UNIVERSIDADE DE BRASIacuteLIA

Faculdade de Medicina

Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical

Aline Machado Rapello do Nascimento

Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenos

mamiacuteferos por Leishmania em matas de galeria do Distrito

Federal Brasil

Brasiacutelia

Agosto de 2017

Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenos

mamiacuteferos por Leishmania em matas de galeria do Distrito

Federal Brasil

Aline Machado Rapello do Nascimento

Brasiacutelia

Agosto de 2017

Orientador Prof Rodrigo Gurgel

Gonccedilalves

Co-orientador Prof Andrey Joseacute de

Andrade

Defesa de doutorado apresentada ao

programa de poacutes-graduaccedilatildeo em

Medicina Tropical da Universidade de

Brasiacutelia para a obtenccedilatildeo do tiacutetulo de

doutora em Medicina Tropical na aacuterea

de concentraccedilatildeo Epidemiologia e

Controle das doenccedilas Infecciosas e

Parasitaacuterias

Ficha catalograacutefica elaborada automaticamente com os dados fornecidos pelo(a) autor(a)

MoMachado Rapello do Nascimento Aline Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenosmamiacuteferos por Leishmania em matas de galeria do DistritoFederal Brasil Aline Machado Rapello do Nascimentoorientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves co-orientador AndreyJoseacute de Andrade -- Brasiacutelia 2017 193 p

Tese (Doutorado - Doutorado em Medicina Tropical) --Universidade de Brasiacutelia 2017

1 Medicina Tropical 2 Epidemiologia e parasitologia3 Leishmaniose 4 Flebotomiacuteneos 5 Pequenos MamiacuteferosSilvestres I Gurgel Gonccedilalves Rodrigo orient II Joseacutede Andrade Andrey co-orient III Tiacutetulo

Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenos

mamiacuteferos por Leishmania spp em matas de galeria do Distrito

Federal Brasil

UNIVERSIDADE DE BRASIacuteLIA

BANCA EXAMINADORA

Dra Magda Clara Vieira da Costa-Ribeiro

Universidade Federal do Paranaacute

Dra Elisa Neves Vianna

Universidade de Brasiacutelia

Dr Ciro Martins Gomes

Universidade de Brasiacutelia

Dr Francisco Anilton Arauacutejo (suplente)

Laboratoacuterio Hertape Sauacutede e Bem Estar Animal SA

Agosto de 2017

ldquoPorque o que acontece aos filhos dos homens isso tambeacutem acontece aos

animais a mesma coisa lhes acontece Como morre um assim morre o outro

Todos tecircm o mesmo focirclego e nenhuma vantagem tecircm homens sobre os

animais Tudo eacute vaidaderdquo

Eclesiastes 319

Dedico este trabalho aos meus pais Ronaldo Rapello e Eliana Rapello meus

maiores mestres e incentivadores e para quem sinto profundo respeito e

agradecimento pelos ensinamentos de vida e amor incondicional

AGRADECIMENTOS

Agrave Deus por me guiar pelos caminhos que Ele traccedilou para minha vida ainda que

alguns inicialmente pareccedilam obscuros progressivamente se revelam

fundamentais para meu crescimento pessoal e profissional

Aos professores do Nuacutecleo de Medicina Tropical especialmente agraves professoras

Maria Regina Fernandes de Oliveira Elisabeth Carmem Duarte Elza Ferreira

Noronha e aos professores Gustavo Adolfo Sierra Romero Cleudson Nery de

Castro Pedro Luiz Tauil Wildo Navegantes de Arauacutejo e Joatildeo Barberino Santos

pela formaccedilatildeo teoacuterica e inspiraccedilatildeo profissional no campo da Epidemiologia

Ao meu orientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves pelo profissionalismo exemplar

pela constante motivaccedilatildeo pela participaccedilatildeo ativa em todas as etapas desse

processo mas tambeacutem pela compreensatildeo empatia paciecircncia e amizade ao

longo da jornada

Ao meu co-orientador Andrey Joseacute Andrade pelo extenso conhecimento

compartilhado pela identificaccedilatildeo de milhares de flebotomiacuteneos pelo incentivo

positivo e participaccedilatildeo em todas as etapas desse processo mas tambeacutem pelos

conselhos pela sinceridade pela paciecircncia e pela parceria do iniacutecio ao fim desse

doutorado

Agrave equipe do Laboratoacuterio Interdisciplinar de Biociecircncias e Faculdade de Medicina

e em especial agrave professora Nadjar Nitz Silva Lociks de Arauacutejo pelo vasto

conhecimento teoacuterico e praacutetico compartilhado pelas palavras de incentivo

fundamentais para o sucesso da etapa molecular mas tambeacutem pela doccedilura e

pela forccedila feminina por compartilhar sabedoria por se tornar um exemplo

profissional e pessoal para mim Agrave colega Thaiacutes Tacircmara Castro Minuzzi-Souza

por compartilhar sua experiecircncia profissional com paciecircncia pelos conselhos e

momentos que fortaleceram a amizade Agraves colegas Tamires Emanuele Vital e

Bruna Caroline Veacuteras de Carvalho pela ajuda na execuccedilatildeo das PCRs pela

paciecircncia pela gentileza e pelo agradaacutevel conviacutevio na etapa laboratorial

Agrave equipe do Laboratoacuterio de Parasitologia especialmente ao professor Marcos

Takasha Obara pelo incentivo e ajuda em vaacuterias etapas de trabalho e pela

amizade Ao colega Douglas Rocha pela ajuda no campo e na triagem

identificaccedilatildeo e fotografia dos flebotomiacuteneos Agrave colega Tauana de Souza Ferreira

por ser gentilmente prestativa em todas as etapas desse trabalho Agrave colega Thaiacutes

Oliveira por compartilhar o tempo e os conhecimentos profissionais pelos

agradaacuteveis momentos juntas pela amizade construiacuteda Agrave colega e teacutecnica

Renata Velocircso Timboacute pela ajuda na execuccedilatildeo de diversas etapas do processo

laboratorial e pela paciecircncia Agrave colega Mariana Neiva pela ajuda na execuccedilatildeo de

diversas etapas do processo laboratorial

Agrave melhor equipe de campo que algueacutem poderia ter Jocircnatas Ferreira Deacutebora

Juliana Rodrigues Martins Jeacutessica Toledo de Almeida Cristiana Santiago Nery

de Souza Agda Regina Melo Silva Thamerson Felipe Lelis dos Santos Saemis

Ferreira de Souza Tacircmela Steacutefany Lopes Silva Renecirc Cunha de Castro Rubens

Geraldo de Souza Jadson Joseacute Gomes da Silva Lana Cristina Evangelista

Ferreira Saacute Hayana Maria Boaventura Costa e ao senhor Barbosa Joseacute Bezerra

Ao meu parceiro Greacutegoire Saint Gal de Pons pela cumplicidade pelo amor pela

paciecircncia por ser um grande ouvinte pelos conselhos pela compreensatildeo nos

momentos de privaccedilatildeo de tempo em funccedilatildeo do curso por cuidar da nossa

famiacutelia

Aos meus filhos Lucca Rapello e Pierre Rapello pela paciecircncia e compreensatildeo

nos momentos de ausecircncia e por serem minhas razotildees de ser melhor

Ao meu irmatildeo Marcio Rapello e cunhada Gabriela Ortiz de Rozas pelos

momentos e palavras de apoio sempre bem-vindos

Agraves minhas avoacutes Annita Rapello (in memorian) e Eulina Machado (in memorian)

que foram para o Senhor ao longo desse doutorado mas que deixaram seus

ensinamentos para sempre na minha vida

Aos meus amigos pessoais que natildeo foram aqui citados mas que sabem o

quanto foram importantes para mim ao longo dessa etapa Vocecircs me fortalecem

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 A Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO 2016

27

Figura 2 Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte Rey 2002ndash CD room (Modificado)

32

Figura 3 Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral Leishmaniases (LV) CL Cutaneous Leishmaniases (LT) Fonte TDR ndash Wellcome Trust

34

Figura 4 Ilustraccedilatildeo das subunidades SSU e LSU intercaladas por espaccediladores de conservaccedilatildeo intermediaacuteria ITS (ITS1 e ITS2 espaccediladores internos transcritos) e ETS (espaccedilador externo transcrito) flanqueados pelo espaccedilador intergenocircmico (IGS) Fonte Vilgalyslab Duke University

63

Figura 5 Matas de Galeria amostradas em Brasiacutelia A Parque Nacional de Brasiacutelia B Fazenda Aacutegua Limpa C Jardim Botacircnico de Brasiacutelia D Reserva Bioloacutegica da Contagem

68

Figura 6 Localizaccedilatildeo geograacutefica das quatro aacutereas de estudo no Distrito Federal A PNB Parque Nacional de Brasiacutelia (PA PB) B REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem (RA RB) C FAL Fazenda Aacutegua Limpa da UNB (BA BB) D JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia (JA JB) Fonte Google Earth 2014

69

Figura 7 Armadilhas utilizadas nas amostragens de flebotomiacuteneos A armadilha do tipo HP B Armadilha do tipo Shannon

70

Figura 8 Armadilhas utilizadas para amostragens de mamiacuteferos A Armadilha tipo Tomahawk localizada no solo B Armadilha tipo Tomahawk com pequeno mamiacutefero capturado C Armadilha tipo Sherman localizada em estrato arboacutereo

72

Figura 9 Roedor marcado por um brinco de identificaccedilatildeo (observar a ponta da pinccedila)

73

Figura10 Base de trabalho de campo 74

Figura 11 Procedimentos de pesagem (A) e exame cliacutenico geral em roedor e marsupial (B)

75

Figura 12 Roedor apoacutes coleta de tecido A seta aponta o local da coleta da ponta de orelha

76

Capiacutetulo 1

Figura 1 Porcentagem de armadilhas positivas para flebotomiacuteneos em quatro matas de galeria no Distrito Federal em maio e setembro de 2014 FAL = Fazenda Aacutegua Limpa REBIO = Reserva Bioloacutegica da Contagem PNB = Parque Nacional de Brasiacutelia JBB = Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

86

Figura 2 A) Genitaacutelia de macho de Brumptomyia brumpti (10x) B) genitaacutelia masculina de Brumptomyia guimaraesi (10x) C) toacuterax do macho de Brumptomyia guimaraesi (10X) (Montados em baacutelsamo de canadaacute)

89

Figura 3 D) Cabeccedila de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (10x) E) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (40x) F) espermateca de Micropygomyia ferreirana (40x) (Montados em baacutelsamo do Canadaacute

90

Figura 4 G) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Evandromyia bourrouli (40x) H) espermateca de Evandromyia bourrouli (40X) I) genitaacutelia masculina de Evandromyia bourrouli (40X)

91

Figura 5 J) Ascoacuteide em flagelocircmeros de Psathyromyia pradobarrientosi (40X) K) Genitaacutelia masculina de Psathyromyia pradobarrientosi (10X) L) porccedilatildeo final do ducto ejaculatoacuterio de Psathyromyia pradobarrientosi (40X)

92

Capiacutetulo 2

Figura 1 Fluxograma explicativo dos meacutetodos utilizados para a obtenccedilatildeo e processamento dos flebotomiacuteneos

102

Figura 2 Amplificaccedilatildeo do gene Cacophany em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-R22 Amostras de flebotomiacuteneos

110

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de SSUrRNA em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-

R28 Amostras de flebotomiacuteneos Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

111

Capiacutetulo 3

Figura 1 Roedores capturados no presente trabalho A Oecomys bicolor B Calomys expulsus C Hylaeamys magacephalus D Rhipidomys macrurus E Nectomys rattus F Necromys lasiurus Fonte A B C D e F - Bonvicino (2008) E ndash Arquivo pessoal

125

Figura 2 Marsupiais capturados no presente trabalho A Didelphis albiventris B Gracilinanus agilis C e D Monodelphis americana Fonte arquivo pessoal

125

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 4 13 1617 20 21 25 82 e 86 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 4 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 48 55 70 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 5 Amplificaccedilatildeo de SSU rRNA em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 02 11 13 16 17 20 25 41 58 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

135

LISTA DE QUADROS E TABELAS

Quadro 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al 2015 Galati 2015

43

Capiacutetulo 1

Tabela 1 Nuacutemeros do cataacutelogo institucional dos voucheres de

espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados no presente estudo

84

Tabela 2 Espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados nas quatro aacutereas de estudo do Distrito Federal em maio e setembro de 2014 Novos registros para o Distrito Federal Novo registro para o cerrado Riqueza total de espeacutecies nas matas de galeria 16 espeacutecies

85

Tabela 3

Lista atualizada de espeacutecies de flebotomiacuteneos no Distrito Federal Brasil Novo registro para o Brasil Riqueza total 35 espeacutecies

87

Capiacutetulo 2

Tabela 1 Identificaccedilatildeo molecular dos ldquopoolsrdquo de flebotomiacuteneos fecircmeas

submetidos aos exames moleculares por aacuterea espeacutecie mecircs de coleta e nuacutemero de indiviacuteduos em cada ldquopoolrdquo

107

Capiacutetulo 3

Tabela 1 Espeacutecies de roedores e marsupiais didelfiacutedeos coletadas

nos meses de maio e setembro de 2014 na FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal Brasil

124

Tabela 2

Distribuiccedilatildeo das espeacutecies de mamiacuteferos capturados nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014

126

Tabela 3 Dados brutos da morfometria corporal sexo e idade das espeacutecies de mamiacuteferos capturadas nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014 As linhas realccediladas em amarelo correspondem aos animais positivos nos testes moleculares

127

Tabela 4

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU de Tripanossomatiacutedeos e ITS1 de Leishmania spp em animais da FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal

133

Tabela 5

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos e ITS-1 de Leishmania spp em animais da FAL PNB e JBB Distrito Federal

136

ABREVIATURAS E SIGLAS

APA Aacutereas de Proteccedilatildeo Ambiental

APPs Aacutereas de Preservaccedilatildeo Permanente

CEUA Comitecirc de Eacutetica de Uso Animal

DF Distrito Federal

DNA Aacutecido Desoxirribonucleacuteico

ELISA Ensaio de Imunoabsorccedilatildeo Enzimaacutetica

ETS Espaccedilador Externo Transcrito

FAL Fazenda Aacutegua Limpa

GDF Governo do Distrito Federal

IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos

Naturais Renovaacuteveis

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatiacutestica

IBRAM Instituto Brasiacutelia Ambiental

ICMBio Instituto Chico Medes de Biodiversidade

IGS Espaccediladores Intergecircnicos

IGS Espaccedilador Intergenocircmico

IM Intramuscular

ITS Internal Transcribed Spacer-

Regiatildeo Espaccediladora Transcrita Interna

ITS-1 Espaccediladores Internos Transcritos 1

ITS-2 Espaccediladores Internos Transcritos 2

JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

KOH Hidroacutexido de Potaacutessio

LC Leishmaniose Cutacircnea

LMC Leishmaniose Muco-cutacircnea

LSU Subunidade Maior

LTA Leishmaniose Tegumentar Americana

LV Leishmaniose Visceral

mgKg Miligramas por quilo

PBS Phosphate-buffered saline - Tampatildeo Fosfato Salino

PCR Polymerase Chain Reaction -Reaccedilatildeo da Polimerase em

Cadeia

PCR-RFLP Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restriccedilatildeo

PNB Parque Nacional de Brasiacutelia

RBC-DF Reserva da Biosfera do Cerrado no DF

RCO Regiatildeo Centro-Oeste

REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia Indireta

RNA Aacutecido Ribonucleacuteico

RNAr RNA ribossocircmico

SINAN-NET Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SSU Subunidade Menor

UC Unidades de Conservaccedilatildeo

UNB Universidade de Brasiacutelia

OMSWHO Organizaccedilatildeo Mundial de SauacutedeWorld Health Organization

OPAS Organizaccedilatildeo Pan-Americana da Sauacutede

CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento de Pessoal de Niacutevel

Superior

dNTPs

Deoxyribonucleotide Triphosphates ndash Desoxirribonucleotiacutedeo

Trifosfato)

Taq Thermus aquaticus

pb pares de bases

FINANCIAMENTO

O estudo foi financiado pela CAPES (processo ndeg127611 edital Parasitologia

Baacutesica) e pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical da

Universidade de Brasiacutelia

Sumaacuterio

1 INTRODUCcedilAtildeO

23

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas 23

12 Definiccedilatildeo 25

13 Epidemiologia 26

14 Agente Etioloacutegico 31

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose 35

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF 38

17 Vetores

40

18 Flebotomiacuteneos no DF 43

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp 45

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de Hospedeiros e Reservatoacuterios

46

111 A questatildeo ambiental do Distrito Federal 52

112 A fragmentaccedilatildeo florestal e as leishmanioses 55

113 Estrateacutegias de controle das leishmanioses 57

114 Diagnoacutestico parasitoloacutegico e imunoloacutegico das leishmanioses 58

115 Diagnoacutestico molecular das leishmanioses 61

116 Diagnoacutestico molecular da infecccedilatildeo por tripanossomatiacutedeos utilizando genes ribossocircmicos

62

2 JUSTIFICATIVA 64

3 OBJETIVOS 66

4 MATERIAL E MEacuteTODOS 67

41 Aacutereas de estudo 67

42 Amostragem de flebotomiacuteneos 70

43 Montagem dissecccedilatildeo e identificaccedilatildeo dos flebotomiacuteneos 71

44 Captura dos pequenos mamiacuteferos 71

45 Contenccedilatildeo e marcaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos 73

46 Coleta de material bioloacutegico 75

5 Resultados 77

51 Capiacutetulo 1 - Lista atualizada de flebotomiacuteneos (Diptera Psychodidae Phlebotominae) do Distrito Federal Brasil

77

RESUMO 78

Introduccedilatildeo 79

Material e Meacutetodos 80

Aacutereas de Estudo 80

Amostragem dos flebotomiacuteneos 81

Anaacutelise estatiacutestica 82

Resultados 82

Aspectos morfoloacutegicos para novos registros

88

Discussatildeo 93

52 Capiacutetulo 2 - Avaliaccedilatildeo de infecccedilatildeo natural por Leishmania spp em flebotomiacuteneos de matas de galeria do Distrito Federal Brasil

98

RESUMO 98

1 Introduccedilatildeo 100

2 Material e Meacutetodos 101

21 Amostragem dissecccedilatildeo e montagem dos flebotomiacuteneos 102

22 Extraccedilatildeo de DNA 103

23 PCR dirigida ao gene Cacophany 103

24 PCR dirigida ao gene SSU rDNA de tripanossomatiacutedeos 104

25 PCR dirigida ao ITS-I do rDNA 105

3 Resultados 106

4 Discussatildeo 111

53 Capiacutetulo 3 Ocorrecircncia de pequenos mamiacuteferos infectados por Leishmania spp em Matas de Galeria do Distrito Federal Brasil

115

RESUMO 115

1 Introduccedilatildeo 116

2 Material e meacutetodos 118

21 Aacuterea de estudo amostragem e identificaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos

118

22 Amostras bioloacutegicas e extraccedilatildeo do DNA 119

23 PCR dirigida ao gene SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos 120

24 PCR dirigida ao ITS- 1 do rRNA 121

25 Aspectos eacuteticos 122

26 Anaacutelise de dados 122

3 Resultados 123

4 Discussatildeo 137

41 Composiccedilatildeo da comunidade de mamiacuteferos no momento das coletas

137

42 Infecccedilatildeo natural por Leishmania spp nos pequenos mamiacuteferos das Matas de Galeria estudadas no Distrito Federal Brasil

141

6 Consideraccedilotildees Finais 148

7 Conclusotildees 151

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 152

9 ANEXOS 190

RESUMO

O conhecimento relacionado agrave transmissatildeo enzooacutetica de espeacutecies de

Leishmania no Distrito Federal ainda eacute escasso e a participaccedilatildeo de

flebotomiacuteneos e mamiacuteferos silvestres no ciclo de transmissatildeo desses

protozoaacuterios eacute objeto do presente estudo As aacutereas estudadas foram as matas

de galeria da Fazenda Aacutegua Limpa da Universidade de Brasiacutelia Reserva

Bioloacutegica da Contagem Parque Nacional de Brasiacutelia e Jardim Botacircnico de

Brasiacutelia em maio e setembro de 2014 O Capiacutetulo 1 traz a atualizaccedilatildeo da lista de

espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF Com esforccedilo de captura de 1280 armadilhas

HP e 16 armadilhas do tipo Shannon foram capturados 1209 flebotomiacuteneos

pertencentes a 16 espeacutecies Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espeacutecie

mais capturada Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia guimaraesi Br

brumpti Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas

pela primeira vez no DF ampliando a distribuiccedilatildeo geograacutefica das mesmas e

elevando para 35 o nuacutemero de espeacutecies registradas nessa unidade da

federaccedilatildeo O Capiacutetulo 2 analisou a infecccedilatildeo natural dos flebotomiacuteneos

capturados por Leishmania DNA foi extraiacutedo de 569 fecircmeas agrupadas em 87

ldquopoolsrdquo A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada agrave

amplificaccedilatildeo do gene cacophony da regiatildeo IVS6 A detecccedilatildeo dos

tripanossomatiacutedeos foi feita pela amplificaccedilatildeo das regiotildees SSU rRNA e ITS-1

Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp entretanto os

resultados do presente estudo natildeo implicam na inexistecircncia de vetores

infectados nestas matas de galeria O Capiacutetulo 3 analisou a ocorrecircncia e infecccedilatildeo

em pequenos mamiacuteferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp nas

mesmas aacutereas dos flebotomiacuteneos e nos mesmos periacuteodos Amostras de tecido

(fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamiacuteferos capturados e utilizadas

para a detecccedilatildeo molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e

PCR com alvo na regiatildeo ITS em 153 amostras Com um total de 5120

armadilhas-noite 172 pequenos mamiacuteferos foram capturados pertencentes agrave

trecircs espeacutecies de marsupiais (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis e

Monodephis americana) e seis espeacutecies de roedores (Rhipidomys macrurus

Oecomys bicolor Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys

rattus e Necromys lasiurus) Vinte amostras (1307) foram positivas

considerando ambos os marcadores moleculares quatro somente para SSU e

quatro somente para ITS As espeacutecies infectadas por Leishmania spp foram

Rhipidomys macrurus Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris Estas espeacutecies

devem participar da transmissatildeo enzooacutetica de Leishmania na REBIO FAL e JBB

sendo este o primeiro relato de mamiacuteferos silvestres infectados por este parasito

nestas duas uacuteltimas aacutereas Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se

que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espeacutecies incriminadas

vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenccedilatildeo da

transmissatildeo enzooacutetica desses tripanossomatiacutedeos

Palavras chaves Transmissatildeo enzooacutetica Leishmania spp roedores

marsupiais Phlebotominae Cerrado

ABSTRACT

Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce

and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis

transmission cycle is the subject of this study All samples were captured in

gallery forests of four areas Aacutegua Limpa Farm Biological Reserve of Contagem

Brasiliarsquos National Park and Botanic Garden of Brasiacutelia on May and September

2014 Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal

District The entire capture effort entailed 1280 HP light traps and 16 Shannon

traps 16 species were identified Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the

most captured species Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia

guimaraesi Br brumpti Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli

were registered for the first time in the Federal District elevating to 35 the number

of reported species at this federation unit Chapter 2 follows up the study of

Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies

DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools Fragments that

corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples

demonstrating the quality of the extracted DNA Trypanosomatids detection was

performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions All samples tested

negative for Leishmania spp Therefore negative results in the present study do

not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and

surroundings Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small

mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of

sandflies and during the same periods Tissue samples (ear tips) were obtained

from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested

PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples The entire

capture effort entailed 5120 night-traps and 172 small mammals from three

marsupials species (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis and Monodephis

americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus Oecomys bicolor

Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys rattus and Necromys

lasiurus) were captured Twenty samples (1307) were positive considering

both molecular markers four samples only for SSU and four sampes only for ITS

Leishmania spp infected species were Rhipidomys macrurus Gracilinanus

agilis and Didelphis albiventris These species might participate in the enzootic

transmition of Leishmania at REBIO FAL and JBB This is the first report of

Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas Considering all

results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species

from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the

maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Key words Enzootic transmission Leishmania spp rodents marsupials

Phlebotominae Brazilian savanna

23

1 Introduccedilatildeo

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) eacute uma doenccedila existente

desde a antiguidade cujos relatos e descriccedilotildees datam do seacutec I dC (Basano

amp Camargo 2004) Altamirano-Enciso et al (2003) relataram trecircs teorias de

origem da doenccedila nas Ameacutericas A primeira de 1890 em que Juliano Moreira

amp Aguiar Pupo propunham uma origem mediterracircnea enfatizando que os

casos observados em pacientes da Bahia (Brasil) doenccedila chamada ldquobotatildeo da

Bahiardquo eram parecidos ao ldquobotatildeo do Orienterdquo Segundo os mesmos autores a

LTA teria sido introduzida pelos feniacutecios ou siacuterios que supostamente

chegaram ao nordeste do Brasil ainda na Antiguidade No entanto tais

viagens jamais foram comprovadas historicamente ou arqueologicamente

A segunda teoria eacute a de origem andina formulada a partir dos

descobrimentos de peccedilas de ceracircmica preacute-colombianas ou ldquohuacos peruanosrdquo

em 1895 e reforccedilada pelos documentos do seacuteculo XVI Contudo a discussatildeo

dos dados histoacutericos dividiu-se em dois grupos uma primeira corrente

representada pelos defensores das chamadas ldquoevidecircnciasrdquo histoacutericas cujos

argumentos se reforccedilam pelos estudos das representaccedilotildees de lesotildees feitas

em objetos de ceracircmica e outro grupo de estudiosos que questionava essa

fonte histoacuterica por ser descrita por cronistas que natildeo eram meacutedicos Atribui-se

a essa discussatildeo grande importacircncia porque se passaram quase 80 anos

desde que Eduardo Rabello (1925) propocircs que as origens da leishmaniose

muco-cutacircnea (LMC) estariam inicialmente focalizadas nos territoacuterios frios

sugerindo as regiotildees da Boliacutevia e do Peru predominando esta teoria na

literatura biomeacutedica

24

Mais recentemente a chamada teoria monofileacutetica para origem das

leishmacircnias foi formulada por Thomas-Soccol et al (1993) que baseando-se

em estudos de DNA mitocondrial de 20 espeacutecies de leishmacircnias do mundo

consideram que os subgecircneros Viannia e Leishmania propostos por Lainson

amp Shaw (1972) tiveram origem comum desde os periacuteodos Cretaacuteceo e

Juraacutessico haacute 120 milhotildees de anos quando os continentes estavam unidos na

Pangeacuteia Contudo a questatildeo do local de origem das leishmacircnias continua

controversa entre as regiotildees Neotropical Paleaacutertica e Africana

Cerqueira no Brasil em 1855 observou a existecircncia da forma cutacircnea

identificando-a clinicamente como ldquobotatildeo de Biskrardquo e Breda em 1895 na

Itaacutelia descreveu a doenccedila em italianos provenientes de Satildeo Paulo

Lindenberg (1909) encontrou ldquoformas de Leishmaniardquo idecircnticas agrave

Leishmania tropica da leishmaniose do Velho Mundo em lesotildees cutacircneas de

indiviacuteduos que trabalhavam nas matas do interior do Estado de Satildeo Paulo o

que confirmou a natureza leishmanioacutetica das lesotildees cutacircneas e nasofariacutengeas

(Basano amp Camargo 2004) Gaspar Vianna redescreveu o parasito como L

braziliensis por consideraacute-lo diferente da L tropica e assim denominou-se o

agente etioloacutegico da uacutelcera de Bauru ferida brava ou nariz de tapir

(Basano amp Camargo 2004)

No Brasil ateacute a deacutecada de 1970 todos os casos de LTA eram atribuiacutedos a

L braziliensis (Basano amp Camargo 2004) entretanto com o progresso das

pesquisas ecoepidemioloacutegicas e com o desenvolvimento das teacutecnicas

moleculares outras espeacutecies foram descritas sendo registradas ateacute o

momento sete espeacutecies causadoras da LTA (Brasil 2010) A leishmaniose

visceral (LV) era confundida no passado com outras doenccedilas endecircmicas e de

apresentaccedilatildeo cliacutenica semelhante como a malaacuteria em humanos (Palmer

1998)

No iniacutecio de 1903 James Homer Wright de Baltimore observou formas de

protozoaacuterios em uacutelcera cutacircnea de uma crianccedila da Armecircnia suspeita de ser

acometida pelo Botatildeo do Oriente e propocircs o nome de Welcozoma tropicum

para o agente causal hoje conhecido como L tropica Em 30 de maio desse

25

ano o inglecircs William Boog Leishman obteve uma bioacutepsia de fiacutegado de um

soldado inglecircs morto pela doenccedila febre de dum-dumou kala-azar na Iacutendia

Dois meses depois em 11 de julho Charles Donovan tambeacutem em bioacutepsia do

baccedilo de outro soldado morto descobriu independentemente o agente

etioloacutegico do calazar que era semelhante ao parasito da tripanossomiacutease em

sua fase intracelular (Altamirano-Enciso et al 2003)

O nome do gecircnero Leishmania foi criado pelo meacutedico inglecircs Ronald Ross

mas o termo Leishmania donovani para o agente da LV foi proposto por

Laveran amp Mesnil em 1903 embora segundo Basano amp Camargo (2004)

Cunningham em 1885 na Iacutendia foi o primeiro a observar o parasito do gecircnero

em casos de LV A partir daquele ano foram descritos outros

tripanossomatiacutedeos em paiacuteses do mar Mediterracircneo e da Aacutesia araacutebica As

duacutevidas de que L donovani e L tropica fossem tripanossomatiacutedeos e natildeo

piroplasmas soacute foram dissipadas quando Rogers amp Nicolle (1904) e

posteriormente Nicolle (1908) e Carlos Chagas (1908) demonstraram as

formas flageladas de ambos os parasitos em meio de aacutegar sangue ldquoin vitrordquo

Sergent et al (1921) reproduziram o rdquobotatildeo do Orienterdquo em hamsters ao

inocularem macerados de Phlebotomus papatasi alimentados em soldados

franceses na Argeacutelia comprovando a associaccedilatildeo entre L tropica e

flebotomiacuteneos No Brasil Henrique Aragatildeo (1922) estudou um surto de LTA

no Rio de Janeiro e associou os casos agrave presenccedila de elevada quantidade de

flebotomiacuteneos infectados por L braziliensis Ao inocular triturados destes

flebotomiacuteneos no focinho de catildees foi observada ulceraccedilatildeo com a presenccedila

de formas amastigotas intracelulares (Altamirano-Enciso et al 2003)

12 Definiccedilatildeo

As leishmanioses satildeo um conjunto de doenccedilas resultantes da infecccedilatildeo

por protozoaacuterios digeneacuteticos (Negratildeo amp Ferreira 2014) pertencentes ao filo

Euglenozoa classe Kinetoplastea ordem Trypanosomatida famiacutelia

26

Trypanosomatidae (Cavalier-Smith 2016) gecircnero Leishmania (Ross 1903)

com caraacuteter zoonoacutetico Esses protozoaacuterios satildeo transmitidos por insetos

vetores conhecidos por flebotomiacuteneos (Laurenti 2010 Ready 2013) O fator

em comum das espeacutecies de Leishmania estaacute na necessidade de passar por

um hospedeiro invertebrado obrigatoriamente um flebotomiacuteneo (ver item 17)

para se reproduzirem e atingirem a forma infectante (Jones et al 2003)

As doenccedilas estatildeo amplamente distribuiacutedas em todo o mundo e dividem-se

em dois grandes grupos as leishmanioses dermotroacutepicas e as leishmanioses

viscerotroacutepicas (Negratildeo amp Ferreira 2009)

13 Epidemiologia

As leishmanioses representam uma das endemias de maior

importacircncia em sauacutede puacuteblica no mundo (Laurenti 2010) As mesmas satildeo

consideradas emergentes em franca expansatildeo associada agrave pobreza e ao

deslocamento da populaccedilatildeo para aacutereas com ciclos de transmissatildeo existentes

sendo incluiacutedas na lista de Doenccedilas Tropicais Negligenciadas (WHO 2014)

As leishmanioses tecircm ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica sendo possiacutevel observar

casos da doenccedila em todos os continentes com exceccedilatildeo da Antaacutertica (Figura

1) (WHO 2009)

27

FIGURA 1 Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A

Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO

2016

Segundo a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (WHO 2016) satildeo estimados

900 mil a 16 milhatildeo de novos casos de leishmanioses destes 02 a 04

milhatildeo de novos casos de LV e 07 a 12 milhotildees de novos casos de LT onde

20 mil a 30 mil mortes ocorrem anualmente no mundo Ainda de acordo com

A

B

28

dados da WHO (2016) mais de 98 paiacuteses e territoacuterios satildeo endecircmicos para as

leishmanioses Destes 72 paiacuteses estatildeo em processo de desenvolvimento

incluindo 13 dos menos desenvolvidos e sua notificaccedilatildeo eacute compulsoacuteria em

apenas 30 deles (Negratildeo amp Ferreira 2014) Nas Ameacutericas as leishmanioses

ocorrem em 21 paiacuteses com expansatildeo geograacutefica associada agrave antropizaccedilatildeo

dos ciclos de transmissatildeo de Leishmania com o desmatamento abertura de

estradas e urbanizaccedilatildeo de aacutereas primitivas que tem favorecido o ciclo

peridomiciliar da doenccedila (Dedet 1999 Negratildeo amp Ferreira 2014)

As formas viscerotroacutepica e dermotroacutepica tecircm despertado especial

interesse devido a sua importacircncia meacutedica e econocircmica em aacutereas endecircmicas

em regiotildees tropicais e subtropicais da Ameacuterica Aacutefrica Iacutendia e paiacuteses nas

margens do Mediterracircneo (Negratildeo amp Ferreira 2009)

A LTA eacute encontrada em todos os paiacuteses das regiotildees tropicais e

subtropicais do mundo (Gontijo amp Carvalho 2003) exceto na Austraacutelia Nova

Zelacircndia e algumas ilhas do Paciacutefico Essa irregularidade na distribuiccedilatildeo

mundial eacute enfatizada pelo fato que os 90 dos casos tem ocorrido em apenas

seis paiacuteses Afeganistatildeo Brasil Iratilde Peru Araacutebia Saudita e Siacuteria (WHO 2008

Negratildeo amp Ferreira 2014) A doenccedila eacute descrita em quase todos os paiacuteses

americanos do sul dos Estados Unidos agrave Patagocircnia ao norte extremo da

Argentina (Millaacuten et al 2016) com exceccedilatildeo do Uruguai e do Chile (Lainson

1981) verificando-se a distribuiccedilatildeo das diversas formas clinico

epidemioloacutegicas com estreita relaccedilatildeo com condiccedilotildees floriacutesticas e fauniacutesticas

(Teodoro 1997) Na Ameacuterica Latina eacute assinalada desde a peniacutensula de

Yucataacuten Meacutexico (Castro 2002) compreendendo as proviacutencias do norte da

Argentina (Salomoacuten 2010 Millaacuten et al 2016) alcanccedilando maior importacircncia no

Brasil aleacutem do Peru

Negratildeo amp Ferreira (2014) consideraram que na Ameacuterica do Sul a LTA

apresenta dois padrotildees epidemioloacutegicos o padratildeo claacutessico constituiacutedo por

surtos epidecircmicos associados agrave derrubada de matas para a construccedilatildeo de

estradas e povoados e o padratildeo associado agraves formas de ocupaccedilatildeo do espaccedilo

em regiotildees de colonizaccedilatildeo antiga

29

A maioria dos casos de leishmanioses nas Ameacutericas eacute proveniente do

Brasil (Alvar et al 2012) onde as mesmas apresentam distribuiccedilatildeo em todas

as regiotildees geograacuteficas desde 2003 com maior incidecircncia observada no

Nordeste brasileiro (WHO 2014) No Brasil estatildeo incluiacutedas na lista de

doenccedilas que compotildeem o Sistema de Informaccedilatildeo de Doenccedilas de Notificaccedilatildeo

Compulsoacuteria (Brasil 2010)

De acordo com WHO (2016) no ano de 2014 foram notificados 3453

casos de LV no Brasil dos quais 82 com confirmaccedilatildeo laboratorial Para a

leishmaniose tegumentar (LT) foram notificados 19402 casos e 89

confirmados por exames De acordo com a mesma fonte 43 da populaccedilatildeo

brasileira estaacute sob o risco de LV (86997054 200362200) e 70 sob o risco

de LT (139396846200362200) Entre os fatores de risco para a ocorrecircncia

das leishmanioses encontra-se a subnutriccedilatildeo com dietas pobres em

proteiacutenas ferro vitamina A e zinco que pode comprometer a imunidade dos

indiviacuteduos aumentando o risco de uma infecccedilatildeo se agravar a precariedade

das condiccedilotildees sanitaacuterias domeacutesticas como a falta de gestatildeo de resiacuteduos e

esgoto a ceacuteu aberto que podem aumentar os locais de criaccedilatildeo e repouso de

flebotomiacuteneos e bem como o seu acesso aos seres humanos a migraccedilatildeo e

a exposiccedilatildeo ocupacional onde as pessoas ao se movimentarem ou se

estabelecerem em aacutereas de florestas ficam mais proacuteximas do habitat de

flebotomiacuteneos mudando o perfil epidemioloacutegico das doenccedilas (WHO 2014)

Negratildeo amp Ferreira (2014) estudaram a dispersatildeo da LT nas Ameacutericas e

relataram que o crescimento migratoacuterio aliado ao processo histoacuterico de

organizaccedilatildeo espacial nas uacuteltimas deacutecadas tem propiciado a proliferaccedilatildeo de

aacutereas de alto risco e infecccedilatildeo por Leishmania em aacutereas urbanas brasileiras

ora associadas a aacutereas verdes e outras como consequecircncia do desequiliacutebrio

ecoloacutegico evidenciada em algumas aacutereas periurbanas ou associadas agraves

aacutereas de desmatamentos Os mesmos autores enfatizaram que dentro dos

limites geograacuteficos da ocorrecircncia da doenccedila sua extensatildeo e severidade

variavam pelo endemismo ou ocorrecircncia esporaacutedica com condiccedilotildees

ecoloacutegicas especiacuteficas em diferentes regiotildees A distribuiccedilatildeo espacial da

doenccedila em territoacuterio brasileiro eacute resultado de diferentes condiccedilotildees geograacuteficas

30

ou ecoloacutegicas potencializadas pelo planejamento governamental inadequado

ou ineficiente em accedilotildees que promovam a conscientizaccedilatildeo visando o controle

prevenccedilatildeo ou detecccedilatildeo precoce da infecccedilatildeo em aacutereas de risco Para os

centros urbanos eacute de grande importacircncia o conhecimento de aacutereas que

podem oferecer risco agrave populaccedilatildeo exposta agraves formas de LTA de ocorrecircncia

ligadas ao ambiente (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Outro aspecto relevante dentro deste contexto de expansatildeo e urbanizaccedilatildeo

das leishmanioses em todo o mundo e principalmente no Brasil eacute a

possibilidade de se adquirir a doenccedila a partir de transfusotildees sanguiacuteneas (Luz

et al 1997 Urias et al 2009) Este fato eacute agravado em funccedilatildeo do diagnoacutestico

soroloacutegico para a LV natildeo estar incluiacutedo ainda na triagem dos doadores do

paiacutes (Laurenti 2010) que se restringe a triagem laboratorial normatizada das

seguintes doenccedilas doenccedila de Chagas siacutefilis hepatite B HIV malaacuteria HTLV

1 e 2 (Anvisa 2004)

Karagiannis-Voules et al (2013) associaram as doenccedilas a fatores soacutecio-

econocircmicos e agrave precipitaccedilatildeo Clima precipitaccedilatildeo temperatura e umidade satildeo

fatores que podem alterar as distribuiccedilotildees e influenciar na sobrevivecircncia e no

tamanho das populaccedilotildees de vetores e de hospedeiros reservatoacuterios

Flutuaccedilotildees na temperatura podem ter um efeito profundo no ciclo de

desenvolvimento de promastigotas de Leishmania em flebotomiacuteneos

permitindo a transmissatildeo do parasito em aacutereas anteriormente natildeo endecircmicas

para as doenccedilas Alteraccedilotildees climaacuteticas que levam agrave seca fome e inundaccedilotildees

podem levar ao deslocamento em massa e a migraccedilatildeo de pessoas para aacutereas

com transmissatildeo de leishmanioses (WHO 2014)

Acredita-se que os nuacutemeros de casos notificados natildeo correspondam a

evoluccedilatildeo da LTA devido agrave demora com que o paciente procura o sistema de

sauacutede e o difiacutecil diagnoacutestico por parte do proacuteprio sistema Mesmo levando-se

em conta as falhas de notificaccedilatildeo compulsoacuteria eacute evidente o crescente nuacutemero

de casos novos e a intensidade que atinge o homem sendo proporcional agraves

alteraccedilotildees ambientais decorrentes de atividades humanas em aacutereas

especiacuteficas na aacuterea de estudo proposta A prevalecircncia das diferentes

leishmanioses no continente americano eacute difiacutecil de ser mensurada devido

31

principalmente a subnotificaccedilotildees diagnoacutesticos incorretos afecccedilotildees

inaparentes variaccedilotildees de resposta do hospedeiro e multiplicidade de agentes

etioloacutegicos envolvidos (Marzochi 1992)

14 Agente Etioloacutegico

As infecccedilotildees em seres humanos e em animais por protozoaacuterios do

gecircnero Leishmania recebem denominaccedilotildees variadas mas podem ser

agrupadas com base em suas caracteriacutesticas comuns De acordo com

Akhoundi et al (2016) satildeo conhecidas 53 espeacutecies de Leishmania

pertencentes a cinco subgecircneros e complexos (Leishmania Viannia

Sauroleishmania complexo L enriettii e Paraleishmania) Desse total 31

espeacutecies parasitam espeacutecies de mamiacuteferos sendo que pelo menos 20 delas

infectam seres humanos Uma vez que as formas amastigotas satildeo

morfologicamente similares (Jubb et al1993 Palmer 1998) a diferenciaccedilatildeo

das espeacutecies que parasitam seres humanos eacute realizada por testes

moleculares indispensaacuteveis para o diagnoacutestico (Zampieri et al 2016)

As espeacutecies de Leishmania tecircm ciclos bioloacutegicos similares (Laurenti

2010) apresentando duas formas principais a amastigota observada dentro

de ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear em tecidos dos hospedeiros

vertebrados e a promastigota encontrada no sistema digestoacuterio de

flebotomiacuteneos fecircmeas (Figura 2) (Rey 2002) Ambos amastigotas e

promastigotas dividem-se repetidamente por divisatildeo binaacuteria (Palmer 1998)

32

FIGURA 2 ndash Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte

Rey 2002ndash CD room (Modificado)

No hospedeiro vertebrado as formas amastigotas encontram-se no

interior de vacuacuteolos parasitoacuteforos em macroacutefagos e ceacutelulas reticuloendoteliais

e medem cerca de 1 a 2 microm de largura por 2 a 4 microm de comprimento (Palmer

1988 Jones et al 2003) Esta forma se multiplica por divisatildeo assexuada ateacute o

rompimento da ceacutelula disseminando-se pela via hematogecircnica e linfaacutetica

para outros tecidos ricos em ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear como

linfonodos fiacutegado baccedilo medula oacutessea placas de Peyer por exemplo

iniciando uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria e proporcionando a atraccedilatildeo de outros

macroacutefagos gerando um ldquociclo viciosordquo (Figura 3) (Palmer 1998 Basano amp

Camargo 2004)

A forma amastigota da Leishmania eacute tipicamente ovoacuteide ou esfeacuterica

natildeo possui flagelo e nem membrana ondulatoacuteria (Palmer 1998) apenas um

rudimento de flagelo que estaacute presente na bolsa flagelar caracterizada como

uma pequena invaginaccedilatildeo da membrana do parasito (Figura 2) (Laurenti

2010) Nas preparaccedilotildees coradas por Romanovsky esses organismos

apresentam um citoplasma azul paacutelido contendo nas proximidades da

33

extremidade posterior um nuacutecleo uacutenico avermelhado com um cariossoma

central que se cora mais profundamente Tangenciando e anterior ao nuacutecleo

encontra-se um corpo em forma de bastonete e com uma cor violeta escuro o

cinetoplasto que conteacutem o corpo parabasal e o blefaroplasto em forma de

pinta (Figura 2) (Jones et al 2003) A forma amastigota conteacutem duas

concentraccedilotildees de DNA no nuacutecleo e em uma mitococircndria modificada o

cinetoplasto (Palmer 1998)

No seu hospedeiro invertebrado ou em culturas os organismos

assumem formas que variam desde a forma amastigota ateacute a forma de pro-

mastigota essa uacuteltima eacute esguia e fusiforme medindo cerca de 14 a 20microm de

comprimento e 15 a 4microm de largura Esta forma tem motilidade por meio de

um flagelo que se origina no blefaroplasto e projeta-se desde o poacutelo anterior

do organismo O cinetoplasto se situa na extremidade anterior do corpo

(Figura 2) (Jones et al 2003)

O flebotomiacuteneo hospedeiro invertebrado ao sugar sangue de um

animal infectado se infecta ao ingerir histioacutecitos da derme ou monoacutecitos do

sangue contendo formas amastigotas de Leishmania em seu citoplasma

(Basano amp Camargo 2004) Em seu intestino meacutedio e glacircndulas salivares as

leishmacircnias sofrem modificaccedilotildees morfoloacutegicas e bioquiacutemicas se congregam

na vaacutelvula cardiacuteaca onde o intestino anterior projeta-se no intestino meacutedio e

se transformam em promastigotas (com flagelo livre) que aderem ao epiteacutelio

do tubo digestoacuterio onde se multiplicam amplamente por divisotildees binaacuterias A

populaccedilatildeo daiacute resultante migra para a parte anterior do tubo digestoacuterio do

inseto diferenciando-se para formas promastigotas infectantes por volta de 3-

4 dias com invasatildeo da faringe do inseto sendo tambeacutem as chamadas formas

de promastigotas metaciacuteclicas encontradas na buco-faringe destes insetos

Quando os parasitos atingem o proacute-ventriacuteculo do inseto causam uma

obstruccedilatildeo no tubo digestoacuterio dificultando a ingestatildeo de sangue e levando a

fecircmea entatildeo faminta a picar muitas vezes pessoas ou animais Tais insetos

ao sugarem sangue (injetando na picada da pele a sua saliva e a saliva

apresentando propriedade anticoagulante homesostaacutetica anesteacutesica e

vasodilatadora) injetam tambeacutem as formas infectantes da Leishmania a qual

34

caindo na circulaccedilatildeo sanguiacutenea deste novo hospedeiro (vertebrado) vai

desenvolver a doenccedila numa das formas cliacutenicas conhecidas (Figura 3)

(Palmer 1998) ou na maioria dos casos levar a infecccedilotildees assintomaacuteticas e

autoresolutivas (Fukutani 2014)

FIGURA 3 ndash Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral

Leishmaniasis (LV) CL Cutaneous Leishmaniasis (LT) Fonte TDR ndash

Wellcome Trust

35

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose

Os protozoaacuterios do gecircnero Leishmania apresentam diferentes

distribuiccedilotildees geograacuteficas e as enfermidades por eles causadas satildeo

relativamente distintas embora possa haver superposiccedilatildeo nos sinais e

cliacutenicos e lesotildees (Jones et al 2003) Cerca de 20 espeacutecies de Leishmania satildeo

patogecircnicas para o ser humano (Laurenti 2010) As leishmanioses se

manifestam de quatro formas diferentes a depender da espeacutecie de

Leishmania envolvida e do estado imunoloacutegico do hospedeiro i) visceral

tambeacutem conhecida como calazar a forma mais grave da doenccedila ii) cutacircnea

a mais comum iii) mucocutacircnea e iv) cutacircnea difusa A LV eacute uma doenccedila

crocircnica sistecircmica que afeta os oacutergatildeos como o fiacutegado e o baccedilo A LTA inclui

as formas cutacircnea cutacircnea difusa e mucocutacircnea caracterizadas pela

formaccedilatildeo de uacutelceras na pele (Brasil 2006 2010)

A LV eacute principalmente causada por L donovani (Jubb et al 1993) Nas

Ameacutericas Central e Sul Leishmania infantum (syn L chagasi) eacute a espeacutecie

envolvida na patogenia (Brasil 2006)

A patogenia das leishmanioses eacute fortemente influenciada por fatores

inerentes ao hospedeiro como suas caracteriacutesticas geneacuteticas e resposta

imunoloacutegica por fatores inerentes ao parasito como a virulecircncia da espeacutecie

de Leishmania infectante e por fatores inerentes ao vetor como sua

capacidade vetorial Como resultado dessa interaccedilatildeo entre as diferentes

espeacutecies do parasito do vetor e dos mecanismos da resposta imunoloacutegica do

hospedeiro vertebrado um espectro de manifestaccedilotildees cliacutenicas

histopatoloacutegicas e imunoloacutegicas eacute observado no homem (Laurenti 2010)

Imunologicamente apoacutes a inoculaccedilatildeo do parasito aqueles animais que seratildeo

resistentes agrave infecccedilatildeo promovem a ativaccedilatildeo de ceacutelulas TCD4+Th1 que

produziratildeo entre outras as citocinas interferon gama fator de necrose

tumoral alfa e interleucinas (IL) 2 e 12 Estas por sua vez ativaratildeo

macroacutefagos que faratildeo a destruiccedilatildeo das formas amastigotas intracelulares

(Pinelli et al 1995) Segundo os mesmos autores as ceacutelulas TCD8 citotoacutexicas

36

tambeacutem podem estar envolvidas na resistecircncia agrave doenccedila Jaacute nos animais que

manifestaratildeo sinais cliacutenicos da doenccedila haveraacute uma supressatildeo das ceacutelulas

TCD4+Th1 e ativaccedilatildeo das ceacutelulas TCD4+Th2 com produccedilatildeo de IL-4 IL-5 IL-

6 IL-10 IL-13 responsaacuteveis pela proliferaccedilatildeo de ceacutelulas B e

consequentemente produccedilatildeo de grande quantidade de anticorpos (Pinelli et al

1994 1999) Anticorpos estes natildeo protetores mas muitas vezes danosos

pois formaratildeo imunocomplexos que poderatildeo ser depositados nas membranas

basais de vaacuterios oacutergatildeos (Slappendel 1988 Martinez-Moreno et al 1995)

Usualmente a LV eacute observada como enfermidade debilitante crocircnica

com periacuteodos de febre perda de peso gradual anemia e leucopenia (Jones et

al 2003) Patologicamente o fiacutegado pode conter numerosos granulomas e eacute

simetricamente aumentado e marrom escuro O baccedilo eacute maior em duas a trecircs

vezes o seu tamanho normal simetricamente aumentado e marrom-escuro a

preto na sua superfiacutecie capsular Os linfonodos estatildeo moderadamente

aumentados e irregulares sem outras mudanccedilas significativas na cavidade

abdominal exceto os rins que podem estar mais escuros que o normal (Jubb

et al 1993) A medula oacutessea eacute uniformemente avermelhada e amolecida

(Jones et al 2003)

As lesotildees microscoacutepicas da LV caracterizam-se por uma infiltraccedilatildeo

maciccedila em vaacuterios sistemas do organismo de enormes macroacutefagos cujo

citoplasma estaacute repleto de leishmacircnias A arquitetura dos linfonodos e do

baccedilo pode estar completamente obscurecida pelas ceacutelulas fagocitaacuterias

(Jones et al 2003)

Os foliacuteculos esplecircnicos satildeo hiperplaacutesicos geralmente com hialinose

folicular Em casos avanccedilados haacute atrofia de nodos e baccedilo e as aacutereas dos

sinus podem estar difusamente ocupadas por grandes macroacutefagos altamente

carregados com organismos intracitoplasmaacuteticos e numerosas ceacutelulas

plasmaacuteticas As lesotildees na medula oacutessea podem ser focais e consistem de

grupos de macroacutefagos epitelioacuteides com organismos fagocitados As

alteraccedilotildees renais satildeo variaacuteveis e podem consistir em manchas intersticiais

com algum envolvimento parasitaacuterio (Jubb et al 1993) e por este motivo

utiliza-se os criteacuterios de classificaccedilatildeo da Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede que

37

inclui glomerulopatias com alteraccedilotildees miacutenimas glomeruloesclerose

segmentar focal glomerulonefrite membranoproliferativa glomerulonefrite

proliferativa mesangial glomerulonefrite membranosa glomerulonefrite

crescecircntica e glomerulonefrite crocircnica (Churg et al 1985)

A LT eacute causada por 18 espeacutecies de Leishmania patogecircnicas para os

seres humanos (Ready 2013) A LT causada por L tropica e L major ocorre

principalmente no sul da Europa e nos paiacuteses do norte da Aacutefrica que

circundam o Mediterracircneo (Jones et al 2003) Nas Ameacutericas assim

denominada LTA a infecccedilatildeo humana ocorre por 11 espeacutecies (Ready 2013)

agrupadas nos subgecircneros Leishmania e Viannia onde as trecircs espeacutecies mais

importantes do subgecircnero Leishmania satildeo L mexicana L amazonensis e L

venezuelensis e do subgecircnero Viannia satildeo L braziliensis L panamensis L

peruviana e L guyanensis

A infecccedilatildeo caracteriza-se por uacutelceras ou noacutedulos uacutenicos ou muacuteltiplos na

pele com lento desenvolvimento e que habitualmente cicatrizam-se

espontaneamente depois de um periacuteodo de meses (Jones et al 2003) As

lesotildees cutacircneas tomam forma de uma uacutelcera crocircnica que se desenvolve de

paacutepulas inflamatoacuterias no local da picada do inseto Linfoacutecitos e ceacutelulas

plasmaacuteticas margeiam a lesatildeo e os neutroacutefilos satildeo atraiacutedos para os debris

Quando a inflamaccedilatildeo se estende agrave borda epitelial a ulceraccedilatildeo ocorre Muitos

parasitos estatildeo no interior de histioacutecitos e alguns estatildeo livres no tecido (Jubb

et al 1993) As lesotildees de longa duraccedilatildeo estatildeo circunscritas por um tecido

conjuntivo fibroblaacutestico o que lhes daacute um aspecto de granuloma tiacutepico (Jones

et al 2003)

A leishmaniose mucocutacircnea uma das formas cliacutenicas da LTA ocorre

no Meacutexico e nas Ameacutericas Central e do Sul A infecccedilatildeo parece com a

cutacircnea mas aleacutem da pele com frequecircncia as uacutelceras crocircnicas com bordas

elevadas e fundo granuloso estatildeo localizadas nas junccedilotildees mucocutacircneas e

podem ocorrer nas cavidades oral e nasal (Jones et al 2003 Brasil 2010

Laurenti 2010)

38

No Brasil jaacute foram identificadas sete espeacutecies responsaacuteveis pela LTA

sendo seis do subgecircnero Viannia e uma do subgecircnero Leishmania As trecircs

espeacutecies mais encontradas satildeo L braziliensis L guyanensis e L

amazonensis As espeacutecies L lainsoni L naiffi L lindenbergi e L shawi foram

identificadas mais recentemente em estados das regiotildees Norte e Nordeste

(Brasil 2010)

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF

Entre 2001 e 2012 cerca de 3000 casos confirmados de LV e 50 mil de

LTA foram registrados na regiatildeo Centro-Oeste do Brasil (RCO)

(wwwsaudegovbr) onde haacute pelo menos 127 espeacutecies de flebotomiacuteneos

registradas (Almeida et al 2015) Essa regiatildeo eacute coberta em sua maioria pelo

bioma Cerrado onde haacute vasta expansatildeo agropecuaacuteria e ocupaccedilatildeo do solo

devido o crescimento urbano desordenado o que poderia favorecer a

ocorrecircncia das leishmanioses (Galati et al 1996 Carranza-Tamayo et al

2010) O Centro-Oeste se destaca atualmente por estar se tornando um poacutelo

de atraccedilatildeo de populaccedilatildeo das demais regiotildees brasileiras devido agrave expansatildeo

da fronteira agriacutecola (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Um estudo da distribuiccedilatildeo territorial da LTA no Brasil (Negratildeo amp Ferreira

2014) mostrou que o Centro-Oeste corresponde a segunda maior regiatildeo em

coeficiente de detecccedilatildeo da doenccedila de 2001 a 2010 (199 casos por 100000

habitantes) Em Goiaacutes o nuacutemero de municiacutepios com registro da doenccedila

passou de 71 (306) em 1994 para 118 (487) em 1999 o que

corresponde a um acreacutescimo de 67 (Costa 2005) O Estado do Mato Grosso

eacute detentor do terceiro maior coeficiente de detecccedilatildeo ndash 765 casos por 100000

habitantes O Distrito Federal (DF) registra a transmissatildeo da LTA de

ocorrecircncia ciacuteclica desde 1992 e a partir de entatildeo apresenta coeficientes de

detecccedilatildeo bem inferiores ao que eacute considerado como baixo segundo

paracircmetros do Ministeacuterio da Sauacutede (lt25 casos por 100000 habitantes)

39

(Carvalho et al 2010) Com a expansatildeo das fronteiras agriacutecolas nesta regiatildeo

principalmente nos estados de Mato Grosso e Goiaacutes estes Estados passaram

a ser importante rota de fixaccedilatildeo do homem

No DF haacute evidecircncia de transmissatildeo autoacutectone de LTA O nuacutemero de casos

notificados de LTA procedentes do DF nos anos de 2003 2004 e 2005 foi de

31 57 e 26 respectivamente (Sampaio et al 2009) O primeiro caso de LV

autoacutectone no DF ocorreu em 2005 e trecircs oacutebitos foram confirmados ateacute 2009

(Carranza-Tamayo et al 2010) Entre 2007 e 2012 24 casos humanos de LV

autoacutectone foram registrados (SESDF 2012) Em 2013 foram notificadas no

Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo ndash SINANNET 98 pessoas

com suspeita de LV e 47 foram confirmadas sendo dois casos autoacutectones

provenientes de Sobradinho e Lago Norte dos quais um veio a oacutebito

Segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das Leishmanioses no DF para

o ano de 2015 dos 142 casos de LV notificados 39 foram confirmados

destes trecircs autoacutectones e 36 importados Foram atendidos 39 pacientes nas

unidades hospitalares do DF desses quatro evoluiacuteram a oacutebito dos quais um

autoacutectone da RA da Fercal e trecircs importados De janeiro a marccedilo de 2016

foram notificados 28 casos de LV dentre eles um caso autoacutectone proveniente

do Lago Norte aleacutem de sete importados e dois em investigaccedilatildeo para a

definiccedilatildeo do Local Provaacutevel de Infecccedilatildeo (LPI) Dos dez casos confirmados em

2016 foram atendidos dez pacientes nas unidades hospitalares do DF

desses dois evoluiacuteram a oacutebito dos quais um importado do estado de Goiaacutes e

um encontra-se em investigaccedilatildeo para definir o LPI

Em relaccedilatildeo agrave LTA no DF segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das

Leishmanioses no DF para o ano de 2015 foram confirmados 50 casos

destes 35 satildeo residentes do DF 14 de outras Unidades Federadas e um da

Guiana Francesa Dos 50 casos confirmados 35 satildeo importados nove

indeterminados seis em investigaccedilatildeo e nenhum autoacutectone Natildeo foi registrado

nenhum oacutebito relacionado agrave LTA no periacuteodo Dados do Boletim

Epidemioloacutegico de janeiro a marccedilo de 2016 confirmam sete casos da doenccedila

mas nenhum caso autoacutectone foi registrado Aleacutem disso nos uacuteltimos anos tecircm

sido registrados casos de LV em catildees domeacutesticos nas regiotildees norte e sul do

40

DF que vem sofrendo com a urbanizaccedilatildeo descontrolada da sua aacuterea rural

(Carranza-Tamayo et al 2010 Cardoso et al 2015)

17 Vetores

Flebotomiacuteneos (ordem Diptera famiacutelia Psychodidae subfamiacutelia

Phlebotominae) satildeo insetos com ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica ocorrendo sob

as mais diversas condiccedilotildees climaacuteticas e de altitude nos ambientes silvestres

rurais e urbanos Atualmente conhece-se cerca de 1003 espeacutecies das quais

537 estatildeo presentes na regiatildeo Neotropical e Neoaacutertica destas 277 foram

registradas no Brasil representando 28 do total e 53 das que ocorrem na

Regiatildeo Neotropical (Shimabukuro et al 2017) Dezenove espeacutecies de

flebotomiacuteneos estatildeo incriminadas como vetoras de espeacutecies de Leishmania

(Basano amp Camargo 2004 Shimabukuro amp Galati 2010)

Flebotomiacuteneos satildeo insetos pequenos de cor parda (ldquomosquito-palhardquo) e

de corpo cerdoso que normalmente natildeo ultrapassam 05 cm de comprimento

tecircm pernas longas e delgadas e apresentam como caracteriacutestica o voo

saltitante Ao contraacuterio dos outros diacutepteros os flebotomiacuteneos mantecircm a

postura ereta das asas mesmo em repouso Apenas as fecircmeas fazem

repasto sanguiacuteneo por serem adaptadas com o aparelho bucal picador-

sugador (Killick-Kendrick1999 Basano amp Camargo 2004) A hematofagia eacute

indispensaacutevel ao desenvolvimento ovariano (Carrera 1991) Entre os

inuacutemeros nomes populares que variam segundo os paiacuteses e as suas regiotildees

encontram-se mosquito palha asa dura asa branca tatuquira birigui

cangalha cangalhinha ligeirinho peacutela-eacutegua arrupiado (Martins et al 1978)

As formas imaturas podem ser encontradas em seus criadouros em solo

uacutemido mas natildeo molhado e em detritos ricos em mateacuteria orgacircnica em

decomposiccedilatildeo (Brazil amp Brazil 2003)

41

As fecircmeas dos flebotomiacuteneos geralmente apresentam haacutebito noturno

procuram fazer repasto sanguiacuteneo ao entardecer e comeccedilo da noite quando

transmitem o parasito para o novo hospedeiro Jaacute os machos alimentam-se de

frutas seiva de plantas entre outros por breve periacuteodo (Killick-

Kendrick1999) Durante o dia os flebotomiacuteneos procuram abrigo ou no

interior das residecircncias ou em matas em local protegido dos ventos Satildeo

frequentemente encontrados em tocas de outros animais como tatu buracos

em paredes de construccedilotildees ocos de paus ou bambus ou similares Em matas

fechadas devido a pouca luz em seu interior podem ser vistos mesmo

durante o dia inclusive ativos a procura de possiacuteveis animais ou o proacuteprio

homem para ser sugado (Basano amp Camargo 2004)

Killick‐Kendrick (1990) propotildeem quatro criteacuterios que devem ser

observados antes de se incriminar uma espeacutecie como vetora de zoonoses

satildeo eles alimentar-se em humanos e no reservatoacuterio animal manter os

parasitos apoacutes a ingestatildeo exibir parasitos indistinguiacuteveis daqueles isolados

de pacientes e transmitir o parasito pela picada Adicionalmente Ready (2013)

propotildee o criteacuterio relacionado a influecircncia da abundacircncia do vetor na

incidecircncia da leishmaniose comprovada por modelos matemaacuteticos

No Brasil as principais espeacutecies envolvidas na transmissatildeo da LTA satildeo

Bichromomyia flaviscutellata Nyssomyia whitmani Ny umbratilis Ny neivai

Psychodopygus wellcomei e Migonemyia migonei (Barbosa et al 2008 Ready

2013 Diniz et al 2014) Estas espeacutecies de flebotomiacuteneos foram definidas

como potenciais vetores de acordo com o Manual de Vigilacircncia da

Leishmaniose Tegumentar Americana do Ministeacuterio da Sauacutede por atenderem

a alguns dos criteacuterios que atribuem a uma espeacutecie a capacidade vetorial

segundo Killick-Kendrick amp Ward (1981) Killick-Kendrick (1990) e Ready

(2013) Cabe ressaltar que o papel vetorial de cada uma dessas espeacutecies

dependeraacute da espeacutecie de Leishmania presente no intestino da sua

capacidade de se infectar e transmitir o parasito a um novo hospedeiro (Brasil

2010 Pita-Pereira et al 2009 2011)

O principal vetor da LV nas Ameacutericas eacute o flebotomiacuteneo Lutzomyia

longipalpis espeacutecie bem adaptada ao ambiente peridomeacutestico e com ampla

42

distribuiccedilatildeo geograacutefica (Brasil 2010) poreacutem outros flebotomiacuteneos tambeacutem

podem estar participando do ciclo de LV principalmente nas aacutereas onde Lu

longipalpis eacute ausente (de Souza et al 2003 de Carvalho et al 2010)

Lutzomyia cruzi parece participar como vetor nos municiacutepios de Corumbaacute e

LadaacuterioMS na fronteira entre Brasil e Boliacutevia (Dos Santos et al 1998) e

Pintomyia (Pifanomyia) evansi eacute tambeacutem um importante vetor na Colocircmbia

(Travi et al 1990 Oviedo amp Moreno 1995 Montoya-Lerma amp Lane 1996 Travi

et al 1996) e Venezuela (Pifano 1964 Feliciangeli et al 1998)

43

18 Flebotomiacuteneos no DF

Atualmente conhece-se 29 espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF (Quadro1)

QUADRO 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte

Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al

2015 Galati 2015

Espeacutecies

Brumptomyia avellari (Costa Lima 1932)

Brumptomyia pintoi (Costa Lima 1932)

Micropygomyia longipennis (Barretto 1946)

Micropygomyia acanthopharynx (Martins Falcatildeo amp Silva 1962)

Micropygomyia quinquefer (Dyar 1929)

Evandromyia bacula (Martins Falcatildeo amp Silva 1965)

Evandromyia evandroi (Costa Lima amp Antunes 1936)

Evandromyia corumbaensis (Galati Nunes Oshiro amp Rego 1989)

Evandromyia teratodes (Martins Falcatildeo amp Silva 1964)

Evandromyia sallesi (Galvatildeo amp Coutinho 1939)

Evandromyia saulensis (Floch amp Abonnenc 1944)

Evandromyia lenti (Mangabeira 1938)

Pintomyia christenseni (Young amp Duncan 1994)

Pintomyia kuscheli (Le Pont Martinez Torrez-Espejo amp Dujardin 1998)

Pintomyia monticola (Costa Lima 1932)

Pintomyia fischeri (Pinto 1926)

Sciopemyia servulolimai (Damasceno amp Causey 1945)

Continua

44

Sciopemyia sordellii (Shannon amp Del Ponte 1927)

Lutzomyia longipalpis (Lutz amp Neiva 1912)

Lutzomyia ischnacantha Martins Souza amp Falcatildeo 1962

Psathyromyia lutziana (Costa Lima 1932)

Psathyromyia runoides (Fairchild amp Hertig 1953)

Psathyromyia brasiliensis (Costa Lima 1932)

Psathyromyia aragaoi (Costa Lima 1932)

Psathyromyia shannoni (Dyar 1929)

Nyssomyia whitmani (Antunes amp Coutinho 1939)

Nyssomyia neivai (Pinto 1926)

Nyssomyia intermedia (Lutz amp Neiva 1912)

Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira 1942)

No trabalho de Carvalho et al (2010) foram coletados mais de 17 mil

flebotomiacuteneos de 27 espeacutecies em diversos ambientes como nas diferentes

fitofisionomias do Cerrado abrigo de animais e no intradomiciacutelo Os autores

identificaram mais duas espeacutecies consideradas vetoras Ny neivai e Ps davisi

que auxiliaram no mapeamento das aacutereas de risco agrave transmissatildeo de

Leishmania

Ferreira et al (2014) analisaram a ocorrecircncia de flebotomiacuteneos em matas

de galeria do Distrito Federal (DF) nas estaccedilotildees seca e chuvosa Os autores

natildeo capturaram flebotomiacuteneos em novembro (estaccedilatildeo chuvosa) e em maio

(estaccedilatildeo seca) foram capturados 250 exemplares identificados como

Psathyromyia runoides (799) Pintomyia monticola (97) Mi quinquefer

(37) Pa shannoni (3) Bi flaviscutellata (07) Brumptomyia sp (07)

Pi kuscheli (07) Pa lutziana (Costa Lima) (07) e Sciopemyia sordellii

(07) De acordo com os resultados os autores relataram que em matas de

galeria do DF haveria maior ocorrecircncia de flebotomiacuteneos na estaccedilatildeo seca no

Continuaccedilatildeo QUADRO 1

45

niacutevel do solo e em aacutereas preservadas As espeacutecies Pa runoides Pi kuscheli

e Mi quinquefer foram registradas pela primeira vez no DF

Informaccedilotildees relevantes relacionadas agrave riqueza de espeacutecies abundacircncia

ocorrecircncia em distintas eacutepocas do ano somam dados que podem ser usados

para a melhor compreensatildeo da epidemiologia das doenccedilas e conhecimento

do comportamento dos flebotomiacuteneos nas matas de galeria proacuteximas agraves aacutereas

urbanas no DF

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp

Segundo Ashford (1996) o reservatoacuterio de uma infecccedilatildeo eacute definido como

o sistema ecoloacutegico no qual um agente infeccioso sobrevive

persistentemente Para as infecccedilotildees de transmissatildeo vetorial o sistema

compreenderia um ou mais vetores e um ou mais mamiacuteferos hospedeiros

que viveriam sob condiccedilotildees de densidade populacional proximidade espacial

entre outros fatores que permitiriam a transferecircncia continuada do agente

entre eles O autor designa o hospedeiro mamiacutefero responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo em longo prazo do agente infeccioso de hospedeiro reservatoacuterio

e define como zoonose uma doenccedila causada por parasitos cujos hospedeiros

satildeo o homem e outros mamiacuteferos

Entretanto a definiccedilatildeo de reservatoacuterio tem sofrido mudanccedilas significativas

no uacuteltimo seacuteculo fazendo-se necessaacuterio o estudo das zoonoses a partir de

perspectivas mais abrangentes Atualmente aceita-se que um reservatoacuterio

pode ser uma espeacutecie ou um complexo delas responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo

do parasito na natureza Dentro desse sistema-reservatoacuterio cada hospedeiro

desenvolve papeis diferentes na transmissatildeo em um determinado tempo e

espaccedilo isso eacute considera-se que ldquohospedeiros de manutenccedilatildeordquo sejam os

mamiacuteferos que podem ser infectados e mantecircm a infecccedilatildeo e que

ldquohospedeiros amplificadoresrdquo sejam os mamiacuteferos que aleacutem de manterem a

46

infecccedilatildeo desempenham uma caracteriacutestica que favoreccedila a transmissatildeo como

a presenccedila de mais parasitos no sangue e pele por periacuteodos maiores (Roque

amp Jansen 2014) Um estudo de reservatoacuterios silvestres e sinantroacutepicos de

espeacutecies de Leishmania nas Ameacutericas distinguiu as espeacutecies de mamiacuteferos

silvestres e sinantroacutepicos encontrados infectados com Leishmania spp

classificando-os em hospedeiros e potenciais reservatoacuterios (Roque amp

Jansen 2014) de acordo com a capacidade de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo ou de

transmissibilidade dos parasitos aos vetores por meio de xenodiagnoacutestico

positivo ou culturas de pele ou sangue

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de hospedeiros e

reservatoacuterios

Desde o seacuteculo passado a comunidade cientiacutefica tem demonstrado que

diferentes e numerosos mamiacuteferos silvestres podem se tornar infectados com

espeacutecies de Leishmania aleacutem das espeacutecies domeacutesticas e sinantroacutepicas

(animais natildeo domesticados que habitualmente compartilham e aproveitam-se

do ecoacutetopo humano) (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006 Roque amp Jansen

2014) Entretanto o foco deve ser mudado para a identificaccedilatildeo de espeacutecies

que podem servir como fontes de infecccedilatildeo para vetores e amplificaccedilatildeo de

focos enzooacuteticos temporalmente e regionalmente especiacuteficos constituindo

um risco para a transmissatildeo humana Esta mudanccedila depende da melhor

compreensatildeo de sistemas reservatoacuterios e do papel desempenhado por cada

espeacutecie de mamiacutefero na manutenccedilatildeo destes parasitos na natureza (Roque amp

Jansen 2014) Diversas espeacutecies das ordens Didelphimorphia Pilosa

Cingulata Rodentia Carnivora Primata e Chiroptera foram recentemente

classificadas como hospedeiros ou potenciais reservatoacuterios por Roque amp

Jansen (2014)

47

Os catildees domeacutesticos (Canis familiaris) satildeo considerados eficientes

reservatoacuterios de L infantum devido agrave alta susceptibilidade agrave infecccedilatildeo ao

frequentemente elevado parasitismo nesta espeacutecie e por causa da sua iacutentima

relaccedilatildeo com o homem tanto nas zonas urbanas quanto rurais (Dantas-Torres

amp Brandatildeo-Filho 2006) Os catildees como importantes reservatoacuterios domeacutesticos

de L infantum satildeo responsabilizados pela manutenccedilatildeo das endemias nos

grandes centros urbanos (Silva et al 2001 Medeiros et al 2005) Uma

consideraacutevel gama dos catildees infectados por espeacutecies de Leishmania satildeo

assintomaacuteticos seja por um determinado periacuteodo de tempo que pode chegar

a anos ateacute nunca apresentar sinais cliacutenicos ou sintomas da doenccedila Poreacutem

os catildees natildeo satildeo as uacutenicas fontes de infecccedilatildeo em todos os focos de LV no

Brasil (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Tambeacutem existe uma forte

tendecircncia para que os catildees assumam o papel de principais reservatoacuterios

domeacutesticos para L braziliensis o agente etioloacutegico da LTA mais disseminado

(Aguilar et al 1989 Madeira et al 2003 2006 Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho

2006 Castro et al 2007 Quaresma et al 2011) Entre os estudos que relatam

casos de infecccedilatildeo mista por L infantum e L braziliensis encontra-se os

trabalhos de Madeira et al (2006) e Quaresma et al (2011)

Aleacutem dos carniacutevoros descritos por Roque amp Jansen (2014) Cerdocyon

thous popularmente conhecido como cachorro do mato ou guaraxaim jaacute era

suspeito de desempenhar o papel de hospedeiro reservatoacuterio primaacuterio de L

infantum no Norte do Brasil (Lainson et al 1969) Os mesmos autores

descreveram a eficiecircncia dessa espeacutecie como fonte de infecccedilatildeo em 1990

Este caniacutedeo tambeacutem tem sido incriminado como hospedeiro reservatoacuterio

primaacuterio na Venezuela (Lainson et al 1987) Figueiredo et al (2008) relataram

o primeiro caso de L infantum em cachorro-vinagre (Speothos venaticus) no

Brasil no Estado do Mato Grosso Os autores chamam a atenccedilatildeo para os

controles parasitoloacutegicos em animais silvestres mantidos em cativeiros

principalmente quando estes fazem intercacircmbios entre zooloacutegicos brasileiros

Tambeacutem no Mato Grosso Souza et al (2010) relataram a infecccedilatildeo de

caniacutedeos silvestres por L infantum mantidos em cativeiro Foram coletadas

amostras de pele medula oacutessea e linfonodos de seis raposas (Cerdocyon

thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus) para detecccedilatildeo e

48

caracterizaccedilatildeo de Leishmania sp pela teacutecnica de PCR-RFLP Todos os

animais pesquisados apresentaram-se positivos para L infantum O estudo

destaca a importacircncia de monitoramento adequado dos animais e do maior

controle desta enfermidade jaacute que os animais estudados estavam em

ambientes de recreaccedilatildeo puacuteblica

De maneira geral as taxas de infecccedilatildeo em caniacutedeos natildeo domeacutesticos satildeo

baixas mas pode ser alta agraves vezes como observado nas raposas da

Ameacuterica do Sul (Lainson et al 1987) Poreacutem caniacutedeos silvestres

normalmente natildeo vivem perto de habitaccedilotildees humanas e logo eles teriam um

papel secundaacuterio na importacircncia da epidemiologia da LV enzooacutetica (Dantas-

Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Millaacuten et al (2016) encontraram Leishmania

sp em 375 das 32 raposas cinzas (Pseudalopex griseus) capturadas na

Patagocircnia Argentina Os achados dos autores tecircm elevada significacircncia pela

extensatildeo da aacuterea de distribuiccedilatildeo das leishmanioses na Ameacuterica do Sul por

suportar a existecircncia de um ciclo silvestre na ausecircncia de catildees e ainda na

transmissatildeo indicando que ou a distribuiccedilatildeo de flebotomiacuteneos eacute mais ampla

do que se pensava ou que a transmissatildeo de Leishmania por outros

artroacutepodes poderia ser possiacutevel

De acordo com Medeiros et al (2005) marsupiais didelfiacutedeos estatildeo entre

os principais reservatoacuterios rurais da doenccedila Didelphis albiventris foi o primeiro

mamiacutefero silvestre natildeo canino a ser descrito como hospedeiro de L infantum

no Novo Mundo (Sherlock et al 1984) Em aacutereas endecircmicas do Brasil e na

Colocircmbia espeacutecies de Didelphis tecircm frequentemente abrigado L infantum

(Corredor et al 1989 Travi et al 1994 Sherlock 1996 Cabrera et al 2003

Humberg et al 2012 Carreira et al 2012) e a presenccedila de D albiventris

poderia ser um fator associado a ocorrecircncia de infecccedilotildees assintomaacuteticas por

Leishmania na periferia de centros urbanos (Carranza-Tamayo et al 2016)

Outros marsupiais como Didelphis marsupialis Philander opossum e

Metachirus nudicaudatus jaacute foram detectados com Leishmania amazonensis

(Lainson et al 1981) mostrando que esses mamiacuteferos desempenham papel

importante na manutenccedilatildeo de Leishmania na natureza Em Barra de

Guaratiba estado do Rio de Janeiro a distacircncia das casas para as bordas

49

florestais sua altitude e a presenccedila de D marsupialis nos quintais das casas

foram considerados fatores preditores para infecccedilatildeo por L infantum em catildees

(Cabrera et al 2003)

Roedores sinantroacutepicos da famiacutelia Muridae como o rato de telhado (Rattus

rattus) e o camundongo (Mus musculus) compotildeem a lista de espeacutecies de

potenciais reservatoacuterios ou hospedeiros conforme a espeacutecie de Leishmania

encontrada e o local (Roque amp Jansen 2014) Rattus rattus jaacute foi encontrado

naturalmente infectado por L infantum (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

