Teste Biochimice
Transcript of Teste Biochimice
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 1/34
PRINCIPALELEPRINCIPALELETESTE BIOCHIMICE UTILIZATE INTESTE BIOCHIMICE UTILIZATE IN
DETERMINAREA STARII DE IGIENADETERMINAREA STARII DE IGIENA
SI A SALUBRITATII PRODUSELORSI A SALUBRITATII PRODUSELORALIMENTAREALIMENTARE
- (BACTERIOLOGIA ALIMENTARA)- (BACTERIOLOGIA ALIMENTARA)
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 2/34
TESTUL HEMOLIZEI
• Capacitatea unor bacterii de a elabora enzime
care pot produce hemoliza globulelor rosii
ale dieritelor specii de animale!• Speciile cele mai utilizate iind" oaia# calul#
iepurele# s!a!
• Mediul utilizat cel mai rec$ent este gelozasange %agar sange&# cu o proportie de '()*+
sange inglobat in mediu!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 3/34
TESTUL ,E HEMOLIZ- .
TEST ,E /-TO0E1IT-TE
• /2EZE1T- HEMOLIZEI ( denota
capacitatea patogena a bacteriilor testate3
• Bacterii importante pentru microbiologiaalimentara –testate pt. hemoliza: E. coli,
Bacillus cereus, Clostridium perfringens,
Streptococcus# etc!• LI/S- HEMOLZEI ( denota lipsa de
patogenitate a bacteriilor cercetate!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 4/34
TI/U2I ,E HEMOLIZ-
• HEMOLIZ- -L4- ( producerea in 5urul
coloniei a unei decolorari mai putin intinsa#
insotita de o in$erzire a mediului (
E4ECTUL 6I2I,-1S . datoritatransormarii hemoglobinei in
methemoglobina sub actiunea apei o7igenate
produsa de bacterie!• Hemolizinele streptococice sunt acti$e ata
de globulele rosii de iepure!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 5/34
• HEMOLIZ- 8ET- . decolorarea intensa a
mediului agar sange in 5urul coloniei#
datorita unui proces intens de hemoliza!
• Hemolizinele streptococice sunt acti$e ata
de globulele rosii de oaie!
• HEMOLIZ- 0-MM- . hemolizinele
streptococice sunt intense ata de globulele
rosii de iepure si oarte putin acti$e ata de
cele de oaie!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 6/34
TESTUL I1,OLULUI
o ,ezintegrarea triptoanului sub actiunea
unor enzime elaborate de microorganisme3
o Indolul se pune in e$identa cu a5utorul unorreacti$i# cel mai utilizat iind reacti$ul
9o$acs sau
o cu a5utorul benzilor de hartie impregnate cuindicatori3
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 7/34
Testul indolului cu reacti$
9o$acs• presupune punerea in contact a culturilor de
bacterii insamantate pe medii lichide .
preerabil apa triptonata# cu reacti$ul 9o$acs#reacti$ pe baza de iod 3
• TEST /OZITI6( aparitia unui inel de culoare
rosie la supraata mediului3
• TEST 1E0-TI6 . nu apare inelul de culoare
rosie sau prezinta alta coloratie!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 8/34
• 8enzile de indol sunt benzi de hartie cu o
lungime de )*():cm# *#'cm latime si care au
impregnat );< din lungimea benzii cuindicator!
• TEST /OZITI6 ( innegrirea benzii dupa :=(
=> ore de incubare# benzi care contin indicator
pentru indol3
• TEST 1E0-TI6 . nu se constata innegrirea
benzii!
TESTUL 8E1ZILO2
,E I1,OL
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 9/34
• 8acterii indol poziti$e ( Escherichia#
/asteurella# etc!3• 8acterii indol negati$e . Salmonella#
Enterobacter# /roteus# Hania#etc!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 10/34
TESTUL HI,2O0E1ULUI
SUL4U2-T• Capacitatea unor enzime bacteriene de a
dezintegra aminoacizii care contin sul"
cistina# cisteina# etc!3
• Se pune in e$identa cu a5utorul benzilor sau
a mediilor care contin acetat de plumb"
• Medodele pe medii de cultura si cu a5utorul
benzilor!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 11/34
• TEST /OZITI6 ( innegrirea centrului colonieiculti$a de mediile care contin )()*+ acetat de
plumb sau innegrirea mediului din 5urul
coloniei daca se produce sulura de plumbrezultata din combinarea hidrogenului sulurat
si a acetatului de plumb!
• TEST 1E0-TI6 . nu se constata colonii cucentrul negru sau innegrirea mediului in 5urul
coloniei!
