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Histologia e seus métodos de estudo Rosiane Nascimento Alves

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Histologia e seus métodos de estudo

Rosiane Nascimento Alves

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Tecidos do corpo órgãos

4 tipos de tecidos fundamentais:

◦ Tec. Epitelial

◦ Tec. Conjuntivo

◦ Tec. Muscular

◦ Tec. Nervoso

Histologia

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Constituição:

◦ Células + matriz extracelular (MEC)

Cada tecido:

◦ Células + MEC característicos

Distinção no reconhecimento

Tecidos

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Método mais utilizado MO

◦ Feixe de luz atravessa a estrutura

Tecidos e órgãos são espessos

◦ Fixação da amostra, inclusão em parafina, corte

histológico, coloração.

Preparação de tecido para microscopia

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Fixação

◦ Evitar autólise e preservar estrutura e composição

◦ Física (congelamento) ou química (formaldeído 4%)

Inclusão

◦ Desidratação em etanol e clareamento em xilol

◦ Inclusão em parafina

Preparação de tecido para microscopia

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Bateria de inclusão

Blocos de parafina

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Microtomia

◦ Cortes de 4µm de espessura em lâmina de vidro

1µm = 0,001mm

Preparação de tecido para microscopia

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Coloração Evidenciar os vários componentes dos tecidos,

células e MEC Corantes: caráter ácido ou básico que formam ligações

eletrostáticas (salinas) com componentes ionizados dos tecidos

Ácido

Básico Básico

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Hematoxilina e Eosina (HE) Hematoxilina: corante básico (azul ou violeta)

Liga-se à estruturas basófilas (núcleo) Eosina: corante ácido (rosa)

Liga-se à estruturas acidófilos (citoplasma)

Células intestinas de camundongos

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Hematoxilina e Eosina (HE) Aplicações:

Caracterização do tecido Identificação de carcinoma Identificação de infiltrado inflamatório → PATOLOGIA

Células renais humanas

Células renais de carcinoma humano

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Hematoxilina e Eosina (HE) Infiltrado Inflamatório

Células hepáticas de camundongo

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Hematoxilina e Eosina (HE) Necrose

Células hepáticas de camundongo

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Microscópio de luz

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Imagem aumentada e com detalhes

Limite de resolução:

◦ A menor distância entre 2 partículas que permite

visualizá-las como 2 objetos separados.

◦ MO: 0,2µm (0,002mm)

◦ MET: 3nm (0,003µm ou 0,00003mm)

Resolução

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Contraste de fase

◦ Células e cortes não corados (transparentes)

Outras microscopias

Microscopia convencional

Contraste de fase Contraste diferencial

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Reação de Imunohistoquímica (IH)

Infecção por Leishmania sp. Amastigotas extracelulares (A) e intracelulares (B).

Detecção da reação química:

Anti-Leishmania + enzimaSubstrato da enzima PRECIPITADO

MARROM

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Reação de Imunofluorescência (IF)Baseada na excitação de átomos de fluorocromo

1. Emissão de luz (fotons) com pequeno (comprimento de onda).

2. Excitação de elétrons, os quais saltam de camada.

3. Estes retornam à sua camada original.

4. Liberação de luz (fotons) em um maior comprimento de onda (visível).

5. Visualização com microscópio de fluorescência. (confocal)

UV(Não

visível)Espectr

o visível

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Infecção por Listeria monocitogenes

LaranjaMarcador anti-L. monocitogenes

VerdeFilamentos de actina

AmareloSobreposição das duas marcações:Laranja e verde

Microscopia de Fluorescência (MF)

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Microscopia Confocal O espécime é iluminado por um feixe de luz muito estreito A imagem coletada deve passar por um orifício muito

pequenoFocalizar um único plano de cada vez sem deterioração da

imagem• Luz fora do foco é eliminada

• Definição melhorada do objeto

• Localização mais precisa de componentes do espécime

Reunir os vários planos = objeto 3D

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Cultura de plasmócitos

AzulDNA

VerdeFimamentos intermediários

VermelhoFilamentos de actina

Microscopia Confocal

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Microscopia Confocal

Fases do ciclo celular

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Microscopia Eletrônica de Transmissão

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Microscopia Eletrônica de Transmissão

Cardiomiócitos de Tilápia tailandesa

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Microscopia Eletrônica de Transmissão

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Microscopia Eletrônica de Transmissão Marcação citoquímica para detecção enzimática:

Incubação em meio Gormori

-glicerofosfato + Pb(NO3)2 → ↓Pb(PO4)

Fosfatase ácida

Célula renal de rato

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Microscopia Eletrônica de TransmissãoN

MIL

N

CE L

LL

L

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Microscopia Eletrônica de Varredura Imagens pseudotridimensionais das superfícies de células,

tecidos e órgãos

• Os elétrons não atravessam o espécime

• Os elétrons varrem uma delgada camada de metal aplicada ao espécime e são refletidos pelos átomos do metal

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Microscopia Eletrônica de Varredura

Eritrócitos humanos

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Microscopia Eletrônica de Varredura

Mucosa respiratória de rato