De Lima et al (2002) isolaram Leishmania braziliensis de R rattus na

Venezuela e Brandatildeo-Filho (2003) encontrou L braziliensis por meio de

eletroforese enzimaacutetica multilocus nesse mesmo hospedeiro Esse processo

de domiciliaccedilatildeo facilita a ligaccedilatildeo entre os ambientes peridomeacutestico e o

silvestre (Lainson et al1969) podendo estabelecer novos padrotildees

epidemioloacutegicos de LV particularmente no ciclo urbano de transmissatildeo

(Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

Helhazar et al (2013) reportaram pela primeira vez em Portugal a

infecccedilatildeo natural por L infantum em M musculus e em Rattus norvegicus

(ratazana) sugerindo que estes animais provavelmente desempenham papeacuteis

como potenciais reservatoacuterios no ciclo bioloacutegico do parasito Os autores

relatam que M musculus e R norvegicus satildeo animais que se proliferam muito

raacutepido e tecircm uma expectativa de vida de 12 e 24 meses respectivamente o

que poderia manter o parasito disponiacutevel por pelo menos um ano mesmo

durante a baixa atividade dos flebotomiacuteneos em determinadas estaccedilotildees do

ano Na Venezuela De Lima e colaboradores (2002) isolaram L braziliensis

em Sigmodon hispidus (rato do algodatildeo) aleacutem do R rattus

Mais de 200 espeacutecies de roedores estatildeo distribuiacutedas em haacutebitats semi-

aquaacuteticos terrestres e semi-fossoriais no Brasil (Bonvicino et al 2008) Esta

caracteriacutestica eacute provavelmente a principal razatildeo que explica a sua exposiccedilatildeo

aos diferentes ciclos de transmissatildeo de vaacuterias espeacutecies de Leishmania no

ambiente silvestre (Roque amp Jansen 2014a)

50

No Brasil Paacutedua et al (2011) relataram infecccedilatildeo natural por L braziliensis

no roedor sinantroacutepico M musculus e no roedor silvestre Necromys lasiurus a

partir de anaacutelises moleculares (PCR-RFLP) de medula oacutessea femoral e

fragmentos de pele Freitas et al (2012) no Estado de Mato Grosso uma

regiatildeo endecircmica para leishmaniose cutacircnea relataram infecccedilatildeo natural nas

mesmas espeacutecies e utilizando a mesma metodologia que Paacutedua et al (2011)

mostraram que a presenccedila de Leishmania em roedores sinantroacutepicos pode

ser uma ameaccedila aos humanos devido a cohabitaccedilatildeo de domiciacutelios humanos

nessa aacuterea de estudo

No Brasil existem poucos estudos de infecccedilatildeo natural de Leishmania em

roedores caviomorfos e cerca de 90 espeacutecimes foram analisados (Lainson et

al 1981 Quaresma et al 2011) Estudos experimentais apontaram duas

espeacutecies de caviomorfos como reservatoacuterios potenciais para Leishmania

Thrichomys laurentius infectado por L infantum e L braziliensis (Roque et al

2010) e Proechimys semispinosus infectados com L infantum (Travi et al

2002) Lainson amp Shaw (1968) encontraram o parasito L amazonensis no

roedor Proechimys guyannensis no norte do estado do Paraacute (Lainson amp Shaw

1972) Proechimys cuvieri foi descrito como hospedeiro de Leishmania spp

na Guiana Francesa por Dedet et al (1985)

Um estudo de Brandatildeo-Filho et al (1994) em pequenos mamiacuteferos

provaacuteveis reservatoacuterios de L braziliensis em Amaraji Pernambuco encontrou

amostras de esfregaccedilos hepaacuteticos e esplecircnicos com amastigotas em

Nectomys squamipes N lasiurus e tambeacutem em R rattus Apoacutes quase 10

anos um estudo realizado na mesma localidade de Pernambuco identificou L

braziliensis em R rattus e N lasiurus (Brandatildeo-Filho et al 2003)

Forattini et al (1972 1973) isolaram Leishmania de Akodon arviculoides

Oryzomys nigripes e Oryzomys capito laticeps Telleria et al (1999)

identificaram Leishmania amazonensis em Akodon spp por PCR kDNA

Exames histoloacutegicos de lesotildees nos roedores Oryzomys spp Nectomys

spinosus amoenus e Nectomys rattus revelaram amastigotas compatiacuteveis com

Leishmania (Lainson amp Shaw 1970) Leishmania amazonensis foi isolada de

Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenos

mamiacuteferos por Leishmania em matas de galeria do Distrito

Federal Brasil

Aline Machado Rapello do Nascimento

Brasiacutelia

Agosto de 2017

Orientador Prof Rodrigo Gurgel

Gonccedilalves

Co-orientador Prof Andrey Joseacute de

Andrade

Defesa de doutorado apresentada ao

programa de poacutes-graduaccedilatildeo em

Medicina Tropical da Universidade de

Brasiacutelia para a obtenccedilatildeo do tiacutetulo de

doutora em Medicina Tropical na aacuterea

de concentraccedilatildeo Epidemiologia e

Controle das doenccedilas Infecciosas e

Parasitaacuterias

Ficha catalograacutefica elaborada automaticamente com os dados fornecidos pelo(a) autor(a)

MoMachado Rapello do Nascimento Aline Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenosmamiacuteferos por Leishmania em matas de galeria do DistritoFederal Brasil Aline Machado Rapello do Nascimentoorientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves co-orientador AndreyJoseacute de Andrade -- Brasiacutelia 2017 193 p

Tese (Doutorado - Doutorado em Medicina Tropical) --Universidade de Brasiacutelia 2017

1 Medicina Tropical 2 Epidemiologia e parasitologia3 Leishmaniose 4 Flebotomiacuteneos 5 Pequenos MamiacuteferosSilvestres I Gurgel Gonccedilalves Rodrigo orient II Joseacutede Andrade Andrey co-orient III Tiacutetulo

Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenos

mamiacuteferos por Leishmania spp em matas de galeria do Distrito

Federal Brasil

UNIVERSIDADE DE BRASIacuteLIA

BANCA EXAMINADORA

Dra Magda Clara Vieira da Costa-Ribeiro

Universidade Federal do Paranaacute

Dra Elisa Neves Vianna

Universidade de Brasiacutelia

Dr Ciro Martins Gomes

Universidade de Brasiacutelia

Dr Francisco Anilton Arauacutejo (suplente)

Laboratoacuterio Hertape Sauacutede e Bem Estar Animal SA

Agosto de 2017

ldquoPorque o que acontece aos filhos dos homens isso tambeacutem acontece aos

animais a mesma coisa lhes acontece Como morre um assim morre o outro

Todos tecircm o mesmo focirclego e nenhuma vantagem tecircm homens sobre os

animais Tudo eacute vaidaderdquo

Eclesiastes 319

Dedico este trabalho aos meus pais Ronaldo Rapello e Eliana Rapello meus

maiores mestres e incentivadores e para quem sinto profundo respeito e

agradecimento pelos ensinamentos de vida e amor incondicional

AGRADECIMENTOS

Agrave Deus por me guiar pelos caminhos que Ele traccedilou para minha vida ainda que

alguns inicialmente pareccedilam obscuros progressivamente se revelam

fundamentais para meu crescimento pessoal e profissional

Aos professores do Nuacutecleo de Medicina Tropical especialmente agraves professoras

Maria Regina Fernandes de Oliveira Elisabeth Carmem Duarte Elza Ferreira

Noronha e aos professores Gustavo Adolfo Sierra Romero Cleudson Nery de

Castro Pedro Luiz Tauil Wildo Navegantes de Arauacutejo e Joatildeo Barberino Santos

pela formaccedilatildeo teoacuterica e inspiraccedilatildeo profissional no campo da Epidemiologia

Ao meu orientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves pelo profissionalismo exemplar

pela constante motivaccedilatildeo pela participaccedilatildeo ativa em todas as etapas desse

processo mas tambeacutem pela compreensatildeo empatia paciecircncia e amizade ao

longo da jornada

Ao meu co-orientador Andrey Joseacute Andrade pelo extenso conhecimento

compartilhado pela identificaccedilatildeo de milhares de flebotomiacuteneos pelo incentivo

positivo e participaccedilatildeo em todas as etapas desse processo mas tambeacutem pelos

conselhos pela sinceridade pela paciecircncia e pela parceria do iniacutecio ao fim desse

doutorado

Agrave equipe do Laboratoacuterio Interdisciplinar de Biociecircncias e Faculdade de Medicina

e em especial agrave professora Nadjar Nitz Silva Lociks de Arauacutejo pelo vasto

conhecimento teoacuterico e praacutetico compartilhado pelas palavras de incentivo

fundamentais para o sucesso da etapa molecular mas tambeacutem pela doccedilura e

pela forccedila feminina por compartilhar sabedoria por se tornar um exemplo

profissional e pessoal para mim Agrave colega Thaiacutes Tacircmara Castro Minuzzi-Souza

por compartilhar sua experiecircncia profissional com paciecircncia pelos conselhos e

momentos que fortaleceram a amizade Agraves colegas Tamires Emanuele Vital e

Bruna Caroline Veacuteras de Carvalho pela ajuda na execuccedilatildeo das PCRs pela

paciecircncia pela gentileza e pelo agradaacutevel conviacutevio na etapa laboratorial

Agrave equipe do Laboratoacuterio de Parasitologia especialmente ao professor Marcos

Takasha Obara pelo incentivo e ajuda em vaacuterias etapas de trabalho e pela

amizade Ao colega Douglas Rocha pela ajuda no campo e na triagem

identificaccedilatildeo e fotografia dos flebotomiacuteneos Agrave colega Tauana de Souza Ferreira

por ser gentilmente prestativa em todas as etapas desse trabalho Agrave colega Thaiacutes

Oliveira por compartilhar o tempo e os conhecimentos profissionais pelos

agradaacuteveis momentos juntas pela amizade construiacuteda Agrave colega e teacutecnica

Renata Velocircso Timboacute pela ajuda na execuccedilatildeo de diversas etapas do processo

laboratorial e pela paciecircncia Agrave colega Mariana Neiva pela ajuda na execuccedilatildeo de

diversas etapas do processo laboratorial

Agrave melhor equipe de campo que algueacutem poderia ter Jocircnatas Ferreira Deacutebora

Juliana Rodrigues Martins Jeacutessica Toledo de Almeida Cristiana Santiago Nery

de Souza Agda Regina Melo Silva Thamerson Felipe Lelis dos Santos Saemis

Ferreira de Souza Tacircmela Steacutefany Lopes Silva Renecirc Cunha de Castro Rubens

Geraldo de Souza Jadson Joseacute Gomes da Silva Lana Cristina Evangelista

Ferreira Saacute Hayana Maria Boaventura Costa e ao senhor Barbosa Joseacute Bezerra

Ao meu parceiro Greacutegoire Saint Gal de Pons pela cumplicidade pelo amor pela

paciecircncia por ser um grande ouvinte pelos conselhos pela compreensatildeo nos

momentos de privaccedilatildeo de tempo em funccedilatildeo do curso por cuidar da nossa

famiacutelia

Aos meus filhos Lucca Rapello e Pierre Rapello pela paciecircncia e compreensatildeo

nos momentos de ausecircncia e por serem minhas razotildees de ser melhor

Ao meu irmatildeo Marcio Rapello e cunhada Gabriela Ortiz de Rozas pelos

momentos e palavras de apoio sempre bem-vindos

Agraves minhas avoacutes Annita Rapello (in memorian) e Eulina Machado (in memorian)

que foram para o Senhor ao longo desse doutorado mas que deixaram seus

ensinamentos para sempre na minha vida

Aos meus amigos pessoais que natildeo foram aqui citados mas que sabem o

quanto foram importantes para mim ao longo dessa etapa Vocecircs me fortalecem

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 A Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO 2016

27

Figura 2 Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte Rey 2002ndash CD room (Modificado)

32

Figura 3 Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral Leishmaniases (LV) CL Cutaneous Leishmaniases (LT) Fonte TDR ndash Wellcome Trust

34

Figura 4 Ilustraccedilatildeo das subunidades SSU e LSU intercaladas por espaccediladores de conservaccedilatildeo intermediaacuteria ITS (ITS1 e ITS2 espaccediladores internos transcritos) e ETS (espaccedilador externo transcrito) flanqueados pelo espaccedilador intergenocircmico (IGS) Fonte Vilgalyslab Duke University

63

Figura 5 Matas de Galeria amostradas em Brasiacutelia A Parque Nacional de Brasiacutelia B Fazenda Aacutegua Limpa C Jardim Botacircnico de Brasiacutelia D Reserva Bioloacutegica da Contagem

68

Figura 6 Localizaccedilatildeo geograacutefica das quatro aacutereas de estudo no Distrito Federal A PNB Parque Nacional de Brasiacutelia (PA PB) B REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem (RA RB) C FAL Fazenda Aacutegua Limpa da UNB (BA BB) D JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia (JA JB) Fonte Google Earth 2014

69

Figura 7 Armadilhas utilizadas nas amostragens de flebotomiacuteneos A armadilha do tipo HP B Armadilha do tipo Shannon

70

Figura 8 Armadilhas utilizadas para amostragens de mamiacuteferos A Armadilha tipo Tomahawk localizada no solo B Armadilha tipo Tomahawk com pequeno mamiacutefero capturado C Armadilha tipo Sherman localizada em estrato arboacutereo

72

Figura 9 Roedor marcado por um brinco de identificaccedilatildeo (observar a ponta da pinccedila)

73

Figura10 Base de trabalho de campo 74

Figura 11 Procedimentos de pesagem (A) e exame cliacutenico geral em roedor e marsupial (B)

75

Figura 12 Roedor apoacutes coleta de tecido A seta aponta o local da coleta da ponta de orelha

76

Capiacutetulo 1

Figura 1 Porcentagem de armadilhas positivas para flebotomiacuteneos em quatro matas de galeria no Distrito Federal em maio e setembro de 2014 FAL = Fazenda Aacutegua Limpa REBIO = Reserva Bioloacutegica da Contagem PNB = Parque Nacional de Brasiacutelia JBB = Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

86

Figura 2 A) Genitaacutelia de macho de Brumptomyia brumpti (10x) B) genitaacutelia masculina de Brumptomyia guimaraesi (10x) C) toacuterax do macho de Brumptomyia guimaraesi (10X) (Montados em baacutelsamo de canadaacute)

89

Figura 3 D) Cabeccedila de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (10x) E) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (40x) F) espermateca de Micropygomyia ferreirana (40x) (Montados em baacutelsamo do Canadaacute

90

Figura 4 G) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Evandromyia bourrouli (40x) H) espermateca de Evandromyia bourrouli (40X) I) genitaacutelia masculina de Evandromyia bourrouli (40X)

91

Figura 5 J) Ascoacuteide em flagelocircmeros de Psathyromyia pradobarrientosi (40X) K) Genitaacutelia masculina de Psathyromyia pradobarrientosi (10X) L) porccedilatildeo final do ducto ejaculatoacuterio de Psathyromyia pradobarrientosi (40X)

92

Capiacutetulo 2

Figura 1 Fluxograma explicativo dos meacutetodos utilizados para a obtenccedilatildeo e processamento dos flebotomiacuteneos

102

Figura 2 Amplificaccedilatildeo do gene Cacophany em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-R22 Amostras de flebotomiacuteneos

110

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de SSUrRNA em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-

R28 Amostras de flebotomiacuteneos Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

111

Capiacutetulo 3

Figura 1 Roedores capturados no presente trabalho A Oecomys bicolor B Calomys expulsus C Hylaeamys magacephalus D Rhipidomys macrurus E Nectomys rattus F Necromys lasiurus Fonte A B C D e F - Bonvicino (2008) E ndash Arquivo pessoal

125

Figura 2 Marsupiais capturados no presente trabalho A Didelphis albiventris B Gracilinanus agilis C e D Monodelphis americana Fonte arquivo pessoal

125

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 4 13 1617 20 21 25 82 e 86 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 4 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 48 55 70 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 5 Amplificaccedilatildeo de SSU rRNA em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 02 11 13 16 17 20 25 41 58 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

135

LISTA DE QUADROS E TABELAS

Quadro 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al 2015 Galati 2015

43

Capiacutetulo 1

Tabela 1 Nuacutemeros do cataacutelogo institucional dos voucheres de

espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados no presente estudo

84

Tabela 2 Espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados nas quatro aacutereas de estudo do Distrito Federal em maio e setembro de 2014 Novos registros para o Distrito Federal Novo registro para o cerrado Riqueza total de espeacutecies nas matas de galeria 16 espeacutecies

85

Tabela 3

Lista atualizada de espeacutecies de flebotomiacuteneos no Distrito Federal Brasil Novo registro para o Brasil Riqueza total 35 espeacutecies

87

Capiacutetulo 2

Tabela 1 Identificaccedilatildeo molecular dos ldquopoolsrdquo de flebotomiacuteneos fecircmeas

submetidos aos exames moleculares por aacuterea espeacutecie mecircs de coleta e nuacutemero de indiviacuteduos em cada ldquopoolrdquo

107

Capiacutetulo 3

Tabela 1 Espeacutecies de roedores e marsupiais didelfiacutedeos coletadas

nos meses de maio e setembro de 2014 na FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal Brasil

124

Tabela 2

Distribuiccedilatildeo das espeacutecies de mamiacuteferos capturados nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014

126

Tabela 3 Dados brutos da morfometria corporal sexo e idade das espeacutecies de mamiacuteferos capturadas nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014 As linhas realccediladas em amarelo correspondem aos animais positivos nos testes moleculares

127

Tabela 4

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU de Tripanossomatiacutedeos e ITS1 de Leishmania spp em animais da FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal

133

Tabela 5

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos e ITS-1 de Leishmania spp em animais da FAL PNB e JBB Distrito Federal

136

ABREVIATURAS E SIGLAS

APA Aacutereas de Proteccedilatildeo Ambiental

APPs Aacutereas de Preservaccedilatildeo Permanente

CEUA Comitecirc de Eacutetica de Uso Animal

DF Distrito Federal

DNA Aacutecido Desoxirribonucleacuteico

ELISA Ensaio de Imunoabsorccedilatildeo Enzimaacutetica

ETS Espaccedilador Externo Transcrito

FAL Fazenda Aacutegua Limpa

GDF Governo do Distrito Federal

IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos

Naturais Renovaacuteveis

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatiacutestica

IBRAM Instituto Brasiacutelia Ambiental

ICMBio Instituto Chico Medes de Biodiversidade

IGS Espaccediladores Intergecircnicos

IGS Espaccedilador Intergenocircmico

IM Intramuscular

ITS Internal Transcribed Spacer-

Regiatildeo Espaccediladora Transcrita Interna

ITS-1 Espaccediladores Internos Transcritos 1

ITS-2 Espaccediladores Internos Transcritos 2

JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

KOH Hidroacutexido de Potaacutessio

LC Leishmaniose Cutacircnea

LMC Leishmaniose Muco-cutacircnea

LSU Subunidade Maior

LTA Leishmaniose Tegumentar Americana

LV Leishmaniose Visceral

mgKg Miligramas por quilo

PBS Phosphate-buffered saline - Tampatildeo Fosfato Salino

PCR Polymerase Chain Reaction -Reaccedilatildeo da Polimerase em

Cadeia

PCR-RFLP Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restriccedilatildeo

PNB Parque Nacional de Brasiacutelia

RBC-DF Reserva da Biosfera do Cerrado no DF

RCO Regiatildeo Centro-Oeste

REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia Indireta

RNA Aacutecido Ribonucleacuteico

RNAr RNA ribossocircmico

SINAN-NET Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SSU Subunidade Menor

UC Unidades de Conservaccedilatildeo

UNB Universidade de Brasiacutelia

OMSWHO Organizaccedilatildeo Mundial de SauacutedeWorld Health Organization

OPAS Organizaccedilatildeo Pan-Americana da Sauacutede

CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento de Pessoal de Niacutevel

Superior

dNTPs

Deoxyribonucleotide Triphosphates ndash Desoxirribonucleotiacutedeo

Trifosfato)

Taq Thermus aquaticus

pb pares de bases

FINANCIAMENTO

O estudo foi financiado pela CAPES (processo ndeg127611 edital Parasitologia

Baacutesica) e pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical da

Universidade de Brasiacutelia

Sumaacuterio

1 INTRODUCcedilAtildeO

23

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas 23

12 Definiccedilatildeo 25

13 Epidemiologia 26

14 Agente Etioloacutegico 31

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose 35

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF 38

17 Vetores

40

18 Flebotomiacuteneos no DF 43

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp 45

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de Hospedeiros e Reservatoacuterios

46

111 A questatildeo ambiental do Distrito Federal 52

112 A fragmentaccedilatildeo florestal e as leishmanioses 55

113 Estrateacutegias de controle das leishmanioses 57

114 Diagnoacutestico parasitoloacutegico e imunoloacutegico das leishmanioses 58

115 Diagnoacutestico molecular das leishmanioses 61

116 Diagnoacutestico molecular da infecccedilatildeo por tripanossomatiacutedeos utilizando genes ribossocircmicos

62

2 JUSTIFICATIVA 64

3 OBJETIVOS 66

4 MATERIAL E MEacuteTODOS 67

41 Aacutereas de estudo 67

42 Amostragem de flebotomiacuteneos 70

43 Montagem dissecccedilatildeo e identificaccedilatildeo dos flebotomiacuteneos 71

44 Captura dos pequenos mamiacuteferos 71

45 Contenccedilatildeo e marcaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos 73

46 Coleta de material bioloacutegico 75

5 Resultados 77

51 Capiacutetulo 1 - Lista atualizada de flebotomiacuteneos (Diptera Psychodidae Phlebotominae) do Distrito Federal Brasil

77

RESUMO 78

Introduccedilatildeo 79

Material e Meacutetodos 80

Aacutereas de Estudo 80

Amostragem dos flebotomiacuteneos 81

Anaacutelise estatiacutestica 82

Resultados 82

Aspectos morfoloacutegicos para novos registros

88

Discussatildeo 93

52 Capiacutetulo 2 - Avaliaccedilatildeo de infecccedilatildeo natural por Leishmania spp em flebotomiacuteneos de matas de galeria do Distrito Federal Brasil

98

RESUMO 98

1 Introduccedilatildeo 100

2 Material e Meacutetodos 101

21 Amostragem dissecccedilatildeo e montagem dos flebotomiacuteneos 102

22 Extraccedilatildeo de DNA 103

23 PCR dirigida ao gene Cacophany 103

24 PCR dirigida ao gene SSU rDNA de tripanossomatiacutedeos 104

25 PCR dirigida ao ITS-I do rDNA 105

3 Resultados 106

4 Discussatildeo 111

53 Capiacutetulo 3 Ocorrecircncia de pequenos mamiacuteferos infectados por Leishmania spp em Matas de Galeria do Distrito Federal Brasil

115

RESUMO 115

1 Introduccedilatildeo 116

2 Material e meacutetodos 118

21 Aacuterea de estudo amostragem e identificaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos

118

22 Amostras bioloacutegicas e extraccedilatildeo do DNA 119

23 PCR dirigida ao gene SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos 120

24 PCR dirigida ao ITS- 1 do rRNA 121

25 Aspectos eacuteticos 122

26 Anaacutelise de dados 122

3 Resultados 123

4 Discussatildeo 137

41 Composiccedilatildeo da comunidade de mamiacuteferos no momento das coletas

137

42 Infecccedilatildeo natural por Leishmania spp nos pequenos mamiacuteferos das Matas de Galeria estudadas no Distrito Federal Brasil

141

6 Consideraccedilotildees Finais 148

7 Conclusotildees 151

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 152

9 ANEXOS 190

RESUMO

O conhecimento relacionado agrave transmissatildeo enzooacutetica de espeacutecies de

Leishmania no Distrito Federal ainda eacute escasso e a participaccedilatildeo de

flebotomiacuteneos e mamiacuteferos silvestres no ciclo de transmissatildeo desses

protozoaacuterios eacute objeto do presente estudo As aacutereas estudadas foram as matas

de galeria da Fazenda Aacutegua Limpa da Universidade de Brasiacutelia Reserva

Bioloacutegica da Contagem Parque Nacional de Brasiacutelia e Jardim Botacircnico de

Brasiacutelia em maio e setembro de 2014 O Capiacutetulo 1 traz a atualizaccedilatildeo da lista de

espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF Com esforccedilo de captura de 1280 armadilhas

HP e 16 armadilhas do tipo Shannon foram capturados 1209 flebotomiacuteneos

pertencentes a 16 espeacutecies Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espeacutecie

mais capturada Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia guimaraesi Br

brumpti Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas

pela primeira vez no DF ampliando a distribuiccedilatildeo geograacutefica das mesmas e

elevando para 35 o nuacutemero de espeacutecies registradas nessa unidade da

federaccedilatildeo O Capiacutetulo 2 analisou a infecccedilatildeo natural dos flebotomiacuteneos

capturados por Leishmania DNA foi extraiacutedo de 569 fecircmeas agrupadas em 87

ldquopoolsrdquo A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada agrave

amplificaccedilatildeo do gene cacophony da regiatildeo IVS6 A detecccedilatildeo dos

tripanossomatiacutedeos foi feita pela amplificaccedilatildeo das regiotildees SSU rRNA e ITS-1

Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp entretanto os

resultados do presente estudo natildeo implicam na inexistecircncia de vetores

infectados nestas matas de galeria O Capiacutetulo 3 analisou a ocorrecircncia e infecccedilatildeo

em pequenos mamiacuteferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp nas

mesmas aacutereas dos flebotomiacuteneos e nos mesmos periacuteodos Amostras de tecido

(fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamiacuteferos capturados e utilizadas

para a detecccedilatildeo molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e

PCR com alvo na regiatildeo ITS em 153 amostras Com um total de 5120

armadilhas-noite 172 pequenos mamiacuteferos foram capturados pertencentes agrave

trecircs espeacutecies de marsupiais (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis e

Monodephis americana) e seis espeacutecies de roedores (Rhipidomys macrurus

Oecomys bicolor Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys

rattus e Necromys lasiurus) Vinte amostras (1307) foram positivas

considerando ambos os marcadores moleculares quatro somente para SSU e

quatro somente para ITS As espeacutecies infectadas por Leishmania spp foram

Rhipidomys macrurus Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris Estas espeacutecies

devem participar da transmissatildeo enzooacutetica de Leishmania na REBIO FAL e JBB

sendo este o primeiro relato de mamiacuteferos silvestres infectados por este parasito

nestas duas uacuteltimas aacutereas Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se

que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espeacutecies incriminadas

vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenccedilatildeo da

transmissatildeo enzooacutetica desses tripanossomatiacutedeos

Palavras chaves Transmissatildeo enzooacutetica Leishmania spp roedores

marsupiais Phlebotominae Cerrado

ABSTRACT

Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce

and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis

transmission cycle is the subject of this study All samples were captured in

gallery forests of four areas Aacutegua Limpa Farm Biological Reserve of Contagem

Brasiliarsquos National Park and Botanic Garden of Brasiacutelia on May and September

2014 Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal

District The entire capture effort entailed 1280 HP light traps and 16 Shannon

traps 16 species were identified Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the

most captured species Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia

guimaraesi Br brumpti Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli

were registered for the first time in the Federal District elevating to 35 the number

of reported species at this federation unit Chapter 2 follows up the study of

Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies

DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools Fragments that

corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples

demonstrating the quality of the extracted DNA Trypanosomatids detection was

performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions All samples tested

negative for Leishmania spp Therefore negative results in the present study do

not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and

surroundings Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small

mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of

sandflies and during the same periods Tissue samples (ear tips) were obtained

from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested

PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples The entire

capture effort entailed 5120 night-traps and 172 small mammals from three

marsupials species (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis and Monodephis

americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus Oecomys bicolor

Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys rattus and Necromys

lasiurus) were captured Twenty samples (1307) were positive considering

both molecular markers four samples only for SSU and four sampes only for ITS

Leishmania spp infected species were Rhipidomys macrurus Gracilinanus

agilis and Didelphis albiventris These species might participate in the enzootic

transmition of Leishmania at REBIO FAL and JBB This is the first report of

Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas Considering all

results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species

from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the

maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Key words Enzootic transmission Leishmania spp rodents marsupials

Phlebotominae Brazilian savanna

23

1 Introduccedilatildeo

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) eacute uma doenccedila existente

desde a antiguidade cujos relatos e descriccedilotildees datam do seacutec I dC (Basano

amp Camargo 2004) Altamirano-Enciso et al (2003) relataram trecircs teorias de

origem da doenccedila nas Ameacutericas A primeira de 1890 em que Juliano Moreira

amp Aguiar Pupo propunham uma origem mediterracircnea enfatizando que os

casos observados em pacientes da Bahia (Brasil) doenccedila chamada ldquobotatildeo da

Bahiardquo eram parecidos ao ldquobotatildeo do Orienterdquo Segundo os mesmos autores a

LTA teria sido introduzida pelos feniacutecios ou siacuterios que supostamente

chegaram ao nordeste do Brasil ainda na Antiguidade No entanto tais

viagens jamais foram comprovadas historicamente ou arqueologicamente

A segunda teoria eacute a de origem andina formulada a partir dos

descobrimentos de peccedilas de ceracircmica preacute-colombianas ou ldquohuacos peruanosrdquo

em 1895 e reforccedilada pelos documentos do seacuteculo XVI Contudo a discussatildeo

dos dados histoacutericos dividiu-se em dois grupos uma primeira corrente

representada pelos defensores das chamadas ldquoevidecircnciasrdquo histoacutericas cujos

argumentos se reforccedilam pelos estudos das representaccedilotildees de lesotildees feitas

em objetos de ceracircmica e outro grupo de estudiosos que questionava essa

fonte histoacuterica por ser descrita por cronistas que natildeo eram meacutedicos Atribui-se

a essa discussatildeo grande importacircncia porque se passaram quase 80 anos

desde que Eduardo Rabello (1925) propocircs que as origens da leishmaniose

muco-cutacircnea (LMC) estariam inicialmente focalizadas nos territoacuterios frios

sugerindo as regiotildees da Boliacutevia e do Peru predominando esta teoria na

literatura biomeacutedica

24

Mais recentemente a chamada teoria monofileacutetica para origem das

leishmacircnias foi formulada por Thomas-Soccol et al (1993) que baseando-se

em estudos de DNA mitocondrial de 20 espeacutecies de leishmacircnias do mundo

consideram que os subgecircneros Viannia e Leishmania propostos por Lainson

amp Shaw (1972) tiveram origem comum desde os periacuteodos Cretaacuteceo e

Juraacutessico haacute 120 milhotildees de anos quando os continentes estavam unidos na

Pangeacuteia Contudo a questatildeo do local de origem das leishmacircnias continua

controversa entre as regiotildees Neotropical Paleaacutertica e Africana

Cerqueira no Brasil em 1855 observou a existecircncia da forma cutacircnea

identificando-a clinicamente como ldquobotatildeo de Biskrardquo e Breda em 1895 na

Itaacutelia descreveu a doenccedila em italianos provenientes de Satildeo Paulo

Lindenberg (1909) encontrou ldquoformas de Leishmaniardquo idecircnticas agrave

Leishmania tropica da leishmaniose do Velho Mundo em lesotildees cutacircneas de

indiviacuteduos que trabalhavam nas matas do interior do Estado de Satildeo Paulo o

que confirmou a natureza leishmanioacutetica das lesotildees cutacircneas e nasofariacutengeas

(Basano amp Camargo 2004) Gaspar Vianna redescreveu o parasito como L

braziliensis por consideraacute-lo diferente da L tropica e assim denominou-se o

agente etioloacutegico da uacutelcera de Bauru ferida brava ou nariz de tapir

(Basano amp Camargo 2004)

No Brasil ateacute a deacutecada de 1970 todos os casos de LTA eram atribuiacutedos a

L braziliensis (Basano amp Camargo 2004) entretanto com o progresso das

pesquisas ecoepidemioloacutegicas e com o desenvolvimento das teacutecnicas

moleculares outras espeacutecies foram descritas sendo registradas ateacute o

momento sete espeacutecies causadoras da LTA (Brasil 2010) A leishmaniose

visceral (LV) era confundida no passado com outras doenccedilas endecircmicas e de

apresentaccedilatildeo cliacutenica semelhante como a malaacuteria em humanos (Palmer

1998)

No iniacutecio de 1903 James Homer Wright de Baltimore observou formas de

protozoaacuterios em uacutelcera cutacircnea de uma crianccedila da Armecircnia suspeita de ser

acometida pelo Botatildeo do Oriente e propocircs o nome de Welcozoma tropicum

para o agente causal hoje conhecido como L tropica Em 30 de maio desse

25

ano o inglecircs William Boog Leishman obteve uma bioacutepsia de fiacutegado de um

soldado inglecircs morto pela doenccedila febre de dum-dumou kala-azar na Iacutendia

Dois meses depois em 11 de julho Charles Donovan tambeacutem em bioacutepsia do

baccedilo de outro soldado morto descobriu independentemente o agente

etioloacutegico do calazar que era semelhante ao parasito da tripanossomiacutease em

sua fase intracelular (Altamirano-Enciso et al 2003)

O nome do gecircnero Leishmania foi criado pelo meacutedico inglecircs Ronald Ross

mas o termo Leishmania donovani para o agente da LV foi proposto por

Laveran amp Mesnil em 1903 embora segundo Basano amp Camargo (2004)

Cunningham em 1885 na Iacutendia foi o primeiro a observar o parasito do gecircnero

em casos de LV A partir daquele ano foram descritos outros

tripanossomatiacutedeos em paiacuteses do mar Mediterracircneo e da Aacutesia araacutebica As

duacutevidas de que L donovani e L tropica fossem tripanossomatiacutedeos e natildeo

piroplasmas soacute foram dissipadas quando Rogers amp Nicolle (1904) e

posteriormente Nicolle (1908) e Carlos Chagas (1908) demonstraram as

formas flageladas de ambos os parasitos em meio de aacutegar sangue ldquoin vitrordquo

Sergent et al (1921) reproduziram o rdquobotatildeo do Orienterdquo em hamsters ao

inocularem macerados de Phlebotomus papatasi alimentados em soldados

franceses na Argeacutelia comprovando a associaccedilatildeo entre L tropica e

flebotomiacuteneos No Brasil Henrique Aragatildeo (1922) estudou um surto de LTA

no Rio de Janeiro e associou os casos agrave presenccedila de elevada quantidade de

flebotomiacuteneos infectados por L braziliensis Ao inocular triturados destes

flebotomiacuteneos no focinho de catildees foi observada ulceraccedilatildeo com a presenccedila

de formas amastigotas intracelulares (Altamirano-Enciso et al 2003)

12 Definiccedilatildeo

As leishmanioses satildeo um conjunto de doenccedilas resultantes da infecccedilatildeo

por protozoaacuterios digeneacuteticos (Negratildeo amp Ferreira 2014) pertencentes ao filo

Euglenozoa classe Kinetoplastea ordem Trypanosomatida famiacutelia

26

Trypanosomatidae (Cavalier-Smith 2016) gecircnero Leishmania (Ross 1903)

com caraacuteter zoonoacutetico Esses protozoaacuterios satildeo transmitidos por insetos

vetores conhecidos por flebotomiacuteneos (Laurenti 2010 Ready 2013) O fator

em comum das espeacutecies de Leishmania estaacute na necessidade de passar por

um hospedeiro invertebrado obrigatoriamente um flebotomiacuteneo (ver item 17)

para se reproduzirem e atingirem a forma infectante (Jones et al 2003)

As doenccedilas estatildeo amplamente distribuiacutedas em todo o mundo e dividem-se

em dois grandes grupos as leishmanioses dermotroacutepicas e as leishmanioses

viscerotroacutepicas (Negratildeo amp Ferreira 2009)

13 Epidemiologia

As leishmanioses representam uma das endemias de maior

importacircncia em sauacutede puacuteblica no mundo (Laurenti 2010) As mesmas satildeo

consideradas emergentes em franca expansatildeo associada agrave pobreza e ao

deslocamento da populaccedilatildeo para aacutereas com ciclos de transmissatildeo existentes

sendo incluiacutedas na lista de Doenccedilas Tropicais Negligenciadas (WHO 2014)

As leishmanioses tecircm ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica sendo possiacutevel observar

casos da doenccedila em todos os continentes com exceccedilatildeo da Antaacutertica (Figura

1) (WHO 2009)

27

FIGURA 1 Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A

Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO

2016

Segundo a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (WHO 2016) satildeo estimados

900 mil a 16 milhatildeo de novos casos de leishmanioses destes 02 a 04

milhatildeo de novos casos de LV e 07 a 12 milhotildees de novos casos de LT onde

20 mil a 30 mil mortes ocorrem anualmente no mundo Ainda de acordo com

A

B

28

dados da WHO (2016) mais de 98 paiacuteses e territoacuterios satildeo endecircmicos para as

leishmanioses Destes 72 paiacuteses estatildeo em processo de desenvolvimento

incluindo 13 dos menos desenvolvidos e sua notificaccedilatildeo eacute compulsoacuteria em

apenas 30 deles (Negratildeo amp Ferreira 2014) Nas Ameacutericas as leishmanioses

ocorrem em 21 paiacuteses com expansatildeo geograacutefica associada agrave antropizaccedilatildeo

dos ciclos de transmissatildeo de Leishmania com o desmatamento abertura de

estradas e urbanizaccedilatildeo de aacutereas primitivas que tem favorecido o ciclo

peridomiciliar da doenccedila (Dedet 1999 Negratildeo amp Ferreira 2014)

As formas viscerotroacutepica e dermotroacutepica tecircm despertado especial

interesse devido a sua importacircncia meacutedica e econocircmica em aacutereas endecircmicas

em regiotildees tropicais e subtropicais da Ameacuterica Aacutefrica Iacutendia e paiacuteses nas

margens do Mediterracircneo (Negratildeo amp Ferreira 2009)

A LTA eacute encontrada em todos os paiacuteses das regiotildees tropicais e

subtropicais do mundo (Gontijo amp Carvalho 2003) exceto na Austraacutelia Nova

Zelacircndia e algumas ilhas do Paciacutefico Essa irregularidade na distribuiccedilatildeo

mundial eacute enfatizada pelo fato que os 90 dos casos tem ocorrido em apenas

seis paiacuteses Afeganistatildeo Brasil Iratilde Peru Araacutebia Saudita e Siacuteria (WHO 2008

Negratildeo amp Ferreira 2014) A doenccedila eacute descrita em quase todos os paiacuteses

americanos do sul dos Estados Unidos agrave Patagocircnia ao norte extremo da

Argentina (Millaacuten et al 2016) com exceccedilatildeo do Uruguai e do Chile (Lainson

1981) verificando-se a distribuiccedilatildeo das diversas formas clinico

epidemioloacutegicas com estreita relaccedilatildeo com condiccedilotildees floriacutesticas e fauniacutesticas

(Teodoro 1997) Na Ameacuterica Latina eacute assinalada desde a peniacutensula de

Yucataacuten Meacutexico (Castro 2002) compreendendo as proviacutencias do norte da

Argentina (Salomoacuten 2010 Millaacuten et al 2016) alcanccedilando maior importacircncia no

Brasil aleacutem do Peru

Negratildeo amp Ferreira (2014) consideraram que na Ameacuterica do Sul a LTA

apresenta dois padrotildees epidemioloacutegicos o padratildeo claacutessico constituiacutedo por

surtos epidecircmicos associados agrave derrubada de matas para a construccedilatildeo de

estradas e povoados e o padratildeo associado agraves formas de ocupaccedilatildeo do espaccedilo

em regiotildees de colonizaccedilatildeo antiga

29

A maioria dos casos de leishmanioses nas Ameacutericas eacute proveniente do

Brasil (Alvar et al 2012) onde as mesmas apresentam distribuiccedilatildeo em todas

as regiotildees geograacuteficas desde 2003 com maior incidecircncia observada no

Nordeste brasileiro (WHO 2014) No Brasil estatildeo incluiacutedas na lista de

doenccedilas que compotildeem o Sistema de Informaccedilatildeo de Doenccedilas de Notificaccedilatildeo

Compulsoacuteria (Brasil 2010)

De acordo com WHO (2016) no ano de 2014 foram notificados 3453

casos de LV no Brasil dos quais 82 com confirmaccedilatildeo laboratorial Para a

leishmaniose tegumentar (LT) foram notificados 19402 casos e 89

confirmados por exames De acordo com a mesma fonte 43 da populaccedilatildeo

brasileira estaacute sob o risco de LV (86997054 200362200) e 70 sob o risco

de LT (139396846200362200) Entre os fatores de risco para a ocorrecircncia

das leishmanioses encontra-se a subnutriccedilatildeo com dietas pobres em

proteiacutenas ferro vitamina A e zinco que pode comprometer a imunidade dos

indiviacuteduos aumentando o risco de uma infecccedilatildeo se agravar a precariedade

das condiccedilotildees sanitaacuterias domeacutesticas como a falta de gestatildeo de resiacuteduos e

esgoto a ceacuteu aberto que podem aumentar os locais de criaccedilatildeo e repouso de

flebotomiacuteneos e bem como o seu acesso aos seres humanos a migraccedilatildeo e

a exposiccedilatildeo ocupacional onde as pessoas ao se movimentarem ou se

estabelecerem em aacutereas de florestas ficam mais proacuteximas do habitat de

flebotomiacuteneos mudando o perfil epidemioloacutegico das doenccedilas (WHO 2014)

Negratildeo amp Ferreira (2014) estudaram a dispersatildeo da LT nas Ameacutericas e

relataram que o crescimento migratoacuterio aliado ao processo histoacuterico de

organizaccedilatildeo espacial nas uacuteltimas deacutecadas tem propiciado a proliferaccedilatildeo de

aacutereas de alto risco e infecccedilatildeo por Leishmania em aacutereas urbanas brasileiras

ora associadas a aacutereas verdes e outras como consequecircncia do desequiliacutebrio

ecoloacutegico evidenciada em algumas aacutereas periurbanas ou associadas agraves

aacutereas de desmatamentos Os mesmos autores enfatizaram que dentro dos

limites geograacuteficos da ocorrecircncia da doenccedila sua extensatildeo e severidade

variavam pelo endemismo ou ocorrecircncia esporaacutedica com condiccedilotildees

ecoloacutegicas especiacuteficas em diferentes regiotildees A distribuiccedilatildeo espacial da

doenccedila em territoacuterio brasileiro eacute resultado de diferentes condiccedilotildees geograacuteficas

30

ou ecoloacutegicas potencializadas pelo planejamento governamental inadequado

ou ineficiente em accedilotildees que promovam a conscientizaccedilatildeo visando o controle

prevenccedilatildeo ou detecccedilatildeo precoce da infecccedilatildeo em aacutereas de risco Para os

centros urbanos eacute de grande importacircncia o conhecimento de aacutereas que

podem oferecer risco agrave populaccedilatildeo exposta agraves formas de LTA de ocorrecircncia

ligadas ao ambiente (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Outro aspecto relevante dentro deste contexto de expansatildeo e urbanizaccedilatildeo

das leishmanioses em todo o mundo e principalmente no Brasil eacute a

possibilidade de se adquirir a doenccedila a partir de transfusotildees sanguiacuteneas (Luz

et al 1997 Urias et al 2009) Este fato eacute agravado em funccedilatildeo do diagnoacutestico

soroloacutegico para a LV natildeo estar incluiacutedo ainda na triagem dos doadores do

paiacutes (Laurenti 2010) que se restringe a triagem laboratorial normatizada das

seguintes doenccedilas doenccedila de Chagas siacutefilis hepatite B HIV malaacuteria HTLV

1 e 2 (Anvisa 2004)

Karagiannis-Voules et al (2013) associaram as doenccedilas a fatores soacutecio-

econocircmicos e agrave precipitaccedilatildeo Clima precipitaccedilatildeo temperatura e umidade satildeo

fatores que podem alterar as distribuiccedilotildees e influenciar na sobrevivecircncia e no

tamanho das populaccedilotildees de vetores e de hospedeiros reservatoacuterios

Flutuaccedilotildees na temperatura podem ter um efeito profundo no ciclo de

desenvolvimento de promastigotas de Leishmania em flebotomiacuteneos

permitindo a transmissatildeo do parasito em aacutereas anteriormente natildeo endecircmicas

para as doenccedilas Alteraccedilotildees climaacuteticas que levam agrave seca fome e inundaccedilotildees

podem levar ao deslocamento em massa e a migraccedilatildeo de pessoas para aacutereas

com transmissatildeo de leishmanioses (WHO 2014)

Acredita-se que os nuacutemeros de casos notificados natildeo correspondam a

evoluccedilatildeo da LTA devido agrave demora com que o paciente procura o sistema de

sauacutede e o difiacutecil diagnoacutestico por parte do proacuteprio sistema Mesmo levando-se

em conta as falhas de notificaccedilatildeo compulsoacuteria eacute evidente o crescente nuacutemero

de casos novos e a intensidade que atinge o homem sendo proporcional agraves

alteraccedilotildees ambientais decorrentes de atividades humanas em aacutereas

especiacuteficas na aacuterea de estudo proposta A prevalecircncia das diferentes

leishmanioses no continente americano eacute difiacutecil de ser mensurada devido

31

principalmente a subnotificaccedilotildees diagnoacutesticos incorretos afecccedilotildees

inaparentes variaccedilotildees de resposta do hospedeiro e multiplicidade de agentes

etioloacutegicos envolvidos (Marzochi 1992)

14 Agente Etioloacutegico

As infecccedilotildees em seres humanos e em animais por protozoaacuterios do

gecircnero Leishmania recebem denominaccedilotildees variadas mas podem ser

agrupadas com base em suas caracteriacutesticas comuns De acordo com

Akhoundi et al (2016) satildeo conhecidas 53 espeacutecies de Leishmania

pertencentes a cinco subgecircneros e complexos (Leishmania Viannia

Sauroleishmania complexo L enriettii e Paraleishmania) Desse total 31

espeacutecies parasitam espeacutecies de mamiacuteferos sendo que pelo menos 20 delas

infectam seres humanos Uma vez que as formas amastigotas satildeo

morfologicamente similares (Jubb et al1993 Palmer 1998) a diferenciaccedilatildeo

das espeacutecies que parasitam seres humanos eacute realizada por testes

moleculares indispensaacuteveis para o diagnoacutestico (Zampieri et al 2016)

As espeacutecies de Leishmania tecircm ciclos bioloacutegicos similares (Laurenti

2010) apresentando duas formas principais a amastigota observada dentro

de ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear em tecidos dos hospedeiros

vertebrados e a promastigota encontrada no sistema digestoacuterio de

flebotomiacuteneos fecircmeas (Figura 2) (Rey 2002) Ambos amastigotas e

promastigotas dividem-se repetidamente por divisatildeo binaacuteria (Palmer 1998)

32

FIGURA 2 ndash Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte

Rey 2002ndash CD room (Modificado)

No hospedeiro vertebrado as formas amastigotas encontram-se no

interior de vacuacuteolos parasitoacuteforos em macroacutefagos e ceacutelulas reticuloendoteliais

e medem cerca de 1 a 2 microm de largura por 2 a 4 microm de comprimento (Palmer

1988 Jones et al 2003) Esta forma se multiplica por divisatildeo assexuada ateacute o

rompimento da ceacutelula disseminando-se pela via hematogecircnica e linfaacutetica

para outros tecidos ricos em ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear como

linfonodos fiacutegado baccedilo medula oacutessea placas de Peyer por exemplo

iniciando uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria e proporcionando a atraccedilatildeo de outros

macroacutefagos gerando um ldquociclo viciosordquo (Figura 3) (Palmer 1998 Basano amp

Camargo 2004)

A forma amastigota da Leishmania eacute tipicamente ovoacuteide ou esfeacuterica

natildeo possui flagelo e nem membrana ondulatoacuteria (Palmer 1998) apenas um

rudimento de flagelo que estaacute presente na bolsa flagelar caracterizada como

uma pequena invaginaccedilatildeo da membrana do parasito (Figura 2) (Laurenti

2010) Nas preparaccedilotildees coradas por Romanovsky esses organismos

apresentam um citoplasma azul paacutelido contendo nas proximidades da

33

extremidade posterior um nuacutecleo uacutenico avermelhado com um cariossoma

central que se cora mais profundamente Tangenciando e anterior ao nuacutecleo

encontra-se um corpo em forma de bastonete e com uma cor violeta escuro o

cinetoplasto que conteacutem o corpo parabasal e o blefaroplasto em forma de

pinta (Figura 2) (Jones et al 2003) A forma amastigota conteacutem duas

concentraccedilotildees de DNA no nuacutecleo e em uma mitococircndria modificada o

cinetoplasto (Palmer 1998)

No seu hospedeiro invertebrado ou em culturas os organismos

assumem formas que variam desde a forma amastigota ateacute a forma de pro-

mastigota essa uacuteltima eacute esguia e fusiforme medindo cerca de 14 a 20microm de

comprimento e 15 a 4microm de largura Esta forma tem motilidade por meio de

um flagelo que se origina no blefaroplasto e projeta-se desde o poacutelo anterior

do organismo O cinetoplasto se situa na extremidade anterior do corpo

(Figura 2) (Jones et al 2003)

O flebotomiacuteneo hospedeiro invertebrado ao sugar sangue de um

animal infectado se infecta ao ingerir histioacutecitos da derme ou monoacutecitos do

sangue contendo formas amastigotas de Leishmania em seu citoplasma

(Basano amp Camargo 2004) Em seu intestino meacutedio e glacircndulas salivares as

leishmacircnias sofrem modificaccedilotildees morfoloacutegicas e bioquiacutemicas se congregam

na vaacutelvula cardiacuteaca onde o intestino anterior projeta-se no intestino meacutedio e

se transformam em promastigotas (com flagelo livre) que aderem ao epiteacutelio

do tubo digestoacuterio onde se multiplicam amplamente por divisotildees binaacuterias A

populaccedilatildeo daiacute resultante migra para a parte anterior do tubo digestoacuterio do

inseto diferenciando-se para formas promastigotas infectantes por volta de 3-

4 dias com invasatildeo da faringe do inseto sendo tambeacutem as chamadas formas

de promastigotas metaciacuteclicas encontradas na buco-faringe destes insetos

Quando os parasitos atingem o proacute-ventriacuteculo do inseto causam uma

obstruccedilatildeo no tubo digestoacuterio dificultando a ingestatildeo de sangue e levando a

fecircmea entatildeo faminta a picar muitas vezes pessoas ou animais Tais insetos

ao sugarem sangue (injetando na picada da pele a sua saliva e a saliva

apresentando propriedade anticoagulante homesostaacutetica anesteacutesica e

vasodilatadora) injetam tambeacutem as formas infectantes da Leishmania a qual

34

caindo na circulaccedilatildeo sanguiacutenea deste novo hospedeiro (vertebrado) vai

desenvolver a doenccedila numa das formas cliacutenicas conhecidas (Figura 3)

(Palmer 1998) ou na maioria dos casos levar a infecccedilotildees assintomaacuteticas e

autoresolutivas (Fukutani 2014)

FIGURA 3 ndash Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral

Leishmaniasis (LV) CL Cutaneous Leishmaniasis (LT) Fonte TDR ndash

Wellcome Trust

35

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose

Os protozoaacuterios do gecircnero Leishmania apresentam diferentes

distribuiccedilotildees geograacuteficas e as enfermidades por eles causadas satildeo

relativamente distintas embora possa haver superposiccedilatildeo nos sinais e

cliacutenicos e lesotildees (Jones et al 2003) Cerca de 20 espeacutecies de Leishmania satildeo

patogecircnicas para o ser humano (Laurenti 2010) As leishmanioses se

manifestam de quatro formas diferentes a depender da espeacutecie de

Leishmania envolvida e do estado imunoloacutegico do hospedeiro i) visceral

tambeacutem conhecida como calazar a forma mais grave da doenccedila ii) cutacircnea

a mais comum iii) mucocutacircnea e iv) cutacircnea difusa A LV eacute uma doenccedila

crocircnica sistecircmica que afeta os oacutergatildeos como o fiacutegado e o baccedilo A LTA inclui

as formas cutacircnea cutacircnea difusa e mucocutacircnea caracterizadas pela

formaccedilatildeo de uacutelceras na pele (Brasil 2006 2010)

A LV eacute principalmente causada por L donovani (Jubb et al 1993) Nas

Ameacutericas Central e Sul Leishmania infantum (syn L chagasi) eacute a espeacutecie

envolvida na patogenia (Brasil 2006)

A patogenia das leishmanioses eacute fortemente influenciada por fatores

inerentes ao hospedeiro como suas caracteriacutesticas geneacuteticas e resposta

imunoloacutegica por fatores inerentes ao parasito como a virulecircncia da espeacutecie

de Leishmania infectante e por fatores inerentes ao vetor como sua

capacidade vetorial Como resultado dessa interaccedilatildeo entre as diferentes

espeacutecies do parasito do vetor e dos mecanismos da resposta imunoloacutegica do

hospedeiro vertebrado um espectro de manifestaccedilotildees cliacutenicas

histopatoloacutegicas e imunoloacutegicas eacute observado no homem (Laurenti 2010)

Imunologicamente apoacutes a inoculaccedilatildeo do parasito aqueles animais que seratildeo

resistentes agrave infecccedilatildeo promovem a ativaccedilatildeo de ceacutelulas TCD4+Th1 que

produziratildeo entre outras as citocinas interferon gama fator de necrose

tumoral alfa e interleucinas (IL) 2 e 12 Estas por sua vez ativaratildeo

macroacutefagos que faratildeo a destruiccedilatildeo das formas amastigotas intracelulares

(Pinelli et al 1995) Segundo os mesmos autores as ceacutelulas TCD8 citotoacutexicas

36

tambeacutem podem estar envolvidas na resistecircncia agrave doenccedila Jaacute nos animais que

manifestaratildeo sinais cliacutenicos da doenccedila haveraacute uma supressatildeo das ceacutelulas

TCD4+Th1 e ativaccedilatildeo das ceacutelulas TCD4+Th2 com produccedilatildeo de IL-4 IL-5 IL-

6 IL-10 IL-13 responsaacuteveis pela proliferaccedilatildeo de ceacutelulas B e

consequentemente produccedilatildeo de grande quantidade de anticorpos (Pinelli et al

1994 1999) Anticorpos estes natildeo protetores mas muitas vezes danosos

pois formaratildeo imunocomplexos que poderatildeo ser depositados nas membranas

basais de vaacuterios oacutergatildeos (Slappendel 1988 Martinez-Moreno et al 1995)

Usualmente a LV eacute observada como enfermidade debilitante crocircnica

com periacuteodos de febre perda de peso gradual anemia e leucopenia (Jones et

al 2003) Patologicamente o fiacutegado pode conter numerosos granulomas e eacute

simetricamente aumentado e marrom escuro O baccedilo eacute maior em duas a trecircs

vezes o seu tamanho normal simetricamente aumentado e marrom-escuro a

preto na sua superfiacutecie capsular Os linfonodos estatildeo moderadamente

aumentados e irregulares sem outras mudanccedilas significativas na cavidade

abdominal exceto os rins que podem estar mais escuros que o normal (Jubb

et al 1993) A medula oacutessea eacute uniformemente avermelhada e amolecida

(Jones et al 2003)

As lesotildees microscoacutepicas da LV caracterizam-se por uma infiltraccedilatildeo

maciccedila em vaacuterios sistemas do organismo de enormes macroacutefagos cujo

citoplasma estaacute repleto de leishmacircnias A arquitetura dos linfonodos e do

baccedilo pode estar completamente obscurecida pelas ceacutelulas fagocitaacuterias

(Jones et al 2003)

Os foliacuteculos esplecircnicos satildeo hiperplaacutesicos geralmente com hialinose

folicular Em casos avanccedilados haacute atrofia de nodos e baccedilo e as aacutereas dos

sinus podem estar difusamente ocupadas por grandes macroacutefagos altamente

carregados com organismos intracitoplasmaacuteticos e numerosas ceacutelulas

plasmaacuteticas As lesotildees na medula oacutessea podem ser focais e consistem de

grupos de macroacutefagos epitelioacuteides com organismos fagocitados As

alteraccedilotildees renais satildeo variaacuteveis e podem consistir em manchas intersticiais

com algum envolvimento parasitaacuterio (Jubb et al 1993) e por este motivo

utiliza-se os criteacuterios de classificaccedilatildeo da Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede que

37

inclui glomerulopatias com alteraccedilotildees miacutenimas glomeruloesclerose

segmentar focal glomerulonefrite membranoproliferativa glomerulonefrite

proliferativa mesangial glomerulonefrite membranosa glomerulonefrite

crescecircntica e glomerulonefrite crocircnica (Churg et al 1985)

A LT eacute causada por 18 espeacutecies de Leishmania patogecircnicas para os

seres humanos (Ready 2013) A LT causada por L tropica e L major ocorre

principalmente no sul da Europa e nos paiacuteses do norte da Aacutefrica que

circundam o Mediterracircneo (Jones et al 2003) Nas Ameacutericas assim

denominada LTA a infecccedilatildeo humana ocorre por 11 espeacutecies (Ready 2013)

agrupadas nos subgecircneros Leishmania e Viannia onde as trecircs espeacutecies mais

importantes do subgecircnero Leishmania satildeo L mexicana L amazonensis e L

venezuelensis e do subgecircnero Viannia satildeo L braziliensis L panamensis L

peruviana e L guyanensis

A infecccedilatildeo caracteriza-se por uacutelceras ou noacutedulos uacutenicos ou muacuteltiplos na

pele com lento desenvolvimento e que habitualmente cicatrizam-se

espontaneamente depois de um periacuteodo de meses (Jones et al 2003) As

lesotildees cutacircneas tomam forma de uma uacutelcera crocircnica que se desenvolve de

paacutepulas inflamatoacuterias no local da picada do inseto Linfoacutecitos e ceacutelulas

plasmaacuteticas margeiam a lesatildeo e os neutroacutefilos satildeo atraiacutedos para os debris

Quando a inflamaccedilatildeo se estende agrave borda epitelial a ulceraccedilatildeo ocorre Muitos

parasitos estatildeo no interior de histioacutecitos e alguns estatildeo livres no tecido (Jubb

et al 1993) As lesotildees de longa duraccedilatildeo estatildeo circunscritas por um tecido

conjuntivo fibroblaacutestico o que lhes daacute um aspecto de granuloma tiacutepico (Jones

et al 2003)

A leishmaniose mucocutacircnea uma das formas cliacutenicas da LTA ocorre

no Meacutexico e nas Ameacutericas Central e do Sul A infecccedilatildeo parece com a

cutacircnea mas aleacutem da pele com frequecircncia as uacutelceras crocircnicas com bordas

elevadas e fundo granuloso estatildeo localizadas nas junccedilotildees mucocutacircneas e

podem ocorrer nas cavidades oral e nasal (Jones et al 2003 Brasil 2010

Laurenti 2010)

38

No Brasil jaacute foram identificadas sete espeacutecies responsaacuteveis pela LTA

sendo seis do subgecircnero Viannia e uma do subgecircnero Leishmania As trecircs

espeacutecies mais encontradas satildeo L braziliensis L guyanensis e L

amazonensis As espeacutecies L lainsoni L naiffi L lindenbergi e L shawi foram

identificadas mais recentemente em estados das regiotildees Norte e Nordeste

(Brasil 2010)

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF

Entre 2001 e 2012 cerca de 3000 casos confirmados de LV e 50 mil de

LTA foram registrados na regiatildeo Centro-Oeste do Brasil (RCO)

(wwwsaudegovbr) onde haacute pelo menos 127 espeacutecies de flebotomiacuteneos

registradas (Almeida et al 2015) Essa regiatildeo eacute coberta em sua maioria pelo

bioma Cerrado onde haacute vasta expansatildeo agropecuaacuteria e ocupaccedilatildeo do solo

devido o crescimento urbano desordenado o que poderia favorecer a

ocorrecircncia das leishmanioses (Galati et al 1996 Carranza-Tamayo et al

2010) O Centro-Oeste se destaca atualmente por estar se tornando um poacutelo

de atraccedilatildeo de populaccedilatildeo das demais regiotildees brasileiras devido agrave expansatildeo

da fronteira agriacutecola (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Um estudo da distribuiccedilatildeo territorial da LTA no Brasil (Negratildeo amp Ferreira

2014) mostrou que o Centro-Oeste corresponde a segunda maior regiatildeo em

coeficiente de detecccedilatildeo da doenccedila de 2001 a 2010 (199 casos por 100000

habitantes) Em Goiaacutes o nuacutemero de municiacutepios com registro da doenccedila

passou de 71 (306) em 1994 para 118 (487) em 1999 o que

corresponde a um acreacutescimo de 67 (Costa 2005) O Estado do Mato Grosso

eacute detentor do terceiro maior coeficiente de detecccedilatildeo ndash 765 casos por 100000

habitantes O Distrito Federal (DF) registra a transmissatildeo da LTA de

ocorrecircncia ciacuteclica desde 1992 e a partir de entatildeo apresenta coeficientes de

detecccedilatildeo bem inferiores ao que eacute considerado como baixo segundo

paracircmetros do Ministeacuterio da Sauacutede (lt25 casos por 100000 habitantes)

39

(Carvalho et al 2010) Com a expansatildeo das fronteiras agriacutecolas nesta regiatildeo

principalmente nos estados de Mato Grosso e Goiaacutes estes Estados passaram

a ser importante rota de fixaccedilatildeo do homem

No DF haacute evidecircncia de transmissatildeo autoacutectone de LTA O nuacutemero de casos

notificados de LTA procedentes do DF nos anos de 2003 2004 e 2005 foi de

31 57 e 26 respectivamente (Sampaio et al 2009) O primeiro caso de LV

autoacutectone no DF ocorreu em 2005 e trecircs oacutebitos foram confirmados ateacute 2009

(Carranza-Tamayo et al 2010) Entre 2007 e 2012 24 casos humanos de LV

autoacutectone foram registrados (SESDF 2012) Em 2013 foram notificadas no

Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo ndash SINANNET 98 pessoas

com suspeita de LV e 47 foram confirmadas sendo dois casos autoacutectones

provenientes de Sobradinho e Lago Norte dos quais um veio a oacutebito

Segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das Leishmanioses no DF para

o ano de 2015 dos 142 casos de LV notificados 39 foram confirmados

destes trecircs autoacutectones e 36 importados Foram atendidos 39 pacientes nas

unidades hospitalares do DF desses quatro evoluiacuteram a oacutebito dos quais um

autoacutectone da RA da Fercal e trecircs importados De janeiro a marccedilo de 2016

foram notificados 28 casos de LV dentre eles um caso autoacutectone proveniente

do Lago Norte aleacutem de sete importados e dois em investigaccedilatildeo para a

definiccedilatildeo do Local Provaacutevel de Infecccedilatildeo (LPI) Dos dez casos confirmados em

2016 foram atendidos dez pacientes nas unidades hospitalares do DF

desses dois evoluiacuteram a oacutebito dos quais um importado do estado de Goiaacutes e

um encontra-se em investigaccedilatildeo para definir o LPI

Em relaccedilatildeo agrave LTA no DF segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das

Leishmanioses no DF para o ano de 2015 foram confirmados 50 casos

destes 35 satildeo residentes do DF 14 de outras Unidades Federadas e um da

Guiana Francesa Dos 50 casos confirmados 35 satildeo importados nove

indeterminados seis em investigaccedilatildeo e nenhum autoacutectone Natildeo foi registrado

nenhum oacutebito relacionado agrave LTA no periacuteodo Dados do Boletim

Epidemioloacutegico de janeiro a marccedilo de 2016 confirmam sete casos da doenccedila

mas nenhum caso autoacutectone foi registrado Aleacutem disso nos uacuteltimos anos tecircm

sido registrados casos de LV em catildees domeacutesticos nas regiotildees norte e sul do

40

DF que vem sofrendo com a urbanizaccedilatildeo descontrolada da sua aacuterea rural

(Carranza-Tamayo et al 2010 Cardoso et al 2015)

17 Vetores

Flebotomiacuteneos (ordem Diptera famiacutelia Psychodidae subfamiacutelia

Phlebotominae) satildeo insetos com ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica ocorrendo sob

as mais diversas condiccedilotildees climaacuteticas e de altitude nos ambientes silvestres

rurais e urbanos Atualmente conhece-se cerca de 1003 espeacutecies das quais

537 estatildeo presentes na regiatildeo Neotropical e Neoaacutertica destas 277 foram

registradas no Brasil representando 28 do total e 53 das que ocorrem na

Regiatildeo Neotropical (Shimabukuro et al 2017) Dezenove espeacutecies de

flebotomiacuteneos estatildeo incriminadas como vetoras de espeacutecies de Leishmania

(Basano amp Camargo 2004 Shimabukuro amp Galati 2010)

Flebotomiacuteneos satildeo insetos pequenos de cor parda (ldquomosquito-palhardquo) e

de corpo cerdoso que normalmente natildeo ultrapassam 05 cm de comprimento

tecircm pernas longas e delgadas e apresentam como caracteriacutestica o voo

saltitante Ao contraacuterio dos outros diacutepteros os flebotomiacuteneos mantecircm a

postura ereta das asas mesmo em repouso Apenas as fecircmeas fazem

repasto sanguiacuteneo por serem adaptadas com o aparelho bucal picador-

sugador (Killick-Kendrick1999 Basano amp Camargo 2004) A hematofagia eacute

indispensaacutevel ao desenvolvimento ovariano (Carrera 1991) Entre os

inuacutemeros nomes populares que variam segundo os paiacuteses e as suas regiotildees

encontram-se mosquito palha asa dura asa branca tatuquira birigui

cangalha cangalhinha ligeirinho peacutela-eacutegua arrupiado (Martins et al 1978)

As formas imaturas podem ser encontradas em seus criadouros em solo

uacutemido mas natildeo molhado e em detritos ricos em mateacuteria orgacircnica em

decomposiccedilatildeo (Brazil amp Brazil 2003)

41

As fecircmeas dos flebotomiacuteneos geralmente apresentam haacutebito noturno

procuram fazer repasto sanguiacuteneo ao entardecer e comeccedilo da noite quando

transmitem o parasito para o novo hospedeiro Jaacute os machos alimentam-se de

frutas seiva de plantas entre outros por breve periacuteodo (Killick-

Kendrick1999) Durante o dia os flebotomiacuteneos procuram abrigo ou no

interior das residecircncias ou em matas em local protegido dos ventos Satildeo

frequentemente encontrados em tocas de outros animais como tatu buracos

em paredes de construccedilotildees ocos de paus ou bambus ou similares Em matas

fechadas devido a pouca luz em seu interior podem ser vistos mesmo

durante o dia inclusive ativos a procura de possiacuteveis animais ou o proacuteprio

homem para ser sugado (Basano amp Camargo 2004)

Killick‐Kendrick (1990) propotildeem quatro criteacuterios que devem ser

observados antes de se incriminar uma espeacutecie como vetora de zoonoses

satildeo eles alimentar-se em humanos e no reservatoacuterio animal manter os

parasitos apoacutes a ingestatildeo exibir parasitos indistinguiacuteveis daqueles isolados

de pacientes e transmitir o parasito pela picada Adicionalmente Ready (2013)

propotildee o criteacuterio relacionado a influecircncia da abundacircncia do vetor na

incidecircncia da leishmaniose comprovada por modelos matemaacuteticos

No Brasil as principais espeacutecies envolvidas na transmissatildeo da LTA satildeo

Bichromomyia flaviscutellata Nyssomyia whitmani Ny umbratilis Ny neivai

Psychodopygus wellcomei e Migonemyia migonei (Barbosa et al 2008 Ready

2013 Diniz et al 2014) Estas espeacutecies de flebotomiacuteneos foram definidas

como potenciais vetores de acordo com o Manual de Vigilacircncia da

Leishmaniose Tegumentar Americana do Ministeacuterio da Sauacutede por atenderem

a alguns dos criteacuterios que atribuem a uma espeacutecie a capacidade vetorial

segundo Killick-Kendrick amp Ward (1981) Killick-Kendrick (1990) e Ready

(2013) Cabe ressaltar que o papel vetorial de cada uma dessas espeacutecies

dependeraacute da espeacutecie de Leishmania presente no intestino da sua

capacidade de se infectar e transmitir o parasito a um novo hospedeiro (Brasil

2010 Pita-Pereira et al 2009 2011)

O principal vetor da LV nas Ameacutericas eacute o flebotomiacuteneo Lutzomyia

longipalpis espeacutecie bem adaptada ao ambiente peridomeacutestico e com ampla

42

distribuiccedilatildeo geograacutefica (Brasil 2010) poreacutem outros flebotomiacuteneos tambeacutem

podem estar participando do ciclo de LV principalmente nas aacutereas onde Lu

longipalpis eacute ausente (de Souza et al 2003 de Carvalho et al 2010)

Lutzomyia cruzi parece participar como vetor nos municiacutepios de Corumbaacute e

LadaacuterioMS na fronteira entre Brasil e Boliacutevia (Dos Santos et al 1998) e

Pintomyia (Pifanomyia) evansi eacute tambeacutem um importante vetor na Colocircmbia

(Travi et al 1990 Oviedo amp Moreno 1995 Montoya-Lerma amp Lane 1996 Travi

et al 1996) e Venezuela (Pifano 1964 Feliciangeli et al 1998)

43

18 Flebotomiacuteneos no DF

Atualmente conhece-se 29 espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF (Quadro1)

QUADRO 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte

Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al

2015 Galati 2015

Espeacutecies

Brumptomyia avellari (Costa Lima 1932)

Brumptomyia pintoi (Costa Lima 1932)

Micropygomyia longipennis (Barretto 1946)

Micropygomyia acanthopharynx (Martins Falcatildeo amp Silva 1962)

Micropygomyia quinquefer (Dyar 1929)

Evandromyia bacula (Martins Falcatildeo amp Silva 1965)

Evandromyia evandroi (Costa Lima amp Antunes 1936)

Evandromyia corumbaensis (Galati Nunes Oshiro amp Rego 1989)

Evandromyia teratodes (Martins Falcatildeo amp Silva 1964)

Evandromyia sallesi (Galvatildeo amp Coutinho 1939)

Evandromyia saulensis (Floch amp Abonnenc 1944)

Evandromyia lenti (Mangabeira 1938)

Pintomyia christenseni (Young amp Duncan 1994)

Pintomyia kuscheli (Le Pont Martinez Torrez-Espejo amp Dujardin 1998)

Pintomyia monticola (Costa Lima 1932)

Pintomyia fischeri (Pinto 1926)

Sciopemyia servulolimai (Damasceno amp Causey 1945)

Continua

44

Sciopemyia sordellii (Shannon amp Del Ponte 1927)

Lutzomyia longipalpis (Lutz amp Neiva 1912)

Lutzomyia ischnacantha Martins Souza amp Falcatildeo 1962

Psathyromyia lutziana (Costa Lima 1932)

Psathyromyia runoides (Fairchild amp Hertig 1953)

Psathyromyia brasiliensis (Costa Lima 1932)

Psathyromyia aragaoi (Costa Lima 1932)

Psathyromyia shannoni (Dyar 1929)

Nyssomyia whitmani (Antunes amp Coutinho 1939)

Nyssomyia neivai (Pinto 1926)

Nyssomyia intermedia (Lutz amp Neiva 1912)

Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira 1942)

No trabalho de Carvalho et al (2010) foram coletados mais de 17 mil

flebotomiacuteneos de 27 espeacutecies em diversos ambientes como nas diferentes

fitofisionomias do Cerrado abrigo de animais e no intradomiciacutelo Os autores

identificaram mais duas espeacutecies consideradas vetoras Ny neivai e Ps davisi

que auxiliaram no mapeamento das aacutereas de risco agrave transmissatildeo de

Leishmania

Ferreira et al (2014) analisaram a ocorrecircncia de flebotomiacuteneos em matas

de galeria do Distrito Federal (DF) nas estaccedilotildees seca e chuvosa Os autores

natildeo capturaram flebotomiacuteneos em novembro (estaccedilatildeo chuvosa) e em maio

(estaccedilatildeo seca) foram capturados 250 exemplares identificados como

Psathyromyia runoides (799) Pintomyia monticola (97) Mi quinquefer

(37) Pa shannoni (3) Bi flaviscutellata (07) Brumptomyia sp (07)

Pi kuscheli (07) Pa lutziana (Costa Lima) (07) e Sciopemyia sordellii

(07) De acordo com os resultados os autores relataram que em matas de

galeria do DF haveria maior ocorrecircncia de flebotomiacuteneos na estaccedilatildeo seca no

Continuaccedilatildeo QUADRO 1

45

niacutevel do solo e em aacutereas preservadas As espeacutecies Pa runoides Pi kuscheli

e Mi quinquefer foram registradas pela primeira vez no DF

Informaccedilotildees relevantes relacionadas agrave riqueza de espeacutecies abundacircncia

ocorrecircncia em distintas eacutepocas do ano somam dados que podem ser usados

para a melhor compreensatildeo da epidemiologia das doenccedilas e conhecimento

do comportamento dos flebotomiacuteneos nas matas de galeria proacuteximas agraves aacutereas

urbanas no DF

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp

Segundo Ashford (1996) o reservatoacuterio de uma infecccedilatildeo eacute definido como

o sistema ecoloacutegico no qual um agente infeccioso sobrevive

persistentemente Para as infecccedilotildees de transmissatildeo vetorial o sistema

compreenderia um ou mais vetores e um ou mais mamiacuteferos hospedeiros

que viveriam sob condiccedilotildees de densidade populacional proximidade espacial

entre outros fatores que permitiriam a transferecircncia continuada do agente

entre eles O autor designa o hospedeiro mamiacutefero responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo em longo prazo do agente infeccioso de hospedeiro reservatoacuterio

e define como zoonose uma doenccedila causada por parasitos cujos hospedeiros

satildeo o homem e outros mamiacuteferos

Entretanto a definiccedilatildeo de reservatoacuterio tem sofrido mudanccedilas significativas

no uacuteltimo seacuteculo fazendo-se necessaacuterio o estudo das zoonoses a partir de

perspectivas mais abrangentes Atualmente aceita-se que um reservatoacuterio

pode ser uma espeacutecie ou um complexo delas responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo

do parasito na natureza Dentro desse sistema-reservatoacuterio cada hospedeiro

desenvolve papeis diferentes na transmissatildeo em um determinado tempo e

espaccedilo isso eacute considera-se que ldquohospedeiros de manutenccedilatildeordquo sejam os

mamiacuteferos que podem ser infectados e mantecircm a infecccedilatildeo e que

ldquohospedeiros amplificadoresrdquo sejam os mamiacuteferos que aleacutem de manterem a

46

infecccedilatildeo desempenham uma caracteriacutestica que favoreccedila a transmissatildeo como

a presenccedila de mais parasitos no sangue e pele por periacuteodos maiores (Roque

amp Jansen 2014) Um estudo de reservatoacuterios silvestres e sinantroacutepicos de

espeacutecies de Leishmania nas Ameacutericas distinguiu as espeacutecies de mamiacuteferos

silvestres e sinantroacutepicos encontrados infectados com Leishmania spp

classificando-os em hospedeiros e potenciais reservatoacuterios (Roque amp

Jansen 2014) de acordo com a capacidade de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo ou de

transmissibilidade dos parasitos aos vetores por meio de xenodiagnoacutestico

positivo ou culturas de pele ou sangue

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de hospedeiros e

reservatoacuterios

Desde o seacuteculo passado a comunidade cientiacutefica tem demonstrado que

diferentes e numerosos mamiacuteferos silvestres podem se tornar infectados com

espeacutecies de Leishmania aleacutem das espeacutecies domeacutesticas e sinantroacutepicas

(animais natildeo domesticados que habitualmente compartilham e aproveitam-se

do ecoacutetopo humano) (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006 Roque amp Jansen

2014) Entretanto o foco deve ser mudado para a identificaccedilatildeo de espeacutecies

que podem servir como fontes de infecccedilatildeo para vetores e amplificaccedilatildeo de

focos enzooacuteticos temporalmente e regionalmente especiacuteficos constituindo

um risco para a transmissatildeo humana Esta mudanccedila depende da melhor

compreensatildeo de sistemas reservatoacuterios e do papel desempenhado por cada

espeacutecie de mamiacutefero na manutenccedilatildeo destes parasitos na natureza (Roque amp

Jansen 2014) Diversas espeacutecies das ordens Didelphimorphia Pilosa

Cingulata Rodentia Carnivora Primata e Chiroptera foram recentemente

classificadas como hospedeiros ou potenciais reservatoacuterios por Roque amp

Jansen (2014)

47

Os catildees domeacutesticos (Canis familiaris) satildeo considerados eficientes

reservatoacuterios de L infantum devido agrave alta susceptibilidade agrave infecccedilatildeo ao

frequentemente elevado parasitismo nesta espeacutecie e por causa da sua iacutentima

relaccedilatildeo com o homem tanto nas zonas urbanas quanto rurais (Dantas-Torres

amp Brandatildeo-Filho 2006) Os catildees como importantes reservatoacuterios domeacutesticos

de L infantum satildeo responsabilizados pela manutenccedilatildeo das endemias nos

grandes centros urbanos (Silva et al 2001 Medeiros et al 2005) Uma

consideraacutevel gama dos catildees infectados por espeacutecies de Leishmania satildeo

assintomaacuteticos seja por um determinado periacuteodo de tempo que pode chegar

a anos ateacute nunca apresentar sinais cliacutenicos ou sintomas da doenccedila Poreacutem

os catildees natildeo satildeo as uacutenicas fontes de infecccedilatildeo em todos os focos de LV no

Brasil (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Tambeacutem existe uma forte

tendecircncia para que os catildees assumam o papel de principais reservatoacuterios

domeacutesticos para L braziliensis o agente etioloacutegico da LTA mais disseminado

(Aguilar et al 1989 Madeira et al 2003 2006 Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho

2006 Castro et al 2007 Quaresma et al 2011) Entre os estudos que relatam

casos de infecccedilatildeo mista por L infantum e L braziliensis encontra-se os

trabalhos de Madeira et al (2006) e Quaresma et al (2011)

Aleacutem dos carniacutevoros descritos por Roque amp Jansen (2014) Cerdocyon

thous popularmente conhecido como cachorro do mato ou guaraxaim jaacute era

suspeito de desempenhar o papel de hospedeiro reservatoacuterio primaacuterio de L

infantum no Norte do Brasil (Lainson et al 1969) Os mesmos autores

descreveram a eficiecircncia dessa espeacutecie como fonte de infecccedilatildeo em 1990

