1. M.V. EDUARD MARTINEZ

2. TODOS LOS SERES VIVOS ESTN CONSTITUDOS POR CLULAS 3. Niveles de organizacin CLULAS RGANOS TEJIDOS 4. Anatoma Macroscpica vs. Anatoma Microscpica 5. Anatoma Macroscpica: Estudio del animal mediante inspeccin, palpacin y diseccin Anatoma Microscpica (Histologa): Estudio de clulas y tejidos del animal mediante el uso del microscopio Estudio = Preparacin de tejidos y clulas (vivas- muertas) 6. TCNICAS HISTOLGICAS Se denominan as al conjunto de procedimientos aplicados a un tejido (animal o vegetal) con la finalidad de estudiar sus componentes morfolgicos a travs de los microscopios fotnicos y electrnicos 7. MTODOS DE ESTUDIO CELULAR Mtodos in vivo: se estudia la clula en su estado natural Mtodos in vitro: se estudia la clula viva pero bajo ambiente artificial. El mtodo ms utilizado es el cultivo celular 8. CULTIVO CELULAR CONDICIONES Y REQUERIMIENTOS Asepsia rigurosa pH del medio de cultivo igual al de los lquidos corporales Temperatura Control O2- CO2 9. Mtodos para tejidos muertos: Se realizan con la finalidad de preparar clulas, tejidos y rganos procedentes de individuos en los que se han detenido los procesos vitales MTODOS DE ESTUDIO CELULAR 10. PREPARACIN DE TEJIDOS MUERTOS Tcnica de la parafina Tcnica de la celoidina Tcnica de congelacin 11. TCNICA DE LA PARAFINA: PASOS Obtencin de la muestra Fijacin Deshidratacin Aclaracin Inclusin en parafina Formacin del bloque de parafina Microtoma Extendido Secado 12. Tcnica de la parafina PASO 1: OBTENCIN DE LA MUESTRA BIOPSIA NECROPSIA 13. Caractersticas que debe tener la muestra: 1. Debe ser lo suficientemente pequea 2. Debe ser representativa del tejido u rgano a estudiar 14. Tcnica de la parafina PASO 2: FIJACIN Se debe matar a las clulas, evitar la autlisis postmortem y la invasin de microorganismos Fijador: agente fsico o qumico utilizado para el proceso de fijacin 15. Clasificacin de los fijadores FSICOS QUMICOS DESECACIN CALOR SECO CALOR HMEDO CONGELACIN FIJADORES SIMPLES FIJADORES COMPUESTOS 16. Ejemplos de fijadores qumicos Fijadores simples: formol 10%, alcohol etlico absoluto o al 96%, alcohol metlico, cido smico 1-2%, dicromato de potasio 3-5% Fijadores compuestos: Solucin de Bouin (cido pcrico, formol, cido actico) Solucin de Zenker (dicromato de poasio, cloruro de mercurio y acido actico) Solucin de Helly (dicromato de potasio, cloruro de mercurio y formol) 17. CARACTERSTICAS DE UN BUEN AGENTE FIJADOR Que acte con rapidez, matando y fijando a las clulas antes de que aparezcan los cambios degenerativos Alto poder de penetracin Conservar, en lo posible, las caractersticas del tejido Que permita manipular los tejidos fijados Accesible-econmico 18. Tcnica de la parafina PASO 3: DESHIDRATACIN Se necesita extraer toda el agua de los tejidos para dar paso a la parafina Alcohol etlico-isoproplico en concentraciones crecientes (60%-100%) 19. Tcnica de la parafina PASO 4: ACLARACIN (o diafanizacin) Uso de agentes solubles en alcohol y solventes de parafina Ms usados: xileno, tolueno, benceno y cloroformo 20. Tcnica de la parafina PASOS 5-6: INCLUSIN Y FORMACIN DE LOS BLOQUES DE PARAFINA 21. Tcnica de la parafina PASO 7: MICROTOMA (obtencin de cortes histolgicos) 22. Tcnica de la parafina PASO 8: EXTENSIN Y ADHESIN DE LOS CORTES HISTOLGICOS 23. Tcnica de la parafina PASO 9: SECADO Y ELIMINACIN DEL EXCESO DE PARAFINA 24. COLORACIN La coloracin o tincin es el proceso en el cual se aplica a las clulas o tejidos una sustancia colorante Colorante: sustancia con color propio capaz de cederlo a otros cuerpos 25. Bases fsicas-qumicas de la coloracin Teora fsica: la coloracin ocurre por fenmenos de absorcin. Teora qumica: la coloracin ocurre por la interaccin inica de los cationes y aniones de los colorantes con los aniones y cationes de las protenas celulares. 