Relatório Ivo Barreiros

Ivo Duarte do Cabo Barreiros

Relatrio de Estgio

Mestrado em Anlises Clnicas

Relatrio de Estgio Curricular no mbito de Mestrado em Anlises Clnicas, orientado pelo Doutor Frederico Valido e apresentado Faculdade de Farmcia da Universidade de Coimbra

Setembro, 2012

i

ndice

LISTA DE ABREVIATURAS ........................................................................ III

RESUMO ......................................................................................................... V

ABSTRACT .................................................................................................... V

I. INTRODUO ........................................................................................ 1

II. CARACTERIZAO DO LABORATRIO DE ESTAGIO .................. 2

III. ATIVIDADES DESENVOLVIDAS .......................................................... 5

A. QUMICA CLNICA E MICROBIOLOGIA ............................................................................. 6

A.1. Qumica Clnica .................................................................................................................... 6

A.2. Microbiologia ........................................................................................................................ 7

B. HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA ..................................................................................... 8

B.1. O Setor ................................................................................................................................... 8

B.1.1. Equipamentos, princpios de funcionamento e tcnicas manuais .......................... 9

B.1.2. Controlo de Qualidade ................................................................................................. 14

B.2. Marcadores Tumorais ......................................................................................................15

B.2.1. Alfa-fetoprotena (AFP) ................................................................................................. 16

B.2.2. Calcitonina ....................................................................................................................... 16

B.2.3. Antignio Carcinoembrionrio (CEA) ...................................................................... 16

B.2.4. CYFRA 21.1 ..................................................................................................................... 17

B.2.5. CA 15.3 ............................................................................................................................. 17

B.2.6. CA 19.9 ............................................................................................................................. 17

B.2.7. CA 72.4 ............................................................................................................................. 18

B.2.8. CA 125 .............................................................................................................................. 18

B.2.9. Enolase NeuroEspecfica (NSE)................................................................................... 18

B.2.10. Antignio Especfico da Prstata (PSA) ................................................................... 19

B.2.11. Antignio do Carcinoma de Clulas Escamosas (SCCA) ................................... 19

B.2.12. Tireoglobulina (TG) ..................................................................................................... 19

B.2.13. -hCG ............................................................................................................................. 20

B.2.14. 2-Microglobulina ......................................................................................................... 20

B.3. Hormonas Sexuais ............................................................................................................21

B.3.1. Prolactina .......................................................................................................................... 21

B.3.2. Gonadotrofinas FSH e LH ............................................................................................ 21

B.3.3. Estradiol ............................................................................................................................ 22

NDICE

ii

B.3.4. Progesterona ................................................................................................................... 22

B.3.5. Testosterona ................................................................................................................... 22

B.4. Hormanas de Avaliao da Funo Tiroideia ............................................................ 22

B.4.1. Hormona estimuladora da tiroide (TSH) ................................................................. 23

B.4.2. Tetraiodotironina (T4).................................................................................................. 23

B.4.3. Triiodotironina (T3) ...................................................................................................... 23

B.5. Eletroforese de protenas ................................................................................................ 24

B.6. Imunofixao de protenas ............................................................................................. 24

C. HEMATOLOGIA ................................................................................................................. 26

C.1. O Setor................................................................................................................................. 26

C.1.1. Equipamentos, princpios de funcionamento e tcnicas manuais ....................... 26

C.1.2. Controlo de Qualidade................................................................................................. 31

C.2. Hemograma ....................................................................................................................... 32

C.2.1. Eritrograma ...................................................................................................................... 32

C.2.2. Leucograma ..................................................................................................................... 35

C.3. Velocidade de Sedimentao (VS) ................................................................................ 37

C.4. Hemstase .......................................................................................................................... 38

C.4.1. Tempo de Protrombina (PT)....................................................................................... 40

C.4.2. Fibrinognio ..................................................................................................................... 40

C.4.3. Tempo de Tromboplastina Parcial ativada (aPTT) ................................................. 41

C.4.4. Tempo de Trombina (TT)............................................................................................ 41

C.4.5. Produtos de Degradao da Fibrina (PDF) .............................................................. 42

C.4.6. Anticoagulante Lpico (AL) ......................................................................................... 42

C.4.7. Fator II e Fator V de Leiden ........................................................................................ 43

IV. CONCLUSO ....................................................................................... 45

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ............................................................. 47

iii

Lista de Abreviaturas

ACTH Hormona adrenocorticotrfica

AEQ Avaliao externa de qualidade

AFP Alfa-fetoprotena

AL Anticoagulante lpico

aPTT Tempo de tromboplastina parcial

ativada

hCG Gonadotrofina corinica humana

BMG 2-microglobobulina

CA~ Antignio carbohidrato

CEA Antignio carcinoembrionrio

CIV Coagulao intravascular

disseminada

CLIA Chemiluminescence immunoassay

CQI Controlo de qualidade interno

DNA cido desoxirribonucleico

ECLIA Electrochemiluminescence

immunoassay

EDTA cido etilenodiaminotetractico

EMIT Enzyme Multiplied Immunoassay

Technique

EP Embolismo pulmonar

EPO Eritropoetina

FSH Hormona folculo-estimulante

GnRH Hormona libertadora de

gonadotrofinas

Hct Hematcrito

Hgb Concentrao de hemoglobina

INR International normalized ratio

INSA Instituto Nacional de Sade Dr.

Ricardo Jorge

Ig Imunoglobulina

IPO Instituto portugus de oncologia

IRMA Immuno radiometric assay

ISI International sensitivity index

LCR Lquido cefalorraquidiano

LH Hormona luteinizante

LB Linfcitos B

LT Linfcitos T

MCH Hemoglobina corpuscular mdia

MCHC Concentrao de hemoglobina

corpuscular mdia

MCV Volume corpuscular mdio

MN Mononucleares

MT Marcador tumoral

NSE Enolase Neuroespecfica

PCR Reao em cadeia da polimerase

ABREVIATURAS

iv

PDF Produtos de degradao da

fibrina

PMN Polimorfonuclear

PSA Antignio especfico da prstata

PT Tempo de protrombina

PTH Paratormona

RIA Radio immuno assay

RBC Clulas sanguneas vermelhas

RDW Amplitude de distribuio de

eritrcitos

RET Reticulcitos

RIQAS Randox International Quality

Assessment Scheme

RNA cido ribonucleico

SCCA Antignio do Carcinoma de

Clulas Escamosas

SCT Silica clotting time

SPC Servio de Patologia Clnica

TG Tireoglobulina

TRACE Time Resolved Amplified Cryptate

Emission

TRH Hormona libertadora da

tiriotrofina

TSH Hormona Estimuladora da

Tiroide

TT Tempo de trombina

TVP Trombose venosa profunda

TVVRd Tempo de veneno de vbora de

Russel diludo

T3 Triiodotironina

T4 Tetraiodotironina

VCS Technology Acrnimo para

Volume, Conductivity and Scatter

VDRL Venereal Disease Research

Laboratory

VS Velocidade de sedimentao

WBC Clulas sanguneas brancas

v

Resumo

Com o presente relatrio de estgio, no mbito do Mestrado em Anlises Clnicas,

pretende-se descrever todas as atividades nas quais estive envolvido ao longo deste ano letivo

no servio de Patologia Clnica do Instituto Portugus de Oncologia de Coimbra Francisco

Gentil (IPOCFG).

Aps uma breve introduo instituio de acolhimento e descrio dos objetivos,

ser realizada uma apresentao do servio de Patologia Clnica. Posteriormente sero

abordadas as atividades desenvolvidas atravs de uma descrio muito simples das reas de

Qumica Clnica e Microbiologia e de uma descrio mais detalhada das reas de

Hormonologia/ Imunologia e Hematologia.

Nas reas para maior aprofundamento sero ainda referidos os equipamentos

existentes e esclarecidos os princpios das metodologias utilizadas. Finalmente sero

abordados alguns dos principais parmetros determinados com o respetivo enquadramento

terico.

Palavras-chave: IPO, Patologia Clnica, Hematologia, Imunologia, Endocrinologia.

Abstract

The intention of this report under the Masters Degree in Clinical Analysis is to

describe all the activities in which I have participated throughout the year at the Service of

Clinical Pathology of Francisco Gentil Portuguese Institute of Oncology at Coimbra (IPOCFG).

After a brief description of the Institution and the objectives of this internship it will be

present the Clinical Pathology Service. Posteriorly will be discussed and simple described the

activities performed in the clinical chemistry and microbiology laboratories and in more detail

the activities performed in the immunology/ endocrinology and haematology laboratories.

Within hormonology/ immunology and haematology activities will be also referred the

existing equipment and the methodologies used. Finally, will be discussed some of the

parameters determined in these laboratories with the respective theoretical framework.

Keywords: IPO, Clinical Pathology, Haematology, Immunology, Endocrinology.

MAC - RELATRIO DE ESTGIO

1

I. Introduo

O Instituto Portugus de Oncologia de Coimbra Francisco Gentil (IPOCFG) uma

instituio de reconhecido prestgio que presta cuidados de sade altamente especializados

nas reas da oncologia mdica.(1) O Servio de Patologia Clinica (SPC) constitui um dos muitos

servios que esta unidade hospitalar tem ao dispor dos seus utentes e encontra-se sob a

responsabilidade do Dr. Frederico Valido. Foi neste servio que foi desenvolvido o estgio

curricular no mbito do Mestrado em Anlises Clnicas.

Com uma durao aproximada de seis meses e meio (mais de 800 horas), este estgio

permitiu, no s, a integrao na rotina laboratorial num servio de caractersticas particulares,

mas tambm a aquisio de uma melhor perceo do que poder ser o nosso mercado de

trabalho. A possibilidade de poderem ser realizados os mais diversos estudos, nos mais

diversos fluidos biolgicos do organismo humano, alguns deles at, recorrendo a tcnicas de

diagnstico que se encontram na vanguarda da cincia e tecnologia, como a citometria de fluxo

e a biologia molecular, demonstram a multidisciplinariedade e o quo valioso pode ser o

domnio desta rea na interpretao clnica e no estabelecimento do diagnstico.

