TIacuteTULO REGENERACcedilAtildeO OacuteSSEA IN VIVO UTILIZANDO MEMBRANA DE ELASTINA DERIVADA DACARTILAGEM AURICULAR E MINERALIZADA COM FOSFATO DE CAacuteLCIOTIacuteTULO

CATEGORIA CONCLUIacuteDOCATEGORIA

AacuteREA CIEcircNCIAS BIOLOacuteGICAS E SAUacuteDEAacuteREA

SUBAacuteREA FISIOTERAPIASUBAacuteREA

INSTITUICcedilAtildeO CENTRO UNIVERSITAacuteRIO PADRE ANCHIETAINSTITUICcedilAtildeO

AUTOR(ES) EWERTON ALEXANDRE GALDEANOAUTOR(ES)

ORIENTADOR(ES) MARCELO RODRIGUES DA CUNHAORIENTADOR(ES)

COLABORADOR(ES) ANA MARIA GUZZI PLEPIS DANIEL LUIS DO NASCIMENTO GEOVANERIBEIRO DOS SANTOS VIRGINIA DA CONCEICcedilAtildeO AMARO MARTINSCOLABORADOR(ES)

1- RESUMO A pesquisa analisou e quantificou a regeneraccedilatildeo oacutessea in vivo atraveacutes da

aplicabilidade de membrana de elastina derivada da cartilagem auricular bovina

tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio em ratos Wistar Com um procedimento

ciruacutergico foi criada uma falha oacutessea experimental na calota craniana dos animais de

laboratoacuterio e enxertadas com o biomaterial Apoacutes 3 e 8 semanas de recuperaccedilatildeo

poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados e as aacutereas receptoras foram removidas

enviadas para anaacutelise laboratorial composta por macroscopia radiologia histologia e

morfometria obtendo resultados satisfatoacuterios quanto agrave osteoinduccedilatildeo

osteoconduccedilatildeo sendo biocompatiacutevel e biodegradaacutevel mostrando-se um promissor

biomaterial em terapias de regeneraccedilatildeo oacutessea

Palavras-chave cartilagem auricular regeneraccedilatildeo oacutessea elastina

2- INTRODUCcedilAtildeO

A cliacutenica meacutedica em traumatologia tem conquistado grandes avanccedilos

tecnoloacutegicos na substituiccedilatildeo de tecidos lesados utilizando biomateriais para

enxertia que conferem um suporte para a proliferaccedilatildeo celular estimulando a

regeneraccedilatildeo tecidual e promovendo a estabilidade mecacircnica e funcional dos mais

variados tecidos humanos (Cunha et al 2011) Enxertos autoacutegenos satildeo

amplamente utilizados em casos de perda de massa oacutessea causadas por traumas

patologias e deformidades congecircnitas Apesar de possuir ceacutelulas osteoprogenitoras

capazes de estimular a formaccedilatildeo oacutessea este apresenta algumas desvantagens

como morbidade dor crocircnica do siacutetio doador reabsorccedilatildeo oacutessea necessidade de

dois procedimentos ciruacutergicos formaccedilatildeo irregular do contorno oacutesseo na aacuterea

receptora e limitaccedilotildees quanto agrave quantidade disponiacutevel do material (Nascimento et

al 2012 Konig Jr 2010 Cunha et al 2011)

Em virtude desta problemaacutetica foi desenvolvida e testada a matriz de elastina

derivada da cartilagem auricular bovina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio

com o objetivo de ser utilizado como um substituto do enxerto autoacutegeno podendo

ser uma alternativa promissora nas terapias de regeneraccedilatildeo oacutessea (Nascimento et

al 2012) A elastina eacute uma importante proteiacutena da matriz extracelular que promove

elasticidade a vaacuterios oacutergatildeos Suas fibras satildeo compostas por microfibrilas que agem

como uma armaccedilatildeo onde a elastina amorfa eacute depositada atraveacutes de ligaccedilotildees

cruzadas formando um arcabouccedilo tridimensional capaz de permitir a angiogecircnese

no local do implante e fornecer suporte para a infiltraccedilatildeo diferenciaccedilatildeo e

proliferaccedilatildeo de ceacutelulas osteoblaacutesticas que desempenham a importante funccedilatildeo de

deposiccedilatildeo iacuteons de Caacutelcio gerando a neoformaccedilatildeo oacutessea A elastina presente na

cartilagem auricular bovina possui fibras orientadas em forma de favo otimizando a

permeabilidade celular (Mithieux e Weiss 2005 Daamen et al 2007)