Este caniacutedeo tambeacutem tem sido incriminado como hospedeiro reservatoacuterio

primaacuterio na Venezuela (Lainson et al 1987) Figueiredo et al (2008) relataram

o primeiro caso de L infantum em cachorro-vinagre (Speothos venaticus) no

Brasil no Estado do Mato Grosso Os autores chamam a atenccedilatildeo para os

controles parasitoloacutegicos em animais silvestres mantidos em cativeiros

principalmente quando estes fazem intercacircmbios entre zooloacutegicos brasileiros

Tambeacutem no Mato Grosso Souza et al (2010) relataram a infecccedilatildeo de

caniacutedeos silvestres por L infantum mantidos em cativeiro Foram coletadas

amostras de pele medula oacutessea e linfonodos de seis raposas (Cerdocyon

thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus) para detecccedilatildeo e

48

caracterizaccedilatildeo de Leishmania sp pela teacutecnica de PCR-RFLP Todos os

animais pesquisados apresentaram-se positivos para L infantum O estudo

destaca a importacircncia de monitoramento adequado dos animais e do maior

controle desta enfermidade jaacute que os animais estudados estavam em

ambientes de recreaccedilatildeo puacuteblica

De maneira geral as taxas de infecccedilatildeo em caniacutedeos natildeo domeacutesticos satildeo

baixas mas pode ser alta agraves vezes como observado nas raposas da

Ameacuterica do Sul (Lainson et al 1987) Poreacutem caniacutedeos silvestres

normalmente natildeo vivem perto de habitaccedilotildees humanas e logo eles teriam um

papel secundaacuterio na importacircncia da epidemiologia da LV enzooacutetica (Dantas-

Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Millaacuten et al (2016) encontraram Leishmania

sp em 375 das 32 raposas cinzas (Pseudalopex griseus) capturadas na

Patagocircnia Argentina Os achados dos autores tecircm elevada significacircncia pela

extensatildeo da aacuterea de distribuiccedilatildeo das leishmanioses na Ameacuterica do Sul por

suportar a existecircncia de um ciclo silvestre na ausecircncia de catildees e ainda na

transmissatildeo indicando que ou a distribuiccedilatildeo de flebotomiacuteneos eacute mais ampla

do que se pensava ou que a transmissatildeo de Leishmania por outros

artroacutepodes poderia ser possiacutevel

De acordo com Medeiros et al (2005) marsupiais didelfiacutedeos estatildeo entre

os principais reservatoacuterios rurais da doenccedila Didelphis albiventris foi o primeiro

mamiacutefero silvestre natildeo canino a ser descrito como hospedeiro de L infantum

no Novo Mundo (Sherlock et al 1984) Em aacutereas endecircmicas do Brasil e na

Colocircmbia espeacutecies de Didelphis tecircm frequentemente abrigado L infantum

(Corredor et al 1989 Travi et al 1994 Sherlock 1996 Cabrera et al 2003

Humberg et al 2012 Carreira et al 2012) e a presenccedila de D albiventris

poderia ser um fator associado a ocorrecircncia de infecccedilotildees assintomaacuteticas por

Leishmania na periferia de centros urbanos (Carranza-Tamayo et al 2016)

Outros marsupiais como Didelphis marsupialis Philander opossum e

Metachirus nudicaudatus jaacute foram detectados com Leishmania amazonensis

(Lainson et al 1981) mostrando que esses mamiacuteferos desempenham papel

importante na manutenccedilatildeo de Leishmania na natureza Em Barra de

Guaratiba estado do Rio de Janeiro a distacircncia das casas para as bordas

49

florestais sua altitude e a presenccedila de D marsupialis nos quintais das casas

foram considerados fatores preditores para infecccedilatildeo por L infantum em catildees

(Cabrera et al 2003)

Roedores sinantroacutepicos da famiacutelia Muridae como o rato de telhado (Rattus

rattus) e o camundongo (Mus musculus) compotildeem a lista de espeacutecies de

potenciais reservatoacuterios ou hospedeiros conforme a espeacutecie de Leishmania

encontrada e o local (Roque amp Jansen 2014) Rattus rattus jaacute foi encontrado

naturalmente infectado por L infantum (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

De Lima et al (2002) isolaram Leishmania braziliensis de R rattus na

Venezuela e Brandatildeo-Filho (2003) encontrou L braziliensis por meio de

eletroforese enzimaacutetica multilocus nesse mesmo hospedeiro Esse processo

de domiciliaccedilatildeo facilita a ligaccedilatildeo entre os ambientes peridomeacutestico e o

silvestre (Lainson et al1969) podendo estabelecer novos padrotildees

epidemioloacutegicos de LV particularmente no ciclo urbano de transmissatildeo

(Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

Helhazar et al (2013) reportaram pela primeira vez em Portugal a

infecccedilatildeo natural por L infantum em M musculus e em Rattus norvegicus

(ratazana) sugerindo que estes animais provavelmente desempenham papeacuteis

como potenciais reservatoacuterios no ciclo bioloacutegico do parasito Os autores

relatam que M musculus e R norvegicus satildeo animais que se proliferam muito

raacutepido e tecircm uma expectativa de vida de 12 e 24 meses respectivamente o

que poderia manter o parasito disponiacutevel por pelo menos um ano mesmo

durante a baixa atividade dos flebotomiacuteneos em determinadas estaccedilotildees do

ano Na Venezuela De Lima e colaboradores (2002) isolaram L braziliensis

em Sigmodon hispidus (rato do algodatildeo) aleacutem do R rattus

Mais de 200 espeacutecies de roedores estatildeo distribuiacutedas em haacutebitats semi-

aquaacuteticos terrestres e semi-fossoriais no Brasil (Bonvicino et al 2008) Esta

caracteriacutestica eacute provavelmente a principal razatildeo que explica a sua exposiccedilatildeo

aos diferentes ciclos de transmissatildeo de vaacuterias espeacutecies de Leishmania no

ambiente silvestre (Roque amp Jansen 2014a)

50

No Brasil Paacutedua et al (2011) relataram infecccedilatildeo natural por L braziliensis

no roedor sinantroacutepico M musculus e no roedor silvestre Necromys lasiurus a

partir de anaacutelises moleculares (PCR-RFLP) de medula oacutessea femoral e

fragmentos de pele Freitas et al (2012) no Estado de Mato Grosso uma

regiatildeo endecircmica para leishmaniose cutacircnea relataram infecccedilatildeo natural nas

mesmas espeacutecies e utilizando a mesma metodologia que Paacutedua et al (2011)

mostraram que a presenccedila de Leishmania em roedores sinantroacutepicos pode

ser uma ameaccedila aos humanos devido a cohabitaccedilatildeo de domiciacutelios humanos

nessa aacuterea de estudo

No Brasil existem poucos estudos de infecccedilatildeo natural de Leishmania em

roedores caviomorfos e cerca de 90 espeacutecimes foram analisados (Lainson et

al 1981 Quaresma et al 2011) Estudos experimentais apontaram duas

espeacutecies de caviomorfos como reservatoacuterios potenciais para Leishmania

Thrichomys laurentius infectado por L infantum e L braziliensis (Roque et al

2010) e Proechimys semispinosus infectados com L infantum (Travi et al

2002) Lainson amp Shaw (1968) encontraram o parasito L amazonensis no

roedor Proechimys guyannensis no norte do estado do Paraacute (Lainson amp Shaw

1972) Proechimys cuvieri foi descrito como hospedeiro de Leishmania spp

na Guiana Francesa por Dedet et al (1985)

Um estudo de Brandatildeo-Filho et al (1994) em pequenos mamiacuteferos

provaacuteveis reservatoacuterios de L braziliensis em Amaraji Pernambuco encontrou

amostras de esfregaccedilos hepaacuteticos e esplecircnicos com amastigotas em

Nectomys squamipes N lasiurus e tambeacutem em R rattus Apoacutes quase 10

anos um estudo realizado na mesma localidade de Pernambuco identificou L

braziliensis em R rattus e N lasiurus (Brandatildeo-Filho et al 2003)

Forattini et al (1972 1973) isolaram Leishmania de Akodon arviculoides

Oryzomys nigripes e Oryzomys capito laticeps Telleria et al (1999)

identificaram Leishmania amazonensis em Akodon spp por PCR kDNA

Exames histoloacutegicos de lesotildees nos roedores Oryzomys spp Nectomys

spinosus amoenus e Nectomys rattus revelaram amastigotas compatiacuteveis com

Leishmania (Lainson amp Shaw 1970) Leishmania amazonensis foi isolada de

Ficha catalograacutefica elaborada automaticamente com os dados fornecidos pelo(a) autor(a)

MoMachado Rapello do Nascimento Aline Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenosmamiacuteferos por Leishmania em matas de galeria do DistritoFederal Brasil Aline Machado Rapello do Nascimentoorientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves co-orientador AndreyJoseacute de Andrade -- Brasiacutelia 2017 193 p

Tese (Doutorado - Doutorado em Medicina Tropical) --Universidade de Brasiacutelia 2017

1 Medicina Tropical 2 Epidemiologia e parasitologia3 Leishmaniose 4 Flebotomiacuteneos 5 Pequenos MamiacuteferosSilvestres I Gurgel Gonccedilalves Rodrigo orient II Joseacutede Andrade Andrey co-orient III Tiacutetulo

Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenos

mamiacuteferos por Leishmania spp em matas de galeria do Distrito

Federal Brasil

UNIVERSIDADE DE BRASIacuteLIA

BANCA EXAMINADORA

Dra Magda Clara Vieira da Costa-Ribeiro

Universidade Federal do Paranaacute

Dra Elisa Neves Vianna

Universidade de Brasiacutelia

Dr Ciro Martins Gomes

Universidade de Brasiacutelia

Dr Francisco Anilton Arauacutejo (suplente)

Laboratoacuterio Hertape Sauacutede e Bem Estar Animal SA

Agosto de 2017

ldquoPorque o que acontece aos filhos dos homens isso tambeacutem acontece aos

animais a mesma coisa lhes acontece Como morre um assim morre o outro

Todos tecircm o mesmo focirclego e nenhuma vantagem tecircm homens sobre os

animais Tudo eacute vaidaderdquo

Eclesiastes 319

Dedico este trabalho aos meus pais Ronaldo Rapello e Eliana Rapello meus

maiores mestres e incentivadores e para quem sinto profundo respeito e

agradecimento pelos ensinamentos de vida e amor incondicional

AGRADECIMENTOS

Agrave Deus por me guiar pelos caminhos que Ele traccedilou para minha vida ainda que

alguns inicialmente pareccedilam obscuros progressivamente se revelam

fundamentais para meu crescimento pessoal e profissional

Aos professores do Nuacutecleo de Medicina Tropical especialmente agraves professoras

Maria Regina Fernandes de Oliveira Elisabeth Carmem Duarte Elza Ferreira

Noronha e aos professores Gustavo Adolfo Sierra Romero Cleudson Nery de

Castro Pedro Luiz Tauil Wildo Navegantes de Arauacutejo e Joatildeo Barberino Santos

pela formaccedilatildeo teoacuterica e inspiraccedilatildeo profissional no campo da Epidemiologia

Ao meu orientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves pelo profissionalismo exemplar

pela constante motivaccedilatildeo pela participaccedilatildeo ativa em todas as etapas desse

processo mas tambeacutem pela compreensatildeo empatia paciecircncia e amizade ao

longo da jornada

Ao meu co-orientador Andrey Joseacute Andrade pelo extenso conhecimento

compartilhado pela identificaccedilatildeo de milhares de flebotomiacuteneos pelo incentivo

positivo e participaccedilatildeo em todas as etapas desse processo mas tambeacutem pelos

conselhos pela sinceridade pela paciecircncia e pela parceria do iniacutecio ao fim desse

doutorado

Agrave equipe do Laboratoacuterio Interdisciplinar de Biociecircncias e Faculdade de Medicina

e em especial agrave professora Nadjar Nitz Silva Lociks de Arauacutejo pelo vasto

conhecimento teoacuterico e praacutetico compartilhado pelas palavras de incentivo

fundamentais para o sucesso da etapa molecular mas tambeacutem pela doccedilura e

pela forccedila feminina por compartilhar sabedoria por se tornar um exemplo

profissional e pessoal para mim Agrave colega Thaiacutes Tacircmara Castro Minuzzi-Souza

por compartilhar sua experiecircncia profissional com paciecircncia pelos conselhos e

momentos que fortaleceram a amizade Agraves colegas Tamires Emanuele Vital e

Bruna Caroline Veacuteras de Carvalho pela ajuda na execuccedilatildeo das PCRs pela

paciecircncia pela gentileza e pelo agradaacutevel conviacutevio na etapa laboratorial

Agrave equipe do Laboratoacuterio de Parasitologia especialmente ao professor Marcos

Takasha Obara pelo incentivo e ajuda em vaacuterias etapas de trabalho e pela

amizade Ao colega Douglas Rocha pela ajuda no campo e na triagem

identificaccedilatildeo e fotografia dos flebotomiacuteneos Agrave colega Tauana de Souza Ferreira

por ser gentilmente prestativa em todas as etapas desse trabalho Agrave colega Thaiacutes

Oliveira por compartilhar o tempo e os conhecimentos profissionais pelos

agradaacuteveis momentos juntas pela amizade construiacuteda Agrave colega e teacutecnica

Renata Velocircso Timboacute pela ajuda na execuccedilatildeo de diversas etapas do processo

laboratorial e pela paciecircncia Agrave colega Mariana Neiva pela ajuda na execuccedilatildeo de

diversas etapas do processo laboratorial

Agrave melhor equipe de campo que algueacutem poderia ter Jocircnatas Ferreira Deacutebora

Juliana Rodrigues Martins Jeacutessica Toledo de Almeida Cristiana Santiago Nery

de Souza Agda Regina Melo Silva Thamerson Felipe Lelis dos Santos Saemis

Ferreira de Souza Tacircmela Steacutefany Lopes Silva Renecirc Cunha de Castro Rubens

Geraldo de Souza Jadson Joseacute Gomes da Silva Lana Cristina Evangelista

Ferreira Saacute Hayana Maria Boaventura Costa e ao senhor Barbosa Joseacute Bezerra

Ao meu parceiro Greacutegoire Saint Gal de Pons pela cumplicidade pelo amor pela

paciecircncia por ser um grande ouvinte pelos conselhos pela compreensatildeo nos

momentos de privaccedilatildeo de tempo em funccedilatildeo do curso por cuidar da nossa

famiacutelia

Aos meus filhos Lucca Rapello e Pierre Rapello pela paciecircncia e compreensatildeo

nos momentos de ausecircncia e por serem minhas razotildees de ser melhor

Ao meu irmatildeo Marcio Rapello e cunhada Gabriela Ortiz de Rozas pelos

momentos e palavras de apoio sempre bem-vindos

Agraves minhas avoacutes Annita Rapello (in memorian) e Eulina Machado (in memorian)

que foram para o Senhor ao longo desse doutorado mas que deixaram seus

ensinamentos para sempre na minha vida

Aos meus amigos pessoais que natildeo foram aqui citados mas que sabem o

quanto foram importantes para mim ao longo dessa etapa Vocecircs me fortalecem

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 A Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO 2016

27

Figura 2 Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte Rey 2002ndash CD room (Modificado)

32

Figura 3 Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral Leishmaniases (LV) CL Cutaneous Leishmaniases (LT) Fonte TDR ndash Wellcome Trust

34

Figura 4 Ilustraccedilatildeo das subunidades SSU e LSU intercaladas por espaccediladores de conservaccedilatildeo intermediaacuteria ITS (ITS1 e ITS2 espaccediladores internos transcritos) e ETS (espaccedilador externo transcrito) flanqueados pelo espaccedilador intergenocircmico (IGS) Fonte Vilgalyslab Duke University

63

Figura 5 Matas de Galeria amostradas em Brasiacutelia A Parque Nacional de Brasiacutelia B Fazenda Aacutegua Limpa C Jardim Botacircnico de Brasiacutelia D Reserva Bioloacutegica da Contagem

68

Figura 6 Localizaccedilatildeo geograacutefica das quatro aacutereas de estudo no Distrito Federal A PNB Parque Nacional de Brasiacutelia (PA PB) B REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem (RA RB) C FAL Fazenda Aacutegua Limpa da UNB (BA BB) D JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia (JA JB) Fonte Google Earth 2014

69

Figura 7 Armadilhas utilizadas nas amostragens de flebotomiacuteneos A armadilha do tipo HP B Armadilha do tipo Shannon

70

Figura 8 Armadilhas utilizadas para amostragens de mamiacuteferos A Armadilha tipo Tomahawk localizada no solo B Armadilha tipo Tomahawk com pequeno mamiacutefero capturado C Armadilha tipo Sherman localizada em estrato arboacutereo

72

Figura 9 Roedor marcado por um brinco de identificaccedilatildeo (observar a ponta da pinccedila)

73

Figura10 Base de trabalho de campo 74

Figura 11 Procedimentos de pesagem (A) e exame cliacutenico geral em roedor e marsupial (B)

75

Figura 12 Roedor apoacutes coleta de tecido A seta aponta o local da coleta da ponta de orelha

76

Capiacutetulo 1

Figura 1 Porcentagem de armadilhas positivas para flebotomiacuteneos em quatro matas de galeria no Distrito Federal em maio e setembro de 2014 FAL = Fazenda Aacutegua Limpa REBIO = Reserva Bioloacutegica da Contagem PNB = Parque Nacional de Brasiacutelia JBB = Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

86

Figura 2 A) Genitaacutelia de macho de Brumptomyia brumpti (10x) B) genitaacutelia masculina de Brumptomyia guimaraesi (10x) C) toacuterax do macho de Brumptomyia guimaraesi (10X) (Montados em baacutelsamo de canadaacute)

89

Figura 3 D) Cabeccedila de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (10x) E) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (40x) F) espermateca de Micropygomyia ferreirana (40x) (Montados em baacutelsamo do Canadaacute

90

Figura 4 G) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Evandromyia bourrouli (40x) H) espermateca de Evandromyia bourrouli (40X) I) genitaacutelia masculina de Evandromyia bourrouli (40X)

91

Figura 5 J) Ascoacuteide em flagelocircmeros de Psathyromyia pradobarrientosi (40X) K) Genitaacutelia masculina de Psathyromyia pradobarrientosi (10X) L) porccedilatildeo final do ducto ejaculatoacuterio de Psathyromyia pradobarrientosi (40X)

92

Capiacutetulo 2

Figura 1 Fluxograma explicativo dos meacutetodos utilizados para a obtenccedilatildeo e processamento dos flebotomiacuteneos

102

Figura 2 Amplificaccedilatildeo do gene Cacophany em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-R22 Amostras de flebotomiacuteneos

110

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de SSUrRNA em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-

R28 Amostras de flebotomiacuteneos Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

111

Capiacutetulo 3

Figura 1 Roedores capturados no presente trabalho A Oecomys bicolor B Calomys expulsus C Hylaeamys magacephalus D Rhipidomys macrurus E Nectomys rattus F Necromys lasiurus Fonte A B C D e F - Bonvicino (2008) E ndash Arquivo pessoal

125

Figura 2 Marsupiais capturados no presente trabalho A Didelphis albiventris B Gracilinanus agilis C e D Monodelphis americana Fonte arquivo pessoal

125

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 4 13 1617 20 21 25 82 e 86 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 4 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 48 55 70 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 5 Amplificaccedilatildeo de SSU rRNA em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 02 11 13 16 17 20 25 41 58 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

135

LISTA DE QUADROS E TABELAS

Quadro 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al 2015 Galati 2015

43

Capiacutetulo 1

Tabela 1 Nuacutemeros do cataacutelogo institucional dos voucheres de

espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados no presente estudo

84

Tabela 2 Espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados nas quatro aacutereas de estudo do Distrito Federal em maio e setembro de 2014 Novos registros para o Distrito Federal Novo registro para o cerrado Riqueza total de espeacutecies nas matas de galeria 16 espeacutecies

85

Tabela 3

Lista atualizada de espeacutecies de flebotomiacuteneos no Distrito Federal Brasil Novo registro para o Brasil Riqueza total 35 espeacutecies

87

Capiacutetulo 2

Tabela 1 Identificaccedilatildeo molecular dos ldquopoolsrdquo de flebotomiacuteneos fecircmeas

submetidos aos exames moleculares por aacuterea espeacutecie mecircs de coleta e nuacutemero de indiviacuteduos em cada ldquopoolrdquo

107

Capiacutetulo 3

Tabela 1 Espeacutecies de roedores e marsupiais didelfiacutedeos coletadas

nos meses de maio e setembro de 2014 na FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal Brasil

124

Tabela 2

Distribuiccedilatildeo das espeacutecies de mamiacuteferos capturados nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014

126

Tabela 3 Dados brutos da morfometria corporal sexo e idade das espeacutecies de mamiacuteferos capturadas nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014 As linhas realccediladas em amarelo correspondem aos animais positivos nos testes moleculares

127

Tabela 4

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU de Tripanossomatiacutedeos e ITS1 de Leishmania spp em animais da FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal

133

Tabela 5

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos e ITS-1 de Leishmania spp em animais da FAL PNB e JBB Distrito Federal

136

ABREVIATURAS E SIGLAS

APA Aacutereas de Proteccedilatildeo Ambiental

APPs Aacutereas de Preservaccedilatildeo Permanente

CEUA Comitecirc de Eacutetica de Uso Animal

DF Distrito Federal

DNA Aacutecido Desoxirribonucleacuteico

ELISA Ensaio de Imunoabsorccedilatildeo Enzimaacutetica

ETS Espaccedilador Externo Transcrito

FAL Fazenda Aacutegua Limpa

GDF Governo do Distrito Federal

IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos

Naturais Renovaacuteveis

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatiacutestica

IBRAM Instituto Brasiacutelia Ambiental

ICMBio Instituto Chico Medes de Biodiversidade

IGS Espaccediladores Intergecircnicos

IGS Espaccedilador Intergenocircmico

IM Intramuscular

ITS Internal Transcribed Spacer-

Regiatildeo Espaccediladora Transcrita Interna

ITS-1 Espaccediladores Internos Transcritos 1

ITS-2 Espaccediladores Internos Transcritos 2

JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

KOH Hidroacutexido de Potaacutessio

LC Leishmaniose Cutacircnea

LMC Leishmaniose Muco-cutacircnea

LSU Subunidade Maior

LTA Leishmaniose Tegumentar Americana

LV Leishmaniose Visceral

mgKg Miligramas por quilo

PBS Phosphate-buffered saline - Tampatildeo Fosfato Salino

PCR Polymerase Chain Reaction -Reaccedilatildeo da Polimerase em

Cadeia

PCR-RFLP Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restriccedilatildeo

PNB Parque Nacional de Brasiacutelia

RBC-DF Reserva da Biosfera do Cerrado no DF

RCO Regiatildeo Centro-Oeste

REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia Indireta

RNA Aacutecido Ribonucleacuteico

RNAr RNA ribossocircmico

SINAN-NET Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SSU Subunidade Menor

UC Unidades de Conservaccedilatildeo

UNB Universidade de Brasiacutelia

OMSWHO Organizaccedilatildeo Mundial de SauacutedeWorld Health Organization

OPAS Organizaccedilatildeo Pan-Americana da Sauacutede

CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento de Pessoal de Niacutevel

Superior

dNTPs

Deoxyribonucleotide Triphosphates ndash Desoxirribonucleotiacutedeo

Trifosfato)

Taq Thermus aquaticus

pb pares de bases

FINANCIAMENTO

O estudo foi financiado pela CAPES (processo ndeg127611 edital Parasitologia

Baacutesica) e pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical da

Universidade de Brasiacutelia

Sumaacuterio

1 INTRODUCcedilAtildeO

23

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas 23

12 Definiccedilatildeo 25

13 Epidemiologia 26

14 Agente Etioloacutegico 31

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose 35

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF 38

17 Vetores

40

18 Flebotomiacuteneos no DF 43

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp 45

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de Hospedeiros e Reservatoacuterios

46

111 A questatildeo ambiental do Distrito Federal 52

112 A fragmentaccedilatildeo florestal e as leishmanioses 55

113 Estrateacutegias de controle das leishmanioses 57

114 Diagnoacutestico parasitoloacutegico e imunoloacutegico das leishmanioses 58

115 Diagnoacutestico molecular das leishmanioses 61

116 Diagnoacutestico molecular da infecccedilatildeo por tripanossomatiacutedeos utilizando genes ribossocircmicos

62

2 JUSTIFICATIVA 64

3 OBJETIVOS 66

4 MATERIAL E MEacuteTODOS 67

41 Aacutereas de estudo 67

42 Amostragem de flebotomiacuteneos 70

43 Montagem dissecccedilatildeo e identificaccedilatildeo dos flebotomiacuteneos 71

44 Captura dos pequenos mamiacuteferos 71

45 Contenccedilatildeo e marcaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos 73

46 Coleta de material bioloacutegico 75

5 Resultados 77

51 Capiacutetulo 1 - Lista atualizada de flebotomiacuteneos (Diptera Psychodidae Phlebotominae) do Distrito Federal Brasil

77

RESUMO 78

Introduccedilatildeo 79

Material e Meacutetodos 80

Aacutereas de Estudo 80

Amostragem dos flebotomiacuteneos 81

Anaacutelise estatiacutestica 82

Resultados 82

Aspectos morfoloacutegicos para novos registros

88

Discussatildeo 93

52 Capiacutetulo 2 - Avaliaccedilatildeo de infecccedilatildeo natural por Leishmania spp em flebotomiacuteneos de matas de galeria do Distrito Federal Brasil

98

RESUMO 98

1 Introduccedilatildeo 100

2 Material e Meacutetodos 101

21 Amostragem dissecccedilatildeo e montagem dos flebotomiacuteneos 102

22 Extraccedilatildeo de DNA 103

23 PCR dirigida ao gene Cacophany 103

24 PCR dirigida ao gene SSU rDNA de tripanossomatiacutedeos 104

25 PCR dirigida ao ITS-I do rDNA 105

3 Resultados 106

4 Discussatildeo 111

53 Capiacutetulo 3 Ocorrecircncia de pequenos mamiacuteferos infectados por Leishmania spp em Matas de Galeria do Distrito Federal Brasil

115

RESUMO 115

1 Introduccedilatildeo 116

2 Material e meacutetodos 118

21 Aacuterea de estudo amostragem e identificaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos

118

22 Amostras bioloacutegicas e extraccedilatildeo do DNA 119

23 PCR dirigida ao gene SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos 120

24 PCR dirigida ao ITS- 1 do rRNA 121

25 Aspectos eacuteticos 122

26 Anaacutelise de dados 122

3 Resultados 123

4 Discussatildeo 137

41 Composiccedilatildeo da comunidade de mamiacuteferos no momento das coletas

137

42 Infecccedilatildeo natural por Leishmania spp nos pequenos mamiacuteferos das Matas de Galeria estudadas no Distrito Federal Brasil

141

6 Consideraccedilotildees Finais 148

7 Conclusotildees 151

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 152

9 ANEXOS 190

RESUMO

O conhecimento relacionado agrave transmissatildeo enzooacutetica de espeacutecies de

Leishmania no Distrito Federal ainda eacute escasso e a participaccedilatildeo de

flebotomiacuteneos e mamiacuteferos silvestres no ciclo de transmissatildeo desses

protozoaacuterios eacute objeto do presente estudo As aacutereas estudadas foram as matas

de galeria da Fazenda Aacutegua Limpa da Universidade de Brasiacutelia Reserva

Bioloacutegica da Contagem Parque Nacional de Brasiacutelia e Jardim Botacircnico de

Brasiacutelia em maio e setembro de 2014 O Capiacutetulo 1 traz a atualizaccedilatildeo da lista de

espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF Com esforccedilo de captura de 1280 armadilhas

HP e 16 armadilhas do tipo Shannon foram capturados 1209 flebotomiacuteneos

pertencentes a 16 espeacutecies Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espeacutecie

mais capturada Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia guimaraesi Br

brumpti Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas

pela primeira vez no DF ampliando a distribuiccedilatildeo geograacutefica das mesmas e

elevando para 35 o nuacutemero de espeacutecies registradas nessa unidade da

federaccedilatildeo O Capiacutetulo 2 analisou a infecccedilatildeo natural dos flebotomiacuteneos

capturados por Leishmania DNA foi extraiacutedo de 569 fecircmeas agrupadas em 87

ldquopoolsrdquo A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada agrave

amplificaccedilatildeo do gene cacophony da regiatildeo IVS6 A detecccedilatildeo dos

tripanossomatiacutedeos foi feita pela amplificaccedilatildeo das regiotildees SSU rRNA e ITS-1

Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp entretanto os

resultados do presente estudo natildeo implicam na inexistecircncia de vetores

infectados nestas matas de galeria O Capiacutetulo 3 analisou a ocorrecircncia e infecccedilatildeo

em pequenos mamiacuteferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp nas

mesmas aacutereas dos flebotomiacuteneos e nos mesmos periacuteodos Amostras de tecido

(fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamiacuteferos capturados e utilizadas

para a detecccedilatildeo molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e

PCR com alvo na regiatildeo ITS em 153 amostras Com um total de 5120

armadilhas-noite 172 pequenos mamiacuteferos foram capturados pertencentes agrave

trecircs espeacutecies de marsupiais (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis e

Monodephis americana) e seis espeacutecies de roedores (Rhipidomys macrurus

Oecomys bicolor Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys

rattus e Necromys lasiurus) Vinte amostras (1307) foram positivas

considerando ambos os marcadores moleculares quatro somente para SSU e

quatro somente para ITS As espeacutecies infectadas por Leishmania spp foram

Rhipidomys macrurus Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris Estas espeacutecies

devem participar da transmissatildeo enzooacutetica de Leishmania na REBIO FAL e JBB

sendo este o primeiro relato de mamiacuteferos silvestres infectados por este parasito

nestas duas uacuteltimas aacutereas Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se

que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espeacutecies incriminadas

vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenccedilatildeo da

transmissatildeo enzooacutetica desses tripanossomatiacutedeos

Palavras chaves Transmissatildeo enzooacutetica Leishmania spp roedores

marsupiais Phlebotominae Cerrado

ABSTRACT

Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce

and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis

transmission cycle is the subject of this study All samples were captured in

gallery forests of four areas Aacutegua Limpa Farm Biological Reserve of Contagem

Brasiliarsquos National Park and Botanic Garden of Brasiacutelia on May and September

2014 Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal

District The entire capture effort entailed 1280 HP light traps and 16 Shannon

traps 16 species were identified Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the

most captured species Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia

guimaraesi Br brumpti Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli

were registered for the first time in the Federal District elevating to 35 the number

of reported species at this federation unit Chapter 2 follows up the study of

Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies

DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools Fragments that

corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples

demonstrating the quality of the extracted DNA Trypanosomatids detection was

performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions All samples tested

negative for Leishmania spp Therefore negative results in the present study do

not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and

surroundings Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small

mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of

sandflies and during the same periods Tissue samples (ear tips) were obtained

from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested

PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples The entire

capture effort entailed 5120 night-traps and 172 small mammals from three

marsupials species (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis and Monodephis

americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus Oecomys bicolor

Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys rattus and Necromys

lasiurus) were captured Twenty samples (1307) were positive considering

both molecular markers four samples only for SSU and four sampes only for ITS

Leishmania spp infected species were Rhipidomys macrurus Gracilinanus

agilis and Didelphis albiventris These species might participate in the enzootic

transmition of Leishmania at REBIO FAL and JBB This is the first report of

Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas Considering all

results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species

from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the

maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Key words Enzootic transmission Leishmania spp rodents marsupials

Phlebotominae Brazilian savanna

23

1 Introduccedilatildeo

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) eacute uma doenccedila existente

desde a antiguidade cujos relatos e descriccedilotildees datam do seacutec I dC (Basano

amp Camargo 2004) Altamirano-Enciso et al (2003) relataram trecircs teorias de

origem da doenccedila nas Ameacutericas A primeira de 1890 em que Juliano Moreira

amp Aguiar Pupo propunham uma origem mediterracircnea enfatizando que os

casos observados em pacientes da Bahia (Brasil) doenccedila chamada ldquobotatildeo da

Bahiardquo eram parecidos ao ldquobotatildeo do Orienterdquo Segundo os mesmos autores a

LTA teria sido introduzida pelos feniacutecios ou siacuterios que supostamente

chegaram ao nordeste do Brasil ainda na Antiguidade No entanto tais

viagens jamais foram comprovadas historicamente ou arqueologicamente

A segunda teoria eacute a de origem andina formulada a partir dos

descobrimentos de peccedilas de ceracircmica preacute-colombianas ou ldquohuacos peruanosrdquo

em 1895 e reforccedilada pelos documentos do seacuteculo XVI Contudo a discussatildeo

dos dados histoacutericos dividiu-se em dois grupos uma primeira corrente

representada pelos defensores das chamadas ldquoevidecircnciasrdquo histoacutericas cujos

argumentos se reforccedilam pelos estudos das representaccedilotildees de lesotildees feitas

em objetos de ceracircmica e outro grupo de estudiosos que questionava essa

fonte histoacuterica por ser descrita por cronistas que natildeo eram meacutedicos Atribui-se

a essa discussatildeo grande importacircncia porque se passaram quase 80 anos

desde que Eduardo Rabello (1925) propocircs que as origens da leishmaniose

muco-cutacircnea (LMC) estariam inicialmente focalizadas nos territoacuterios frios

sugerindo as regiotildees da Boliacutevia e do Peru predominando esta teoria na

literatura biomeacutedica

24

Mais recentemente a chamada teoria monofileacutetica para origem das

leishmacircnias foi formulada por Thomas-Soccol et al (1993) que baseando-se

em estudos de DNA mitocondrial de 20 espeacutecies de leishmacircnias do mundo

consideram que os subgecircneros Viannia e Leishmania propostos por Lainson

amp Shaw (1972) tiveram origem comum desde os periacuteodos Cretaacuteceo e

Juraacutessico haacute 120 milhotildees de anos quando os continentes estavam unidos na

Pangeacuteia Contudo a questatildeo do local de origem das leishmacircnias continua

controversa entre as regiotildees Neotropical Paleaacutertica e Africana

Cerqueira no Brasil em 1855 observou a existecircncia da forma cutacircnea

identificando-a clinicamente como ldquobotatildeo de Biskrardquo e Breda em 1895 na

Itaacutelia descreveu a doenccedila em italianos provenientes de Satildeo Paulo

Lindenberg (1909) encontrou ldquoformas de Leishmaniardquo idecircnticas agrave

Leishmania tropica da leishmaniose do Velho Mundo em lesotildees cutacircneas de

indiviacuteduos que trabalhavam nas matas do interior do Estado de Satildeo Paulo o

que confirmou a natureza leishmanioacutetica das lesotildees cutacircneas e nasofariacutengeas

(Basano amp Camargo 2004) Gaspar Vianna redescreveu o parasito como L

braziliensis por consideraacute-lo diferente da L tropica e assim denominou-se o

agente etioloacutegico da uacutelcera de Bauru ferida brava ou nariz de tapir

(Basano amp Camargo 2004)

No Brasil ateacute a deacutecada de 1970 todos os casos de LTA eram atribuiacutedos a

L braziliensis (Basano amp Camargo 2004) entretanto com o progresso das

pesquisas ecoepidemioloacutegicas e com o desenvolvimento das teacutecnicas

moleculares outras espeacutecies foram descritas sendo registradas ateacute o

momento sete espeacutecies causadoras da LTA (Brasil 2010) A leishmaniose

visceral (LV) era confundida no passado com outras doenccedilas endecircmicas e de

apresentaccedilatildeo cliacutenica semelhante como a malaacuteria em humanos (Palmer

1998)

No iniacutecio de 1903 James Homer Wright de Baltimore observou formas de

protozoaacuterios em uacutelcera cutacircnea de uma crianccedila da Armecircnia suspeita de ser

acometida pelo Botatildeo do Oriente e propocircs o nome de Welcozoma tropicum

para o agente causal hoje conhecido como L tropica Em 30 de maio desse

25

ano o inglecircs William Boog Leishman obteve uma bioacutepsia de fiacutegado de um

soldado inglecircs morto pela doenccedila febre de dum-dumou kala-azar na Iacutendia

Dois meses depois em 11 de julho Charles Donovan tambeacutem em bioacutepsia do

baccedilo de outro soldado morto descobriu independentemente o agente

etioloacutegico do calazar que era semelhante ao parasito da tripanossomiacutease em

sua fase intracelular (Altamirano-Enciso et al 2003)

O nome do gecircnero Leishmania foi criado pelo meacutedico inglecircs Ronald Ross

mas o termo Leishmania donovani para o agente da LV foi proposto por

Laveran amp Mesnil em 1903 embora segundo Basano amp Camargo (2004)

Cunningham em 1885 na Iacutendia foi o primeiro a observar o parasito do gecircnero

em casos de LV A partir daquele ano foram descritos outros

tripanossomatiacutedeos em paiacuteses do mar Mediterracircneo e da Aacutesia araacutebica As

duacutevidas de que L donovani e L tropica fossem tripanossomatiacutedeos e natildeo

piroplasmas soacute foram dissipadas quando Rogers amp Nicolle (1904) e

posteriormente Nicolle (1908) e Carlos Chagas (1908) demonstraram as

formas flageladas de ambos os parasitos em meio de aacutegar sangue ldquoin vitrordquo

Sergent et al (1921) reproduziram o rdquobotatildeo do Orienterdquo em hamsters ao

inocularem macerados de Phlebotomus papatasi alimentados em soldados

franceses na Argeacutelia comprovando a associaccedilatildeo entre L tropica e

flebotomiacuteneos No Brasil Henrique Aragatildeo (1922) estudou um surto de LTA

no Rio de Janeiro e associou os casos agrave presenccedila de elevada quantidade de

flebotomiacuteneos infectados por L braziliensis Ao inocular triturados destes

flebotomiacuteneos no focinho de catildees foi observada ulceraccedilatildeo com a presenccedila

de formas amastigotas intracelulares (Altamirano-Enciso et al 2003)

12 Definiccedilatildeo

As leishmanioses satildeo um conjunto de doenccedilas resultantes da infecccedilatildeo

por protozoaacuterios digeneacuteticos (Negratildeo amp Ferreira 2014) pertencentes ao filo

Euglenozoa classe Kinetoplastea ordem Trypanosomatida famiacutelia

26

Trypanosomatidae (Cavalier-Smith 2016) gecircnero Leishmania (Ross 1903)

com caraacuteter zoonoacutetico Esses protozoaacuterios satildeo transmitidos por insetos

vetores conhecidos por flebotomiacuteneos (Laurenti 2010 Ready 2013) O fator

em comum das espeacutecies de Leishmania estaacute na necessidade de passar por

um hospedeiro invertebrado obrigatoriamente um flebotomiacuteneo (ver item 17)

para se reproduzirem e atingirem a forma infectante (Jones et al 2003)

As doenccedilas estatildeo amplamente distribuiacutedas em todo o mundo e dividem-se

em dois grandes grupos as leishmanioses dermotroacutepicas e as leishmanioses

viscerotroacutepicas (Negratildeo amp Ferreira 2009)

13 Epidemiologia

As leishmanioses representam uma das endemias de maior

importacircncia em sauacutede puacuteblica no mundo (Laurenti 2010) As mesmas satildeo

consideradas emergentes em franca expansatildeo associada agrave pobreza e ao

deslocamento da populaccedilatildeo para aacutereas com ciclos de transmissatildeo existentes

sendo incluiacutedas na lista de Doenccedilas Tropicais Negligenciadas (WHO 2014)

As leishmanioses tecircm ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica sendo possiacutevel observar

casos da doenccedila em todos os continentes com exceccedilatildeo da Antaacutertica (Figura

1) (WHO 2009)

27

FIGURA 1 Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A

Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO

2016

Segundo a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (WHO 2016) satildeo estimados

900 mil a 16 milhatildeo de novos casos de leishmanioses destes 02 a 04

milhatildeo de novos casos de LV e 07 a 12 milhotildees de novos casos de LT onde

20 mil a 30 mil mortes ocorrem anualmente no mundo Ainda de acordo com

A

B

28

dados da WHO (2016) mais de 98 paiacuteses e territoacuterios satildeo endecircmicos para as

leishmanioses Destes 72 paiacuteses estatildeo em processo de desenvolvimento

incluindo 13 dos menos desenvolvidos e sua notificaccedilatildeo eacute compulsoacuteria em

apenas 30 deles (Negratildeo amp Ferreira 2014) Nas Ameacutericas as leishmanioses

ocorrem em 21 paiacuteses com expansatildeo geograacutefica associada agrave antropizaccedilatildeo

dos ciclos de transmissatildeo de Leishmania com o desmatamento abertura de

estradas e urbanizaccedilatildeo de aacutereas primitivas que tem favorecido o ciclo

peridomiciliar da doenccedila (Dedet 1999 Negratildeo amp Ferreira 2014)

As formas viscerotroacutepica e dermotroacutepica tecircm despertado especial

interesse devido a sua importacircncia meacutedica e econocircmica em aacutereas endecircmicas

em regiotildees tropicais e subtropicais da Ameacuterica Aacutefrica Iacutendia e paiacuteses nas

margens do Mediterracircneo (Negratildeo amp Ferreira 2009)

A LTA eacute encontrada em todos os paiacuteses das regiotildees tropicais e

subtropicais do mundo (Gontijo amp Carvalho 2003) exceto na Austraacutelia Nova

Zelacircndia e algumas ilhas do Paciacutefico Essa irregularidade na distribuiccedilatildeo

mundial eacute enfatizada pelo fato que os 90 dos casos tem ocorrido em apenas

seis paiacuteses Afeganistatildeo Brasil Iratilde Peru Araacutebia Saudita e Siacuteria (WHO 2008

Negratildeo amp Ferreira 2014) A doenccedila eacute descrita em quase todos os paiacuteses

americanos do sul dos Estados Unidos agrave Patagocircnia ao norte extremo da

Argentina (Millaacuten et al 2016) com exceccedilatildeo do Uruguai e do Chile (Lainson

1981) verificando-se a distribuiccedilatildeo das diversas formas clinico

epidemioloacutegicas com estreita relaccedilatildeo com condiccedilotildees floriacutesticas e fauniacutesticas

(Teodoro 1997) Na Ameacuterica Latina eacute assinalada desde a peniacutensula de

Yucataacuten Meacutexico (Castro 2002) compreendendo as proviacutencias do norte da

Argentina (Salomoacuten 2010 Millaacuten et al 2016) alcanccedilando maior importacircncia no

Brasil aleacutem do Peru

Negratildeo amp Ferreira (2014) consideraram que na Ameacuterica do Sul a LTA

apresenta dois padrotildees epidemioloacutegicos o padratildeo claacutessico constituiacutedo por

surtos epidecircmicos associados agrave derrubada de matas para a construccedilatildeo de

estradas e povoados e o padratildeo associado agraves formas de ocupaccedilatildeo do espaccedilo

em regiotildees de colonizaccedilatildeo antiga

29

A maioria dos casos de leishmanioses nas Ameacutericas eacute proveniente do

Brasil (Alvar et al 2012) onde as mesmas apresentam distribuiccedilatildeo em todas

as regiotildees geograacuteficas desde 2003 com maior incidecircncia observada no

Nordeste brasileiro (WHO 2014) No Brasil estatildeo incluiacutedas na lista de

doenccedilas que compotildeem o Sistema de Informaccedilatildeo de Doenccedilas de Notificaccedilatildeo

Compulsoacuteria (Brasil 2010)

De acordo com WHO (2016) no ano de 2014 foram notificados 3453

casos de LV no Brasil dos quais 82 com confirmaccedilatildeo laboratorial Para a

leishmaniose tegumentar (LT) foram notificados 19402 casos e 89

confirmados por exames De acordo com a mesma fonte 43 da populaccedilatildeo

brasileira estaacute sob o risco de LV (86997054 200362200) e 70 sob o risco

de LT (139396846200362200) Entre os fatores de risco para a ocorrecircncia

das leishmanioses encontra-se a subnutriccedilatildeo com dietas pobres em

proteiacutenas ferro vitamina A e zinco que pode comprometer a imunidade dos

indiviacuteduos aumentando o risco de uma infecccedilatildeo se agravar a precariedade

das condiccedilotildees sanitaacuterias domeacutesticas como a falta de gestatildeo de resiacuteduos e

esgoto a ceacuteu aberto que podem aumentar os locais de criaccedilatildeo e repouso de

flebotomiacuteneos e bem como o seu acesso aos seres humanos a migraccedilatildeo e

a exposiccedilatildeo ocupacional onde as pessoas ao se movimentarem ou se

estabelecerem em aacutereas de florestas ficam mais proacuteximas do habitat de

flebotomiacuteneos mudando o perfil epidemioloacutegico das doenccedilas (WHO 2014)

Negratildeo amp Ferreira (2014) estudaram a dispersatildeo da LT nas Ameacutericas e

relataram que o crescimento migratoacuterio aliado ao processo histoacuterico de

organizaccedilatildeo espacial nas uacuteltimas deacutecadas tem propiciado a proliferaccedilatildeo de

aacutereas de alto risco e infecccedilatildeo por Leishmania em aacutereas urbanas brasileiras

ora associadas a aacutereas verdes e outras como consequecircncia do desequiliacutebrio

ecoloacutegico evidenciada em algumas aacutereas periurbanas ou associadas agraves

aacutereas de desmatamentos Os mesmos autores enfatizaram que dentro dos

limites geograacuteficos da ocorrecircncia da doenccedila sua extensatildeo e severidade

variavam pelo endemismo ou ocorrecircncia esporaacutedica com condiccedilotildees

ecoloacutegicas especiacuteficas em diferentes regiotildees A distribuiccedilatildeo espacial da

doenccedila em territoacuterio brasileiro eacute resultado de diferentes condiccedilotildees geograacuteficas

30

ou ecoloacutegicas potencializadas pelo planejamento governamental inadequado

ou ineficiente em accedilotildees que promovam a conscientizaccedilatildeo visando o controle

prevenccedilatildeo ou detecccedilatildeo precoce da infecccedilatildeo em aacutereas de risco Para os

centros urbanos eacute de grande importacircncia o conhecimento de aacutereas que

podem oferecer risco agrave populaccedilatildeo exposta agraves formas de LTA de ocorrecircncia

ligadas ao ambiente (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Outro aspecto relevante dentro deste contexto de expansatildeo e urbanizaccedilatildeo

das leishmanioses em todo o mundo e principalmente no Brasil eacute a

possibilidade de se adquirir a doenccedila a partir de transfusotildees sanguiacuteneas (Luz

et al 1997 Urias et al 2009) Este fato eacute agravado em funccedilatildeo do diagnoacutestico

soroloacutegico para a LV natildeo estar incluiacutedo ainda na triagem dos doadores do

paiacutes (Laurenti 2010) que se restringe a triagem laboratorial normatizada das

seguintes doenccedilas doenccedila de Chagas siacutefilis hepatite B HIV malaacuteria HTLV

1 e 2 (Anvisa 2004)

Karagiannis-Voules et al (2013) associaram as doenccedilas a fatores soacutecio-

econocircmicos e agrave precipitaccedilatildeo Clima precipitaccedilatildeo temperatura e umidade satildeo

fatores que podem alterar as distribuiccedilotildees e influenciar na sobrevivecircncia e no

tamanho das populaccedilotildees de vetores e de hospedeiros reservatoacuterios

Flutuaccedilotildees na temperatura podem ter um efeito profundo no ciclo de

desenvolvimento de promastigotas de Leishmania em flebotomiacuteneos

permitindo a transmissatildeo do parasito em aacutereas anteriormente natildeo endecircmicas

para as doenccedilas Alteraccedilotildees climaacuteticas que levam agrave seca fome e inundaccedilotildees

podem levar ao deslocamento em massa e a migraccedilatildeo de pessoas para aacutereas

com transmissatildeo de leishmanioses (WHO 2014)

Acredita-se que os nuacutemeros de casos notificados natildeo correspondam a

evoluccedilatildeo da LTA devido agrave demora com que o paciente procura o sistema de

sauacutede e o difiacutecil diagnoacutestico por parte do proacuteprio sistema Mesmo levando-se

em conta as falhas de notificaccedilatildeo compulsoacuteria eacute evidente o crescente nuacutemero

de casos novos e a intensidade que atinge o homem sendo proporcional agraves

alteraccedilotildees ambientais decorrentes de atividades humanas em aacutereas

especiacuteficas na aacuterea de estudo proposta A prevalecircncia das diferentes

leishmanioses no continente americano eacute difiacutecil de ser mensurada devido

31

principalmente a subnotificaccedilotildees diagnoacutesticos incorretos afecccedilotildees

inaparentes variaccedilotildees de resposta do hospedeiro e multiplicidade de agentes

etioloacutegicos envolvidos (Marzochi 1992)

14 Agente Etioloacutegico

As infecccedilotildees em seres humanos e em animais por protozoaacuterios do

gecircnero Leishmania recebem denominaccedilotildees variadas mas podem ser

agrupadas com base em suas caracteriacutesticas comuns De acordo com

Akhoundi et al (2016) satildeo conhecidas 53 espeacutecies de Leishmania

pertencentes a cinco subgecircneros e complexos (Leishmania Viannia

Sauroleishmania complexo L enriettii e Paraleishmania) Desse total 31

espeacutecies parasitam espeacutecies de mamiacuteferos sendo que pelo menos 20 delas

infectam seres humanos Uma vez que as formas amastigotas satildeo

morfologicamente similares (Jubb et al1993 Palmer 1998) a diferenciaccedilatildeo

das espeacutecies que parasitam seres humanos eacute realizada por testes

moleculares indispensaacuteveis para o diagnoacutestico (Zampieri et al 2016)

As espeacutecies de Leishmania tecircm ciclos bioloacutegicos similares (Laurenti

2010) apresentando duas formas principais a amastigota observada dentro

de ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear em tecidos dos hospedeiros

vertebrados e a promastigota encontrada no sistema digestoacuterio de

flebotomiacuteneos fecircmeas (Figura 2) (Rey 2002) Ambos amastigotas e

promastigotas dividem-se repetidamente por divisatildeo binaacuteria (Palmer 1998)

32

FIGURA 2 ndash Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte

Rey 2002ndash CD room (Modificado)

No hospedeiro vertebrado as formas amastigotas encontram-se no

interior de vacuacuteolos parasitoacuteforos em macroacutefagos e ceacutelulas reticuloendoteliais

e medem cerca de 1 a 2 microm de largura por 2 a 4 microm de comprimento (Palmer

1988 Jones et al 2003) Esta forma se multiplica por divisatildeo assexuada ateacute o

rompimento da ceacutelula disseminando-se pela via hematogecircnica e linfaacutetica

para outros tecidos ricos em ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear como

linfonodos fiacutegado baccedilo medula oacutessea placas de Peyer por exemplo

iniciando uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria e proporcionando a atraccedilatildeo de outros

macroacutefagos gerando um ldquociclo viciosordquo (Figura 3) (Palmer 1998 Basano amp

Camargo 2004)

A forma amastigota da Leishmania eacute tipicamente ovoacuteide ou esfeacuterica

natildeo possui flagelo e nem membrana ondulatoacuteria (Palmer 1998) apenas um

rudimento de flagelo que estaacute presente na bolsa flagelar caracterizada como

uma pequena invaginaccedilatildeo da membrana do parasito (Figura 2) (Laurenti

2010) Nas preparaccedilotildees coradas por Romanovsky esses organismos

apresentam um citoplasma azul paacutelido contendo nas proximidades da

33

extremidade posterior um nuacutecleo uacutenico avermelhado com um cariossoma

central que se cora mais profundamente Tangenciando e anterior ao nuacutecleo

encontra-se um corpo em forma de bastonete e com uma cor violeta escuro o

cinetoplasto que conteacutem o corpo parabasal e o blefaroplasto em forma de

pinta (Figura 2) (Jones et al 2003) A forma amastigota conteacutem duas

concentraccedilotildees de DNA no nuacutecleo e em uma mitococircndria modificada o

cinetoplasto (Palmer 1998)

No seu hospedeiro invertebrado ou em culturas os organismos

assumem formas que variam desde a forma amastigota ateacute a forma de pro-

mastigota essa uacuteltima eacute esguia e fusiforme medindo cerca de 14 a 20microm de

comprimento e 15 a 4microm de largura Esta forma tem motilidade por meio de

um flagelo que se origina no blefaroplasto e projeta-se desde o poacutelo anterior

do organismo O cinetoplasto se situa na extremidade anterior do corpo

(Figura 2) (Jones et al 2003)

O flebotomiacuteneo hospedeiro invertebrado ao sugar sangue de um

animal infectado se infecta ao ingerir histioacutecitos da derme ou monoacutecitos do

sangue contendo formas amastigotas de Leishmania em seu citoplasma

(Basano amp Camargo 2004) Em seu intestino meacutedio e glacircndulas salivares as

leishmacircnias sofrem modificaccedilotildees morfoloacutegicas e bioquiacutemicas se congregam

na vaacutelvula cardiacuteaca onde o intestino anterior projeta-se no intestino meacutedio e

se transformam em promastigotas (com flagelo livre) que aderem ao epiteacutelio

do tubo digestoacuterio onde se multiplicam amplamente por divisotildees binaacuterias A

populaccedilatildeo daiacute resultante migra para a parte anterior do tubo digestoacuterio do

inseto diferenciando-se para formas promastigotas infectantes por volta de 3-

4 dias com invasatildeo da faringe do inseto sendo tambeacutem as chamadas formas

de promastigotas metaciacuteclicas encontradas na buco-faringe destes insetos

Quando os parasitos atingem o proacute-ventriacuteculo do inseto causam uma

obstruccedilatildeo no tubo digestoacuterio dificultando a ingestatildeo de sangue e levando a

fecircmea entatildeo faminta a picar muitas vezes pessoas ou animais Tais insetos

ao sugarem sangue (injetando na picada da pele a sua saliva e a saliva

apresentando propriedade anticoagulante homesostaacutetica anesteacutesica e

vasodilatadora) injetam tambeacutem as formas infectantes da Leishmania a qual

34

caindo na circulaccedilatildeo sanguiacutenea deste novo hospedeiro (vertebrado) vai

desenvolver a doenccedila numa das formas cliacutenicas conhecidas (Figura 3)

(Palmer 1998) ou na maioria dos casos levar a infecccedilotildees assintomaacuteticas e

autoresolutivas (Fukutani 2014)

FIGURA 3 ndash Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral

Leishmaniasis (LV) CL Cutaneous Leishmaniasis (LT) Fonte TDR ndash

Wellcome Trust

35

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose

Os protozoaacuterios do gecircnero Leishmania apresentam diferentes

distribuiccedilotildees geograacuteficas e as enfermidades por eles causadas satildeo

relativamente distintas embora possa haver superposiccedilatildeo nos sinais e

cliacutenicos e lesotildees (Jones et al 2003) Cerca de 20 espeacutecies de Leishmania satildeo

patogecircnicas para o ser humano (Laurenti 2010) As leishmanioses se

manifestam de quatro formas diferentes a depender da espeacutecie de

Leishmania envolvida e do estado imunoloacutegico do hospedeiro i) visceral

tambeacutem conhecida como calazar a forma mais grave da doenccedila ii) cutacircnea

a mais comum iii) mucocutacircnea e iv) cutacircnea difusa A LV eacute uma doenccedila

crocircnica sistecircmica que afeta os oacutergatildeos como o fiacutegado e o baccedilo A LTA inclui

as formas cutacircnea cutacircnea difusa e mucocutacircnea caracterizadas pela

formaccedilatildeo de uacutelceras na pele (Brasil 2006 2010)

A LV eacute principalmente causada por L donovani (Jubb et al 1993) Nas

Ameacutericas Central e Sul Leishmania infantum (syn L chagasi) eacute a espeacutecie

envolvida na patogenia (Brasil 2006)

A patogenia das leishmanioses eacute fortemente influenciada por fatores

inerentes ao hospedeiro como suas caracteriacutesticas geneacuteticas e resposta

imunoloacutegica por fatores inerentes ao parasito como a virulecircncia da espeacutecie

de Leishmania infectante e por fatores inerentes ao vetor como sua

capacidade vetorial Como resultado dessa interaccedilatildeo entre as diferentes

espeacutecies do parasito do vetor e dos mecanismos da resposta imunoloacutegica do

hospedeiro vertebrado um espectro de manifestaccedilotildees cliacutenicas

histopatoloacutegicas e imunoloacutegicas eacute observado no homem (Laurenti 2010)

Imunologicamente apoacutes a inoculaccedilatildeo do parasito aqueles animais que seratildeo

resistentes agrave infecccedilatildeo promovem a ativaccedilatildeo de ceacutelulas TCD4+Th1 que

produziratildeo entre outras as citocinas interferon gama fator de necrose

tumoral alfa e interleucinas (IL) 2 e 12 Estas por sua vez ativaratildeo

macroacutefagos que faratildeo a destruiccedilatildeo das formas amastigotas intracelulares

(Pinelli et al 1995) Segundo os mesmos autores as ceacutelulas TCD8 citotoacutexicas

36

tambeacutem podem estar envolvidas na resistecircncia agrave doenccedila Jaacute nos animais que

manifestaratildeo sinais cliacutenicos da doenccedila haveraacute uma supressatildeo das ceacutelulas

TCD4+Th1 e ativaccedilatildeo das ceacutelulas TCD4+Th2 com produccedilatildeo de IL-4 IL-5 IL-

6 IL-10 IL-13 responsaacuteveis pela proliferaccedilatildeo de ceacutelulas B e

consequentemente produccedilatildeo de grande quantidade de anticorpos (Pinelli et al

1994 1999) Anticorpos estes natildeo protetores mas muitas vezes danosos

pois formaratildeo imunocomplexos que poderatildeo ser depositados nas membranas

basais de vaacuterios oacutergatildeos (Slappendel 1988 Martinez-Moreno et al 1995)

Usualmente a LV eacute observada como enfermidade debilitante crocircnica

com periacuteodos de febre perda de peso gradual anemia e leucopenia (Jones et

al 2003) Patologicamente o fiacutegado pode conter numerosos granulomas e eacute

simetricamente aumentado e marrom escuro O baccedilo eacute maior em duas a trecircs

vezes o seu tamanho normal simetricamente aumentado e marrom-escuro a

preto na sua superfiacutecie capsular Os linfonodos estatildeo moderadamente

aumentados e irregulares sem outras mudanccedilas significativas na cavidade

abdominal exceto os rins que podem estar mais escuros que o normal (Jubb

et al 1993) A medula oacutessea eacute uniformemente avermelhada e amolecida

(Jones et al 2003)

As lesotildees microscoacutepicas da LV caracterizam-se por uma infiltraccedilatildeo

maciccedila em vaacuterios sistemas do organismo de enormes macroacutefagos cujo

citoplasma estaacute repleto de leishmacircnias A arquitetura dos linfonodos e do

baccedilo pode estar completamente obscurecida pelas ceacutelulas fagocitaacuterias

(Jones et al 2003)

Os foliacuteculos esplecircnicos satildeo hiperplaacutesicos geralmente com hialinose

folicular Em casos avanccedilados haacute atrofia de nodos e baccedilo e as aacutereas dos

sinus podem estar difusamente ocupadas por grandes macroacutefagos altamente

carregados com organismos intracitoplasmaacuteticos e numerosas ceacutelulas

plasmaacuteticas As lesotildees na medula oacutessea podem ser focais e consistem de

grupos de macroacutefagos epitelioacuteides com organismos fagocitados As

alteraccedilotildees renais satildeo variaacuteveis e podem consistir em manchas intersticiais

com algum envolvimento parasitaacuterio (Jubb et al 1993) e por este motivo

utiliza-se os criteacuterios de classificaccedilatildeo da Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede que

37

inclui glomerulopatias com alteraccedilotildees miacutenimas glomeruloesclerose

segmentar focal glomerulonefrite membranoproliferativa glomerulonefrite

proliferativa mesangial glomerulonefrite membranosa glomerulonefrite

crescecircntica e glomerulonefrite crocircnica (Churg et al 1985)

A LT eacute causada por 18 espeacutecies de Leishmania patogecircnicas para os

seres humanos (Ready 2013) A LT causada por L tropica e L major ocorre

principalmente no sul da Europa e nos paiacuteses do norte da Aacutefrica que

circundam o Mediterracircneo (Jones et al 2003) Nas Ameacutericas assim

denominada LTA a infecccedilatildeo humana ocorre por 11 espeacutecies (Ready 2013)

agrupadas nos subgecircneros Leishmania e Viannia onde as trecircs espeacutecies mais

importantes do subgecircnero Leishmania satildeo L mexicana L amazonensis e L

venezuelensis e do subgecircnero Viannia satildeo L braziliensis L panamensis L

peruviana e L guyanensis

A infecccedilatildeo caracteriza-se por uacutelceras ou noacutedulos uacutenicos ou muacuteltiplos na

pele com lento desenvolvimento e que habitualmente cicatrizam-se

espontaneamente depois de um periacuteodo de meses (Jones et al 2003) As

lesotildees cutacircneas tomam forma de uma uacutelcera crocircnica que se desenvolve de

paacutepulas inflamatoacuterias no local da picada do inseto Linfoacutecitos e ceacutelulas

plasmaacuteticas margeiam a lesatildeo e os neutroacutefilos satildeo atraiacutedos para os debris

Quando a inflamaccedilatildeo se estende agrave borda epitelial a ulceraccedilatildeo ocorre Muitos

parasitos estatildeo no interior de histioacutecitos e alguns estatildeo livres no tecido (Jubb

et al 1993) As lesotildees de longa duraccedilatildeo estatildeo circunscritas por um tecido

conjuntivo fibroblaacutestico o que lhes daacute um aspecto de granuloma tiacutepico (Jones

et al 2003)

A leishmaniose mucocutacircnea uma das formas cliacutenicas da LTA ocorre

no Meacutexico e nas Ameacutericas Central e do Sul A infecccedilatildeo parece com a

cutacircnea mas aleacutem da pele com frequecircncia as uacutelceras crocircnicas com bordas

elevadas e fundo granuloso estatildeo localizadas nas junccedilotildees mucocutacircneas e

podem ocorrer nas cavidades oral e nasal (Jones et al 2003 Brasil 2010

Laurenti 2010)

38

No Brasil jaacute foram identificadas sete espeacutecies responsaacuteveis pela LTA

sendo seis do subgecircnero Viannia e uma do subgecircnero Leishmania As trecircs

espeacutecies mais encontradas satildeo L braziliensis L guyanensis e L

amazonensis As espeacutecies L lainsoni L naiffi L lindenbergi e L shawi foram

identificadas mais recentemente em estados das regiotildees Norte e Nordeste

(Brasil 2010)

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF

Entre 2001 e 2012 cerca de 3000 casos confirmados de LV e 50 mil de

LTA foram registrados na regiatildeo Centro-Oeste do Brasil (RCO)

(wwwsaudegovbr) onde haacute pelo menos 127 espeacutecies de flebotomiacuteneos

registradas (Almeida et al 2015) Essa regiatildeo eacute coberta em sua maioria pelo

bioma Cerrado onde haacute vasta expansatildeo agropecuaacuteria e ocupaccedilatildeo do solo

devido o crescimento urbano desordenado o que poderia favorecer a

ocorrecircncia das leishmanioses (Galati et al 1996 Carranza-Tamayo et al

2010) O Centro-Oeste se destaca atualmente por estar se tornando um poacutelo

de atraccedilatildeo de populaccedilatildeo das demais regiotildees brasileiras devido agrave expansatildeo

da fronteira agriacutecola (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Um estudo da distribuiccedilatildeo territorial da LTA no Brasil (Negratildeo amp Ferreira

2014) mostrou que o Centro-Oeste corresponde a segunda maior regiatildeo em

coeficiente de detecccedilatildeo da doenccedila de 2001 a 2010 (199 casos por 100000

habitantes) Em Goiaacutes o nuacutemero de municiacutepios com registro da doenccedila

passou de 71 (306) em 1994 para 118 (487) em 1999 o que

corresponde a um acreacutescimo de 67 (Costa 2005) O Estado do Mato Grosso

eacute detentor do terceiro maior coeficiente de detecccedilatildeo ndash 765 casos por 100000

habitantes O Distrito Federal (DF) registra a transmissatildeo da LTA de

ocorrecircncia ciacuteclica desde 1992 e a partir de entatildeo apresenta coeficientes de

detecccedilatildeo bem inferiores ao que eacute considerado como baixo segundo

paracircmetros do Ministeacuterio da Sauacutede (lt25 casos por 100000 habitantes)

39

(Carvalho et al 2010) Com a expansatildeo das fronteiras agriacutecolas nesta regiatildeo

principalmente nos estados de Mato Grosso e Goiaacutes estes Estados passaram

a ser importante rota de fixaccedilatildeo do homem

No DF haacute evidecircncia de transmissatildeo autoacutectone de LTA O nuacutemero de casos

notificados de LTA procedentes do DF nos anos de 2003 2004 e 2005 foi de

31 57 e 26 respectivamente (Sampaio et al 2009) O primeiro caso de LV

autoacutectone no DF ocorreu em 2005 e trecircs oacutebitos foram confirmados ateacute 2009

(Carranza-Tamayo et al 2010) Entre 2007 e 2012 24 casos humanos de LV

autoacutectone foram registrados (SESDF 2012) Em 2013 foram notificadas no

Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo ndash SINANNET 98 pessoas

com suspeita de LV e 47 foram confirmadas sendo dois casos autoacutectones

provenientes de Sobradinho e Lago Norte dos quais um veio a oacutebito

Segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das Leishmanioses no DF para

o ano de 2015 dos 142 casos de LV notificados 39 foram confirmados

destes trecircs autoacutectones e 36 importados Foram atendidos 39 pacientes nas

unidades hospitalares do DF desses quatro evoluiacuteram a oacutebito dos quais um

autoacutectone da RA da Fercal e trecircs importados De janeiro a marccedilo de 2016

foram notificados 28 casos de LV dentre eles um caso autoacutectone proveniente

do Lago Norte aleacutem de sete importados e dois em investigaccedilatildeo para a

definiccedilatildeo do Local Provaacutevel de Infecccedilatildeo (LPI) Dos dez casos confirmados em

2016 foram atendidos dez pacientes nas unidades hospitalares do DF

desses dois evoluiacuteram a oacutebito dos quais um importado do estado de Goiaacutes e

um encontra-se em investigaccedilatildeo para definir o LPI

Em relaccedilatildeo agrave LTA no DF segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das

Leishmanioses no DF para o ano de 2015 foram confirmados 50 casos

destes 35 satildeo residentes do DF 14 de outras Unidades Federadas e um da

Guiana Francesa Dos 50 casos confirmados 35 satildeo importados nove

indeterminados seis em investigaccedilatildeo e nenhum autoacutectone Natildeo foi registrado

nenhum oacutebito relacionado agrave LTA no periacuteodo Dados do Boletim

Epidemioloacutegico de janeiro a marccedilo de 2016 confirmam sete casos da doenccedila

mas nenhum caso autoacutectone foi registrado Aleacutem disso nos uacuteltimos anos tecircm

sido registrados casos de LV em catildees domeacutesticos nas regiotildees norte e sul do

40

DF que vem sofrendo com a urbanizaccedilatildeo descontrolada da sua aacuterea rural

(Carranza-Tamayo et al 2010 Cardoso et al 2015)

17 Vetores

Flebotomiacuteneos (ordem Diptera famiacutelia Psychodidae subfamiacutelia

Phlebotominae) satildeo insetos com ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica ocorrendo sob

as mais diversas condiccedilotildees climaacuteticas e de altitude nos ambientes silvestres

rurais e urbanos Atualmente conhece-se cerca de 1003 espeacutecies das quais

537 estatildeo presentes na regiatildeo Neotropical e Neoaacutertica destas 277 foram

registradas no Brasil representando 28 do total e 53 das que ocorrem na

Regiatildeo Neotropical (Shimabukuro et al 2017) Dezenove espeacutecies de

flebotomiacuteneos estatildeo incriminadas como vetoras de espeacutecies de Leishmania

(Basano amp Camargo 2004 Shimabukuro amp Galati 2010)

Flebotomiacuteneos satildeo insetos pequenos de cor parda (ldquomosquito-palhardquo) e

de corpo cerdoso que normalmente natildeo ultrapassam 05 cm de comprimento

tecircm pernas longas e delgadas e apresentam como caracteriacutestica o voo

saltitante Ao contraacuterio dos outros diacutepteros os flebotomiacuteneos mantecircm a

postura ereta das asas mesmo em repouso Apenas as fecircmeas fazem

repasto sanguiacuteneo por serem adaptadas com o aparelho bucal picador-

sugador (Killick-Kendrick1999 Basano amp Camargo 2004) A hematofagia eacute

indispensaacutevel ao desenvolvimento ovariano (Carrera 1991) Entre os

inuacutemeros nomes populares que variam segundo os paiacuteses e as suas regiotildees

encontram-se mosquito palha asa dura asa branca tatuquira birigui

cangalha cangalhinha ligeirinho peacutela-eacutegua arrupiado (Martins et al 1978)

As formas imaturas podem ser encontradas em seus criadouros em solo

uacutemido mas natildeo molhado e em detritos ricos em mateacuteria orgacircnica em

decomposiccedilatildeo (Brazil amp Brazil 2003)

41

As fecircmeas dos flebotomiacuteneos geralmente apresentam haacutebito noturno

procuram fazer repasto sanguiacuteneo ao entardecer e comeccedilo da noite quando

transmitem o parasito para o novo hospedeiro Jaacute os machos alimentam-se de

frutas seiva de plantas entre outros por breve periacuteodo (Killick-

Kendrick1999) Durante o dia os flebotomiacuteneos procuram abrigo ou no

interior das residecircncias ou em matas em local protegido dos ventos Satildeo

frequentemente encontrados em tocas de outros animais como tatu buracos

em paredes de construccedilotildees ocos de paus ou bambus ou similares Em matas

fechadas devido a pouca luz em seu interior podem ser vistos mesmo

durante o dia inclusive ativos a procura de possiacuteveis animais ou o proacuteprio

homem para ser sugado (Basano amp Camargo 2004)

Killick‐Kendrick (1990) propotildeem quatro criteacuterios que devem ser

observados antes de se incriminar uma espeacutecie como vetora de zoonoses

satildeo eles alimentar-se em humanos e no reservatoacuterio animal manter os

parasitos apoacutes a ingestatildeo exibir parasitos indistinguiacuteveis daqueles isolados

de pacientes e transmitir o parasito pela picada Adicionalmente Ready (2013)

propotildee o criteacuterio relacionado a influecircncia da abundacircncia do vetor na

incidecircncia da leishmaniose comprovada por modelos matemaacuteticos

No Brasil as principais espeacutecies envolvidas na transmissatildeo da LTA satildeo

Bichromomyia flaviscutellata Nyssomyia whitmani Ny umbratilis Ny neivai

Psychodopygus wellcomei e Migonemyia migonei (Barbosa et al 2008 Ready

2013 Diniz et al 2014) Estas espeacutecies de flebotomiacuteneos foram definidas

como potenciais vetores de acordo com o Manual de Vigilacircncia da

Leishmaniose Tegumentar Americana do Ministeacuterio da Sauacutede por atenderem

a alguns dos criteacuterios que atribuem a uma espeacutecie a capacidade vetorial

segundo Killick-Kendrick amp Ward (1981) Killick-Kendrick (1990) e Ready

(2013) Cabe ressaltar que o papel vetorial de cada uma dessas espeacutecies

dependeraacute da espeacutecie de Leishmania presente no intestino da sua

capacidade de se infectar e transmitir o parasito a um novo hospedeiro (Brasil

2010 Pita-Pereira et al 2009 2011)

O principal vetor da LV nas Ameacutericas eacute o flebotomiacuteneo Lutzomyia

longipalpis espeacutecie bem adaptada ao ambiente peridomeacutestico e com ampla

42

distribuiccedilatildeo geograacutefica (Brasil 2010) poreacutem outros flebotomiacuteneos tambeacutem

podem estar participando do ciclo de LV principalmente nas aacutereas onde Lu

longipalpis eacute ausente (de Souza et al 2003 de Carvalho et al 2010)

Lutzomyia cruzi parece participar como vetor nos municiacutepios de Corumbaacute e

LadaacuterioMS na fronteira entre Brasil e Boliacutevia (Dos Santos et al 1998) e

Pintomyia (Pifanomyia) evansi eacute tambeacutem um importante vetor na Colocircmbia

(Travi et al 1990 Oviedo amp Moreno 1995 Montoya-Lerma amp Lane 1996 Travi

et al 1996) e Venezuela (Pifano 1964 Feliciangeli et al 1998)

43

18 Flebotomiacuteneos no DF

Atualmente conhece-se 29 espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF (Quadro1)

QUADRO 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte

Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al

2015 Galati 2015

Espeacutecies

Brumptomyia avellari (Costa Lima 1932)

Brumptomyia pintoi (Costa Lima 1932)

Micropygomyia longipennis (Barretto 1946)

Micropygomyia acanthopharynx (Martins Falcatildeo amp Silva 1962)

Micropygomyia quinquefer (Dyar 1929)

Evandromyia bacula (Martins Falcatildeo amp Silva 1965)

Evandromyia evandroi (Costa Lima amp Antunes 1936)

Evandromyia corumbaensis (Galati Nunes Oshiro amp Rego 1989)

Evandromyia teratodes (Martins Falcatildeo amp Silva 1964)

Evandromyia sallesi (Galvatildeo amp Coutinho 1939)

Evandromyia saulensis (Floch amp Abonnenc 1944)

Evandromyia lenti (Mangabeira 1938)

Pintomyia christenseni (Young amp Duncan 1994)

Pintomyia kuscheli (Le Pont Martinez Torrez-Espejo amp Dujardin 1998)

Pintomyia monticola (Costa Lima 1932)

Pintomyia fischeri (Pinto 1926)

Sciopemyia servulolimai (Damasceno amp Causey 1945)

Continua

44

Sciopemyia sordellii (Shannon amp Del Ponte 1927)

Lutzomyia longipalpis (Lutz amp Neiva 1912)

Lutzomyia ischnacantha Martins Souza amp Falcatildeo 1962

Psathyromyia lutziana (Costa Lima 1932)

Psathyromyia runoides (Fairchild amp Hertig 1953)

Psathyromyia brasiliensis (Costa Lima 1932)

Psathyromyia aragaoi (Costa Lima 1932)

Psathyromyia shannoni (Dyar 1929)

Nyssomyia whitmani (Antunes amp Coutinho 1939)

Nyssomyia neivai (Pinto 1926)

Nyssomyia intermedia (Lutz amp Neiva 1912)

Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira 1942)

No trabalho de Carvalho et al (2010) foram coletados mais de 17 mil

flebotomiacuteneos de 27 espeacutecies em diversos ambientes como nas diferentes

fitofisionomias do Cerrado abrigo de animais e no intradomiciacutelo Os autores

identificaram mais duas espeacutecies consideradas vetoras Ny neivai e Ps davisi

que auxiliaram no mapeamento das aacutereas de risco agrave transmissatildeo de

Leishmania

Ferreira et al (2014) analisaram a ocorrecircncia de flebotomiacuteneos em matas

de galeria do Distrito Federal (DF) nas estaccedilotildees seca e chuvosa Os autores

natildeo capturaram flebotomiacuteneos em novembro (estaccedilatildeo chuvosa) e em maio

(estaccedilatildeo seca) foram capturados 250 exemplares identificados como

Psathyromyia runoides (799) Pintomyia monticola (97) Mi quinquefer

(37) Pa shannoni (3) Bi flaviscutellata (07) Brumptomyia sp (07)

Pi kuscheli (07) Pa lutziana (Costa Lima) (07) e Sciopemyia sordellii

(07) De acordo com os resultados os autores relataram que em matas de

galeria do DF haveria maior ocorrecircncia de flebotomiacuteneos na estaccedilatildeo seca no

Continuaccedilatildeo QUADRO 1

45

niacutevel do solo e em aacutereas preservadas As espeacutecies Pa runoides Pi kuscheli

e Mi quinquefer foram registradas pela primeira vez no DF

Informaccedilotildees relevantes relacionadas agrave riqueza de espeacutecies abundacircncia

ocorrecircncia em distintas eacutepocas do ano somam dados que podem ser usados

para a melhor compreensatildeo da epidemiologia das doenccedilas e conhecimento

do comportamento dos flebotomiacuteneos nas matas de galeria proacuteximas agraves aacutereas

urbanas no DF

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp

Segundo Ashford (1996) o reservatoacuterio de uma infecccedilatildeo eacute definido como

o sistema ecoloacutegico no qual um agente infeccioso sobrevive

persistentemente Para as infecccedilotildees de transmissatildeo vetorial o sistema

compreenderia um ou mais vetores e um ou mais mamiacuteferos hospedeiros

que viveriam sob condiccedilotildees de densidade populacional proximidade espacial

entre outros fatores que permitiriam a transferecircncia continuada do agente

entre eles O autor designa o hospedeiro mamiacutefero responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo em longo prazo do agente infeccioso de hospedeiro reservatoacuterio

e define como zoonose uma doenccedila causada por parasitos cujos hospedeiros

satildeo o homem e outros mamiacuteferos

Entretanto a definiccedilatildeo de reservatoacuterio tem sofrido mudanccedilas significativas

no uacuteltimo seacuteculo fazendo-se necessaacuterio o estudo das zoonoses a partir de

perspectivas mais abrangentes Atualmente aceita-se que um reservatoacuterio

pode ser uma espeacutecie ou um complexo delas responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo

do parasito na natureza Dentro desse sistema-reservatoacuterio cada hospedeiro

desenvolve papeis diferentes na transmissatildeo em um determinado tempo e

espaccedilo isso eacute considera-se que ldquohospedeiros de manutenccedilatildeordquo sejam os

mamiacuteferos que podem ser infectados e mantecircm a infecccedilatildeo e que

ldquohospedeiros amplificadoresrdquo sejam os mamiacuteferos que aleacutem de manterem a