26. Clasificacin de los colorantes Por su origen: Naturales Animal/Vegetal Artificiales: Derivados de la anilina, que a su vez es un derivado de la destilacin de la hulla. El colorante artificial ms usado es la eosina Carmn Hematoxilina Orcena 27. Por el radical con color: Colorante bsico Colorante cido Colorante neutro Por los componentes celulares que colorea Colorantes nucleares Colorantes citoplasmticos 28. TIPOS DE COLORACIONES De rutina: Coloracin hematoxilina-eosina (H-E) Ortocromticas: los tejidos adquieren el color del colorante empleado Metacromticas: los tejidos o componentes de los tejidos adquieren un color distinto al del colorante Progresivas: el colorante es aplicado en concentraciones crecientes 29. Regresivas: los tejidos se sobrecolorean para someterlos despus a la accin de una sustancia denominada diferenciador, con la finalidad de extraer el exceso de colorante Impregnacin: Involucra la deposicin de sustancias metlicas (cobre, plata, oro) en la superficie de las clulas y tejidos, por lo que no se considera una verdadera coloracin. 30. Coloracin vital: se utilizan colorantes inocuos para el estudio de clulas y tejidos vivos. Existen 2 tipos de esta coloracin: intravital y supravital. Coloraciones especficas: para los componentes celulares o tisulares. 31. COLORACIN CON HEMATOXILINA- EOSINA Es la coloracin ms utilizada en histologa Consiste en la aplicacin de dos colorantes, uno que es la hematoxilina, que se encarga de teir el ncleo celular y la eosina, que tie el citoplasma y los componentes citoplasmticos, segn la afinidad de cada componente celular 32. COLORACIN CON HEMATOXILINA- EOSINA PASO 1: HIDRATACIN DEL TEJIDO (5 min) PASO 2: COLORACIN CON HEMATOXILINA (15 ) 33. PASO 3: LAVADO CON AGUA (15) PASO 4: DIFERENCIAR CON ALCOHOL CIDO PASO 5: VIRAR AL COLOR AZUL PASO 6: LAVAR CON AGUA PASO 7: COLOREAR CON EOSINA PASO 8: DESHIDRATACIN 34. PASO 9: ACLARACIN (DIAFANIZACIN) PASO 10: MONTAJE DEFINITIVO EN LMINAS (permount) PARA OBSERVACIN AL MICROSCOPIO FIG. N 7 35. IMAGEN NORMAL ARTEFACTOS 36. Coloraciones especiales Tcnica de Van Gieson (Fibras colgenas) Impregnacin Argntica (Fibras reticulares) Tricrmica de Masson (Colgeno) Sudn (Adipocitos) PAS (cido perydico de Schiff) 37. EL MICROSCOPIO COMO HERRAMIENTA DE ESTUDIO El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para el ojo humano 38. Tipos de microscopios Microscopios pticos (propios y especiales) Microscopios electrnicos (transmisin- barrido) 39. Objetivos Oculares Condensador Componentes pticos 40. Pinza Carro Platina Componentes Mecnicos Tornillo Macromtrico Tornillo Micromtrico Lmpara Revolver 41. Componentes pticos Componentes Mecnicos Condensador Objetivos Oculares Platina Pinza Tornillo micromtrico Tornillo macromtrico Carro Lmpara Revolver 42. MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO 43. REFERENCIAS GENNESER, FINN. HISTOLOGIA. CAPTULO 2. http://webs.uvigo.es/mmegias/ 6-tecnicas/1-introduccion.php http://www.anatomohistologia. uns.edu.ar/plantilla.asp?zona= modtecni