Aps uma apresentao das infraestruturas existentes no servio de patologia clinica o

plano geral do estgio foi desde logo decidido. Iriamos passar um ms em cada setor

comeando pelo de Qumica Clnica, seguido da Microbiologia, Hematologia e por fim o setor

da Hormonologia/ Imunologia. No final dos 4 meses teramos de optar pelos setores onde

pretendamos aprofundar o estudo ficando mais um ms em cada um deles. Desta feita os

eleitos foram o setor da Hematologia e o da Hormonologia/ Imunologia.

IPOC SERVIO DE PATOLOGIA CLNICA

2

II. Caracterizao do Laboratrio de Estgio

Todos os parmetros analticos realizados neste servio so solicitados pelo mdico

mediante o preenchimento de uma requisio em que so assinalados individualmente os

testes laboratoriais pretendidos ou por indicao do protocolo pretendido, ao qual

corresponde uma bateria de anlises. Vrios protocolos foram definidos pelo SPC em conjunto

com os outros servios clnicos da instituio de forma a facilitar o pedido de anlises.

Todas as requisies que chegam ao servio so analisadas pelo pessoal administrativo

que verificam se estas se encontram devidamente preenchidas antes de procederem sua

admisso. Alm do pedido de anlises, nestas requisies deve constar a identificao do

doente (nome completo, data de nascimento, morada), o cdigo do servio requisitante, a

data, a assinatura do mdico e o seu nmero mecanogrfico, sendo tambm importante que

o mdico d indicao do tipo de amostra a colher e que fornea informaes clinicamente

relevantes.

Uma vez reunidas estas condies, as requisies so organizadas de modo a gerenciar

o processo de colheitas que tanto podem ser realizadas na sala de colheitas do SPC como nas

enfermarias. Independentemente do processo de colheita so sempre os tcnicos de

diagnstico e teraputica que as executam, fazendo-se acompanhar da respetiva requisio.

Quando a colheita se processa no SPC, o doente atendido por ordem de chegada, sendo-

lhe atribudo um nmero do dia e uma letra correspondente ao dia da semana que ir

identificar a requisio e os tubos da respetiva colheita.

A cada doente colhida, por puno venosa, a quantidade de sangue total necessria

para a realizao dos doseamentos requeridos, que de seguida distribudo pelos diferentes

tubos. Cada setor recebe o tubo/ contentor com a amostra a analisar, devidamente identificada

e acompanhada pela respetiva requisio, destinada quele setor.

Aps o processamento analtico os resultados so validados pelo mdico ou tcnico

superior de sade responsvel pelo setor que os pode disponibilizar ao clnico em suporte de

papel, informaticamente, ou ainda por telefone nos casos de emergncia. Quando fornecidos

por escrito, devem ir assinados pelo responsvel do setor sendo posteriormente recolhidos

pelo pessoal administrativo que os reenviam aos servios requisitantes.

Como qualquer laboratrio que procura alcanar a qualidade do seu produto, o SPC

possui todos os requisitos necessrios para que tal seja possvel, desde manuais de


3

procedimentos internos e programas de manuteno, at programas de garantia e controlo

de qualidade e apostas na formao de todos os seus funcionrios. Desta forma o SPC

demonstra a preocupao com uma melhoria contnua da qualidade e garante um elevado grau

de confiana e fiabilidade nos resultados reportados. Assim sendo, o SPC submete-se a dois

sistemas de controlo de qualidade, o controlo de qualidade interno (CQI) e o controlo

qualidade externo (CQE). Atravs do CQI possvel a monitorizao contnua das prticas

de trabalho, do equipamentos e dos reagentes. Neste controlo as concentraes do analito

so previamente conhecidas. O CQE consiste na avaliao por terceiros, do desempenho do

laboratrio. recebida uma amostra de caractersticas desconhecidas que deve ser manipulada

sob as condies habituais de funcionamento do laboratrio. Os resultados obtidos so depois

analisados e comparados com os obtidos por outros participantes.

Ilustrao 1 Organigrama do servio de patologia clnica

IPOC SERVIO DE PATOLOGIA CLNICA

4

Nmero de Amostras

2010 2011

Qumica Clnica 792496 790891

Microbiologia 11971 10893

Imunologia 71300 69771

Hormonologia 38980 37501

Hematologia 133062 123675

Nmero de Doentes 65440 67351

Tabela 1 Dados estatsticos relativos ao nmero de anlises realizadas no servio de patologia clnica. Pode verificar-se um decrscimo do nmero de anlises pedidas mas o nmero de doentes aumentou

Qumica Clnica

Microbiologia

Imunologia

Hormonologia

Hematologia

N DE ANLISES 2011

Grfico 1 Distribuio de anlises realizadas por servio no ano de 2011


5

III. Atividades desenvolvidas

Ao longo de todo este estgio, os profissionais de sade de qualquer um dos setores

predispuseram-se a dar todo o apoio necessrio promovendo sempre a participao proactiva

quer na execuo do trabalho de rotina quer j na validao dos resultados. Favoreceram a

aprendizagem procurando esclarecer as questes prticas do dia-a-dia dos servios e insistiram

para que fossem colocadas dvidas. Sugeriram, tambm, a realizao de diversas tcnicas

manuais e todos os setores procuraram mostrar os procedimentos de calibrao e realizao

dos controlos internos, bem como as manutenes peridicas dos equipamentos.

Dada e extenso do estgio tive ainda a oportunidade de participar ativamente num

dos programas de avaliao externa da qualidade (AEQ) no setor de microbiologia ajudando

o responsvel pelo setor na identificao microbiolgica e estabelecimento do perfil de

suscetibilidade aos antibiticos. Ainda neste setor, surgiu a oportunidade de acompanhar os

procedimentos efetuados quando so realizadas colheitas na enfermaria.

No setor da hematologia, alm da integrao na rotina, execuo de tcnicas manuais

e interpretao dos resultados, tive a oportunidade de fazer a marcao celular para posterior

estudo imunofenotpico por citometria de fluxo, tendo sido tambm avaliados alguns dos casos

e feita a respetiva interpretao clnica.

Na hormonologia/ imunologia tambm me integrei a rotina diria, participei na

admisso das amostras ao setor e executei algumas tcnicas manuais. Como o estgio coincidiu

com a altura dos concursos por parte das empresas que comercializam os seus produtos e

equipamentos, foi possvel assistir a algumas aes de formao promovidas pelas entidades

empresariais que os comercializam e participar na avaliao destes equipamentos.

QUMICA CLNICA E MICROBIOLOGIA

6

A. Qumica Clnica e Microbiologia

A.1. Qumica Clnica

o setor que apresenta o maior fluxo de amostras diariamente. Aqui so avaliados os

mais diversos parmetros bioqumicos, caractersticos do funcionamento do organismo

humano. Este ser, provavelmente, o setor mais automatizado.

Em termos de recursos humanos, o servio de qumica clinica constitudo por um

mdico especialista em patologia clnica, uma tcnica superior de sade e por quarto tcnicas

de diagnstico e teraputica.

Aps a colheita, executada segundo o manual das boas prticas vigente, as amostras

seguem para o setor sendo imediatamente centrifugadas e cuidadosamente identificadas. A

maioria das determinaes analticas do servio realizada no soro pelo que importante que

os tubos utilizados apresentem micropartculas de acelerao da coagulao de forma a agilizar

todo o procedimento analtico. Certas determinaes, no entanto, podero ser executadas

em sangue total, plasma ou at outros produtos para alm do sangue como o lquido

cefalorraquidiano (LCR). Uma vez feita a admisso das amostras, estas so encaminhas para os

diferentes equipamentos conforme os parmetros que se pretendem determinar.

Entre os parmetros realizados, alm de habitual a bateria de testes bioqumicos

determinada nos laboratrios de anlises clnicas (colesterol, triglicerdeos, glicose,

transaminases hepticas,), a gasometria ou o ionograma, so tambm executadas

determinaes mais especficas como a hemoglobina glicosilada, teste da mononucleose

infeciosa, teste da Brucella, VDRL (Venereal Disease Research Laboratory), teste do Lpus

Sistmico Eritematoso, entre outros.

O controlo de qualidade a nvel interno realizado diariamente, antes do incio do

trabalho e para cada um dos equipamentos, com recurso a controlos comerciais. Os valores

obtidos so depois estudados segundo as regras de Westgard. Os controlos internos podero

ainda ser repetidos sempre que tal se justifique.

O setor participa tambm em programas peridicos de AEQ promovidos pelo Randox

International Quality Assessment Scheme (RIQAS) e pelo Instituto Nacional de Sade Dr. Ricardo

Jorge (INSA).


7

A.2. Microbiologia

Setor destinado ao estudo microbiolgico de diversos produtos biolgicos e o que

mais depende do analista clnico. As amostras que aqui chegam podem ter como finalidade

estudos bacteriolgicos, parasitolgicos ou at micolgicos. Estas amostras podem ainda ser

dos mais variados tipos, deste uma simples urina at exsudados vaginais, expetoraes, lavados

brnquicos, LCR e outros fluidos biolgicos, ps, sangue (hemocultura), fezes, escamas da pele

e unhas ou at dispositivos mdicos, como cateteres. Como tal requerem cuidados prprios

durante a sua colheita.

Os recursos humanos existentes no setor so constitudos por uma mdica especialista

em patologia clnica, uma tcnica superior de sade e trs tcnicos de diagnstico e

teraputica.

Aps a receo das amostras so verificadas as condies de colheita, segundo as

consideraes do manual das boas prticas para cada tipo de amostra, e quais os exames a

executar. Pode ser necessrio fazer uma simples anlise quantitativa e qualitativa da urina ou

uma observao do sedimento urinrio, com uma cuidadosa pesquisa e identificao de

microrganismos responsveis por graves doenas respiratrias ou por uma septicmia, seguida

da determinao do seu perfil de suscetibilidade aos antibiticos.

Neste setor tambm essencial que se trabalhe em condies de assepsia e que a

escolha dos meios a inocular seja muito bem pensada, de forma a obter uma boa recuperao

dos microrganismos que pensamos ser causadores da situao patolgica para podermos

prosseguir os estudos. O microscpio tico representa um dos mais valiosos suportes que

nos pode guiar num diagnstico preliminar.