A elastina quando associada aos processos de tratamento alcalino e

mineralizaccedilatildeo pode excluir os efeitos deleteacuterios do processo de enxertia e acionar a

cascata correta de eventos bioloacutegicos necessaacuterios para a regeneraccedilatildeo tecidual

devido a facilidade de adesatildeo celular e inibiccedilatildeo da formaccedilatildeo de fibroses Estes

achados estatildeo fundamentados nas caracteriacutesticas moleculares da elastina que

possui a sequecircncia de reconhecimento celular composto pela sequecircncia arginina -

glicina - aacutecido aspaacutertico (Daamen et al 2007)

A regeneraccedilatildeo ainda pode ser acelerada na presenccedila de iacuteons de fosfato de

caacutelcio exercendo importante papel de siacutetios de nucleaccedilatildeo aumentando a

calcificaccedilatildeo (Daamen et al 2007 Tampieri et al 2011) Salienta-se que a

mineralizaccedilatildeo deste biomaterial agrave base de elastina atraveacutes da inclusatildeo de fosfato de

caacutelcio possa constituir uma interessante alternativa para a cicatrizaccedilatildeo do tecido

oacutesseo em funccedilatildeo da capacidade de estimular a expressatildeo de proteiacutenas marcadoras

da neoformaccedilatildeo oacutessea (Tampieri et al 2011)

3- OBJETIVOS

Analisar qualitativo e quantitativamente o processo de neoformaccedilatildeo oacutessea

durante o reparo de defeitos oacutesseos criados em ratos e enxertados com membrana

de elastina derivada da cartilagem auricular bovina e mineralizada com fosfato de

caacutelcio

4- METODOLOGIA A pesquisa aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal

(CEUA) da Unianchieta (Processo 0022013) utilizou 30 ratos (Rattus norvegicus

Wistar) machos com 15 semanas de idade peso meacutedio de 330g e separados em

caixas com 5 (cinco) animais cada recebendo raccedilatildeo balanceada (Purinareg) e aacutegua

ad-libitum e temperatura do ambiente controlada (23 plusmn1ordmC)

A confecccedilatildeo das membranas de elastina foi realizada pelo Instituto de Quiacutemica

da Universidade de Satildeo Paulo (USP) Campus Satildeo Carlos atraveacutes de um processo

laboratorial cuja finalidade foi provocar alteraccedilotildees fiacutesicas e quiacutemicas para elevar as

caracteriacutesticas piezoeleacutetricas eliminar possiacuteveis antiacutegenos e incluir elementos

indutores de agregaccedilatildeo celular Para a obtenccedilatildeo da membrana de elastina natildeo

mineralizada procedeu-se com a lavagem do material em soluccedilatildeo de NaCl 09

aacutegua e acetona e tratada em NaOH agrave 80degC por 45 min seguida de lavagem em

aacutegua e liofilizaccedilatildeo Para a membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio

foi realizado o processo descrito anteriormente acrescido de imersatildeo em CaCl2 por

30min e lavagem em aacutegua desionizada seguida imersatildeo em soluccedilatildeo de Na2HPO4

por 30min em pH 90 sendo este ciclo repetido por 6 vezes Em seguida a

membrana de elastina foi lavada em aacutegua desionizada e liofilizada (Nascimento et

al 2012) As Eletro-Fotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

Aumento 1000X evidenciam a porosidade das membranas conforme Figura 1

Figura 1 A ndash Membrana de elastina tratada e natildeo mineralizada B ndash Membrana

de elastina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio

Os animais foram divididos em dois grupos sendo o primeiro contendo 15

animais sacrificados com 3 semanas de poacutes-operatoacuterio e o segundo contendo 15

animais sacrificados com 8 semanas de poacutes-operatoacuterio Cada grupo recebeu

subgrupos sendo G1 (Animais com defeito na calota craniana e sem

preenchimento da falha oacutessea - Grupo Controle) G2 (Animais com defeito na calota

craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem

mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz

derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)

Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de

Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo

analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de

0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)

Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida

em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das

coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da

tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e

afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca

ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de

5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o

implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados

suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010

Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2

Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo

sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash

Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura

dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local

Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de

peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via

intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na

dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et

al 2009)

Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados

com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram

removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a

finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi

utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o

tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho

Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que

possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida

a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos

resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50

(Potijanyakul et al 2010)

5- DESENVOLVIMENTO

Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina

implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo

imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade

do biomaterial (Ratner 2013)

Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar

funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo

oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para

a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-

implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas

afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das

membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2

observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo

oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a

osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al

2011 Konig Jr 2010)

A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu

um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o

implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea

constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a

infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de

aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada

em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do

implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a

capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente

que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse

maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu

uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a

neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo

permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para

o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de

caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a

permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)

O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo

I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi

surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias

sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas

osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea

6- RESULTADOS

Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e

absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente

Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas

Figuras 5 e 6 respectivamente

Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido

oacutesseo neoformado

Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

0

10

20

30

40

50

60

70

80

G13 G23 G33 G18 G28 G38

PERC

ENTU

AL D

E O

SSO

NEO

FORM

ADO

()

GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA

8- FONTES CONSULTADAS

bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for

bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33

bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr

AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of

diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52

bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a

Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98

bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of

bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal

Care of the Injured 20114222-25

bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em

ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010

bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de

Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009

bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61

bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de

matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6

bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S

Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects

Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204

bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine

Third edition Canada Elsevier 2013

bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of

α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical

Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98

bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-

mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development

Trends in Biotechnology 201129(10)526-535

1- RESUMO A pesquisa analisou e quantificou a regeneraccedilatildeo oacutessea in vivo atraveacutes da

aplicabilidade de membrana de elastina derivada da cartilagem auricular bovina

tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio em ratos Wistar Com um procedimento

ciruacutergico foi criada uma falha oacutessea experimental na calota craniana dos animais de

laboratoacuterio e enxertadas com o biomaterial Apoacutes 3 e 8 semanas de recuperaccedilatildeo

poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados e as aacutereas receptoras foram removidas

enviadas para anaacutelise laboratorial composta por macroscopia radiologia histologia e

morfometria obtendo resultados satisfatoacuterios quanto agrave osteoinduccedilatildeo

osteoconduccedilatildeo sendo biocompatiacutevel e biodegradaacutevel mostrando-se um promissor

biomaterial em terapias de regeneraccedilatildeo oacutessea

Palavras-chave cartilagem auricular regeneraccedilatildeo oacutessea elastina

2- INTRODUCcedilAtildeO

A cliacutenica meacutedica em traumatologia tem conquistado grandes avanccedilos

tecnoloacutegicos na substituiccedilatildeo de tecidos lesados utilizando biomateriais para

enxertia que conferem um suporte para a proliferaccedilatildeo celular estimulando a

regeneraccedilatildeo tecidual e promovendo a estabilidade mecacircnica e funcional dos mais

variados tecidos humanos (Cunha et al 2011) Enxertos autoacutegenos satildeo

amplamente utilizados em casos de perda de massa oacutessea causadas por traumas

patologias e deformidades congecircnitas Apesar de possuir ceacutelulas osteoprogenitoras

capazes de estimular a formaccedilatildeo oacutessea este apresenta algumas desvantagens

como morbidade dor crocircnica do siacutetio doador reabsorccedilatildeo oacutessea necessidade de

dois procedimentos ciruacutergicos formaccedilatildeo irregular do contorno oacutesseo na aacuterea

receptora e limitaccedilotildees quanto agrave quantidade disponiacutevel do material (Nascimento et

al 2012 Konig Jr 2010 Cunha et al 2011)

