SD s sem histidina 3AT 0 ou 2,5mM
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Figura 9: Esquema do protocolo de transformação e seleção de duplo-híbrido robotizável baseadas na interação entre as proteínas p53 e largeT. De duas transformações, cada uma contendo 1 g de pISCA (Gal4DL-p53), 1 g de pSEMPRESA (Gal4DA) e 0 ou 100ng de pPRESA (Gal4DA-largeT), foram tomadas alíquotas correspondentes a 0; 1; 5 e 10ng de pPRESA em tubos de cultura SDs líquida sem histidina suplementado com 3AT 0 ou 2,5mM e distribuídos em 96 poços de placa deepwell (400L por poço). O crescimento foi avaliado pela medida de densidade do meio líquido em espectrofotômetro com leitor de placa de ELISA (OD600nm) segundo protocolo de diluições F (Material e Métodos, item 3.15).
SDs sem histidina 3AT 0 ou 2,5mM
1 ng 0 ng 5 ng 10 ng
Transformação 1pISCA (1g)
pSEMPRESA (1g) pPRESA (100ng)
1:100 1:20 1:10
pPRESApISCA + pSEMPRESA
0 ng
1 ng
5 ng
10 ng
controle
4 placas grandes = 1 placa deepwell
22 setores
Transformação 2
pISCA (1g) pSEMPRESA (1g)
pPRESA (0ng)