No setor de microbiologia so tambm efetuados o CQI e o CQE. O CQI efetuado

periodicamente com estirpes conhecidas, adquiridas comercialmente, s quais so aplicadas as

tcnicas usadas na rotina. Periodicamente tambm executado o CQE do INSA no qual so

fornecidas amostras cegas e solicitado que sejam processadas normalmente e que os

resultados obtidos sejam enviados. Posteriormente so fornecidos os resultados esperados

pela AEQ.

HORMONOLOGIA/ IMUNOLOGIA

8

B. Hormonologia/ Imunologia

B.1. O Setor

O setor da endocrinologia/imunologia , provavelmente, o mais desenvolvido no

servio de patologia clnica, o que compreensvel j que o IPOCFG E.P.E uma unidade

hospitalar de oncologia. Os recursos humanos do setor so compostos por profissionais de

sade, entre os quais, tcnicos superiores de sade especialistas e tcnicos de diagnstico e

teraputica.

A hormonologia e a imunologia so dois setores que ocupam o mesmo espao fsico

comportando-se estrutural e organizacionalmente como um grande setor. De entre todos os

outros, este o setor de maiores dimenses e est dividido em vrios espaos. Num deles,

encontram-se os autoanalisadores de imunoqumica onde so estudados marcadores tumorais

e hormonas, e realizados testes de avaliao cardaca e monitorizao de frmacos, alm da

serologia infeciosa. Possui ainda espaos apropriados execuo de tcnicas manuais. Esta

rea est tambm dedicada ao registo, processamento e validao das amostras do setor. Um

outro espao est destinado ao estudo eletrofortico e imunofixao das protenas tendo

ainda um contador gamma, uma estufa, uma centrfuga refrigerada, uma ultracentrfuga e uma

hotte. Dentro do setor existe, ainda, um microscpio de fluorescncia para estudos especficos

de autoimunidade.

O sistema informtico do setor de endocrinologia/imunologia possui um software de

processamento de dados, independente dos outros setores, que atribui a cada doente um

nmero de registo independente e interno para melhor organizao e distribuio do servio.

Os tubos so identificados por cdigo de barras com numerao sequencial, para alm do

nmero do dia de registo e do nmero de identificao do paciente (nmero de processo).

Este sistema permite que os autoanalisadores funcionem em rede (LIS) com o software central.

Alm disso a comunicao feita em modo query bidirecional, isto , so enviados para os

equipamentos os parmetros a dosear e estes correspondem com os resultados, completando

o pedido por doente. O processo finalizado com a validao biopatolgica.

Este sistema utiliza perfis analticos internos (MAM, PUL, DI, TI,) consoante os

parmetros a determinar e que facilitam o registo informtico e informam o profissional de

sade sobre o percurso que cada amostra tem de fazer.


9

Neste setor a maioria das determinaes so executadas no soro ou no plasma. Os

tubos sem preparao so os mais utilizados por este setor e contm microesferas que

aceleram a coagulao e permitem uma separao fsica entre o soro e as clulas.

Determinaes como a hormona adrenocorticotrfica (ACTH) e as metanefrinas plasmticas,

so executadas em tubos com sangue contendo cido etilenodiaminotetractico (EDTA),

colhido e separado a frio, enquanto que para a renina o sangue colhido e separado

temperatura ambiente. So realizadas determinaes na urina tais como o iodo, protena de

Bence-Jones, metanefrinas, cido 5-OH-indolactico e cido vanilmandlico.

B.1.1. Equipamentos, princpios de funcionamento e tcnicas manuais

Este setor constitudo por diversos tipos equipamentos, que no geral executam

diferentes tarefas e determinaes. De seguida sero descritos aqueles com os quais tive maior

contacto e que geralmente tem maior carga de trabalho.

B.1.1.1. Siemens IMMULITE 2000 e VersaCell System

Analisador de imunologia da Siemens. Este

sistema realiza ensaios tendo como base a

tecnologia de quimioluminescncia (CLIA) e utiliza

esferas de poliestireno com anticorpos especficos

adsorvidos superfcie como fase slida.(2, 3) Cada

esfera dispensada num tubo de reao com

caractersticas prprias que serve como recipiente

de incubao, lavagem e desenvolvimento do sinal. De seguida a amostra incubada com o

anticorpo marcado com uma enzima (fosfatase alcalina) sendo que, posteriormente, a mistura

separada da esfera atravs de uma rotao a alta velocidade do tubo de reao sobre o seu

prprio eixo vertical, fazendo com que o material excedente se acumule numa cmara superior

do tubo. Segue-se uma srie de 4 lavagens para assegurar que a esfera fica desprovida de

qualquer frao no ligada. A frao ligada ento quantificada utilizando como substrato

quimioluminescente o dioxetano que, ao reagir com a fosfatase alcalina ligada esfera,

promove a emisso de luz. A intensidade de luz emitida detetada por um fotomultiplicador

sendo o resultado, calculado com base numa curva

padro. Podem ser realizados ensaios em sandwich

ou competitivos.(2, 3)

Fig. 1 Siemens IMMULITE 2000

Ilustrao 2 Representao esquemtica das diferentes fases da anlise executada pelo IMMULITE


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B.1.1.2. BRAHMS KRYPTOR

Analisador de imunologia para

doseamento de marcadores tumorais cujo

princpio de funcionamento se baseia na

tecnologia TRACE (Time Resolved Amplified

Cryptate Emission). Esta tecnologia consiste na

transferncia de energia no radioativa entre dois

marcadores fluorescentes em que um funciona

como dador (criptato de eurpio) e o outro

como recetor (XL665). Trata-se de um ensaio imunomtrico tipo sandwich em que os dois

anticorpos especficos do antignio a dosear esto marcados com um fluorocromo.(4)

Este tipo de interao requer uma proximidade fsica entre o dador e aceitador de

modo que s quando se forma um complexo com o antignio que o fluorocromo aceitador

eficazmente excitado. A formao do complexo antignio-anticorpo e a consequente

transferncia de energia do criptato para o XL665 permite o prolongamento temporal e a

intensificao do sinal de fluorescncia do XL665. A intensidade de sinal obtido ser

proporcional concentrao do antignio.(4)

Estes ensaios baseiam-se no princpio de ensaio homogneo sendo, deste modo,

dispensados os processos demorados de separao e lavagem e tornado possvel a execuo

de medies sem interromper a reao. Isto permite uma anlise cintica que logo no incio

da incubao capaz de reconhecer amostras altamente concentradas possibilitando que

sejam automaticamente diludas por um fator de diluio apropriado e ento analisadas

novamente.(4)

Ilustrao 3 Representao esquemtica do processo de excitao e amplificao

Fig. 2 Brahms Kryptor


11

B.1.1.3. Roche cobas e 411

Analisador de imunologia baseado na

tecnologia de eletroquimioluminescncia

(ECLIA).(5) Este equipamento utiliza

micropartculas revestidas com

estreptavidina, anticorpos monoclonais

especficos biotinilados e anticorpos

monoclonais especficos para cada analito,

marcados com um quelato de rutnio. Todos estes compostos reagem entre si formando um

complexo tipo sandwich. Esta mistura ento fixada magneticamente, graas as

micropartculas de estreptavinina, na superfcie de um eltrodo permitindo que todo o

material no fixado seja removido. Por fim, aplicada uma corrente eltrica no eltrodo que

induz uma emisso quimioluminiscente, por parte do rutnio, que medida por um

fotomultiplicador. Neste caso a concentrao do analito ser diretamente proporcional

intensidade do sinal.(6)

Este equipamento poder tambm executar ensaios competitivos que no lugar do

antignio monoclonal especfico para o analito, utilizado um derivado do analito marcado

com o complexo de rutnio que ir competir diretamente com o da amostra do doente pelo

local de ligao do anticorpo especfico biotinilado. A concentrao do analito ser

inversamente proporcional intensidade do sinal.

Fig. 3 cobas e 411

Ilustrao 4 Representao esquemtica dos princpios de funcionamento do equipamento da Roche. esquerda o mtodo sandwich. direita o mtodo competitivo


12

B.1.1.4. Thermo Scientific KoneLab 30

Equipamento cujo princpio de funcionamento a

imunoturbidimetria. A turbidimetria baseia-se na deteo

tica de partculas muito pequenas suspensas em lquido por

decrscimo da luz transmitida. Quando o anticorpo

especfico reage com o analito presente na

amostra formam-se imunocomplexos

insolveis que induzem uma turbidez que

medida por espetrofotometria. Esta turbidez ser proporcional concentrao de analito na

amostra.

B.1.1.5. DiaSorin Liaison

Equipamento destinado principalmente

determinao dos marcadores cardacos e serologia

infeciosa, baseado no princpio da quimioluminescncia

clssica. Distingue-se do Immulite por utilizar partculas

paramagnticas revestidas com os anticorpos

monoclonais especficos e os anticorpos policlonais

estarem conjugados com um derivado do isoluminol.(7)

B.1.1.6. Siemens BN ProSpec

Equipamento baseado na tecnologia de

nefelometria e especialmente dedicado ao doseamento

de protenas especficas. Possvel substituto do KoneLab

dada a sua tecnologia mais avanada que

apesar do princpio ser o mesmo da

turbidimetria difere no sistema de deteo.

Ao invs de ser medido o decrscimo da intensidade de

luz, medida a luz que dispersa, tornando a determinao mais precisa.

Fig. 4 KoneLab

Fig. 5 Liaison

Fig. 6 ProSpec


13

B.1.1.7. Siemens Viva-E

Sistema destinado monitorizao de frmacos e

baseado na tecnologia EMIT (Enzyme Multiplied Immunoassay

Technique). um ensaio imunoenzimtico homogneo

competitivo no qual o analito alvo, presente na amostra, e um

frmaco marcado enzimaticamente (G6PDH) competem pela

ligao ao mesmo anticorpo. Na presena de frmaco na

amostra, o frmaco marcado enzimaticamente no se liga ao anticorpo permitindo que esta

enzima reaja com um substrato. A velocidade de formao deste produto ento determinada

fotometricamente e a concentrao do frmaco ser calculada por comparao com a

velocidade obtida em diferentes concentraes do frmaco conhecidas.(8)

B.1.1.8. Pharmacia Diagnostics UniCAP 100 E

Equipamento destinado ao estudo das alergias e que

tambm se baseia nas tcnicas imunoenzimticas heterogneas.

