TÉCNICAS CITOQUÍMICAS UTILIZADAS NO ESTUDO DAS GLÂNDULAS ACESSÓRIAS MASCULINAS DE CHIROPTERA...
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TÉCNICAS CITOQUÍMICAS UTILIZADAS NO ESTUDO DAS
GLÂNDULAS ACESSÓRIAS MASCULINAS DE CHIROPTERA
(MAMMALIA)Disciplina: Microscopia e Microanálise Docente: Profa. Dra. Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira Discente: Cíntia Cristina Isicawa Puga
SUMÁRIO Projeto de Pesquisa
Técnicas Citoquímicas
Resultados Preliminares
PROJETO DE PESQUISA
Morfofisiologia da Próstata de Morcegos: Estudosnas espécies Artibeus planirostris e Platyrrhinus
lineatus (Phyllostomidae: Chiroptera)
Cíntia Cristina Isicawa Puga Prof. Dr. Sebastião Roberto Taboga (Orientador) – IBILCE/UNESP Profa. Dra. Patricia Simone Leite Vilamaior (Co-orientadora) - UNIRP
INTRODUÇÃO Ordem Chiroptera 2ª maior dos Mammalia
200 gêneros e 1000 espécies;
Regiões tropicais e temperadas, com exceção de algumas ilhas oceânicas remotas e a Antártica (REIS et al., 2006)
Ampla radiação + avanços nos estudos com enfoques evolutivos Aspectos relativos à biologia reprodutiva pouco
explorados glândulas acessórias do sistema genital e às relações
funcionais dessas glândulas com as variações sazonais
Ampla distribuição geográfica influência de fatores abióticos estratégias reprodutivas Detectadas através de comportamento ou
da avaliação funcional das gônadas e das glândulas anexas (SWAMI & LALL ,1982)
Morcegos hibernantes de zonas temperadas reprodutores sazonais
Zonas tropicais padrão reprodutivo complexo Influências Variações da temperatura, Pluviosidade, Disponibilidade de recursos alimentares -FLEMING et al., 1972;-FLEMING et al., 1972;
-TADDEI, 1976.-TADDEI, 1976.
OBJETIVO
Avaliar as glândulas sexuais acessórias masculinas, com ênfase à próstata de morcegos representantes da família Phyllostomidae (Artibeus planirostris e Platyrrhinus lineatus).
Platyrrhinus lineatus
http://www.flickr.com/photos/11412389@N05/2676572439/
Artibeus planirostris
http://www.morcegolivre.vet.br/artibeusplanirostris.html10
Método de Coleta Redes de Neblina Coletas seriadas
Hematoxilina-Eosina: estrutura glandular, quantificações celulares, reconstrução tridimensional e densidade de volume dos componentes prostáticos (avaliação estereológica);
Método do P.A.S: atividade secretora geral da glândula;
Método da Reticulina de Gömöri: elementos do estroma glandular.
Análise Imunocitoquímica para Receptor Androgênico (AR): expressão de receptores androgênicos (AR) durante os meses do ano.
Fosfatase ácida: Para a detecção da atividade de fosfatase ácida prostática
MICROSCOPIA DE LUZ
Microscopia Eletrônica de Transmissão e de Varredura
Dosagens hormonais: punção endocárdica Testosterona
FixaçãoRetirada do material
Inclusão em Resina/ParafinaSecções no Micrótomo
TÉCNICAS CITOQUÍMICAS Hematoxilina & Eosina
Hematoxilina (basófila) → substratos básicos → fosfato do DNA e RNA → núcleo e o Retículo Endoplasmático Rugoso, locais onde há grande quantidade de proteínas (básicas pelo seu grupamento amina)
Eosina (acidófila) → cora citoplasma tonalidade rósea, atua sobre citoplasma, fibras colágenas e outras substâncias ácidas das células.
5’ 10’
1’5’
8’ 1’
1’
1’ 1’ 1’
ÁGUA ÁGUA ÁL 80%
ABS III
5.0 µm
5.0 µm
REAÇÃO DO PAS (ÁCIDO PERIÓDICO/REATIVO DE SCHIFF)
Um pré tratamento determina a especificidade da coloração quando se utiliza o Reativo de Schiff
Reação de Feulgen → hidrolise acida com HCl Reação do PAS → oxidação com o ácido periódico
Reação do PAS Secreção Epitélio
ETAPAS 1. Oxidação do material com ácido periódico
produção de radicais aldeídos nas moléculas de carboidrato
2. Estes radicais aldeído vão se ligar ao leucoderivado da Fucsina básica restaurando o grupo cromoforico e produzindo um composto corado
5’ 40’
1’
8’ 60’
1’
1’ 1’ 1’
ÁGUA ÁGUA
ABS III
3x 5’
Metabissulfito de Sódio
10’
ÁGUA
2’ 10’ÁGUA