46

infecccedilatildeo desempenham uma caracteriacutestica que favoreccedila a transmissatildeo como

a presenccedila de mais parasitos no sangue e pele por periacuteodos maiores (Roque

amp Jansen 2014) Um estudo de reservatoacuterios silvestres e sinantroacutepicos de

espeacutecies de Leishmania nas Ameacutericas distinguiu as espeacutecies de mamiacuteferos

silvestres e sinantroacutepicos encontrados infectados com Leishmania spp

classificando-os em hospedeiros e potenciais reservatoacuterios (Roque amp

Jansen 2014) de acordo com a capacidade de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo ou de

transmissibilidade dos parasitos aos vetores por meio de xenodiagnoacutestico

positivo ou culturas de pele ou sangue

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de hospedeiros e

reservatoacuterios

Desde o seacuteculo passado a comunidade cientiacutefica tem demonstrado que

diferentes e numerosos mamiacuteferos silvestres podem se tornar infectados com

espeacutecies de Leishmania aleacutem das espeacutecies domeacutesticas e sinantroacutepicas

(animais natildeo domesticados que habitualmente compartilham e aproveitam-se

do ecoacutetopo humano) (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006 Roque amp Jansen

2014) Entretanto o foco deve ser mudado para a identificaccedilatildeo de espeacutecies

que podem servir como fontes de infecccedilatildeo para vetores e amplificaccedilatildeo de

focos enzooacuteticos temporalmente e regionalmente especiacuteficos constituindo

um risco para a transmissatildeo humana Esta mudanccedila depende da melhor

compreensatildeo de sistemas reservatoacuterios e do papel desempenhado por cada

espeacutecie de mamiacutefero na manutenccedilatildeo destes parasitos na natureza (Roque amp

Jansen 2014) Diversas espeacutecies das ordens Didelphimorphia Pilosa

Cingulata Rodentia Carnivora Primata e Chiroptera foram recentemente

classificadas como hospedeiros ou potenciais reservatoacuterios por Roque amp

Jansen (2014)

47

Os catildees domeacutesticos (Canis familiaris) satildeo considerados eficientes

reservatoacuterios de L infantum devido agrave alta susceptibilidade agrave infecccedilatildeo ao

frequentemente elevado parasitismo nesta espeacutecie e por causa da sua iacutentima

relaccedilatildeo com o homem tanto nas zonas urbanas quanto rurais (Dantas-Torres

amp Brandatildeo-Filho 2006) Os catildees como importantes reservatoacuterios domeacutesticos

de L infantum satildeo responsabilizados pela manutenccedilatildeo das endemias nos

grandes centros urbanos (Silva et al 2001 Medeiros et al 2005) Uma

consideraacutevel gama dos catildees infectados por espeacutecies de Leishmania satildeo

assintomaacuteticos seja por um determinado periacuteodo de tempo que pode chegar

a anos ateacute nunca apresentar sinais cliacutenicos ou sintomas da doenccedila Poreacutem

os catildees natildeo satildeo as uacutenicas fontes de infecccedilatildeo em todos os focos de LV no

Brasil (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Tambeacutem existe uma forte

tendecircncia para que os catildees assumam o papel de principais reservatoacuterios

domeacutesticos para L braziliensis o agente etioloacutegico da LTA mais disseminado

(Aguilar et al 1989 Madeira et al 2003 2006 Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho

2006 Castro et al 2007 Quaresma et al 2011) Entre os estudos que relatam

casos de infecccedilatildeo mista por L infantum e L braziliensis encontra-se os

trabalhos de Madeira et al (2006) e Quaresma et al (2011)

Aleacutem dos carniacutevoros descritos por Roque amp Jansen (2014) Cerdocyon

thous popularmente conhecido como cachorro do mato ou guaraxaim jaacute era

suspeito de desempenhar o papel de hospedeiro reservatoacuterio primaacuterio de L

infantum no Norte do Brasil (Lainson et al 1969) Os mesmos autores

descreveram a eficiecircncia dessa espeacutecie como fonte de infecccedilatildeo em 1990

Este caniacutedeo tambeacutem tem sido incriminado como hospedeiro reservatoacuterio

primaacuterio na Venezuela (Lainson et al 1987) Figueiredo et al (2008) relataram

o primeiro caso de L infantum em cachorro-vinagre (Speothos venaticus) no

Brasil no Estado do Mato Grosso Os autores chamam a atenccedilatildeo para os

controles parasitoloacutegicos em animais silvestres mantidos em cativeiros

principalmente quando estes fazem intercacircmbios entre zooloacutegicos brasileiros

Tambeacutem no Mato Grosso Souza et al (2010) relataram a infecccedilatildeo de

caniacutedeos silvestres por L infantum mantidos em cativeiro Foram coletadas

amostras de pele medula oacutessea e linfonodos de seis raposas (Cerdocyon

thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus) para detecccedilatildeo e

48

caracterizaccedilatildeo de Leishmania sp pela teacutecnica de PCR-RFLP Todos os

animais pesquisados apresentaram-se positivos para L infantum O estudo

destaca a importacircncia de monitoramento adequado dos animais e do maior

controle desta enfermidade jaacute que os animais estudados estavam em

ambientes de recreaccedilatildeo puacuteblica

De maneira geral as taxas de infecccedilatildeo em caniacutedeos natildeo domeacutesticos satildeo

baixas mas pode ser alta agraves vezes como observado nas raposas da

Ameacuterica do Sul (Lainson et al 1987) Poreacutem caniacutedeos silvestres

normalmente natildeo vivem perto de habitaccedilotildees humanas e logo eles teriam um

papel secundaacuterio na importacircncia da epidemiologia da LV enzooacutetica (Dantas-

Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Millaacuten et al (2016) encontraram Leishmania

sp em 375 das 32 raposas cinzas (Pseudalopex griseus) capturadas na

Patagocircnia Argentina Os achados dos autores tecircm elevada significacircncia pela

extensatildeo da aacuterea de distribuiccedilatildeo das leishmanioses na Ameacuterica do Sul por

suportar a existecircncia de um ciclo silvestre na ausecircncia de catildees e ainda na

transmissatildeo indicando que ou a distribuiccedilatildeo de flebotomiacuteneos eacute mais ampla

do que se pensava ou que a transmissatildeo de Leishmania por outros

artroacutepodes poderia ser possiacutevel

De acordo com Medeiros et al (2005) marsupiais didelfiacutedeos estatildeo entre

os principais reservatoacuterios rurais da doenccedila Didelphis albiventris foi o primeiro

mamiacutefero silvestre natildeo canino a ser descrito como hospedeiro de L infantum

no Novo Mundo (Sherlock et al 1984) Em aacutereas endecircmicas do Brasil e na

Colocircmbia espeacutecies de Didelphis tecircm frequentemente abrigado L infantum

(Corredor et al 1989 Travi et al 1994 Sherlock 1996 Cabrera et al 2003

Humberg et al 2012 Carreira et al 2012) e a presenccedila de D albiventris

poderia ser um fator associado a ocorrecircncia de infecccedilotildees assintomaacuteticas por

Leishmania na periferia de centros urbanos (Carranza-Tamayo et al 2016)

Outros marsupiais como Didelphis marsupialis Philander opossum e

Metachirus nudicaudatus jaacute foram detectados com Leishmania amazonensis

(Lainson et al 1981) mostrando que esses mamiacuteferos desempenham papel

importante na manutenccedilatildeo de Leishmania na natureza Em Barra de

Guaratiba estado do Rio de Janeiro a distacircncia das casas para as bordas

49

florestais sua altitude e a presenccedila de D marsupialis nos quintais das casas

foram considerados fatores preditores para infecccedilatildeo por L infantum em catildees

(Cabrera et al 2003)

Roedores sinantroacutepicos da famiacutelia Muridae como o rato de telhado (Rattus

rattus) e o camundongo (Mus musculus) compotildeem a lista de espeacutecies de

potenciais reservatoacuterios ou hospedeiros conforme a espeacutecie de Leishmania

encontrada e o local (Roque amp Jansen 2014) Rattus rattus jaacute foi encontrado

naturalmente infectado por L infantum (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

De Lima et al (2002) isolaram Leishmania braziliensis de R rattus na

Venezuela e Brandatildeo-Filho (2003) encontrou L braziliensis por meio de

eletroforese enzimaacutetica multilocus nesse mesmo hospedeiro Esse processo

de domiciliaccedilatildeo facilita a ligaccedilatildeo entre os ambientes peridomeacutestico e o

silvestre (Lainson et al1969) podendo estabelecer novos padrotildees

epidemioloacutegicos de LV particularmente no ciclo urbano de transmissatildeo

(Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

Helhazar et al (2013) reportaram pela primeira vez em Portugal a

infecccedilatildeo natural por L infantum em M musculus e em Rattus norvegicus

(ratazana) sugerindo que estes animais provavelmente desempenham papeacuteis

como potenciais reservatoacuterios no ciclo bioloacutegico do parasito Os autores

relatam que M musculus e R norvegicus satildeo animais que se proliferam muito

raacutepido e tecircm uma expectativa de vida de 12 e 24 meses respectivamente o

que poderia manter o parasito disponiacutevel por pelo menos um ano mesmo

durante a baixa atividade dos flebotomiacuteneos em determinadas estaccedilotildees do

ano Na Venezuela De Lima e colaboradores (2002) isolaram L braziliensis

em Sigmodon hispidus (rato do algodatildeo) aleacutem do R rattus

Mais de 200 espeacutecies de roedores estatildeo distribuiacutedas em haacutebitats semi-

aquaacuteticos terrestres e semi-fossoriais no Brasil (Bonvicino et al 2008) Esta

caracteriacutestica eacute provavelmente a principal razatildeo que explica a sua exposiccedilatildeo

aos diferentes ciclos de transmissatildeo de vaacuterias espeacutecies de Leishmania no

ambiente silvestre (Roque amp Jansen 2014a)

50

No Brasil Paacutedua et al (2011) relataram infecccedilatildeo natural por L braziliensis

no roedor sinantroacutepico M musculus e no roedor silvestre Necromys lasiurus a

partir de anaacutelises moleculares (PCR-RFLP) de medula oacutessea femoral e

fragmentos de pele Freitas et al (2012) no Estado de Mato Grosso uma

regiatildeo endecircmica para leishmaniose cutacircnea relataram infecccedilatildeo natural nas

mesmas espeacutecies e utilizando a mesma metodologia que Paacutedua et al (2011)

mostraram que a presenccedila de Leishmania em roedores sinantroacutepicos pode

ser uma ameaccedila aos humanos devido a cohabitaccedilatildeo de domiciacutelios humanos

nessa aacuterea de estudo

No Brasil existem poucos estudos de infecccedilatildeo natural de Leishmania em

roedores caviomorfos e cerca de 90 espeacutecimes foram analisados (Lainson et

al 1981 Quaresma et al 2011) Estudos experimentais apontaram duas

espeacutecies de caviomorfos como reservatoacuterios potenciais para Leishmania

Thrichomys laurentius infectado por L infantum e L braziliensis (Roque et al

2010) e Proechimys semispinosus infectados com L infantum (Travi et al

2002) Lainson amp Shaw (1968) encontraram o parasito L amazonensis no

roedor Proechimys guyannensis no norte do estado do Paraacute (Lainson amp Shaw

1972) Proechimys cuvieri foi descrito como hospedeiro de Leishmania spp

na Guiana Francesa por Dedet et al (1985)

Um estudo de Brandatildeo-Filho et al (1994) em pequenos mamiacuteferos

provaacuteveis reservatoacuterios de L braziliensis em Amaraji Pernambuco encontrou

amostras de esfregaccedilos hepaacuteticos e esplecircnicos com amastigotas em

Nectomys squamipes N lasiurus e tambeacutem em R rattus Apoacutes quase 10

anos um estudo realizado na mesma localidade de Pernambuco identificou L

braziliensis em R rattus e N lasiurus (Brandatildeo-Filho et al 2003)

Forattini et al (1972 1973) isolaram Leishmania de Akodon arviculoides

Oryzomys nigripes e Oryzomys capito laticeps Telleria et al (1999)

identificaram Leishmania amazonensis em Akodon spp por PCR kDNA

Exames histoloacutegicos de lesotildees nos roedores Oryzomys spp Nectomys

spinosus amoenus e Nectomys rattus revelaram amastigotas compatiacuteveis com

Leishmania (Lainson amp Shaw 1970) Leishmania amazonensis foi isolada de

Ocorrecircncia e infecccedilatildeo natural de flebotomiacuteneos e pequenos

mamiacuteferos por Leishmania spp em matas de galeria do Distrito

Federal Brasil

UNIVERSIDADE DE BRASIacuteLIA

BANCA EXAMINADORA

Dra Magda Clara Vieira da Costa-Ribeiro

Universidade Federal do Paranaacute

Dra Elisa Neves Vianna

Universidade de Brasiacutelia

Dr Ciro Martins Gomes

Universidade de Brasiacutelia

Dr Francisco Anilton Arauacutejo (suplente)

Laboratoacuterio Hertape Sauacutede e Bem Estar Animal SA

Agosto de 2017

ldquoPorque o que acontece aos filhos dos homens isso tambeacutem acontece aos

animais a mesma coisa lhes acontece Como morre um assim morre o outro

Todos tecircm o mesmo focirclego e nenhuma vantagem tecircm homens sobre os

animais Tudo eacute vaidaderdquo

Eclesiastes 319

Dedico este trabalho aos meus pais Ronaldo Rapello e Eliana Rapello meus

maiores mestres e incentivadores e para quem sinto profundo respeito e

agradecimento pelos ensinamentos de vida e amor incondicional

AGRADECIMENTOS

Agrave Deus por me guiar pelos caminhos que Ele traccedilou para minha vida ainda que

alguns inicialmente pareccedilam obscuros progressivamente se revelam

fundamentais para meu crescimento pessoal e profissional

Aos professores do Nuacutecleo de Medicina Tropical especialmente agraves professoras

Maria Regina Fernandes de Oliveira Elisabeth Carmem Duarte Elza Ferreira

Noronha e aos professores Gustavo Adolfo Sierra Romero Cleudson Nery de

Castro Pedro Luiz Tauil Wildo Navegantes de Arauacutejo e Joatildeo Barberino Santos

pela formaccedilatildeo teoacuterica e inspiraccedilatildeo profissional no campo da Epidemiologia

Ao meu orientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves pelo profissionalismo exemplar

pela constante motivaccedilatildeo pela participaccedilatildeo ativa em todas as etapas desse

processo mas tambeacutem pela compreensatildeo empatia paciecircncia e amizade ao

longo da jornada

Ao meu co-orientador Andrey Joseacute Andrade pelo extenso conhecimento

compartilhado pela identificaccedilatildeo de milhares de flebotomiacuteneos pelo incentivo

positivo e participaccedilatildeo em todas as etapas desse processo mas tambeacutem pelos

conselhos pela sinceridade pela paciecircncia e pela parceria do iniacutecio ao fim desse

doutorado

Agrave equipe do Laboratoacuterio Interdisciplinar de Biociecircncias e Faculdade de Medicina

e em especial agrave professora Nadjar Nitz Silva Lociks de Arauacutejo pelo vasto

conhecimento teoacuterico e praacutetico compartilhado pelas palavras de incentivo

fundamentais para o sucesso da etapa molecular mas tambeacutem pela doccedilura e

pela forccedila feminina por compartilhar sabedoria por se tornar um exemplo

profissional e pessoal para mim Agrave colega Thaiacutes Tacircmara Castro Minuzzi-Souza

por compartilhar sua experiecircncia profissional com paciecircncia pelos conselhos e

momentos que fortaleceram a amizade Agraves colegas Tamires Emanuele Vital e

Bruna Caroline Veacuteras de Carvalho pela ajuda na execuccedilatildeo das PCRs pela

paciecircncia pela gentileza e pelo agradaacutevel conviacutevio na etapa laboratorial

Agrave equipe do Laboratoacuterio de Parasitologia especialmente ao professor Marcos

Takasha Obara pelo incentivo e ajuda em vaacuterias etapas de trabalho e pela

amizade Ao colega Douglas Rocha pela ajuda no campo e na triagem

identificaccedilatildeo e fotografia dos flebotomiacuteneos Agrave colega Tauana de Souza Ferreira

por ser gentilmente prestativa em todas as etapas desse trabalho Agrave colega Thaiacutes

Oliveira por compartilhar o tempo e os conhecimentos profissionais pelos

agradaacuteveis momentos juntas pela amizade construiacuteda Agrave colega e teacutecnica

Renata Velocircso Timboacute pela ajuda na execuccedilatildeo de diversas etapas do processo

laboratorial e pela paciecircncia Agrave colega Mariana Neiva pela ajuda na execuccedilatildeo de

diversas etapas do processo laboratorial

Agrave melhor equipe de campo que algueacutem poderia ter Jocircnatas Ferreira Deacutebora

Juliana Rodrigues Martins Jeacutessica Toledo de Almeida Cristiana Santiago Nery

de Souza Agda Regina Melo Silva Thamerson Felipe Lelis dos Santos Saemis

Ferreira de Souza Tacircmela Steacutefany Lopes Silva Renecirc Cunha de Castro Rubens

Geraldo de Souza Jadson Joseacute Gomes da Silva Lana Cristina Evangelista

Ferreira Saacute Hayana Maria Boaventura Costa e ao senhor Barbosa Joseacute Bezerra

Ao meu parceiro Greacutegoire Saint Gal de Pons pela cumplicidade pelo amor pela

paciecircncia por ser um grande ouvinte pelos conselhos pela compreensatildeo nos

momentos de privaccedilatildeo de tempo em funccedilatildeo do curso por cuidar da nossa

famiacutelia

Aos meus filhos Lucca Rapello e Pierre Rapello pela paciecircncia e compreensatildeo

nos momentos de ausecircncia e por serem minhas razotildees de ser melhor

Ao meu irmatildeo Marcio Rapello e cunhada Gabriela Ortiz de Rozas pelos

momentos e palavras de apoio sempre bem-vindos

Agraves minhas avoacutes Annita Rapello (in memorian) e Eulina Machado (in memorian)

que foram para o Senhor ao longo desse doutorado mas que deixaram seus

ensinamentos para sempre na minha vida

Aos meus amigos pessoais que natildeo foram aqui citados mas que sabem o

quanto foram importantes para mim ao longo dessa etapa Vocecircs me fortalecem

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 A Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO 2016

27

Figura 2 Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte Rey 2002ndash CD room (Modificado)

32

Figura 3 Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral Leishmaniases (LV) CL Cutaneous Leishmaniases (LT) Fonte TDR ndash Wellcome Trust

34

Figura 4 Ilustraccedilatildeo das subunidades SSU e LSU intercaladas por espaccediladores de conservaccedilatildeo intermediaacuteria ITS (ITS1 e ITS2 espaccediladores internos transcritos) e ETS (espaccedilador externo transcrito) flanqueados pelo espaccedilador intergenocircmico (IGS) Fonte Vilgalyslab Duke University

63

Figura 5 Matas de Galeria amostradas em Brasiacutelia A Parque Nacional de Brasiacutelia B Fazenda Aacutegua Limpa C Jardim Botacircnico de Brasiacutelia D Reserva Bioloacutegica da Contagem

68

Figura 6 Localizaccedilatildeo geograacutefica das quatro aacutereas de estudo no Distrito Federal A PNB Parque Nacional de Brasiacutelia (PA PB) B REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem (RA RB) C FAL Fazenda Aacutegua Limpa da UNB (BA BB) D JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia (JA JB) Fonte Google Earth 2014

69

Figura 7 Armadilhas utilizadas nas amostragens de flebotomiacuteneos A armadilha do tipo HP B Armadilha do tipo Shannon

70

Figura 8 Armadilhas utilizadas para amostragens de mamiacuteferos A Armadilha tipo Tomahawk localizada no solo B Armadilha tipo Tomahawk com pequeno mamiacutefero capturado C Armadilha tipo Sherman localizada em estrato arboacutereo

72

Figura 9 Roedor marcado por um brinco de identificaccedilatildeo (observar a ponta da pinccedila)

73

Figura10 Base de trabalho de campo 74

Figura 11 Procedimentos de pesagem (A) e exame cliacutenico geral em roedor e marsupial (B)

75

Figura 12 Roedor apoacutes coleta de tecido A seta aponta o local da coleta da ponta de orelha

76

Capiacutetulo 1

Figura 1 Porcentagem de armadilhas positivas para flebotomiacuteneos em quatro matas de galeria no Distrito Federal em maio e setembro de 2014 FAL = Fazenda Aacutegua Limpa REBIO = Reserva Bioloacutegica da Contagem PNB = Parque Nacional de Brasiacutelia JBB = Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

86

Figura 2 A) Genitaacutelia de macho de Brumptomyia brumpti (10x) B) genitaacutelia masculina de Brumptomyia guimaraesi (10x) C) toacuterax do macho de Brumptomyia guimaraesi (10X) (Montados em baacutelsamo de canadaacute)

89

Figura 3 D) Cabeccedila de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (10x) E) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (40x) F) espermateca de Micropygomyia ferreirana (40x) (Montados em baacutelsamo do Canadaacute

90

Figura 4 G) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Evandromyia bourrouli (40x) H) espermateca de Evandromyia bourrouli (40X) I) genitaacutelia masculina de Evandromyia bourrouli (40X)

91

Figura 5 J) Ascoacuteide em flagelocircmeros de Psathyromyia pradobarrientosi (40X) K) Genitaacutelia masculina de Psathyromyia pradobarrientosi (10X) L) porccedilatildeo final do ducto ejaculatoacuterio de Psathyromyia pradobarrientosi (40X)

92

Capiacutetulo 2

Figura 1 Fluxograma explicativo dos meacutetodos utilizados para a obtenccedilatildeo e processamento dos flebotomiacuteneos

102

Figura 2 Amplificaccedilatildeo do gene Cacophany em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-R22 Amostras de flebotomiacuteneos

110

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de SSUrRNA em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-

R28 Amostras de flebotomiacuteneos Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

111

Capiacutetulo 3

Figura 1 Roedores capturados no presente trabalho A Oecomys bicolor B Calomys expulsus C Hylaeamys magacephalus D Rhipidomys macrurus E Nectomys rattus F Necromys lasiurus Fonte A B C D e F - Bonvicino (2008) E ndash Arquivo pessoal

125

Figura 2 Marsupiais capturados no presente trabalho A Didelphis albiventris B Gracilinanus agilis C e D Monodelphis americana Fonte arquivo pessoal

125

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 4 13 1617 20 21 25 82 e 86 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 4 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 48 55 70 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 5 Amplificaccedilatildeo de SSU rRNA em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 02 11 13 16 17 20 25 41 58 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

135

LISTA DE QUADROS E TABELAS

Quadro 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al 2015 Galati 2015

43

Capiacutetulo 1

Tabela 1 Nuacutemeros do cataacutelogo institucional dos voucheres de

espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados no presente estudo

84

Tabela 2 Espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados nas quatro aacutereas de estudo do Distrito Federal em maio e setembro de 2014 Novos registros para o Distrito Federal Novo registro para o cerrado Riqueza total de espeacutecies nas matas de galeria 16 espeacutecies

85

Tabela 3

Lista atualizada de espeacutecies de flebotomiacuteneos no Distrito Federal Brasil Novo registro para o Brasil Riqueza total 35 espeacutecies

87

Capiacutetulo 2

Tabela 1 Identificaccedilatildeo molecular dos ldquopoolsrdquo de flebotomiacuteneos fecircmeas

submetidos aos exames moleculares por aacuterea espeacutecie mecircs de coleta e nuacutemero de indiviacuteduos em cada ldquopoolrdquo

107

Capiacutetulo 3

Tabela 1 Espeacutecies de roedores e marsupiais didelfiacutedeos coletadas

nos meses de maio e setembro de 2014 na FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal Brasil

124

Tabela 2

Distribuiccedilatildeo das espeacutecies de mamiacuteferos capturados nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014

126

Tabela 3 Dados brutos da morfometria corporal sexo e idade das espeacutecies de mamiacuteferos capturadas nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014 As linhas realccediladas em amarelo correspondem aos animais positivos nos testes moleculares

127

Tabela 4

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU de Tripanossomatiacutedeos e ITS1 de Leishmania spp em animais da FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal

133

Tabela 5

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos e ITS-1 de Leishmania spp em animais da FAL PNB e JBB Distrito Federal

136

ABREVIATURAS E SIGLAS

APA Aacutereas de Proteccedilatildeo Ambiental

APPs Aacutereas de Preservaccedilatildeo Permanente

CEUA Comitecirc de Eacutetica de Uso Animal

DF Distrito Federal

DNA Aacutecido Desoxirribonucleacuteico

ELISA Ensaio de Imunoabsorccedilatildeo Enzimaacutetica

ETS Espaccedilador Externo Transcrito

FAL Fazenda Aacutegua Limpa

GDF Governo do Distrito Federal

IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos

Naturais Renovaacuteveis

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatiacutestica

IBRAM Instituto Brasiacutelia Ambiental

ICMBio Instituto Chico Medes de Biodiversidade

IGS Espaccediladores Intergecircnicos

IGS Espaccedilador Intergenocircmico

IM Intramuscular

ITS Internal Transcribed Spacer-

Regiatildeo Espaccediladora Transcrita Interna

ITS-1 Espaccediladores Internos Transcritos 1

ITS-2 Espaccediladores Internos Transcritos 2

JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

KOH Hidroacutexido de Potaacutessio

LC Leishmaniose Cutacircnea

LMC Leishmaniose Muco-cutacircnea

LSU Subunidade Maior

LTA Leishmaniose Tegumentar Americana

LV Leishmaniose Visceral

mgKg Miligramas por quilo

PBS Phosphate-buffered saline - Tampatildeo Fosfato Salino

PCR Polymerase Chain Reaction -Reaccedilatildeo da Polimerase em

Cadeia

PCR-RFLP Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restriccedilatildeo

PNB Parque Nacional de Brasiacutelia

RBC-DF Reserva da Biosfera do Cerrado no DF

RCO Regiatildeo Centro-Oeste

REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia Indireta

RNA Aacutecido Ribonucleacuteico

RNAr RNA ribossocircmico

SINAN-NET Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SSU Subunidade Menor

UC Unidades de Conservaccedilatildeo

UNB Universidade de Brasiacutelia

OMSWHO Organizaccedilatildeo Mundial de SauacutedeWorld Health Organization

OPAS Organizaccedilatildeo Pan-Americana da Sauacutede

CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento de Pessoal de Niacutevel

Superior

dNTPs

Deoxyribonucleotide Triphosphates ndash Desoxirribonucleotiacutedeo

Trifosfato)

Taq Thermus aquaticus

pb pares de bases

FINANCIAMENTO

O estudo foi financiado pela CAPES (processo ndeg127611 edital Parasitologia

Baacutesica) e pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical da

Universidade de Brasiacutelia

Sumaacuterio

1 INTRODUCcedilAtildeO

23

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas 23

12 Definiccedilatildeo 25

13 Epidemiologia 26

14 Agente Etioloacutegico 31

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose 35

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF 38

17 Vetores

40

18 Flebotomiacuteneos no DF 43

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp 45

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de Hospedeiros e Reservatoacuterios

46

111 A questatildeo ambiental do Distrito Federal 52

112 A fragmentaccedilatildeo florestal e as leishmanioses 55

113 Estrateacutegias de controle das leishmanioses 57

114 Diagnoacutestico parasitoloacutegico e imunoloacutegico das leishmanioses 58

115 Diagnoacutestico molecular das leishmanioses 61

116 Diagnoacutestico molecular da infecccedilatildeo por tripanossomatiacutedeos utilizando genes ribossocircmicos

62

2 JUSTIFICATIVA 64

3 OBJETIVOS 66

4 MATERIAL E MEacuteTODOS 67

41 Aacutereas de estudo 67

42 Amostragem de flebotomiacuteneos 70

43 Montagem dissecccedilatildeo e identificaccedilatildeo dos flebotomiacuteneos 71

44 Captura dos pequenos mamiacuteferos 71

45 Contenccedilatildeo e marcaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos 73

46 Coleta de material bioloacutegico 75

5 Resultados 77

51 Capiacutetulo 1 - Lista atualizada de flebotomiacuteneos (Diptera Psychodidae Phlebotominae) do Distrito Federal Brasil

77

RESUMO 78

Introduccedilatildeo 79

Material e Meacutetodos 80

Aacutereas de Estudo 80

Amostragem dos flebotomiacuteneos 81

Anaacutelise estatiacutestica 82

Resultados 82

Aspectos morfoloacutegicos para novos registros

88

Discussatildeo 93

52 Capiacutetulo 2 - Avaliaccedilatildeo de infecccedilatildeo natural por Leishmania spp em flebotomiacuteneos de matas de galeria do Distrito Federal Brasil

98

RESUMO 98

1 Introduccedilatildeo 100

2 Material e Meacutetodos 101

21 Amostragem dissecccedilatildeo e montagem dos flebotomiacuteneos 102

22 Extraccedilatildeo de DNA 103

23 PCR dirigida ao gene Cacophany 103

24 PCR dirigida ao gene SSU rDNA de tripanossomatiacutedeos 104

25 PCR dirigida ao ITS-I do rDNA 105

3 Resultados 106

4 Discussatildeo 111

53 Capiacutetulo 3 Ocorrecircncia de pequenos mamiacuteferos infectados por Leishmania spp em Matas de Galeria do Distrito Federal Brasil

115

RESUMO 115

1 Introduccedilatildeo 116

2 Material e meacutetodos 118

21 Aacuterea de estudo amostragem e identificaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos

118

22 Amostras bioloacutegicas e extraccedilatildeo do DNA 119

23 PCR dirigida ao gene SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos 120

24 PCR dirigida ao ITS- 1 do rRNA 121

25 Aspectos eacuteticos 122

26 Anaacutelise de dados 122

3 Resultados 123

4 Discussatildeo 137

41 Composiccedilatildeo da comunidade de mamiacuteferos no momento das coletas

137

42 Infecccedilatildeo natural por Leishmania spp nos pequenos mamiacuteferos das Matas de Galeria estudadas no Distrito Federal Brasil

141

6 Consideraccedilotildees Finais 148

7 Conclusotildees 151

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 152

9 ANEXOS 190

RESUMO

O conhecimento relacionado agrave transmissatildeo enzooacutetica de espeacutecies de

Leishmania no Distrito Federal ainda eacute escasso e a participaccedilatildeo de

flebotomiacuteneos e mamiacuteferos silvestres no ciclo de transmissatildeo desses

protozoaacuterios eacute objeto do presente estudo As aacutereas estudadas foram as matas

de galeria da Fazenda Aacutegua Limpa da Universidade de Brasiacutelia Reserva

Bioloacutegica da Contagem Parque Nacional de Brasiacutelia e Jardim Botacircnico de

Brasiacutelia em maio e setembro de 2014 O Capiacutetulo 1 traz a atualizaccedilatildeo da lista de

espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF Com esforccedilo de captura de 1280 armadilhas

HP e 16 armadilhas do tipo Shannon foram capturados 1209 flebotomiacuteneos

pertencentes a 16 espeacutecies Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espeacutecie

mais capturada Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia guimaraesi Br

brumpti Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas

pela primeira vez no DF ampliando a distribuiccedilatildeo geograacutefica das mesmas e

elevando para 35 o nuacutemero de espeacutecies registradas nessa unidade da

federaccedilatildeo O Capiacutetulo 2 analisou a infecccedilatildeo natural dos flebotomiacuteneos

capturados por Leishmania DNA foi extraiacutedo de 569 fecircmeas agrupadas em 87

ldquopoolsrdquo A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada agrave

amplificaccedilatildeo do gene cacophony da regiatildeo IVS6 A detecccedilatildeo dos

tripanossomatiacutedeos foi feita pela amplificaccedilatildeo das regiotildees SSU rRNA e ITS-1

Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp entretanto os

resultados do presente estudo natildeo implicam na inexistecircncia de vetores

infectados nestas matas de galeria O Capiacutetulo 3 analisou a ocorrecircncia e infecccedilatildeo

em pequenos mamiacuteferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp nas

mesmas aacutereas dos flebotomiacuteneos e nos mesmos periacuteodos Amostras de tecido

(fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamiacuteferos capturados e utilizadas

para a detecccedilatildeo molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e

PCR com alvo na regiatildeo ITS em 153 amostras Com um total de 5120

armadilhas-noite 172 pequenos mamiacuteferos foram capturados pertencentes agrave

trecircs espeacutecies de marsupiais (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis e

Monodephis americana) e seis espeacutecies de roedores (Rhipidomys macrurus

Oecomys bicolor Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys

rattus e Necromys lasiurus) Vinte amostras (1307) foram positivas

considerando ambos os marcadores moleculares quatro somente para SSU e

quatro somente para ITS As espeacutecies infectadas por Leishmania spp foram

Rhipidomys macrurus Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris Estas espeacutecies

devem participar da transmissatildeo enzooacutetica de Leishmania na REBIO FAL e JBB

sendo este o primeiro relato de mamiacuteferos silvestres infectados por este parasito

nestas duas uacuteltimas aacutereas Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se

que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espeacutecies incriminadas

vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenccedilatildeo da

transmissatildeo enzooacutetica desses tripanossomatiacutedeos

Palavras chaves Transmissatildeo enzooacutetica Leishmania spp roedores

marsupiais Phlebotominae Cerrado

ABSTRACT

Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce

and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis

transmission cycle is the subject of this study All samples were captured in

gallery forests of four areas Aacutegua Limpa Farm Biological Reserve of Contagem

Brasiliarsquos National Park and Botanic Garden of Brasiacutelia on May and September

2014 Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal

District The entire capture effort entailed 1280 HP light traps and 16 Shannon

traps 16 species were identified Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the

most captured species Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia

guimaraesi Br brumpti Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli

were registered for the first time in the Federal District elevating to 35 the number

of reported species at this federation unit Chapter 2 follows up the study of

Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies

DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools Fragments that

corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples

demonstrating the quality of the extracted DNA Trypanosomatids detection was

performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions All samples tested

negative for Leishmania spp Therefore negative results in the present study do

not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and

surroundings Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small

mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of

sandflies and during the same periods Tissue samples (ear tips) were obtained

from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested

PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples The entire

capture effort entailed 5120 night-traps and 172 small mammals from three

marsupials species (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis and Monodephis

americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus Oecomys bicolor

Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys rattus and Necromys

lasiurus) were captured Twenty samples (1307) were positive considering

both molecular markers four samples only for SSU and four sampes only for ITS

Leishmania spp infected species were Rhipidomys macrurus Gracilinanus

agilis and Didelphis albiventris These species might participate in the enzootic

transmition of Leishmania at REBIO FAL and JBB This is the first report of

Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas Considering all

results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species

from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the

maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Key words Enzootic transmission Leishmania spp rodents marsupials

Phlebotominae Brazilian savanna

23

1 Introduccedilatildeo

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) eacute uma doenccedila existente

desde a antiguidade cujos relatos e descriccedilotildees datam do seacutec I dC (Basano

amp Camargo 2004) Altamirano-Enciso et al (2003) relataram trecircs teorias de

origem da doenccedila nas Ameacutericas A primeira de 1890 em que Juliano Moreira

amp Aguiar Pupo propunham uma origem mediterracircnea enfatizando que os

casos observados em pacientes da Bahia (Brasil) doenccedila chamada ldquobotatildeo da

Bahiardquo eram parecidos ao ldquobotatildeo do Orienterdquo Segundo os mesmos autores a

LTA teria sido introduzida pelos feniacutecios ou siacuterios que supostamente

chegaram ao nordeste do Brasil ainda na Antiguidade No entanto tais

viagens jamais foram comprovadas historicamente ou arqueologicamente

A segunda teoria eacute a de origem andina formulada a partir dos

descobrimentos de peccedilas de ceracircmica preacute-colombianas ou ldquohuacos peruanosrdquo

em 1895 e reforccedilada pelos documentos do seacuteculo XVI Contudo a discussatildeo

dos dados histoacutericos dividiu-se em dois grupos uma primeira corrente

representada pelos defensores das chamadas ldquoevidecircnciasrdquo histoacutericas cujos

argumentos se reforccedilam pelos estudos das representaccedilotildees de lesotildees feitas

em objetos de ceracircmica e outro grupo de estudiosos que questionava essa

fonte histoacuterica por ser descrita por cronistas que natildeo eram meacutedicos Atribui-se

a essa discussatildeo grande importacircncia porque se passaram quase 80 anos

desde que Eduardo Rabello (1925) propocircs que as origens da leishmaniose

muco-cutacircnea (LMC) estariam inicialmente focalizadas nos territoacuterios frios

sugerindo as regiotildees da Boliacutevia e do Peru predominando esta teoria na

literatura biomeacutedica

24

Mais recentemente a chamada teoria monofileacutetica para origem das

leishmacircnias foi formulada por Thomas-Soccol et al (1993) que baseando-se

em estudos de DNA mitocondrial de 20 espeacutecies de leishmacircnias do mundo

consideram que os subgecircneros Viannia e Leishmania propostos por Lainson

amp Shaw (1972) tiveram origem comum desde os periacuteodos Cretaacuteceo e

Juraacutessico haacute 120 milhotildees de anos quando os continentes estavam unidos na

Pangeacuteia Contudo a questatildeo do local de origem das leishmacircnias continua

controversa entre as regiotildees Neotropical Paleaacutertica e Africana

Cerqueira no Brasil em 1855 observou a existecircncia da forma cutacircnea

identificando-a clinicamente como ldquobotatildeo de Biskrardquo e Breda em 1895 na

Itaacutelia descreveu a doenccedila em italianos provenientes de Satildeo Paulo

Lindenberg (1909) encontrou ldquoformas de Leishmaniardquo idecircnticas agrave

Leishmania tropica da leishmaniose do Velho Mundo em lesotildees cutacircneas de

indiviacuteduos que trabalhavam nas matas do interior do Estado de Satildeo Paulo o

que confirmou a natureza leishmanioacutetica das lesotildees cutacircneas e nasofariacutengeas

(Basano amp Camargo 2004) Gaspar Vianna redescreveu o parasito como L

braziliensis por consideraacute-lo diferente da L tropica e assim denominou-se o

agente etioloacutegico da uacutelcera de Bauru ferida brava ou nariz de tapir

(Basano amp Camargo 2004)

No Brasil ateacute a deacutecada de 1970 todos os casos de LTA eram atribuiacutedos a

L braziliensis (Basano amp Camargo 2004) entretanto com o progresso das

pesquisas ecoepidemioloacutegicas e com o desenvolvimento das teacutecnicas

moleculares outras espeacutecies foram descritas sendo registradas ateacute o

momento sete espeacutecies causadoras da LTA (Brasil 2010) A leishmaniose

visceral (LV) era confundida no passado com outras doenccedilas endecircmicas e de

apresentaccedilatildeo cliacutenica semelhante como a malaacuteria em humanos (Palmer

1998)

No iniacutecio de 1903 James Homer Wright de Baltimore observou formas de

protozoaacuterios em uacutelcera cutacircnea de uma crianccedila da Armecircnia suspeita de ser

acometida pelo Botatildeo do Oriente e propocircs o nome de Welcozoma tropicum

para o agente causal hoje conhecido como L tropica Em 30 de maio desse

25

ano o inglecircs William Boog Leishman obteve uma bioacutepsia de fiacutegado de um

soldado inglecircs morto pela doenccedila febre de dum-dumou kala-azar na Iacutendia

Dois meses depois em 11 de julho Charles Donovan tambeacutem em bioacutepsia do

baccedilo de outro soldado morto descobriu independentemente o agente

etioloacutegico do calazar que era semelhante ao parasito da tripanossomiacutease em

sua fase intracelular (Altamirano-Enciso et al 2003)

O nome do gecircnero Leishmania foi criado pelo meacutedico inglecircs Ronald Ross

mas o termo Leishmania donovani para o agente da LV foi proposto por

Laveran amp Mesnil em 1903 embora segundo Basano amp Camargo (2004)

Cunningham em 1885 na Iacutendia foi o primeiro a observar o parasito do gecircnero

em casos de LV A partir daquele ano foram descritos outros

tripanossomatiacutedeos em paiacuteses do mar Mediterracircneo e da Aacutesia araacutebica As

duacutevidas de que L donovani e L tropica fossem tripanossomatiacutedeos e natildeo

piroplasmas soacute foram dissipadas quando Rogers amp Nicolle (1904) e

posteriormente Nicolle (1908) e Carlos Chagas (1908) demonstraram as

formas flageladas de ambos os parasitos em meio de aacutegar sangue ldquoin vitrordquo

Sergent et al (1921) reproduziram o rdquobotatildeo do Orienterdquo em hamsters ao

inocularem macerados de Phlebotomus papatasi alimentados em soldados

franceses na Argeacutelia comprovando a associaccedilatildeo entre L tropica e

flebotomiacuteneos No Brasil Henrique Aragatildeo (1922) estudou um surto de LTA

no Rio de Janeiro e associou os casos agrave presenccedila de elevada quantidade de

flebotomiacuteneos infectados por L braziliensis Ao inocular triturados destes

flebotomiacuteneos no focinho de catildees foi observada ulceraccedilatildeo com a presenccedila

de formas amastigotas intracelulares (Altamirano-Enciso et al 2003)

12 Definiccedilatildeo

As leishmanioses satildeo um conjunto de doenccedilas resultantes da infecccedilatildeo

por protozoaacuterios digeneacuteticos (Negratildeo amp Ferreira 2014) pertencentes ao filo

Euglenozoa classe Kinetoplastea ordem Trypanosomatida famiacutelia

26

Trypanosomatidae (Cavalier-Smith 2016) gecircnero Leishmania (Ross 1903)

com caraacuteter zoonoacutetico Esses protozoaacuterios satildeo transmitidos por insetos

vetores conhecidos por flebotomiacuteneos (Laurenti 2010 Ready 2013) O fator

em comum das espeacutecies de Leishmania estaacute na necessidade de passar por

um hospedeiro invertebrado obrigatoriamente um flebotomiacuteneo (ver item 17)

para se reproduzirem e atingirem a forma infectante (Jones et al 2003)

As doenccedilas estatildeo amplamente distribuiacutedas em todo o mundo e dividem-se

em dois grandes grupos as leishmanioses dermotroacutepicas e as leishmanioses

viscerotroacutepicas (Negratildeo amp Ferreira 2009)

13 Epidemiologia

As leishmanioses representam uma das endemias de maior

importacircncia em sauacutede puacuteblica no mundo (Laurenti 2010) As mesmas satildeo

consideradas emergentes em franca expansatildeo associada agrave pobreza e ao

deslocamento da populaccedilatildeo para aacutereas com ciclos de transmissatildeo existentes

sendo incluiacutedas na lista de Doenccedilas Tropicais Negligenciadas (WHO 2014)

As leishmanioses tecircm ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica sendo possiacutevel observar

casos da doenccedila em todos os continentes com exceccedilatildeo da Antaacutertica (Figura

1) (WHO 2009)

27

FIGURA 1 Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A

Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO

2016

Segundo a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (WHO 2016) satildeo estimados

900 mil a 16 milhatildeo de novos casos de leishmanioses destes 02 a 04

milhatildeo de novos casos de LV e 07 a 12 milhotildees de novos casos de LT onde

20 mil a 30 mil mortes ocorrem anualmente no mundo Ainda de acordo com

A

B

28

dados da WHO (2016) mais de 98 paiacuteses e territoacuterios satildeo endecircmicos para as

leishmanioses Destes 72 paiacuteses estatildeo em processo de desenvolvimento

incluindo 13 dos menos desenvolvidos e sua notificaccedilatildeo eacute compulsoacuteria em

apenas 30 deles (Negratildeo amp Ferreira 2014) Nas Ameacutericas as leishmanioses

ocorrem em 21 paiacuteses com expansatildeo geograacutefica associada agrave antropizaccedilatildeo

dos ciclos de transmissatildeo de Leishmania com o desmatamento abertura de

estradas e urbanizaccedilatildeo de aacutereas primitivas que tem favorecido o ciclo

peridomiciliar da doenccedila (Dedet 1999 Negratildeo amp Ferreira 2014)

As formas viscerotroacutepica e dermotroacutepica tecircm despertado especial

interesse devido a sua importacircncia meacutedica e econocircmica em aacutereas endecircmicas

em regiotildees tropicais e subtropicais da Ameacuterica Aacutefrica Iacutendia e paiacuteses nas

margens do Mediterracircneo (Negratildeo amp Ferreira 2009)

A LTA eacute encontrada em todos os paiacuteses das regiotildees tropicais e

subtropicais do mundo (Gontijo amp Carvalho 2003) exceto na Austraacutelia Nova

Zelacircndia e algumas ilhas do Paciacutefico Essa irregularidade na distribuiccedilatildeo

mundial eacute enfatizada pelo fato que os 90 dos casos tem ocorrido em apenas

seis paiacuteses Afeganistatildeo Brasil Iratilde Peru Araacutebia Saudita e Siacuteria (WHO 2008

Negratildeo amp Ferreira 2014) A doenccedila eacute descrita em quase todos os paiacuteses

americanos do sul dos Estados Unidos agrave Patagocircnia ao norte extremo da

Argentina (Millaacuten et al 2016) com exceccedilatildeo do Uruguai e do Chile (Lainson

1981) verificando-se a distribuiccedilatildeo das diversas formas clinico

epidemioloacutegicas com estreita relaccedilatildeo com condiccedilotildees floriacutesticas e fauniacutesticas

(Teodoro 1997) Na Ameacuterica Latina eacute assinalada desde a peniacutensula de

Yucataacuten Meacutexico (Castro 2002) compreendendo as proviacutencias do norte da

Argentina (Salomoacuten 2010 Millaacuten et al 2016) alcanccedilando maior importacircncia no

Brasil aleacutem do Peru

Negratildeo amp Ferreira (2014) consideraram que na Ameacuterica do Sul a LTA

apresenta dois padrotildees epidemioloacutegicos o padratildeo claacutessico constituiacutedo por

surtos epidecircmicos associados agrave derrubada de matas para a construccedilatildeo de

estradas e povoados e o padratildeo associado agraves formas de ocupaccedilatildeo do espaccedilo

em regiotildees de colonizaccedilatildeo antiga

29

A maioria dos casos de leishmanioses nas Ameacutericas eacute proveniente do

Brasil (Alvar et al 2012) onde as mesmas apresentam distribuiccedilatildeo em todas

as regiotildees geograacuteficas desde 2003 com maior incidecircncia observada no

Nordeste brasileiro (WHO 2014) No Brasil estatildeo incluiacutedas na lista de

doenccedilas que compotildeem o Sistema de Informaccedilatildeo de Doenccedilas de Notificaccedilatildeo

Compulsoacuteria (Brasil 2010)

De acordo com WHO (2016) no ano de 2014 foram notificados 3453

casos de LV no Brasil dos quais 82 com confirmaccedilatildeo laboratorial Para a

leishmaniose tegumentar (LT) foram notificados 19402 casos e 89

confirmados por exames De acordo com a mesma fonte 43 da populaccedilatildeo

brasileira estaacute sob o risco de LV (86997054 200362200) e 70 sob o risco

de LT (139396846200362200) Entre os fatores de risco para a ocorrecircncia

das leishmanioses encontra-se a subnutriccedilatildeo com dietas pobres em

proteiacutenas ferro vitamina A e zinco que pode comprometer a imunidade dos

indiviacuteduos aumentando o risco de uma infecccedilatildeo se agravar a precariedade

das condiccedilotildees sanitaacuterias domeacutesticas como a falta de gestatildeo de resiacuteduos e

esgoto a ceacuteu aberto que podem aumentar os locais de criaccedilatildeo e repouso de

flebotomiacuteneos e bem como o seu acesso aos seres humanos a migraccedilatildeo e

a exposiccedilatildeo ocupacional onde as pessoas ao se movimentarem ou se

estabelecerem em aacutereas de florestas ficam mais proacuteximas do habitat de

flebotomiacuteneos mudando o perfil epidemioloacutegico das doenccedilas (WHO 2014)

Negratildeo amp Ferreira (2014) estudaram a dispersatildeo da LT nas Ameacutericas e

relataram que o crescimento migratoacuterio aliado ao processo histoacuterico de

organizaccedilatildeo espacial nas uacuteltimas deacutecadas tem propiciado a proliferaccedilatildeo de

aacutereas de alto risco e infecccedilatildeo por Leishmania em aacutereas urbanas brasileiras

ora associadas a aacutereas verdes e outras como consequecircncia do desequiliacutebrio

ecoloacutegico evidenciada em algumas aacutereas periurbanas ou associadas agraves

aacutereas de desmatamentos Os mesmos autores enfatizaram que dentro dos

limites geograacuteficos da ocorrecircncia da doenccedila sua extensatildeo e severidade

variavam pelo endemismo ou ocorrecircncia esporaacutedica com condiccedilotildees

ecoloacutegicas especiacuteficas em diferentes regiotildees A distribuiccedilatildeo espacial da

doenccedila em territoacuterio brasileiro eacute resultado de diferentes condiccedilotildees geograacuteficas

30

ou ecoloacutegicas potencializadas pelo planejamento governamental inadequado

ou ineficiente em accedilotildees que promovam a conscientizaccedilatildeo visando o controle

prevenccedilatildeo ou detecccedilatildeo precoce da infecccedilatildeo em aacutereas de risco Para os

centros urbanos eacute de grande importacircncia o conhecimento de aacutereas que

podem oferecer risco agrave populaccedilatildeo exposta agraves formas de LTA de ocorrecircncia

ligadas ao ambiente (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Outro aspecto relevante dentro deste contexto de expansatildeo e urbanizaccedilatildeo

das leishmanioses em todo o mundo e principalmente no Brasil eacute a

possibilidade de se adquirir a doenccedila a partir de transfusotildees sanguiacuteneas (Luz

et al 1997 Urias et al 2009) Este fato eacute agravado em funccedilatildeo do diagnoacutestico

soroloacutegico para a LV natildeo estar incluiacutedo ainda na triagem dos doadores do

paiacutes (Laurenti 2010) que se restringe a triagem laboratorial normatizada das

seguintes doenccedilas doenccedila de Chagas siacutefilis hepatite B HIV malaacuteria HTLV

1 e 2 (Anvisa 2004)

Karagiannis-Voules et al (2013) associaram as doenccedilas a fatores soacutecio-

econocircmicos e agrave precipitaccedilatildeo Clima precipitaccedilatildeo temperatura e umidade satildeo

fatores que podem alterar as distribuiccedilotildees e influenciar na sobrevivecircncia e no

tamanho das populaccedilotildees de vetores e de hospedeiros reservatoacuterios

Flutuaccedilotildees na temperatura podem ter um efeito profundo no ciclo de

desenvolvimento de promastigotas de Leishmania em flebotomiacuteneos

permitindo a transmissatildeo do parasito em aacutereas anteriormente natildeo endecircmicas

para as doenccedilas Alteraccedilotildees climaacuteticas que levam agrave seca fome e inundaccedilotildees

podem levar ao deslocamento em massa e a migraccedilatildeo de pessoas para aacutereas

com transmissatildeo de leishmanioses (WHO 2014)

Acredita-se que os nuacutemeros de casos notificados natildeo correspondam a

evoluccedilatildeo da LTA devido agrave demora com que o paciente procura o sistema de

sauacutede e o difiacutecil diagnoacutestico por parte do proacuteprio sistema Mesmo levando-se

em conta as falhas de notificaccedilatildeo compulsoacuteria eacute evidente o crescente nuacutemero

de casos novos e a intensidade que atinge o homem sendo proporcional agraves

alteraccedilotildees ambientais decorrentes de atividades humanas em aacutereas

especiacuteficas na aacuterea de estudo proposta A prevalecircncia das diferentes

leishmanioses no continente americano eacute difiacutecil de ser mensurada devido

31

principalmente a subnotificaccedilotildees diagnoacutesticos incorretos afecccedilotildees

inaparentes variaccedilotildees de resposta do hospedeiro e multiplicidade de agentes

etioloacutegicos envolvidos (Marzochi 1992)

14 Agente Etioloacutegico

As infecccedilotildees em seres humanos e em animais por protozoaacuterios do

gecircnero Leishmania recebem denominaccedilotildees variadas mas podem ser

agrupadas com base em suas caracteriacutesticas comuns De acordo com

Akhoundi et al (2016) satildeo conhecidas 53 espeacutecies de Leishmania

pertencentes a cinco subgecircneros e complexos (Leishmania Viannia

Sauroleishmania complexo L enriettii e Paraleishmania) Desse total 31

espeacutecies parasitam espeacutecies de mamiacuteferos sendo que pelo menos 20 delas

infectam seres humanos Uma vez que as formas amastigotas satildeo

morfologicamente similares (Jubb et al1993 Palmer 1998) a diferenciaccedilatildeo

das espeacutecies que parasitam seres humanos eacute realizada por testes

moleculares indispensaacuteveis para o diagnoacutestico (Zampieri et al 2016)

As espeacutecies de Leishmania tecircm ciclos bioloacutegicos similares (Laurenti

2010) apresentando duas formas principais a amastigota observada dentro

de ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear em tecidos dos hospedeiros

vertebrados e a promastigota encontrada no sistema digestoacuterio de

flebotomiacuteneos fecircmeas (Figura 2) (Rey 2002) Ambos amastigotas e

promastigotas dividem-se repetidamente por divisatildeo binaacuteria (Palmer 1998)

32

FIGURA 2 ndash Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte

Rey 2002ndash CD room (Modificado)

No hospedeiro vertebrado as formas amastigotas encontram-se no

interior de vacuacuteolos parasitoacuteforos em macroacutefagos e ceacutelulas reticuloendoteliais

e medem cerca de 1 a 2 microm de largura por 2 a 4 microm de comprimento (Palmer

1988 Jones et al 2003) Esta forma se multiplica por divisatildeo assexuada ateacute o

rompimento da ceacutelula disseminando-se pela via hematogecircnica e linfaacutetica

para outros tecidos ricos em ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear como

linfonodos fiacutegado baccedilo medula oacutessea placas de Peyer por exemplo

iniciando uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria e proporcionando a atraccedilatildeo de outros

macroacutefagos gerando um ldquociclo viciosordquo (Figura 3) (Palmer 1998 Basano amp

Camargo 2004)

A forma amastigota da Leishmania eacute tipicamente ovoacuteide ou esfeacuterica

natildeo possui flagelo e nem membrana ondulatoacuteria (Palmer 1998) apenas um

rudimento de flagelo que estaacute presente na bolsa flagelar caracterizada como

uma pequena invaginaccedilatildeo da membrana do parasito (Figura 2) (Laurenti

2010) Nas preparaccedilotildees coradas por Romanovsky esses organismos

apresentam um citoplasma azul paacutelido contendo nas proximidades da

33

extremidade posterior um nuacutecleo uacutenico avermelhado com um cariossoma

central que se cora mais profundamente Tangenciando e anterior ao nuacutecleo

encontra-se um corpo em forma de bastonete e com uma cor violeta escuro o

cinetoplasto que conteacutem o corpo parabasal e o blefaroplasto em forma de

pinta (Figura 2) (Jones et al 2003) A forma amastigota conteacutem duas

concentraccedilotildees de DNA no nuacutecleo e em uma mitococircndria modificada o

cinetoplasto (Palmer 1998)

No seu hospedeiro invertebrado ou em culturas os organismos

assumem formas que variam desde a forma amastigota ateacute a forma de pro-

mastigota essa uacuteltima eacute esguia e fusiforme medindo cerca de 14 a 20microm de

comprimento e 15 a 4microm de largura Esta forma tem motilidade por meio de

um flagelo que se origina no blefaroplasto e projeta-se desde o poacutelo anterior

do organismo O cinetoplasto se situa na extremidade anterior do corpo

(Figura 2) (Jones et al 2003)

O flebotomiacuteneo hospedeiro invertebrado ao sugar sangue de um

animal infectado se infecta ao ingerir histioacutecitos da derme ou monoacutecitos do

sangue contendo formas amastigotas de Leishmania em seu citoplasma

(Basano amp Camargo 2004) Em seu intestino meacutedio e glacircndulas salivares as

leishmacircnias sofrem modificaccedilotildees morfoloacutegicas e bioquiacutemicas se congregam

na vaacutelvula cardiacuteaca onde o intestino anterior projeta-se no intestino meacutedio e

se transformam em promastigotas (com flagelo livre) que aderem ao epiteacutelio

do tubo digestoacuterio onde se multiplicam amplamente por divisotildees binaacuterias A

populaccedilatildeo daiacute resultante migra para a parte anterior do tubo digestoacuterio do

inseto diferenciando-se para formas promastigotas infectantes por volta de 3-

4 dias com invasatildeo da faringe do inseto sendo tambeacutem as chamadas formas

de promastigotas metaciacuteclicas encontradas na buco-faringe destes insetos

Quando os parasitos atingem o proacute-ventriacuteculo do inseto causam uma

obstruccedilatildeo no tubo digestoacuterio dificultando a ingestatildeo de sangue e levando a

fecircmea entatildeo faminta a picar muitas vezes pessoas ou animais Tais insetos

ao sugarem sangue (injetando na picada da pele a sua saliva e a saliva

apresentando propriedade anticoagulante homesostaacutetica anesteacutesica e

vasodilatadora) injetam tambeacutem as formas infectantes da Leishmania a qual

34

caindo na circulaccedilatildeo sanguiacutenea deste novo hospedeiro (vertebrado) vai

desenvolver a doenccedila numa das formas cliacutenicas conhecidas (Figura 3)

(Palmer 1998) ou na maioria dos casos levar a infecccedilotildees assintomaacuteticas e

autoresolutivas (Fukutani 2014)

FIGURA 3 ndash Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral

Leishmaniasis (LV) CL Cutaneous Leishmaniasis (LT) Fonte TDR ndash

Wellcome Trust

35

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose

Os protozoaacuterios do gecircnero Leishmania apresentam diferentes

distribuiccedilotildees geograacuteficas e as enfermidades por eles causadas satildeo

relativamente distintas embora possa haver superposiccedilatildeo nos sinais e

cliacutenicos e lesotildees (Jones et al 2003) Cerca de 20 espeacutecies de Leishmania satildeo

patogecircnicas para o ser humano (Laurenti 2010) As leishmanioses se

manifestam de quatro formas diferentes a depender da espeacutecie de

Leishmania envolvida e do estado imunoloacutegico do hospedeiro i) visceral

tambeacutem conhecida como calazar a forma mais grave da doenccedila ii) cutacircnea

a mais comum iii) mucocutacircnea e iv) cutacircnea difusa A LV eacute uma doenccedila

crocircnica sistecircmica que afeta os oacutergatildeos como o fiacutegado e o baccedilo A LTA inclui

as formas cutacircnea cutacircnea difusa e mucocutacircnea caracterizadas pela

formaccedilatildeo de uacutelceras na pele (Brasil 2006 2010)

A LV eacute principalmente causada por L donovani (Jubb et al 1993) Nas

Ameacutericas Central e Sul Leishmania infantum (syn L chagasi) eacute a espeacutecie

envolvida na patogenia (Brasil 2006)

A patogenia das leishmanioses eacute fortemente influenciada por fatores

inerentes ao hospedeiro como suas caracteriacutesticas geneacuteticas e resposta

imunoloacutegica por fatores inerentes ao parasito como a virulecircncia da espeacutecie

de Leishmania infectante e por fatores inerentes ao vetor como sua

capacidade vetorial Como resultado dessa interaccedilatildeo entre as diferentes

espeacutecies do parasito do vetor e dos mecanismos da resposta imunoloacutegica do

hospedeiro vertebrado um espectro de manifestaccedilotildees cliacutenicas

histopatoloacutegicas e imunoloacutegicas eacute observado no homem (Laurenti 2010)

Imunologicamente apoacutes a inoculaccedilatildeo do parasito aqueles animais que seratildeo

resistentes agrave infecccedilatildeo promovem a ativaccedilatildeo de ceacutelulas TCD4+Th1 que

produziratildeo entre outras as citocinas interferon gama fator de necrose

tumoral alfa e interleucinas (IL) 2 e 12 Estas por sua vez ativaratildeo

macroacutefagos que faratildeo a destruiccedilatildeo das formas amastigotas intracelulares

(Pinelli et al 1995) Segundo os mesmos autores as ceacutelulas TCD8 citotoacutexicas

36

tambeacutem podem estar envolvidas na resistecircncia agrave doenccedila Jaacute nos animais que

manifestaratildeo sinais cliacutenicos da doenccedila haveraacute uma supressatildeo das ceacutelulas

TCD4+Th1 e ativaccedilatildeo das ceacutelulas TCD4+Th2 com produccedilatildeo de IL-4 IL-5 IL-

6 IL-10 IL-13 responsaacuteveis pela proliferaccedilatildeo de ceacutelulas B e

consequentemente produccedilatildeo de grande quantidade de anticorpos (Pinelli et al

1994 1999) Anticorpos estes natildeo protetores mas muitas vezes danosos

pois formaratildeo imunocomplexos que poderatildeo ser depositados nas membranas

basais de vaacuterios oacutergatildeos (Slappendel 1988 Martinez-Moreno et al 1995)

Usualmente a LV eacute observada como enfermidade debilitante crocircnica

com periacuteodos de febre perda de peso gradual anemia e leucopenia (Jones et

al 2003) Patologicamente o fiacutegado pode conter numerosos granulomas e eacute

simetricamente aumentado e marrom escuro O baccedilo eacute maior em duas a trecircs

vezes o seu tamanho normal simetricamente aumentado e marrom-escuro a

preto na sua superfiacutecie capsular Os linfonodos estatildeo moderadamente

aumentados e irregulares sem outras mudanccedilas significativas na cavidade

abdominal exceto os rins que podem estar mais escuros que o normal (Jubb

et al 1993) A medula oacutessea eacute uniformemente avermelhada e amolecida

(Jones et al 2003)

As lesotildees microscoacutepicas da LV caracterizam-se por uma infiltraccedilatildeo

maciccedila em vaacuterios sistemas do organismo de enormes macroacutefagos cujo

citoplasma estaacute repleto de leishmacircnias A arquitetura dos linfonodos e do

baccedilo pode estar completamente obscurecida pelas ceacutelulas fagocitaacuterias

(Jones et al 2003)

Os foliacuteculos esplecircnicos satildeo hiperplaacutesicos geralmente com hialinose

folicular Em casos avanccedilados haacute atrofia de nodos e baccedilo e as aacutereas dos

sinus podem estar difusamente ocupadas por grandes macroacutefagos altamente

carregados com organismos intracitoplasmaacuteticos e numerosas ceacutelulas

plasmaacuteticas As lesotildees na medula oacutessea podem ser focais e consistem de

grupos de macroacutefagos epitelioacuteides com organismos fagocitados As

alteraccedilotildees renais satildeo variaacuteveis e podem consistir em manchas intersticiais

com algum envolvimento parasitaacuterio (Jubb et al 1993) e por este motivo

utiliza-se os criteacuterios de classificaccedilatildeo da Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede que

37

inclui glomerulopatias com alteraccedilotildees miacutenimas glomeruloesclerose

segmentar focal glomerulonefrite membranoproliferativa glomerulonefrite

proliferativa mesangial glomerulonefrite membranosa glomerulonefrite

crescecircntica e glomerulonefrite crocircnica (Churg et al 1985)

A LT eacute causada por 18 espeacutecies de Leishmania patogecircnicas para os

seres humanos (Ready 2013) A LT causada por L tropica e L major ocorre

principalmente no sul da Europa e nos paiacuteses do norte da Aacutefrica que

circundam o Mediterracircneo (Jones et al 2003) Nas Ameacutericas assim

denominada LTA a infecccedilatildeo humana ocorre por 11 espeacutecies (Ready 2013)

agrupadas nos subgecircneros Leishmania e Viannia onde as trecircs espeacutecies mais

importantes do subgecircnero Leishmania satildeo L mexicana L amazonensis e L

venezuelensis e do subgecircnero Viannia satildeo L braziliensis L panamensis L

peruviana e L guyanensis

A infecccedilatildeo caracteriza-se por uacutelceras ou noacutedulos uacutenicos ou muacuteltiplos na

pele com lento desenvolvimento e que habitualmente cicatrizam-se

espontaneamente depois de um periacuteodo de meses (Jones et al 2003) As

lesotildees cutacircneas tomam forma de uma uacutelcera crocircnica que se desenvolve de

paacutepulas inflamatoacuterias no local da picada do inseto Linfoacutecitos e ceacutelulas

plasmaacuteticas margeiam a lesatildeo e os neutroacutefilos satildeo atraiacutedos para os debris

Quando a inflamaccedilatildeo se estende agrave borda epitelial a ulceraccedilatildeo ocorre Muitos

parasitos estatildeo no interior de histioacutecitos e alguns estatildeo livres no tecido (Jubb

et al 1993) As lesotildees de longa duraccedilatildeo estatildeo circunscritas por um tecido

conjuntivo fibroblaacutestico o que lhes daacute um aspecto de granuloma tiacutepico (Jones

et al 2003)

A leishmaniose mucocutacircnea uma das formas cliacutenicas da LTA ocorre

no Meacutexico e nas Ameacutericas Central e do Sul A infecccedilatildeo parece com a

cutacircnea mas aleacutem da pele com frequecircncia as uacutelceras crocircnicas com bordas

elevadas e fundo granuloso estatildeo localizadas nas junccedilotildees mucocutacircneas e

podem ocorrer nas cavidades oral e nasal (Jones et al 2003 Brasil 2010

Laurenti 2010)

38

No Brasil jaacute foram identificadas sete espeacutecies responsaacuteveis pela LTA

sendo seis do subgecircnero Viannia e uma do subgecircnero Leishmania As trecircs

espeacutecies mais encontradas satildeo L braziliensis L guyanensis e L

amazonensis As espeacutecies L lainsoni L naiffi L lindenbergi e L shawi foram

identificadas mais recentemente em estados das regiotildees Norte e Nordeste

(Brasil 2010)

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF

Entre 2001 e 2012 cerca de 3000 casos confirmados de LV e 50 mil de

LTA foram registrados na regiatildeo Centro-Oeste do Brasil (RCO)

(wwwsaudegovbr) onde haacute pelo menos 127 espeacutecies de flebotomiacuteneos

registradas (Almeida et al 2015) Essa regiatildeo eacute coberta em sua maioria pelo

bioma Cerrado onde haacute vasta expansatildeo agropecuaacuteria e ocupaccedilatildeo do solo

devido o crescimento urbano desordenado o que poderia favorecer a

ocorrecircncia das leishmanioses (Galati et al 1996 Carranza-Tamayo et al

2010) O Centro-Oeste se destaca atualmente por estar se tornando um poacutelo

de atraccedilatildeo de populaccedilatildeo das demais regiotildees brasileiras devido agrave expansatildeo

da fronteira agriacutecola (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Um estudo da distribuiccedilatildeo territorial da LTA no Brasil (Negratildeo amp Ferreira

2014) mostrou que o Centro-Oeste corresponde a segunda maior regiatildeo em

coeficiente de detecccedilatildeo da doenccedila de 2001 a 2010 (199 casos por 100000

habitantes) Em Goiaacutes o nuacutemero de municiacutepios com registro da doenccedila

passou de 71 (306) em 1994 para 118 (487) em 1999 o que

corresponde a um acreacutescimo de 67 (Costa 2005) O Estado do Mato Grosso

eacute detentor do terceiro maior coeficiente de detecccedilatildeo ndash 765 casos por 100000

habitantes O Distrito Federal (DF) registra a transmissatildeo da LTA de

ocorrecircncia ciacuteclica desde 1992 e a partir de entatildeo apresenta coeficientes de

detecccedilatildeo bem inferiores ao que eacute considerado como baixo segundo

paracircmetros do Ministeacuterio da Sauacutede (lt25 casos por 100000 habitantes)

39

(Carvalho et al 2010) Com a expansatildeo das fronteiras agriacutecolas nesta regiatildeo

principalmente nos estados de Mato Grosso e Goiaacutes estes Estados passaram

a ser importante rota de fixaccedilatildeo do homem

No DF haacute evidecircncia de transmissatildeo autoacutectone de LTA O nuacutemero de casos

notificados de LTA procedentes do DF nos anos de 2003 2004 e 2005 foi de

31 57 e 26 respectivamente (Sampaio et al 2009) O primeiro caso de LV

autoacutectone no DF ocorreu em 2005 e trecircs oacutebitos foram confirmados ateacute 2009

(Carranza-Tamayo et al 2010) Entre 2007 e 2012 24 casos humanos de LV

autoacutectone foram registrados (SESDF 2012) Em 2013 foram notificadas no

Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo ndash SINANNET 98 pessoas

com suspeita de LV e 47 foram confirmadas sendo dois casos autoacutectones

provenientes de Sobradinho e Lago Norte dos quais um veio a oacutebito

Segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das Leishmanioses no DF para

o ano de 2015 dos 142 casos de LV notificados 39 foram confirmados

destes trecircs autoacutectones e 36 importados Foram atendidos 39 pacientes nas

unidades hospitalares do DF desses quatro evoluiacuteram a oacutebito dos quais um

autoacutectone da RA da Fercal e trecircs importados De janeiro a marccedilo de 2016

foram notificados 28 casos de LV dentre eles um caso autoacutectone proveniente

do Lago Norte aleacutem de sete importados e dois em investigaccedilatildeo para a

definiccedilatildeo do Local Provaacutevel de Infecccedilatildeo (LPI) Dos dez casos confirmados em

2016 foram atendidos dez pacientes nas unidades hospitalares do DF

desses dois evoluiacuteram a oacutebito dos quais um importado do estado de Goiaacutes e

um encontra-se em investigaccedilatildeo para definir o LPI

Em relaccedilatildeo agrave LTA no DF segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das

Leishmanioses no DF para o ano de 2015 foram confirmados 50 casos

destes 35 satildeo residentes do DF 14 de outras Unidades Federadas e um da

Guiana Francesa Dos 50 casos confirmados 35 satildeo importados nove

indeterminados seis em investigaccedilatildeo e nenhum autoacutectone Natildeo foi registrado

nenhum oacutebito relacionado agrave LTA no periacuteodo Dados do Boletim

Epidemioloacutegico de janeiro a marccedilo de 2016 confirmam sete casos da doenccedila

mas nenhum caso autoacutectone foi registrado Aleacutem disso nos uacuteltimos anos tecircm

sido registrados casos de LV em catildees domeacutesticos nas regiotildees norte e sul do

40

DF que vem sofrendo com a urbanizaccedilatildeo descontrolada da sua aacuterea rural

(Carranza-Tamayo et al 2010 Cardoso et al 2015)

17 Vetores

Flebotomiacuteneos (ordem Diptera famiacutelia Psychodidae subfamiacutelia

Phlebotominae) satildeo insetos com ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica ocorrendo sob

as mais diversas condiccedilotildees climaacuteticas e de altitude nos ambientes silvestres

rurais e urbanos Atualmente conhece-se cerca de 1003 espeacutecies das quais

537 estatildeo presentes na regiatildeo Neotropical e Neoaacutertica destas 277 foram

registradas no Brasil representando 28 do total e 53 das que ocorrem na

Regiatildeo Neotropical (Shimabukuro et al 2017) Dezenove espeacutecies de

flebotomiacuteneos estatildeo incriminadas como vetoras de espeacutecies de Leishmania

(Basano amp Camargo 2004 Shimabukuro amp Galati 2010)

Flebotomiacuteneos satildeo insetos pequenos de cor parda (ldquomosquito-palhardquo) e

de corpo cerdoso que normalmente natildeo ultrapassam 05 cm de comprimento

tecircm pernas longas e delgadas e apresentam como caracteriacutestica o voo

saltitante Ao contraacuterio dos outros diacutepteros os flebotomiacuteneos mantecircm a

postura ereta das asas mesmo em repouso Apenas as fecircmeas fazem

repasto sanguiacuteneo por serem adaptadas com o aparelho bucal picador-

sugador (Killick-Kendrick1999 Basano amp Camargo 2004) A hematofagia eacute

indispensaacutevel ao desenvolvimento ovariano (Carrera 1991) Entre os

inuacutemeros nomes populares que variam segundo os paiacuteses e as suas regiotildees

encontram-se mosquito palha asa dura asa branca tatuquira birigui

cangalha cangalhinha ligeirinho peacutela-eacutegua arrupiado (Martins et al 1978)

As formas imaturas podem ser encontradas em seus criadouros em solo

uacutemido mas natildeo molhado e em detritos ricos em mateacuteria orgacircnica em

decomposiccedilatildeo (Brazil amp Brazil 2003)

41

As fecircmeas dos flebotomiacuteneos geralmente apresentam haacutebito noturno

procuram fazer repasto sanguiacuteneo ao entardecer e comeccedilo da noite quando

transmitem o parasito para o novo hospedeiro Jaacute os machos alimentam-se de

frutas seiva de plantas entre outros por breve periacuteodo (Killick-

Kendrick1999) Durante o dia os flebotomiacuteneos procuram abrigo ou no

interior das residecircncias ou em matas em local protegido dos ventos Satildeo

frequentemente encontrados em tocas de outros animais como tatu buracos

em paredes de construccedilotildees ocos de paus ou bambus ou similares Em matas

fechadas devido a pouca luz em seu interior podem ser vistos mesmo

durante o dia inclusive ativos a procura de possiacuteveis animais ou o proacuteprio

homem para ser sugado (Basano amp Camargo 2004)

Killick‐Kendrick (1990) propotildeem quatro criteacuterios que devem ser

observados antes de se incriminar uma espeacutecie como vetora de zoonoses

satildeo eles alimentar-se em humanos e no reservatoacuterio animal manter os

parasitos apoacutes a ingestatildeo exibir parasitos indistinguiacuteveis daqueles isolados

de pacientes e transmitir o parasito pela picada Adicionalmente Ready (2013)

propotildee o criteacuterio relacionado a influecircncia da abundacircncia do vetor na

incidecircncia da leishmaniose comprovada por modelos matemaacuteticos

No Brasil as principais espeacutecies envolvidas na transmissatildeo da LTA satildeo

Bichromomyia flaviscutellata Nyssomyia whitmani Ny umbratilis Ny neivai

Psychodopygus wellcomei e Migonemyia migonei (Barbosa et al 2008 Ready

2013 Diniz et al 2014) Estas espeacutecies de flebotomiacuteneos foram definidas

como potenciais vetores de acordo com o Manual de Vigilacircncia da

Leishmaniose Tegumentar Americana do Ministeacuterio da Sauacutede por atenderem

a alguns dos criteacuterios que atribuem a uma espeacutecie a capacidade vetorial

segundo Killick-Kendrick amp Ward (1981) Killick-Kendrick (1990) e Ready

(2013) Cabe ressaltar que o papel vetorial de cada uma dessas espeacutecies

dependeraacute da espeacutecie de Leishmania presente no intestino da sua

capacidade de se infectar e transmitir o parasito a um novo hospedeiro (Brasil

2010 Pita-Pereira et al 2009 2011)

O principal vetor da LV nas Ameacutericas eacute o flebotomiacuteneo Lutzomyia

longipalpis espeacutecie bem adaptada ao ambiente peridomeacutestico e com ampla

42

distribuiccedilatildeo geograacutefica (Brasil 2010) poreacutem outros flebotomiacuteneos tambeacutem

podem estar participando do ciclo de LV principalmente nas aacutereas onde Lu

longipalpis eacute ausente (de Souza et al 2003 de Carvalho et al 2010)

Lutzomyia cruzi parece participar como vetor nos municiacutepios de Corumbaacute e

LadaacuterioMS na fronteira entre Brasil e Boliacutevia (Dos Santos et al 1998) e

Pintomyia (Pifanomyia) evansi eacute tambeacutem um importante vetor na Colocircmbia

(Travi et al 1990 Oviedo amp Moreno 1995 Montoya-Lerma amp Lane 1996 Travi

et al 1996) e Venezuela (Pifano 1964 Feliciangeli et al 1998)

43

18 Flebotomiacuteneos no DF

Atualmente conhece-se 29 espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF (Quadro1)

QUADRO 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte

Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al

2015 Galati 2015

Espeacutecies

Brumptomyia avellari (Costa Lima 1932)

Brumptomyia pintoi (Costa Lima 1932)

Micropygomyia longipennis (Barretto 1946)

Micropygomyia acanthopharynx (Martins Falcatildeo amp Silva 1962)

Micropygomyia quinquefer (Dyar 1929)

Evandromyia bacula (Martins Falcatildeo amp Silva 1965)

Evandromyia evandroi (Costa Lima amp Antunes 1936)

Evandromyia corumbaensis (Galati Nunes Oshiro amp Rego 1989)

Evandromyia teratodes (Martins Falcatildeo amp Silva 1964)

Evandromyia sallesi (Galvatildeo amp Coutinho 1939)

Evandromyia saulensis (Floch amp Abonnenc 1944)

Evandromyia lenti (Mangabeira 1938)

Pintomyia christenseni (Young amp Duncan 1994)

Pintomyia kuscheli (Le Pont Martinez Torrez-Espejo amp Dujardin 1998)

Pintomyia monticola (Costa Lima 1932)

Pintomyia fischeri (Pinto 1926)

Sciopemyia servulolimai (Damasceno amp Causey 1945)

Continua

44

Sciopemyia sordellii (Shannon amp Del Ponte 1927)

Lutzomyia longipalpis (Lutz amp Neiva 1912)

Lutzomyia ischnacantha Martins Souza amp Falcatildeo 1962

Psathyromyia lutziana (Costa Lima 1932)

Psathyromyia runoides (Fairchild amp Hertig 1953)

Psathyromyia brasiliensis (Costa Lima 1932)

Psathyromyia aragaoi (Costa Lima 1932)

Psathyromyia shannoni (Dyar 1929)

Nyssomyia whitmani (Antunes amp Coutinho 1939)

Nyssomyia neivai (Pinto 1926)

Nyssomyia intermedia (Lutz amp Neiva 1912)

Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira 1942)

No trabalho de Carvalho et al (2010) foram coletados mais de 17 mil

flebotomiacuteneos de 27 espeacutecies em diversos ambientes como nas diferentes

fitofisionomias do Cerrado abrigo de animais e no intradomiciacutelo Os autores

identificaram mais duas espeacutecies consideradas vetoras Ny neivai e Ps davisi

que auxiliaram no mapeamento das aacutereas de risco agrave transmissatildeo de

Leishmania

Ferreira et al (2014) analisaram a ocorrecircncia de flebotomiacuteneos em matas

de galeria do Distrito Federal (DF) nas estaccedilotildees seca e chuvosa Os autores

natildeo capturaram flebotomiacuteneos em novembro (estaccedilatildeo chuvosa) e em maio

(estaccedilatildeo seca) foram capturados 250 exemplares identificados como

Psathyromyia runoides (799) Pintomyia monticola (97) Mi quinquefer

(37) Pa shannoni (3) Bi flaviscutellata (07) Brumptomyia sp (07)