Difere, no entanto, no sistema de deteo uma vez que so

utilizados anticorpos marcados com um fluorocromo contra o

antignio/ anticorpo de interesse. A intensidade de

fluorescncia ser proporcional a quantidade do analito na

amostra.

B.1.1.9. Sebia Hydrasys

Equipamento semiautomtico destinado

eletroforese e imunofixao de protenas.

constitudo por dois mdulos que funcionam de

modo independente. O da esquerda destinado

corrida eletrofortica sendo apenas necessrio

colocar o gel de agarose e um pente aplicador da

amostra. No caso de ser uma imunofixao ainda

necessrio um passo extra no qual usada uma mscara que serve para aplicar os anticorpos.

O mdulo da direita destina-se colorao e secagem do gel de forma a revelar o resultado.

Fig. 7 Viva-E

Ilustrao 5 Repesentao esquemtica do prncipo de funcionamento do Viva-E

Fig. 8 UniCAP 100 E

Fig. 9 Hydrasys


14

B.1.1.10. Tcnicas Manuais

B.1.1.10.1. Imunolgicas

Consoante a tcnica a executar o princpio do

teste pode ser a RIA (Radio Immuno Assay mtodo

competitivo) ou a IRMA (Immuno Radiometric Assay

mtodo sandwich). Estas tcnicas implicam o uso de

material radioativo (anticorpos monoclonais marcados

com 125I) e de um leitor da radiao gamma emitida pelo

radioistopo. (9) Apresentam no entanto, diversos

inconvenientes, quer de ordem tcnica, quer de segurana para o analista que manipula este

tipo de substncias. Entre outras, o marcador radioativo tem uma semi-vida curta pelo que os

kits tm de ser utilizados dentro do curto prazo estabelecido pela firma, so tcnicas muito

demoradas, com longos perodos de incubao e muitos passos que requerem grande prtica

de manuseamento por parte do analista. Por estas razes estes mtodos tem vindo a ser

substitudos, sempre que possvel, pelos de quimioluminescncia e de fluorescncia.

B.1.1.10.2. Cromatogrficas

As tcnicas manuais cromatogrficas so utilizadas para a quantificao dos metabolitos

excretados na urina. Estas tcnicas usam colunas de extrao que contm resinas de modo a

permitirem a remoo diferencial do metabolito de interesse. Numa primeira etapa, fica retido

na coluna e s aps a adio de cloreto de sdio (NaCl) que eludo. Posteriormente

quantificado por espetrofotometria.

B.1.2. Controlo de Qualidade

Diariamente, e antes do incio do trabalho, so efetuados dois nveis de CQI para todos

os parmetros doseados em cada equipamento. Uma vez executados, so avaliados segundo

as regras de Westgard. Neste setor existe, ainda, a possibilidade destes controlos internos

serem comparados e consultados atravs de um software informtico com todos os

laboratrios que usem os mesmos kits e os mesmos equipamentos. Isto no s permite avaliar

o desempenho do laboratrio, como tambm permite despistar causas provveis para o desvio

aos valores esperados. So tambm realizados periodicamente controlos de AEQ, sendo que,

este setor participa em dois diferentes programas, o Randox International Quality Assessment

Scheme (RIQAS), e do Instituto Nacional de Sade Dr. Ricardo Jorge (INSA).

Fig. 10 Contador Gamma


15

Sempre que se trate de uma tcnica manual realizado o controlo apropriado em

simultneo com as amostras, podendo tambm ser includo um controlo de qualidade externo

sempre que pretenda fazer esta avaliao.

B.2. Marcadores Tumorais

Um marcador tumoral (MT) pode ser definido como uma molcula biologicamente

estvel e com caractersticas muito variveis, cujo aparecimento ou alterao da sua

concentrao, poder alertar para a gnese, presena ou evoluo de um tumor de

caractersticas malignas.(10) O estabelecimento de uma classificao universal no fcil pois

cada um deles poderia pertencer a mais que um grupo. No entanto, podem considerar-se

genericamente dois grandes grupos de marcadores tumorais, por um lado as molculas

produzidas de novo ou em maior quantidade pelas clulas malignas do que pelo tecido normal,

por outro, molculas que foram induzidas pelo prprio hospedeiro em resposta clulas

malignas possivelmente presentes.(11)

Deste modo um marcador tumoral poder ser qualquer tipo de molcula, com

qualquer tipo de funo biolgica, desde enzimas e hormonas, at antignios de funo

desconhecida ou oncoprotenas. A sua principal utilidade a possibilidade de manipulao

clnica de doentes com cancro, auxiliando nos processos de diagnstico, estadio da doena,

avaliao da resposta teraputica, deteo de recidivas e prognostico. (10)

Como no existe um marcador ideal, e porque as suas elevaes podem estar

associadas a processos fisiolgicos ou de progresso benigna, importante no esquecer que

Ilustrao 6 Principais marcadores tumorais


16

os marcadores tumorais servem apenas como exame de diagnstico complementar devendo

ser solicitados devidamente enquadrados com o quadro suspeito e juntamente com outros

mtodos de diagnstico clnico.

B.2.1. Alfa-fetoprotena (AFP)

A alfafetoprotena uma protena produzida pelo feto em desenvolvimento com

importantes funes de transporte plasmtico e de manuteno da presso onctica que

diminui depois do nascimento e permanece baixa em crianas e adultos. Pode estar elevada

em doentes portadores de tumores gastrointestinais e hepatocarcinoma mas tambm nos

casos de hepatite e cirrose. (10, 11)

Tem como principal utilidade a monitorizao do hepatocarcinoma sendo que a sua

presena sugere persistncia da doena e a sua concentrao relaciona-se com a massa

tumoral. Pode ser ainda utilizada na monitorizao teraputica do carcinoma testicular.(10)

B.2.2. Calcitonina

Trata-se de uma hormona polipeptdica secretada pelas clulas C parafoliculares da

tiroide. Juntamente com a paratormona (PTH) regula o metabolismo do Clcio e do Fsforo

no organismo. Em resposta ao aumento dos nveis sricos de clcio a sua principal funo a

inibio da reabsoro ssea pela regulao do nmero e atividade dos osteoclastos.(10, 11)

A sua maior utilidade como marcador tumoral no seguimento de doentes com

carcinoma medular da tiroide. utilizado no diagnstico precoce em doentes de risco (histria

familiar) e os seus nveis parecem correlacionar-se com a massa do tumor e com a presena

de metstases. Pode ainda estar elevado em doenas como anemia perniciosa, insuficincia

renal crnica, cirrose alcolica, hiperparatiroidismo e doena de Paget ssea.(10)

B.2.3. Antignio Carcinoembrionrio (CEA)

Produzido pelas clulas da mucosa gastrointestinal, est principalmente relacionado

com o carcinoma colo-retal e particularmente til para avaliao do estadio, monitorizao

teraputica e prognstico da doena. tambm um marcador complementar frequentemente

associado a outros marcadores, sendo encontrados nveis sricos elevados em neoplasias

malignas do pulmo, pncreas, trato gastrointestinal, trato biliar, tiroide, colo do tero, ovrio

e mama. Estes nveis podem ainda elevar-se em doentes com metstases.(10, 11)

Distrbios benignos como cirrose alcolica, doena de Crohn, doenas hepticas,

doenas intestinais, doena fibrocstica da mama, bronquite, tabagismo e insuficincia real

podem tambm gerar elevaes do CEA.(10)


17

B.2.4. CYFRA 21.1

um fragmento da citoqueratina 19 encontrado no soro. Este marcador tem alta

sensibilidade para o carcinoma de clulas escamosas e um fator de mal prognstico no

carcinoma de clulas escamosas do pulmo. Encontra-se tambm elevado no carcinoma

pulmonar de no pequenas clulas, cancro da bexiga, do colo uterino e da cabea e pescoo.

Aumentos inespecficos podem ser encontrados em algumas patologias benignas pulmonares,

gastrointestinais, ginecolgicas urolgicas e de mama.(10, 11)

As suas concentraes esto correlacionadas com o processo crescente do tumor e

so particularmente uteis na monitorizao do decurso da doena.(10)

B.2.5. CA 15.3

o marcador tumoral, por excelncia, do cancro da mama sendo mais especfico e

sensvel que o CEA. A sua sensibilidade varia de acordo com a massa tumoral e estadio clinico

sendo altamente sensvel na doena disseminada. A concentrao correlaciona-se com a

progresso da doena e a sua diminuio est associada regresso tumoral. No entanto, no

tem valor diagnstico na doena precoce.(10, 11)

A grande utilizao do CA 15.3 no diagnstico precoce de recidiva, precedendo os

sinais clnicos em at 13 meses.

Nveis elevados podem ser observados em varias outar neoplasias como cancro do

ovrio, pulmo, colo do tero, hepatocarcinoma e linfomas. Situaes benignas como hepatite

cronica, tuberculose, sarcoidose e lpus eritematoso sistmico tambm podem levar

elevao do CA15.3.(10)

B.2.6. CA 19.9

Marcador tumoral indicado para a determinao do estadio e monitorizao do

tratamento do cancro do pncreas e trato biliar e, quando associado ao CEA, no follow-up do

cancro colo-retal. (10, 11)

O CA 19.9 possui uma sensibilidade variada consoante a localizao do tumor podendo

tambm positivar no carcinoma hepatocelular, gstrico, mama, pulmo e da cabea e pescoo.

Outras doenas como cirrose heptica, pancreatite, doena infamatria intestinal e doenas

autoimunes tambm podem levar sua elevao.(10)


18

B.2.7. CA 72.4

Tambm denominado TAG-72, este marcador tem elevada especificidade para o

cancro, mas baixa sensibilidade de rgo. No entanto, em associao com o CEA, o MT de

primeira escolha para despiste do carcinoma do estmago e um MT complementar do CA

125 para o carcinoma do ovrio. Contrariamente ao CA 125, apresenta-se elevado no

carcinoma mucinoso do ovrio e dada a sua especificidade permite a discriminao entre

tumor maligno e doenas benignas gastrointestinais. ainda til na monitorizao teraputica

e controlo de recidiva de carcinomas do trato gastrointestinal.(10, 11)

Aumentos discretos do marcador podem ser encontrados em processos inflamatrios

e em doenas benignas gastrointestinais.

