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CONCURSO PÚBLICO PARA A CONTRATAÇÃO DE TÉCNICO EM LABORATÓRIO IB-ATAD-028-2011; D.O.E. 09/11/2011

PROVA PRÁTICA

NOME: _______________________________________________________________________________ 05/04/2012

Questão 1: Gel de Eletroforese Questão 1A. Para preparar um gel de agarose, você deve misturar agarose em solução TBE. Nesta estação você deverá pesar a quantidade de agarose necessária para preparar um gel de 35 ml a 2%. Após a pesagem aguarde a verificação do examinador. Questão 1B. Com os materiais disponíveis nesta estação você deverá montar uma eletroforese em um gel de agarose. Você deverá aplicar 4 µL de cada amostra no gel, fechar a cuba e inserir os cabos na fonte. Após verificar com o examinador que esta etapa está cumprida, responda: Qual a justificativa de posicionar o gel em relação aos polos elétricos da maneira que você fez? _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ Questão 1C. Considere o gel abaixo exemplificando o resultado de uma reação de PCR para 6 amostras e responda: Quais são os problemas que você identificou neste resultado e quais medidas você adotaria para resolvê-los?

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Questão 2: PCR

Questão 2A. Nesta estação, você irá simular uma reação de PCR (Polymerase Chain Reaction) de 25 µL, para amplificar o gene X para 3 amostras de DNA. As soluções disponíveis e os respectivos volumes em cada reação são os seguintes: 1. Master Mix (solução vermelha) contendo água, buffer, dNTP e MgCl2 …… 20.35 µL 2. Solução de primers f + r (solução verde) …………………………………… 2.0 µL 3. Taq (solução azul) …………………………………………………………… 0.15 µL 4. Amostra de DNA genômico* …………………………………………… 1.5 µL (*) Três amostras intituladas “a”, “b” e “c”. Com os materiais disponíveis nesta estação, prepare as reações de PCR e informe ao examinador quando concluir a tarefa. Questão 2B. O termociclador opera repetindo ciclos de temperatura com três etapas bem definidas (A, B e C) durante a reação de PCR (Polymerase Chain Reaction), como ilustra a figura abaixo.

a. Nomeie e explique o que ocorre durante uma reação de PCR em cada destas etapas. A. _____________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ B. _____________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ C. _____________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ b. Este é um termociclador com gradiente de temperatura. Para que você usaria esta função deste equipamento? _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________

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Questão 3: Uso de Equipamentos

Questão 3A. Nesta estação encontram-se 3 (três) tubos tipo eppendorf com suas amostras, um rack no qual se encontram diversos tubos contendo diferentes volumes de água e uma centrífuga. Os tubos que contém suas amostras possuem os seguintes volumes: 1. 500 µL, 2. 300 µL e 3. 500 µL. Posicione os tubos no rotor da centrífuga, informe a disposição dos tubos na figura abaixo e informe ao examinador que concluiu este exercício. Questão 3B. Qual o nome e a utilidade dos quatro equipamentos posicionados nesta estação. Equipamento 1: _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ Equipamento 2: _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ Equipamento 3: _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ Equipamento 4: _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________

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Questão 4: Habilidades Computacionais Questão 4A. O GenBank/NCBI é um grande repositório de dados moleculares. Utilizando a ferramenta de busca de nucleotídeos ENTREZ você deverá:

1. baixar as sequências sob os números de acesso JF444303.1, AY544158.1 e AY633977.1.

2. Alinhá-las utilizando ClustalW em Bioedit. 3. Salvar o arquivo com as sequências alinhadas na pasta contendo seu nome na área de

trabalho deste computador. Questão 4B. Faça uma tabela em EXCEL obedecendo a formatação abaixo. Esta tabela deverá conter os valores dos volumes (use as fórmulas de EXCEL) de solução estoque de DNA necessários para obter a concentração de 50 ng/uL da solução de trabalho. Ao finalizar a tabela, salve-a dentro do diretório com seu nome que está na área de trabalho (“Desktop”) deste computador atribuindo “questao_4b.xls” ao nome do arquivo.

Água  uL DNA  uL

123 30 5070 30 50100 30 50300 30 50157 30 50

DNA  S ol.  E s toque  ng /uL

S olução  de  trabalho  50  ng /uL

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Questão 5: NanoDrop

Questão 5. Considere a figura abaixo que se refere ao “print screen” de um aplicativo associado ao equipamento NanoDrop da Thermo Scientific e responda: Quais os princípios físico-químicos que estão envolvidos no funcionamento deste equipamento, o que o gráfico representa e qual a sua utilidade em um laboratório de sistemática molecular? _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________ _______________________________________________________________________