TESTUL H:S /E ME,II
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 12/34
• 8enzile pentru H:S sunt benzi de hartie cu o
lungime de )*():cm# cu o latime de *#'cm si
care au impregnat );< din lungimea benzii cuindicator# cel mai utilizat iind acetatul de
plumb!
TESTUL 8E1ZILO2 pt! H:S
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 13/34
• TEST H:S /OZITI6 ( innegrirea benzii
dupa :=(=> ore de incubare# benzi care
contin )*+ acetat de plumb3
• TEST H:S 1E0-TI6 . nu se constata
innegrirea benzii!
• 8acterii H:S poziti$e ( /roteus# Salmonella#
Citrobacter"
• 8acterii H:S negati$e . Escherichia#
Enterobacter# Staph?lococcus!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 14/34
TESTUL ,E HI,2OLIZ- -
U2EEI• presupune punerea in e$identa a
proprietatilor unei bacterii de a hidroliza
ureea# realizata pe medii lichide sau solidecare contin uree )*(:*+3
• Medii de cultura utilizate" MIU#
Christensen# bulion uree# etc!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 15/34
TESTUL CIT2-TULUI
• presupune punerea in e$identa a
proprietatilor unei bacterii de a utilizacitratul de amoniu sau de sodiu ca unica
sursa de carbon . pe mediul Simmons3
• Mediul contine )#'+ albastru de bromtimol
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 16/34
• TEST /OZITI6 ( $irarea culorii mediului
din albastru $erzui in albastru intens3• TEST 1E0-TI6 . nu se constata
modiicarea culorii mediului de cultura#
acesta ramane $erde( albastru!• 8acterii citrat poziti$e ( Salmonella#
Enterobacter# Citrobacter"
• 8acterii citrat negati$e . Escherichia#Shigella!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 17/34
• Pentru testare bi!"i#i!$ se uti%i&ea&$'
• !n!#itent #eii%e aar TSI* MIU* MIO*
MIL* MIL+* !itrat Si##ns* RM-,P*
e%&$ nutriti$* et!* .i rea!tiii /entru
rea!0ia RM-,P* !itrat e 1ier* rea!tii
/entru in%* et!2* sau
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 18/34
• siste#e #u%titest stanari&ate* !are
uti%i&ea&$ un nu#$r #u%t #ai #are e
teste !are /t 1i e1e!tuate .i !are se /tinter/reta i&ua%* /rin rea!0ie e !u%are
sau aut#at* 1iin !$ s-au e&%tat e
!$tre une%e 1ir#e /rra#e s/e!ia%i&ate2
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 19/34
• siste#e #u%titest stanari&ate* !areuti%i&ea&$ un nu#$r #u%t #ai #are e
teste !are /t 1i e1e!tuate .i !are se /t
inter/reta i&ua%* /rin rea!0ie e !u%are
sau aut#at*
• a!estea s-au e&%tat e !$tre une%e
1ir#e /rra#e s/e!ia%i&ate2
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 20/34
ME,II ,E CULTU2-
MULTITEST
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 21/34
• E1e!tuarea teste%r bi!"i#i!e3E1e!tuarea teste%r bi!"i#i!e3
• Meiu% TSI 4 %u!&$* %a!t&$* &a"ar&$
• Inter/retarea rea!0ii%r bi!"i#i!e se 1a!e/rin i&ua%i&area !u%rii /e !%ana .i/anta #eiu%ui TSI'
• !%ana a%ben$ a #eiu%ui ent$1er#entarea %u!&ei (rea!0ie /&iti$)3
• !%ana r.ie sau nes!"i#bat$ ini!$
neuti%i&area %u!&ei (rea!0ie neati$)3• a/ari0ia !%ra0iei nere* ent$
/ru!erea e "iren su%1urat3
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 22/34
• a/ari0ia !%ra0iei nere* ent$ /ru!ereae "iren su%1urat3
• /ru!erea e a& in %u!&$ sei&ua%i&ea&$ /rin a/ari0ia bu%e%r e a& 5n#eiu sau !"iar /rin ru/erea #eiu%ui2
• /anta #eiu%ui e !u%are a%ben$ ent$1er#entarea %a!t&ei .i6sau &a"ar&ei(%a!t&$ .i6sau &a"ar&$ /&iti$)* iar
• !u%area r.ie sau nes!"i#bat$ ini!$neuti%i&area %a!t&ei .i6sau &a"ar&ei(%a!t&$ .i6sau &a"ar&$ neati$)3
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 23/34
• !u%turi%e ti/i!e e sa%#ne%e !res/un unei/ante e !u%are r.ie (#eiu a%!a%in)*