B.2.8. CA 125

Produzido por uma variedade de clulas o MT de eleio no carcinoma do ovrio,

mais particularmente dos adenocarcinomas serosos. Atualmente, a sua principal funo a

monitorizao da resposta teraputica e o follow-up dos doentes com cancro epitelial do ovrio

j que a elevao deste MT pode ocorre dois a doze meses antes de qualquer evidncia clnica

de recorrncia.(10, 11)

Doentes com carcinoma da mama, tero (endomtrio e colo), pulmo, estmago e

colo-retal tambm podem estar associados sua elevao.(10)

Podem ainda encontrar-se nveis elevados desta mucina em mulheres grvidas ou

durante a menstruao, em condies benignas como endometriose e quistos no ovrio e em

pessoas com cirrose, hepatite ou pancreatite.

B.2.9. Enolase NeuroEspecfica (NSE)

A NSE uma enzima glicoltica encontrada em tecido neuronal e nas clulas do sistema

neuroendcrino. utilizado como auxiliar de diagnstico do carcinoma de pequenas clulas

do pulmo, no entanto, tem sido tambm detetado em doentes com neuroblastoma,

carcinoma medular da tiroide, tumores carcinoides, tumores do pncreas endcrino e

melanoma. Parece ser til na monitorizao do tratamento e os seus nveis correlacionam-se

com o estadio da doena, apesentando utilidade prognstica, e at possibilidade de antever

uma recidiva da doena.(10, 11)

Este marcador possui uma fonte de erro pr-analtica importante, que o facto dos

eritrcitos, clulas plasmticas e plaquetas possurem NSE e, portanto, caso haja hemlise ou

se a centrifugao do sangue for executada tardiamente podem-se gerar falsas elevaes.


19

Situaes benignas como insuficincia renal, pneumopatias e traumatismos cranianos podem

ser causa de aumentos inespecficos.(11)

B.2.10. Antignio Especfico da Prstata (PSA)

Protena produzida tanto por clulas prostticas normais como patologicas. O nvel de

PSA no sangue pode estar elevado tanto em homens cujo crescimento da prstata seja benigno

(comuns em homens idosos) como maligno no permitindo aos mdicos fazer esta distino.

Todavia, um nvel elevado de PSA alerta sempre para a necessidade de outros testes para

determinar a presena, ou no, do tumor. Doseamento da PSA total juntamente com a PSA

livre (com o clculo razo (PSAL x 100) /PSAt) e um exame mdico como o toque retal

tornam-se fundamentais para o estabelecimento do diagnstico.(10, 11)

O teste de PSA excelente para a monitorizao da resposta ao tratamento do cancro

da prstata. O nvel srico declina aps tratamento curativo (embora nveis normais no

excluam carcinoma persistente), enquanto nveis crescentes indicam doena residual e

progressiva. O PSA no serve como mtodo de triagem devido aos baixos nveis deste

marcador nos estadios de desenvolvimento iniciais.(10)

Elevaes dos nveis sricos podem ainda ser observadas em doentes com patologias

prostticas no malignas tais como Hiperplasia Benigna da Prstata e prostatite ou devido a

procedimentos cirrgicos ou de manipulao prosttica durante procedimentos mdicos.(10)

B.2.11. Antignio do Carcinoma de Clulas Escamosas (SCCA)

Glicoprotena de superfcie celular que se correlaciona com o estadio de

desenvolvimento clinico e decurso dos carcinomas das clulas escamosas do colo uterino,

pulmo, cabea e pescoo. Embora este marcador possa ser til na monitorizao destas

neoplasias, a baixa especificidade e sensibilidade em estadios precoces limitam o seu papel na

deteo precoce e diagnstico.(11, 12)

Valores elevados de SCC antes do tratamento parecem estar associados a um mal

prognstico.(12)

B.2.12. Tireoglobulina (TG)

Glicoprotena produzida pelas clulas foliculares da tiroide. a protena percursora das

iodotironinas (T3 e T4) e a sua velocidade de sntese est dependente da TSH. Pode ser usada

como MT do carcinoma da tiroide, folicular ou papilar mas como qualquer doena relacionada

com a massa ou com o aumento da atividade do tecido tiroideu poder tambm induzir o


20

aumento dos nveis sricos de TG, esta protena no tem grande valor na discriminao entre

doena benigna ou maligna. (11, 12)

Apresenta, porm um importante papel na abordagem do tumor da tiroide pois

permite a monitorizao da progresso da doena depois da tiroidectomia total. Aps a

cirurgia a TG srica pode elevar-se temporariamente, retomando aos nveis normais dentro

de 4 a 6 semanas. Nveis residuais ou recorrentes devem levantar suspeita de recidiva local ou

metstases.(13)

Aumentos no especficos podero ocorrer na tiroidite autoimune, adenoma toxico

tiroideio e bcio.

B.2.13. -hCG

Frao beta da Gonadotropina Corinica Humana que normalmente secretada pela

placenta durante a gravidez. Devido aos elevados nveis de HCG no sangue e na urina de quase

todas as mulheres com doena trofoblstica constitui um excelente marcador tumoral para

essa doena. Elevaes deste MT podem ainda estar associadas presena de cancro das

clulas germinativas (testculo e ovrio).(10, 11)

Doentes com patologias benignas como, doena inflamatria do intestino, lceras

duodenais e cirrose ou cancros da mama, pulmo, pncreas, ovrio ou gastrointestinais podem

induzir elevao dos nveis de HCG.(12, 13)

B.2.14. 2-Microglobulina

Polipeptdeo associado a complexo major de histocompatibilidade HLA-tipo I e, por

isso, expresso em quase todas as clulas nucleadas.(10)

O seu aumento no soro tem sido associado a uma variedade de doenas malignas

incluindo o mieloma mltiplo, linfoma e tumores slidos. Nveis elevados de BMG

correlacionam-se com o volume tumoral e com a elevao dos nveis creatinina srica que so

importantes fatores na determinao do desenvolvimento e prognstico no mieloma mltiplo.

Nveis sricos elevados de BMG tm tambm mostrado valor preditivo de insucesso

teraputico e sobrevida insatisfatria em doentes com linfoma. (10, 13)

Por estas razes tornou-se um marcador utilizado poa monitorizar o mieloma mltiplo

e algumas leucemias e linfomas.


21

B.3. Hormonas Sexuais

Sobre a regulao do eixo hipotalmico-hipofisrio-gnadal as hormonas sexuais

desempenham um papel muito importante na regulao de inmeros processos fisiolgicos

tais como a maturao das clulas sexuais (vulos e espermatozoides) e desenvolvimento de

caracteres sexuais secundrios. (12)

O hipotlamo produz a hormona libertadora de gonadotrofinas (GnRH), que por sua

vez vai estimular a hipfise a secretar a hormona folculo-estimulante (FSH) e a hormona

luteinizante (LH) que consoante se encontrem em indivduos do sexo masculino ou do sexo

feminino iro exercer funes distintas.

B.3.1. Prolactina

uma hormona sintetizada na hipfise anterior e cuja secreo esta sob o controlo do

hipotlamo. O rgo alvo da prolactina a glndula mamria feminina adulta. Durante a

gravidez ajuda a promover o aumento glandular e depois do parto, inicia e mantm a lactao.

Nos homens promove o crescimento e desenvolvimento da prstata.

A hipersecreo de prolactina est associada hipogonadismo em ambos os sexos. Nos

homens uma hiperprolactinmia pode levar inibio da sntese de testosterona com

consequente diminuio da espermatognese e infertilidade. Nas mulheres pode levar

supresso da ovulao resultando em amenorreia e infertilidade.

O doseamento da prolactina srica ainda importante na deteo de desordens

hipotalmicas e da hipfise.(12)

B.3.2. Gonadotrofinas FSH (Hormona Folculo-Estimulante) e LH (Hormona

Luteinizante)

So hormonas libertadas pela hipfise anterior, sob estmulo do hipotlamo. Nos

ovrios as gonadotrofinas estimulam o crescimento e amadurecimento do folculo e por

conseguinte, a biossntese de estrognios e progesterona. Nas mulheres a FSH estimula o

amadurecimento dos folculos ovricos e quando na presena de LH, promove a secreo de

estrognios pelos folculos maduros. J a LH induz a posterior a ovulao e a formao do

corpo lteo que, sobre libertao pulstil da LH, secreta progesterona e estradiol. Nos

homens a FSH estimula a espermatognese pelas clulas de Sertoli nos testculos e a LH

responsvel pela produo de testosterona pala clulas de Leydig.(12)


22

A FSH ainda importante no diagnstico e monitorizao da eficcia teraputica em

distrbios da hipfise e das gonadas e a LH no diagnstico de anomalias testiculares e de

infertilidade.

B.3.3. Estradiol

Hormona esteroide pertencente ao grupo dos estrognios e sintetizada,

principalmente, nos folculos ovricos, corpo lteo e placenta a partir do colesterol.

responsvel pelo desenvolvimento das caractersticas sexuais secundrias femininas

nomeadamente o desenvolvimento do peito, distribuio dos plos corporais e deposio de

gordura. A sua sntese dependente dos nveis de FSH e LH e varia durante o ciclo menstrual.

O seu doseamento til no estudo da puberdade precoce nas raparigas e da

ginecomastia no homem. igualmente til no doseamento diferencial da amenorreia e na

monitorizao da induo da ovulao.(12)

B.3.4. Progesterona

Hormona esteroide sintetizada pelo corpo lteo no perodo ovulatrio e pela placenta

durante a gravidez cuja secreo dependente da LH. A sua principal funo preparar o

tero para a possvel implantao do blastocisto e manter essa gravidez. Atua tambm em

associao com a prolactina na preparao da glndula mamria para a lactao.

O doseamento da progesterona utilizado para a deteo da ovulao e de alteraes

do ciclo menstrual, bem como no diagnstico e tratamento de doenas dos ovrios ou da

placenta.(12)

B.3.5. Testosterona

Principal andrognio secretado pelos testculos e pelas glndulas adrenais. Esta

hormona promove o desenvolvimento e crescimento dos testculos e o desenvolvimento dos

caracteres sexuais secundrios masculinos como a disposio dos plos corporais, aumento

da lbido e da massa muscular e da agressividade.