Pi kuscheli (07) Pa lutziana (Costa Lima) (07) e Sciopemyia sordellii

(07) De acordo com os resultados os autores relataram que em matas de

galeria do DF haveria maior ocorrecircncia de flebotomiacuteneos na estaccedilatildeo seca no

Continuaccedilatildeo QUADRO 1

45

niacutevel do solo e em aacutereas preservadas As espeacutecies Pa runoides Pi kuscheli

e Mi quinquefer foram registradas pela primeira vez no DF

Informaccedilotildees relevantes relacionadas agrave riqueza de espeacutecies abundacircncia

ocorrecircncia em distintas eacutepocas do ano somam dados que podem ser usados

para a melhor compreensatildeo da epidemiologia das doenccedilas e conhecimento

do comportamento dos flebotomiacuteneos nas matas de galeria proacuteximas agraves aacutereas

urbanas no DF

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp

Segundo Ashford (1996) o reservatoacuterio de uma infecccedilatildeo eacute definido como

o sistema ecoloacutegico no qual um agente infeccioso sobrevive

persistentemente Para as infecccedilotildees de transmissatildeo vetorial o sistema

compreenderia um ou mais vetores e um ou mais mamiacuteferos hospedeiros

que viveriam sob condiccedilotildees de densidade populacional proximidade espacial

entre outros fatores que permitiriam a transferecircncia continuada do agente

entre eles O autor designa o hospedeiro mamiacutefero responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo em longo prazo do agente infeccioso de hospedeiro reservatoacuterio

e define como zoonose uma doenccedila causada por parasitos cujos hospedeiros

satildeo o homem e outros mamiacuteferos

Entretanto a definiccedilatildeo de reservatoacuterio tem sofrido mudanccedilas significativas

no uacuteltimo seacuteculo fazendo-se necessaacuterio o estudo das zoonoses a partir de

perspectivas mais abrangentes Atualmente aceita-se que um reservatoacuterio

pode ser uma espeacutecie ou um complexo delas responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo

do parasito na natureza Dentro desse sistema-reservatoacuterio cada hospedeiro

desenvolve papeis diferentes na transmissatildeo em um determinado tempo e

espaccedilo isso eacute considera-se que ldquohospedeiros de manutenccedilatildeordquo sejam os

mamiacuteferos que podem ser infectados e mantecircm a infecccedilatildeo e que

ldquohospedeiros amplificadoresrdquo sejam os mamiacuteferos que aleacutem de manterem a

46

infecccedilatildeo desempenham uma caracteriacutestica que favoreccedila a transmissatildeo como

a presenccedila de mais parasitos no sangue e pele por periacuteodos maiores (Roque

amp Jansen 2014) Um estudo de reservatoacuterios silvestres e sinantroacutepicos de

espeacutecies de Leishmania nas Ameacutericas distinguiu as espeacutecies de mamiacuteferos

silvestres e sinantroacutepicos encontrados infectados com Leishmania spp

classificando-os em hospedeiros e potenciais reservatoacuterios (Roque amp

Jansen 2014) de acordo com a capacidade de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo ou de

transmissibilidade dos parasitos aos vetores por meio de xenodiagnoacutestico

positivo ou culturas de pele ou sangue

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de hospedeiros e

reservatoacuterios

Desde o seacuteculo passado a comunidade cientiacutefica tem demonstrado que

diferentes e numerosos mamiacuteferos silvestres podem se tornar infectados com

espeacutecies de Leishmania aleacutem das espeacutecies domeacutesticas e sinantroacutepicas

(animais natildeo domesticados que habitualmente compartilham e aproveitam-se

do ecoacutetopo humano) (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006 Roque amp Jansen

2014) Entretanto o foco deve ser mudado para a identificaccedilatildeo de espeacutecies

que podem servir como fontes de infecccedilatildeo para vetores e amplificaccedilatildeo de

focos enzooacuteticos temporalmente e regionalmente especiacuteficos constituindo

um risco para a transmissatildeo humana Esta mudanccedila depende da melhor

compreensatildeo de sistemas reservatoacuterios e do papel desempenhado por cada

espeacutecie de mamiacutefero na manutenccedilatildeo destes parasitos na natureza (Roque amp

Jansen 2014) Diversas espeacutecies das ordens Didelphimorphia Pilosa

Cingulata Rodentia Carnivora Primata e Chiroptera foram recentemente

classificadas como hospedeiros ou potenciais reservatoacuterios por Roque amp

Jansen (2014)

47

Os catildees domeacutesticos (Canis familiaris) satildeo considerados eficientes

reservatoacuterios de L infantum devido agrave alta susceptibilidade agrave infecccedilatildeo ao

frequentemente elevado parasitismo nesta espeacutecie e por causa da sua iacutentima

relaccedilatildeo com o homem tanto nas zonas urbanas quanto rurais (Dantas-Torres

amp Brandatildeo-Filho 2006) Os catildees como importantes reservatoacuterios domeacutesticos

de L infantum satildeo responsabilizados pela manutenccedilatildeo das endemias nos

grandes centros urbanos (Silva et al 2001 Medeiros et al 2005) Uma

consideraacutevel gama dos catildees infectados por espeacutecies de Leishmania satildeo

assintomaacuteticos seja por um determinado periacuteodo de tempo que pode chegar

a anos ateacute nunca apresentar sinais cliacutenicos ou sintomas da doenccedila Poreacutem

os catildees natildeo satildeo as uacutenicas fontes de infecccedilatildeo em todos os focos de LV no

Brasil (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Tambeacutem existe uma forte

tendecircncia para que os catildees assumam o papel de principais reservatoacuterios

domeacutesticos para L braziliensis o agente etioloacutegico da LTA mais disseminado

(Aguilar et al 1989 Madeira et al 2003 2006 Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho

2006 Castro et al 2007 Quaresma et al 2011) Entre os estudos que relatam

casos de infecccedilatildeo mista por L infantum e L braziliensis encontra-se os

trabalhos de Madeira et al (2006) e Quaresma et al (2011)

Aleacutem dos carniacutevoros descritos por Roque amp Jansen (2014) Cerdocyon

thous popularmente conhecido como cachorro do mato ou guaraxaim jaacute era

suspeito de desempenhar o papel de hospedeiro reservatoacuterio primaacuterio de L

infantum no Norte do Brasil (Lainson et al 1969) Os mesmos autores

descreveram a eficiecircncia dessa espeacutecie como fonte de infecccedilatildeo em 1990

Este caniacutedeo tambeacutem tem sido incriminado como hospedeiro reservatoacuterio

primaacuterio na Venezuela (Lainson et al 1987) Figueiredo et al (2008) relataram

o primeiro caso de L infantum em cachorro-vinagre (Speothos venaticus) no

Brasil no Estado do Mato Grosso Os autores chamam a atenccedilatildeo para os

controles parasitoloacutegicos em animais silvestres mantidos em cativeiros

principalmente quando estes fazem intercacircmbios entre zooloacutegicos brasileiros

Tambeacutem no Mato Grosso Souza et al (2010) relataram a infecccedilatildeo de

caniacutedeos silvestres por L infantum mantidos em cativeiro Foram coletadas

amostras de pele medula oacutessea e linfonodos de seis raposas (Cerdocyon

thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus) para detecccedilatildeo e

48

caracterizaccedilatildeo de Leishmania sp pela teacutecnica de PCR-RFLP Todos os

animais pesquisados apresentaram-se positivos para L infantum O estudo

destaca a importacircncia de monitoramento adequado dos animais e do maior

controle desta enfermidade jaacute que os animais estudados estavam em

ambientes de recreaccedilatildeo puacuteblica

De maneira geral as taxas de infecccedilatildeo em caniacutedeos natildeo domeacutesticos satildeo

baixas mas pode ser alta agraves vezes como observado nas raposas da

Ameacuterica do Sul (Lainson et al 1987) Poreacutem caniacutedeos silvestres

normalmente natildeo vivem perto de habitaccedilotildees humanas e logo eles teriam um

papel secundaacuterio na importacircncia da epidemiologia da LV enzooacutetica (Dantas-

Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Millaacuten et al (2016) encontraram Leishmania

sp em 375 das 32 raposas cinzas (Pseudalopex griseus) capturadas na

Patagocircnia Argentina Os achados dos autores tecircm elevada significacircncia pela

extensatildeo da aacuterea de distribuiccedilatildeo das leishmanioses na Ameacuterica do Sul por

suportar a existecircncia de um ciclo silvestre na ausecircncia de catildees e ainda na

transmissatildeo indicando que ou a distribuiccedilatildeo de flebotomiacuteneos eacute mais ampla

do que se pensava ou que a transmissatildeo de Leishmania por outros

artroacutepodes poderia ser possiacutevel

De acordo com Medeiros et al (2005) marsupiais didelfiacutedeos estatildeo entre

os principais reservatoacuterios rurais da doenccedila Didelphis albiventris foi o primeiro

mamiacutefero silvestre natildeo canino a ser descrito como hospedeiro de L infantum

no Novo Mundo (Sherlock et al 1984) Em aacutereas endecircmicas do Brasil e na

Colocircmbia espeacutecies de Didelphis tecircm frequentemente abrigado L infantum

(Corredor et al 1989 Travi et al 1994 Sherlock 1996 Cabrera et al 2003

Humberg et al 2012 Carreira et al 2012) e a presenccedila de D albiventris

poderia ser um fator associado a ocorrecircncia de infecccedilotildees assintomaacuteticas por

Leishmania na periferia de centros urbanos (Carranza-Tamayo et al 2016)

Outros marsupiais como Didelphis marsupialis Philander opossum e

Metachirus nudicaudatus jaacute foram detectados com Leishmania amazonensis

(Lainson et al 1981) mostrando que esses mamiacuteferos desempenham papel

importante na manutenccedilatildeo de Leishmania na natureza Em Barra de

Guaratiba estado do Rio de Janeiro a distacircncia das casas para as bordas

49

florestais sua altitude e a presenccedila de D marsupialis nos quintais das casas

foram considerados fatores preditores para infecccedilatildeo por L infantum em catildees

(Cabrera et al 2003)

Roedores sinantroacutepicos da famiacutelia Muridae como o rato de telhado (Rattus

rattus) e o camundongo (Mus musculus) compotildeem a lista de espeacutecies de

potenciais reservatoacuterios ou hospedeiros conforme a espeacutecie de Leishmania

encontrada e o local (Roque amp Jansen 2014) Rattus rattus jaacute foi encontrado

naturalmente infectado por L infantum (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

De Lima et al (2002) isolaram Leishmania braziliensis de R rattus na

Venezuela e Brandatildeo-Filho (2003) encontrou L braziliensis por meio de

eletroforese enzimaacutetica multilocus nesse mesmo hospedeiro Esse processo

de domiciliaccedilatildeo facilita a ligaccedilatildeo entre os ambientes peridomeacutestico e o

silvestre (Lainson et al1969) podendo estabelecer novos padrotildees

epidemioloacutegicos de LV particularmente no ciclo urbano de transmissatildeo

(Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

Helhazar et al (2013) reportaram pela primeira vez em Portugal a

infecccedilatildeo natural por L infantum em M musculus e em Rattus norvegicus

(ratazana) sugerindo que estes animais provavelmente desempenham papeacuteis

como potenciais reservatoacuterios no ciclo bioloacutegico do parasito Os autores

relatam que M musculus e R norvegicus satildeo animais que se proliferam muito

raacutepido e tecircm uma expectativa de vida de 12 e 24 meses respectivamente o

que poderia manter o parasito disponiacutevel por pelo menos um ano mesmo

durante a baixa atividade dos flebotomiacuteneos em determinadas estaccedilotildees do

ano Na Venezuela De Lima e colaboradores (2002) isolaram L braziliensis

em Sigmodon hispidus (rato do algodatildeo) aleacutem do R rattus

Mais de 200 espeacutecies de roedores estatildeo distribuiacutedas em haacutebitats semi-

aquaacuteticos terrestres e semi-fossoriais no Brasil (Bonvicino et al 2008) Esta

caracteriacutestica eacute provavelmente a principal razatildeo que explica a sua exposiccedilatildeo

aos diferentes ciclos de transmissatildeo de vaacuterias espeacutecies de Leishmania no

ambiente silvestre (Roque amp Jansen 2014a)

50

No Brasil Paacutedua et al (2011) relataram infecccedilatildeo natural por L braziliensis

no roedor sinantroacutepico M musculus e no roedor silvestre Necromys lasiurus a

partir de anaacutelises moleculares (PCR-RFLP) de medula oacutessea femoral e

fragmentos de pele Freitas et al (2012) no Estado de Mato Grosso uma

regiatildeo endecircmica para leishmaniose cutacircnea relataram infecccedilatildeo natural nas

mesmas espeacutecies e utilizando a mesma metodologia que Paacutedua et al (2011)

mostraram que a presenccedila de Leishmania em roedores sinantroacutepicos pode

ser uma ameaccedila aos humanos devido a cohabitaccedilatildeo de domiciacutelios humanos

nessa aacuterea de estudo

No Brasil existem poucos estudos de infecccedilatildeo natural de Leishmania em

roedores caviomorfos e cerca de 90 espeacutecimes foram analisados (Lainson et

al 1981 Quaresma et al 2011) Estudos experimentais apontaram duas

espeacutecies de caviomorfos como reservatoacuterios potenciais para Leishmania

Thrichomys laurentius infectado por L infantum e L braziliensis (Roque et al

2010) e Proechimys semispinosus infectados com L infantum (Travi et al

2002) Lainson amp Shaw (1968) encontraram o parasito L amazonensis no

roedor Proechimys guyannensis no norte do estado do Paraacute (Lainson amp Shaw

1972) Proechimys cuvieri foi descrito como hospedeiro de Leishmania spp

na Guiana Francesa por Dedet et al (1985)

Um estudo de Brandatildeo-Filho et al (1994) em pequenos mamiacuteferos

provaacuteveis reservatoacuterios de L braziliensis em Amaraji Pernambuco encontrou

amostras de esfregaccedilos hepaacuteticos e esplecircnicos com amastigotas em

Nectomys squamipes N lasiurus e tambeacutem em R rattus Apoacutes quase 10

anos um estudo realizado na mesma localidade de Pernambuco identificou L

braziliensis em R rattus e N lasiurus (Brandatildeo-Filho et al 2003)

Forattini et al (1972 1973) isolaram Leishmania de Akodon arviculoides

Oryzomys nigripes e Oryzomys capito laticeps Telleria et al (1999)

identificaram Leishmania amazonensis em Akodon spp por PCR kDNA

Exames histoloacutegicos de lesotildees nos roedores Oryzomys spp Nectomys

spinosus amoenus e Nectomys rattus revelaram amastigotas compatiacuteveis com

Leishmania (Lainson amp Shaw 1970) Leishmania amazonensis foi isolada de

ldquoPorque o que acontece aos filhos dos homens isso tambeacutem acontece aos

animais a mesma coisa lhes acontece Como morre um assim morre o outro

Todos tecircm o mesmo focirclego e nenhuma vantagem tecircm homens sobre os

animais Tudo eacute vaidaderdquo

Eclesiastes 319

Dedico este trabalho aos meus pais Ronaldo Rapello e Eliana Rapello meus

maiores mestres e incentivadores e para quem sinto profundo respeito e

agradecimento pelos ensinamentos de vida e amor incondicional

AGRADECIMENTOS

Agrave Deus por me guiar pelos caminhos que Ele traccedilou para minha vida ainda que

alguns inicialmente pareccedilam obscuros progressivamente se revelam

fundamentais para meu crescimento pessoal e profissional

Aos professores do Nuacutecleo de Medicina Tropical especialmente agraves professoras

Maria Regina Fernandes de Oliveira Elisabeth Carmem Duarte Elza Ferreira

Noronha e aos professores Gustavo Adolfo Sierra Romero Cleudson Nery de

Castro Pedro Luiz Tauil Wildo Navegantes de Arauacutejo e Joatildeo Barberino Santos

pela formaccedilatildeo teoacuterica e inspiraccedilatildeo profissional no campo da Epidemiologia

Ao meu orientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves pelo profissionalismo exemplar

pela constante motivaccedilatildeo pela participaccedilatildeo ativa em todas as etapas desse

processo mas tambeacutem pela compreensatildeo empatia paciecircncia e amizade ao

longo da jornada

Ao meu co-orientador Andrey Joseacute Andrade pelo extenso conhecimento

compartilhado pela identificaccedilatildeo de milhares de flebotomiacuteneos pelo incentivo

positivo e participaccedilatildeo em todas as etapas desse processo mas tambeacutem pelos

conselhos pela sinceridade pela paciecircncia e pela parceria do iniacutecio ao fim desse

doutorado

Agrave equipe do Laboratoacuterio Interdisciplinar de Biociecircncias e Faculdade de Medicina

e em especial agrave professora Nadjar Nitz Silva Lociks de Arauacutejo pelo vasto

conhecimento teoacuterico e praacutetico compartilhado pelas palavras de incentivo

fundamentais para o sucesso da etapa molecular mas tambeacutem pela doccedilura e

pela forccedila feminina por compartilhar sabedoria por se tornar um exemplo

profissional e pessoal para mim Agrave colega Thaiacutes Tacircmara Castro Minuzzi-Souza

por compartilhar sua experiecircncia profissional com paciecircncia pelos conselhos e

momentos que fortaleceram a amizade Agraves colegas Tamires Emanuele Vital e

Bruna Caroline Veacuteras de Carvalho pela ajuda na execuccedilatildeo das PCRs pela

paciecircncia pela gentileza e pelo agradaacutevel conviacutevio na etapa laboratorial

Agrave equipe do Laboratoacuterio de Parasitologia especialmente ao professor Marcos

Takasha Obara pelo incentivo e ajuda em vaacuterias etapas de trabalho e pela

amizade Ao colega Douglas Rocha pela ajuda no campo e na triagem

identificaccedilatildeo e fotografia dos flebotomiacuteneos Agrave colega Tauana de Souza Ferreira

por ser gentilmente prestativa em todas as etapas desse trabalho Agrave colega Thaiacutes

Oliveira por compartilhar o tempo e os conhecimentos profissionais pelos

agradaacuteveis momentos juntas pela amizade construiacuteda Agrave colega e teacutecnica

Renata Velocircso Timboacute pela ajuda na execuccedilatildeo de diversas etapas do processo

laboratorial e pela paciecircncia Agrave colega Mariana Neiva pela ajuda na execuccedilatildeo de

diversas etapas do processo laboratorial

Agrave melhor equipe de campo que algueacutem poderia ter Jocircnatas Ferreira Deacutebora

Juliana Rodrigues Martins Jeacutessica Toledo de Almeida Cristiana Santiago Nery

de Souza Agda Regina Melo Silva Thamerson Felipe Lelis dos Santos Saemis

Ferreira de Souza Tacircmela Steacutefany Lopes Silva Renecirc Cunha de Castro Rubens

Geraldo de Souza Jadson Joseacute Gomes da Silva Lana Cristina Evangelista

Ferreira Saacute Hayana Maria Boaventura Costa e ao senhor Barbosa Joseacute Bezerra

Ao meu parceiro Greacutegoire Saint Gal de Pons pela cumplicidade pelo amor pela

paciecircncia por ser um grande ouvinte pelos conselhos pela compreensatildeo nos

momentos de privaccedilatildeo de tempo em funccedilatildeo do curso por cuidar da nossa

famiacutelia

Aos meus filhos Lucca Rapello e Pierre Rapello pela paciecircncia e compreensatildeo

nos momentos de ausecircncia e por serem minhas razotildees de ser melhor

Ao meu irmatildeo Marcio Rapello e cunhada Gabriela Ortiz de Rozas pelos

momentos e palavras de apoio sempre bem-vindos

Agraves minhas avoacutes Annita Rapello (in memorian) e Eulina Machado (in memorian)

que foram para o Senhor ao longo desse doutorado mas que deixaram seus

ensinamentos para sempre na minha vida

Aos meus amigos pessoais que natildeo foram aqui citados mas que sabem o

quanto foram importantes para mim ao longo dessa etapa Vocecircs me fortalecem

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 A Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO 2016

27

Figura 2 Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte Rey 2002ndash CD room (Modificado)

32

Figura 3 Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral Leishmaniases (LV) CL Cutaneous Leishmaniases (LT) Fonte TDR ndash Wellcome Trust

34

Figura 4 Ilustraccedilatildeo das subunidades SSU e LSU intercaladas por espaccediladores de conservaccedilatildeo intermediaacuteria ITS (ITS1 e ITS2 espaccediladores internos transcritos) e ETS (espaccedilador externo transcrito) flanqueados pelo espaccedilador intergenocircmico (IGS) Fonte Vilgalyslab Duke University

63

Figura 5 Matas de Galeria amostradas em Brasiacutelia A Parque Nacional de Brasiacutelia B Fazenda Aacutegua Limpa C Jardim Botacircnico de Brasiacutelia D Reserva Bioloacutegica da Contagem

68

Figura 6 Localizaccedilatildeo geograacutefica das quatro aacutereas de estudo no Distrito Federal A PNB Parque Nacional de Brasiacutelia (PA PB) B REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem (RA RB) C FAL Fazenda Aacutegua Limpa da UNB (BA BB) D JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia (JA JB) Fonte Google Earth 2014

69

Figura 7 Armadilhas utilizadas nas amostragens de flebotomiacuteneos A armadilha do tipo HP B Armadilha do tipo Shannon

70

Figura 8 Armadilhas utilizadas para amostragens de mamiacuteferos A Armadilha tipo Tomahawk localizada no solo B Armadilha tipo Tomahawk com pequeno mamiacutefero capturado C Armadilha tipo Sherman localizada em estrato arboacutereo

72

Figura 9 Roedor marcado por um brinco de identificaccedilatildeo (observar a ponta da pinccedila)

73

Figura10 Base de trabalho de campo 74

Figura 11 Procedimentos de pesagem (A) e exame cliacutenico geral em roedor e marsupial (B)

75

Figura 12 Roedor apoacutes coleta de tecido A seta aponta o local da coleta da ponta de orelha

76

Capiacutetulo 1

Figura 1 Porcentagem de armadilhas positivas para flebotomiacuteneos em quatro matas de galeria no Distrito Federal em maio e setembro de 2014 FAL = Fazenda Aacutegua Limpa REBIO = Reserva Bioloacutegica da Contagem PNB = Parque Nacional de Brasiacutelia JBB = Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

86

Figura 2 A) Genitaacutelia de macho de Brumptomyia brumpti (10x) B) genitaacutelia masculina de Brumptomyia guimaraesi (10x) C) toacuterax do macho de Brumptomyia guimaraesi (10X) (Montados em baacutelsamo de canadaacute)

89

Figura 3 D) Cabeccedila de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (10x) E) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (40x) F) espermateca de Micropygomyia ferreirana (40x) (Montados em baacutelsamo do Canadaacute

90

Figura 4 G) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Evandromyia bourrouli (40x) H) espermateca de Evandromyia bourrouli (40X) I) genitaacutelia masculina de Evandromyia bourrouli (40X)

91

Figura 5 J) Ascoacuteide em flagelocircmeros de Psathyromyia pradobarrientosi (40X) K) Genitaacutelia masculina de Psathyromyia pradobarrientosi (10X) L) porccedilatildeo final do ducto ejaculatoacuterio de Psathyromyia pradobarrientosi (40X)

92

Capiacutetulo 2

Figura 1 Fluxograma explicativo dos meacutetodos utilizados para a obtenccedilatildeo e processamento dos flebotomiacuteneos

102

Figura 2 Amplificaccedilatildeo do gene Cacophany em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-R22 Amostras de flebotomiacuteneos

110

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de SSUrRNA em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-

R28 Amostras de flebotomiacuteneos Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

111

Capiacutetulo 3

Figura 1 Roedores capturados no presente trabalho A Oecomys bicolor B Calomys expulsus C Hylaeamys magacephalus D Rhipidomys macrurus E Nectomys rattus F Necromys lasiurus Fonte A B C D e F - Bonvicino (2008) E ndash Arquivo pessoal

125

Figura 2 Marsupiais capturados no presente trabalho A Didelphis albiventris B Gracilinanus agilis C e D Monodelphis americana Fonte arquivo pessoal

125

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 4 13 1617 20 21 25 82 e 86 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 4 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 48 55 70 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 5 Amplificaccedilatildeo de SSU rRNA em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 02 11 13 16 17 20 25 41 58 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

135

LISTA DE QUADROS E TABELAS

Quadro 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al 2015 Galati 2015

43

Capiacutetulo 1

Tabela 1 Nuacutemeros do cataacutelogo institucional dos voucheres de

espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados no presente estudo

84

Tabela 2 Espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados nas quatro aacutereas de estudo do Distrito Federal em maio e setembro de 2014 Novos registros para o Distrito Federal Novo registro para o cerrado Riqueza total de espeacutecies nas matas de galeria 16 espeacutecies

85

Tabela 3

Lista atualizada de espeacutecies de flebotomiacuteneos no Distrito Federal Brasil Novo registro para o Brasil Riqueza total 35 espeacutecies

87

Capiacutetulo 2

Tabela 1 Identificaccedilatildeo molecular dos ldquopoolsrdquo de flebotomiacuteneos fecircmeas

submetidos aos exames moleculares por aacuterea espeacutecie mecircs de coleta e nuacutemero de indiviacuteduos em cada ldquopoolrdquo

107

Capiacutetulo 3

Tabela 1 Espeacutecies de roedores e marsupiais didelfiacutedeos coletadas

nos meses de maio e setembro de 2014 na FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal Brasil

124

Tabela 2

Distribuiccedilatildeo das espeacutecies de mamiacuteferos capturados nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014

126

Tabela 3 Dados brutos da morfometria corporal sexo e idade das espeacutecies de mamiacuteferos capturadas nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014 As linhas realccediladas em amarelo correspondem aos animais positivos nos testes moleculares

127

Tabela 4

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU de Tripanossomatiacutedeos e ITS1 de Leishmania spp em animais da FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal

133

Tabela 5

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos e ITS-1 de Leishmania spp em animais da FAL PNB e JBB Distrito Federal

136

ABREVIATURAS E SIGLAS

APA Aacutereas de Proteccedilatildeo Ambiental

APPs Aacutereas de Preservaccedilatildeo Permanente

CEUA Comitecirc de Eacutetica de Uso Animal

DF Distrito Federal

DNA Aacutecido Desoxirribonucleacuteico

ELISA Ensaio de Imunoabsorccedilatildeo Enzimaacutetica

ETS Espaccedilador Externo Transcrito

FAL Fazenda Aacutegua Limpa

GDF Governo do Distrito Federal

IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos

Naturais Renovaacuteveis

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatiacutestica

IBRAM Instituto Brasiacutelia Ambiental

ICMBio Instituto Chico Medes de Biodiversidade

IGS Espaccediladores Intergecircnicos

IGS Espaccedilador Intergenocircmico

IM Intramuscular

ITS Internal Transcribed Spacer-

Regiatildeo Espaccediladora Transcrita Interna

ITS-1 Espaccediladores Internos Transcritos 1

ITS-2 Espaccediladores Internos Transcritos 2

JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

KOH Hidroacutexido de Potaacutessio

LC Leishmaniose Cutacircnea

LMC Leishmaniose Muco-cutacircnea

LSU Subunidade Maior

LTA Leishmaniose Tegumentar Americana

LV Leishmaniose Visceral

mgKg Miligramas por quilo

PBS Phosphate-buffered saline - Tampatildeo Fosfato Salino

PCR Polymerase Chain Reaction -Reaccedilatildeo da Polimerase em

Cadeia

PCR-RFLP Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restriccedilatildeo

PNB Parque Nacional de Brasiacutelia

RBC-DF Reserva da Biosfera do Cerrado no DF

RCO Regiatildeo Centro-Oeste

REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia Indireta

RNA Aacutecido Ribonucleacuteico

RNAr RNA ribossocircmico

SINAN-NET Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SSU Subunidade Menor

UC Unidades de Conservaccedilatildeo

UNB Universidade de Brasiacutelia

OMSWHO Organizaccedilatildeo Mundial de SauacutedeWorld Health Organization

OPAS Organizaccedilatildeo Pan-Americana da Sauacutede

CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento de Pessoal de Niacutevel

Superior

dNTPs

Deoxyribonucleotide Triphosphates ndash Desoxirribonucleotiacutedeo

Trifosfato)

Taq Thermus aquaticus

pb pares de bases

FINANCIAMENTO

O estudo foi financiado pela CAPES (processo ndeg127611 edital Parasitologia

Baacutesica) e pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical da

Universidade de Brasiacutelia

Sumaacuterio

1 INTRODUCcedilAtildeO

23

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas 23

12 Definiccedilatildeo 25

13 Epidemiologia 26

14 Agente Etioloacutegico 31

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose 35

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF 38

17 Vetores

40

18 Flebotomiacuteneos no DF 43

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp 45

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de Hospedeiros e Reservatoacuterios

46

111 A questatildeo ambiental do Distrito Federal 52

112 A fragmentaccedilatildeo florestal e as leishmanioses 55

113 Estrateacutegias de controle das leishmanioses 57

114 Diagnoacutestico parasitoloacutegico e imunoloacutegico das leishmanioses 58

115 Diagnoacutestico molecular das leishmanioses 61

116 Diagnoacutestico molecular da infecccedilatildeo por tripanossomatiacutedeos utilizando genes ribossocircmicos

62

2 JUSTIFICATIVA 64

3 OBJETIVOS 66

4 MATERIAL E MEacuteTODOS 67

41 Aacutereas de estudo 67

42 Amostragem de flebotomiacuteneos 70

43 Montagem dissecccedilatildeo e identificaccedilatildeo dos flebotomiacuteneos 71

44 Captura dos pequenos mamiacuteferos 71

45 Contenccedilatildeo e marcaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos 73

46 Coleta de material bioloacutegico 75

5 Resultados 77

51 Capiacutetulo 1 - Lista atualizada de flebotomiacuteneos (Diptera Psychodidae Phlebotominae) do Distrito Federal Brasil

77

RESUMO 78

Introduccedilatildeo 79

Material e Meacutetodos 80

Aacutereas de Estudo 80

Amostragem dos flebotomiacuteneos 81

Anaacutelise estatiacutestica 82

Resultados 82

Aspectos morfoloacutegicos para novos registros

88

Discussatildeo 93

52 Capiacutetulo 2 - Avaliaccedilatildeo de infecccedilatildeo natural por Leishmania spp em flebotomiacuteneos de matas de galeria do Distrito Federal Brasil

98

RESUMO 98

1 Introduccedilatildeo 100

2 Material e Meacutetodos 101

21 Amostragem dissecccedilatildeo e montagem dos flebotomiacuteneos 102

22 Extraccedilatildeo de DNA 103

23 PCR dirigida ao gene Cacophany 103

24 PCR dirigida ao gene SSU rDNA de tripanossomatiacutedeos 104

25 PCR dirigida ao ITS-I do rDNA 105

3 Resultados 106

4 Discussatildeo 111

53 Capiacutetulo 3 Ocorrecircncia de pequenos mamiacuteferos infectados por Leishmania spp em Matas de Galeria do Distrito Federal Brasil

115

RESUMO 115

1 Introduccedilatildeo 116

2 Material e meacutetodos 118

21 Aacuterea de estudo amostragem e identificaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos

118

22 Amostras bioloacutegicas e extraccedilatildeo do DNA 119

23 PCR dirigida ao gene SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos 120

24 PCR dirigida ao ITS- 1 do rRNA 121

25 Aspectos eacuteticos 122

26 Anaacutelise de dados 122

3 Resultados 123

4 Discussatildeo 137

41 Composiccedilatildeo da comunidade de mamiacuteferos no momento das coletas

137

42 Infecccedilatildeo natural por Leishmania spp nos pequenos mamiacuteferos das Matas de Galeria estudadas no Distrito Federal Brasil

141

6 Consideraccedilotildees Finais 148

7 Conclusotildees 151

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 152

9 ANEXOS 190

RESUMO

O conhecimento relacionado agrave transmissatildeo enzooacutetica de espeacutecies de

Leishmania no Distrito Federal ainda eacute escasso e a participaccedilatildeo de

flebotomiacuteneos e mamiacuteferos silvestres no ciclo de transmissatildeo desses

protozoaacuterios eacute objeto do presente estudo As aacutereas estudadas foram as matas

de galeria da Fazenda Aacutegua Limpa da Universidade de Brasiacutelia Reserva

Bioloacutegica da Contagem Parque Nacional de Brasiacutelia e Jardim Botacircnico de

Brasiacutelia em maio e setembro de 2014 O Capiacutetulo 1 traz a atualizaccedilatildeo da lista de

espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF Com esforccedilo de captura de 1280 armadilhas

HP e 16 armadilhas do tipo Shannon foram capturados 1209 flebotomiacuteneos

pertencentes a 16 espeacutecies Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espeacutecie

mais capturada Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia guimaraesi Br

brumpti Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas

pela primeira vez no DF ampliando a distribuiccedilatildeo geograacutefica das mesmas e

elevando para 35 o nuacutemero de espeacutecies registradas nessa unidade da

federaccedilatildeo O Capiacutetulo 2 analisou a infecccedilatildeo natural dos flebotomiacuteneos

capturados por Leishmania DNA foi extraiacutedo de 569 fecircmeas agrupadas em 87

ldquopoolsrdquo A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada agrave

amplificaccedilatildeo do gene cacophony da regiatildeo IVS6 A detecccedilatildeo dos

tripanossomatiacutedeos foi feita pela amplificaccedilatildeo das regiotildees SSU rRNA e ITS-1

Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp entretanto os

resultados do presente estudo natildeo implicam na inexistecircncia de vetores

infectados nestas matas de galeria O Capiacutetulo 3 analisou a ocorrecircncia e infecccedilatildeo

em pequenos mamiacuteferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp nas

mesmas aacutereas dos flebotomiacuteneos e nos mesmos periacuteodos Amostras de tecido

(fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamiacuteferos capturados e utilizadas

para a detecccedilatildeo molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e

PCR com alvo na regiatildeo ITS em 153 amostras Com um total de 5120

armadilhas-noite 172 pequenos mamiacuteferos foram capturados pertencentes agrave

trecircs espeacutecies de marsupiais (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis e

Monodephis americana) e seis espeacutecies de roedores (Rhipidomys macrurus

Oecomys bicolor Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys

rattus e Necromys lasiurus) Vinte amostras (1307) foram positivas

considerando ambos os marcadores moleculares quatro somente para SSU e

quatro somente para ITS As espeacutecies infectadas por Leishmania spp foram

Rhipidomys macrurus Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris Estas espeacutecies

devem participar da transmissatildeo enzooacutetica de Leishmania na REBIO FAL e JBB

sendo este o primeiro relato de mamiacuteferos silvestres infectados por este parasito

nestas duas uacuteltimas aacutereas Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se

que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espeacutecies incriminadas

vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenccedilatildeo da

transmissatildeo enzooacutetica desses tripanossomatiacutedeos

Palavras chaves Transmissatildeo enzooacutetica Leishmania spp roedores

marsupiais Phlebotominae Cerrado

ABSTRACT

Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce

and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis

transmission cycle is the subject of this study All samples were captured in

gallery forests of four areas Aacutegua Limpa Farm Biological Reserve of Contagem

Brasiliarsquos National Park and Botanic Garden of Brasiacutelia on May and September

2014 Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal

District The entire capture effort entailed 1280 HP light traps and 16 Shannon

traps 16 species were identified Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the

most captured species Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia

guimaraesi Br brumpti Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli

were registered for the first time in the Federal District elevating to 35 the number

of reported species at this federation unit Chapter 2 follows up the study of

Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies

DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools Fragments that

corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples

demonstrating the quality of the extracted DNA Trypanosomatids detection was

performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions All samples tested

negative for Leishmania spp Therefore negative results in the present study do

not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and

surroundings Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small

mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of

sandflies and during the same periods Tissue samples (ear tips) were obtained

from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested

PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples The entire

capture effort entailed 5120 night-traps and 172 small mammals from three

marsupials species (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis and Monodephis

americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus Oecomys bicolor

Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys rattus and Necromys

lasiurus) were captured Twenty samples (1307) were positive considering

both molecular markers four samples only for SSU and four sampes only for ITS

Leishmania spp infected species were Rhipidomys macrurus Gracilinanus

agilis and Didelphis albiventris These species might participate in the enzootic

transmition of Leishmania at REBIO FAL and JBB This is the first report of

Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas Considering all

results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species

from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the

maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Key words Enzootic transmission Leishmania spp rodents marsupials

Phlebotominae Brazilian savanna

23

1 Introduccedilatildeo

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) eacute uma doenccedila existente

desde a antiguidade cujos relatos e descriccedilotildees datam do seacutec I dC (Basano

amp Camargo 2004) Altamirano-Enciso et al (2003) relataram trecircs teorias de

origem da doenccedila nas Ameacutericas A primeira de 1890 em que Juliano Moreira

amp Aguiar Pupo propunham uma origem mediterracircnea enfatizando que os

casos observados em pacientes da Bahia (Brasil) doenccedila chamada ldquobotatildeo da

Bahiardquo eram parecidos ao ldquobotatildeo do Orienterdquo Segundo os mesmos autores a

LTA teria sido introduzida pelos feniacutecios ou siacuterios que supostamente

chegaram ao nordeste do Brasil ainda na Antiguidade No entanto tais

viagens jamais foram comprovadas historicamente ou arqueologicamente

A segunda teoria eacute a de origem andina formulada a partir dos

descobrimentos de peccedilas de ceracircmica preacute-colombianas ou ldquohuacos peruanosrdquo

em 1895 e reforccedilada pelos documentos do seacuteculo XVI Contudo a discussatildeo

dos dados histoacutericos dividiu-se em dois grupos uma primeira corrente

representada pelos defensores das chamadas ldquoevidecircnciasrdquo histoacutericas cujos

argumentos se reforccedilam pelos estudos das representaccedilotildees de lesotildees feitas

em objetos de ceracircmica e outro grupo de estudiosos que questionava essa

fonte histoacuterica por ser descrita por cronistas que natildeo eram meacutedicos Atribui-se

a essa discussatildeo grande importacircncia porque se passaram quase 80 anos

desde que Eduardo Rabello (1925) propocircs que as origens da leishmaniose

muco-cutacircnea (LMC) estariam inicialmente focalizadas nos territoacuterios frios

sugerindo as regiotildees da Boliacutevia e do Peru predominando esta teoria na

literatura biomeacutedica

24

Mais recentemente a chamada teoria monofileacutetica para origem das

leishmacircnias foi formulada por Thomas-Soccol et al (1993) que baseando-se

em estudos de DNA mitocondrial de 20 espeacutecies de leishmacircnias do mundo

consideram que os subgecircneros Viannia e Leishmania propostos por Lainson

amp Shaw (1972) tiveram origem comum desde os periacuteodos Cretaacuteceo e

Juraacutessico haacute 120 milhotildees de anos quando os continentes estavam unidos na

Pangeacuteia Contudo a questatildeo do local de origem das leishmacircnias continua

controversa entre as regiotildees Neotropical Paleaacutertica e Africana

Cerqueira no Brasil em 1855 observou a existecircncia da forma cutacircnea

identificando-a clinicamente como ldquobotatildeo de Biskrardquo e Breda em 1895 na

Itaacutelia descreveu a doenccedila em italianos provenientes de Satildeo Paulo

Lindenberg (1909) encontrou ldquoformas de Leishmaniardquo idecircnticas agrave

Leishmania tropica da leishmaniose do Velho Mundo em lesotildees cutacircneas de

indiviacuteduos que trabalhavam nas matas do interior do Estado de Satildeo Paulo o

que confirmou a natureza leishmanioacutetica das lesotildees cutacircneas e nasofariacutengeas

(Basano amp Camargo 2004) Gaspar Vianna redescreveu o parasito como L

braziliensis por consideraacute-lo diferente da L tropica e assim denominou-se o

agente etioloacutegico da uacutelcera de Bauru ferida brava ou nariz de tapir

(Basano amp Camargo 2004)

No Brasil ateacute a deacutecada de 1970 todos os casos de LTA eram atribuiacutedos a

L braziliensis (Basano amp Camargo 2004) entretanto com o progresso das

pesquisas ecoepidemioloacutegicas e com o desenvolvimento das teacutecnicas

moleculares outras espeacutecies foram descritas sendo registradas ateacute o

momento sete espeacutecies causadoras da LTA (Brasil 2010) A leishmaniose

visceral (LV) era confundida no passado com outras doenccedilas endecircmicas e de

apresentaccedilatildeo cliacutenica semelhante como a malaacuteria em humanos (Palmer

1998)

No iniacutecio de 1903 James Homer Wright de Baltimore observou formas de

protozoaacuterios em uacutelcera cutacircnea de uma crianccedila da Armecircnia suspeita de ser

acometida pelo Botatildeo do Oriente e propocircs o nome de Welcozoma tropicum

para o agente causal hoje conhecido como L tropica Em 30 de maio desse

25

ano o inglecircs William Boog Leishman obteve uma bioacutepsia de fiacutegado de um

soldado inglecircs morto pela doenccedila febre de dum-dumou kala-azar na Iacutendia

Dois meses depois em 11 de julho Charles Donovan tambeacutem em bioacutepsia do

baccedilo de outro soldado morto descobriu independentemente o agente

etioloacutegico do calazar que era semelhante ao parasito da tripanossomiacutease em

sua fase intracelular (Altamirano-Enciso et al 2003)

O nome do gecircnero Leishmania foi criado pelo meacutedico inglecircs Ronald Ross

mas o termo Leishmania donovani para o agente da LV foi proposto por

Laveran amp Mesnil em 1903 embora segundo Basano amp Camargo (2004)

Cunningham em 1885 na Iacutendia foi o primeiro a observar o parasito do gecircnero

em casos de LV A partir daquele ano foram descritos outros

tripanossomatiacutedeos em paiacuteses do mar Mediterracircneo e da Aacutesia araacutebica As

duacutevidas de que L donovani e L tropica fossem tripanossomatiacutedeos e natildeo

piroplasmas soacute foram dissipadas quando Rogers amp Nicolle (1904) e

posteriormente Nicolle (1908) e Carlos Chagas (1908) demonstraram as

formas flageladas de ambos os parasitos em meio de aacutegar sangue ldquoin vitrordquo

Sergent et al (1921) reproduziram o rdquobotatildeo do Orienterdquo em hamsters ao

inocularem macerados de Phlebotomus papatasi alimentados em soldados

franceses na Argeacutelia comprovando a associaccedilatildeo entre L tropica e

flebotomiacuteneos No Brasil Henrique Aragatildeo (1922) estudou um surto de LTA

no Rio de Janeiro e associou os casos agrave presenccedila de elevada quantidade de

flebotomiacuteneos infectados por L braziliensis Ao inocular triturados destes

flebotomiacuteneos no focinho de catildees foi observada ulceraccedilatildeo com a presenccedila

de formas amastigotas intracelulares (Altamirano-Enciso et al 2003)

12 Definiccedilatildeo

As leishmanioses satildeo um conjunto de doenccedilas resultantes da infecccedilatildeo

por protozoaacuterios digeneacuteticos (Negratildeo amp Ferreira 2014) pertencentes ao filo

Euglenozoa classe Kinetoplastea ordem Trypanosomatida famiacutelia

26

Trypanosomatidae (Cavalier-Smith 2016) gecircnero Leishmania (Ross 1903)

com caraacuteter zoonoacutetico Esses protozoaacuterios satildeo transmitidos por insetos

vetores conhecidos por flebotomiacuteneos (Laurenti 2010 Ready 2013) O fator

em comum das espeacutecies de Leishmania estaacute na necessidade de passar por

um hospedeiro invertebrado obrigatoriamente um flebotomiacuteneo (ver item 17)

para se reproduzirem e atingirem a forma infectante (Jones et al 2003)

As doenccedilas estatildeo amplamente distribuiacutedas em todo o mundo e dividem-se

em dois grandes grupos as leishmanioses dermotroacutepicas e as leishmanioses

viscerotroacutepicas (Negratildeo amp Ferreira 2009)

13 Epidemiologia

As leishmanioses representam uma das endemias de maior

importacircncia em sauacutede puacuteblica no mundo (Laurenti 2010) As mesmas satildeo

consideradas emergentes em franca expansatildeo associada agrave pobreza e ao

deslocamento da populaccedilatildeo para aacutereas com ciclos de transmissatildeo existentes

sendo incluiacutedas na lista de Doenccedilas Tropicais Negligenciadas (WHO 2014)

As leishmanioses tecircm ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica sendo possiacutevel observar

casos da doenccedila em todos os continentes com exceccedilatildeo da Antaacutertica (Figura

1) (WHO 2009)

27

FIGURA 1 Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A

Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO

2016

Segundo a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (WHO 2016) satildeo estimados

900 mil a 16 milhatildeo de novos casos de leishmanioses destes 02 a 04

milhatildeo de novos casos de LV e 07 a 12 milhotildees de novos casos de LT onde

20 mil a 30 mil mortes ocorrem anualmente no mundo Ainda de acordo com

A

B

28

dados da WHO (2016) mais de 98 paiacuteses e territoacuterios satildeo endecircmicos para as

leishmanioses Destes 72 paiacuteses estatildeo em processo de desenvolvimento

incluindo 13 dos menos desenvolvidos e sua notificaccedilatildeo eacute compulsoacuteria em

apenas 30 deles (Negratildeo amp Ferreira 2014) Nas Ameacutericas as leishmanioses

ocorrem em 21 paiacuteses com expansatildeo geograacutefica associada agrave antropizaccedilatildeo

dos ciclos de transmissatildeo de Leishmania com o desmatamento abertura de

estradas e urbanizaccedilatildeo de aacutereas primitivas que tem favorecido o ciclo

peridomiciliar da doenccedila (Dedet 1999 Negratildeo amp Ferreira 2014)

As formas viscerotroacutepica e dermotroacutepica tecircm despertado especial

interesse devido a sua importacircncia meacutedica e econocircmica em aacutereas endecircmicas

em regiotildees tropicais e subtropicais da Ameacuterica Aacutefrica Iacutendia e paiacuteses nas

margens do Mediterracircneo (Negratildeo amp Ferreira 2009)

A LTA eacute encontrada em todos os paiacuteses das regiotildees tropicais e

subtropicais do mundo (Gontijo amp Carvalho 2003) exceto na Austraacutelia Nova

Zelacircndia e algumas ilhas do Paciacutefico Essa irregularidade na distribuiccedilatildeo

mundial eacute enfatizada pelo fato que os 90 dos casos tem ocorrido em apenas

seis paiacuteses Afeganistatildeo Brasil Iratilde Peru Araacutebia Saudita e Siacuteria (WHO 2008

Negratildeo amp Ferreira 2014) A doenccedila eacute descrita em quase todos os paiacuteses

americanos do sul dos Estados Unidos agrave Patagocircnia ao norte extremo da

Argentina (Millaacuten et al 2016) com exceccedilatildeo do Uruguai e do Chile (Lainson

1981) verificando-se a distribuiccedilatildeo das diversas formas clinico

epidemioloacutegicas com estreita relaccedilatildeo com condiccedilotildees floriacutesticas e fauniacutesticas

(Teodoro 1997) Na Ameacuterica Latina eacute assinalada desde a peniacutensula de

Yucataacuten Meacutexico (Castro 2002) compreendendo as proviacutencias do norte da

Argentina (Salomoacuten 2010 Millaacuten et al 2016) alcanccedilando maior importacircncia no

Brasil aleacutem do Peru

Negratildeo amp Ferreira (2014) consideraram que na Ameacuterica do Sul a LTA

apresenta dois padrotildees epidemioloacutegicos o padratildeo claacutessico constituiacutedo por

surtos epidecircmicos associados agrave derrubada de matas para a construccedilatildeo de

estradas e povoados e o padratildeo associado agraves formas de ocupaccedilatildeo do espaccedilo

em regiotildees de colonizaccedilatildeo antiga

29

A maioria dos casos de leishmanioses nas Ameacutericas eacute proveniente do

Brasil (Alvar et al 2012) onde as mesmas apresentam distribuiccedilatildeo em todas

as regiotildees geograacuteficas desde 2003 com maior incidecircncia observada no

Nordeste brasileiro (WHO 2014) No Brasil estatildeo incluiacutedas na lista de

doenccedilas que compotildeem o Sistema de Informaccedilatildeo de Doenccedilas de Notificaccedilatildeo

Compulsoacuteria (Brasil 2010)

De acordo com WHO (2016) no ano de 2014 foram notificados 3453

casos de LV no Brasil dos quais 82 com confirmaccedilatildeo laboratorial Para a

leishmaniose tegumentar (LT) foram notificados 19402 casos e 89

confirmados por exames De acordo com a mesma fonte 43 da populaccedilatildeo

brasileira estaacute sob o risco de LV (86997054 200362200) e 70 sob o risco

de LT (139396846200362200) Entre os fatores de risco para a ocorrecircncia

das leishmanioses encontra-se a subnutriccedilatildeo com dietas pobres em

proteiacutenas ferro vitamina A e zinco que pode comprometer a imunidade dos

indiviacuteduos aumentando o risco de uma infecccedilatildeo se agravar a precariedade

das condiccedilotildees sanitaacuterias domeacutesticas como a falta de gestatildeo de resiacuteduos e

esgoto a ceacuteu aberto que podem aumentar os locais de criaccedilatildeo e repouso de

flebotomiacuteneos e bem como o seu acesso aos seres humanos a migraccedilatildeo e

a exposiccedilatildeo ocupacional onde as pessoas ao se movimentarem ou se

estabelecerem em aacutereas de florestas ficam mais proacuteximas do habitat de

flebotomiacuteneos mudando o perfil epidemioloacutegico das doenccedilas (WHO 2014)

Negratildeo amp Ferreira (2014) estudaram a dispersatildeo da LT nas Ameacutericas e

relataram que o crescimento migratoacuterio aliado ao processo histoacuterico de

organizaccedilatildeo espacial nas uacuteltimas deacutecadas tem propiciado a proliferaccedilatildeo de

aacutereas de alto risco e infecccedilatildeo por Leishmania em aacutereas urbanas brasileiras

ora associadas a aacutereas verdes e outras como consequecircncia do desequiliacutebrio

ecoloacutegico evidenciada em algumas aacutereas periurbanas ou associadas agraves

aacutereas de desmatamentos Os mesmos autores enfatizaram que dentro dos

limites geograacuteficos da ocorrecircncia da doenccedila sua extensatildeo e severidade

variavam pelo endemismo ou ocorrecircncia esporaacutedica com condiccedilotildees

ecoloacutegicas especiacuteficas em diferentes regiotildees A distribuiccedilatildeo espacial da

doenccedila em territoacuterio brasileiro eacute resultado de diferentes condiccedilotildees geograacuteficas

30

ou ecoloacutegicas potencializadas pelo planejamento governamental inadequado

ou ineficiente em accedilotildees que promovam a conscientizaccedilatildeo visando o controle

prevenccedilatildeo ou detecccedilatildeo precoce da infecccedilatildeo em aacutereas de risco Para os

centros urbanos eacute de grande importacircncia o conhecimento de aacutereas que

podem oferecer risco agrave populaccedilatildeo exposta agraves formas de LTA de ocorrecircncia

ligadas ao ambiente (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Outro aspecto relevante dentro deste contexto de expansatildeo e urbanizaccedilatildeo

das leishmanioses em todo o mundo e principalmente no Brasil eacute a

possibilidade de se adquirir a doenccedila a partir de transfusotildees sanguiacuteneas (Luz

et al 1997 Urias et al 2009) Este fato eacute agravado em funccedilatildeo do diagnoacutestico

soroloacutegico para a LV natildeo estar incluiacutedo ainda na triagem dos doadores do

paiacutes (Laurenti 2010) que se restringe a triagem laboratorial normatizada das

seguintes doenccedilas doenccedila de Chagas siacutefilis hepatite B HIV malaacuteria HTLV

1 e 2 (Anvisa 2004)

Karagiannis-Voules et al (2013) associaram as doenccedilas a fatores soacutecio-

econocircmicos e agrave precipitaccedilatildeo Clima precipitaccedilatildeo temperatura e umidade satildeo

fatores que podem alterar as distribuiccedilotildees e influenciar na sobrevivecircncia e no

tamanho das populaccedilotildees de vetores e de hospedeiros reservatoacuterios

Flutuaccedilotildees na temperatura podem ter um efeito profundo no ciclo de

desenvolvimento de promastigotas de Leishmania em flebotomiacuteneos

permitindo a transmissatildeo do parasito em aacutereas anteriormente natildeo endecircmicas

para as doenccedilas Alteraccedilotildees climaacuteticas que levam agrave seca fome e inundaccedilotildees

podem levar ao deslocamento em massa e a migraccedilatildeo de pessoas para aacutereas

com transmissatildeo de leishmanioses (WHO 2014)

Acredita-se que os nuacutemeros de casos notificados natildeo correspondam a

evoluccedilatildeo da LTA devido agrave demora com que o paciente procura o sistema de

sauacutede e o difiacutecil diagnoacutestico por parte do proacuteprio sistema Mesmo levando-se

em conta as falhas de notificaccedilatildeo compulsoacuteria eacute evidente o crescente nuacutemero

de casos novos e a intensidade que atinge o homem sendo proporcional agraves

alteraccedilotildees ambientais decorrentes de atividades humanas em aacutereas

especiacuteficas na aacuterea de estudo proposta A prevalecircncia das diferentes

leishmanioses no continente americano eacute difiacutecil de ser mensurada devido

31

principalmente a subnotificaccedilotildees diagnoacutesticos incorretos afecccedilotildees

inaparentes variaccedilotildees de resposta do hospedeiro e multiplicidade de agentes

etioloacutegicos envolvidos (Marzochi 1992)

14 Agente Etioloacutegico

As infecccedilotildees em seres humanos e em animais por protozoaacuterios do

gecircnero Leishmania recebem denominaccedilotildees variadas mas podem ser

agrupadas com base em suas caracteriacutesticas comuns De acordo com

Akhoundi et al (2016) satildeo conhecidas 53 espeacutecies de Leishmania

pertencentes a cinco subgecircneros e complexos (Leishmania Viannia

Sauroleishmania complexo L enriettii e Paraleishmania) Desse total 31

espeacutecies parasitam espeacutecies de mamiacuteferos sendo que pelo menos 20 delas

infectam seres humanos Uma vez que as formas amastigotas satildeo

morfologicamente similares (Jubb et al1993 Palmer 1998) a diferenciaccedilatildeo

das espeacutecies que parasitam seres humanos eacute realizada por testes

moleculares indispensaacuteveis para o diagnoacutestico (Zampieri et al 2016)

As espeacutecies de Leishmania tecircm ciclos bioloacutegicos similares (Laurenti

2010) apresentando duas formas principais a amastigota observada dentro

de ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear em tecidos dos hospedeiros

vertebrados e a promastigota encontrada no sistema digestoacuterio de

flebotomiacuteneos fecircmeas (Figura 2) (Rey 2002) Ambos amastigotas e

promastigotas dividem-se repetidamente por divisatildeo binaacuteria (Palmer 1998)

32

FIGURA 2 ndash Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte

Rey 2002ndash CD room (Modificado)

No hospedeiro vertebrado as formas amastigotas encontram-se no

interior de vacuacuteolos parasitoacuteforos em macroacutefagos e ceacutelulas reticuloendoteliais

e medem cerca de 1 a 2 microm de largura por 2 a 4 microm de comprimento (Palmer

1988 Jones et al 2003) Esta forma se multiplica por divisatildeo assexuada ateacute o

rompimento da ceacutelula disseminando-se pela via hematogecircnica e linfaacutetica

para outros tecidos ricos em ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear como

linfonodos fiacutegado baccedilo medula oacutessea placas de Peyer por exemplo

iniciando uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria e proporcionando a atraccedilatildeo de outros

macroacutefagos gerando um ldquociclo viciosordquo (Figura 3) (Palmer 1998 Basano amp

Camargo 2004)

A forma amastigota da Leishmania eacute tipicamente ovoacuteide ou esfeacuterica

natildeo possui flagelo e nem membrana ondulatoacuteria (Palmer 1998) apenas um

rudimento de flagelo que estaacute presente na bolsa flagelar caracterizada como

uma pequena invaginaccedilatildeo da membrana do parasito (Figura 2) (Laurenti

2010) Nas preparaccedilotildees coradas por Romanovsky esses organismos

apresentam um citoplasma azul paacutelido contendo nas proximidades da

33

extremidade posterior um nuacutecleo uacutenico avermelhado com um cariossoma

central que se cora mais profundamente Tangenciando e anterior ao nuacutecleo

encontra-se um corpo em forma de bastonete e com uma cor violeta escuro o

cinetoplasto que conteacutem o corpo parabasal e o blefaroplasto em forma de

pinta (Figura 2) (Jones et al 2003) A forma amastigota conteacutem duas

concentraccedilotildees de DNA no nuacutecleo e em uma mitococircndria modificada o

cinetoplasto (Palmer 1998)

No seu hospedeiro invertebrado ou em culturas os organismos

assumem formas que variam desde a forma amastigota ateacute a forma de pro-

mastigota essa uacuteltima eacute esguia e fusiforme medindo cerca de 14 a 20microm de

comprimento e 15 a 4microm de largura Esta forma tem motilidade por meio de

um flagelo que se origina no blefaroplasto e projeta-se desde o poacutelo anterior

do organismo O cinetoplasto se situa na extremidade anterior do corpo

(Figura 2) (Jones et al 2003)

O flebotomiacuteneo hospedeiro invertebrado ao sugar sangue de um

animal infectado se infecta ao ingerir histioacutecitos da derme ou monoacutecitos do

sangue contendo formas amastigotas de Leishmania em seu citoplasma

(Basano amp Camargo 2004) Em seu intestino meacutedio e glacircndulas salivares as

leishmacircnias sofrem modificaccedilotildees morfoloacutegicas e bioquiacutemicas se congregam

na vaacutelvula cardiacuteaca onde o intestino anterior projeta-se no intestino meacutedio e

se transformam em promastigotas (com flagelo livre) que aderem ao epiteacutelio

do tubo digestoacuterio onde se multiplicam amplamente por divisotildees binaacuterias A

populaccedilatildeo daiacute resultante migra para a parte anterior do tubo digestoacuterio do

inseto diferenciando-se para formas promastigotas infectantes por volta de 3-

4 dias com invasatildeo da faringe do inseto sendo tambeacutem as chamadas formas

de promastigotas metaciacuteclicas encontradas na buco-faringe destes insetos

Quando os parasitos atingem o proacute-ventriacuteculo do inseto causam uma

obstruccedilatildeo no tubo digestoacuterio dificultando a ingestatildeo de sangue e levando a

fecircmea entatildeo faminta a picar muitas vezes pessoas ou animais Tais insetos

ao sugarem sangue (injetando na picada da pele a sua saliva e a saliva

apresentando propriedade anticoagulante homesostaacutetica anesteacutesica e

vasodilatadora) injetam tambeacutem as formas infectantes da Leishmania a qual

34

caindo na circulaccedilatildeo sanguiacutenea deste novo hospedeiro (vertebrado) vai

desenvolver a doenccedila numa das formas cliacutenicas conhecidas (Figura 3)

(Palmer 1998) ou na maioria dos casos levar a infecccedilotildees assintomaacuteticas e

autoresolutivas (Fukutani 2014)

FIGURA 3 ndash Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral

Leishmaniasis (LV) CL Cutaneous Leishmaniasis (LT) Fonte TDR ndash

Wellcome Trust

35

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose

Os protozoaacuterios do gecircnero Leishmania apresentam diferentes

distribuiccedilotildees geograacuteficas e as enfermidades por eles causadas satildeo

relativamente distintas embora possa haver superposiccedilatildeo nos sinais e

cliacutenicos e lesotildees (Jones et al 2003) Cerca de 20 espeacutecies de Leishmania satildeo

patogecircnicas para o ser humano (Laurenti 2010) As leishmanioses se

manifestam de quatro formas diferentes a depender da espeacutecie de

Leishmania envolvida e do estado imunoloacutegico do hospedeiro i) visceral

tambeacutem conhecida como calazar a forma mais grave da doenccedila ii) cutacircnea

a mais comum iii) mucocutacircnea e iv) cutacircnea difusa A LV eacute uma doenccedila

crocircnica sistecircmica que afeta os oacutergatildeos como o fiacutegado e o baccedilo A LTA inclui

as formas cutacircnea cutacircnea difusa e mucocutacircnea caracterizadas pela

formaccedilatildeo de uacutelceras na pele (Brasil 2006 2010)

A LV eacute principalmente causada por L donovani (Jubb et al 1993) Nas

Ameacutericas Central e Sul Leishmania infantum (syn L chagasi) eacute a espeacutecie

envolvida na patogenia (Brasil 2006)

A patogenia das leishmanioses eacute fortemente influenciada por fatores

inerentes ao hospedeiro como suas caracteriacutesticas geneacuteticas e resposta

imunoloacutegica por fatores inerentes ao parasito como a virulecircncia da espeacutecie

de Leishmania infectante e por fatores inerentes ao vetor como sua

capacidade vetorial Como resultado dessa interaccedilatildeo entre as diferentes

espeacutecies do parasito do vetor e dos mecanismos da resposta imunoloacutegica do

hospedeiro vertebrado um espectro de manifestaccedilotildees cliacutenicas

histopatoloacutegicas e imunoloacutegicas eacute observado no homem (Laurenti 2010)

Imunologicamente apoacutes a inoculaccedilatildeo do parasito aqueles animais que seratildeo

resistentes agrave infecccedilatildeo promovem a ativaccedilatildeo de ceacutelulas TCD4+Th1 que

produziratildeo entre outras as citocinas interferon gama fator de necrose

tumoral alfa e interleucinas (IL) 2 e 12 Estas por sua vez ativaratildeo

macroacutefagos que faratildeo a destruiccedilatildeo das formas amastigotas intracelulares

(Pinelli et al 1995) Segundo os mesmos autores as ceacutelulas TCD8 citotoacutexicas

36

tambeacutem podem estar envolvidas na resistecircncia agrave doenccedila Jaacute nos animais que

manifestaratildeo sinais cliacutenicos da doenccedila haveraacute uma supressatildeo das ceacutelulas

TCD4+Th1 e ativaccedilatildeo das ceacutelulas TCD4+Th2 com produccedilatildeo de IL-4 IL-5 IL-

6 IL-10 IL-13 responsaacuteveis pela proliferaccedilatildeo de ceacutelulas B e

consequentemente produccedilatildeo de grande quantidade de anticorpos (Pinelli et al

1994 1999) Anticorpos estes natildeo protetores mas muitas vezes danosos

pois formaratildeo imunocomplexos que poderatildeo ser depositados nas membranas

basais de vaacuterios oacutergatildeos (Slappendel 1988 Martinez-Moreno et al 1995)

Usualmente a LV eacute observada como enfermidade debilitante crocircnica

com periacuteodos de febre perda de peso gradual anemia e leucopenia (Jones et

al 2003) Patologicamente o fiacutegado pode conter numerosos granulomas e eacute

simetricamente aumentado e marrom escuro O baccedilo eacute maior em duas a trecircs

vezes o seu tamanho normal simetricamente aumentado e marrom-escuro a

preto na sua superfiacutecie capsular Os linfonodos estatildeo moderadamente

aumentados e irregulares sem outras mudanccedilas significativas na cavidade

abdominal exceto os rins que podem estar mais escuros que o normal (Jubb

et al 1993) A medula oacutessea eacute uniformemente avermelhada e amolecida

(Jones et al 2003)

As lesotildees microscoacutepicas da LV caracterizam-se por uma infiltraccedilatildeo

maciccedila em vaacuterios sistemas do organismo de enormes macroacutefagos cujo

citoplasma estaacute repleto de leishmacircnias A arquitetura dos linfonodos e do

baccedilo pode estar completamente obscurecida pelas ceacutelulas fagocitaacuterias

(Jones et al 2003)

Os foliacuteculos esplecircnicos satildeo hiperplaacutesicos geralmente com hialinose

folicular Em casos avanccedilados haacute atrofia de nodos e baccedilo e as aacutereas dos

sinus podem estar difusamente ocupadas por grandes macroacutefagos altamente

carregados com organismos intracitoplasmaacuteticos e numerosas ceacutelulas

plasmaacuteticas As lesotildees na medula oacutessea podem ser focais e consistem de

grupos de macroacutefagos epitelioacuteides com organismos fagocitados As

alteraccedilotildees renais satildeo variaacuteveis e podem consistir em manchas intersticiais

com algum envolvimento parasitaacuterio (Jubb et al 1993) e por este motivo

utiliza-se os criteacuterios de classificaccedilatildeo da Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede que

37

inclui glomerulopatias com alteraccedilotildees miacutenimas glomeruloesclerose

segmentar focal glomerulonefrite membranoproliferativa glomerulonefrite

proliferativa mesangial glomerulonefrite membranosa glomerulonefrite

crescecircntica e glomerulonefrite crocircnica (Churg et al 1985)

A LT eacute causada por 18 espeacutecies de Leishmania patogecircnicas para os

seres humanos (Ready 2013) A LT causada por L tropica e L major ocorre

principalmente no sul da Europa e nos paiacuteses do norte da Aacutefrica que

circundam o Mediterracircneo (Jones et al 2003) Nas Ameacutericas assim

denominada LTA a infecccedilatildeo humana ocorre por 11 espeacutecies (Ready 2013)

agrupadas nos subgecircneros Leishmania e Viannia onde as trecircs espeacutecies mais

importantes do subgecircnero Leishmania satildeo L mexicana L amazonensis e L

venezuelensis e do subgecircnero Viannia satildeo L braziliensis L panamensis L

peruviana e L guyanensis

A infecccedilatildeo caracteriza-se por uacutelceras ou noacutedulos uacutenicos ou muacuteltiplos na

pele com lento desenvolvimento e que habitualmente cicatrizam-se

espontaneamente depois de um periacuteodo de meses (Jones et al 2003) As

lesotildees cutacircneas tomam forma de uma uacutelcera crocircnica que se desenvolve de

paacutepulas inflamatoacuterias no local da picada do inseto Linfoacutecitos e ceacutelulas

plasmaacuteticas margeiam a lesatildeo e os neutroacutefilos satildeo atraiacutedos para os debris

Quando a inflamaccedilatildeo se estende agrave borda epitelial a ulceraccedilatildeo ocorre Muitos

parasitos estatildeo no interior de histioacutecitos e alguns estatildeo livres no tecido (Jubb

et al 1993) As lesotildees de longa duraccedilatildeo estatildeo circunscritas por um tecido

conjuntivo fibroblaacutestico o que lhes daacute um aspecto de granuloma tiacutepico (Jones

et al 2003)

A leishmaniose mucocutacircnea uma das formas cliacutenicas da LTA ocorre

no Meacutexico e nas Ameacutericas Central e do Sul A infecccedilatildeo parece com a

cutacircnea mas aleacutem da pele com frequecircncia as uacutelceras crocircnicas com bordas

elevadas e fundo granuloso estatildeo localizadas nas junccedilotildees mucocutacircneas e

podem ocorrer nas cavidades oral e nasal (Jones et al 2003 Brasil 2010

Laurenti 2010)

38

No Brasil jaacute foram identificadas sete espeacutecies responsaacuteveis pela LTA

sendo seis do subgecircnero Viannia e uma do subgecircnero Leishmania As trecircs

espeacutecies mais encontradas satildeo L braziliensis L guyanensis e L

amazonensis As espeacutecies L lainsoni L naiffi L lindenbergi e L shawi foram

identificadas mais recentemente em estados das regiotildees Norte e Nordeste

(Brasil 2010)

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF

Entre 2001 e 2012 cerca de 3000 casos confirmados de LV e 50 mil de

LTA foram registrados na regiatildeo Centro-Oeste do Brasil (RCO)

(wwwsaudegovbr) onde haacute pelo menos 127 espeacutecies de flebotomiacuteneos

registradas (Almeida et al 2015) Essa regiatildeo eacute coberta em sua maioria pelo

bioma Cerrado onde haacute vasta expansatildeo agropecuaacuteria e ocupaccedilatildeo do solo

devido o crescimento urbano desordenado o que poderia favorecer a

ocorrecircncia das leishmanioses (Galati et al 1996 Carranza-Tamayo et al

2010) O Centro-Oeste se destaca atualmente por estar se tornando um poacutelo

de atraccedilatildeo de populaccedilatildeo das demais regiotildees brasileiras devido agrave expansatildeo

da fronteira agriacutecola (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Um estudo da distribuiccedilatildeo territorial da LTA no Brasil (Negratildeo amp Ferreira

2014) mostrou que o Centro-Oeste corresponde a segunda maior regiatildeo em

coeficiente de detecccedilatildeo da doenccedila de 2001 a 2010 (199 casos por 100000

habitantes) Em Goiaacutes o nuacutemero de municiacutepios com registro da doenccedila

passou de 71 (306) em 1994 para 118 (487) em 1999 o que

corresponde a um acreacutescimo de 67 (Costa 2005) O Estado do Mato Grosso

eacute detentor do terceiro maior coeficiente de detecccedilatildeo ndash 765 casos por 100000

habitantes O Distrito Federal (DF) registra a transmissatildeo da LTA de

ocorrecircncia ciacuteclica desde 1992 e a partir de entatildeo apresenta coeficientes de

detecccedilatildeo bem inferiores ao que eacute considerado como baixo segundo

paracircmetros do Ministeacuterio da Sauacutede (lt25 casos por 100000 habitantes)

39

(Carvalho et al 2010) Com a expansatildeo das fronteiras agriacutecolas nesta regiatildeo

principalmente nos estados de Mato Grosso e Goiaacutes estes Estados passaram

a ser importante rota de fixaccedilatildeo do homem

No DF haacute evidecircncia de transmissatildeo autoacutectone de LTA O nuacutemero de casos

notificados de LTA procedentes do DF nos anos de 2003 2004 e 2005 foi de

31 57 e 26 respectivamente (Sampaio et al 2009) O primeiro caso de LV

autoacutectone no DF ocorreu em 2005 e trecircs oacutebitos foram confirmados ateacute 2009

(Carranza-Tamayo et al 2010) Entre 2007 e 2012 24 casos humanos de LV

autoacutectone foram registrados (SESDF 2012) Em 2013 foram notificadas no

Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo ndash SINANNET 98 pessoas

com suspeita de LV e 47 foram confirmadas sendo dois casos autoacutectones

provenientes de Sobradinho e Lago Norte dos quais um veio a oacutebito

Segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das Leishmanioses no DF para

o ano de 2015 dos 142 casos de LV notificados 39 foram confirmados

destes trecircs autoacutectones e 36 importados Foram atendidos 39 pacientes nas

unidades hospitalares do DF desses quatro evoluiacuteram a oacutebito dos quais um

autoacutectone da RA da Fercal e trecircs importados De janeiro a marccedilo de 2016

foram notificados 28 casos de LV dentre eles um caso autoacutectone proveniente

do Lago Norte aleacutem de sete importados e dois em investigaccedilatildeo para a

definiccedilatildeo do Local Provaacutevel de Infecccedilatildeo (LPI) Dos dez casos confirmados em

2016 foram atendidos dez pacientes nas unidades hospitalares do DF

desses dois evoluiacuteram a oacutebito dos quais um importado do estado de Goiaacutes e

um encontra-se em investigaccedilatildeo para definir o LPI

Em relaccedilatildeo agrave LTA no DF segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das

Leishmanioses no DF para o ano de 2015 foram confirmados 50 casos

destes 35 satildeo residentes do DF 14 de outras Unidades Federadas e um da

Guiana Francesa Dos 50 casos confirmados 35 satildeo importados nove

indeterminados seis em investigaccedilatildeo e nenhum autoacutectone Natildeo foi registrado

nenhum oacutebito relacionado agrave LTA no periacuteodo Dados do Boletim

Epidemioloacutegico de janeiro a marccedilo de 2016 confirmam sete casos da doenccedila

mas nenhum caso autoacutectone foi registrado Aleacutem disso nos uacuteltimos anos tecircm

sido registrados casos de LV em catildees domeacutesticos nas regiotildees norte e sul do

40

DF que vem sofrendo com a urbanizaccedilatildeo descontrolada da sua aacuterea rural

(Carranza-Tamayo et al 2010 Cardoso et al 2015)

17 Vetores

Flebotomiacuteneos (ordem Diptera famiacutelia Psychodidae subfamiacutelia

Phlebotominae) satildeo insetos com ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica ocorrendo sob

as mais diversas condiccedilotildees climaacuteticas e de altitude nos ambientes silvestres

rurais e urbanos Atualmente conhece-se cerca de 1003 espeacutecies das quais

537 estatildeo presentes na regiatildeo Neotropical e Neoaacutertica destas 277 foram

registradas no Brasil representando 28 do total e 53 das que ocorrem na

Regiatildeo Neotropical (Shimabukuro et al 2017) Dezenove espeacutecies de

flebotomiacuteneos estatildeo incriminadas como vetoras de espeacutecies de Leishmania

(Basano amp Camargo 2004 Shimabukuro amp Galati 2010)

Flebotomiacuteneos satildeo insetos pequenos de cor parda (ldquomosquito-palhardquo) e

de corpo cerdoso que normalmente natildeo ultrapassam 05 cm de comprimento

tecircm pernas longas e delgadas e apresentam como caracteriacutestica o voo

saltitante Ao contraacuterio dos outros diacutepteros os flebotomiacuteneos mantecircm a

postura ereta das asas mesmo em repouso Apenas as fecircmeas fazem

repasto sanguiacuteneo por serem adaptadas com o aparelho bucal picador-

sugador (Killick-Kendrick1999 Basano amp Camargo 2004) A hematofagia eacute

indispensaacutevel ao desenvolvimento ovariano (Carrera 1991) Entre os

inuacutemeros nomes populares que variam segundo os paiacuteses e as suas regiotildees

encontram-se mosquito palha asa dura asa branca tatuquira birigui

cangalha cangalhinha ligeirinho peacutela-eacutegua arrupiado (Martins et al 1978)

As formas imaturas podem ser encontradas em seus criadouros em solo

uacutemido mas natildeo molhado e em detritos ricos em mateacuteria orgacircnica em

decomposiccedilatildeo (Brazil amp Brazil 2003)

41

As fecircmeas dos flebotomiacuteneos geralmente apresentam haacutebito noturno

procuram fazer repasto sanguiacuteneo ao entardecer e comeccedilo da noite quando

transmitem o parasito para o novo hospedeiro Jaacute os machos alimentam-se de

frutas seiva de plantas entre outros por breve periacuteodo (Killick-

Kendrick1999) Durante o dia os flebotomiacuteneos procuram abrigo ou no

interior das residecircncias ou em matas em local protegido dos ventos Satildeo

frequentemente encontrados em tocas de outros animais como tatu buracos

em paredes de construccedilotildees ocos de paus ou bambus ou similares Em matas

fechadas devido a pouca luz em seu interior podem ser vistos mesmo

durante o dia inclusive ativos a procura de possiacuteveis animais ou o proacuteprio

homem para ser sugado (Basano amp Camargo 2004)

Killick‐Kendrick (1990) propotildeem quatro criteacuterios que devem ser

observados antes de se incriminar uma espeacutecie como vetora de zoonoses

satildeo eles alimentar-se em humanos e no reservatoacuterio animal manter os

parasitos apoacutes a ingestatildeo exibir parasitos indistinguiacuteveis daqueles isolados

de pacientes e transmitir o parasito pela picada Adicionalmente Ready (2013)

propotildee o criteacuterio relacionado a influecircncia da abundacircncia do vetor na

incidecircncia da leishmaniose comprovada por modelos matemaacuteticos

No Brasil as principais espeacutecies envolvidas na transmissatildeo da LTA satildeo

Bichromomyia flaviscutellata Nyssomyia whitmani Ny umbratilis Ny neivai

Psychodopygus wellcomei e Migonemyia migonei (Barbosa et al 2008 Ready

2013 Diniz et al 2014) Estas espeacutecies de flebotomiacuteneos foram definidas

como potenciais vetores de acordo com o Manual de Vigilacircncia da

Leishmaniose Tegumentar Americana do Ministeacuterio da Sauacutede por atenderem

a alguns dos criteacuterios que atribuem a uma espeacutecie a capacidade vetorial

segundo Killick-Kendrick amp Ward (1981) Killick-Kendrick (1990) e Ready

(2013) Cabe ressaltar que o papel vetorial de cada uma dessas espeacutecies

dependeraacute da espeacutecie de Leishmania presente no intestino da sua

capacidade de se infectar e transmitir o parasito a um novo hospedeiro (Brasil

2010 Pita-Pereira et al 2009 2011)

O principal vetor da LV nas Ameacutericas eacute o flebotomiacuteneo Lutzomyia

longipalpis espeacutecie bem adaptada ao ambiente peridomeacutestico e com ampla

42

distribuiccedilatildeo geograacutefica (Brasil 2010) poreacutem outros flebotomiacuteneos tambeacutem

podem estar participando do ciclo de LV principalmente nas aacutereas onde Lu

longipalpis eacute ausente (de Souza et al 2003 de Carvalho et al 2010)

Lutzomyia cruzi parece participar como vetor nos municiacutepios de Corumbaacute e

LadaacuterioMS na fronteira entre Brasil e Boliacutevia (Dos Santos et al 1998) e

Pintomyia (Pifanomyia) evansi eacute tambeacutem um importante vetor na Colocircmbia

(Travi et al 1990 Oviedo amp Moreno 1995 Montoya-Lerma amp Lane 1996 Travi

et al 1996) e Venezuela (Pifano 1964 Feliciangeli et al 1998)

43

18 Flebotomiacuteneos no DF

Atualmente conhece-se 29 espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF (Quadro1)

QUADRO 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte

Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al

2015 Galati 2015

Espeacutecies

Brumptomyia avellari (Costa Lima 1932)

Brumptomyia pintoi (Costa Lima 1932)

Micropygomyia longipennis (Barretto 1946)

Micropygomyia acanthopharynx (Martins Falcatildeo amp Silva 1962)

Micropygomyia quinquefer (Dyar 1929)

Evandromyia bacula (Martins Falcatildeo amp Silva 1965)

Evandromyia evandroi (Costa Lima amp Antunes 1936)

Evandromyia corumbaensis (Galati Nunes Oshiro amp Rego 1989)

Evandromyia teratodes (Martins Falcatildeo amp Silva 1964)

Evandromyia sallesi (Galvatildeo amp Coutinho 1939)

Evandromyia saulensis (Floch amp Abonnenc 1944)