!%an$ a%ben$ (1er#entare a%!a%in$)* !u1r#area* 5n !e%e #ai #u%te !a&uri a"irenu%ui su%1urat .i !u 1r#are e a&3
• Salmonella nu /ru!e in%* rea!0ieneati$ /e bana e "7rtie i#/renat$ !u/ara-i#eti%a#in-ben&a%e"i$2 Cue8!e/0ia serti/uri%r Gallinarum .i Pullorum tate !%e%e%a%te serti/uri sunt#bi%e2
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 24/34
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 25/34
• Meiu% MIL+ 4 #bi%itate* in%* %i&in$*
1eni%a%anin$
• a/ari0ia unei !%ra0ii i%ete u/$ in!ubare ini!$
rea!0ie /&iti$* e!i /ru!erea
%i&ine!arb8i%a&ei* sa%#ne%e%e 1iin e reu%$
%i&ine!arb8i%a&$ /&itie3• eri1i!area /ru!erii e 1enina%anine!arb8i%a&$
se eri1i!$ /rin a$uarea !%rurii 1eri!e %a
su/ra1a0a #eiu%ui* sa%#ne%e%e 1iin
1enina%anine!arb8i%a&$ neatie nu se /ru!eirarea !u%rii 5n ere (rea!0ie neati$)3
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 26/34
• #bi%itatea tu%/ini%r 5ns$#7n0ate
eter#in$ #i1i!area turbiit$0ii #eiu%ui*
ini1erent e #i1i!$ri%e e !u%.are !are/t a/$rea3
• Rea!0ia in%u%ui este neati$2
• Meiu% MIL - este un #eiu se#is%i* !arese tarn$ re/t* 5n tuburi !u ia#etru% #i!* 5n !are se 5ns$#7ntea&$ /rin 5n0e/are /etat$ !%ana* in !u%tura e !er!etat2 Este
uti%i&at /entru eri1i!area e!arb8i%$rii%i&inei u/$ in!ubare e 9: e re %a ;<=Csau ;>=C2
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 27/34
• A/ari0ia unei !%ra0ii i%ete 5n #eiu
re1%e!t$ rea!0ie /&iti$* Salmonella e!arb8i%ea&$ %i&ina* e!i eter#in$
a/ari0ia !u%rii i%ete2 Rea!0ia neati$
este at$ e !%ra0ia a%ben$ a !%anei#eiu%ui2 A!est #eiu eri1i!$ .i
e8isten0a #bi%it$0ii* !are se trau!e /rin
tu%burarea #eiu%ui e-a %unu% %iniei e 5ns$#7n0are2
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 28/34
• Meiu% CS 4 Citrat Si##ns
• ba!terii%e in enu% Salmonella uti%i&e&$
!itratu% e siu
• rea!0ie /&iti$* a/ari0ia !%ra0iei
a%bastre a #eiu%ui* e!i irarea in
ere 5n a%bastru* u/$ in!ubare3
• rea!0ie neati$ nu se #i1i!$ !u%area
ini0ia%$ a #eiu%ui2
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 29/34
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 30/34
• Meiu% MIU .i C"ristensen - este uti%i&at/entru eri1i!area uti%i&$rii ureeii /rin
"ir%i&$
• er#enii in ru/u% Salmonella nu 1%ses!urea- rea!0ie neati$*
• !%ra0ia #eiu%ui (#arnie /entru MIU .ia%ben es!"is %a #eiu% Cristensen) nu este#i1i!at$3
• rea!0ia /&iti$ 4 se /ru!e 5n$%benire a#eiu%ui2
•
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 31/34
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 32/34
TESTUL O@I,-ZEI
• presupune punerea in contact a unei
colonii# ragment de colonie sau a unei
culturi de cercetat obtinuta la : zile# ma7im= zile pe un mediu solid si care se combina
cu reacti$ pentru o7idaza# solutie apoasa de
)+ concentratie . tetrametil(paraenil(endiamin(hidroclorid!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 33/34
• TEST /OZITI6 . aparitia unei coloratii
$iolacee# negricioasa sau negricosa(
maronie# in unctie de producator 3• TEST 1E0-TI6 . lipsa aparitiei unei
coloratii# hartia de iltru ramane alba# alb(
galbuie!
8/19/2019 Teste Biochimice
http://slidepdf.com/reader/full/teste-biochimice 34/34
• Combinarea culturilor de testat obtinute pe medii
solide ( se recolteaza o colonie sau un ragment de
colonie si se pune in contact cu o picatura de apa
o7igenata pe o lama de microscop sau sticla de
ceas!
• Combinarea culturilor de testat obtinute pe medii
lichide cu 'ml de bulion triptic de := ore a$and <ml H:O: in concentratie <+!
TESTUL C-T-L-ZEI