O doseamento da testosterona executado principalmente quando se suspeita de

hipogonadismo no homem. Nas mulheres um aumento do seu nvel srico pode estar

relacionado com tumores no ovrio ou hiperplasia das glndulas adrenais.(12)

B.4. Hormanas de Avaliao da Funo Tiroideia

A glndula da tiroide constituda por 2 lbulos ligados por um istmo e localiza-se na

parte posterior do pescoo. A sua estrutura folicular, a nica entre as glndulas endcrinas,


23

esta relacionada com a sua dependncia funcional do oligoelemento, iodo, para a sntese das

hormonas tiroideias.(12)

A principal funo da glndula da tiroide a produo e armazenamento das hormonas

tiroideias triidotironina (T3) e tetraiodotironina (T4). A produo destas hormonas ocorre

aps estimulao das clulas pela hormona da hipfise, TSH (Hormona Estimuladora da

Tiroide) que por sua vez previamente regulada pela TRH (Hormona libertadora da

tiriotrofina) ao nvel Hipotalmico.(12)

Na circulao sangunea T3 e a T4 podem circular ligadas a um transportador ou sobre

a forma livre sendo nesta ltima que elas exercem atividade biolgica.

B.4.1. Hormona estimuladora da tiroide (TSH)

Tambm designada de hormona tireotrfica, uma glicoprotena sintetizada pelo

lbulo anterior da hipfise e que se liga aos recetores da TSH permitindo estimular e regular

a produo das hormonas da tiroide T3 e T4.

O doseamento desta hormona permite o diagnstico diferencial do hipotiroidismo e a

monitorizao da teraputica de substituio das hormonas da tiroide. Em casos de

hipertiroidismo, os valores de TSH encontram-se normalmente reduzidos, por outro lado, em

casos de hipotiroidismo os nveis sricos de TSH esto elevados.(12)

B.4.2. Tetraiodotironina (T4)

A T4 a principal hormona da tiroide e encontra-se maioritariamente ligada a protenas

transportadoras plasmticas.

Valores baixos de T4 so encontrados no hipotiroidismo e nas carncias de iodos

enquanto que valores elevados ocorrem no hipertiroidismo e nas subcargas de iodo. A frao

livre da T4 a que reflete melhor o estado funcional da tiroide j que no influenciada pelas

variaes fisiolgicas das protenas transportadoras como a albumina e a TGB.

Em casos de gravidez e de doentes sujeitos a teraputicas base de estrognio e em

hiperproteinmias verifica-se um aumento da T4 total por aumento das protenas plasmticas

de transporte. Doentes com neoplasias hepticas ou gastrointestinais assim como deficincia

gentica da TGB (protena ligadora da tiroxina) apresentam valores de T4 total diminudos.(12)

B.4.3. Triiodotironina (T3)

Esta hormona e proveniente na grande maioria da desiodinao perifrica da T4 e uma

pequena parte da secreo da tiroide. Pode encontrar-se ligada a protenas de transporte ou


24

sobre forma livre que a fisiologicamente ativa. O doseamento desta forma livre sempre a

mais indicada para a avaliao de patologias associadas tiroide j que no alterada por

variaes de concentrao/produo das protenas transportadoras das hormonas da tiroide.

A elevao dos nveis de T3 livre no soro ocorre em situaes de hipertiroidismo e de doenas

autoimunes da tiroide.(12)

A T3 total utilizada deteo de casos de hipertiroidismo, no entanto, existem outras

patologias no relacionadas com a tiroide que elevam a concentrao de T3.

B.5. Eletroforese de protenas

A eletroforese das protenas uma anlise

muito til, usada na rotina laboratorial das anlises

clnicas, com vista deteo de anomalias no perfil

proteico. Esta anlise baseia-se na separao

consoante a carga eltrica de superfcie, o peso

molecular e a estrutura proteica. Deste modo as

protenas percorrem diferentes distncias formando

as bandas denominadas de albumina, 1-globulina,

2- globulina, -globulina e -globulina que

posteriormente so quantificadas. (14)

Observa-se diminuio da concentrao de albumina em situaes que promovam a

sua perda, por baixa ingesto proteica ou elevado catabolismo. As fraes -globulina

apresentam nveis aumentados em processos inflamatrios, infeciosos e imunes. O aumento

das -globulinas observado em situao de perturbao do metabolismo lipdico ou anemia

ferropriva. A ausncia ou diminuio da banda- indica imunodeficincias congnitas ou

adquiridas. J o seu aumento sugere elevao policlonal das imunoglobulinas, associado a

condies inflamatrias, neoplsicas ou infeciosas. Um aumento monoclonal pode ser

observado no mieloma mltiplo e em outras desordens linfoproliferativas como a

macroglobulinemia de Waldenstrm.(14)

B.6. Imunofixao de protenas

A imunofixaao uma tcnica que se destina deteo de protenas monoclonais no

soro humano, por eletroforese em gel de agarose. Esta tcnica geralmente realizada quando

detetada uma gamopatia monoclonal no proteinograma ou quando os valores da frao das

-globulinas esto muito acima do normal.

Ilustrao 7 Representao de um perfil eletrofortico normal


25

As protenas so separadas por eletroforese em meio alcalino e depois

imunoprecipitadas com antissoros de diferentes especificidades: anti-cadeias pesadas (IgG),

(IgA) e (IgM) e anti-cadeias leves e (livres e ligadas). (15)

Para se identificar de forma precisa a

natureza das bandas monoclonais, cada amostra

testada com todos os antissoros

simultaneamente. Depois da eletroforese, a pista

ELP serve de referncia onde no foi adicionando

qualquer antissoro mostrando assim o perfil

eletroforetico das protenas da amostra. As

restantes cinco pistas permitem a caracterizao

da(s) banda(s) monoclonal(ais). Ilustrao 8 Representao de uma imunofixao de protenas em gel de agarose

HEMATOLOGIA

26

C. Hematologia

C.1. O Setor

No setor da Hematologia trabalham diversos profissionais de sade, empenhados em

fornecer os melhores resultados. Entre estes, encontram-se tcnicos de diagnstico e

teraputica, tcnicos superiores de sade e mdicos especialistas em patologia clnica.

O local de trabalho est dividido em vrias reas, sendo uma delas dedicada realizao

dos hemogramas, velocidades de sedimentao (VS), observao microscpica de esfregaos

sanguneos e s tcnicas manuais em geral, e a outra hemstase e citometria de fluxo. Dispe

ainda de uma sala polivalente onde se determinam parmetros analticos por biologia molecular

relacionados com a patologia hematolgica.

Tal como nos restantes setores, na hematologia as amostras seguem um circuito

especfico pelo que, logo aps a admisso dos devidos tubos, estes so separados e etiquetados

conforme se destinem a cada uma das reas referidas. Na primeira rea, as amostras com

pedido de VS e hemograma so primeiramente colocadas num agitador de tubos passando de

seguida para o contador de clulas e depois para a determinao da VS. Para pedidos de

coagulao e hemstase, assim como citometria de fluxo, so efetuadas colheitas especficas

para o efeito. Posteriormente, e se necessrio, realizado o esfregao sanguneo, antes das

amostras serem arrumadas.

relevante referir que, neste setor, o volume de sangue um dos fatores mais

importantes a ter em conta. Aquando da colheita, e no prprio setor, o volume de sangue no

tubo deve ser verificado, j que os efeitos de diluio do anticoagulante ou a

hemoconcentrao podem conduzir a alteraes nos resultados.

C.1.1. Equipamentos, princpios de funcionamento e tcnicas manuais

No global existem sete equipamentos a funcionar neste setor. Dois contadores de

clulas, um analisador de VS, dois analisadores de coagulao e hemstase, um citmetro e

um analisador biomolecular. Os contadores de clulas e os analisadores de coagulao e

hemstase geralmente so utilizados alternadamente, a no ser para confirmao dos

resultados, caso se justifique.


27

C.1.1.1. Beckman Coulter LH 750

Trata-se de um contador de clulas. Este equipamento

baseia-se no Principio de Coulter, na medio fotomtrica e

na tecnologia VCS. Pelo princpio de Coulter ou princpio da

impedncia cada partcula (clula) suspensa num lquido

condutor (diluente) pode ser vista como um isolador que

medida que atravessa uma abertura aumenta

momentaneamente a resistncia ao percurso eltrico entre os

dois eltrodos submersos. Desta forma, originado um

impulso eltrico que pode ser detetado e medido. Enquanto o nmero de impulsos indica a

contagem das partculas, a sua amplitude ser proporcional ao volume que cada partcula

ocupa, neste caso, ao volume celular. (16-18)

Ilustrao 9 Mtodo Coulter para contagem e determinao do tamanho celular

A medio fotomtrica destina-se exclusivamente medio da concentrao de

hemoglobina. Neste mtodo, um feixe de luz branca proveniente de uma lmpada

incandescente passa atravs de um filtro de comprimento de onda de 525 nm e depois atravs

da cuvete, sendo medida a intensidade de luz no detetor. A absorvncia do pigmento ser

proporcional concentrao de hemoglobina na amostra. (16, 17)

Por outro lado, a tecnologia VCS aplicada na contagem diferencial de leuccitos

utilizando trs variveis correspondentes ao volume celular individual, condutividade de alta

frequncia e disperso de luz lazer (Ilustrao 10). Uma corrente de baixa frequncia mede

o volume dos leuccitos. Como as paredes da clula atuam como condutores de corrente de

alta frequncia, esta corrente ao atravessar as paredes e o interior de cada clula, permite

detetar as diferenas nas propriedades isoladoras destes componentes. So desta forma

caracterizados os constituintes nucleares e granulares e a composio qumica do interior da

clula. Por fim, atravs da disperso da luz lazer possvel caracterizar a superfcie celular. (16,

17)

Fig. 11 Beckman Coulter LH 750

HEMATOLOGIA

28

Ilustrao 10 Tecnologia VCS. esquerda aplicada a corrente de baixa frequncia. Segue-se a de alta

frequncia e por fim a disperso lazer. direita pode ser observada a perspetiva tridimensional

C.1.1.2. ALIFAX TEST1 BCL

Analisador automtico fechado, destinado medio de VS.