Evandromyia lenti (Mangabeira 1938)

Pintomyia christenseni (Young amp Duncan 1994)

Pintomyia kuscheli (Le Pont Martinez Torrez-Espejo amp Dujardin 1998)

Pintomyia monticola (Costa Lima 1932)

Pintomyia fischeri (Pinto 1926)

Sciopemyia servulolimai (Damasceno amp Causey 1945)

Continua

44

Sciopemyia sordellii (Shannon amp Del Ponte 1927)

Lutzomyia longipalpis (Lutz amp Neiva 1912)

Lutzomyia ischnacantha Martins Souza amp Falcatildeo 1962

Psathyromyia lutziana (Costa Lima 1932)

Psathyromyia runoides (Fairchild amp Hertig 1953)

Psathyromyia brasiliensis (Costa Lima 1932)

Psathyromyia aragaoi (Costa Lima 1932)

Psathyromyia shannoni (Dyar 1929)

Nyssomyia whitmani (Antunes amp Coutinho 1939)

Nyssomyia neivai (Pinto 1926)

Nyssomyia intermedia (Lutz amp Neiva 1912)

Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira 1942)

No trabalho de Carvalho et al (2010) foram coletados mais de 17 mil

flebotomiacuteneos de 27 espeacutecies em diversos ambientes como nas diferentes

fitofisionomias do Cerrado abrigo de animais e no intradomiciacutelo Os autores

identificaram mais duas espeacutecies consideradas vetoras Ny neivai e Ps davisi

que auxiliaram no mapeamento das aacutereas de risco agrave transmissatildeo de

Leishmania

Ferreira et al (2014) analisaram a ocorrecircncia de flebotomiacuteneos em matas

de galeria do Distrito Federal (DF) nas estaccedilotildees seca e chuvosa Os autores

natildeo capturaram flebotomiacuteneos em novembro (estaccedilatildeo chuvosa) e em maio

(estaccedilatildeo seca) foram capturados 250 exemplares identificados como

Psathyromyia runoides (799) Pintomyia monticola (97) Mi quinquefer

(37) Pa shannoni (3) Bi flaviscutellata (07) Brumptomyia sp (07)

Pi kuscheli (07) Pa lutziana (Costa Lima) (07) e Sciopemyia sordellii

(07) De acordo com os resultados os autores relataram que em matas de

galeria do DF haveria maior ocorrecircncia de flebotomiacuteneos na estaccedilatildeo seca no

Continuaccedilatildeo QUADRO 1

45

niacutevel do solo e em aacutereas preservadas As espeacutecies Pa runoides Pi kuscheli

e Mi quinquefer foram registradas pela primeira vez no DF

Informaccedilotildees relevantes relacionadas agrave riqueza de espeacutecies abundacircncia

ocorrecircncia em distintas eacutepocas do ano somam dados que podem ser usados

para a melhor compreensatildeo da epidemiologia das doenccedilas e conhecimento

do comportamento dos flebotomiacuteneos nas matas de galeria proacuteximas agraves aacutereas

urbanas no DF

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp

Segundo Ashford (1996) o reservatoacuterio de uma infecccedilatildeo eacute definido como

o sistema ecoloacutegico no qual um agente infeccioso sobrevive

persistentemente Para as infecccedilotildees de transmissatildeo vetorial o sistema

compreenderia um ou mais vetores e um ou mais mamiacuteferos hospedeiros

que viveriam sob condiccedilotildees de densidade populacional proximidade espacial

entre outros fatores que permitiriam a transferecircncia continuada do agente

entre eles O autor designa o hospedeiro mamiacutefero responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo em longo prazo do agente infeccioso de hospedeiro reservatoacuterio

e define como zoonose uma doenccedila causada por parasitos cujos hospedeiros

satildeo o homem e outros mamiacuteferos

Entretanto a definiccedilatildeo de reservatoacuterio tem sofrido mudanccedilas significativas

no uacuteltimo seacuteculo fazendo-se necessaacuterio o estudo das zoonoses a partir de

perspectivas mais abrangentes Atualmente aceita-se que um reservatoacuterio

pode ser uma espeacutecie ou um complexo delas responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo

do parasito na natureza Dentro desse sistema-reservatoacuterio cada hospedeiro

desenvolve papeis diferentes na transmissatildeo em um determinado tempo e

espaccedilo isso eacute considera-se que ldquohospedeiros de manutenccedilatildeordquo sejam os

mamiacuteferos que podem ser infectados e mantecircm a infecccedilatildeo e que

ldquohospedeiros amplificadoresrdquo sejam os mamiacuteferos que aleacutem de manterem a

46

infecccedilatildeo desempenham uma caracteriacutestica que favoreccedila a transmissatildeo como

a presenccedila de mais parasitos no sangue e pele por periacuteodos maiores (Roque

amp Jansen 2014) Um estudo de reservatoacuterios silvestres e sinantroacutepicos de

espeacutecies de Leishmania nas Ameacutericas distinguiu as espeacutecies de mamiacuteferos

silvestres e sinantroacutepicos encontrados infectados com Leishmania spp

classificando-os em hospedeiros e potenciais reservatoacuterios (Roque amp

Jansen 2014) de acordo com a capacidade de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo ou de

transmissibilidade dos parasitos aos vetores por meio de xenodiagnoacutestico

positivo ou culturas de pele ou sangue

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de hospedeiros e

reservatoacuterios

Desde o seacuteculo passado a comunidade cientiacutefica tem demonstrado que

diferentes e numerosos mamiacuteferos silvestres podem se tornar infectados com

espeacutecies de Leishmania aleacutem das espeacutecies domeacutesticas e sinantroacutepicas

(animais natildeo domesticados que habitualmente compartilham e aproveitam-se

do ecoacutetopo humano) (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006 Roque amp Jansen

2014) Entretanto o foco deve ser mudado para a identificaccedilatildeo de espeacutecies

que podem servir como fontes de infecccedilatildeo para vetores e amplificaccedilatildeo de

focos enzooacuteticos temporalmente e regionalmente especiacuteficos constituindo

um risco para a transmissatildeo humana Esta mudanccedila depende da melhor

compreensatildeo de sistemas reservatoacuterios e do papel desempenhado por cada

espeacutecie de mamiacutefero na manutenccedilatildeo destes parasitos na natureza (Roque amp

Jansen 2014) Diversas espeacutecies das ordens Didelphimorphia Pilosa

Cingulata Rodentia Carnivora Primata e Chiroptera foram recentemente

classificadas como hospedeiros ou potenciais reservatoacuterios por Roque amp

Jansen (2014)

47

Os catildees domeacutesticos (Canis familiaris) satildeo considerados eficientes

reservatoacuterios de L infantum devido agrave alta susceptibilidade agrave infecccedilatildeo ao

frequentemente elevado parasitismo nesta espeacutecie e por causa da sua iacutentima

relaccedilatildeo com o homem tanto nas zonas urbanas quanto rurais (Dantas-Torres

amp Brandatildeo-Filho 2006) Os catildees como importantes reservatoacuterios domeacutesticos

de L infantum satildeo responsabilizados pela manutenccedilatildeo das endemias nos

grandes centros urbanos (Silva et al 2001 Medeiros et al 2005) Uma

consideraacutevel gama dos catildees infectados por espeacutecies de Leishmania satildeo

assintomaacuteticos seja por um determinado periacuteodo de tempo que pode chegar

a anos ateacute nunca apresentar sinais cliacutenicos ou sintomas da doenccedila Poreacutem

os catildees natildeo satildeo as uacutenicas fontes de infecccedilatildeo em todos os focos de LV no

Brasil (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Tambeacutem existe uma forte

tendecircncia para que os catildees assumam o papel de principais reservatoacuterios

domeacutesticos para L braziliensis o agente etioloacutegico da LTA mais disseminado

(Aguilar et al 1989 Madeira et al 2003 2006 Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho

2006 Castro et al 2007 Quaresma et al 2011) Entre os estudos que relatam

casos de infecccedilatildeo mista por L infantum e L braziliensis encontra-se os

trabalhos de Madeira et al (2006) e Quaresma et al (2011)

Aleacutem dos carniacutevoros descritos por Roque amp Jansen (2014) Cerdocyon

thous popularmente conhecido como cachorro do mato ou guaraxaim jaacute era

suspeito de desempenhar o papel de hospedeiro reservatoacuterio primaacuterio de L

infantum no Norte do Brasil (Lainson et al 1969) Os mesmos autores

descreveram a eficiecircncia dessa espeacutecie como fonte de infecccedilatildeo em 1990

Este caniacutedeo tambeacutem tem sido incriminado como hospedeiro reservatoacuterio

primaacuterio na Venezuela (Lainson et al 1987) Figueiredo et al (2008) relataram

o primeiro caso de L infantum em cachorro-vinagre (Speothos venaticus) no

Brasil no Estado do Mato Grosso Os autores chamam a atenccedilatildeo para os

controles parasitoloacutegicos em animais silvestres mantidos em cativeiros

principalmente quando estes fazem intercacircmbios entre zooloacutegicos brasileiros

Tambeacutem no Mato Grosso Souza et al (2010) relataram a infecccedilatildeo de

caniacutedeos silvestres por L infantum mantidos em cativeiro Foram coletadas

amostras de pele medula oacutessea e linfonodos de seis raposas (Cerdocyon

thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus) para detecccedilatildeo e

48

caracterizaccedilatildeo de Leishmania sp pela teacutecnica de PCR-RFLP Todos os

animais pesquisados apresentaram-se positivos para L infantum O estudo

destaca a importacircncia de monitoramento adequado dos animais e do maior

controle desta enfermidade jaacute que os animais estudados estavam em

ambientes de recreaccedilatildeo puacuteblica

De maneira geral as taxas de infecccedilatildeo em caniacutedeos natildeo domeacutesticos satildeo

baixas mas pode ser alta agraves vezes como observado nas raposas da

Ameacuterica do Sul (Lainson et al 1987) Poreacutem caniacutedeos silvestres

normalmente natildeo vivem perto de habitaccedilotildees humanas e logo eles teriam um

papel secundaacuterio na importacircncia da epidemiologia da LV enzooacutetica (Dantas-

Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Millaacuten et al (2016) encontraram Leishmania

sp em 375 das 32 raposas cinzas (Pseudalopex griseus) capturadas na

Patagocircnia Argentina Os achados dos autores tecircm elevada significacircncia pela

extensatildeo da aacuterea de distribuiccedilatildeo das leishmanioses na Ameacuterica do Sul por

suportar a existecircncia de um ciclo silvestre na ausecircncia de catildees e ainda na

transmissatildeo indicando que ou a distribuiccedilatildeo de flebotomiacuteneos eacute mais ampla

do que se pensava ou que a transmissatildeo de Leishmania por outros

artroacutepodes poderia ser possiacutevel

De acordo com Medeiros et al (2005) marsupiais didelfiacutedeos estatildeo entre

os principais reservatoacuterios rurais da doenccedila Didelphis albiventris foi o primeiro

mamiacutefero silvestre natildeo canino a ser descrito como hospedeiro de L infantum

no Novo Mundo (Sherlock et al 1984) Em aacutereas endecircmicas do Brasil e na

Colocircmbia espeacutecies de Didelphis tecircm frequentemente abrigado L infantum

(Corredor et al 1989 Travi et al 1994 Sherlock 1996 Cabrera et al 2003

Humberg et al 2012 Carreira et al 2012) e a presenccedila de D albiventris

poderia ser um fator associado a ocorrecircncia de infecccedilotildees assintomaacuteticas por

Leishmania na periferia de centros urbanos (Carranza-Tamayo et al 2016)

Outros marsupiais como Didelphis marsupialis Philander opossum e

Metachirus nudicaudatus jaacute foram detectados com Leishmania amazonensis

(Lainson et al 1981) mostrando que esses mamiacuteferos desempenham papel

importante na manutenccedilatildeo de Leishmania na natureza Em Barra de

Guaratiba estado do Rio de Janeiro a distacircncia das casas para as bordas

49

florestais sua altitude e a presenccedila de D marsupialis nos quintais das casas

foram considerados fatores preditores para infecccedilatildeo por L infantum em catildees

(Cabrera et al 2003)

Roedores sinantroacutepicos da famiacutelia Muridae como o rato de telhado (Rattus

rattus) e o camundongo (Mus musculus) compotildeem a lista de espeacutecies de

potenciais reservatoacuterios ou hospedeiros conforme a espeacutecie de Leishmania

encontrada e o local (Roque amp Jansen 2014) Rattus rattus jaacute foi encontrado

naturalmente infectado por L infantum (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

De Lima et al (2002) isolaram Leishmania braziliensis de R rattus na

Venezuela e Brandatildeo-Filho (2003) encontrou L braziliensis por meio de

eletroforese enzimaacutetica multilocus nesse mesmo hospedeiro Esse processo

de domiciliaccedilatildeo facilita a ligaccedilatildeo entre os ambientes peridomeacutestico e o

silvestre (Lainson et al1969) podendo estabelecer novos padrotildees

epidemioloacutegicos de LV particularmente no ciclo urbano de transmissatildeo

(Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

Helhazar et al (2013) reportaram pela primeira vez em Portugal a

infecccedilatildeo natural por L infantum em M musculus e em Rattus norvegicus

(ratazana) sugerindo que estes animais provavelmente desempenham papeacuteis

como potenciais reservatoacuterios no ciclo bioloacutegico do parasito Os autores

relatam que M musculus e R norvegicus satildeo animais que se proliferam muito

raacutepido e tecircm uma expectativa de vida de 12 e 24 meses respectivamente o

que poderia manter o parasito disponiacutevel por pelo menos um ano mesmo

durante a baixa atividade dos flebotomiacuteneos em determinadas estaccedilotildees do

ano Na Venezuela De Lima e colaboradores (2002) isolaram L braziliensis

em Sigmodon hispidus (rato do algodatildeo) aleacutem do R rattus

Mais de 200 espeacutecies de roedores estatildeo distribuiacutedas em haacutebitats semi-

aquaacuteticos terrestres e semi-fossoriais no Brasil (Bonvicino et al 2008) Esta

caracteriacutestica eacute provavelmente a principal razatildeo que explica a sua exposiccedilatildeo

aos diferentes ciclos de transmissatildeo de vaacuterias espeacutecies de Leishmania no

ambiente silvestre (Roque amp Jansen 2014a)

50

No Brasil Paacutedua et al (2011) relataram infecccedilatildeo natural por L braziliensis

no roedor sinantroacutepico M musculus e no roedor silvestre Necromys lasiurus a

partir de anaacutelises moleculares (PCR-RFLP) de medula oacutessea femoral e

fragmentos de pele Freitas et al (2012) no Estado de Mato Grosso uma

regiatildeo endecircmica para leishmaniose cutacircnea relataram infecccedilatildeo natural nas

mesmas espeacutecies e utilizando a mesma metodologia que Paacutedua et al (2011)

mostraram que a presenccedila de Leishmania em roedores sinantroacutepicos pode

ser uma ameaccedila aos humanos devido a cohabitaccedilatildeo de domiciacutelios humanos

nessa aacuterea de estudo

No Brasil existem poucos estudos de infecccedilatildeo natural de Leishmania em

roedores caviomorfos e cerca de 90 espeacutecimes foram analisados (Lainson et

al 1981 Quaresma et al 2011) Estudos experimentais apontaram duas

espeacutecies de caviomorfos como reservatoacuterios potenciais para Leishmania

Thrichomys laurentius infectado por L infantum e L braziliensis (Roque et al

2010) e Proechimys semispinosus infectados com L infantum (Travi et al

2002) Lainson amp Shaw (1968) encontraram o parasito L amazonensis no

roedor Proechimys guyannensis no norte do estado do Paraacute (Lainson amp Shaw

1972) Proechimys cuvieri foi descrito como hospedeiro de Leishmania spp

na Guiana Francesa por Dedet et al (1985)

Um estudo de Brandatildeo-Filho et al (1994) em pequenos mamiacuteferos

provaacuteveis reservatoacuterios de L braziliensis em Amaraji Pernambuco encontrou

amostras de esfregaccedilos hepaacuteticos e esplecircnicos com amastigotas em

Nectomys squamipes N lasiurus e tambeacutem em R rattus Apoacutes quase 10

anos um estudo realizado na mesma localidade de Pernambuco identificou L

braziliensis em R rattus e N lasiurus (Brandatildeo-Filho et al 2003)

Forattini et al (1972 1973) isolaram Leishmania de Akodon arviculoides

Oryzomys nigripes e Oryzomys capito laticeps Telleria et al (1999)

identificaram Leishmania amazonensis em Akodon spp por PCR kDNA

Exames histoloacutegicos de lesotildees nos roedores Oryzomys spp Nectomys

spinosus amoenus e Nectomys rattus revelaram amastigotas compatiacuteveis com

Leishmania (Lainson amp Shaw 1970) Leishmania amazonensis foi isolada de

Dedico este trabalho aos meus pais Ronaldo Rapello e Eliana Rapello meus

maiores mestres e incentivadores e para quem sinto profundo respeito e

agradecimento pelos ensinamentos de vida e amor incondicional

AGRADECIMENTOS

Agrave Deus por me guiar pelos caminhos que Ele traccedilou para minha vida ainda que

alguns inicialmente pareccedilam obscuros progressivamente se revelam

fundamentais para meu crescimento pessoal e profissional

Aos professores do Nuacutecleo de Medicina Tropical especialmente agraves professoras

Maria Regina Fernandes de Oliveira Elisabeth Carmem Duarte Elza Ferreira

Noronha e aos professores Gustavo Adolfo Sierra Romero Cleudson Nery de

Castro Pedro Luiz Tauil Wildo Navegantes de Arauacutejo e Joatildeo Barberino Santos

pela formaccedilatildeo teoacuterica e inspiraccedilatildeo profissional no campo da Epidemiologia

Ao meu orientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves pelo profissionalismo exemplar

pela constante motivaccedilatildeo pela participaccedilatildeo ativa em todas as etapas desse

processo mas tambeacutem pela compreensatildeo empatia paciecircncia e amizade ao

longo da jornada

Ao meu co-orientador Andrey Joseacute Andrade pelo extenso conhecimento

compartilhado pela identificaccedilatildeo de milhares de flebotomiacuteneos pelo incentivo

positivo e participaccedilatildeo em todas as etapas desse processo mas tambeacutem pelos

conselhos pela sinceridade pela paciecircncia e pela parceria do iniacutecio ao fim desse

doutorado

Agrave equipe do Laboratoacuterio Interdisciplinar de Biociecircncias e Faculdade de Medicina

e em especial agrave professora Nadjar Nitz Silva Lociks de Arauacutejo pelo vasto

conhecimento teoacuterico e praacutetico compartilhado pelas palavras de incentivo

fundamentais para o sucesso da etapa molecular mas tambeacutem pela doccedilura e

pela forccedila feminina por compartilhar sabedoria por se tornar um exemplo

profissional e pessoal para mim Agrave colega Thaiacutes Tacircmara Castro Minuzzi-Souza

por compartilhar sua experiecircncia profissional com paciecircncia pelos conselhos e

momentos que fortaleceram a amizade Agraves colegas Tamires Emanuele Vital e

Bruna Caroline Veacuteras de Carvalho pela ajuda na execuccedilatildeo das PCRs pela

paciecircncia pela gentileza e pelo agradaacutevel conviacutevio na etapa laboratorial

Agrave equipe do Laboratoacuterio de Parasitologia especialmente ao professor Marcos

Takasha Obara pelo incentivo e ajuda em vaacuterias etapas de trabalho e pela

amizade Ao colega Douglas Rocha pela ajuda no campo e na triagem

identificaccedilatildeo e fotografia dos flebotomiacuteneos Agrave colega Tauana de Souza Ferreira

por ser gentilmente prestativa em todas as etapas desse trabalho Agrave colega Thaiacutes

Oliveira por compartilhar o tempo e os conhecimentos profissionais pelos

agradaacuteveis momentos juntas pela amizade construiacuteda Agrave colega e teacutecnica

Renata Velocircso Timboacute pela ajuda na execuccedilatildeo de diversas etapas do processo

laboratorial e pela paciecircncia Agrave colega Mariana Neiva pela ajuda na execuccedilatildeo de

diversas etapas do processo laboratorial

Agrave melhor equipe de campo que algueacutem poderia ter Jocircnatas Ferreira Deacutebora

Juliana Rodrigues Martins Jeacutessica Toledo de Almeida Cristiana Santiago Nery

de Souza Agda Regina Melo Silva Thamerson Felipe Lelis dos Santos Saemis

Ferreira de Souza Tacircmela Steacutefany Lopes Silva Renecirc Cunha de Castro Rubens

Geraldo de Souza Jadson Joseacute Gomes da Silva Lana Cristina Evangelista

Ferreira Saacute Hayana Maria Boaventura Costa e ao senhor Barbosa Joseacute Bezerra

Ao meu parceiro Greacutegoire Saint Gal de Pons pela cumplicidade pelo amor pela

paciecircncia por ser um grande ouvinte pelos conselhos pela compreensatildeo nos

momentos de privaccedilatildeo de tempo em funccedilatildeo do curso por cuidar da nossa

famiacutelia

Aos meus filhos Lucca Rapello e Pierre Rapello pela paciecircncia e compreensatildeo

nos momentos de ausecircncia e por serem minhas razotildees de ser melhor

Ao meu irmatildeo Marcio Rapello e cunhada Gabriela Ortiz de Rozas pelos

momentos e palavras de apoio sempre bem-vindos

Agraves minhas avoacutes Annita Rapello (in memorian) e Eulina Machado (in memorian)

que foram para o Senhor ao longo desse doutorado mas que deixaram seus

ensinamentos para sempre na minha vida

Aos meus amigos pessoais que natildeo foram aqui citados mas que sabem o

quanto foram importantes para mim ao longo dessa etapa Vocecircs me fortalecem

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 A Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO 2016

27

Figura 2 Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte Rey 2002ndash CD room (Modificado)

32

Figura 3 Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral Leishmaniases (LV) CL Cutaneous Leishmaniases (LT) Fonte TDR ndash Wellcome Trust

34

Figura 4 Ilustraccedilatildeo das subunidades SSU e LSU intercaladas por espaccediladores de conservaccedilatildeo intermediaacuteria ITS (ITS1 e ITS2 espaccediladores internos transcritos) e ETS (espaccedilador externo transcrito) flanqueados pelo espaccedilador intergenocircmico (IGS) Fonte Vilgalyslab Duke University

63

Figura 5 Matas de Galeria amostradas em Brasiacutelia A Parque Nacional de Brasiacutelia B Fazenda Aacutegua Limpa C Jardim Botacircnico de Brasiacutelia D Reserva Bioloacutegica da Contagem

68

Figura 6 Localizaccedilatildeo geograacutefica das quatro aacutereas de estudo no Distrito Federal A PNB Parque Nacional de Brasiacutelia (PA PB) B REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem (RA RB) C FAL Fazenda Aacutegua Limpa da UNB (BA BB) D JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia (JA JB) Fonte Google Earth 2014

69

Figura 7 Armadilhas utilizadas nas amostragens de flebotomiacuteneos A armadilha do tipo HP B Armadilha do tipo Shannon

70

Figura 8 Armadilhas utilizadas para amostragens de mamiacuteferos A Armadilha tipo Tomahawk localizada no solo B Armadilha tipo Tomahawk com pequeno mamiacutefero capturado C Armadilha tipo Sherman localizada em estrato arboacutereo

72

Figura 9 Roedor marcado por um brinco de identificaccedilatildeo (observar a ponta da pinccedila)

73

Figura10 Base de trabalho de campo 74

Figura 11 Procedimentos de pesagem (A) e exame cliacutenico geral em roedor e marsupial (B)

75

Figura 12 Roedor apoacutes coleta de tecido A seta aponta o local da coleta da ponta de orelha

76

Capiacutetulo 1

Figura 1 Porcentagem de armadilhas positivas para flebotomiacuteneos em quatro matas de galeria no Distrito Federal em maio e setembro de 2014 FAL = Fazenda Aacutegua Limpa REBIO = Reserva Bioloacutegica da Contagem PNB = Parque Nacional de Brasiacutelia JBB = Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

86

Figura 2 A) Genitaacutelia de macho de Brumptomyia brumpti (10x) B) genitaacutelia masculina de Brumptomyia guimaraesi (10x) C) toacuterax do macho de Brumptomyia guimaraesi (10X) (Montados em baacutelsamo de canadaacute)

89

Figura 3 D) Cabeccedila de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (10x) E) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (40x) F) espermateca de Micropygomyia ferreirana (40x) (Montados em baacutelsamo do Canadaacute

90

Figura 4 G) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Evandromyia bourrouli (40x) H) espermateca de Evandromyia bourrouli (40X) I) genitaacutelia masculina de Evandromyia bourrouli (40X)

91

Figura 5 J) Ascoacuteide em flagelocircmeros de Psathyromyia pradobarrientosi (40X) K) Genitaacutelia masculina de Psathyromyia pradobarrientosi (10X) L) porccedilatildeo final do ducto ejaculatoacuterio de Psathyromyia pradobarrientosi (40X)

92

Capiacutetulo 2

Figura 1 Fluxograma explicativo dos meacutetodos utilizados para a obtenccedilatildeo e processamento dos flebotomiacuteneos

102

Figura 2 Amplificaccedilatildeo do gene Cacophany em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-R22 Amostras de flebotomiacuteneos

110

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de SSUrRNA em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-

R28 Amostras de flebotomiacuteneos Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

111

Capiacutetulo 3

Figura 1 Roedores capturados no presente trabalho A Oecomys bicolor B Calomys expulsus C Hylaeamys magacephalus D Rhipidomys macrurus E Nectomys rattus F Necromys lasiurus Fonte A B C D e F - Bonvicino (2008) E ndash Arquivo pessoal

125

Figura 2 Marsupiais capturados no presente trabalho A Didelphis albiventris B Gracilinanus agilis C e D Monodelphis americana Fonte arquivo pessoal

125

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 4 13 1617 20 21 25 82 e 86 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 4 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 48 55 70 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 5 Amplificaccedilatildeo de SSU rRNA em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 02 11 13 16 17 20 25 41 58 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

135

LISTA DE QUADROS E TABELAS

Quadro 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al 2015 Galati 2015

43

Capiacutetulo 1

Tabela 1 Nuacutemeros do cataacutelogo institucional dos voucheres de

espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados no presente estudo

84

Tabela 2 Espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados nas quatro aacutereas de estudo do Distrito Federal em maio e setembro de 2014 Novos registros para o Distrito Federal Novo registro para o cerrado Riqueza total de espeacutecies nas matas de galeria 16 espeacutecies

85

Tabela 3

Lista atualizada de espeacutecies de flebotomiacuteneos no Distrito Federal Brasil Novo registro para o Brasil Riqueza total 35 espeacutecies

87

Capiacutetulo 2

Tabela 1 Identificaccedilatildeo molecular dos ldquopoolsrdquo de flebotomiacuteneos fecircmeas

submetidos aos exames moleculares por aacuterea espeacutecie mecircs de coleta e nuacutemero de indiviacuteduos em cada ldquopoolrdquo

107

Capiacutetulo 3

Tabela 1 Espeacutecies de roedores e marsupiais didelfiacutedeos coletadas

nos meses de maio e setembro de 2014 na FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal Brasil

124

Tabela 2

Distribuiccedilatildeo das espeacutecies de mamiacuteferos capturados nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014

126

Tabela 3 Dados brutos da morfometria corporal sexo e idade das espeacutecies de mamiacuteferos capturadas nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014 As linhas realccediladas em amarelo correspondem aos animais positivos nos testes moleculares

127

Tabela 4

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU de Tripanossomatiacutedeos e ITS1 de Leishmania spp em animais da FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal

133

Tabela 5

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos e ITS-1 de Leishmania spp em animais da FAL PNB e JBB Distrito Federal

136

ABREVIATURAS E SIGLAS

APA Aacutereas de Proteccedilatildeo Ambiental

APPs Aacutereas de Preservaccedilatildeo Permanente

CEUA Comitecirc de Eacutetica de Uso Animal

DF Distrito Federal

DNA Aacutecido Desoxirribonucleacuteico

ELISA Ensaio de Imunoabsorccedilatildeo Enzimaacutetica

ETS Espaccedilador Externo Transcrito

FAL Fazenda Aacutegua Limpa

GDF Governo do Distrito Federal

IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos

Naturais Renovaacuteveis

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatiacutestica

IBRAM Instituto Brasiacutelia Ambiental

ICMBio Instituto Chico Medes de Biodiversidade

IGS Espaccediladores Intergecircnicos

IGS Espaccedilador Intergenocircmico

IM Intramuscular

ITS Internal Transcribed Spacer-

Regiatildeo Espaccediladora Transcrita Interna

ITS-1 Espaccediladores Internos Transcritos 1

ITS-2 Espaccediladores Internos Transcritos 2

JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

KOH Hidroacutexido de Potaacutessio

LC Leishmaniose Cutacircnea

LMC Leishmaniose Muco-cutacircnea

LSU Subunidade Maior

LTA Leishmaniose Tegumentar Americana

LV Leishmaniose Visceral

mgKg Miligramas por quilo

PBS Phosphate-buffered saline - Tampatildeo Fosfato Salino

PCR Polymerase Chain Reaction -Reaccedilatildeo da Polimerase em

Cadeia

PCR-RFLP Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restriccedilatildeo

PNB Parque Nacional de Brasiacutelia

RBC-DF Reserva da Biosfera do Cerrado no DF

RCO Regiatildeo Centro-Oeste

REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia Indireta

RNA Aacutecido Ribonucleacuteico

RNAr RNA ribossocircmico

SINAN-NET Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SSU Subunidade Menor

UC Unidades de Conservaccedilatildeo

UNB Universidade de Brasiacutelia

OMSWHO Organizaccedilatildeo Mundial de SauacutedeWorld Health Organization

OPAS Organizaccedilatildeo Pan-Americana da Sauacutede

CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento de Pessoal de Niacutevel

Superior

dNTPs

Deoxyribonucleotide Triphosphates ndash Desoxirribonucleotiacutedeo

Trifosfato)

Taq Thermus aquaticus

pb pares de bases

FINANCIAMENTO

O estudo foi financiado pela CAPES (processo ndeg127611 edital Parasitologia

Baacutesica) e pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical da

Universidade de Brasiacutelia

Sumaacuterio

1 INTRODUCcedilAtildeO

23

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas 23

12 Definiccedilatildeo 25

13 Epidemiologia 26

14 Agente Etioloacutegico 31

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose 35

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF 38

17 Vetores

40

18 Flebotomiacuteneos no DF 43

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp 45

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de Hospedeiros e Reservatoacuterios

46

111 A questatildeo ambiental do Distrito Federal 52

112 A fragmentaccedilatildeo florestal e as leishmanioses 55

113 Estrateacutegias de controle das leishmanioses 57

114 Diagnoacutestico parasitoloacutegico e imunoloacutegico das leishmanioses 58

115 Diagnoacutestico molecular das leishmanioses 61

116 Diagnoacutestico molecular da infecccedilatildeo por tripanossomatiacutedeos utilizando genes ribossocircmicos

62

2 JUSTIFICATIVA 64

3 OBJETIVOS 66

4 MATERIAL E MEacuteTODOS 67

41 Aacutereas de estudo 67

42 Amostragem de flebotomiacuteneos 70

43 Montagem dissecccedilatildeo e identificaccedilatildeo dos flebotomiacuteneos 71

44 Captura dos pequenos mamiacuteferos 71

45 Contenccedilatildeo e marcaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos 73

46 Coleta de material bioloacutegico 75

5 Resultados 77

51 Capiacutetulo 1 - Lista atualizada de flebotomiacuteneos (Diptera Psychodidae Phlebotominae) do Distrito Federal Brasil

77

RESUMO 78

Introduccedilatildeo 79

Material e Meacutetodos 80

Aacutereas de Estudo 80

Amostragem dos flebotomiacuteneos 81

Anaacutelise estatiacutestica 82

Resultados 82

Aspectos morfoloacutegicos para novos registros

88

Discussatildeo 93

52 Capiacutetulo 2 - Avaliaccedilatildeo de infecccedilatildeo natural por Leishmania spp em flebotomiacuteneos de matas de galeria do Distrito Federal Brasil

98

RESUMO 98

1 Introduccedilatildeo 100

2 Material e Meacutetodos 101

21 Amostragem dissecccedilatildeo e montagem dos flebotomiacuteneos 102

22 Extraccedilatildeo de DNA 103

23 PCR dirigida ao gene Cacophany 103

24 PCR dirigida ao gene SSU rDNA de tripanossomatiacutedeos 104

25 PCR dirigida ao ITS-I do rDNA 105

3 Resultados 106

4 Discussatildeo 111

53 Capiacutetulo 3 Ocorrecircncia de pequenos mamiacuteferos infectados por Leishmania spp em Matas de Galeria do Distrito Federal Brasil

115

RESUMO 115

1 Introduccedilatildeo 116

2 Material e meacutetodos 118

21 Aacuterea de estudo amostragem e identificaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos

118

22 Amostras bioloacutegicas e extraccedilatildeo do DNA 119

23 PCR dirigida ao gene SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos 120

24 PCR dirigida ao ITS- 1 do rRNA 121

25 Aspectos eacuteticos 122

26 Anaacutelise de dados 122

3 Resultados 123

4 Discussatildeo 137

41 Composiccedilatildeo da comunidade de mamiacuteferos no momento das coletas

137

42 Infecccedilatildeo natural por Leishmania spp nos pequenos mamiacuteferos das Matas de Galeria estudadas no Distrito Federal Brasil

141

6 Consideraccedilotildees Finais 148

7 Conclusotildees 151

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 152

9 ANEXOS 190

RESUMO

O conhecimento relacionado agrave transmissatildeo enzooacutetica de espeacutecies de

Leishmania no Distrito Federal ainda eacute escasso e a participaccedilatildeo de

flebotomiacuteneos e mamiacuteferos silvestres no ciclo de transmissatildeo desses

protozoaacuterios eacute objeto do presente estudo As aacutereas estudadas foram as matas

de galeria da Fazenda Aacutegua Limpa da Universidade de Brasiacutelia Reserva

Bioloacutegica da Contagem Parque Nacional de Brasiacutelia e Jardim Botacircnico de

Brasiacutelia em maio e setembro de 2014 O Capiacutetulo 1 traz a atualizaccedilatildeo da lista de

espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF Com esforccedilo de captura de 1280 armadilhas

HP e 16 armadilhas do tipo Shannon foram capturados 1209 flebotomiacuteneos

pertencentes a 16 espeacutecies Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espeacutecie

mais capturada Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia guimaraesi Br

brumpti Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas

pela primeira vez no DF ampliando a distribuiccedilatildeo geograacutefica das mesmas e

elevando para 35 o nuacutemero de espeacutecies registradas nessa unidade da

federaccedilatildeo O Capiacutetulo 2 analisou a infecccedilatildeo natural dos flebotomiacuteneos

capturados por Leishmania DNA foi extraiacutedo de 569 fecircmeas agrupadas em 87

ldquopoolsrdquo A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada agrave

amplificaccedilatildeo do gene cacophony da regiatildeo IVS6 A detecccedilatildeo dos

tripanossomatiacutedeos foi feita pela amplificaccedilatildeo das regiotildees SSU rRNA e ITS-1

Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp entretanto os

resultados do presente estudo natildeo implicam na inexistecircncia de vetores

infectados nestas matas de galeria O Capiacutetulo 3 analisou a ocorrecircncia e infecccedilatildeo

em pequenos mamiacuteferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp nas

mesmas aacutereas dos flebotomiacuteneos e nos mesmos periacuteodos Amostras de tecido

(fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamiacuteferos capturados e utilizadas

para a detecccedilatildeo molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e

PCR com alvo na regiatildeo ITS em 153 amostras Com um total de 5120

armadilhas-noite 172 pequenos mamiacuteferos foram capturados pertencentes agrave

trecircs espeacutecies de marsupiais (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis e

Monodephis americana) e seis espeacutecies de roedores (Rhipidomys macrurus

Oecomys bicolor Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys

rattus e Necromys lasiurus) Vinte amostras (1307) foram positivas

considerando ambos os marcadores moleculares quatro somente para SSU e

quatro somente para ITS As espeacutecies infectadas por Leishmania spp foram

Rhipidomys macrurus Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris Estas espeacutecies

devem participar da transmissatildeo enzooacutetica de Leishmania na REBIO FAL e JBB

sendo este o primeiro relato de mamiacuteferos silvestres infectados por este parasito

nestas duas uacuteltimas aacutereas Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se

que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espeacutecies incriminadas

vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenccedilatildeo da

transmissatildeo enzooacutetica desses tripanossomatiacutedeos

Palavras chaves Transmissatildeo enzooacutetica Leishmania spp roedores

marsupiais Phlebotominae Cerrado

ABSTRACT

Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce

and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis

transmission cycle is the subject of this study All samples were captured in

gallery forests of four areas Aacutegua Limpa Farm Biological Reserve of Contagem

Brasiliarsquos National Park and Botanic Garden of Brasiacutelia on May and September

2014 Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal

District The entire capture effort entailed 1280 HP light traps and 16 Shannon

traps 16 species were identified Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the

most captured species Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia

guimaraesi Br brumpti Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli

were registered for the first time in the Federal District elevating to 35 the number

of reported species at this federation unit Chapter 2 follows up the study of

Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies

DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools Fragments that

corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples

demonstrating the quality of the extracted DNA Trypanosomatids detection was

performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions All samples tested

negative for Leishmania spp Therefore negative results in the present study do

not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and

surroundings Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small

mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of

sandflies and during the same periods Tissue samples (ear tips) were obtained

from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested

PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples The entire

capture effort entailed 5120 night-traps and 172 small mammals from three

marsupials species (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis and Monodephis

americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus Oecomys bicolor

Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys rattus and Necromys

lasiurus) were captured Twenty samples (1307) were positive considering

both molecular markers four samples only for SSU and four sampes only for ITS

Leishmania spp infected species were Rhipidomys macrurus Gracilinanus

agilis and Didelphis albiventris These species might participate in the enzootic

transmition of Leishmania at REBIO FAL and JBB This is the first report of

Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas Considering all

results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species

from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the

maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Key words Enzootic transmission Leishmania spp rodents marsupials

Phlebotominae Brazilian savanna

23

1 Introduccedilatildeo

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) eacute uma doenccedila existente

desde a antiguidade cujos relatos e descriccedilotildees datam do seacutec I dC (Basano

amp Camargo 2004) Altamirano-Enciso et al (2003) relataram trecircs teorias de

origem da doenccedila nas Ameacutericas A primeira de 1890 em que Juliano Moreira

amp Aguiar Pupo propunham uma origem mediterracircnea enfatizando que os

casos observados em pacientes da Bahia (Brasil) doenccedila chamada ldquobotatildeo da

Bahiardquo eram parecidos ao ldquobotatildeo do Orienterdquo Segundo os mesmos autores a

LTA teria sido introduzida pelos feniacutecios ou siacuterios que supostamente

chegaram ao nordeste do Brasil ainda na Antiguidade No entanto tais

viagens jamais foram comprovadas historicamente ou arqueologicamente

A segunda teoria eacute a de origem andina formulada a partir dos

descobrimentos de peccedilas de ceracircmica preacute-colombianas ou ldquohuacos peruanosrdquo

em 1895 e reforccedilada pelos documentos do seacuteculo XVI Contudo a discussatildeo

dos dados histoacutericos dividiu-se em dois grupos uma primeira corrente

representada pelos defensores das chamadas ldquoevidecircnciasrdquo histoacutericas cujos

argumentos se reforccedilam pelos estudos das representaccedilotildees de lesotildees feitas

em objetos de ceracircmica e outro grupo de estudiosos que questionava essa

fonte histoacuterica por ser descrita por cronistas que natildeo eram meacutedicos Atribui-se

a essa discussatildeo grande importacircncia porque se passaram quase 80 anos

desde que Eduardo Rabello (1925) propocircs que as origens da leishmaniose

muco-cutacircnea (LMC) estariam inicialmente focalizadas nos territoacuterios frios

sugerindo as regiotildees da Boliacutevia e do Peru predominando esta teoria na

literatura biomeacutedica

24

Mais recentemente a chamada teoria monofileacutetica para origem das

leishmacircnias foi formulada por Thomas-Soccol et al (1993) que baseando-se

em estudos de DNA mitocondrial de 20 espeacutecies de leishmacircnias do mundo

consideram que os subgecircneros Viannia e Leishmania propostos por Lainson

amp Shaw (1972) tiveram origem comum desde os periacuteodos Cretaacuteceo e

Juraacutessico haacute 120 milhotildees de anos quando os continentes estavam unidos na

Pangeacuteia Contudo a questatildeo do local de origem das leishmacircnias continua

controversa entre as regiotildees Neotropical Paleaacutertica e Africana

Cerqueira no Brasil em 1855 observou a existecircncia da forma cutacircnea

identificando-a clinicamente como ldquobotatildeo de Biskrardquo e Breda em 1895 na

Itaacutelia descreveu a doenccedila em italianos provenientes de Satildeo Paulo

Lindenberg (1909) encontrou ldquoformas de Leishmaniardquo idecircnticas agrave

Leishmania tropica da leishmaniose do Velho Mundo em lesotildees cutacircneas de

indiviacuteduos que trabalhavam nas matas do interior do Estado de Satildeo Paulo o

que confirmou a natureza leishmanioacutetica das lesotildees cutacircneas e nasofariacutengeas

(Basano amp Camargo 2004) Gaspar Vianna redescreveu o parasito como L

braziliensis por consideraacute-lo diferente da L tropica e assim denominou-se o

agente etioloacutegico da uacutelcera de Bauru ferida brava ou nariz de tapir

(Basano amp Camargo 2004)

No Brasil ateacute a deacutecada de 1970 todos os casos de LTA eram atribuiacutedos a

L braziliensis (Basano amp Camargo 2004) entretanto com o progresso das

pesquisas ecoepidemioloacutegicas e com o desenvolvimento das teacutecnicas

moleculares outras espeacutecies foram descritas sendo registradas ateacute o

momento sete espeacutecies causadoras da LTA (Brasil 2010) A leishmaniose

visceral (LV) era confundida no passado com outras doenccedilas endecircmicas e de

apresentaccedilatildeo cliacutenica semelhante como a malaacuteria em humanos (Palmer

1998)

No iniacutecio de 1903 James Homer Wright de Baltimore observou formas de

protozoaacuterios em uacutelcera cutacircnea de uma crianccedila da Armecircnia suspeita de ser

acometida pelo Botatildeo do Oriente e propocircs o nome de Welcozoma tropicum

para o agente causal hoje conhecido como L tropica Em 30 de maio desse

25

ano o inglecircs William Boog Leishman obteve uma bioacutepsia de fiacutegado de um

soldado inglecircs morto pela doenccedila febre de dum-dumou kala-azar na Iacutendia

Dois meses depois em 11 de julho Charles Donovan tambeacutem em bioacutepsia do

baccedilo de outro soldado morto descobriu independentemente o agente

etioloacutegico do calazar que era semelhante ao parasito da tripanossomiacutease em

sua fase intracelular (Altamirano-Enciso et al 2003)

O nome do gecircnero Leishmania foi criado pelo meacutedico inglecircs Ronald Ross

mas o termo Leishmania donovani para o agente da LV foi proposto por

Laveran amp Mesnil em 1903 embora segundo Basano amp Camargo (2004)

Cunningham em 1885 na Iacutendia foi o primeiro a observar o parasito do gecircnero

em casos de LV A partir daquele ano foram descritos outros

tripanossomatiacutedeos em paiacuteses do mar Mediterracircneo e da Aacutesia araacutebica As

duacutevidas de que L donovani e L tropica fossem tripanossomatiacutedeos e natildeo

piroplasmas soacute foram dissipadas quando Rogers amp Nicolle (1904) e

posteriormente Nicolle (1908) e Carlos Chagas (1908) demonstraram as

formas flageladas de ambos os parasitos em meio de aacutegar sangue ldquoin vitrordquo

Sergent et al (1921) reproduziram o rdquobotatildeo do Orienterdquo em hamsters ao

inocularem macerados de Phlebotomus papatasi alimentados em soldados

franceses na Argeacutelia comprovando a associaccedilatildeo entre L tropica e

flebotomiacuteneos No Brasil Henrique Aragatildeo (1922) estudou um surto de LTA

no Rio de Janeiro e associou os casos agrave presenccedila de elevada quantidade de

flebotomiacuteneos infectados por L braziliensis Ao inocular triturados destes

flebotomiacuteneos no focinho de catildees foi observada ulceraccedilatildeo com a presenccedila

de formas amastigotas intracelulares (Altamirano-Enciso et al 2003)

12 Definiccedilatildeo

As leishmanioses satildeo um conjunto de doenccedilas resultantes da infecccedilatildeo

por protozoaacuterios digeneacuteticos (Negratildeo amp Ferreira 2014) pertencentes ao filo

Euglenozoa classe Kinetoplastea ordem Trypanosomatida famiacutelia

26

Trypanosomatidae (Cavalier-Smith 2016) gecircnero Leishmania (Ross 1903)

com caraacuteter zoonoacutetico Esses protozoaacuterios satildeo transmitidos por insetos

vetores conhecidos por flebotomiacuteneos (Laurenti 2010 Ready 2013) O fator

em comum das espeacutecies de Leishmania estaacute na necessidade de passar por

um hospedeiro invertebrado obrigatoriamente um flebotomiacuteneo (ver item 17)

para se reproduzirem e atingirem a forma infectante (Jones et al 2003)

As doenccedilas estatildeo amplamente distribuiacutedas em todo o mundo e dividem-se

em dois grandes grupos as leishmanioses dermotroacutepicas e as leishmanioses

viscerotroacutepicas (Negratildeo amp Ferreira 2009)

13 Epidemiologia

As leishmanioses representam uma das endemias de maior

importacircncia em sauacutede puacuteblica no mundo (Laurenti 2010) As mesmas satildeo

consideradas emergentes em franca expansatildeo associada agrave pobreza e ao

deslocamento da populaccedilatildeo para aacutereas com ciclos de transmissatildeo existentes

sendo incluiacutedas na lista de Doenccedilas Tropicais Negligenciadas (WHO 2014)

As leishmanioses tecircm ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica sendo possiacutevel observar

casos da doenccedila em todos os continentes com exceccedilatildeo da Antaacutertica (Figura

1) (WHO 2009)

27

FIGURA 1 Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A

Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO

2016

Segundo a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (WHO 2016) satildeo estimados

900 mil a 16 milhatildeo de novos casos de leishmanioses destes 02 a 04

milhatildeo de novos casos de LV e 07 a 12 milhotildees de novos casos de LT onde

20 mil a 30 mil mortes ocorrem anualmente no mundo Ainda de acordo com

A

B

28

dados da WHO (2016) mais de 98 paiacuteses e territoacuterios satildeo endecircmicos para as

leishmanioses Destes 72 paiacuteses estatildeo em processo de desenvolvimento

incluindo 13 dos menos desenvolvidos e sua notificaccedilatildeo eacute compulsoacuteria em

apenas 30 deles (Negratildeo amp Ferreira 2014) Nas Ameacutericas as leishmanioses

ocorrem em 21 paiacuteses com expansatildeo geograacutefica associada agrave antropizaccedilatildeo

dos ciclos de transmissatildeo de Leishmania com o desmatamento abertura de

estradas e urbanizaccedilatildeo de aacutereas primitivas que tem favorecido o ciclo

peridomiciliar da doenccedila (Dedet 1999 Negratildeo amp Ferreira 2014)

As formas viscerotroacutepica e dermotroacutepica tecircm despertado especial

interesse devido a sua importacircncia meacutedica e econocircmica em aacutereas endecircmicas

em regiotildees tropicais e subtropicais da Ameacuterica Aacutefrica Iacutendia e paiacuteses nas

margens do Mediterracircneo (Negratildeo amp Ferreira 2009)

A LTA eacute encontrada em todos os paiacuteses das regiotildees tropicais e

subtropicais do mundo (Gontijo amp Carvalho 2003) exceto na Austraacutelia Nova

Zelacircndia e algumas ilhas do Paciacutefico Essa irregularidade na distribuiccedilatildeo

mundial eacute enfatizada pelo fato que os 90 dos casos tem ocorrido em apenas

seis paiacuteses Afeganistatildeo Brasil Iratilde Peru Araacutebia Saudita e Siacuteria (WHO 2008

Negratildeo amp Ferreira 2014) A doenccedila eacute descrita em quase todos os paiacuteses

americanos do sul dos Estados Unidos agrave Patagocircnia ao norte extremo da

Argentina (Millaacuten et al 2016) com exceccedilatildeo do Uruguai e do Chile (Lainson

1981) verificando-se a distribuiccedilatildeo das diversas formas clinico

epidemioloacutegicas com estreita relaccedilatildeo com condiccedilotildees floriacutesticas e fauniacutesticas

(Teodoro 1997) Na Ameacuterica Latina eacute assinalada desde a peniacutensula de

Yucataacuten Meacutexico (Castro 2002) compreendendo as proviacutencias do norte da

Argentina (Salomoacuten 2010 Millaacuten et al 2016) alcanccedilando maior importacircncia no

Brasil aleacutem do Peru

Negratildeo amp Ferreira (2014) consideraram que na Ameacuterica do Sul a LTA

apresenta dois padrotildees epidemioloacutegicos o padratildeo claacutessico constituiacutedo por

surtos epidecircmicos associados agrave derrubada de matas para a construccedilatildeo de

estradas e povoados e o padratildeo associado agraves formas de ocupaccedilatildeo do espaccedilo

em regiotildees de colonizaccedilatildeo antiga

29

A maioria dos casos de leishmanioses nas Ameacutericas eacute proveniente do

Brasil (Alvar et al 2012) onde as mesmas apresentam distribuiccedilatildeo em todas

as regiotildees geograacuteficas desde 2003 com maior incidecircncia observada no

Nordeste brasileiro (WHO 2014) No Brasil estatildeo incluiacutedas na lista de

doenccedilas que compotildeem o Sistema de Informaccedilatildeo de Doenccedilas de Notificaccedilatildeo

Compulsoacuteria (Brasil 2010)

De acordo com WHO (2016) no ano de 2014 foram notificados 3453

casos de LV no Brasil dos quais 82 com confirmaccedilatildeo laboratorial Para a

leishmaniose tegumentar (LT) foram notificados 19402 casos e 89

confirmados por exames De acordo com a mesma fonte 43 da populaccedilatildeo

brasileira estaacute sob o risco de LV (86997054 200362200) e 70 sob o risco

de LT (139396846200362200) Entre os fatores de risco para a ocorrecircncia

das leishmanioses encontra-se a subnutriccedilatildeo com dietas pobres em

proteiacutenas ferro vitamina A e zinco que pode comprometer a imunidade dos

indiviacuteduos aumentando o risco de uma infecccedilatildeo se agravar a precariedade

das condiccedilotildees sanitaacuterias domeacutesticas como a falta de gestatildeo de resiacuteduos e

esgoto a ceacuteu aberto que podem aumentar os locais de criaccedilatildeo e repouso de

flebotomiacuteneos e bem como o seu acesso aos seres humanos a migraccedilatildeo e

a exposiccedilatildeo ocupacional onde as pessoas ao se movimentarem ou se

estabelecerem em aacutereas de florestas ficam mais proacuteximas do habitat de

flebotomiacuteneos mudando o perfil epidemioloacutegico das doenccedilas (WHO 2014)

Negratildeo amp Ferreira (2014) estudaram a dispersatildeo da LT nas Ameacutericas e

relataram que o crescimento migratoacuterio aliado ao processo histoacuterico de

organizaccedilatildeo espacial nas uacuteltimas deacutecadas tem propiciado a proliferaccedilatildeo de

aacutereas de alto risco e infecccedilatildeo por Leishmania em aacutereas urbanas brasileiras

ora associadas a aacutereas verdes e outras como consequecircncia do desequiliacutebrio

ecoloacutegico evidenciada em algumas aacutereas periurbanas ou associadas agraves

aacutereas de desmatamentos Os mesmos autores enfatizaram que dentro dos

limites geograacuteficos da ocorrecircncia da doenccedila sua extensatildeo e severidade

variavam pelo endemismo ou ocorrecircncia esporaacutedica com condiccedilotildees

ecoloacutegicas especiacuteficas em diferentes regiotildees A distribuiccedilatildeo espacial da

doenccedila em territoacuterio brasileiro eacute resultado de diferentes condiccedilotildees geograacuteficas

30

ou ecoloacutegicas potencializadas pelo planejamento governamental inadequado

ou ineficiente em accedilotildees que promovam a conscientizaccedilatildeo visando o controle

prevenccedilatildeo ou detecccedilatildeo precoce da infecccedilatildeo em aacutereas de risco Para os

centros urbanos eacute de grande importacircncia o conhecimento de aacutereas que

podem oferecer risco agrave populaccedilatildeo exposta agraves formas de LTA de ocorrecircncia

ligadas ao ambiente (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Outro aspecto relevante dentro deste contexto de expansatildeo e urbanizaccedilatildeo

das leishmanioses em todo o mundo e principalmente no Brasil eacute a

possibilidade de se adquirir a doenccedila a partir de transfusotildees sanguiacuteneas (Luz

et al 1997 Urias et al 2009) Este fato eacute agravado em funccedilatildeo do diagnoacutestico

soroloacutegico para a LV natildeo estar incluiacutedo ainda na triagem dos doadores do

paiacutes (Laurenti 2010) que se restringe a triagem laboratorial normatizada das

seguintes doenccedilas doenccedila de Chagas siacutefilis hepatite B HIV malaacuteria HTLV

1 e 2 (Anvisa 2004)

Karagiannis-Voules et al (2013) associaram as doenccedilas a fatores soacutecio-

econocircmicos e agrave precipitaccedilatildeo Clima precipitaccedilatildeo temperatura e umidade satildeo

fatores que podem alterar as distribuiccedilotildees e influenciar na sobrevivecircncia e no

tamanho das populaccedilotildees de vetores e de hospedeiros reservatoacuterios

Flutuaccedilotildees na temperatura podem ter um efeito profundo no ciclo de

desenvolvimento de promastigotas de Leishmania em flebotomiacuteneos

permitindo a transmissatildeo do parasito em aacutereas anteriormente natildeo endecircmicas

para as doenccedilas Alteraccedilotildees climaacuteticas que levam agrave seca fome e inundaccedilotildees

podem levar ao deslocamento em massa e a migraccedilatildeo de pessoas para aacutereas

com transmissatildeo de leishmanioses (WHO 2014)

Acredita-se que os nuacutemeros de casos notificados natildeo correspondam a

evoluccedilatildeo da LTA devido agrave demora com que o paciente procura o sistema de

sauacutede e o difiacutecil diagnoacutestico por parte do proacuteprio sistema Mesmo levando-se

em conta as falhas de notificaccedilatildeo compulsoacuteria eacute evidente o crescente nuacutemero

de casos novos e a intensidade que atinge o homem sendo proporcional agraves

alteraccedilotildees ambientais decorrentes de atividades humanas em aacutereas

especiacuteficas na aacuterea de estudo proposta A prevalecircncia das diferentes

leishmanioses no continente americano eacute difiacutecil de ser mensurada devido

31

principalmente a subnotificaccedilotildees diagnoacutesticos incorretos afecccedilotildees

inaparentes variaccedilotildees de resposta do hospedeiro e multiplicidade de agentes

etioloacutegicos envolvidos (Marzochi 1992)

14 Agente Etioloacutegico

As infecccedilotildees em seres humanos e em animais por protozoaacuterios do

gecircnero Leishmania recebem denominaccedilotildees variadas mas podem ser

agrupadas com base em suas caracteriacutesticas comuns De acordo com

Akhoundi et al (2016) satildeo conhecidas 53 espeacutecies de Leishmania

pertencentes a cinco subgecircneros e complexos (Leishmania Viannia

Sauroleishmania complexo L enriettii e Paraleishmania) Desse total 31

espeacutecies parasitam espeacutecies de mamiacuteferos sendo que pelo menos 20 delas

infectam seres humanos Uma vez que as formas amastigotas satildeo

morfologicamente similares (Jubb et al1993 Palmer 1998) a diferenciaccedilatildeo

das espeacutecies que parasitam seres humanos eacute realizada por testes

moleculares indispensaacuteveis para o diagnoacutestico (Zampieri et al 2016)

As espeacutecies de Leishmania tecircm ciclos bioloacutegicos similares (Laurenti

2010) apresentando duas formas principais a amastigota observada dentro

de ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear em tecidos dos hospedeiros

vertebrados e a promastigota encontrada no sistema digestoacuterio de

flebotomiacuteneos fecircmeas (Figura 2) (Rey 2002) Ambos amastigotas e

promastigotas dividem-se repetidamente por divisatildeo binaacuteria (Palmer 1998)

32

FIGURA 2 ndash Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte

Rey 2002ndash CD room (Modificado)

No hospedeiro vertebrado as formas amastigotas encontram-se no

interior de vacuacuteolos parasitoacuteforos em macroacutefagos e ceacutelulas reticuloendoteliais

e medem cerca de 1 a 2 microm de largura por 2 a 4 microm de comprimento (Palmer

1988 Jones et al 2003) Esta forma se multiplica por divisatildeo assexuada ateacute o

rompimento da ceacutelula disseminando-se pela via hematogecircnica e linfaacutetica

para outros tecidos ricos em ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear como

linfonodos fiacutegado baccedilo medula oacutessea placas de Peyer por exemplo

iniciando uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria e proporcionando a atraccedilatildeo de outros

macroacutefagos gerando um ldquociclo viciosordquo (Figura 3) (Palmer 1998 Basano amp

Camargo 2004)

A forma amastigota da Leishmania eacute tipicamente ovoacuteide ou esfeacuterica

natildeo possui flagelo e nem membrana ondulatoacuteria (Palmer 1998) apenas um

rudimento de flagelo que estaacute presente na bolsa flagelar caracterizada como

uma pequena invaginaccedilatildeo da membrana do parasito (Figura 2) (Laurenti

2010) Nas preparaccedilotildees coradas por Romanovsky esses organismos

apresentam um citoplasma azul paacutelido contendo nas proximidades da

33

extremidade posterior um nuacutecleo uacutenico avermelhado com um cariossoma

central que se cora mais profundamente Tangenciando e anterior ao nuacutecleo

encontra-se um corpo em forma de bastonete e com uma cor violeta escuro o

cinetoplasto que conteacutem o corpo parabasal e o blefaroplasto em forma de

pinta (Figura 2) (Jones et al 2003) A forma amastigota conteacutem duas

concentraccedilotildees de DNA no nuacutecleo e em uma mitococircndria modificada o

cinetoplasto (Palmer 1998)

No seu hospedeiro invertebrado ou em culturas os organismos

assumem formas que variam desde a forma amastigota ateacute a forma de pro-

mastigota essa uacuteltima eacute esguia e fusiforme medindo cerca de 14 a 20microm de

comprimento e 15 a 4microm de largura Esta forma tem motilidade por meio de

um flagelo que se origina no blefaroplasto e projeta-se desde o poacutelo anterior

do organismo O cinetoplasto se situa na extremidade anterior do corpo

(Figura 2) (Jones et al 2003)

O flebotomiacuteneo hospedeiro invertebrado ao sugar sangue de um

animal infectado se infecta ao ingerir histioacutecitos da derme ou monoacutecitos do

sangue contendo formas amastigotas de Leishmania em seu citoplasma

(Basano amp Camargo 2004) Em seu intestino meacutedio e glacircndulas salivares as

leishmacircnias sofrem modificaccedilotildees morfoloacutegicas e bioquiacutemicas se congregam

na vaacutelvula cardiacuteaca onde o intestino anterior projeta-se no intestino meacutedio e

se transformam em promastigotas (com flagelo livre) que aderem ao epiteacutelio

do tubo digestoacuterio onde se multiplicam amplamente por divisotildees binaacuterias A

populaccedilatildeo daiacute resultante migra para a parte anterior do tubo digestoacuterio do

inseto diferenciando-se para formas promastigotas infectantes por volta de 3-

4 dias com invasatildeo da faringe do inseto sendo tambeacutem as chamadas formas

de promastigotas metaciacuteclicas encontradas na buco-faringe destes insetos

Quando os parasitos atingem o proacute-ventriacuteculo do inseto causam uma

obstruccedilatildeo no tubo digestoacuterio dificultando a ingestatildeo de sangue e levando a

fecircmea entatildeo faminta a picar muitas vezes pessoas ou animais Tais insetos

ao sugarem sangue (injetando na picada da pele a sua saliva e a saliva

apresentando propriedade anticoagulante homesostaacutetica anesteacutesica e

vasodilatadora) injetam tambeacutem as formas infectantes da Leishmania a qual

34

caindo na circulaccedilatildeo sanguiacutenea deste novo hospedeiro (vertebrado) vai

desenvolver a doenccedila numa das formas cliacutenicas conhecidas (Figura 3)

(Palmer 1998) ou na maioria dos casos levar a infecccedilotildees assintomaacuteticas e

autoresolutivas (Fukutani 2014)

FIGURA 3 ndash Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral

Leishmaniasis (LV) CL Cutaneous Leishmaniasis (LT) Fonte TDR ndash

Wellcome Trust

35

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose

Os protozoaacuterios do gecircnero Leishmania apresentam diferentes

distribuiccedilotildees geograacuteficas e as enfermidades por eles causadas satildeo

relativamente distintas embora possa haver superposiccedilatildeo nos sinais e

cliacutenicos e lesotildees (Jones et al 2003) Cerca de 20 espeacutecies de Leishmania satildeo

patogecircnicas para o ser humano (Laurenti 2010) As leishmanioses se

manifestam de quatro formas diferentes a depender da espeacutecie de

Leishmania envolvida e do estado imunoloacutegico do hospedeiro i) visceral

tambeacutem conhecida como calazar a forma mais grave da doenccedila ii) cutacircnea

a mais comum iii) mucocutacircnea e iv) cutacircnea difusa A LV eacute uma doenccedila

crocircnica sistecircmica que afeta os oacutergatildeos como o fiacutegado e o baccedilo A LTA inclui

as formas cutacircnea cutacircnea difusa e mucocutacircnea caracterizadas pela

formaccedilatildeo de uacutelceras na pele (Brasil 2006 2010)

A LV eacute principalmente causada por L donovani (Jubb et al 1993) Nas

Ameacutericas Central e Sul Leishmania infantum (syn L chagasi) eacute a espeacutecie

envolvida na patogenia (Brasil 2006)

A patogenia das leishmanioses eacute fortemente influenciada por fatores

inerentes ao hospedeiro como suas caracteriacutesticas geneacuteticas e resposta

imunoloacutegica por fatores inerentes ao parasito como a virulecircncia da espeacutecie

de Leishmania infectante e por fatores inerentes ao vetor como sua

capacidade vetorial Como resultado dessa interaccedilatildeo entre as diferentes

espeacutecies do parasito do vetor e dos mecanismos da resposta imunoloacutegica do

hospedeiro vertebrado um espectro de manifestaccedilotildees cliacutenicas

histopatoloacutegicas e imunoloacutegicas eacute observado no homem (Laurenti 2010)

Imunologicamente apoacutes a inoculaccedilatildeo do parasito aqueles animais que seratildeo

resistentes agrave infecccedilatildeo promovem a ativaccedilatildeo de ceacutelulas TCD4+Th1 que

produziratildeo entre outras as citocinas interferon gama fator de necrose

tumoral alfa e interleucinas (IL) 2 e 12 Estas por sua vez ativaratildeo

macroacutefagos que faratildeo a destruiccedilatildeo das formas amastigotas intracelulares

(Pinelli et al 1995) Segundo os mesmos autores as ceacutelulas TCD8 citotoacutexicas

36

tambeacutem podem estar envolvidas na resistecircncia agrave doenccedila Jaacute nos animais que

manifestaratildeo sinais cliacutenicos da doenccedila haveraacute uma supressatildeo das ceacutelulas

TCD4+Th1 e ativaccedilatildeo das ceacutelulas TCD4+Th2 com produccedilatildeo de IL-4 IL-5 IL-

6 IL-10 IL-13 responsaacuteveis pela proliferaccedilatildeo de ceacutelulas B e

consequentemente produccedilatildeo de grande quantidade de anticorpos (Pinelli et al

1994 1999) Anticorpos estes natildeo protetores mas muitas vezes danosos

pois formaratildeo imunocomplexos que poderatildeo ser depositados nas membranas

basais de vaacuterios oacutergatildeos (Slappendel 1988 Martinez-Moreno et al 1995)

Usualmente a LV eacute observada como enfermidade debilitante crocircnica

com periacuteodos de febre perda de peso gradual anemia e leucopenia (Jones et

al 2003) Patologicamente o fiacutegado pode conter numerosos granulomas e eacute

simetricamente aumentado e marrom escuro O baccedilo eacute maior em duas a trecircs

vezes o seu tamanho normal simetricamente aumentado e marrom-escuro a

preto na sua superfiacutecie capsular Os linfonodos estatildeo moderadamente

aumentados e irregulares sem outras mudanccedilas significativas na cavidade

abdominal exceto os rins que podem estar mais escuros que o normal (Jubb

et al 1993) A medula oacutessea eacute uniformemente avermelhada e amolecida

(Jones et al 2003)

As lesotildees microscoacutepicas da LV caracterizam-se por uma infiltraccedilatildeo

maciccedila em vaacuterios sistemas do organismo de enormes macroacutefagos cujo

citoplasma estaacute repleto de leishmacircnias A arquitetura dos linfonodos e do

baccedilo pode estar completamente obscurecida pelas ceacutelulas fagocitaacuterias

(Jones et al 2003)

Os foliacuteculos esplecircnicos satildeo hiperplaacutesicos geralmente com hialinose

folicular Em casos avanccedilados haacute atrofia de nodos e baccedilo e as aacutereas dos

sinus podem estar difusamente ocupadas por grandes macroacutefagos altamente

carregados com organismos intracitoplasmaacuteticos e numerosas ceacutelulas

plasmaacuteticas As lesotildees na medula oacutessea podem ser focais e consistem de

grupos de macroacutefagos epitelioacuteides com organismos fagocitados As

alteraccedilotildees renais satildeo variaacuteveis e podem consistir em manchas intersticiais

com algum envolvimento parasitaacuterio (Jubb et al 1993) e por este motivo

utiliza-se os criteacuterios de classificaccedilatildeo da Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede que

37

inclui glomerulopatias com alteraccedilotildees miacutenimas glomeruloesclerose

segmentar focal glomerulonefrite membranoproliferativa glomerulonefrite

proliferativa mesangial glomerulonefrite membranosa glomerulonefrite

crescecircntica e glomerulonefrite crocircnica (Churg et al 1985)

A LT eacute causada por 18 espeacutecies de Leishmania patogecircnicas para os

seres humanos (Ready 2013) A LT causada por L tropica e L major ocorre

principalmente no sul da Europa e nos paiacuteses do norte da Aacutefrica que

circundam o Mediterracircneo (Jones et al 2003) Nas Ameacutericas assim

denominada LTA a infecccedilatildeo humana ocorre por 11 espeacutecies (Ready 2013)

agrupadas nos subgecircneros Leishmania e Viannia onde as trecircs espeacutecies mais

importantes do subgecircnero Leishmania satildeo L mexicana L amazonensis e L

venezuelensis e do subgecircnero Viannia satildeo L braziliensis L panamensis L

peruviana e L guyanensis

A infecccedilatildeo caracteriza-se por uacutelceras ou noacutedulos uacutenicos ou muacuteltiplos na

pele com lento desenvolvimento e que habitualmente cicatrizam-se

espontaneamente depois de um periacuteodo de meses (Jones et al 2003) As

lesotildees cutacircneas tomam forma de uma uacutelcera crocircnica que se desenvolve de

paacutepulas inflamatoacuterias no local da picada do inseto Linfoacutecitos e ceacutelulas

plasmaacuteticas margeiam a lesatildeo e os neutroacutefilos satildeo atraiacutedos para os debris

Quando a inflamaccedilatildeo se estende agrave borda epitelial a ulceraccedilatildeo ocorre Muitos

parasitos estatildeo no interior de histioacutecitos e alguns estatildeo livres no tecido (Jubb

et al 1993) As lesotildees de longa duraccedilatildeo estatildeo circunscritas por um tecido

conjuntivo fibroblaacutestico o que lhes daacute um aspecto de granuloma tiacutepico (Jones

et al 2003)

A leishmaniose mucocutacircnea uma das formas cliacutenicas da LTA ocorre

no Meacutexico e nas Ameacutericas Central e do Sul A infecccedilatildeo parece com a

cutacircnea mas aleacutem da pele com frequecircncia as uacutelceras crocircnicas com bordas

elevadas e fundo granuloso estatildeo localizadas nas junccedilotildees mucocutacircneas e

podem ocorrer nas cavidades oral e nasal (Jones et al 2003 Brasil 2010

Laurenti 2010)

38

No Brasil jaacute foram identificadas sete espeacutecies responsaacuteveis pela LTA

sendo seis do subgecircnero Viannia e uma do subgecircnero Leishmania As trecircs

espeacutecies mais encontradas satildeo L braziliensis L guyanensis e L

amazonensis As espeacutecies L lainsoni L naiffi L lindenbergi e L shawi foram

identificadas mais recentemente em estados das regiotildees Norte e Nordeste

(Brasil 2010)

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF

Entre 2001 e 2012 cerca de 3000 casos confirmados de LV e 50 mil de

LTA foram registrados na regiatildeo Centro-Oeste do Brasil (RCO)

(wwwsaudegovbr) onde haacute pelo menos 127 espeacutecies de flebotomiacuteneos

registradas (Almeida et al 2015) Essa regiatildeo eacute coberta em sua maioria pelo

bioma Cerrado onde haacute vasta expansatildeo agropecuaacuteria e ocupaccedilatildeo do solo

devido o crescimento urbano desordenado o que poderia favorecer a

ocorrecircncia das leishmanioses (Galati et al 1996 Carranza-Tamayo et al

2010) O Centro-Oeste se destaca atualmente por estar se tornando um poacutelo

de atraccedilatildeo de populaccedilatildeo das demais regiotildees brasileiras devido agrave expansatildeo

da fronteira agriacutecola (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Um estudo da distribuiccedilatildeo territorial da LTA no Brasil (Negratildeo amp Ferreira

2014) mostrou que o Centro-Oeste corresponde a segunda maior regiatildeo em

coeficiente de detecccedilatildeo da doenccedila de 2001 a 2010 (199 casos por 100000

habitantes) Em Goiaacutes o nuacutemero de municiacutepios com registro da doenccedila

passou de 71 (306) em 1994 para 118 (487) em 1999 o que

corresponde a um acreacutescimo de 67 (Costa 2005) O Estado do Mato Grosso

eacute detentor do terceiro maior coeficiente de detecccedilatildeo ndash 765 casos por 100000

habitantes O Distrito Federal (DF) registra a transmissatildeo da LTA de

ocorrecircncia ciacuteclica desde 1992 e a partir de entatildeo apresenta coeficientes de

detecccedilatildeo bem inferiores ao que eacute considerado como baixo segundo

paracircmetros do Ministeacuterio da Sauacutede (lt25 casos por 100000 habitantes)

39

(Carvalho et al 2010) Com a expansatildeo das fronteiras agriacutecolas nesta regiatildeo

principalmente nos estados de Mato Grosso e Goiaacutes estes Estados passaram

a ser importante rota de fixaccedilatildeo do homem

No DF haacute evidecircncia de transmissatildeo autoacutectone de LTA O nuacutemero de casos

notificados de LTA procedentes do DF nos anos de 2003 2004 e 2005 foi de

31 57 e 26 respectivamente (Sampaio et al 2009) O primeiro caso de LV

autoacutectone no DF ocorreu em 2005 e trecircs oacutebitos foram confirmados ateacute 2009

(Carranza-Tamayo et al 2010) Entre 2007 e 2012 24 casos humanos de LV

autoacutectone foram registrados (SESDF 2012) Em 2013 foram notificadas no

Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo ndash SINANNET 98 pessoas

com suspeita de LV e 47 foram confirmadas sendo dois casos autoacutectones

provenientes de Sobradinho e Lago Norte dos quais um veio a oacutebito

Segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das Leishmanioses no DF para

o ano de 2015 dos 142 casos de LV notificados 39 foram confirmados

destes trecircs autoacutectones e 36 importados Foram atendidos 39 pacientes nas

unidades hospitalares do DF desses quatro evoluiacuteram a oacutebito dos quais um

autoacutectone da RA da Fercal e trecircs importados De janeiro a marccedilo de 2016

foram notificados 28 casos de LV dentre eles um caso autoacutectone proveniente

do Lago Norte aleacutem de sete importados e dois em investigaccedilatildeo para a

definiccedilatildeo do Local Provaacutevel de Infecccedilatildeo (LPI) Dos dez casos confirmados em

2016 foram atendidos dez pacientes nas unidades hospitalares do DF

desses dois evoluiacuteram a oacutebito dos quais um importado do estado de Goiaacutes e

um encontra-se em investigaccedilatildeo para definir o LPI

Em relaccedilatildeo agrave LTA no DF segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das

Leishmanioses no DF para o ano de 2015 foram confirmados 50 casos

destes 35 satildeo residentes do DF 14 de outras Unidades Federadas e um da

Guiana Francesa Dos 50 casos confirmados 35 satildeo importados nove

indeterminados seis em investigaccedilatildeo e nenhum autoacutectone Natildeo foi registrado

nenhum oacutebito relacionado agrave LTA no periacuteodo Dados do Boletim

Epidemioloacutegico de janeiro a marccedilo de 2016 confirmam sete casos da doenccedila

mas nenhum caso autoacutectone foi registrado Aleacutem disso nos uacuteltimos anos tecircm

sido registrados casos de LV em catildees domeacutesticos nas regiotildees norte e sul do

40

DF que vem sofrendo com a urbanizaccedilatildeo descontrolada da sua aacuterea rural

(Carranza-Tamayo et al 2010 Cardoso et al 2015)

17 Vetores

Flebotomiacuteneos (ordem Diptera famiacutelia Psychodidae subfamiacutelia

Phlebotominae) satildeo insetos com ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica ocorrendo sob

as mais diversas condiccedilotildees climaacuteticas e de altitude nos ambientes silvestres

rurais e urbanos Atualmente conhece-se cerca de 1003 espeacutecies das quais

537 estatildeo presentes na regiatildeo Neotropical e Neoaacutertica destas 277 foram

registradas no Brasil representando 28 do total e 53 das que ocorrem na

Regiatildeo Neotropical (Shimabukuro et al 2017) Dezenove espeacutecies de

flebotomiacuteneos estatildeo incriminadas como vetoras de espeacutecies de Leishmania

(Basano amp Camargo 2004 Shimabukuro amp Galati 2010)

Flebotomiacuteneos satildeo insetos pequenos de cor parda (ldquomosquito-palhardquo) e

de corpo cerdoso que normalmente natildeo ultrapassam 05 cm de comprimento

tecircm pernas longas e delgadas e apresentam como caracteriacutestica o voo

saltitante Ao contraacuterio dos outros diacutepteros os flebotomiacuteneos mantecircm a

postura ereta das asas mesmo em repouso Apenas as fecircmeas fazem

repasto sanguiacuteneo por serem adaptadas com o aparelho bucal picador-

sugador (Killick-Kendrick1999 Basano amp Camargo 2004) A hematofagia eacute

indispensaacutevel ao desenvolvimento ovariano (Carrera 1991) Entre os

inuacutemeros nomes populares que variam segundo os paiacuteses e as suas regiotildees

encontram-se mosquito palha asa dura asa branca tatuquira birigui

cangalha cangalhinha ligeirinho peacutela-eacutegua arrupiado (Martins et al 1978)

As formas imaturas podem ser encontradas em seus criadouros em solo

uacutemido mas natildeo molhado e em detritos ricos em mateacuteria orgacircnica em

decomposiccedilatildeo (Brazil amp Brazil 2003)

41

As fecircmeas dos flebotomiacuteneos geralmente apresentam haacutebito noturno

procuram fazer repasto sanguiacuteneo ao entardecer e comeccedilo da noite quando

transmitem o parasito para o novo hospedeiro Jaacute os machos alimentam-se de

frutas seiva de plantas entre outros por breve periacuteodo (Killick-

Kendrick1999) Durante o dia os flebotomiacuteneos procuram abrigo ou no

interior das residecircncias ou em matas em local protegido dos ventos Satildeo

frequentemente encontrados em tocas de outros animais como tatu buracos

em paredes de construccedilotildees ocos de paus ou bambus ou similares Em matas

fechadas devido a pouca luz em seu interior podem ser vistos mesmo

durante o dia inclusive ativos a procura de possiacuteveis animais ou o proacuteprio

homem para ser sugado (Basano amp Camargo 2004)

Killick‐Kendrick (1990) propotildeem quatro criteacuterios que devem ser

observados antes de se incriminar uma espeacutecie como vetora de zoonoses

satildeo eles alimentar-se em humanos e no reservatoacuterio animal manter os

parasitos apoacutes a ingestatildeo exibir parasitos indistinguiacuteveis daqueles isolados

de pacientes e transmitir o parasito pela picada Adicionalmente Ready (2013)

propotildee o criteacuterio relacionado a influecircncia da abundacircncia do vetor na

incidecircncia da leishmaniose comprovada por modelos matemaacuteticos

No Brasil as principais espeacutecies envolvidas na transmissatildeo da LTA satildeo

Bichromomyia flaviscutellata Nyssomyia whitmani Ny umbratilis Ny neivai

Psychodopygus wellcomei e Migonemyia migonei (Barbosa et al 2008 Ready

2013 Diniz et al 2014) Estas espeacutecies de flebotomiacuteneos foram definidas

como potenciais vetores de acordo com o Manual de Vigilacircncia da

Leishmaniose Tegumentar Americana do Ministeacuterio da Sauacutede por atenderem

a alguns dos criteacuterios que atribuem a uma espeacutecie a capacidade vetorial

segundo Killick-Kendrick amp Ward (1981) Killick-Kendrick (1990) e Ready

(2013) Cabe ressaltar que o papel vetorial de cada uma dessas espeacutecies

dependeraacute da espeacutecie de Leishmania presente no intestino da sua

capacidade de se infectar e transmitir o parasito a um novo hospedeiro (Brasil

2010 Pita-Pereira et al 2009 2011)

O principal vetor da LV nas Ameacutericas eacute o flebotomiacuteneo Lutzomyia

longipalpis espeacutecie bem adaptada ao ambiente peridomeacutestico e com ampla

42

distribuiccedilatildeo geograacutefica (Brasil 2010) poreacutem outros flebotomiacuteneos tambeacutem

podem estar participando do ciclo de LV principalmente nas aacutereas onde Lu

longipalpis eacute ausente (de Souza et al 2003 de Carvalho et al 2010)