Em virtude desta problemaacutetica foi desenvolvida e testada a matriz de elastina

derivada da cartilagem auricular bovina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio

com o objetivo de ser utilizado como um substituto do enxerto autoacutegeno podendo

ser uma alternativa promissora nas terapias de regeneraccedilatildeo oacutessea (Nascimento et

al 2012) A elastina eacute uma importante proteiacutena da matriz extracelular que promove

elasticidade a vaacuterios oacutergatildeos Suas fibras satildeo compostas por microfibrilas que agem

como uma armaccedilatildeo onde a elastina amorfa eacute depositada atraveacutes de ligaccedilotildees

cruzadas formando um arcabouccedilo tridimensional capaz de permitir a angiogecircnese

no local do implante e fornecer suporte para a infiltraccedilatildeo diferenciaccedilatildeo e

proliferaccedilatildeo de ceacutelulas osteoblaacutesticas que desempenham a importante funccedilatildeo de

deposiccedilatildeo iacuteons de Caacutelcio gerando a neoformaccedilatildeo oacutessea A elastina presente na

cartilagem auricular bovina possui fibras orientadas em forma de favo otimizando a

permeabilidade celular (Mithieux e Weiss 2005 Daamen et al 2007)

A elastina quando associada aos processos de tratamento alcalino e

mineralizaccedilatildeo pode excluir os efeitos deleteacuterios do processo de enxertia e acionar a

cascata correta de eventos bioloacutegicos necessaacuterios para a regeneraccedilatildeo tecidual

devido a facilidade de adesatildeo celular e inibiccedilatildeo da formaccedilatildeo de fibroses Estes

achados estatildeo fundamentados nas caracteriacutesticas moleculares da elastina que

possui a sequecircncia de reconhecimento celular composto pela sequecircncia arginina -

glicina - aacutecido aspaacutertico (Daamen et al 2007)

A regeneraccedilatildeo ainda pode ser acelerada na presenccedila de iacuteons de fosfato de

caacutelcio exercendo importante papel de siacutetios de nucleaccedilatildeo aumentando a

calcificaccedilatildeo (Daamen et al 2007 Tampieri et al 2011) Salienta-se que a

mineralizaccedilatildeo deste biomaterial agrave base de elastina atraveacutes da inclusatildeo de fosfato de

caacutelcio possa constituir uma interessante alternativa para a cicatrizaccedilatildeo do tecido

oacutesseo em funccedilatildeo da capacidade de estimular a expressatildeo de proteiacutenas marcadoras

da neoformaccedilatildeo oacutessea (Tampieri et al 2011)

3- OBJETIVOS

Analisar qualitativo e quantitativamente o processo de neoformaccedilatildeo oacutessea

durante o reparo de defeitos oacutesseos criados em ratos e enxertados com membrana

de elastina derivada da cartilagem auricular bovina e mineralizada com fosfato de

caacutelcio

4- METODOLOGIA A pesquisa aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal

(CEUA) da Unianchieta (Processo 0022013) utilizou 30 ratos (Rattus norvegicus

Wistar) machos com 15 semanas de idade peso meacutedio de 330g e separados em

caixas com 5 (cinco) animais cada recebendo raccedilatildeo balanceada (Purinareg) e aacutegua

ad-libitum e temperatura do ambiente controlada (23 plusmn1ordmC)

A confecccedilatildeo das membranas de elastina foi realizada pelo Instituto de Quiacutemica

da Universidade de Satildeo Paulo (USP) Campus Satildeo Carlos atraveacutes de um processo

laboratorial cuja finalidade foi provocar alteraccedilotildees fiacutesicas e quiacutemicas para elevar as

caracteriacutesticas piezoeleacutetricas eliminar possiacuteveis antiacutegenos e incluir elementos

indutores de agregaccedilatildeo celular Para a obtenccedilatildeo da membrana de elastina natildeo

mineralizada procedeu-se com a lavagem do material em soluccedilatildeo de NaCl 09

aacutegua e acetona e tratada em NaOH agrave 80degC por 45 min seguida de lavagem em

aacutegua e liofilizaccedilatildeo Para a membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio

foi realizado o processo descrito anteriormente acrescido de imersatildeo em CaCl2 por