A 37C e aps uma centrifugao a aproximadamente 20g, a

microssedimentao eritrcitaria medida quantitativamente por

uma tecnologia baseada em fotometria capilar. Este sistema utiliza

um microfotmetro de infravermelho com um comprimento de

onda de 950 nm durante 20 segundos. Os impulsos eltricos so

ento medidos atravs de um detetor de fotododos e sero

diretamente proporcionais concentrao de eritrcitos. Por fim traada uma curva e os

dados so convertidos nos valores de Westergren atravs de um modelo de regresso linear.

(19)

C.1.1.3. Instrumentation Laboratory ACL TOP 500

Este um analisador utilizado para estudos de

coagulao e hemstase. A deteo do cogulo

efetuada atravs da tecnologia fotomtrica sendo

executados neste caso dois tipos de testes, os

coagulomtricos e os imunolgicos. Os

coagulomtricos baseiam-se no princpio da

turbidimetria. Usando um comprimento de onda de 671 nm e uma deteo a 180 medido

Fig. 12 TEST1 BCL

Fig. 13 ACL TOP 500

Ilustrao 11 Representao esquemtica do princpio de funcionamento


29

o decrscimo da luz transmitida medida que o cogulo se vai formando Os testes

imunolgicos baseiam-se no princpio da imuno-turbidimetria em que, aps a formao de um

complexo Antignio-Anticorpo, medido o decrscimo da luz por turbidimetria. Podem ser

usados os comprimentos de onda de 405 ou 671 nm em funo do teste. (20)

C.1.1.4. Beckman Coulter FC500-MCL

Trata-se de um equipamento automatizado que

utiliza a citometria de fluxo. O sistema constitudo por

uma fonte de radiao, cmara de fluxo, unidades de filtros

ticos para seleo de um intervalo de comprimento de

onda especfico e fotododos ou fotomultiplicadores para

a deteo e processamento dos sinais de interesse. Aps

injetar a suspenso celular, atravs da focagem

hidrodinmica do fluxo de amostra, as clulas iro passar de forma individual e em regime

laminar atravs da cmara. Posteriormente, estas clulas so intercetadas pelo feixe de

radiao de excitao, que sofre disperso, quer na direo frontal (forward scattering), quer

lateral (side scattering) e que revelam informaes sobre a morfologia celular tal como a

dimenso e complexidade, respetivamente. Compostos celulares, passveis de se ligarem a

corantes fluorescentes, so tambm detetados e permitem a diferenciao seletiva de

subpopulaes com base na combinao de vrios fluorocromos e respetiva emisso de

fluorescncia.(21)

Ilustrao 12 Representao esquemtica da configurao do FC 500

C.1.1.5. Cepheid GeneXpert

O GeneXpert um equipamento automatizado

fechado, para anlise de biomolecular baseado na Reao em

Cadeia da Polimerase em Tempo Real (Real-Time PCR). Este

mtodo combina a amplificao, do tradicional mtodo de

PCR, com a deteo e quantificao em tempo real, atravs

da monitorizao contnua da fluorescncia emitida medida

Fig. 14 Beckman Coulter FC500

Fig. 15 GeneXpert

HEMATOLOGIA

30

que os produtos se vo formando. Deste modo todos os processos de amplificao, deteo

e quantificao de DNA realiza-se numa s etapa sendo possvel obter resultados rapidamente.

C.1.1.6. Tcnicas manuais

A maioria das tcnicas manuais, existentes no setor de hematologia, tem vindo a ser

menos utilizada devido ao aparecimento de tcnicas mais eficazes, precisas e com tempos de

resposta mais curtos, como o caso dos modernos contadores de clulas e os citmetros de

fluxo. Neste lote incluem-se as tcnicas de contagem de reticulcitos e plaquetas, a Fosfatase

Alcalina Leucocitria, Mieloperoxidade, cido Peridico de Schiff, Fosfatase cida e as

Esterases, todas realizadas no estgio mas apenas didaticamente. As tcnicas utilizadas com

maior frequncia so a Colorao de Wright e a Colorao de Perls (Ferro).

C.1.1.6.1. Esfregao sanguneo

Qualquer uma das tcnicas manuais implica sempre a realizao prvia de um esfregao

sanguneo seguida da secagem e colorao. Desta forma torna-se essencial que este seja bem

executado, pois s assim permitir uma boa identificao das clulas sanguneas. Um dos

primeiros aspetos a ter em considerao o tamanho da gota de sangue pois pretende-se um

esfregao fino de modo que se forme apenas uma camada de clulas. O esfregao deve

apresentar bordos retos, longos e contnuos e ser uniforme, sem apresentar buracos ou

linhas de interrupo. Com isto, asseguramos uma mais fcil observao morfolgica e

contagem ao microscpio tico. Esta observao importante que se realize no centro do

esfregao onde as clulas esto melhor distribudas e ntegras.

Ilustrao 13 Representao esquemtica da realizao de um esfregao sanguneo


31

C.1.1.6.2. Colorao de Wright

Consiste na combinao de um corante cido (Eosina) com um corante bsico (Azul

de Metileno). Aps esta colorao ser possvel fazer a frmula leucocitria assim como a

observao das caractersticas morfolgicas das clulas. Tais estudos so realizados sempre

que os resultados ou a situao clinica o justifique. Enquanto os ncleos devem apresentar

diversos tons de prpura, os citoplasmas podero variar de azul a cor-de-rosa; eosinfilos

tero grnulos cor-de-laranja claros e os basfilos grnulos grossos e azuis-escuros. (22)

C.1.1.6.3. Colorao de Perls

Destina-se colorao histolgica do ferro em fragmentos de medula ssea. Baseia-se

na reao do azul da Prssia em que o ferro inico reage com ferrocianeto cido produzindo

uma cor azul. especialmente usada para avaliar os depsitos de ferro em fragmentos de

medula ssea e identificao de sideroblastos e sidercitos. (23)

C.1.2. Controlo de Qualidade

Alm do CQI dirio para cada um dos equipamentos este setor participa tambm em

dois programas de AEQ, do RIQAS e INSA. Diariamente so executados, antes do incio do

Ilustrao 14 Demonstrao de um esfregao sanguneo

Ilustrao 15 Colorao de perls num fragmento de medula ssea

HEMATOLOGIA

32

trabalho, trs diferentes nveis de controlo e os resultados obtidos so tratados e avaliados

segundo as regras de Westgard.

No que respeita coagulao e hemstase, o CQE feito de igual modo. No entanto,

no caso do CQI, alm do que feito com os restantes equipamentos, a cada mudana dos

reagentes ou a cada 100 testes o equipamento executa automaticamente novo controlo de

forma a verificar se os resultados continuam dentro dos limites de aceitabilidade.

C.2. Hemograma

sem dvida um dos exames complementares de diagnstico mais requisitados e que

permite a quantificao dos elementos celulares do sangue tais como eritrcitos, leuccitos e

plaquetas. Este exame , deste modo, fundamental para o estudo da funo hematolgica. No

entanto, consoante a situao clnica do doente, pode ser necessria uma anlise mais

cuidadosa dos elementos celulares, que para alm de uma simples quantificao implica

tambm um estudo morfolgico que pode se realizado atravs de um esfregao sanguneo.

Uma colheita e um processamento apropriado da amostra de sangue essencial para

a obteno de um bom hemograma. Assim, aps uma cuidadosa venipuntura, o sangue

transferido para um tubo contendo anticoagulante, no caso o EDTA tripotssico (EDTA-3K),

cujo objetivo bloquear o clcio necessrio ocorrncia da coagulao ao mesmo tempo que

conserva a morfologia dos leuccitos e eritrcitos permitindo tambm uma contagem das

plaquetas mais correta. No entanto, quando em excesso, este anticoagulante pode alterar

morfologicamente os eritrcitos, que ficam com um aspeto crenado, diminuir o hematcrito

e o volume corpuscular mdio, aumentar a concentrao de hemoglobina corpuscular mdia

e promover a aglutinao das plaquetas levando a contagens falsamente baixas

(pseudotrombocitopenia).(24)

C.2.1. Eritrograma

Os eritrcitos, alm de serem as clulas mais abundantes do organismo humano,

caracterizam-se pela ausncia de ncleo, mitocndrias e ribossomas e por apresentarem a

forma de disco bicncavo. esta forma que lhes permite ter uma extensa rea de superfcie

em relao ao volume citoplasmtico amentando assim a eficincia da difuso das trocas

gasosas. Alm disso como cerca de 98% da protena presente no citoplasma dos eritrcitos

circulantes a hemoglobina estas clulas so altamente especializadas no fornecimento de O2

aos tecidos e o retorno de CO2 dos tecidos para os pulmes. O eritrograma destina-se, assim,

ao rastreio, quantificao e diagnstico causal das anemias e poliglobulias e consiste na

determinao de trs parmetros quantitativos, a contagem dos eritrcitos (RCB),


33

concentrao de hemoglobina (Hgb) e hematcrito (Hct), e de trs ndices que permitem

descrever as caractersticas qualitativas, o volume corpuscular mdio (MCV), hemoglobina

corpuscular mdia (MCH) e a concentrao de hemoglobina corpuscular mdia (MCHC). (18,

25)

C.2.1.1. Contagem de Eritrcitos

Inicialmente, esta contagem era realizada em cmara de contagem ao microscpio.