Lutzomyia cruzi parece participar como vetor nos municiacutepios de Corumbaacute e

LadaacuterioMS na fronteira entre Brasil e Boliacutevia (Dos Santos et al 1998) e

Pintomyia (Pifanomyia) evansi eacute tambeacutem um importante vetor na Colocircmbia

(Travi et al 1990 Oviedo amp Moreno 1995 Montoya-Lerma amp Lane 1996 Travi

et al 1996) e Venezuela (Pifano 1964 Feliciangeli et al 1998)

43

18 Flebotomiacuteneos no DF

Atualmente conhece-se 29 espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF (Quadro1)

QUADRO 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte

Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al

2015 Galati 2015

Espeacutecies

Brumptomyia avellari (Costa Lima 1932)

Brumptomyia pintoi (Costa Lima 1932)

Micropygomyia longipennis (Barretto 1946)

Micropygomyia acanthopharynx (Martins Falcatildeo amp Silva 1962)

Micropygomyia quinquefer (Dyar 1929)

Evandromyia bacula (Martins Falcatildeo amp Silva 1965)

Evandromyia evandroi (Costa Lima amp Antunes 1936)

Evandromyia corumbaensis (Galati Nunes Oshiro amp Rego 1989)

Evandromyia teratodes (Martins Falcatildeo amp Silva 1964)

Evandromyia sallesi (Galvatildeo amp Coutinho 1939)

Evandromyia saulensis (Floch amp Abonnenc 1944)

Evandromyia lenti (Mangabeira 1938)

Pintomyia christenseni (Young amp Duncan 1994)

Pintomyia kuscheli (Le Pont Martinez Torrez-Espejo amp Dujardin 1998)

Pintomyia monticola (Costa Lima 1932)

Pintomyia fischeri (Pinto 1926)

Sciopemyia servulolimai (Damasceno amp Causey 1945)

Continua

44

Sciopemyia sordellii (Shannon amp Del Ponte 1927)

Lutzomyia longipalpis (Lutz amp Neiva 1912)

Lutzomyia ischnacantha Martins Souza amp Falcatildeo 1962

Psathyromyia lutziana (Costa Lima 1932)

Psathyromyia runoides (Fairchild amp Hertig 1953)

Psathyromyia brasiliensis (Costa Lima 1932)

Psathyromyia aragaoi (Costa Lima 1932)

Psathyromyia shannoni (Dyar 1929)

Nyssomyia whitmani (Antunes amp Coutinho 1939)

Nyssomyia neivai (Pinto 1926)

Nyssomyia intermedia (Lutz amp Neiva 1912)

Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira 1942)

No trabalho de Carvalho et al (2010) foram coletados mais de 17 mil

flebotomiacuteneos de 27 espeacutecies em diversos ambientes como nas diferentes

fitofisionomias do Cerrado abrigo de animais e no intradomiciacutelo Os autores

identificaram mais duas espeacutecies consideradas vetoras Ny neivai e Ps davisi

que auxiliaram no mapeamento das aacutereas de risco agrave transmissatildeo de

Leishmania

Ferreira et al (2014) analisaram a ocorrecircncia de flebotomiacuteneos em matas

de galeria do Distrito Federal (DF) nas estaccedilotildees seca e chuvosa Os autores

natildeo capturaram flebotomiacuteneos em novembro (estaccedilatildeo chuvosa) e em maio

(estaccedilatildeo seca) foram capturados 250 exemplares identificados como

Psathyromyia runoides (799) Pintomyia monticola (97) Mi quinquefer

(37) Pa shannoni (3) Bi flaviscutellata (07) Brumptomyia sp (07)

Pi kuscheli (07) Pa lutziana (Costa Lima) (07) e Sciopemyia sordellii

(07) De acordo com os resultados os autores relataram que em matas de

galeria do DF haveria maior ocorrecircncia de flebotomiacuteneos na estaccedilatildeo seca no

Continuaccedilatildeo QUADRO 1

45

niacutevel do solo e em aacutereas preservadas As espeacutecies Pa runoides Pi kuscheli

e Mi quinquefer foram registradas pela primeira vez no DF

Informaccedilotildees relevantes relacionadas agrave riqueza de espeacutecies abundacircncia

ocorrecircncia em distintas eacutepocas do ano somam dados que podem ser usados

para a melhor compreensatildeo da epidemiologia das doenccedilas e conhecimento

do comportamento dos flebotomiacuteneos nas matas de galeria proacuteximas agraves aacutereas

urbanas no DF

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp

Segundo Ashford (1996) o reservatoacuterio de uma infecccedilatildeo eacute definido como

o sistema ecoloacutegico no qual um agente infeccioso sobrevive

persistentemente Para as infecccedilotildees de transmissatildeo vetorial o sistema

compreenderia um ou mais vetores e um ou mais mamiacuteferos hospedeiros

que viveriam sob condiccedilotildees de densidade populacional proximidade espacial

entre outros fatores que permitiriam a transferecircncia continuada do agente

entre eles O autor designa o hospedeiro mamiacutefero responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo em longo prazo do agente infeccioso de hospedeiro reservatoacuterio

e define como zoonose uma doenccedila causada por parasitos cujos hospedeiros

satildeo o homem e outros mamiacuteferos

Entretanto a definiccedilatildeo de reservatoacuterio tem sofrido mudanccedilas significativas

no uacuteltimo seacuteculo fazendo-se necessaacuterio o estudo das zoonoses a partir de

perspectivas mais abrangentes Atualmente aceita-se que um reservatoacuterio

pode ser uma espeacutecie ou um complexo delas responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo

do parasito na natureza Dentro desse sistema-reservatoacuterio cada hospedeiro

desenvolve papeis diferentes na transmissatildeo em um determinado tempo e

espaccedilo isso eacute considera-se que ldquohospedeiros de manutenccedilatildeordquo sejam os

mamiacuteferos que podem ser infectados e mantecircm a infecccedilatildeo e que

ldquohospedeiros amplificadoresrdquo sejam os mamiacuteferos que aleacutem de manterem a

46

infecccedilatildeo desempenham uma caracteriacutestica que favoreccedila a transmissatildeo como

a presenccedila de mais parasitos no sangue e pele por periacuteodos maiores (Roque

amp Jansen 2014) Um estudo de reservatoacuterios silvestres e sinantroacutepicos de

espeacutecies de Leishmania nas Ameacutericas distinguiu as espeacutecies de mamiacuteferos

silvestres e sinantroacutepicos encontrados infectados com Leishmania spp

classificando-os em hospedeiros e potenciais reservatoacuterios (Roque amp

Jansen 2014) de acordo com a capacidade de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo ou de

transmissibilidade dos parasitos aos vetores por meio de xenodiagnoacutestico

positivo ou culturas de pele ou sangue

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de hospedeiros e

reservatoacuterios

Desde o seacuteculo passado a comunidade cientiacutefica tem demonstrado que

diferentes e numerosos mamiacuteferos silvestres podem se tornar infectados com

espeacutecies de Leishmania aleacutem das espeacutecies domeacutesticas e sinantroacutepicas

(animais natildeo domesticados que habitualmente compartilham e aproveitam-se

do ecoacutetopo humano) (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006 Roque amp Jansen

2014) Entretanto o foco deve ser mudado para a identificaccedilatildeo de espeacutecies

que podem servir como fontes de infecccedilatildeo para vetores e amplificaccedilatildeo de

focos enzooacuteticos temporalmente e regionalmente especiacuteficos constituindo

um risco para a transmissatildeo humana Esta mudanccedila depende da melhor

compreensatildeo de sistemas reservatoacuterios e do papel desempenhado por cada

espeacutecie de mamiacutefero na manutenccedilatildeo destes parasitos na natureza (Roque amp

Jansen 2014) Diversas espeacutecies das ordens Didelphimorphia Pilosa

Cingulata Rodentia Carnivora Primata e Chiroptera foram recentemente

classificadas como hospedeiros ou potenciais reservatoacuterios por Roque amp

Jansen (2014)

47

Os catildees domeacutesticos (Canis familiaris) satildeo considerados eficientes

reservatoacuterios de L infantum devido agrave alta susceptibilidade agrave infecccedilatildeo ao

frequentemente elevado parasitismo nesta espeacutecie e por causa da sua iacutentima

relaccedilatildeo com o homem tanto nas zonas urbanas quanto rurais (Dantas-Torres

amp Brandatildeo-Filho 2006) Os catildees como importantes reservatoacuterios domeacutesticos

de L infantum satildeo responsabilizados pela manutenccedilatildeo das endemias nos

grandes centros urbanos (Silva et al 2001 Medeiros et al 2005) Uma

consideraacutevel gama dos catildees infectados por espeacutecies de Leishmania satildeo

assintomaacuteticos seja por um determinado periacuteodo de tempo que pode chegar

a anos ateacute nunca apresentar sinais cliacutenicos ou sintomas da doenccedila Poreacutem

os catildees natildeo satildeo as uacutenicas fontes de infecccedilatildeo em todos os focos de LV no

Brasil (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Tambeacutem existe uma forte

tendecircncia para que os catildees assumam o papel de principais reservatoacuterios

domeacutesticos para L braziliensis o agente etioloacutegico da LTA mais disseminado

(Aguilar et al 1989 Madeira et al 2003 2006 Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho

2006 Castro et al 2007 Quaresma et al 2011) Entre os estudos que relatam

casos de infecccedilatildeo mista por L infantum e L braziliensis encontra-se os

trabalhos de Madeira et al (2006) e Quaresma et al (2011)

Aleacutem dos carniacutevoros descritos por Roque amp Jansen (2014) Cerdocyon

thous popularmente conhecido como cachorro do mato ou guaraxaim jaacute era

suspeito de desempenhar o papel de hospedeiro reservatoacuterio primaacuterio de L

infantum no Norte do Brasil (Lainson et al 1969) Os mesmos autores

descreveram a eficiecircncia dessa espeacutecie como fonte de infecccedilatildeo em 1990

Este caniacutedeo tambeacutem tem sido incriminado como hospedeiro reservatoacuterio

primaacuterio na Venezuela (Lainson et al 1987) Figueiredo et al (2008) relataram

o primeiro caso de L infantum em cachorro-vinagre (Speothos venaticus) no

Brasil no Estado do Mato Grosso Os autores chamam a atenccedilatildeo para os

controles parasitoloacutegicos em animais silvestres mantidos em cativeiros

principalmente quando estes fazem intercacircmbios entre zooloacutegicos brasileiros

Tambeacutem no Mato Grosso Souza et al (2010) relataram a infecccedilatildeo de

caniacutedeos silvestres por L infantum mantidos em cativeiro Foram coletadas

amostras de pele medula oacutessea e linfonodos de seis raposas (Cerdocyon

thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus) para detecccedilatildeo e

48

caracterizaccedilatildeo de Leishmania sp pela teacutecnica de PCR-RFLP Todos os

animais pesquisados apresentaram-se positivos para L infantum O estudo

destaca a importacircncia de monitoramento adequado dos animais e do maior

controle desta enfermidade jaacute que os animais estudados estavam em

ambientes de recreaccedilatildeo puacuteblica

De maneira geral as taxas de infecccedilatildeo em caniacutedeos natildeo domeacutesticos satildeo

baixas mas pode ser alta agraves vezes como observado nas raposas da

Ameacuterica do Sul (Lainson et al 1987) Poreacutem caniacutedeos silvestres

normalmente natildeo vivem perto de habitaccedilotildees humanas e logo eles teriam um

papel secundaacuterio na importacircncia da epidemiologia da LV enzooacutetica (Dantas-

Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Millaacuten et al (2016) encontraram Leishmania

sp em 375 das 32 raposas cinzas (Pseudalopex griseus) capturadas na

Patagocircnia Argentina Os achados dos autores tecircm elevada significacircncia pela

extensatildeo da aacuterea de distribuiccedilatildeo das leishmanioses na Ameacuterica do Sul por

suportar a existecircncia de um ciclo silvestre na ausecircncia de catildees e ainda na

transmissatildeo indicando que ou a distribuiccedilatildeo de flebotomiacuteneos eacute mais ampla

do que se pensava ou que a transmissatildeo de Leishmania por outros

artroacutepodes poderia ser possiacutevel

De acordo com Medeiros et al (2005) marsupiais didelfiacutedeos estatildeo entre

os principais reservatoacuterios rurais da doenccedila Didelphis albiventris foi o primeiro

mamiacutefero silvestre natildeo canino a ser descrito como hospedeiro de L infantum

no Novo Mundo (Sherlock et al 1984) Em aacutereas endecircmicas do Brasil e na

Colocircmbia espeacutecies de Didelphis tecircm frequentemente abrigado L infantum

(Corredor et al 1989 Travi et al 1994 Sherlock 1996 Cabrera et al 2003

Humberg et al 2012 Carreira et al 2012) e a presenccedila de D albiventris

poderia ser um fator associado a ocorrecircncia de infecccedilotildees assintomaacuteticas por

Leishmania na periferia de centros urbanos (Carranza-Tamayo et al 2016)

Outros marsupiais como Didelphis marsupialis Philander opossum e

Metachirus nudicaudatus jaacute foram detectados com Leishmania amazonensis

(Lainson et al 1981) mostrando que esses mamiacuteferos desempenham papel

importante na manutenccedilatildeo de Leishmania na natureza Em Barra de

Guaratiba estado do Rio de Janeiro a distacircncia das casas para as bordas

49

florestais sua altitude e a presenccedila de D marsupialis nos quintais das casas

foram considerados fatores preditores para infecccedilatildeo por L infantum em catildees

(Cabrera et al 2003)

Roedores sinantroacutepicos da famiacutelia Muridae como o rato de telhado (Rattus

rattus) e o camundongo (Mus musculus) compotildeem a lista de espeacutecies de

potenciais reservatoacuterios ou hospedeiros conforme a espeacutecie de Leishmania

encontrada e o local (Roque amp Jansen 2014) Rattus rattus jaacute foi encontrado

naturalmente infectado por L infantum (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

De Lima et al (2002) isolaram Leishmania braziliensis de R rattus na

Venezuela e Brandatildeo-Filho (2003) encontrou L braziliensis por meio de

eletroforese enzimaacutetica multilocus nesse mesmo hospedeiro Esse processo

de domiciliaccedilatildeo facilita a ligaccedilatildeo entre os ambientes peridomeacutestico e o

silvestre (Lainson et al1969) podendo estabelecer novos padrotildees

epidemioloacutegicos de LV particularmente no ciclo urbano de transmissatildeo

(Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

Helhazar et al (2013) reportaram pela primeira vez em Portugal a

infecccedilatildeo natural por L infantum em M musculus e em Rattus norvegicus

(ratazana) sugerindo que estes animais provavelmente desempenham papeacuteis

como potenciais reservatoacuterios no ciclo bioloacutegico do parasito Os autores

relatam que M musculus e R norvegicus satildeo animais que se proliferam muito

raacutepido e tecircm uma expectativa de vida de 12 e 24 meses respectivamente o

que poderia manter o parasito disponiacutevel por pelo menos um ano mesmo

durante a baixa atividade dos flebotomiacuteneos em determinadas estaccedilotildees do

ano Na Venezuela De Lima e colaboradores (2002) isolaram L braziliensis

em Sigmodon hispidus (rato do algodatildeo) aleacutem do R rattus

Mais de 200 espeacutecies de roedores estatildeo distribuiacutedas em haacutebitats semi-

aquaacuteticos terrestres e semi-fossoriais no Brasil (Bonvicino et al 2008) Esta

caracteriacutestica eacute provavelmente a principal razatildeo que explica a sua exposiccedilatildeo

aos diferentes ciclos de transmissatildeo de vaacuterias espeacutecies de Leishmania no

ambiente silvestre (Roque amp Jansen 2014a)

50

No Brasil Paacutedua et al (2011) relataram infecccedilatildeo natural por L braziliensis

no roedor sinantroacutepico M musculus e no roedor silvestre Necromys lasiurus a

partir de anaacutelises moleculares (PCR-RFLP) de medula oacutessea femoral e

fragmentos de pele Freitas et al (2012) no Estado de Mato Grosso uma

regiatildeo endecircmica para leishmaniose cutacircnea relataram infecccedilatildeo natural nas

mesmas espeacutecies e utilizando a mesma metodologia que Paacutedua et al (2011)

mostraram que a presenccedila de Leishmania em roedores sinantroacutepicos pode

ser uma ameaccedila aos humanos devido a cohabitaccedilatildeo de domiciacutelios humanos

nessa aacuterea de estudo

No Brasil existem poucos estudos de infecccedilatildeo natural de Leishmania em

roedores caviomorfos e cerca de 90 espeacutecimes foram analisados (Lainson et

al 1981 Quaresma et al 2011) Estudos experimentais apontaram duas

espeacutecies de caviomorfos como reservatoacuterios potenciais para Leishmania

Thrichomys laurentius infectado por L infantum e L braziliensis (Roque et al

2010) e Proechimys semispinosus infectados com L infantum (Travi et al

2002) Lainson amp Shaw (1968) encontraram o parasito L amazonensis no

roedor Proechimys guyannensis no norte do estado do Paraacute (Lainson amp Shaw

1972) Proechimys cuvieri foi descrito como hospedeiro de Leishmania spp

na Guiana Francesa por Dedet et al (1985)

Um estudo de Brandatildeo-Filho et al (1994) em pequenos mamiacuteferos

provaacuteveis reservatoacuterios de L braziliensis em Amaraji Pernambuco encontrou

amostras de esfregaccedilos hepaacuteticos e esplecircnicos com amastigotas em

Nectomys squamipes N lasiurus e tambeacutem em R rattus Apoacutes quase 10

anos um estudo realizado na mesma localidade de Pernambuco identificou L

braziliensis em R rattus e N lasiurus (Brandatildeo-Filho et al 2003)

Forattini et al (1972 1973) isolaram Leishmania de Akodon arviculoides

Oryzomys nigripes e Oryzomys capito laticeps Telleria et al (1999)

identificaram Leishmania amazonensis em Akodon spp por PCR kDNA

Exames histoloacutegicos de lesotildees nos roedores Oryzomys spp Nectomys

spinosus amoenus e Nectomys rattus revelaram amastigotas compatiacuteveis com

Leishmania (Lainson amp Shaw 1970) Leishmania amazonensis foi isolada de

AGRADECIMENTOS

Agrave Deus por me guiar pelos caminhos que Ele traccedilou para minha vida ainda que

alguns inicialmente pareccedilam obscuros progressivamente se revelam

fundamentais para meu crescimento pessoal e profissional

Aos professores do Nuacutecleo de Medicina Tropical especialmente agraves professoras

Maria Regina Fernandes de Oliveira Elisabeth Carmem Duarte Elza Ferreira

Noronha e aos professores Gustavo Adolfo Sierra Romero Cleudson Nery de

Castro Pedro Luiz Tauil Wildo Navegantes de Arauacutejo e Joatildeo Barberino Santos

pela formaccedilatildeo teoacuterica e inspiraccedilatildeo profissional no campo da Epidemiologia

Ao meu orientador Rodrigo Gurgel Gonccedilalves pelo profissionalismo exemplar

pela constante motivaccedilatildeo pela participaccedilatildeo ativa em todas as etapas desse

processo mas tambeacutem pela compreensatildeo empatia paciecircncia e amizade ao

longo da jornada

Ao meu co-orientador Andrey Joseacute Andrade pelo extenso conhecimento

compartilhado pela identificaccedilatildeo de milhares de flebotomiacuteneos pelo incentivo

positivo e participaccedilatildeo em todas as etapas desse processo mas tambeacutem pelos

conselhos pela sinceridade pela paciecircncia e pela parceria do iniacutecio ao fim desse

doutorado

Agrave equipe do Laboratoacuterio Interdisciplinar de Biociecircncias e Faculdade de Medicina

e em especial agrave professora Nadjar Nitz Silva Lociks de Arauacutejo pelo vasto

conhecimento teoacuterico e praacutetico compartilhado pelas palavras de incentivo

fundamentais para o sucesso da etapa molecular mas tambeacutem pela doccedilura e

pela forccedila feminina por compartilhar sabedoria por se tornar um exemplo

profissional e pessoal para mim Agrave colega Thaiacutes Tacircmara Castro Minuzzi-Souza

por compartilhar sua experiecircncia profissional com paciecircncia pelos conselhos e

momentos que fortaleceram a amizade Agraves colegas Tamires Emanuele Vital e

Bruna Caroline Veacuteras de Carvalho pela ajuda na execuccedilatildeo das PCRs pela

paciecircncia pela gentileza e pelo agradaacutevel conviacutevio na etapa laboratorial

Agrave equipe do Laboratoacuterio de Parasitologia especialmente ao professor Marcos

Takasha Obara pelo incentivo e ajuda em vaacuterias etapas de trabalho e pela

amizade Ao colega Douglas Rocha pela ajuda no campo e na triagem

identificaccedilatildeo e fotografia dos flebotomiacuteneos Agrave colega Tauana de Souza Ferreira

por ser gentilmente prestativa em todas as etapas desse trabalho Agrave colega Thaiacutes

Oliveira por compartilhar o tempo e os conhecimentos profissionais pelos

agradaacuteveis momentos juntas pela amizade construiacuteda Agrave colega e teacutecnica

Renata Velocircso Timboacute pela ajuda na execuccedilatildeo de diversas etapas do processo

laboratorial e pela paciecircncia Agrave colega Mariana Neiva pela ajuda na execuccedilatildeo de

diversas etapas do processo laboratorial

Agrave melhor equipe de campo que algueacutem poderia ter Jocircnatas Ferreira Deacutebora

Juliana Rodrigues Martins Jeacutessica Toledo de Almeida Cristiana Santiago Nery

de Souza Agda Regina Melo Silva Thamerson Felipe Lelis dos Santos Saemis

Ferreira de Souza Tacircmela Steacutefany Lopes Silva Renecirc Cunha de Castro Rubens

Geraldo de Souza Jadson Joseacute Gomes da Silva Lana Cristina Evangelista

Ferreira Saacute Hayana Maria Boaventura Costa e ao senhor Barbosa Joseacute Bezerra

Ao meu parceiro Greacutegoire Saint Gal de Pons pela cumplicidade pelo amor pela

paciecircncia por ser um grande ouvinte pelos conselhos pela compreensatildeo nos

momentos de privaccedilatildeo de tempo em funccedilatildeo do curso por cuidar da nossa

famiacutelia

Aos meus filhos Lucca Rapello e Pierre Rapello pela paciecircncia e compreensatildeo

nos momentos de ausecircncia e por serem minhas razotildees de ser melhor

Ao meu irmatildeo Marcio Rapello e cunhada Gabriela Ortiz de Rozas pelos

momentos e palavras de apoio sempre bem-vindos

Agraves minhas avoacutes Annita Rapello (in memorian) e Eulina Machado (in memorian)

que foram para o Senhor ao longo desse doutorado mas que deixaram seus

ensinamentos para sempre na minha vida

Aos meus amigos pessoais que natildeo foram aqui citados mas que sabem o

quanto foram importantes para mim ao longo dessa etapa Vocecircs me fortalecem

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 A Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO 2016

27

Figura 2 Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte Rey 2002ndash CD room (Modificado)

32

Figura 3 Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral Leishmaniases (LV) CL Cutaneous Leishmaniases (LT) Fonte TDR ndash Wellcome Trust

34

Figura 4 Ilustraccedilatildeo das subunidades SSU e LSU intercaladas por espaccediladores de conservaccedilatildeo intermediaacuteria ITS (ITS1 e ITS2 espaccediladores internos transcritos) e ETS (espaccedilador externo transcrito) flanqueados pelo espaccedilador intergenocircmico (IGS) Fonte Vilgalyslab Duke University

63

Figura 5 Matas de Galeria amostradas em Brasiacutelia A Parque Nacional de Brasiacutelia B Fazenda Aacutegua Limpa C Jardim Botacircnico de Brasiacutelia D Reserva Bioloacutegica da Contagem

68

Figura 6 Localizaccedilatildeo geograacutefica das quatro aacutereas de estudo no Distrito Federal A PNB Parque Nacional de Brasiacutelia (PA PB) B REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem (RA RB) C FAL Fazenda Aacutegua Limpa da UNB (BA BB) D JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia (JA JB) Fonte Google Earth 2014

69

Figura 7 Armadilhas utilizadas nas amostragens de flebotomiacuteneos A armadilha do tipo HP B Armadilha do tipo Shannon

70

Figura 8 Armadilhas utilizadas para amostragens de mamiacuteferos A Armadilha tipo Tomahawk localizada no solo B Armadilha tipo Tomahawk com pequeno mamiacutefero capturado C Armadilha tipo Sherman localizada em estrato arboacutereo

72

Figura 9 Roedor marcado por um brinco de identificaccedilatildeo (observar a ponta da pinccedila)

73

Figura10 Base de trabalho de campo 74

Figura 11 Procedimentos de pesagem (A) e exame cliacutenico geral em roedor e marsupial (B)

75

Figura 12 Roedor apoacutes coleta de tecido A seta aponta o local da coleta da ponta de orelha

76

Capiacutetulo 1

Figura 1 Porcentagem de armadilhas positivas para flebotomiacuteneos em quatro matas de galeria no Distrito Federal em maio e setembro de 2014 FAL = Fazenda Aacutegua Limpa REBIO = Reserva Bioloacutegica da Contagem PNB = Parque Nacional de Brasiacutelia JBB = Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

86

Figura 2 A) Genitaacutelia de macho de Brumptomyia brumpti (10x) B) genitaacutelia masculina de Brumptomyia guimaraesi (10x) C) toacuterax do macho de Brumptomyia guimaraesi (10X) (Montados em baacutelsamo de canadaacute)

89

Figura 3 D) Cabeccedila de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (10x) E) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (40x) F) espermateca de Micropygomyia ferreirana (40x) (Montados em baacutelsamo do Canadaacute

90

Figura 4 G) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Evandromyia bourrouli (40x) H) espermateca de Evandromyia bourrouli (40X) I) genitaacutelia masculina de Evandromyia bourrouli (40X)

91

Figura 5 J) Ascoacuteide em flagelocircmeros de Psathyromyia pradobarrientosi (40X) K) Genitaacutelia masculina de Psathyromyia pradobarrientosi (10X) L) porccedilatildeo final do ducto ejaculatoacuterio de Psathyromyia pradobarrientosi (40X)

92

Capiacutetulo 2

Figura 1 Fluxograma explicativo dos meacutetodos utilizados para a obtenccedilatildeo e processamento dos flebotomiacuteneos

102

Figura 2 Amplificaccedilatildeo do gene Cacophany em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-R22 Amostras de flebotomiacuteneos

110

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de SSUrRNA em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-

R28 Amostras de flebotomiacuteneos Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

111

Capiacutetulo 3

Figura 1 Roedores capturados no presente trabalho A Oecomys bicolor B Calomys expulsus C Hylaeamys magacephalus D Rhipidomys macrurus E Nectomys rattus F Necromys lasiurus Fonte A B C D e F - Bonvicino (2008) E ndash Arquivo pessoal

125

Figura 2 Marsupiais capturados no presente trabalho A Didelphis albiventris B Gracilinanus agilis C e D Monodelphis americana Fonte arquivo pessoal

125

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 4 13 1617 20 21 25 82 e 86 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 4 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 48 55 70 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 5 Amplificaccedilatildeo de SSU rRNA em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 02 11 13 16 17 20 25 41 58 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

135

LISTA DE QUADROS E TABELAS

Quadro 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al 2015 Galati 2015

43

Capiacutetulo 1

Tabela 1 Nuacutemeros do cataacutelogo institucional dos voucheres de

espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados no presente estudo

84

Tabela 2 Espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados nas quatro aacutereas de estudo do Distrito Federal em maio e setembro de 2014 Novos registros para o Distrito Federal Novo registro para o cerrado Riqueza total de espeacutecies nas matas de galeria 16 espeacutecies

85

Tabela 3

Lista atualizada de espeacutecies de flebotomiacuteneos no Distrito Federal Brasil Novo registro para o Brasil Riqueza total 35 espeacutecies

87

Capiacutetulo 2

Tabela 1 Identificaccedilatildeo molecular dos ldquopoolsrdquo de flebotomiacuteneos fecircmeas

submetidos aos exames moleculares por aacuterea espeacutecie mecircs de coleta e nuacutemero de indiviacuteduos em cada ldquopoolrdquo

107

Capiacutetulo 3

Tabela 1 Espeacutecies de roedores e marsupiais didelfiacutedeos coletadas

nos meses de maio e setembro de 2014 na FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal Brasil

124

Tabela 2

Distribuiccedilatildeo das espeacutecies de mamiacuteferos capturados nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014

126

Tabela 3 Dados brutos da morfometria corporal sexo e idade das espeacutecies de mamiacuteferos capturadas nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014 As linhas realccediladas em amarelo correspondem aos animais positivos nos testes moleculares

127

Tabela 4

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU de Tripanossomatiacutedeos e ITS1 de Leishmania spp em animais da FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal

133

Tabela 5

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos e ITS-1 de Leishmania spp em animais da FAL PNB e JBB Distrito Federal

136

ABREVIATURAS E SIGLAS

APA Aacutereas de Proteccedilatildeo Ambiental

APPs Aacutereas de Preservaccedilatildeo Permanente

CEUA Comitecirc de Eacutetica de Uso Animal

DF Distrito Federal

DNA Aacutecido Desoxirribonucleacuteico

ELISA Ensaio de Imunoabsorccedilatildeo Enzimaacutetica

ETS Espaccedilador Externo Transcrito

FAL Fazenda Aacutegua Limpa

GDF Governo do Distrito Federal

IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos

Naturais Renovaacuteveis

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatiacutestica

IBRAM Instituto Brasiacutelia Ambiental

ICMBio Instituto Chico Medes de Biodiversidade

IGS Espaccediladores Intergecircnicos

IGS Espaccedilador Intergenocircmico

IM Intramuscular

ITS Internal Transcribed Spacer-

Regiatildeo Espaccediladora Transcrita Interna

ITS-1 Espaccediladores Internos Transcritos 1

ITS-2 Espaccediladores Internos Transcritos 2

JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

KOH Hidroacutexido de Potaacutessio

LC Leishmaniose Cutacircnea

LMC Leishmaniose Muco-cutacircnea

LSU Subunidade Maior

LTA Leishmaniose Tegumentar Americana

LV Leishmaniose Visceral

mgKg Miligramas por quilo

PBS Phosphate-buffered saline - Tampatildeo Fosfato Salino

PCR Polymerase Chain Reaction -Reaccedilatildeo da Polimerase em

Cadeia

PCR-RFLP Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restriccedilatildeo

PNB Parque Nacional de Brasiacutelia

RBC-DF Reserva da Biosfera do Cerrado no DF

RCO Regiatildeo Centro-Oeste

REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia Indireta

RNA Aacutecido Ribonucleacuteico

RNAr RNA ribossocircmico

SINAN-NET Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SSU Subunidade Menor

UC Unidades de Conservaccedilatildeo

UNB Universidade de Brasiacutelia

OMSWHO Organizaccedilatildeo Mundial de SauacutedeWorld Health Organization

OPAS Organizaccedilatildeo Pan-Americana da Sauacutede

CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento de Pessoal de Niacutevel

Superior

dNTPs

Deoxyribonucleotide Triphosphates ndash Desoxirribonucleotiacutedeo

Trifosfato)

Taq Thermus aquaticus

pb pares de bases

FINANCIAMENTO

O estudo foi financiado pela CAPES (processo ndeg127611 edital Parasitologia

Baacutesica) e pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical da

Universidade de Brasiacutelia

Sumaacuterio

1 INTRODUCcedilAtildeO

23

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas 23

12 Definiccedilatildeo 25

13 Epidemiologia 26

14 Agente Etioloacutegico 31

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose 35

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF 38

17 Vetores

40

18 Flebotomiacuteneos no DF 43

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp 45

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de Hospedeiros e Reservatoacuterios

46

111 A questatildeo ambiental do Distrito Federal 52

112 A fragmentaccedilatildeo florestal e as leishmanioses 55

113 Estrateacutegias de controle das leishmanioses 57

114 Diagnoacutestico parasitoloacutegico e imunoloacutegico das leishmanioses 58

115 Diagnoacutestico molecular das leishmanioses 61

116 Diagnoacutestico molecular da infecccedilatildeo por tripanossomatiacutedeos utilizando genes ribossocircmicos

62

2 JUSTIFICATIVA 64

3 OBJETIVOS 66

4 MATERIAL E MEacuteTODOS 67

41 Aacutereas de estudo 67

42 Amostragem de flebotomiacuteneos 70

43 Montagem dissecccedilatildeo e identificaccedilatildeo dos flebotomiacuteneos 71

44 Captura dos pequenos mamiacuteferos 71

45 Contenccedilatildeo e marcaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos 73

46 Coleta de material bioloacutegico 75

5 Resultados 77

51 Capiacutetulo 1 - Lista atualizada de flebotomiacuteneos (Diptera Psychodidae Phlebotominae) do Distrito Federal Brasil

77

RESUMO 78

Introduccedilatildeo 79

Material e Meacutetodos 80

Aacutereas de Estudo 80

Amostragem dos flebotomiacuteneos 81

Anaacutelise estatiacutestica 82

Resultados 82

Aspectos morfoloacutegicos para novos registros

88

Discussatildeo 93

52 Capiacutetulo 2 - Avaliaccedilatildeo de infecccedilatildeo natural por Leishmania spp em flebotomiacuteneos de matas de galeria do Distrito Federal Brasil

98

RESUMO 98

1 Introduccedilatildeo 100

2 Material e Meacutetodos 101

21 Amostragem dissecccedilatildeo e montagem dos flebotomiacuteneos 102

22 Extraccedilatildeo de DNA 103

23 PCR dirigida ao gene Cacophany 103

24 PCR dirigida ao gene SSU rDNA de tripanossomatiacutedeos 104

25 PCR dirigida ao ITS-I do rDNA 105

3 Resultados 106

4 Discussatildeo 111

53 Capiacutetulo 3 Ocorrecircncia de pequenos mamiacuteferos infectados por Leishmania spp em Matas de Galeria do Distrito Federal Brasil

115

RESUMO 115

1 Introduccedilatildeo 116

2 Material e meacutetodos 118

21 Aacuterea de estudo amostragem e identificaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos

118

22 Amostras bioloacutegicas e extraccedilatildeo do DNA 119

23 PCR dirigida ao gene SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos 120

24 PCR dirigida ao ITS- 1 do rRNA 121

25 Aspectos eacuteticos 122

26 Anaacutelise de dados 122

3 Resultados 123

4 Discussatildeo 137

41 Composiccedilatildeo da comunidade de mamiacuteferos no momento das coletas

137

42 Infecccedilatildeo natural por Leishmania spp nos pequenos mamiacuteferos das Matas de Galeria estudadas no Distrito Federal Brasil

141

6 Consideraccedilotildees Finais 148

7 Conclusotildees 151

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 152

9 ANEXOS 190

RESUMO

O conhecimento relacionado agrave transmissatildeo enzooacutetica de espeacutecies de

Leishmania no Distrito Federal ainda eacute escasso e a participaccedilatildeo de

flebotomiacuteneos e mamiacuteferos silvestres no ciclo de transmissatildeo desses

protozoaacuterios eacute objeto do presente estudo As aacutereas estudadas foram as matas

de galeria da Fazenda Aacutegua Limpa da Universidade de Brasiacutelia Reserva

Bioloacutegica da Contagem Parque Nacional de Brasiacutelia e Jardim Botacircnico de

Brasiacutelia em maio e setembro de 2014 O Capiacutetulo 1 traz a atualizaccedilatildeo da lista de

espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF Com esforccedilo de captura de 1280 armadilhas

HP e 16 armadilhas do tipo Shannon foram capturados 1209 flebotomiacuteneos

pertencentes a 16 espeacutecies Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espeacutecie

mais capturada Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia guimaraesi Br

brumpti Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas

pela primeira vez no DF ampliando a distribuiccedilatildeo geograacutefica das mesmas e

elevando para 35 o nuacutemero de espeacutecies registradas nessa unidade da

federaccedilatildeo O Capiacutetulo 2 analisou a infecccedilatildeo natural dos flebotomiacuteneos

capturados por Leishmania DNA foi extraiacutedo de 569 fecircmeas agrupadas em 87

ldquopoolsrdquo A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada agrave

amplificaccedilatildeo do gene cacophony da regiatildeo IVS6 A detecccedilatildeo dos

tripanossomatiacutedeos foi feita pela amplificaccedilatildeo das regiotildees SSU rRNA e ITS-1

Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp entretanto os

resultados do presente estudo natildeo implicam na inexistecircncia de vetores

infectados nestas matas de galeria O Capiacutetulo 3 analisou a ocorrecircncia e infecccedilatildeo

em pequenos mamiacuteferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp nas

mesmas aacutereas dos flebotomiacuteneos e nos mesmos periacuteodos Amostras de tecido

(fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamiacuteferos capturados e utilizadas

para a detecccedilatildeo molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e

PCR com alvo na regiatildeo ITS em 153 amostras Com um total de 5120

armadilhas-noite 172 pequenos mamiacuteferos foram capturados pertencentes agrave

trecircs espeacutecies de marsupiais (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis e

Monodephis americana) e seis espeacutecies de roedores (Rhipidomys macrurus

Oecomys bicolor Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys

rattus e Necromys lasiurus) Vinte amostras (1307) foram positivas

considerando ambos os marcadores moleculares quatro somente para SSU e

quatro somente para ITS As espeacutecies infectadas por Leishmania spp foram

Rhipidomys macrurus Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris Estas espeacutecies

devem participar da transmissatildeo enzooacutetica de Leishmania na REBIO FAL e JBB

sendo este o primeiro relato de mamiacuteferos silvestres infectados por este parasito

nestas duas uacuteltimas aacutereas Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se

que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espeacutecies incriminadas

vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenccedilatildeo da

transmissatildeo enzooacutetica desses tripanossomatiacutedeos

Palavras chaves Transmissatildeo enzooacutetica Leishmania spp roedores

marsupiais Phlebotominae Cerrado

ABSTRACT

Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce

and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis

transmission cycle is the subject of this study All samples were captured in

gallery forests of four areas Aacutegua Limpa Farm Biological Reserve of Contagem

Brasiliarsquos National Park and Botanic Garden of Brasiacutelia on May and September

2014 Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal

District The entire capture effort entailed 1280 HP light traps and 16 Shannon

traps 16 species were identified Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the

most captured species Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia

guimaraesi Br brumpti Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli

were registered for the first time in the Federal District elevating to 35 the number

of reported species at this federation unit Chapter 2 follows up the study of

Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies

DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools Fragments that

corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples

demonstrating the quality of the extracted DNA Trypanosomatids detection was

performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions All samples tested

negative for Leishmania spp Therefore negative results in the present study do

not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and

surroundings Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small

mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of

sandflies and during the same periods Tissue samples (ear tips) were obtained

from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested

PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples The entire

capture effort entailed 5120 night-traps and 172 small mammals from three

marsupials species (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis and Monodephis

americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus Oecomys bicolor

Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys rattus and Necromys

lasiurus) were captured Twenty samples (1307) were positive considering

both molecular markers four samples only for SSU and four sampes only for ITS

Leishmania spp infected species were Rhipidomys macrurus Gracilinanus

agilis and Didelphis albiventris These species might participate in the enzootic

transmition of Leishmania at REBIO FAL and JBB This is the first report of

Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas Considering all

results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species

from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the

maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Key words Enzootic transmission Leishmania spp rodents marsupials

Phlebotominae Brazilian savanna

23

1 Introduccedilatildeo

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) eacute uma doenccedila existente

desde a antiguidade cujos relatos e descriccedilotildees datam do seacutec I dC (Basano

amp Camargo 2004) Altamirano-Enciso et al (2003) relataram trecircs teorias de

origem da doenccedila nas Ameacutericas A primeira de 1890 em que Juliano Moreira

amp Aguiar Pupo propunham uma origem mediterracircnea enfatizando que os

casos observados em pacientes da Bahia (Brasil) doenccedila chamada ldquobotatildeo da

Bahiardquo eram parecidos ao ldquobotatildeo do Orienterdquo Segundo os mesmos autores a

LTA teria sido introduzida pelos feniacutecios ou siacuterios que supostamente

chegaram ao nordeste do Brasil ainda na Antiguidade No entanto tais

viagens jamais foram comprovadas historicamente ou arqueologicamente

A segunda teoria eacute a de origem andina formulada a partir dos

descobrimentos de peccedilas de ceracircmica preacute-colombianas ou ldquohuacos peruanosrdquo

em 1895 e reforccedilada pelos documentos do seacuteculo XVI Contudo a discussatildeo

dos dados histoacutericos dividiu-se em dois grupos uma primeira corrente

representada pelos defensores das chamadas ldquoevidecircnciasrdquo histoacutericas cujos

argumentos se reforccedilam pelos estudos das representaccedilotildees de lesotildees feitas

em objetos de ceracircmica e outro grupo de estudiosos que questionava essa

fonte histoacuterica por ser descrita por cronistas que natildeo eram meacutedicos Atribui-se

a essa discussatildeo grande importacircncia porque se passaram quase 80 anos

desde que Eduardo Rabello (1925) propocircs que as origens da leishmaniose

muco-cutacircnea (LMC) estariam inicialmente focalizadas nos territoacuterios frios

sugerindo as regiotildees da Boliacutevia e do Peru predominando esta teoria na

literatura biomeacutedica

24

Mais recentemente a chamada teoria monofileacutetica para origem das

leishmacircnias foi formulada por Thomas-Soccol et al (1993) que baseando-se

em estudos de DNA mitocondrial de 20 espeacutecies de leishmacircnias do mundo

consideram que os subgecircneros Viannia e Leishmania propostos por Lainson

amp Shaw (1972) tiveram origem comum desde os periacuteodos Cretaacuteceo e

Juraacutessico haacute 120 milhotildees de anos quando os continentes estavam unidos na

Pangeacuteia Contudo a questatildeo do local de origem das leishmacircnias continua

controversa entre as regiotildees Neotropical Paleaacutertica e Africana

Cerqueira no Brasil em 1855 observou a existecircncia da forma cutacircnea

identificando-a clinicamente como ldquobotatildeo de Biskrardquo e Breda em 1895 na

Itaacutelia descreveu a doenccedila em italianos provenientes de Satildeo Paulo

Lindenberg (1909) encontrou ldquoformas de Leishmaniardquo idecircnticas agrave

Leishmania tropica da leishmaniose do Velho Mundo em lesotildees cutacircneas de

indiviacuteduos que trabalhavam nas matas do interior do Estado de Satildeo Paulo o

que confirmou a natureza leishmanioacutetica das lesotildees cutacircneas e nasofariacutengeas

(Basano amp Camargo 2004) Gaspar Vianna redescreveu o parasito como L

braziliensis por consideraacute-lo diferente da L tropica e assim denominou-se o

agente etioloacutegico da uacutelcera de Bauru ferida brava ou nariz de tapir

(Basano amp Camargo 2004)

No Brasil ateacute a deacutecada de 1970 todos os casos de LTA eram atribuiacutedos a

L braziliensis (Basano amp Camargo 2004) entretanto com o progresso das

pesquisas ecoepidemioloacutegicas e com o desenvolvimento das teacutecnicas

moleculares outras espeacutecies foram descritas sendo registradas ateacute o

momento sete espeacutecies causadoras da LTA (Brasil 2010) A leishmaniose

visceral (LV) era confundida no passado com outras doenccedilas endecircmicas e de

apresentaccedilatildeo cliacutenica semelhante como a malaacuteria em humanos (Palmer

1998)

No iniacutecio de 1903 James Homer Wright de Baltimore observou formas de

protozoaacuterios em uacutelcera cutacircnea de uma crianccedila da Armecircnia suspeita de ser

acometida pelo Botatildeo do Oriente e propocircs o nome de Welcozoma tropicum

para o agente causal hoje conhecido como L tropica Em 30 de maio desse

25

ano o inglecircs William Boog Leishman obteve uma bioacutepsia de fiacutegado de um

soldado inglecircs morto pela doenccedila febre de dum-dumou kala-azar na Iacutendia

Dois meses depois em 11 de julho Charles Donovan tambeacutem em bioacutepsia do

baccedilo de outro soldado morto descobriu independentemente o agente

etioloacutegico do calazar que era semelhante ao parasito da tripanossomiacutease em

sua fase intracelular (Altamirano-Enciso et al 2003)

O nome do gecircnero Leishmania foi criado pelo meacutedico inglecircs Ronald Ross

mas o termo Leishmania donovani para o agente da LV foi proposto por

Laveran amp Mesnil em 1903 embora segundo Basano amp Camargo (2004)

Cunningham em 1885 na Iacutendia foi o primeiro a observar o parasito do gecircnero

em casos de LV A partir daquele ano foram descritos outros

tripanossomatiacutedeos em paiacuteses do mar Mediterracircneo e da Aacutesia araacutebica As

duacutevidas de que L donovani e L tropica fossem tripanossomatiacutedeos e natildeo

piroplasmas soacute foram dissipadas quando Rogers amp Nicolle (1904) e

posteriormente Nicolle (1908) e Carlos Chagas (1908) demonstraram as

formas flageladas de ambos os parasitos em meio de aacutegar sangue ldquoin vitrordquo

Sergent et al (1921) reproduziram o rdquobotatildeo do Orienterdquo em hamsters ao

inocularem macerados de Phlebotomus papatasi alimentados em soldados

franceses na Argeacutelia comprovando a associaccedilatildeo entre L tropica e

flebotomiacuteneos No Brasil Henrique Aragatildeo (1922) estudou um surto de LTA

no Rio de Janeiro e associou os casos agrave presenccedila de elevada quantidade de

flebotomiacuteneos infectados por L braziliensis Ao inocular triturados destes

flebotomiacuteneos no focinho de catildees foi observada ulceraccedilatildeo com a presenccedila

de formas amastigotas intracelulares (Altamirano-Enciso et al 2003)

12 Definiccedilatildeo

As leishmanioses satildeo um conjunto de doenccedilas resultantes da infecccedilatildeo

por protozoaacuterios digeneacuteticos (Negratildeo amp Ferreira 2014) pertencentes ao filo

Euglenozoa classe Kinetoplastea ordem Trypanosomatida famiacutelia

26

Trypanosomatidae (Cavalier-Smith 2016) gecircnero Leishmania (Ross 1903)

com caraacuteter zoonoacutetico Esses protozoaacuterios satildeo transmitidos por insetos

vetores conhecidos por flebotomiacuteneos (Laurenti 2010 Ready 2013) O fator

em comum das espeacutecies de Leishmania estaacute na necessidade de passar por

um hospedeiro invertebrado obrigatoriamente um flebotomiacuteneo (ver item 17)

para se reproduzirem e atingirem a forma infectante (Jones et al 2003)

As doenccedilas estatildeo amplamente distribuiacutedas em todo o mundo e dividem-se

em dois grandes grupos as leishmanioses dermotroacutepicas e as leishmanioses

viscerotroacutepicas (Negratildeo amp Ferreira 2009)

13 Epidemiologia

As leishmanioses representam uma das endemias de maior

importacircncia em sauacutede puacuteblica no mundo (Laurenti 2010) As mesmas satildeo

consideradas emergentes em franca expansatildeo associada agrave pobreza e ao

deslocamento da populaccedilatildeo para aacutereas com ciclos de transmissatildeo existentes

sendo incluiacutedas na lista de Doenccedilas Tropicais Negligenciadas (WHO 2014)

As leishmanioses tecircm ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica sendo possiacutevel observar

casos da doenccedila em todos os continentes com exceccedilatildeo da Antaacutertica (Figura

1) (WHO 2009)

27

FIGURA 1 Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A

Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO

2016

Segundo a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (WHO 2016) satildeo estimados

900 mil a 16 milhatildeo de novos casos de leishmanioses destes 02 a 04

milhatildeo de novos casos de LV e 07 a 12 milhotildees de novos casos de LT onde

20 mil a 30 mil mortes ocorrem anualmente no mundo Ainda de acordo com

A

B

28

dados da WHO (2016) mais de 98 paiacuteses e territoacuterios satildeo endecircmicos para as

leishmanioses Destes 72 paiacuteses estatildeo em processo de desenvolvimento

incluindo 13 dos menos desenvolvidos e sua notificaccedilatildeo eacute compulsoacuteria em

apenas 30 deles (Negratildeo amp Ferreira 2014) Nas Ameacutericas as leishmanioses

ocorrem em 21 paiacuteses com expansatildeo geograacutefica associada agrave antropizaccedilatildeo

dos ciclos de transmissatildeo de Leishmania com o desmatamento abertura de

estradas e urbanizaccedilatildeo de aacutereas primitivas que tem favorecido o ciclo

peridomiciliar da doenccedila (Dedet 1999 Negratildeo amp Ferreira 2014)

As formas viscerotroacutepica e dermotroacutepica tecircm despertado especial

interesse devido a sua importacircncia meacutedica e econocircmica em aacutereas endecircmicas

em regiotildees tropicais e subtropicais da Ameacuterica Aacutefrica Iacutendia e paiacuteses nas

margens do Mediterracircneo (Negratildeo amp Ferreira 2009)

A LTA eacute encontrada em todos os paiacuteses das regiotildees tropicais e

subtropicais do mundo (Gontijo amp Carvalho 2003) exceto na Austraacutelia Nova

Zelacircndia e algumas ilhas do Paciacutefico Essa irregularidade na distribuiccedilatildeo

mundial eacute enfatizada pelo fato que os 90 dos casos tem ocorrido em apenas

seis paiacuteses Afeganistatildeo Brasil Iratilde Peru Araacutebia Saudita e Siacuteria (WHO 2008

Negratildeo amp Ferreira 2014) A doenccedila eacute descrita em quase todos os paiacuteses

americanos do sul dos Estados Unidos agrave Patagocircnia ao norte extremo da

Argentina (Millaacuten et al 2016) com exceccedilatildeo do Uruguai e do Chile (Lainson

1981) verificando-se a distribuiccedilatildeo das diversas formas clinico

epidemioloacutegicas com estreita relaccedilatildeo com condiccedilotildees floriacutesticas e fauniacutesticas

(Teodoro 1997) Na Ameacuterica Latina eacute assinalada desde a peniacutensula de

Yucataacuten Meacutexico (Castro 2002) compreendendo as proviacutencias do norte da

Argentina (Salomoacuten 2010 Millaacuten et al 2016) alcanccedilando maior importacircncia no

Brasil aleacutem do Peru

Negratildeo amp Ferreira (2014) consideraram que na Ameacuterica do Sul a LTA

apresenta dois padrotildees epidemioloacutegicos o padratildeo claacutessico constituiacutedo por

surtos epidecircmicos associados agrave derrubada de matas para a construccedilatildeo de

estradas e povoados e o padratildeo associado agraves formas de ocupaccedilatildeo do espaccedilo

em regiotildees de colonizaccedilatildeo antiga

29

A maioria dos casos de leishmanioses nas Ameacutericas eacute proveniente do

Brasil (Alvar et al 2012) onde as mesmas apresentam distribuiccedilatildeo em todas

as regiotildees geograacuteficas desde 2003 com maior incidecircncia observada no

Nordeste brasileiro (WHO 2014) No Brasil estatildeo incluiacutedas na lista de

doenccedilas que compotildeem o Sistema de Informaccedilatildeo de Doenccedilas de Notificaccedilatildeo

Compulsoacuteria (Brasil 2010)

De acordo com WHO (2016) no ano de 2014 foram notificados 3453

casos de LV no Brasil dos quais 82 com confirmaccedilatildeo laboratorial Para a

leishmaniose tegumentar (LT) foram notificados 19402 casos e 89

confirmados por exames De acordo com a mesma fonte 43 da populaccedilatildeo

brasileira estaacute sob o risco de LV (86997054 200362200) e 70 sob o risco

de LT (139396846200362200) Entre os fatores de risco para a ocorrecircncia

das leishmanioses encontra-se a subnutriccedilatildeo com dietas pobres em

proteiacutenas ferro vitamina A e zinco que pode comprometer a imunidade dos

indiviacuteduos aumentando o risco de uma infecccedilatildeo se agravar a precariedade

das condiccedilotildees sanitaacuterias domeacutesticas como a falta de gestatildeo de resiacuteduos e

esgoto a ceacuteu aberto que podem aumentar os locais de criaccedilatildeo e repouso de

flebotomiacuteneos e bem como o seu acesso aos seres humanos a migraccedilatildeo e

a exposiccedilatildeo ocupacional onde as pessoas ao se movimentarem ou se

estabelecerem em aacutereas de florestas ficam mais proacuteximas do habitat de

flebotomiacuteneos mudando o perfil epidemioloacutegico das doenccedilas (WHO 2014)

Negratildeo amp Ferreira (2014) estudaram a dispersatildeo da LT nas Ameacutericas e

relataram que o crescimento migratoacuterio aliado ao processo histoacuterico de

organizaccedilatildeo espacial nas uacuteltimas deacutecadas tem propiciado a proliferaccedilatildeo de

aacutereas de alto risco e infecccedilatildeo por Leishmania em aacutereas urbanas brasileiras

ora associadas a aacutereas verdes e outras como consequecircncia do desequiliacutebrio

ecoloacutegico evidenciada em algumas aacutereas periurbanas ou associadas agraves

aacutereas de desmatamentos Os mesmos autores enfatizaram que dentro dos

limites geograacuteficos da ocorrecircncia da doenccedila sua extensatildeo e severidade

variavam pelo endemismo ou ocorrecircncia esporaacutedica com condiccedilotildees

ecoloacutegicas especiacuteficas em diferentes regiotildees A distribuiccedilatildeo espacial da

doenccedila em territoacuterio brasileiro eacute resultado de diferentes condiccedilotildees geograacuteficas

30

ou ecoloacutegicas potencializadas pelo planejamento governamental inadequado

ou ineficiente em accedilotildees que promovam a conscientizaccedilatildeo visando o controle

prevenccedilatildeo ou detecccedilatildeo precoce da infecccedilatildeo em aacutereas de risco Para os

centros urbanos eacute de grande importacircncia o conhecimento de aacutereas que

podem oferecer risco agrave populaccedilatildeo exposta agraves formas de LTA de ocorrecircncia

ligadas ao ambiente (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Outro aspecto relevante dentro deste contexto de expansatildeo e urbanizaccedilatildeo

das leishmanioses em todo o mundo e principalmente no Brasil eacute a

possibilidade de se adquirir a doenccedila a partir de transfusotildees sanguiacuteneas (Luz

et al 1997 Urias et al 2009) Este fato eacute agravado em funccedilatildeo do diagnoacutestico

soroloacutegico para a LV natildeo estar incluiacutedo ainda na triagem dos doadores do

paiacutes (Laurenti 2010) que se restringe a triagem laboratorial normatizada das

seguintes doenccedilas doenccedila de Chagas siacutefilis hepatite B HIV malaacuteria HTLV

1 e 2 (Anvisa 2004)

Karagiannis-Voules et al (2013) associaram as doenccedilas a fatores soacutecio-

econocircmicos e agrave precipitaccedilatildeo Clima precipitaccedilatildeo temperatura e umidade satildeo

fatores que podem alterar as distribuiccedilotildees e influenciar na sobrevivecircncia e no

tamanho das populaccedilotildees de vetores e de hospedeiros reservatoacuterios

Flutuaccedilotildees na temperatura podem ter um efeito profundo no ciclo de

desenvolvimento de promastigotas de Leishmania em flebotomiacuteneos

permitindo a transmissatildeo do parasito em aacutereas anteriormente natildeo endecircmicas

para as doenccedilas Alteraccedilotildees climaacuteticas que levam agrave seca fome e inundaccedilotildees

podem levar ao deslocamento em massa e a migraccedilatildeo de pessoas para aacutereas

com transmissatildeo de leishmanioses (WHO 2014)

Acredita-se que os nuacutemeros de casos notificados natildeo correspondam a

evoluccedilatildeo da LTA devido agrave demora com que o paciente procura o sistema de

sauacutede e o difiacutecil diagnoacutestico por parte do proacuteprio sistema Mesmo levando-se

em conta as falhas de notificaccedilatildeo compulsoacuteria eacute evidente o crescente nuacutemero

de casos novos e a intensidade que atinge o homem sendo proporcional agraves

alteraccedilotildees ambientais decorrentes de atividades humanas em aacutereas

especiacuteficas na aacuterea de estudo proposta A prevalecircncia das diferentes

leishmanioses no continente americano eacute difiacutecil de ser mensurada devido

31

principalmente a subnotificaccedilotildees diagnoacutesticos incorretos afecccedilotildees

inaparentes variaccedilotildees de resposta do hospedeiro e multiplicidade de agentes

etioloacutegicos envolvidos (Marzochi 1992)

14 Agente Etioloacutegico

As infecccedilotildees em seres humanos e em animais por protozoaacuterios do

gecircnero Leishmania recebem denominaccedilotildees variadas mas podem ser

agrupadas com base em suas caracteriacutesticas comuns De acordo com

Akhoundi et al (2016) satildeo conhecidas 53 espeacutecies de Leishmania

pertencentes a cinco subgecircneros e complexos (Leishmania Viannia

Sauroleishmania complexo L enriettii e Paraleishmania) Desse total 31

espeacutecies parasitam espeacutecies de mamiacuteferos sendo que pelo menos 20 delas

infectam seres humanos Uma vez que as formas amastigotas satildeo

morfologicamente similares (Jubb et al1993 Palmer 1998) a diferenciaccedilatildeo

das espeacutecies que parasitam seres humanos eacute realizada por testes

moleculares indispensaacuteveis para o diagnoacutestico (Zampieri et al 2016)

As espeacutecies de Leishmania tecircm ciclos bioloacutegicos similares (Laurenti

2010) apresentando duas formas principais a amastigota observada dentro

de ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear em tecidos dos hospedeiros

vertebrados e a promastigota encontrada no sistema digestoacuterio de

flebotomiacuteneos fecircmeas (Figura 2) (Rey 2002) Ambos amastigotas e

promastigotas dividem-se repetidamente por divisatildeo binaacuteria (Palmer 1998)

32

FIGURA 2 ndash Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte

Rey 2002ndash CD room (Modificado)

No hospedeiro vertebrado as formas amastigotas encontram-se no

interior de vacuacuteolos parasitoacuteforos em macroacutefagos e ceacutelulas reticuloendoteliais

e medem cerca de 1 a 2 microm de largura por 2 a 4 microm de comprimento (Palmer

1988 Jones et al 2003) Esta forma se multiplica por divisatildeo assexuada ateacute o

rompimento da ceacutelula disseminando-se pela via hematogecircnica e linfaacutetica

para outros tecidos ricos em ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear como

linfonodos fiacutegado baccedilo medula oacutessea placas de Peyer por exemplo

iniciando uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria e proporcionando a atraccedilatildeo de outros

macroacutefagos gerando um ldquociclo viciosordquo (Figura 3) (Palmer 1998 Basano amp

Camargo 2004)

A forma amastigota da Leishmania eacute tipicamente ovoacuteide ou esfeacuterica

natildeo possui flagelo e nem membrana ondulatoacuteria (Palmer 1998) apenas um

rudimento de flagelo que estaacute presente na bolsa flagelar caracterizada como

uma pequena invaginaccedilatildeo da membrana do parasito (Figura 2) (Laurenti

2010) Nas preparaccedilotildees coradas por Romanovsky esses organismos

apresentam um citoplasma azul paacutelido contendo nas proximidades da

33

extremidade posterior um nuacutecleo uacutenico avermelhado com um cariossoma

central que se cora mais profundamente Tangenciando e anterior ao nuacutecleo

encontra-se um corpo em forma de bastonete e com uma cor violeta escuro o

cinetoplasto que conteacutem o corpo parabasal e o blefaroplasto em forma de

pinta (Figura 2) (Jones et al 2003) A forma amastigota conteacutem duas

concentraccedilotildees de DNA no nuacutecleo e em uma mitococircndria modificada o

cinetoplasto (Palmer 1998)

No seu hospedeiro invertebrado ou em culturas os organismos

assumem formas que variam desde a forma amastigota ateacute a forma de pro-

mastigota essa uacuteltima eacute esguia e fusiforme medindo cerca de 14 a 20microm de

comprimento e 15 a 4microm de largura Esta forma tem motilidade por meio de

um flagelo que se origina no blefaroplasto e projeta-se desde o poacutelo anterior

do organismo O cinetoplasto se situa na extremidade anterior do corpo

(Figura 2) (Jones et al 2003)

O flebotomiacuteneo hospedeiro invertebrado ao sugar sangue de um

animal infectado se infecta ao ingerir histioacutecitos da derme ou monoacutecitos do

sangue contendo formas amastigotas de Leishmania em seu citoplasma

(Basano amp Camargo 2004) Em seu intestino meacutedio e glacircndulas salivares as

leishmacircnias sofrem modificaccedilotildees morfoloacutegicas e bioquiacutemicas se congregam

na vaacutelvula cardiacuteaca onde o intestino anterior projeta-se no intestino meacutedio e

se transformam em promastigotas (com flagelo livre) que aderem ao epiteacutelio

do tubo digestoacuterio onde se multiplicam amplamente por divisotildees binaacuterias A

populaccedilatildeo daiacute resultante migra para a parte anterior do tubo digestoacuterio do

inseto diferenciando-se para formas promastigotas infectantes por volta de 3-

4 dias com invasatildeo da faringe do inseto sendo tambeacutem as chamadas formas

de promastigotas metaciacuteclicas encontradas na buco-faringe destes insetos

Quando os parasitos atingem o proacute-ventriacuteculo do inseto causam uma

obstruccedilatildeo no tubo digestoacuterio dificultando a ingestatildeo de sangue e levando a

fecircmea entatildeo faminta a picar muitas vezes pessoas ou animais Tais insetos

ao sugarem sangue (injetando na picada da pele a sua saliva e a saliva

apresentando propriedade anticoagulante homesostaacutetica anesteacutesica e

vasodilatadora) injetam tambeacutem as formas infectantes da Leishmania a qual

34

caindo na circulaccedilatildeo sanguiacutenea deste novo hospedeiro (vertebrado) vai

desenvolver a doenccedila numa das formas cliacutenicas conhecidas (Figura 3)

(Palmer 1998) ou na maioria dos casos levar a infecccedilotildees assintomaacuteticas e

autoresolutivas (Fukutani 2014)

FIGURA 3 ndash Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral

Leishmaniasis (LV) CL Cutaneous Leishmaniasis (LT) Fonte TDR ndash

Wellcome Trust

35

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose

Os protozoaacuterios do gecircnero Leishmania apresentam diferentes

distribuiccedilotildees geograacuteficas e as enfermidades por eles causadas satildeo

relativamente distintas embora possa haver superposiccedilatildeo nos sinais e

cliacutenicos e lesotildees (Jones et al 2003) Cerca de 20 espeacutecies de Leishmania satildeo

patogecircnicas para o ser humano (Laurenti 2010) As leishmanioses se

manifestam de quatro formas diferentes a depender da espeacutecie de

Leishmania envolvida e do estado imunoloacutegico do hospedeiro i) visceral

tambeacutem conhecida como calazar a forma mais grave da doenccedila ii) cutacircnea

a mais comum iii) mucocutacircnea e iv) cutacircnea difusa A LV eacute uma doenccedila

crocircnica sistecircmica que afeta os oacutergatildeos como o fiacutegado e o baccedilo A LTA inclui

as formas cutacircnea cutacircnea difusa e mucocutacircnea caracterizadas pela

formaccedilatildeo de uacutelceras na pele (Brasil 2006 2010)

A LV eacute principalmente causada por L donovani (Jubb et al 1993) Nas

Ameacutericas Central e Sul Leishmania infantum (syn L chagasi) eacute a espeacutecie

envolvida na patogenia (Brasil 2006)

A patogenia das leishmanioses eacute fortemente influenciada por fatores

inerentes ao hospedeiro como suas caracteriacutesticas geneacuteticas e resposta

imunoloacutegica por fatores inerentes ao parasito como a virulecircncia da espeacutecie

de Leishmania infectante e por fatores inerentes ao vetor como sua

capacidade vetorial Como resultado dessa interaccedilatildeo entre as diferentes

espeacutecies do parasito do vetor e dos mecanismos da resposta imunoloacutegica do

hospedeiro vertebrado um espectro de manifestaccedilotildees cliacutenicas

histopatoloacutegicas e imunoloacutegicas eacute observado no homem (Laurenti 2010)

Imunologicamente apoacutes a inoculaccedilatildeo do parasito aqueles animais que seratildeo

resistentes agrave infecccedilatildeo promovem a ativaccedilatildeo de ceacutelulas TCD4+Th1 que

produziratildeo entre outras as citocinas interferon gama fator de necrose

tumoral alfa e interleucinas (IL) 2 e 12 Estas por sua vez ativaratildeo

macroacutefagos que faratildeo a destruiccedilatildeo das formas amastigotas intracelulares

(Pinelli et al 1995) Segundo os mesmos autores as ceacutelulas TCD8 citotoacutexicas

36

tambeacutem podem estar envolvidas na resistecircncia agrave doenccedila Jaacute nos animais que

manifestaratildeo sinais cliacutenicos da doenccedila haveraacute uma supressatildeo das ceacutelulas

TCD4+Th1 e ativaccedilatildeo das ceacutelulas TCD4+Th2 com produccedilatildeo de IL-4 IL-5 IL-

6 IL-10 IL-13 responsaacuteveis pela proliferaccedilatildeo de ceacutelulas B e

consequentemente produccedilatildeo de grande quantidade de anticorpos (Pinelli et al

1994 1999) Anticorpos estes natildeo protetores mas muitas vezes danosos

pois formaratildeo imunocomplexos que poderatildeo ser depositados nas membranas

basais de vaacuterios oacutergatildeos (Slappendel 1988 Martinez-Moreno et al 1995)

Usualmente a LV eacute observada como enfermidade debilitante crocircnica

com periacuteodos de febre perda de peso gradual anemia e leucopenia (Jones et

al 2003) Patologicamente o fiacutegado pode conter numerosos granulomas e eacute

simetricamente aumentado e marrom escuro O baccedilo eacute maior em duas a trecircs

vezes o seu tamanho normal simetricamente aumentado e marrom-escuro a

preto na sua superfiacutecie capsular Os linfonodos estatildeo moderadamente

aumentados e irregulares sem outras mudanccedilas significativas na cavidade

abdominal exceto os rins que podem estar mais escuros que o normal (Jubb

et al 1993) A medula oacutessea eacute uniformemente avermelhada e amolecida

(Jones et al 2003)

As lesotildees microscoacutepicas da LV caracterizam-se por uma infiltraccedilatildeo

maciccedila em vaacuterios sistemas do organismo de enormes macroacutefagos cujo

citoplasma estaacute repleto de leishmacircnias A arquitetura dos linfonodos e do

baccedilo pode estar completamente obscurecida pelas ceacutelulas fagocitaacuterias

(Jones et al 2003)

Os foliacuteculos esplecircnicos satildeo hiperplaacutesicos geralmente com hialinose

folicular Em casos avanccedilados haacute atrofia de nodos e baccedilo e as aacutereas dos

sinus podem estar difusamente ocupadas por grandes macroacutefagos altamente

carregados com organismos intracitoplasmaacuteticos e numerosas ceacutelulas

plasmaacuteticas As lesotildees na medula oacutessea podem ser focais e consistem de

grupos de macroacutefagos epitelioacuteides com organismos fagocitados As

alteraccedilotildees renais satildeo variaacuteveis e podem consistir em manchas intersticiais

com algum envolvimento parasitaacuterio (Jubb et al 1993) e por este motivo

utiliza-se os criteacuterios de classificaccedilatildeo da Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede que

37

inclui glomerulopatias com alteraccedilotildees miacutenimas glomeruloesclerose

segmentar focal glomerulonefrite membranoproliferativa glomerulonefrite

proliferativa mesangial glomerulonefrite membranosa glomerulonefrite

crescecircntica e glomerulonefrite crocircnica (Churg et al 1985)

A LT eacute causada por 18 espeacutecies de Leishmania patogecircnicas para os

seres humanos (Ready 2013) A LT causada por L tropica e L major ocorre

principalmente no sul da Europa e nos paiacuteses do norte da Aacutefrica que

circundam o Mediterracircneo (Jones et al 2003) Nas Ameacutericas assim

denominada LTA a infecccedilatildeo humana ocorre por 11 espeacutecies (Ready 2013)

agrupadas nos subgecircneros Leishmania e Viannia onde as trecircs espeacutecies mais

importantes do subgecircnero Leishmania satildeo L mexicana L amazonensis e L

venezuelensis e do subgecircnero Viannia satildeo L braziliensis L panamensis L

peruviana e L guyanensis

A infecccedilatildeo caracteriza-se por uacutelceras ou noacutedulos uacutenicos ou muacuteltiplos na

pele com lento desenvolvimento e que habitualmente cicatrizam-se

espontaneamente depois de um periacuteodo de meses (Jones et al 2003) As

lesotildees cutacircneas tomam forma de uma uacutelcera crocircnica que se desenvolve de

paacutepulas inflamatoacuterias no local da picada do inseto Linfoacutecitos e ceacutelulas

plasmaacuteticas margeiam a lesatildeo e os neutroacutefilos satildeo atraiacutedos para os debris

Quando a inflamaccedilatildeo se estende agrave borda epitelial a ulceraccedilatildeo ocorre Muitos

parasitos estatildeo no interior de histioacutecitos e alguns estatildeo livres no tecido (Jubb

et al 1993) As lesotildees de longa duraccedilatildeo estatildeo circunscritas por um tecido

conjuntivo fibroblaacutestico o que lhes daacute um aspecto de granuloma tiacutepico (Jones

et al 2003)

A leishmaniose mucocutacircnea uma das formas cliacutenicas da LTA ocorre

no Meacutexico e nas Ameacutericas Central e do Sul A infecccedilatildeo parece com a

cutacircnea mas aleacutem da pele com frequecircncia as uacutelceras crocircnicas com bordas

elevadas e fundo granuloso estatildeo localizadas nas junccedilotildees mucocutacircneas e

podem ocorrer nas cavidades oral e nasal (Jones et al 2003 Brasil 2010

Laurenti 2010)

38

No Brasil jaacute foram identificadas sete espeacutecies responsaacuteveis pela LTA

sendo seis do subgecircnero Viannia e uma do subgecircnero Leishmania As trecircs

espeacutecies mais encontradas satildeo L braziliensis L guyanensis e L

amazonensis As espeacutecies L lainsoni L naiffi L lindenbergi e L shawi foram

identificadas mais recentemente em estados das regiotildees Norte e Nordeste

(Brasil 2010)

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF

Entre 2001 e 2012 cerca de 3000 casos confirmados de LV e 50 mil de

LTA foram registrados na regiatildeo Centro-Oeste do Brasil (RCO)

(wwwsaudegovbr) onde haacute pelo menos 127 espeacutecies de flebotomiacuteneos

registradas (Almeida et al 2015) Essa regiatildeo eacute coberta em sua maioria pelo

bioma Cerrado onde haacute vasta expansatildeo agropecuaacuteria e ocupaccedilatildeo do solo

devido o crescimento urbano desordenado o que poderia favorecer a

ocorrecircncia das leishmanioses (Galati et al 1996 Carranza-Tamayo et al

2010) O Centro-Oeste se destaca atualmente por estar se tornando um poacutelo

de atraccedilatildeo de populaccedilatildeo das demais regiotildees brasileiras devido agrave expansatildeo

da fronteira agriacutecola (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Um estudo da distribuiccedilatildeo territorial da LTA no Brasil (Negratildeo amp Ferreira

2014) mostrou que o Centro-Oeste corresponde a segunda maior regiatildeo em

coeficiente de detecccedilatildeo da doenccedila de 2001 a 2010 (199 casos por 100000

habitantes) Em Goiaacutes o nuacutemero de municiacutepios com registro da doenccedila

passou de 71 (306) em 1994 para 118 (487) em 1999 o que

corresponde a um acreacutescimo de 67 (Costa 2005) O Estado do Mato Grosso

eacute detentor do terceiro maior coeficiente de detecccedilatildeo ndash 765 casos por 100000

habitantes O Distrito Federal (DF) registra a transmissatildeo da LTA de

ocorrecircncia ciacuteclica desde 1992 e a partir de entatildeo apresenta coeficientes de

detecccedilatildeo bem inferiores ao que eacute considerado como baixo segundo

paracircmetros do Ministeacuterio da Sauacutede (lt25 casos por 100000 habitantes)

39

(Carvalho et al 2010) Com a expansatildeo das fronteiras agriacutecolas nesta regiatildeo

principalmente nos estados de Mato Grosso e Goiaacutes estes Estados passaram

a ser importante rota de fixaccedilatildeo do homem

No DF haacute evidecircncia de transmissatildeo autoacutectone de LTA O nuacutemero de casos

notificados de LTA procedentes do DF nos anos de 2003 2004 e 2005 foi de

31 57 e 26 respectivamente (Sampaio et al 2009) O primeiro caso de LV

autoacutectone no DF ocorreu em 2005 e trecircs oacutebitos foram confirmados ateacute 2009

(Carranza-Tamayo et al 2010) Entre 2007 e 2012 24 casos humanos de LV

autoacutectone foram registrados (SESDF 2012) Em 2013 foram notificadas no

Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo ndash SINANNET 98 pessoas

com suspeita de LV e 47 foram confirmadas sendo dois casos autoacutectones

provenientes de Sobradinho e Lago Norte dos quais um veio a oacutebito

Segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das Leishmanioses no DF para

o ano de 2015 dos 142 casos de LV notificados 39 foram confirmados

destes trecircs autoacutectones e 36 importados Foram atendidos 39 pacientes nas

unidades hospitalares do DF desses quatro evoluiacuteram a oacutebito dos quais um

autoacutectone da RA da Fercal e trecircs importados De janeiro a marccedilo de 2016

foram notificados 28 casos de LV dentre eles um caso autoacutectone proveniente

do Lago Norte aleacutem de sete importados e dois em investigaccedilatildeo para a

definiccedilatildeo do Local Provaacutevel de Infecccedilatildeo (LPI) Dos dez casos confirmados em

2016 foram atendidos dez pacientes nas unidades hospitalares do DF

desses dois evoluiacuteram a oacutebito dos quais um importado do estado de Goiaacutes e

um encontra-se em investigaccedilatildeo para definir o LPI

Em relaccedilatildeo agrave LTA no DF segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das

Leishmanioses no DF para o ano de 2015 foram confirmados 50 casos

destes 35 satildeo residentes do DF 14 de outras Unidades Federadas e um da

Guiana Francesa Dos 50 casos confirmados 35 satildeo importados nove

indeterminados seis em investigaccedilatildeo e nenhum autoacutectone Natildeo foi registrado

nenhum oacutebito relacionado agrave LTA no periacuteodo Dados do Boletim

Epidemioloacutegico de janeiro a marccedilo de 2016 confirmam sete casos da doenccedila

mas nenhum caso autoacutectone foi registrado Aleacutem disso nos uacuteltimos anos tecircm

sido registrados casos de LV em catildees domeacutesticos nas regiotildees norte e sul do

40

DF que vem sofrendo com a urbanizaccedilatildeo descontrolada da sua aacuterea rural

(Carranza-Tamayo et al 2010 Cardoso et al 2015)

17 Vetores

Flebotomiacuteneos (ordem Diptera famiacutelia Psychodidae subfamiacutelia

Phlebotominae) satildeo insetos com ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica ocorrendo sob

as mais diversas condiccedilotildees climaacuteticas e de altitude nos ambientes silvestres

rurais e urbanos Atualmente conhece-se cerca de 1003 espeacutecies das quais

537 estatildeo presentes na regiatildeo Neotropical e Neoaacutertica destas 277 foram

registradas no Brasil representando 28 do total e 53 das que ocorrem na

Regiatildeo Neotropical (Shimabukuro et al 2017) Dezenove espeacutecies de

flebotomiacuteneos estatildeo incriminadas como vetoras de espeacutecies de Leishmania

(Basano amp Camargo 2004 Shimabukuro amp Galati 2010)

Flebotomiacuteneos satildeo insetos pequenos de cor parda (ldquomosquito-palhardquo) e

de corpo cerdoso que normalmente natildeo ultrapassam 05 cm de comprimento

tecircm pernas longas e delgadas e apresentam como caracteriacutestica o voo

saltitante Ao contraacuterio dos outros diacutepteros os flebotomiacuteneos mantecircm a

postura ereta das asas mesmo em repouso Apenas as fecircmeas fazem

repasto sanguiacuteneo por serem adaptadas com o aparelho bucal picador-

sugador (Killick-Kendrick1999 Basano amp Camargo 2004) A hematofagia eacute

indispensaacutevel ao desenvolvimento ovariano (Carrera 1991) Entre os

inuacutemeros nomes populares que variam segundo os paiacuteses e as suas regiotildees

encontram-se mosquito palha asa dura asa branca tatuquira birigui

cangalha cangalhinha ligeirinho peacutela-eacutegua arrupiado (Martins et al 1978)

As formas imaturas podem ser encontradas em seus criadouros em solo

uacutemido mas natildeo molhado e em detritos ricos em mateacuteria orgacircnica em

decomposiccedilatildeo (Brazil amp Brazil 2003)

41

As fecircmeas dos flebotomiacuteneos geralmente apresentam haacutebito noturno

procuram fazer repasto sanguiacuteneo ao entardecer e comeccedilo da noite quando

transmitem o parasito para o novo hospedeiro Jaacute os machos alimentam-se de

frutas seiva de plantas entre outros por breve periacuteodo (Killick-

Kendrick1999) Durante o dia os flebotomiacuteneos procuram abrigo ou no

interior das residecircncias ou em matas em local protegido dos ventos Satildeo

frequentemente encontrados em tocas de outros animais como tatu buracos

em paredes de construccedilotildees ocos de paus ou bambus ou similares Em matas

fechadas devido a pouca luz em seu interior podem ser vistos mesmo

durante o dia inclusive ativos a procura de possiacuteveis animais ou o proacuteprio

homem para ser sugado (Basano amp Camargo 2004)