30min e lavagem em aacutegua desionizada seguida imersatildeo em soluccedilatildeo de Na2HPO4

por 30min em pH 90 sendo este ciclo repetido por 6 vezes Em seguida a

membrana de elastina foi lavada em aacutegua desionizada e liofilizada (Nascimento et

al 2012) As Eletro-Fotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

Aumento 1000X evidenciam a porosidade das membranas conforme Figura 1

Figura 1 A ndash Membrana de elastina tratada e natildeo mineralizada B ndash Membrana

de elastina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio

Os animais foram divididos em dois grupos sendo o primeiro contendo 15

animais sacrificados com 3 semanas de poacutes-operatoacuterio e o segundo contendo 15

animais sacrificados com 8 semanas de poacutes-operatoacuterio Cada grupo recebeu

subgrupos sendo G1 (Animais com defeito na calota craniana e sem

preenchimento da falha oacutessea - Grupo Controle) G2 (Animais com defeito na calota

craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem

mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz

derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)

Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de

Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo

analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de

0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)

Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida

em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das

coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da

tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e

afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca

ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de

5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o

implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados

suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010

Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2

Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo

sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash

Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura

dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local

Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de

peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via

intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na

dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et

al 2009)

Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados

com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram

removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a

finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi

utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o

tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho

Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que

possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida

a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos

resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50

(Potijanyakul et al 2010)

5- DESENVOLVIMENTO

Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina

implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo

imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade

do biomaterial (Ratner 2013)

Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar

funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo

oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para

a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-

implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas

afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das

membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2

observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo

oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a

osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al

2011 Konig Jr 2010)

A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu

um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o

implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea

constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a

infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de

aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada

em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do

implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a

capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente

que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse

maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu

uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a

neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo

permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para

o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de

caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a

permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)

O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo

I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi

surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias

sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas

osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea

6- RESULTADOS

Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e

absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente

Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas

Figuras 5 e 6 respectivamente

Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido

oacutesseo neoformado

Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

0

10

20

30

40

50

60

70

80

G13 G23 G33 G18 G28 G38

PERC

ENTU

AL D

E O

SSO

NEO

FORM

ADO

()

GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA

8- FONTES CONSULTADAS

bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for

bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33

bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr

AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of

diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52

bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a

Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98

bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of

bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal

Care of the Injured 20114222-25

bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em

ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010

bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de

Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009

bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61

bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de

matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6

bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S

Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects

Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204

bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine

Third edition Canada Elsevier 2013

bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of

α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical

Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98

bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-

mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development

Trends in Biotechnology 201129(10)526-535

como uma armaccedilatildeo onde a elastina amorfa eacute depositada atraveacutes de ligaccedilotildees

cruzadas formando um arcabouccedilo tridimensional capaz de permitir a angiogecircnese

no local do implante e fornecer suporte para a infiltraccedilatildeo diferenciaccedilatildeo e

proliferaccedilatildeo de ceacutelulas osteoblaacutesticas que desempenham a importante funccedilatildeo de

deposiccedilatildeo iacuteons de Caacutelcio gerando a neoformaccedilatildeo oacutessea A elastina presente na

cartilagem auricular bovina possui fibras orientadas em forma de favo otimizando a

permeabilidade celular (Mithieux e Weiss 2005 Daamen et al 2007)

A elastina quando associada aos processos de tratamento alcalino e

mineralizaccedilatildeo pode excluir os efeitos deleteacuterios do processo de enxertia e acionar a

cascata correta de eventos bioloacutegicos necessaacuterios para a regeneraccedilatildeo tecidual

devido a facilidade de adesatildeo celular e inibiccedilatildeo da formaccedilatildeo de fibroses Estes

achados estatildeo fundamentados nas caracteriacutesticas moleculares da elastina que

possui a sequecircncia de reconhecimento celular composto pela sequecircncia arginina -

glicina - aacutecido aspaacutertico (Daamen et al 2007)

A regeneraccedilatildeo ainda pode ser acelerada na presenccedila de iacuteons de fosfato de

caacutelcio exercendo importante papel de siacutetios de nucleaccedilatildeo aumentando a

calcificaccedilatildeo (Daamen et al 2007 Tampieri et al 2011) Salienta-se que a

mineralizaccedilatildeo deste biomaterial agrave base de elastina atraveacutes da inclusatildeo de fosfato de

caacutelcio possa constituir uma interessante alternativa para a cicatrizaccedilatildeo do tecido

oacutesseo em funccedilatildeo da capacidade de estimular a expressatildeo de proteiacutenas marcadoras

da neoformaccedilatildeo oacutessea (Tampieri et al 2011)