Contudo, dada a impreciso desses mtodos, atualmente feita recorrendo a mtodos

automticos, mais precisos, e que realizam as contagens em sangue total diludo em meio

isotnico. O nmero de eritrcitos , assim, medido diretamente pelo princpio de Coulter, e

multiplicado pelo fator de calibrao.(16, 18)

C.2.1.2. Concentrao de Hemoglobina

Como a hemoglobina uma protena dotada de uma colorao forte, a sua

quantificao possvel recorrendo a mtodos espetrofotomtricos. Deste modo, as vrias

formas de hemoglobina presentes no sangue podem ser convertidas num componente comum

estvel, a cianometahemoglobina. A absorvncia deste composto ser proporcional

concentrao de hemoglobina presente, sendo o valor desta protena expresso em grama por

decilitro de sangue (g/dl).(16, 18)

C.2.1.3. Hematcrito

Corresponde ao volume relativo dos eritrcitos existentes no sangue total, no

coagulado. A forma original para a sua determinao passava pela centrifugao do sangue total

em tubo capilar lendo-se de seguida a altura da coluna de eritrcitos. No entanto, apesar da

reprodutibilidade, era sistematicamente inexato.(18) O resultado expressa-se em

percentagem e atualmente um parmetro calculado pelo autoanalisador, multiplicando o

nmero de eritrcitos pelo volume corpuscular mdio.(16)

C.2.1.4. Volume Corpuscular Mdio

Este parmetro representa o volume mdio dos eritrcitos e til na classificao das

anemias (normocticas, macrocticas e microcticas). Geralmente determinado pelos

autoanalisadores recorrendo ao histograma de RBCs mas pode ser calculado pelo quociente

entre o hematcrito e o nmero total de eritrcitos. Expressa-se em fentolitros (fL).(18)

HEMATOLOGIA

34

C.2.1.5. Hemoglobina Corpuscular Mdia

Representa a quantidade mdia de hemoglobina por cada eritrcito expressa em

picogramas (pg) e um parmetro calculado pelo quociente entre a hemoglobina e o nmero

total de eritrcitos.(18)

C.2.1.6. Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia

O valor que obtido representa a concentrao mdia de hemoglobina por eritrcito

permitindo avaliar a cromia (normocromia ou hipocromia). Pode ser calculada atravs do

quociente entre a hemoglobina e o hematcrito e expressa-se em grama por decilitro

(g/dL).(18)

C.2.1.7. Amplitude de distribuio de eritrcitos (RDW)

O RDW corresponde distribuio do tamanho da populao de eritrcitos calculados

a partir do histograma de RBC. Expressa-se em coeficiente de variao (CV) % e permite a

avaliao da heterogeneidade volumtrica das populao de eritrcitos. Atravs desta

determinao, caso se demonstre, por exemplo, um valor acima do limite normal, poder ser

sugestivo de anisocitose alertando o profissional de sade que o poder confirmar atravs de

um esfregao.(18)

C.2.1.8. Reticulcitos (RET)

A eritropoiese corresponde ao processo atravs do qual a partir de clulas tronco

indiferenciadas, presentes na medula ssea, se formam os eritrcitos e encontra-se sob a

regulao da eritropoetina (EPO). Ao longo deste processo de maturao o ncleo acaba por

ser expelido persistindo, no entanto, os organelos necessrios sntese proteica mas que vo

sofrendo progressivo catabolismo. Quando so usados os corantes habituais, este RNA

ribossomal, atribui aos eritrcitos imaturos uma colorao acinzentada geralmente designada

de policromasia que nem sempre fcil de ser observada ao microscpio. Usando uma

colorao supravital como o caso do novo azul-de-metileno ocorre precipitao destes

ribossomas formando grnulos corados de azul de fcil observao e que nos confirmam a


35

presena de reticulcitos. Atravs desta contagem ser assim possvel avaliar o funcionamento

da medula em resposta a alteraes na contagem de eritrcitos. Existem no entanto diversas

partculas no RNA, nomeadamente corpos de Heinz e de Howell-Jolly, que facilmente so

confundveis induzindo o profissional de sade a contagens falsamente elevadas. (18, 25)

C.2.2. Leucograma

Geralmente os leuccitos so divididos em dois grandes grupos, os polimorfonucleares

(PMN), ou granulcitos, que incluem os neutrfilos, eosinfilos e basfilos e os

mononucleares (MN), ou agranulcitos, que incluem os moncitos e os linfcitos. Enquanto

os granulcitos se caracterizam por terem um citoplasma com grnulos especficos, um ncleo

segmentado e irregular, os agranulcitos possuem um ncleo grande, mais regular e sem

segmentaes, sendo o citoplasma desprovido de granulao especfica.(18)

a partir destas caractersticas que se determina o leucograma e que se torna possvel

a contagem de leuccitos, a determinao da frmula leucocitria e a quantificao e avaliao

morfolgica destas diferentes populaes celulares. A quantificao ser particularmente til

para identificar situaes de infeo e seguir o progresso de certas doenas e terapias, como

leucemias e linfomas alertando, no caso, o profissional de sade para o recuso a metodologias

mais sofisticadas.

C.2.2.1. Neutrfilos

Tambm denominados PMN, so os leuccitos mais abundantes no sangue perifrico

do adulto. Caracterizam-se por ter um ncleo com cromatina densa e segmentada em 2 a 5

lbulos. O citoplasma abundante, apresenta uma granulao fina de origem lisossmica,

contendo principalmente enzimas hidrolticas e cora de rosa aps colorao de Wright. Por

vezes podero aparecer no sangue perifrico os neutrfilos em basto que correspondem aos

neutrfilos que ainda no completaram o seu desenvolvimento.(25)

Ilustrao 16 esquerda possivel observar a aparncia dos reticulcitos. Ao centro corpos de Heinz. direita corpos de Howell-Jolly

HEMATOLOGIA

36

C.2.2.2. Eosinfilos

Apresentam um ncleo com 2 a 3 lbulos e uma cromatina densa e sem nuclolos. O

citoplasma caracteriza-se pela forte presena de grnulos com afinidade para corantes cidos,

que aps colorao de Wright adquirem uma colorao laranja e por isso so facilmente

identificados por microscopia. Participam nos mecanismos

de defesa contra corpos estranhos e parasitas estando

ainda envolvidos nas reaes alrgicas

e na remoo de fibrina formada

durante o processo inflamatrio. (25)

C.2.2.3. Basfilos

So os leuccitos menos numerosos do sangue perifrico. Caracterizam-se por terem

abundantes grnulos citoplasmticos, que geralmente cobrem o ncleo por completo, e que

tm uma grande afinidade para corantes bsicos, adquirindo uma cor azul escura aps

colorao de Wright. O ncleo, quando visvel, apresenta-se pouco segmentado mas com dois

a trs lbulos. A sua principal funo consiste em libertar heparina de forma a evitar a formao

do cogulo e histamina para promover a vasodilatao,

permitindo assim a migrao dos neutrfilos,

moncitos e eosinfilos aos locais de

inflamao. Esto tambm envolvidos nas

reao de hipersensibilidade imediata. (25)

C.2.2.4. Moncitos

Os moncitos, juntamente com os macrfagos e clulas dendrticas constituem o

sistema mononuclear fagoctico cuja principal funo a fagocitose. So clulas com ncleo

no lobulado, irregular e geralmente com a forma de feijo ou ferradura, em posio central

ou excntrica na clula. O citoplasma abundante e adquire uma colorao azul-acinzentada

Ilustrao 17 Aparncia dos neutrfilos ao microscpio tico. esquerda um neutrfilo maduro direita um imaturo ou em basto

Ilustrao 18 Aparncia dos eosinfilos ao microscpio

tico

Ilustrao 19 Aparncia de um basfilo ao microscpio tico


37

no apresentando grnulos especficos. Na corrente sangunea so capazes de eliminar fatores

de coagulao ativados, limitando o processo de coagulao, eliminar protenas desnaturadas

e complexos antignio-anticorpo. Em resposta inflamao,

migram para os tecidos onde se diferenciam em

macrfagos e eventualmente clulas

dendrticas desempenhando importante papel

no desenrolar da resposta imunitria. (25)

C.2.2.5. Linfcitos

Juntamente com os moncitos so tambm clulas MN, no entanto apresentam um

ncleo regular que ocupa grande parte da clula e cromatina muito condensada que cora de

azul-escuro aps colorao de Wright. O citoplasma no tem grnulos especficos e apresenta

uma cor azul clara. Existem duas importantes populaes de linfcitos, os linfcitos B (LB),

B de bone marrow por completarem a sua maturao na medula ssea, e os linfcitos T

(LT), T de thymus por completaram a sua maturao no timo. Enquanto os LB so

responsveis pela imunidade humoral, atravs da produo e libertao de anticorpos capazes

de neutralizar os antignios, os LT esto envolvidos na imunidade celular e subdividem-se

genericamente em LT CD4+ (auxiliares) e LT CD8+ (citotxicos). Os LT CD4+ medeiam a

defesa do organismo atravs da libertao de citocinas que vo ativar, entre outras clulas, os

LB e os macrfagos. Os LT CD8+ esto mais envolvidos na resposta contra antignios

endgenos, por exemplo peptdeos virais, atravs da produo de perforinas e granzimas e

ainda na atividade antitumoral. Ao microscpio tico pode observar-se que, quando os

linfcitos se encontram ativados, apresentam o citoplasma

mais volumoso e mais basoflico sendo sugestivo da

existncia de um processo

inflamatrio mesmo que no se

verifique leucocitose.(25)

C.3. Velocidade de Sedimentao (VS)

um teste no especfico mas frequentemente utilizado para medir a velocidade de

sedimentao dos eritrcitos no plasma durante o perodo de uma hora. Para a sua realizao

utilizado o mesmo tubo, contendo EDTA, em que previamente se realizou o hemograma.

A composio do plasma um dos fatores que mais diretamente influencia a velocidade

de sedimentao globular pois, um aumento da presena de protenas plasmticas como o

fibrinognio e as imunoglobulinas, provocam alteraes da carga de superfcie dos eritrcitos,

Ilustrao 21 Aparncia dos linfcidos ao microscpio tico

Ilustrao 20 Aparncia de um moncito ao microscpio tico

HEMATOLOGIA

38

normalmente carregados negativamente, favorecendo a sua agregao e consequente

formao de rouleaux e aglutinados eritrocitrios que aumentam a VS. Fatores relacionados

com os eritrcitos como o seu tamanho tambm iro causar alteraes nestes valores.

Num individuo saudvel ou com uma situao patolgica no inflamatria, a VS

apresenta um valor at 20 mm/h. Este valor geralmente vem alterado em condies patolgicas

do tipo infecioso ou inflamatrio embora possam ocorrer causas no patolgicas como a

gravidez que tambm podem alterar a VS. Fatores de origem pr-analtica como a

concentrao de anticoagulante e hemlise tambm a podero alterar.(26)

C.4. Hemstase

Na realizao de estudos de hemstase, alm dos cuidados j referidos para o

hemograma, a amostra tem, no entanto, de ser colhida para um tubo prprio contendo o

citrato de sdio (9:1). Apesar deste anticoagulante tambm bloquear o processo de coagulao

Relatório Ivo Barreiros

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