7/25/2019 Sequenciamento de DNA de Nova Gerao e Suas

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Sequenciamento de DNA de gerao e sua aplicao n

desenvolvimento de marcadmicrossatlite

Maria Rafaela de Andrade Reis

Ilhus-2013

UNIVERSIDADE ESTADUA DE SANTA !RU"#R$%RA&A DE #'S %RADUA()$ E& %EN*TI!A E

+I$$%IA &$E!UAR

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Microssatlites Denio

Microssatlites (di-, tri-, tetranucleotide repeats)

SSR (sinle nucleotide re!eats"

1 reio a cada #0$000 !ares de %ase

Multi-allico

Alta hetero&iose ' inforati)o

*+cilente utili&+)el !elo uso de ,R e is de !oliacrila

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Des)antaens

,rocesso e9!erientalente lono$ tra%alhoso econoicaente:

;eralente !rodu&indo u !e4ueno n5ero de arcador

aracteri&ao !r)ia de se4u

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SSR )s: ?utras tcnicas

Schl@

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,ers!ecti)as futuras

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Se4uenciaento de DA de noerao

Se4uenciaento de DA e !lataforas ca!a&es de eraso%re ilh=es de !ares de %ases e ua 5nica corrida:

Maior custo %enecio co!arado ao todo de Saner:

,ossi%ilitou si!licar o se4uenciaento de randes !or=enoa a u custo uito acess7)el:

,eritindo assi u r+!ida e %arato desen)ol)iento de oleculares$ incluindo icrossatlites:

As duas !rinci!ais tecnoloias de se4uenciaento utili&addesco%erta de SSR so # da Roche e Sole9a da Illuina:

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,latafora #

,rieira !latafora de se4uenciaento de no)a era

Reali&a o se4uenciaento %aseado e s7ntese$ o !irose4

a!acidade de se4uenciar at #00 ilh=es!%$ e fraentos entre 00 e #0 !% de co!riento:

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,latafora #

,a- $ DNA .ragmentado ,/- adaptadores A e + em suase0tremidades

,c- ligados

,d- #!R ememulsoocorre

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,irose4uenciaento #

o sinal de lu& eitido identicado a cada %aseincor!orada$ e cada

!oo de se4uenciaento:

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,latafora Sole9a

Reali&ado !or s7ntese usando DA !olierase e nucleco diferentes Euor6foros:

Ino)ao consiste na clonae in vitro dos fraen

,ode reali&ar a leitura de 0 ilh=es de fraentos

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,latafora Sole9a

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,latafora Sole9a

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# )s: Sole9a

5ero total de %ases de nucleot7deos erados !or corrida

draaticaente:

#lata.orma p/ Valor por &/,EUA-

# 3#0-F20M%

GS H /$00 ' GSH1$00

iluina 2$#-20 ;% GSH 0$12 - GSH0$3

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