3- OBJETIVOS

Analisar qualitativo e quantitativamente o processo de neoformaccedilatildeo oacutessea

durante o reparo de defeitos oacutesseos criados em ratos e enxertados com membrana

de elastina derivada da cartilagem auricular bovina e mineralizada com fosfato de

caacutelcio

4- METODOLOGIA A pesquisa aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal

(CEUA) da Unianchieta (Processo 0022013) utilizou 30 ratos (Rattus norvegicus

Wistar) machos com 15 semanas de idade peso meacutedio de 330g e separados em

caixas com 5 (cinco) animais cada recebendo raccedilatildeo balanceada (Purinareg) e aacutegua

ad-libitum e temperatura do ambiente controlada (23 plusmn1ordmC)

A confecccedilatildeo das membranas de elastina foi realizada pelo Instituto de Quiacutemica

da Universidade de Satildeo Paulo (USP) Campus Satildeo Carlos atraveacutes de um processo

laboratorial cuja finalidade foi provocar alteraccedilotildees fiacutesicas e quiacutemicas para elevar as

caracteriacutesticas piezoeleacutetricas eliminar possiacuteveis antiacutegenos e incluir elementos

indutores de agregaccedilatildeo celular Para a obtenccedilatildeo da membrana de elastina natildeo

mineralizada procedeu-se com a lavagem do material em soluccedilatildeo de NaCl 09

aacutegua e acetona e tratada em NaOH agrave 80degC por 45 min seguida de lavagem em

aacutegua e liofilizaccedilatildeo Para a membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio

foi realizado o processo descrito anteriormente acrescido de imersatildeo em CaCl2 por

30min e lavagem em aacutegua desionizada seguida imersatildeo em soluccedilatildeo de Na2HPO4

por 30min em pH 90 sendo este ciclo repetido por 6 vezes Em seguida a

membrana de elastina foi lavada em aacutegua desionizada e liofilizada (Nascimento et

al 2012) As Eletro-Fotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

Aumento 1000X evidenciam a porosidade das membranas conforme Figura 1

Figura 1 A ndash Membrana de elastina tratada e natildeo mineralizada B ndash Membrana

de elastina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio

Os animais foram divididos em dois grupos sendo o primeiro contendo 15

animais sacrificados com 3 semanas de poacutes-operatoacuterio e o segundo contendo 15

animais sacrificados com 8 semanas de poacutes-operatoacuterio Cada grupo recebeu

subgrupos sendo G1 (Animais com defeito na calota craniana e sem

preenchimento da falha oacutessea - Grupo Controle) G2 (Animais com defeito na calota

craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem

mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz

derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)

Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de

Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo

analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de

0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)

Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida

em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das

coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da

tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e

afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca

ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de

5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o

implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados

suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010

Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2

Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo

sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash

Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura

dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local

Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de

peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via

intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na

dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et

al 2009)

Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados

com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram

removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a

finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi

utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o

tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho

Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que

possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida

a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos

resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50

(Potijanyakul et al 2010)

5- DESENVOLVIMENTO

Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina

implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo

imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade

do biomaterial (Ratner 2013)

Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar

funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo

oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para

a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-

implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas

afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das

membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2

observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo

oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a

osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al

2011 Konig Jr 2010)

A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu

um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o

implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea

constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a

infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de

aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada

em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do

implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a

capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente

que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse

maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu

uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a

neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo

permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para

o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de

caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a

permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)

O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo

I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi

surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias

sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas

osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea

6- RESULTADOS

Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e

absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente

Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas

Figuras 5 e 6 respectivamente

Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido

oacutesseo neoformado

Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

0

10

20

30

40

50

60

70

80

G13 G23 G33 G18 G28 G38

PERC

ENTU

AL D

E O

SSO

NEO

FORM

ADO

()

GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA

8- FONTES CONSULTADAS

bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for

bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33

bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr

AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of

diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52

bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a

Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98

bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of

bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal

Care of the Injured 20114222-25

bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em

ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010

bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de

Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009

bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61

bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de

matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6

bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S

Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects

Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204

bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine

Third edition Canada Elsevier 2013

bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of

α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical

Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98

bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-

mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development

Trends in Biotechnology 201129(10)526-535

caixas com 5 (cinco) animais cada recebendo raccedilatildeo balanceada (Purinareg) e aacutegua

ad-libitum e temperatura do ambiente controlada (23 plusmn1ordmC)

A confecccedilatildeo das membranas de elastina foi realizada pelo Instituto de Quiacutemica

da Universidade de Satildeo Paulo (USP) Campus Satildeo Carlos atraveacutes de um processo

laboratorial cuja finalidade foi provocar alteraccedilotildees fiacutesicas e quiacutemicas para elevar as

caracteriacutesticas piezoeleacutetricas eliminar possiacuteveis antiacutegenos e incluir elementos

indutores de agregaccedilatildeo celular Para a obtenccedilatildeo da membrana de elastina natildeo

mineralizada procedeu-se com a lavagem do material em soluccedilatildeo de NaCl 09

aacutegua e acetona e tratada em NaOH agrave 80degC por 45 min seguida de lavagem em

aacutegua e liofilizaccedilatildeo Para a membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio

foi realizado o processo descrito anteriormente acrescido de imersatildeo em CaCl2 por

30min e lavagem em aacutegua desionizada seguida imersatildeo em soluccedilatildeo de Na2HPO4

por 30min em pH 90 sendo este ciclo repetido por 6 vezes Em seguida a

membrana de elastina foi lavada em aacutegua desionizada e liofilizada (Nascimento et

al 2012) As Eletro-Fotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

Aumento 1000X evidenciam a porosidade das membranas conforme Figura 1

Figura 1 A ndash Membrana de elastina tratada e natildeo mineralizada B ndash Membrana

de elastina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio

Os animais foram divididos em dois grupos sendo o primeiro contendo 15

animais sacrificados com 3 semanas de poacutes-operatoacuterio e o segundo contendo 15

animais sacrificados com 8 semanas de poacutes-operatoacuterio Cada grupo recebeu

subgrupos sendo G1 (Animais com defeito na calota craniana e sem

preenchimento da falha oacutessea - Grupo Controle) G2 (Animais com defeito na calota

craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem

mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz

derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)

Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de

Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo

analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de

0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)

Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida

em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das

coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da

tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e

afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca

ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de

5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o

implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados

suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010

Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2

Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo

sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash

Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura

dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local

Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de

peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via

intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na

dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et

al 2009)

Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados

com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram

removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a

finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi

utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o

tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho

Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que

possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida

a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos

resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50

(Potijanyakul et al 2010)

5- DESENVOLVIMENTO

Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina

implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo

imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade

do biomaterial (Ratner 2013)

Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar

funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo

oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para

a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-

implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas

afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das

membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2

observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo

oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a

osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al

2011 Konig Jr 2010)

A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu

um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o

implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea

constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a

infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de

aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada

em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do

implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a

capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente

que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse

maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu

uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a

neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo

permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para

o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de

caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a

permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)

O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo

I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi

surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias

sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas

osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea

6- RESULTADOS

Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e

absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente

Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas

Figuras 5 e 6 respectivamente

Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido

oacutesseo neoformado

Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

0

10

20

30

40

50

60

70

80

G13 G23 G33 G18 G28 G38

PERC

ENTU

AL D

E O

SSO

NEO

FORM

ADO

()

GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA

8- FONTES CONSULTADAS

bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for

bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33

bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr

AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of

diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52

bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a

Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98

bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of

bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal

Care of the Injured 20114222-25

bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em

ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010

bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de

Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009

bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61

bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de

matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6

bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S

Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects

Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204

bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine

Third edition Canada Elsevier 2013

bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of

α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical

Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98

bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-

mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development

Trends in Biotechnology 201129(10)526-535

craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem

mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz

derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)

Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de

Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo

analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de

0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)

Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida

em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das

coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da

tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e

afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca

ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de

5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o

implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados

suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010

Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2

Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo

sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash

Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura

dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local

Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de

peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via

intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na

dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et

al 2009)

Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados

com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram

removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a

finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi

utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o

tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho

Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que

possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida

a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos

resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50

(Potijanyakul et al 2010)

5- DESENVOLVIMENTO

Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina

implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo

imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade

do biomaterial (Ratner 2013)

Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar

funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo

oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para

a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-

implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas

afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das

membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2

observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo

oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a

osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al

2011 Konig Jr 2010)

A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu

um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o

implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea

constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a

infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de

aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada

em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do

implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a

capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente

que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse

maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu

uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a

neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo

permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para

o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de

caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a

permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)

O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo

I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi

surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias

sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas

osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea

6- RESULTADOS

Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e

absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente

Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas

Figuras 5 e 6 respectivamente

Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido

oacutesseo neoformado

Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

0

10

20

30

40

50

60

70

80

G13 G23 G33 G18 G28 G38

PERC

ENTU

AL D

E O

SSO

NEO

FORM

ADO

()

GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA

8- FONTES CONSULTADAS

bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for

bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33

bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr

AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of

diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52

bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a

Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98

bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of

bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal

Care of the Injured 20114222-25

bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em

ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010

bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de

Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009

bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61

bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de

matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6

bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S

Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects

Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204

bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine

Third edition Canada Elsevier 2013

bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of

α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical

Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98

bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-

mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development

Trends in Biotechnology 201129(10)526-535

Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de

peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via

intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na

dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et

al 2009)

Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados

com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram

removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a

finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi

utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o

tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho

Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que

possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida

a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos

resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50

(Potijanyakul et al 2010)

5- DESENVOLVIMENTO

Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina

implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo

imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade

do biomaterial (Ratner 2013)

Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar

funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo

oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para

a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-

implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas

afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das

membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2

observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo

oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a

osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al

2011 Konig Jr 2010)

A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu

um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o

implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea

constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a

infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de

aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada

em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do

implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a

capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente

que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse

maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu

uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a

neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo

permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para

o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de

caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a

permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)

O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo

I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi

surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias

sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas

osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea

6- RESULTADOS

Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e

absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente

Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas

Figuras 5 e 6 respectivamente

Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido

oacutesseo neoformado

Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

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G13 G23 G33 G18 G28 G38

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GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA

8- FONTES CONSULTADAS

bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for

bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33

bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr

AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of

diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52

bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a

Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98

bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of

bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal

Care of the Injured 20114222-25

bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em

ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010

bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de

Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009

bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61

bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de

matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6

bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S

Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects

Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204

bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine

Third edition Canada Elsevier 2013

bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of

α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical

Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98

bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-

mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development

Trends in Biotechnology 201129(10)526-535

A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu

um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o

implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea

constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a

infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de

aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada

em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do

implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a

capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente

que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse

maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu

uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a

neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo

permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para

o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de

caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a

permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)

O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo

I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi

surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias

sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas

osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea

6- RESULTADOS

Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e

absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente

Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas

Figuras 5 e 6 respectivamente

Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido

oacutesseo neoformado

Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

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8- FONTES CONSULTADAS

bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for

bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33

bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr

AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of

diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52

bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a

Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98

bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of

bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal

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bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em

ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010

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bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de

matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6

bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S

Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects

Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204

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Third edition Canada Elsevier 2013

bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of

α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical

Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98

bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-

mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development

Trends in Biotechnology 201129(10)526-535

Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3

semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3

respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas

Figuras 5 e 6 respectivamente

Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido

oacutesseo neoformado

Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

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bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em

ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010

bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de

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bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de

matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

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bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of

α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

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Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas

Figuras 5 e 6 respectivamente

Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em

aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-

ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico

As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido

oacutesseo neoformado

Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

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α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

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Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume

percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados

com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321

3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)

semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318

4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1

Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-

ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado

7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade

biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da

cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a

ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado

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8- FONTES CONSULTADAS

bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for

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bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr

AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of

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Care of the Injured 20114222-25

bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em

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matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

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bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of

α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

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AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of

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Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98

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bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal

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ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010

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matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de

Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6

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Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects

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α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined

with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical

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