Killick‐Kendrick (1990) propotildeem quatro criteacuterios que devem ser

observados antes de se incriminar uma espeacutecie como vetora de zoonoses

satildeo eles alimentar-se em humanos e no reservatoacuterio animal manter os

parasitos apoacutes a ingestatildeo exibir parasitos indistinguiacuteveis daqueles isolados

de pacientes e transmitir o parasito pela picada Adicionalmente Ready (2013)

propotildee o criteacuterio relacionado a influecircncia da abundacircncia do vetor na

incidecircncia da leishmaniose comprovada por modelos matemaacuteticos

No Brasil as principais espeacutecies envolvidas na transmissatildeo da LTA satildeo

Bichromomyia flaviscutellata Nyssomyia whitmani Ny umbratilis Ny neivai

Psychodopygus wellcomei e Migonemyia migonei (Barbosa et al 2008 Ready

2013 Diniz et al 2014) Estas espeacutecies de flebotomiacuteneos foram definidas

como potenciais vetores de acordo com o Manual de Vigilacircncia da

Leishmaniose Tegumentar Americana do Ministeacuterio da Sauacutede por atenderem

a alguns dos criteacuterios que atribuem a uma espeacutecie a capacidade vetorial

segundo Killick-Kendrick amp Ward (1981) Killick-Kendrick (1990) e Ready

(2013) Cabe ressaltar que o papel vetorial de cada uma dessas espeacutecies

dependeraacute da espeacutecie de Leishmania presente no intestino da sua

capacidade de se infectar e transmitir o parasito a um novo hospedeiro (Brasil

2010 Pita-Pereira et al 2009 2011)

O principal vetor da LV nas Ameacutericas eacute o flebotomiacuteneo Lutzomyia

longipalpis espeacutecie bem adaptada ao ambiente peridomeacutestico e com ampla

42

distribuiccedilatildeo geograacutefica (Brasil 2010) poreacutem outros flebotomiacuteneos tambeacutem

podem estar participando do ciclo de LV principalmente nas aacutereas onde Lu

longipalpis eacute ausente (de Souza et al 2003 de Carvalho et al 2010)

Lutzomyia cruzi parece participar como vetor nos municiacutepios de Corumbaacute e

LadaacuterioMS na fronteira entre Brasil e Boliacutevia (Dos Santos et al 1998) e

Pintomyia (Pifanomyia) evansi eacute tambeacutem um importante vetor na Colocircmbia

(Travi et al 1990 Oviedo amp Moreno 1995 Montoya-Lerma amp Lane 1996 Travi

et al 1996) e Venezuela (Pifano 1964 Feliciangeli et al 1998)

43

18 Flebotomiacuteneos no DF

Atualmente conhece-se 29 espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF (Quadro1)

QUADRO 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte

Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al

2015 Galati 2015

Espeacutecies

Brumptomyia avellari (Costa Lima 1932)

Brumptomyia pintoi (Costa Lima 1932)

Micropygomyia longipennis (Barretto 1946)

Micropygomyia acanthopharynx (Martins Falcatildeo amp Silva 1962)

Micropygomyia quinquefer (Dyar 1929)

Evandromyia bacula (Martins Falcatildeo amp Silva 1965)

Evandromyia evandroi (Costa Lima amp Antunes 1936)

Evandromyia corumbaensis (Galati Nunes Oshiro amp Rego 1989)

Evandromyia teratodes (Martins Falcatildeo amp Silva 1964)

Evandromyia sallesi (Galvatildeo amp Coutinho 1939)

Evandromyia saulensis (Floch amp Abonnenc 1944)

Evandromyia lenti (Mangabeira 1938)

Pintomyia christenseni (Young amp Duncan 1994)

Pintomyia kuscheli (Le Pont Martinez Torrez-Espejo amp Dujardin 1998)

Pintomyia monticola (Costa Lima 1932)

Pintomyia fischeri (Pinto 1926)

Sciopemyia servulolimai (Damasceno amp Causey 1945)

Continua

44

Sciopemyia sordellii (Shannon amp Del Ponte 1927)

Lutzomyia longipalpis (Lutz amp Neiva 1912)

Lutzomyia ischnacantha Martins Souza amp Falcatildeo 1962

Psathyromyia lutziana (Costa Lima 1932)

Psathyromyia runoides (Fairchild amp Hertig 1953)

Psathyromyia brasiliensis (Costa Lima 1932)

Psathyromyia aragaoi (Costa Lima 1932)

Psathyromyia shannoni (Dyar 1929)

Nyssomyia whitmani (Antunes amp Coutinho 1939)

Nyssomyia neivai (Pinto 1926)

Nyssomyia intermedia (Lutz amp Neiva 1912)

Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira 1942)

No trabalho de Carvalho et al (2010) foram coletados mais de 17 mil

flebotomiacuteneos de 27 espeacutecies em diversos ambientes como nas diferentes

fitofisionomias do Cerrado abrigo de animais e no intradomiciacutelo Os autores

identificaram mais duas espeacutecies consideradas vetoras Ny neivai e Ps davisi

que auxiliaram no mapeamento das aacutereas de risco agrave transmissatildeo de

Leishmania

Ferreira et al (2014) analisaram a ocorrecircncia de flebotomiacuteneos em matas

de galeria do Distrito Federal (DF) nas estaccedilotildees seca e chuvosa Os autores

natildeo capturaram flebotomiacuteneos em novembro (estaccedilatildeo chuvosa) e em maio

(estaccedilatildeo seca) foram capturados 250 exemplares identificados como

Psathyromyia runoides (799) Pintomyia monticola (97) Mi quinquefer

(37) Pa shannoni (3) Bi flaviscutellata (07) Brumptomyia sp (07)

Pi kuscheli (07) Pa lutziana (Costa Lima) (07) e Sciopemyia sordellii

(07) De acordo com os resultados os autores relataram que em matas de

galeria do DF haveria maior ocorrecircncia de flebotomiacuteneos na estaccedilatildeo seca no

Continuaccedilatildeo QUADRO 1

45

niacutevel do solo e em aacutereas preservadas As espeacutecies Pa runoides Pi kuscheli

e Mi quinquefer foram registradas pela primeira vez no DF

Informaccedilotildees relevantes relacionadas agrave riqueza de espeacutecies abundacircncia

ocorrecircncia em distintas eacutepocas do ano somam dados que podem ser usados

para a melhor compreensatildeo da epidemiologia das doenccedilas e conhecimento

do comportamento dos flebotomiacuteneos nas matas de galeria proacuteximas agraves aacutereas

urbanas no DF

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp

Segundo Ashford (1996) o reservatoacuterio de uma infecccedilatildeo eacute definido como

o sistema ecoloacutegico no qual um agente infeccioso sobrevive

persistentemente Para as infecccedilotildees de transmissatildeo vetorial o sistema

compreenderia um ou mais vetores e um ou mais mamiacuteferos hospedeiros

que viveriam sob condiccedilotildees de densidade populacional proximidade espacial

entre outros fatores que permitiriam a transferecircncia continuada do agente

entre eles O autor designa o hospedeiro mamiacutefero responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo em longo prazo do agente infeccioso de hospedeiro reservatoacuterio

e define como zoonose uma doenccedila causada por parasitos cujos hospedeiros

satildeo o homem e outros mamiacuteferos

Entretanto a definiccedilatildeo de reservatoacuterio tem sofrido mudanccedilas significativas

no uacuteltimo seacuteculo fazendo-se necessaacuterio o estudo das zoonoses a partir de

perspectivas mais abrangentes Atualmente aceita-se que um reservatoacuterio

pode ser uma espeacutecie ou um complexo delas responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo

do parasito na natureza Dentro desse sistema-reservatoacuterio cada hospedeiro

desenvolve papeis diferentes na transmissatildeo em um determinado tempo e

espaccedilo isso eacute considera-se que ldquohospedeiros de manutenccedilatildeordquo sejam os

mamiacuteferos que podem ser infectados e mantecircm a infecccedilatildeo e que

ldquohospedeiros amplificadoresrdquo sejam os mamiacuteferos que aleacutem de manterem a

46

infecccedilatildeo desempenham uma caracteriacutestica que favoreccedila a transmissatildeo como

a presenccedila de mais parasitos no sangue e pele por periacuteodos maiores (Roque

amp Jansen 2014) Um estudo de reservatoacuterios silvestres e sinantroacutepicos de

espeacutecies de Leishmania nas Ameacutericas distinguiu as espeacutecies de mamiacuteferos

silvestres e sinantroacutepicos encontrados infectados com Leishmania spp

classificando-os em hospedeiros e potenciais reservatoacuterios (Roque amp

Jansen 2014) de acordo com a capacidade de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo ou de

transmissibilidade dos parasitos aos vetores por meio de xenodiagnoacutestico

positivo ou culturas de pele ou sangue

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de hospedeiros e

reservatoacuterios

Desde o seacuteculo passado a comunidade cientiacutefica tem demonstrado que

diferentes e numerosos mamiacuteferos silvestres podem se tornar infectados com

espeacutecies de Leishmania aleacutem das espeacutecies domeacutesticas e sinantroacutepicas

(animais natildeo domesticados que habitualmente compartilham e aproveitam-se

do ecoacutetopo humano) (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006 Roque amp Jansen

2014) Entretanto o foco deve ser mudado para a identificaccedilatildeo de espeacutecies

que podem servir como fontes de infecccedilatildeo para vetores e amplificaccedilatildeo de

focos enzooacuteticos temporalmente e regionalmente especiacuteficos constituindo

um risco para a transmissatildeo humana Esta mudanccedila depende da melhor

compreensatildeo de sistemas reservatoacuterios e do papel desempenhado por cada

espeacutecie de mamiacutefero na manutenccedilatildeo destes parasitos na natureza (Roque amp

Jansen 2014) Diversas espeacutecies das ordens Didelphimorphia Pilosa

Cingulata Rodentia Carnivora Primata e Chiroptera foram recentemente

classificadas como hospedeiros ou potenciais reservatoacuterios por Roque amp

Jansen (2014)

47

Os catildees domeacutesticos (Canis familiaris) satildeo considerados eficientes

reservatoacuterios de L infantum devido agrave alta susceptibilidade agrave infecccedilatildeo ao

frequentemente elevado parasitismo nesta espeacutecie e por causa da sua iacutentima

relaccedilatildeo com o homem tanto nas zonas urbanas quanto rurais (Dantas-Torres

amp Brandatildeo-Filho 2006) Os catildees como importantes reservatoacuterios domeacutesticos

de L infantum satildeo responsabilizados pela manutenccedilatildeo das endemias nos

grandes centros urbanos (Silva et al 2001 Medeiros et al 2005) Uma

consideraacutevel gama dos catildees infectados por espeacutecies de Leishmania satildeo

assintomaacuteticos seja por um determinado periacuteodo de tempo que pode chegar

a anos ateacute nunca apresentar sinais cliacutenicos ou sintomas da doenccedila Poreacutem

os catildees natildeo satildeo as uacutenicas fontes de infecccedilatildeo em todos os focos de LV no

Brasil (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Tambeacutem existe uma forte

tendecircncia para que os catildees assumam o papel de principais reservatoacuterios

domeacutesticos para L braziliensis o agente etioloacutegico da LTA mais disseminado

(Aguilar et al 1989 Madeira et al 2003 2006 Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho

2006 Castro et al 2007 Quaresma et al 2011) Entre os estudos que relatam

casos de infecccedilatildeo mista por L infantum e L braziliensis encontra-se os

trabalhos de Madeira et al (2006) e Quaresma et al (2011)

Aleacutem dos carniacutevoros descritos por Roque amp Jansen (2014) Cerdocyon

thous popularmente conhecido como cachorro do mato ou guaraxaim jaacute era

suspeito de desempenhar o papel de hospedeiro reservatoacuterio primaacuterio de L

infantum no Norte do Brasil (Lainson et al 1969) Os mesmos autores

descreveram a eficiecircncia dessa espeacutecie como fonte de infecccedilatildeo em 1990

Este caniacutedeo tambeacutem tem sido incriminado como hospedeiro reservatoacuterio

primaacuterio na Venezuela (Lainson et al 1987) Figueiredo et al (2008) relataram

o primeiro caso de L infantum em cachorro-vinagre (Speothos venaticus) no

Brasil no Estado do Mato Grosso Os autores chamam a atenccedilatildeo para os

controles parasitoloacutegicos em animais silvestres mantidos em cativeiros

principalmente quando estes fazem intercacircmbios entre zooloacutegicos brasileiros

Tambeacutem no Mato Grosso Souza et al (2010) relataram a infecccedilatildeo de

caniacutedeos silvestres por L infantum mantidos em cativeiro Foram coletadas

amostras de pele medula oacutessea e linfonodos de seis raposas (Cerdocyon

thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus) para detecccedilatildeo e

48

caracterizaccedilatildeo de Leishmania sp pela teacutecnica de PCR-RFLP Todos os

animais pesquisados apresentaram-se positivos para L infantum O estudo

destaca a importacircncia de monitoramento adequado dos animais e do maior

controle desta enfermidade jaacute que os animais estudados estavam em

ambientes de recreaccedilatildeo puacuteblica

De maneira geral as taxas de infecccedilatildeo em caniacutedeos natildeo domeacutesticos satildeo

baixas mas pode ser alta agraves vezes como observado nas raposas da

Ameacuterica do Sul (Lainson et al 1987) Poreacutem caniacutedeos silvestres

normalmente natildeo vivem perto de habitaccedilotildees humanas e logo eles teriam um

papel secundaacuterio na importacircncia da epidemiologia da LV enzooacutetica (Dantas-

Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Millaacuten et al (2016) encontraram Leishmania

sp em 375 das 32 raposas cinzas (Pseudalopex griseus) capturadas na

Patagocircnia Argentina Os achados dos autores tecircm elevada significacircncia pela

extensatildeo da aacuterea de distribuiccedilatildeo das leishmanioses na Ameacuterica do Sul por

suportar a existecircncia de um ciclo silvestre na ausecircncia de catildees e ainda na

transmissatildeo indicando que ou a distribuiccedilatildeo de flebotomiacuteneos eacute mais ampla

do que se pensava ou que a transmissatildeo de Leishmania por outros

artroacutepodes poderia ser possiacutevel

De acordo com Medeiros et al (2005) marsupiais didelfiacutedeos estatildeo entre

os principais reservatoacuterios rurais da doenccedila Didelphis albiventris foi o primeiro

mamiacutefero silvestre natildeo canino a ser descrito como hospedeiro de L infantum

no Novo Mundo (Sherlock et al 1984) Em aacutereas endecircmicas do Brasil e na

Colocircmbia espeacutecies de Didelphis tecircm frequentemente abrigado L infantum

(Corredor et al 1989 Travi et al 1994 Sherlock 1996 Cabrera et al 2003

Humberg et al 2012 Carreira et al 2012) e a presenccedila de D albiventris

poderia ser um fator associado a ocorrecircncia de infecccedilotildees assintomaacuteticas por

Leishmania na periferia de centros urbanos (Carranza-Tamayo et al 2016)

Outros marsupiais como Didelphis marsupialis Philander opossum e

Metachirus nudicaudatus jaacute foram detectados com Leishmania amazonensis

(Lainson et al 1981) mostrando que esses mamiacuteferos desempenham papel

importante na manutenccedilatildeo de Leishmania na natureza Em Barra de

Guaratiba estado do Rio de Janeiro a distacircncia das casas para as bordas

49

florestais sua altitude e a presenccedila de D marsupialis nos quintais das casas

foram considerados fatores preditores para infecccedilatildeo por L infantum em catildees

(Cabrera et al 2003)

Roedores sinantroacutepicos da famiacutelia Muridae como o rato de telhado (Rattus

rattus) e o camundongo (Mus musculus) compotildeem a lista de espeacutecies de

potenciais reservatoacuterios ou hospedeiros conforme a espeacutecie de Leishmania

encontrada e o local (Roque amp Jansen 2014) Rattus rattus jaacute foi encontrado

naturalmente infectado por L infantum (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

De Lima et al (2002) isolaram Leishmania braziliensis de R rattus na

Venezuela e Brandatildeo-Filho (2003) encontrou L braziliensis por meio de

eletroforese enzimaacutetica multilocus nesse mesmo hospedeiro Esse processo

de domiciliaccedilatildeo facilita a ligaccedilatildeo entre os ambientes peridomeacutestico e o

silvestre (Lainson et al1969) podendo estabelecer novos padrotildees

epidemioloacutegicos de LV particularmente no ciclo urbano de transmissatildeo

(Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

Helhazar et al (2013) reportaram pela primeira vez em Portugal a

infecccedilatildeo natural por L infantum em M musculus e em Rattus norvegicus

(ratazana) sugerindo que estes animais provavelmente desempenham papeacuteis

como potenciais reservatoacuterios no ciclo bioloacutegico do parasito Os autores

relatam que M musculus e R norvegicus satildeo animais que se proliferam muito

raacutepido e tecircm uma expectativa de vida de 12 e 24 meses respectivamente o

que poderia manter o parasito disponiacutevel por pelo menos um ano mesmo

durante a baixa atividade dos flebotomiacuteneos em determinadas estaccedilotildees do

ano Na Venezuela De Lima e colaboradores (2002) isolaram L braziliensis

em Sigmodon hispidus (rato do algodatildeo) aleacutem do R rattus

Mais de 200 espeacutecies de roedores estatildeo distribuiacutedas em haacutebitats semi-

aquaacuteticos terrestres e semi-fossoriais no Brasil (Bonvicino et al 2008) Esta

caracteriacutestica eacute provavelmente a principal razatildeo que explica a sua exposiccedilatildeo

aos diferentes ciclos de transmissatildeo de vaacuterias espeacutecies de Leishmania no

ambiente silvestre (Roque amp Jansen 2014a)

50

No Brasil Paacutedua et al (2011) relataram infecccedilatildeo natural por L braziliensis

no roedor sinantroacutepico M musculus e no roedor silvestre Necromys lasiurus a

partir de anaacutelises moleculares (PCR-RFLP) de medula oacutessea femoral e

fragmentos de pele Freitas et al (2012) no Estado de Mato Grosso uma

regiatildeo endecircmica para leishmaniose cutacircnea relataram infecccedilatildeo natural nas

mesmas espeacutecies e utilizando a mesma metodologia que Paacutedua et al (2011)

mostraram que a presenccedila de Leishmania em roedores sinantroacutepicos pode

ser uma ameaccedila aos humanos devido a cohabitaccedilatildeo de domiciacutelios humanos

nessa aacuterea de estudo

No Brasil existem poucos estudos de infecccedilatildeo natural de Leishmania em

roedores caviomorfos e cerca de 90 espeacutecimes foram analisados (Lainson et

al 1981 Quaresma et al 2011) Estudos experimentais apontaram duas

espeacutecies de caviomorfos como reservatoacuterios potenciais para Leishmania

Thrichomys laurentius infectado por L infantum e L braziliensis (Roque et al

2010) e Proechimys semispinosus infectados com L infantum (Travi et al

2002) Lainson amp Shaw (1968) encontraram o parasito L amazonensis no

roedor Proechimys guyannensis no norte do estado do Paraacute (Lainson amp Shaw

1972) Proechimys cuvieri foi descrito como hospedeiro de Leishmania spp

na Guiana Francesa por Dedet et al (1985)

Um estudo de Brandatildeo-Filho et al (1994) em pequenos mamiacuteferos

provaacuteveis reservatoacuterios de L braziliensis em Amaraji Pernambuco encontrou

amostras de esfregaccedilos hepaacuteticos e esplecircnicos com amastigotas em

Nectomys squamipes N lasiurus e tambeacutem em R rattus Apoacutes quase 10

anos um estudo realizado na mesma localidade de Pernambuco identificou L

braziliensis em R rattus e N lasiurus (Brandatildeo-Filho et al 2003)

Forattini et al (1972 1973) isolaram Leishmania de Akodon arviculoides

Oryzomys nigripes e Oryzomys capito laticeps Telleria et al (1999)

identificaram Leishmania amazonensis em Akodon spp por PCR kDNA

Exames histoloacutegicos de lesotildees nos roedores Oryzomys spp Nectomys

spinosus amoenus e Nectomys rattus revelaram amastigotas compatiacuteveis com

Leishmania (Lainson amp Shaw 1970) Leishmania amazonensis foi isolada de

amizade Ao colega Douglas Rocha pela ajuda no campo e na triagem

identificaccedilatildeo e fotografia dos flebotomiacuteneos Agrave colega Tauana de Souza Ferreira

por ser gentilmente prestativa em todas as etapas desse trabalho Agrave colega Thaiacutes

Oliveira por compartilhar o tempo e os conhecimentos profissionais pelos

agradaacuteveis momentos juntas pela amizade construiacuteda Agrave colega e teacutecnica

Renata Velocircso Timboacute pela ajuda na execuccedilatildeo de diversas etapas do processo

laboratorial e pela paciecircncia Agrave colega Mariana Neiva pela ajuda na execuccedilatildeo de

diversas etapas do processo laboratorial

Agrave melhor equipe de campo que algueacutem poderia ter Jocircnatas Ferreira Deacutebora

Juliana Rodrigues Martins Jeacutessica Toledo de Almeida Cristiana Santiago Nery

de Souza Agda Regina Melo Silva Thamerson Felipe Lelis dos Santos Saemis

Ferreira de Souza Tacircmela Steacutefany Lopes Silva Renecirc Cunha de Castro Rubens

Geraldo de Souza Jadson Joseacute Gomes da Silva Lana Cristina Evangelista

Ferreira Saacute Hayana Maria Boaventura Costa e ao senhor Barbosa Joseacute Bezerra

Ao meu parceiro Greacutegoire Saint Gal de Pons pela cumplicidade pelo amor pela

paciecircncia por ser um grande ouvinte pelos conselhos pela compreensatildeo nos

momentos de privaccedilatildeo de tempo em funccedilatildeo do curso por cuidar da nossa

famiacutelia

Aos meus filhos Lucca Rapello e Pierre Rapello pela paciecircncia e compreensatildeo

nos momentos de ausecircncia e por serem minhas razotildees de ser melhor

Ao meu irmatildeo Marcio Rapello e cunhada Gabriela Ortiz de Rozas pelos

momentos e palavras de apoio sempre bem-vindos

Agraves minhas avoacutes Annita Rapello (in memorian) e Eulina Machado (in memorian)

que foram para o Senhor ao longo desse doutorado mas que deixaram seus

ensinamentos para sempre na minha vida

Aos meus amigos pessoais que natildeo foram aqui citados mas que sabem o

quanto foram importantes para mim ao longo dessa etapa Vocecircs me fortalecem

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 A Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO 2016

27

Figura 2 Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte Rey 2002ndash CD room (Modificado)

32

Figura 3 Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral Leishmaniases (LV) CL Cutaneous Leishmaniases (LT) Fonte TDR ndash Wellcome Trust

34

Figura 4 Ilustraccedilatildeo das subunidades SSU e LSU intercaladas por espaccediladores de conservaccedilatildeo intermediaacuteria ITS (ITS1 e ITS2 espaccediladores internos transcritos) e ETS (espaccedilador externo transcrito) flanqueados pelo espaccedilador intergenocircmico (IGS) Fonte Vilgalyslab Duke University

63

Figura 5 Matas de Galeria amostradas em Brasiacutelia A Parque Nacional de Brasiacutelia B Fazenda Aacutegua Limpa C Jardim Botacircnico de Brasiacutelia D Reserva Bioloacutegica da Contagem

68

Figura 6 Localizaccedilatildeo geograacutefica das quatro aacutereas de estudo no Distrito Federal A PNB Parque Nacional de Brasiacutelia (PA PB) B REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem (RA RB) C FAL Fazenda Aacutegua Limpa da UNB (BA BB) D JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia (JA JB) Fonte Google Earth 2014

69

Figura 7 Armadilhas utilizadas nas amostragens de flebotomiacuteneos A armadilha do tipo HP B Armadilha do tipo Shannon

70

Figura 8 Armadilhas utilizadas para amostragens de mamiacuteferos A Armadilha tipo Tomahawk localizada no solo B Armadilha tipo Tomahawk com pequeno mamiacutefero capturado C Armadilha tipo Sherman localizada em estrato arboacutereo

72

Figura 9 Roedor marcado por um brinco de identificaccedilatildeo (observar a ponta da pinccedila)

73

Figura10 Base de trabalho de campo 74

Figura 11 Procedimentos de pesagem (A) e exame cliacutenico geral em roedor e marsupial (B)

75

Figura 12 Roedor apoacutes coleta de tecido A seta aponta o local da coleta da ponta de orelha

76

Capiacutetulo 1

Figura 1 Porcentagem de armadilhas positivas para flebotomiacuteneos em quatro matas de galeria no Distrito Federal em maio e setembro de 2014 FAL = Fazenda Aacutegua Limpa REBIO = Reserva Bioloacutegica da Contagem PNB = Parque Nacional de Brasiacutelia JBB = Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

86

Figura 2 A) Genitaacutelia de macho de Brumptomyia brumpti (10x) B) genitaacutelia masculina de Brumptomyia guimaraesi (10x) C) toacuterax do macho de Brumptomyia guimaraesi (10X) (Montados em baacutelsamo de canadaacute)

89

Figura 3 D) Cabeccedila de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (10x) E) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (40x) F) espermateca de Micropygomyia ferreirana (40x) (Montados em baacutelsamo do Canadaacute

90

Figura 4 G) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Evandromyia bourrouli (40x) H) espermateca de Evandromyia bourrouli (40X) I) genitaacutelia masculina de Evandromyia bourrouli (40X)

91

Figura 5 J) Ascoacuteide em flagelocircmeros de Psathyromyia pradobarrientosi (40X) K) Genitaacutelia masculina de Psathyromyia pradobarrientosi (10X) L) porccedilatildeo final do ducto ejaculatoacuterio de Psathyromyia pradobarrientosi (40X)

92

Capiacutetulo 2

Figura 1 Fluxograma explicativo dos meacutetodos utilizados para a obtenccedilatildeo e processamento dos flebotomiacuteneos

102

Figura 2 Amplificaccedilatildeo do gene Cacophany em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-R22 Amostras de flebotomiacuteneos

110

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de SSUrRNA em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-

R28 Amostras de flebotomiacuteneos Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

111

Capiacutetulo 3

Figura 1 Roedores capturados no presente trabalho A Oecomys bicolor B Calomys expulsus C Hylaeamys magacephalus D Rhipidomys macrurus E Nectomys rattus F Necromys lasiurus Fonte A B C D e F - Bonvicino (2008) E ndash Arquivo pessoal

125

Figura 2 Marsupiais capturados no presente trabalho A Didelphis albiventris B Gracilinanus agilis C e D Monodelphis americana Fonte arquivo pessoal

125

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 4 13 1617 20 21 25 82 e 86 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 4 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 48 55 70 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 5 Amplificaccedilatildeo de SSU rRNA em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 02 11 13 16 17 20 25 41 58 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

135

LISTA DE QUADROS E TABELAS

Quadro 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al 2015 Galati 2015

43

Capiacutetulo 1

Tabela 1 Nuacutemeros do cataacutelogo institucional dos voucheres de

espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados no presente estudo

84

Tabela 2 Espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados nas quatro aacutereas de estudo do Distrito Federal em maio e setembro de 2014 Novos registros para o Distrito Federal Novo registro para o cerrado Riqueza total de espeacutecies nas matas de galeria 16 espeacutecies

85

Tabela 3

Lista atualizada de espeacutecies de flebotomiacuteneos no Distrito Federal Brasil Novo registro para o Brasil Riqueza total 35 espeacutecies

87

Capiacutetulo 2

Tabela 1 Identificaccedilatildeo molecular dos ldquopoolsrdquo de flebotomiacuteneos fecircmeas

submetidos aos exames moleculares por aacuterea espeacutecie mecircs de coleta e nuacutemero de indiviacuteduos em cada ldquopoolrdquo

107

Capiacutetulo 3

Tabela 1 Espeacutecies de roedores e marsupiais didelfiacutedeos coletadas

nos meses de maio e setembro de 2014 na FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal Brasil

124

Tabela 2

Distribuiccedilatildeo das espeacutecies de mamiacuteferos capturados nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014

126

Tabela 3 Dados brutos da morfometria corporal sexo e idade das espeacutecies de mamiacuteferos capturadas nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014 As linhas realccediladas em amarelo correspondem aos animais positivos nos testes moleculares

127

Tabela 4

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU de Tripanossomatiacutedeos e ITS1 de Leishmania spp em animais da FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal

133

Tabela 5

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos e ITS-1 de Leishmania spp em animais da FAL PNB e JBB Distrito Federal

136

ABREVIATURAS E SIGLAS

APA Aacutereas de Proteccedilatildeo Ambiental

APPs Aacutereas de Preservaccedilatildeo Permanente

CEUA Comitecirc de Eacutetica de Uso Animal

DF Distrito Federal

DNA Aacutecido Desoxirribonucleacuteico

ELISA Ensaio de Imunoabsorccedilatildeo Enzimaacutetica

ETS Espaccedilador Externo Transcrito

FAL Fazenda Aacutegua Limpa

GDF Governo do Distrito Federal

IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos

Naturais Renovaacuteveis

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatiacutestica

IBRAM Instituto Brasiacutelia Ambiental

ICMBio Instituto Chico Medes de Biodiversidade

IGS Espaccediladores Intergecircnicos

IGS Espaccedilador Intergenocircmico

IM Intramuscular

ITS Internal Transcribed Spacer-

Regiatildeo Espaccediladora Transcrita Interna

ITS-1 Espaccediladores Internos Transcritos 1

ITS-2 Espaccediladores Internos Transcritos 2

JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

KOH Hidroacutexido de Potaacutessio

LC Leishmaniose Cutacircnea

LMC Leishmaniose Muco-cutacircnea

LSU Subunidade Maior

LTA Leishmaniose Tegumentar Americana

LV Leishmaniose Visceral

mgKg Miligramas por quilo

PBS Phosphate-buffered saline - Tampatildeo Fosfato Salino

PCR Polymerase Chain Reaction -Reaccedilatildeo da Polimerase em

Cadeia

PCR-RFLP Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restriccedilatildeo

PNB Parque Nacional de Brasiacutelia

RBC-DF Reserva da Biosfera do Cerrado no DF

RCO Regiatildeo Centro-Oeste

REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia Indireta

RNA Aacutecido Ribonucleacuteico

RNAr RNA ribossocircmico

SINAN-NET Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SSU Subunidade Menor

UC Unidades de Conservaccedilatildeo

UNB Universidade de Brasiacutelia

OMSWHO Organizaccedilatildeo Mundial de SauacutedeWorld Health Organization

OPAS Organizaccedilatildeo Pan-Americana da Sauacutede

CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento de Pessoal de Niacutevel

Superior

dNTPs

Deoxyribonucleotide Triphosphates ndash Desoxirribonucleotiacutedeo

Trifosfato)

Taq Thermus aquaticus

pb pares de bases

FINANCIAMENTO

O estudo foi financiado pela CAPES (processo ndeg127611 edital Parasitologia

Baacutesica) e pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical da

Universidade de Brasiacutelia

Sumaacuterio

1 INTRODUCcedilAtildeO

23

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas 23

12 Definiccedilatildeo 25

13 Epidemiologia 26

14 Agente Etioloacutegico 31

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose 35

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF 38

17 Vetores

40

18 Flebotomiacuteneos no DF 43

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp 45

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de Hospedeiros e Reservatoacuterios

46

111 A questatildeo ambiental do Distrito Federal 52

112 A fragmentaccedilatildeo florestal e as leishmanioses 55

113 Estrateacutegias de controle das leishmanioses 57

114 Diagnoacutestico parasitoloacutegico e imunoloacutegico das leishmanioses 58

115 Diagnoacutestico molecular das leishmanioses 61

116 Diagnoacutestico molecular da infecccedilatildeo por tripanossomatiacutedeos utilizando genes ribossocircmicos

62

2 JUSTIFICATIVA 64

3 OBJETIVOS 66

4 MATERIAL E MEacuteTODOS 67

41 Aacutereas de estudo 67

42 Amostragem de flebotomiacuteneos 70

43 Montagem dissecccedilatildeo e identificaccedilatildeo dos flebotomiacuteneos 71

44 Captura dos pequenos mamiacuteferos 71

45 Contenccedilatildeo e marcaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos 73

46 Coleta de material bioloacutegico 75

5 Resultados 77

51 Capiacutetulo 1 - Lista atualizada de flebotomiacuteneos (Diptera Psychodidae Phlebotominae) do Distrito Federal Brasil

77

RESUMO 78

Introduccedilatildeo 79

Material e Meacutetodos 80

Aacutereas de Estudo 80

Amostragem dos flebotomiacuteneos 81

Anaacutelise estatiacutestica 82

Resultados 82

Aspectos morfoloacutegicos para novos registros

88

Discussatildeo 93

52 Capiacutetulo 2 - Avaliaccedilatildeo de infecccedilatildeo natural por Leishmania spp em flebotomiacuteneos de matas de galeria do Distrito Federal Brasil

98

RESUMO 98

1 Introduccedilatildeo 100

2 Material e Meacutetodos 101

21 Amostragem dissecccedilatildeo e montagem dos flebotomiacuteneos 102

22 Extraccedilatildeo de DNA 103

23 PCR dirigida ao gene Cacophany 103

24 PCR dirigida ao gene SSU rDNA de tripanossomatiacutedeos 104

25 PCR dirigida ao ITS-I do rDNA 105

3 Resultados 106

4 Discussatildeo 111

53 Capiacutetulo 3 Ocorrecircncia de pequenos mamiacuteferos infectados por Leishmania spp em Matas de Galeria do Distrito Federal Brasil

115

RESUMO 115

1 Introduccedilatildeo 116

2 Material e meacutetodos 118

21 Aacuterea de estudo amostragem e identificaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos

118

22 Amostras bioloacutegicas e extraccedilatildeo do DNA 119

23 PCR dirigida ao gene SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos 120

24 PCR dirigida ao ITS- 1 do rRNA 121

25 Aspectos eacuteticos 122

26 Anaacutelise de dados 122

3 Resultados 123

4 Discussatildeo 137

41 Composiccedilatildeo da comunidade de mamiacuteferos no momento das coletas

137

42 Infecccedilatildeo natural por Leishmania spp nos pequenos mamiacuteferos das Matas de Galeria estudadas no Distrito Federal Brasil

141

6 Consideraccedilotildees Finais 148

7 Conclusotildees 151

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 152

9 ANEXOS 190

RESUMO

O conhecimento relacionado agrave transmissatildeo enzooacutetica de espeacutecies de

Leishmania no Distrito Federal ainda eacute escasso e a participaccedilatildeo de

flebotomiacuteneos e mamiacuteferos silvestres no ciclo de transmissatildeo desses

protozoaacuterios eacute objeto do presente estudo As aacutereas estudadas foram as matas

de galeria da Fazenda Aacutegua Limpa da Universidade de Brasiacutelia Reserva

Bioloacutegica da Contagem Parque Nacional de Brasiacutelia e Jardim Botacircnico de

Brasiacutelia em maio e setembro de 2014 O Capiacutetulo 1 traz a atualizaccedilatildeo da lista de

espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF Com esforccedilo de captura de 1280 armadilhas

HP e 16 armadilhas do tipo Shannon foram capturados 1209 flebotomiacuteneos

pertencentes a 16 espeacutecies Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espeacutecie

mais capturada Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia guimaraesi Br

brumpti Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas

pela primeira vez no DF ampliando a distribuiccedilatildeo geograacutefica das mesmas e

elevando para 35 o nuacutemero de espeacutecies registradas nessa unidade da

federaccedilatildeo O Capiacutetulo 2 analisou a infecccedilatildeo natural dos flebotomiacuteneos

capturados por Leishmania DNA foi extraiacutedo de 569 fecircmeas agrupadas em 87

ldquopoolsrdquo A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada agrave

amplificaccedilatildeo do gene cacophony da regiatildeo IVS6 A detecccedilatildeo dos

tripanossomatiacutedeos foi feita pela amplificaccedilatildeo das regiotildees SSU rRNA e ITS-1

Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp entretanto os

resultados do presente estudo natildeo implicam na inexistecircncia de vetores

infectados nestas matas de galeria O Capiacutetulo 3 analisou a ocorrecircncia e infecccedilatildeo

em pequenos mamiacuteferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp nas

mesmas aacutereas dos flebotomiacuteneos e nos mesmos periacuteodos Amostras de tecido

(fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamiacuteferos capturados e utilizadas

para a detecccedilatildeo molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e

PCR com alvo na regiatildeo ITS em 153 amostras Com um total de 5120

armadilhas-noite 172 pequenos mamiacuteferos foram capturados pertencentes agrave

trecircs espeacutecies de marsupiais (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis e

Monodephis americana) e seis espeacutecies de roedores (Rhipidomys macrurus

Oecomys bicolor Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys

rattus e Necromys lasiurus) Vinte amostras (1307) foram positivas

considerando ambos os marcadores moleculares quatro somente para SSU e

quatro somente para ITS As espeacutecies infectadas por Leishmania spp foram

Rhipidomys macrurus Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris Estas espeacutecies

devem participar da transmissatildeo enzooacutetica de Leishmania na REBIO FAL e JBB

sendo este o primeiro relato de mamiacuteferos silvestres infectados por este parasito

nestas duas uacuteltimas aacutereas Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se

que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espeacutecies incriminadas

vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenccedilatildeo da

transmissatildeo enzooacutetica desses tripanossomatiacutedeos

Palavras chaves Transmissatildeo enzooacutetica Leishmania spp roedores

marsupiais Phlebotominae Cerrado

ABSTRACT

Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce

and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis

transmission cycle is the subject of this study All samples were captured in

gallery forests of four areas Aacutegua Limpa Farm Biological Reserve of Contagem

Brasiliarsquos National Park and Botanic Garden of Brasiacutelia on May and September

2014 Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal

District The entire capture effort entailed 1280 HP light traps and 16 Shannon

traps 16 species were identified Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the

most captured species Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia

guimaraesi Br brumpti Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli

were registered for the first time in the Federal District elevating to 35 the number

of reported species at this federation unit Chapter 2 follows up the study of

Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies

DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools Fragments that

corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples

demonstrating the quality of the extracted DNA Trypanosomatids detection was

performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions All samples tested

negative for Leishmania spp Therefore negative results in the present study do

not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and

surroundings Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small

mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of

sandflies and during the same periods Tissue samples (ear tips) were obtained

from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested

PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples The entire

capture effort entailed 5120 night-traps and 172 small mammals from three

marsupials species (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis and Monodephis

americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus Oecomys bicolor

Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys rattus and Necromys

lasiurus) were captured Twenty samples (1307) were positive considering

both molecular markers four samples only for SSU and four sampes only for ITS

Leishmania spp infected species were Rhipidomys macrurus Gracilinanus

agilis and Didelphis albiventris These species might participate in the enzootic

transmition of Leishmania at REBIO FAL and JBB This is the first report of

Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas Considering all

results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species

from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the

maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Key words Enzootic transmission Leishmania spp rodents marsupials

Phlebotominae Brazilian savanna

23

1 Introduccedilatildeo

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) eacute uma doenccedila existente

desde a antiguidade cujos relatos e descriccedilotildees datam do seacutec I dC (Basano

amp Camargo 2004) Altamirano-Enciso et al (2003) relataram trecircs teorias de

origem da doenccedila nas Ameacutericas A primeira de 1890 em que Juliano Moreira

amp Aguiar Pupo propunham uma origem mediterracircnea enfatizando que os

casos observados em pacientes da Bahia (Brasil) doenccedila chamada ldquobotatildeo da

Bahiardquo eram parecidos ao ldquobotatildeo do Orienterdquo Segundo os mesmos autores a

LTA teria sido introduzida pelos feniacutecios ou siacuterios que supostamente

chegaram ao nordeste do Brasil ainda na Antiguidade No entanto tais

viagens jamais foram comprovadas historicamente ou arqueologicamente

A segunda teoria eacute a de origem andina formulada a partir dos

descobrimentos de peccedilas de ceracircmica preacute-colombianas ou ldquohuacos peruanosrdquo

em 1895 e reforccedilada pelos documentos do seacuteculo XVI Contudo a discussatildeo

dos dados histoacutericos dividiu-se em dois grupos uma primeira corrente

representada pelos defensores das chamadas ldquoevidecircnciasrdquo histoacutericas cujos

argumentos se reforccedilam pelos estudos das representaccedilotildees de lesotildees feitas

em objetos de ceracircmica e outro grupo de estudiosos que questionava essa

fonte histoacuterica por ser descrita por cronistas que natildeo eram meacutedicos Atribui-se

a essa discussatildeo grande importacircncia porque se passaram quase 80 anos

desde que Eduardo Rabello (1925) propocircs que as origens da leishmaniose

muco-cutacircnea (LMC) estariam inicialmente focalizadas nos territoacuterios frios

sugerindo as regiotildees da Boliacutevia e do Peru predominando esta teoria na

literatura biomeacutedica

24

Mais recentemente a chamada teoria monofileacutetica para origem das

leishmacircnias foi formulada por Thomas-Soccol et al (1993) que baseando-se

em estudos de DNA mitocondrial de 20 espeacutecies de leishmacircnias do mundo

consideram que os subgecircneros Viannia e Leishmania propostos por Lainson

amp Shaw (1972) tiveram origem comum desde os periacuteodos Cretaacuteceo e

Juraacutessico haacute 120 milhotildees de anos quando os continentes estavam unidos na

Pangeacuteia Contudo a questatildeo do local de origem das leishmacircnias continua

controversa entre as regiotildees Neotropical Paleaacutertica e Africana

Cerqueira no Brasil em 1855 observou a existecircncia da forma cutacircnea

identificando-a clinicamente como ldquobotatildeo de Biskrardquo e Breda em 1895 na

Itaacutelia descreveu a doenccedila em italianos provenientes de Satildeo Paulo

Lindenberg (1909) encontrou ldquoformas de Leishmaniardquo idecircnticas agrave

Leishmania tropica da leishmaniose do Velho Mundo em lesotildees cutacircneas de

indiviacuteduos que trabalhavam nas matas do interior do Estado de Satildeo Paulo o

que confirmou a natureza leishmanioacutetica das lesotildees cutacircneas e nasofariacutengeas

(Basano amp Camargo 2004) Gaspar Vianna redescreveu o parasito como L

braziliensis por consideraacute-lo diferente da L tropica e assim denominou-se o

agente etioloacutegico da uacutelcera de Bauru ferida brava ou nariz de tapir

(Basano amp Camargo 2004)

No Brasil ateacute a deacutecada de 1970 todos os casos de LTA eram atribuiacutedos a

L braziliensis (Basano amp Camargo 2004) entretanto com o progresso das

pesquisas ecoepidemioloacutegicas e com o desenvolvimento das teacutecnicas

moleculares outras espeacutecies foram descritas sendo registradas ateacute o

momento sete espeacutecies causadoras da LTA (Brasil 2010) A leishmaniose

visceral (LV) era confundida no passado com outras doenccedilas endecircmicas e de

apresentaccedilatildeo cliacutenica semelhante como a malaacuteria em humanos (Palmer

1998)

No iniacutecio de 1903 James Homer Wright de Baltimore observou formas de

protozoaacuterios em uacutelcera cutacircnea de uma crianccedila da Armecircnia suspeita de ser

acometida pelo Botatildeo do Oriente e propocircs o nome de Welcozoma tropicum

para o agente causal hoje conhecido como L tropica Em 30 de maio desse

25

ano o inglecircs William Boog Leishman obteve uma bioacutepsia de fiacutegado de um

soldado inglecircs morto pela doenccedila febre de dum-dumou kala-azar na Iacutendia

Dois meses depois em 11 de julho Charles Donovan tambeacutem em bioacutepsia do

baccedilo de outro soldado morto descobriu independentemente o agente

etioloacutegico do calazar que era semelhante ao parasito da tripanossomiacutease em

sua fase intracelular (Altamirano-Enciso et al 2003)

O nome do gecircnero Leishmania foi criado pelo meacutedico inglecircs Ronald Ross

mas o termo Leishmania donovani para o agente da LV foi proposto por

Laveran amp Mesnil em 1903 embora segundo Basano amp Camargo (2004)

Cunningham em 1885 na Iacutendia foi o primeiro a observar o parasito do gecircnero

em casos de LV A partir daquele ano foram descritos outros

tripanossomatiacutedeos em paiacuteses do mar Mediterracircneo e da Aacutesia araacutebica As

duacutevidas de que L donovani e L tropica fossem tripanossomatiacutedeos e natildeo

piroplasmas soacute foram dissipadas quando Rogers amp Nicolle (1904) e

posteriormente Nicolle (1908) e Carlos Chagas (1908) demonstraram as

formas flageladas de ambos os parasitos em meio de aacutegar sangue ldquoin vitrordquo

Sergent et al (1921) reproduziram o rdquobotatildeo do Orienterdquo em hamsters ao

inocularem macerados de Phlebotomus papatasi alimentados em soldados

franceses na Argeacutelia comprovando a associaccedilatildeo entre L tropica e

flebotomiacuteneos No Brasil Henrique Aragatildeo (1922) estudou um surto de LTA

no Rio de Janeiro e associou os casos agrave presenccedila de elevada quantidade de

flebotomiacuteneos infectados por L braziliensis Ao inocular triturados destes

flebotomiacuteneos no focinho de catildees foi observada ulceraccedilatildeo com a presenccedila

de formas amastigotas intracelulares (Altamirano-Enciso et al 2003)

12 Definiccedilatildeo

As leishmanioses satildeo um conjunto de doenccedilas resultantes da infecccedilatildeo

por protozoaacuterios digeneacuteticos (Negratildeo amp Ferreira 2014) pertencentes ao filo

Euglenozoa classe Kinetoplastea ordem Trypanosomatida famiacutelia

26

Trypanosomatidae (Cavalier-Smith 2016) gecircnero Leishmania (Ross 1903)

com caraacuteter zoonoacutetico Esses protozoaacuterios satildeo transmitidos por insetos

vetores conhecidos por flebotomiacuteneos (Laurenti 2010 Ready 2013) O fator

em comum das espeacutecies de Leishmania estaacute na necessidade de passar por

um hospedeiro invertebrado obrigatoriamente um flebotomiacuteneo (ver item 17)

para se reproduzirem e atingirem a forma infectante (Jones et al 2003)

As doenccedilas estatildeo amplamente distribuiacutedas em todo o mundo e dividem-se

em dois grandes grupos as leishmanioses dermotroacutepicas e as leishmanioses

viscerotroacutepicas (Negratildeo amp Ferreira 2009)

13 Epidemiologia

As leishmanioses representam uma das endemias de maior

importacircncia em sauacutede puacuteblica no mundo (Laurenti 2010) As mesmas satildeo

consideradas emergentes em franca expansatildeo associada agrave pobreza e ao

deslocamento da populaccedilatildeo para aacutereas com ciclos de transmissatildeo existentes

sendo incluiacutedas na lista de Doenccedilas Tropicais Negligenciadas (WHO 2014)

As leishmanioses tecircm ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica sendo possiacutevel observar

casos da doenccedila em todos os continentes com exceccedilatildeo da Antaacutertica (Figura

1) (WHO 2009)

27

FIGURA 1 Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A

Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO

2016

Segundo a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (WHO 2016) satildeo estimados

900 mil a 16 milhatildeo de novos casos de leishmanioses destes 02 a 04

milhatildeo de novos casos de LV e 07 a 12 milhotildees de novos casos de LT onde

20 mil a 30 mil mortes ocorrem anualmente no mundo Ainda de acordo com

A

B

28

dados da WHO (2016) mais de 98 paiacuteses e territoacuterios satildeo endecircmicos para as

leishmanioses Destes 72 paiacuteses estatildeo em processo de desenvolvimento

incluindo 13 dos menos desenvolvidos e sua notificaccedilatildeo eacute compulsoacuteria em

apenas 30 deles (Negratildeo amp Ferreira 2014) Nas Ameacutericas as leishmanioses

ocorrem em 21 paiacuteses com expansatildeo geograacutefica associada agrave antropizaccedilatildeo

dos ciclos de transmissatildeo de Leishmania com o desmatamento abertura de

estradas e urbanizaccedilatildeo de aacutereas primitivas que tem favorecido o ciclo

peridomiciliar da doenccedila (Dedet 1999 Negratildeo amp Ferreira 2014)

As formas viscerotroacutepica e dermotroacutepica tecircm despertado especial

interesse devido a sua importacircncia meacutedica e econocircmica em aacutereas endecircmicas

em regiotildees tropicais e subtropicais da Ameacuterica Aacutefrica Iacutendia e paiacuteses nas

margens do Mediterracircneo (Negratildeo amp Ferreira 2009)

A LTA eacute encontrada em todos os paiacuteses das regiotildees tropicais e

subtropicais do mundo (Gontijo amp Carvalho 2003) exceto na Austraacutelia Nova

Zelacircndia e algumas ilhas do Paciacutefico Essa irregularidade na distribuiccedilatildeo

mundial eacute enfatizada pelo fato que os 90 dos casos tem ocorrido em apenas

seis paiacuteses Afeganistatildeo Brasil Iratilde Peru Araacutebia Saudita e Siacuteria (WHO 2008

Negratildeo amp Ferreira 2014) A doenccedila eacute descrita em quase todos os paiacuteses

americanos do sul dos Estados Unidos agrave Patagocircnia ao norte extremo da

Argentina (Millaacuten et al 2016) com exceccedilatildeo do Uruguai e do Chile (Lainson

1981) verificando-se a distribuiccedilatildeo das diversas formas clinico

epidemioloacutegicas com estreita relaccedilatildeo com condiccedilotildees floriacutesticas e fauniacutesticas

(Teodoro 1997) Na Ameacuterica Latina eacute assinalada desde a peniacutensula de

Yucataacuten Meacutexico (Castro 2002) compreendendo as proviacutencias do norte da

Argentina (Salomoacuten 2010 Millaacuten et al 2016) alcanccedilando maior importacircncia no

Brasil aleacutem do Peru

Negratildeo amp Ferreira (2014) consideraram que na Ameacuterica do Sul a LTA

apresenta dois padrotildees epidemioloacutegicos o padratildeo claacutessico constituiacutedo por

surtos epidecircmicos associados agrave derrubada de matas para a construccedilatildeo de

estradas e povoados e o padratildeo associado agraves formas de ocupaccedilatildeo do espaccedilo

em regiotildees de colonizaccedilatildeo antiga

29

A maioria dos casos de leishmanioses nas Ameacutericas eacute proveniente do

Brasil (Alvar et al 2012) onde as mesmas apresentam distribuiccedilatildeo em todas

as regiotildees geograacuteficas desde 2003 com maior incidecircncia observada no

Nordeste brasileiro (WHO 2014) No Brasil estatildeo incluiacutedas na lista de

doenccedilas que compotildeem o Sistema de Informaccedilatildeo de Doenccedilas de Notificaccedilatildeo

Compulsoacuteria (Brasil 2010)

De acordo com WHO (2016) no ano de 2014 foram notificados 3453

casos de LV no Brasil dos quais 82 com confirmaccedilatildeo laboratorial Para a

leishmaniose tegumentar (LT) foram notificados 19402 casos e 89

confirmados por exames De acordo com a mesma fonte 43 da populaccedilatildeo

brasileira estaacute sob o risco de LV (86997054 200362200) e 70 sob o risco

de LT (139396846200362200) Entre os fatores de risco para a ocorrecircncia

das leishmanioses encontra-se a subnutriccedilatildeo com dietas pobres em

proteiacutenas ferro vitamina A e zinco que pode comprometer a imunidade dos

indiviacuteduos aumentando o risco de uma infecccedilatildeo se agravar a precariedade

das condiccedilotildees sanitaacuterias domeacutesticas como a falta de gestatildeo de resiacuteduos e

esgoto a ceacuteu aberto que podem aumentar os locais de criaccedilatildeo e repouso de

flebotomiacuteneos e bem como o seu acesso aos seres humanos a migraccedilatildeo e

a exposiccedilatildeo ocupacional onde as pessoas ao se movimentarem ou se

estabelecerem em aacutereas de florestas ficam mais proacuteximas do habitat de

flebotomiacuteneos mudando o perfil epidemioloacutegico das doenccedilas (WHO 2014)

Negratildeo amp Ferreira (2014) estudaram a dispersatildeo da LT nas Ameacutericas e

relataram que o crescimento migratoacuterio aliado ao processo histoacuterico de

organizaccedilatildeo espacial nas uacuteltimas deacutecadas tem propiciado a proliferaccedilatildeo de

aacutereas de alto risco e infecccedilatildeo por Leishmania em aacutereas urbanas brasileiras

ora associadas a aacutereas verdes e outras como consequecircncia do desequiliacutebrio

ecoloacutegico evidenciada em algumas aacutereas periurbanas ou associadas agraves

aacutereas de desmatamentos Os mesmos autores enfatizaram que dentro dos

limites geograacuteficos da ocorrecircncia da doenccedila sua extensatildeo e severidade

variavam pelo endemismo ou ocorrecircncia esporaacutedica com condiccedilotildees

ecoloacutegicas especiacuteficas em diferentes regiotildees A distribuiccedilatildeo espacial da

doenccedila em territoacuterio brasileiro eacute resultado de diferentes condiccedilotildees geograacuteficas

30

ou ecoloacutegicas potencializadas pelo planejamento governamental inadequado

ou ineficiente em accedilotildees que promovam a conscientizaccedilatildeo visando o controle

prevenccedilatildeo ou detecccedilatildeo precoce da infecccedilatildeo em aacutereas de risco Para os

centros urbanos eacute de grande importacircncia o conhecimento de aacutereas que

podem oferecer risco agrave populaccedilatildeo exposta agraves formas de LTA de ocorrecircncia

ligadas ao ambiente (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Outro aspecto relevante dentro deste contexto de expansatildeo e urbanizaccedilatildeo

das leishmanioses em todo o mundo e principalmente no Brasil eacute a

possibilidade de se adquirir a doenccedila a partir de transfusotildees sanguiacuteneas (Luz

et al 1997 Urias et al 2009) Este fato eacute agravado em funccedilatildeo do diagnoacutestico

soroloacutegico para a LV natildeo estar incluiacutedo ainda na triagem dos doadores do

paiacutes (Laurenti 2010) que se restringe a triagem laboratorial normatizada das

seguintes doenccedilas doenccedila de Chagas siacutefilis hepatite B HIV malaacuteria HTLV

1 e 2 (Anvisa 2004)

Karagiannis-Voules et al (2013) associaram as doenccedilas a fatores soacutecio-

econocircmicos e agrave precipitaccedilatildeo Clima precipitaccedilatildeo temperatura e umidade satildeo

fatores que podem alterar as distribuiccedilotildees e influenciar na sobrevivecircncia e no

tamanho das populaccedilotildees de vetores e de hospedeiros reservatoacuterios

Flutuaccedilotildees na temperatura podem ter um efeito profundo no ciclo de

desenvolvimento de promastigotas de Leishmania em flebotomiacuteneos

permitindo a transmissatildeo do parasito em aacutereas anteriormente natildeo endecircmicas

para as doenccedilas Alteraccedilotildees climaacuteticas que levam agrave seca fome e inundaccedilotildees

podem levar ao deslocamento em massa e a migraccedilatildeo de pessoas para aacutereas

com transmissatildeo de leishmanioses (WHO 2014)

Acredita-se que os nuacutemeros de casos notificados natildeo correspondam a

evoluccedilatildeo da LTA devido agrave demora com que o paciente procura o sistema de

sauacutede e o difiacutecil diagnoacutestico por parte do proacuteprio sistema Mesmo levando-se

em conta as falhas de notificaccedilatildeo compulsoacuteria eacute evidente o crescente nuacutemero

de casos novos e a intensidade que atinge o homem sendo proporcional agraves

alteraccedilotildees ambientais decorrentes de atividades humanas em aacutereas

especiacuteficas na aacuterea de estudo proposta A prevalecircncia das diferentes

leishmanioses no continente americano eacute difiacutecil de ser mensurada devido

31

principalmente a subnotificaccedilotildees diagnoacutesticos incorretos afecccedilotildees

inaparentes variaccedilotildees de resposta do hospedeiro e multiplicidade de agentes

etioloacutegicos envolvidos (Marzochi 1992)

14 Agente Etioloacutegico

As infecccedilotildees em seres humanos e em animais por protozoaacuterios do

gecircnero Leishmania recebem denominaccedilotildees variadas mas podem ser

agrupadas com base em suas caracteriacutesticas comuns De acordo com

Akhoundi et al (2016) satildeo conhecidas 53 espeacutecies de Leishmania

pertencentes a cinco subgecircneros e complexos (Leishmania Viannia

Sauroleishmania complexo L enriettii e Paraleishmania) Desse total 31

espeacutecies parasitam espeacutecies de mamiacuteferos sendo que pelo menos 20 delas

infectam seres humanos Uma vez que as formas amastigotas satildeo

morfologicamente similares (Jubb et al1993 Palmer 1998) a diferenciaccedilatildeo

das espeacutecies que parasitam seres humanos eacute realizada por testes

moleculares indispensaacuteveis para o diagnoacutestico (Zampieri et al 2016)

As espeacutecies de Leishmania tecircm ciclos bioloacutegicos similares (Laurenti

2010) apresentando duas formas principais a amastigota observada dentro

de ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear em tecidos dos hospedeiros

vertebrados e a promastigota encontrada no sistema digestoacuterio de

flebotomiacuteneos fecircmeas (Figura 2) (Rey 2002) Ambos amastigotas e

promastigotas dividem-se repetidamente por divisatildeo binaacuteria (Palmer 1998)

32

FIGURA 2 ndash Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte

Rey 2002ndash CD room (Modificado)

No hospedeiro vertebrado as formas amastigotas encontram-se no

interior de vacuacuteolos parasitoacuteforos em macroacutefagos e ceacutelulas reticuloendoteliais

e medem cerca de 1 a 2 microm de largura por 2 a 4 microm de comprimento (Palmer

1988 Jones et al 2003) Esta forma se multiplica por divisatildeo assexuada ateacute o

rompimento da ceacutelula disseminando-se pela via hematogecircnica e linfaacutetica

para outros tecidos ricos em ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear como

linfonodos fiacutegado baccedilo medula oacutessea placas de Peyer por exemplo

iniciando uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria e proporcionando a atraccedilatildeo de outros

macroacutefagos gerando um ldquociclo viciosordquo (Figura 3) (Palmer 1998 Basano amp

Camargo 2004)

A forma amastigota da Leishmania eacute tipicamente ovoacuteide ou esfeacuterica

natildeo possui flagelo e nem membrana ondulatoacuteria (Palmer 1998) apenas um

rudimento de flagelo que estaacute presente na bolsa flagelar caracterizada como

uma pequena invaginaccedilatildeo da membrana do parasito (Figura 2) (Laurenti

2010) Nas preparaccedilotildees coradas por Romanovsky esses organismos

apresentam um citoplasma azul paacutelido contendo nas proximidades da

33

extremidade posterior um nuacutecleo uacutenico avermelhado com um cariossoma

central que se cora mais profundamente Tangenciando e anterior ao nuacutecleo

encontra-se um corpo em forma de bastonete e com uma cor violeta escuro o

cinetoplasto que conteacutem o corpo parabasal e o blefaroplasto em forma de

pinta (Figura 2) (Jones et al 2003) A forma amastigota conteacutem duas

concentraccedilotildees de DNA no nuacutecleo e em uma mitococircndria modificada o

cinetoplasto (Palmer 1998)

No seu hospedeiro invertebrado ou em culturas os organismos

assumem formas que variam desde a forma amastigota ateacute a forma de pro-

mastigota essa uacuteltima eacute esguia e fusiforme medindo cerca de 14 a 20microm de

comprimento e 15 a 4microm de largura Esta forma tem motilidade por meio de

um flagelo que se origina no blefaroplasto e projeta-se desde o poacutelo anterior

do organismo O cinetoplasto se situa na extremidade anterior do corpo

(Figura 2) (Jones et al 2003)

O flebotomiacuteneo hospedeiro invertebrado ao sugar sangue de um

animal infectado se infecta ao ingerir histioacutecitos da derme ou monoacutecitos do

sangue contendo formas amastigotas de Leishmania em seu citoplasma

(Basano amp Camargo 2004) Em seu intestino meacutedio e glacircndulas salivares as

leishmacircnias sofrem modificaccedilotildees morfoloacutegicas e bioquiacutemicas se congregam

na vaacutelvula cardiacuteaca onde o intestino anterior projeta-se no intestino meacutedio e

se transformam em promastigotas (com flagelo livre) que aderem ao epiteacutelio

do tubo digestoacuterio onde se multiplicam amplamente por divisotildees binaacuterias A

populaccedilatildeo daiacute resultante migra para a parte anterior do tubo digestoacuterio do

inseto diferenciando-se para formas promastigotas infectantes por volta de 3-

4 dias com invasatildeo da faringe do inseto sendo tambeacutem as chamadas formas

de promastigotas metaciacuteclicas encontradas na buco-faringe destes insetos

Quando os parasitos atingem o proacute-ventriacuteculo do inseto causam uma

obstruccedilatildeo no tubo digestoacuterio dificultando a ingestatildeo de sangue e levando a

fecircmea entatildeo faminta a picar muitas vezes pessoas ou animais Tais insetos

ao sugarem sangue (injetando na picada da pele a sua saliva e a saliva

apresentando propriedade anticoagulante homesostaacutetica anesteacutesica e

vasodilatadora) injetam tambeacutem as formas infectantes da Leishmania a qual

34

caindo na circulaccedilatildeo sanguiacutenea deste novo hospedeiro (vertebrado) vai

desenvolver a doenccedila numa das formas cliacutenicas conhecidas (Figura 3)

(Palmer 1998) ou na maioria dos casos levar a infecccedilotildees assintomaacuteticas e

autoresolutivas (Fukutani 2014)

FIGURA 3 ndash Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral

Leishmaniasis (LV) CL Cutaneous Leishmaniasis (LT) Fonte TDR ndash

Wellcome Trust

35

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose

Os protozoaacuterios do gecircnero Leishmania apresentam diferentes

distribuiccedilotildees geograacuteficas e as enfermidades por eles causadas satildeo

relativamente distintas embora possa haver superposiccedilatildeo nos sinais e

cliacutenicos e lesotildees (Jones et al 2003) Cerca de 20 espeacutecies de Leishmania satildeo

patogecircnicas para o ser humano (Laurenti 2010) As leishmanioses se

manifestam de quatro formas diferentes a depender da espeacutecie de

Leishmania envolvida e do estado imunoloacutegico do hospedeiro i) visceral

tambeacutem conhecida como calazar a forma mais grave da doenccedila ii) cutacircnea

a mais comum iii) mucocutacircnea e iv) cutacircnea difusa A LV eacute uma doenccedila

crocircnica sistecircmica que afeta os oacutergatildeos como o fiacutegado e o baccedilo A LTA inclui

as formas cutacircnea cutacircnea difusa e mucocutacircnea caracterizadas pela

formaccedilatildeo de uacutelceras na pele (Brasil 2006 2010)

A LV eacute principalmente causada por L donovani (Jubb et al 1993) Nas

Ameacutericas Central e Sul Leishmania infantum (syn L chagasi) eacute a espeacutecie

envolvida na patogenia (Brasil 2006)

A patogenia das leishmanioses eacute fortemente influenciada por fatores

inerentes ao hospedeiro como suas caracteriacutesticas geneacuteticas e resposta

imunoloacutegica por fatores inerentes ao parasito como a virulecircncia da espeacutecie

de Leishmania infectante e por fatores inerentes ao vetor como sua

capacidade vetorial Como resultado dessa interaccedilatildeo entre as diferentes

espeacutecies do parasito do vetor e dos mecanismos da resposta imunoloacutegica do

hospedeiro vertebrado um espectro de manifestaccedilotildees cliacutenicas

histopatoloacutegicas e imunoloacutegicas eacute observado no homem (Laurenti 2010)

Imunologicamente apoacutes a inoculaccedilatildeo do parasito aqueles animais que seratildeo

resistentes agrave infecccedilatildeo promovem a ativaccedilatildeo de ceacutelulas TCD4+Th1 que

produziratildeo entre outras as citocinas interferon gama fator de necrose

tumoral alfa e interleucinas (IL) 2 e 12 Estas por sua vez ativaratildeo

macroacutefagos que faratildeo a destruiccedilatildeo das formas amastigotas intracelulares

(Pinelli et al 1995) Segundo os mesmos autores as ceacutelulas TCD8 citotoacutexicas

36

tambeacutem podem estar envolvidas na resistecircncia agrave doenccedila Jaacute nos animais que

manifestaratildeo sinais cliacutenicos da doenccedila haveraacute uma supressatildeo das ceacutelulas

TCD4+Th1 e ativaccedilatildeo das ceacutelulas TCD4+Th2 com produccedilatildeo de IL-4 IL-5 IL-

6 IL-10 IL-13 responsaacuteveis pela proliferaccedilatildeo de ceacutelulas B e

consequentemente produccedilatildeo de grande quantidade de anticorpos (Pinelli et al

1994 1999) Anticorpos estes natildeo protetores mas muitas vezes danosos

pois formaratildeo imunocomplexos que poderatildeo ser depositados nas membranas

basais de vaacuterios oacutergatildeos (Slappendel 1988 Martinez-Moreno et al 1995)

Usualmente a LV eacute observada como enfermidade debilitante crocircnica

com periacuteodos de febre perda de peso gradual anemia e leucopenia (Jones et

al 2003) Patologicamente o fiacutegado pode conter numerosos granulomas e eacute

simetricamente aumentado e marrom escuro O baccedilo eacute maior em duas a trecircs

vezes o seu tamanho normal simetricamente aumentado e marrom-escuro a

preto na sua superfiacutecie capsular Os linfonodos estatildeo moderadamente

aumentados e irregulares sem outras mudanccedilas significativas na cavidade

abdominal exceto os rins que podem estar mais escuros que o normal (Jubb

et al 1993) A medula oacutessea eacute uniformemente avermelhada e amolecida

(Jones et al 2003)

As lesotildees microscoacutepicas da LV caracterizam-se por uma infiltraccedilatildeo

maciccedila em vaacuterios sistemas do organismo de enormes macroacutefagos cujo

citoplasma estaacute repleto de leishmacircnias A arquitetura dos linfonodos e do

baccedilo pode estar completamente obscurecida pelas ceacutelulas fagocitaacuterias

(Jones et al 2003)

Os foliacuteculos esplecircnicos satildeo hiperplaacutesicos geralmente com hialinose

folicular Em casos avanccedilados haacute atrofia de nodos e baccedilo e as aacutereas dos

sinus podem estar difusamente ocupadas por grandes macroacutefagos altamente

carregados com organismos intracitoplasmaacuteticos e numerosas ceacutelulas

plasmaacuteticas As lesotildees na medula oacutessea podem ser focais e consistem de

grupos de macroacutefagos epitelioacuteides com organismos fagocitados As

alteraccedilotildees renais satildeo variaacuteveis e podem consistir em manchas intersticiais

com algum envolvimento parasitaacuterio (Jubb et al 1993) e por este motivo

utiliza-se os criteacuterios de classificaccedilatildeo da Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede que

37

inclui glomerulopatias com alteraccedilotildees miacutenimas glomeruloesclerose

segmentar focal glomerulonefrite membranoproliferativa glomerulonefrite

proliferativa mesangial glomerulonefrite membranosa glomerulonefrite

crescecircntica e glomerulonefrite crocircnica (Churg et al 1985)

A LT eacute causada por 18 espeacutecies de Leishmania patogecircnicas para os

seres humanos (Ready 2013) A LT causada por L tropica e L major ocorre

principalmente no sul da Europa e nos paiacuteses do norte da Aacutefrica que

circundam o Mediterracircneo (Jones et al 2003) Nas Ameacutericas assim

denominada LTA a infecccedilatildeo humana ocorre por 11 espeacutecies (Ready 2013)

agrupadas nos subgecircneros Leishmania e Viannia onde as trecircs espeacutecies mais

importantes do subgecircnero Leishmania satildeo L mexicana L amazonensis e L

venezuelensis e do subgecircnero Viannia satildeo L braziliensis L panamensis L

peruviana e L guyanensis

A infecccedilatildeo caracteriza-se por uacutelceras ou noacutedulos uacutenicos ou muacuteltiplos na

pele com lento desenvolvimento e que habitualmente cicatrizam-se

espontaneamente depois de um periacuteodo de meses (Jones et al 2003) As

lesotildees cutacircneas tomam forma de uma uacutelcera crocircnica que se desenvolve de

paacutepulas inflamatoacuterias no local da picada do inseto Linfoacutecitos e ceacutelulas

plasmaacuteticas margeiam a lesatildeo e os neutroacutefilos satildeo atraiacutedos para os debris

Quando a inflamaccedilatildeo se estende agrave borda epitelial a ulceraccedilatildeo ocorre Muitos

parasitos estatildeo no interior de histioacutecitos e alguns estatildeo livres no tecido (Jubb

et al 1993) As lesotildees de longa duraccedilatildeo estatildeo circunscritas por um tecido

conjuntivo fibroblaacutestico o que lhes daacute um aspecto de granuloma tiacutepico (Jones

et al 2003)

A leishmaniose mucocutacircnea uma das formas cliacutenicas da LTA ocorre

no Meacutexico e nas Ameacutericas Central e do Sul A infecccedilatildeo parece com a

cutacircnea mas aleacutem da pele com frequecircncia as uacutelceras crocircnicas com bordas

elevadas e fundo granuloso estatildeo localizadas nas junccedilotildees mucocutacircneas e

podem ocorrer nas cavidades oral e nasal (Jones et al 2003 Brasil 2010

Laurenti 2010)

38

No Brasil jaacute foram identificadas sete espeacutecies responsaacuteveis pela LTA

sendo seis do subgecircnero Viannia e uma do subgecircnero Leishmania As trecircs

espeacutecies mais encontradas satildeo L braziliensis L guyanensis e L

amazonensis As espeacutecies L lainsoni L naiffi L lindenbergi e L shawi foram

identificadas mais recentemente em estados das regiotildees Norte e Nordeste

(Brasil 2010)

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF

Entre 2001 e 2012 cerca de 3000 casos confirmados de LV e 50 mil de

LTA foram registrados na regiatildeo Centro-Oeste do Brasil (RCO)

(wwwsaudegovbr) onde haacute pelo menos 127 espeacutecies de flebotomiacuteneos

registradas (Almeida et al 2015) Essa regiatildeo eacute coberta em sua maioria pelo

bioma Cerrado onde haacute vasta expansatildeo agropecuaacuteria e ocupaccedilatildeo do solo

devido o crescimento urbano desordenado o que poderia favorecer a

ocorrecircncia das leishmanioses (Galati et al 1996 Carranza-Tamayo et al

2010) O Centro-Oeste se destaca atualmente por estar se tornando um poacutelo

de atraccedilatildeo de populaccedilatildeo das demais regiotildees brasileiras devido agrave expansatildeo

da fronteira agriacutecola (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Um estudo da distribuiccedilatildeo territorial da LTA no Brasil (Negratildeo amp Ferreira

2014) mostrou que o Centro-Oeste corresponde a segunda maior regiatildeo em

coeficiente de detecccedilatildeo da doenccedila de 2001 a 2010 (199 casos por 100000

habitantes) Em Goiaacutes o nuacutemero de municiacutepios com registro da doenccedila

passou de 71 (306) em 1994 para 118 (487) em 1999 o que

corresponde a um acreacutescimo de 67 (Costa 2005) O Estado do Mato Grosso

eacute detentor do terceiro maior coeficiente de detecccedilatildeo ndash 765 casos por 100000

habitantes O Distrito Federal (DF) registra a transmissatildeo da LTA de

ocorrecircncia ciacuteclica desde 1992 e a partir de entatildeo apresenta coeficientes de

detecccedilatildeo bem inferiores ao que eacute considerado como baixo segundo

paracircmetros do Ministeacuterio da Sauacutede (lt25 casos por 100000 habitantes)

39

(Carvalho et al 2010) Com a expansatildeo das fronteiras agriacutecolas nesta regiatildeo

principalmente nos estados de Mato Grosso e Goiaacutes estes Estados passaram

a ser importante rota de fixaccedilatildeo do homem

No DF haacute evidecircncia de transmissatildeo autoacutectone de LTA O nuacutemero de casos

notificados de LTA procedentes do DF nos anos de 2003 2004 e 2005 foi de

31 57 e 26 respectivamente (Sampaio et al 2009) O primeiro caso de LV

autoacutectone no DF ocorreu em 2005 e trecircs oacutebitos foram confirmados ateacute 2009

(Carranza-Tamayo et al 2010) Entre 2007 e 2012 24 casos humanos de LV

autoacutectone foram registrados (SESDF 2012) Em 2013 foram notificadas no

Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo ndash SINANNET 98 pessoas

com suspeita de LV e 47 foram confirmadas sendo dois casos autoacutectones

provenientes de Sobradinho e Lago Norte dos quais um veio a oacutebito

Segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das Leishmanioses no DF para

o ano de 2015 dos 142 casos de LV notificados 39 foram confirmados

destes trecircs autoacutectones e 36 importados Foram atendidos 39 pacientes nas

unidades hospitalares do DF desses quatro evoluiacuteram a oacutebito dos quais um

autoacutectone da RA da Fercal e trecircs importados De janeiro a marccedilo de 2016

foram notificados 28 casos de LV dentre eles um caso autoacutectone proveniente

do Lago Norte aleacutem de sete importados e dois em investigaccedilatildeo para a

definiccedilatildeo do Local Provaacutevel de Infecccedilatildeo (LPI) Dos dez casos confirmados em

2016 foram atendidos dez pacientes nas unidades hospitalares do DF

desses dois evoluiacuteram a oacutebito dos quais um importado do estado de Goiaacutes e

um encontra-se em investigaccedilatildeo para definir o LPI

Em relaccedilatildeo agrave LTA no DF segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das

Leishmanioses no DF para o ano de 2015 foram confirmados 50 casos

destes 35 satildeo residentes do DF 14 de outras Unidades Federadas e um da

Guiana Francesa Dos 50 casos confirmados 35 satildeo importados nove

indeterminados seis em investigaccedilatildeo e nenhum autoacutectone Natildeo foi registrado

nenhum oacutebito relacionado agrave LTA no periacuteodo Dados do Boletim

Epidemioloacutegico de janeiro a marccedilo de 2016 confirmam sete casos da doenccedila

mas nenhum caso autoacutectone foi registrado Aleacutem disso nos uacuteltimos anos tecircm

sido registrados casos de LV em catildees domeacutesticos nas regiotildees norte e sul do

40

DF que vem sofrendo com a urbanizaccedilatildeo descontrolada da sua aacuterea rural

(Carranza-Tamayo et al 2010 Cardoso et al 2015)

17 Vetores

Flebotomiacuteneos (ordem Diptera famiacutelia Psychodidae subfamiacutelia

Phlebotominae) satildeo insetos com ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica ocorrendo sob

as mais diversas condiccedilotildees climaacuteticas e de altitude nos ambientes silvestres

rurais e urbanos Atualmente conhece-se cerca de 1003 espeacutecies das quais

537 estatildeo presentes na regiatildeo Neotropical e Neoaacutertica destas 277 foram

registradas no Brasil representando 28 do total e 53 das que ocorrem na

Regiatildeo Neotropical (Shimabukuro et al 2017) Dezenove espeacutecies de

flebotomiacuteneos estatildeo incriminadas como vetoras de espeacutecies de Leishmania

(Basano amp Camargo 2004 Shimabukuro amp Galati 2010)

Flebotomiacuteneos satildeo insetos pequenos de cor parda (ldquomosquito-palhardquo) e

de corpo cerdoso que normalmente natildeo ultrapassam 05 cm de comprimento

tecircm pernas longas e delgadas e apresentam como caracteriacutestica o voo

saltitante Ao contraacuterio dos outros diacutepteros os flebotomiacuteneos mantecircm a

postura ereta das asas mesmo em repouso Apenas as fecircmeas fazem

repasto sanguiacuteneo por serem adaptadas com o aparelho bucal picador-

sugador (Killick-Kendrick1999 Basano amp Camargo 2004) A hematofagia eacute

indispensaacutevel ao desenvolvimento ovariano (Carrera 1991) Entre os

inuacutemeros nomes populares que variam segundo os paiacuteses e as suas regiotildees

encontram-se mosquito palha asa dura asa branca tatuquira birigui

cangalha cangalhinha ligeirinho peacutela-eacutegua arrupiado (Martins et al 1978)

As formas imaturas podem ser encontradas em seus criadouros em solo

uacutemido mas natildeo molhado e em detritos ricos em mateacuteria orgacircnica em

decomposiccedilatildeo (Brazil amp Brazil 2003)

41

As fecircmeas dos flebotomiacuteneos geralmente apresentam haacutebito noturno

procuram fazer repasto sanguiacuteneo ao entardecer e comeccedilo da noite quando

transmitem o parasito para o novo hospedeiro Jaacute os machos alimentam-se de

frutas seiva de plantas entre outros por breve periacuteodo (Killick-

Kendrick1999) Durante o dia os flebotomiacuteneos procuram abrigo ou no

interior das residecircncias ou em matas em local protegido dos ventos Satildeo

frequentemente encontrados em tocas de outros animais como tatu buracos

em paredes de construccedilotildees ocos de paus ou bambus ou similares Em matas

fechadas devido a pouca luz em seu interior podem ser vistos mesmo

durante o dia inclusive ativos a procura de possiacuteveis animais ou o proacuteprio

homem para ser sugado (Basano amp Camargo 2004)

Killick‐Kendrick (1990) propotildeem quatro criteacuterios que devem ser

observados antes de se incriminar uma espeacutecie como vetora de zoonoses

satildeo eles alimentar-se em humanos e no reservatoacuterio animal manter os

parasitos apoacutes a ingestatildeo exibir parasitos indistinguiacuteveis daqueles isolados

de pacientes e transmitir o parasito pela picada Adicionalmente Ready (2013)

propotildee o criteacuterio relacionado a influecircncia da abundacircncia do vetor na

incidecircncia da leishmaniose comprovada por modelos matemaacuteticos

No Brasil as principais espeacutecies envolvidas na transmissatildeo da LTA satildeo

Bichromomyia flaviscutellata Nyssomyia whitmani Ny umbratilis Ny neivai

Psychodopygus wellcomei e Migonemyia migonei (Barbosa et al 2008 Ready

2013 Diniz et al 2014) Estas espeacutecies de flebotomiacuteneos foram definidas

como potenciais vetores de acordo com o Manual de Vigilacircncia da

Leishmaniose Tegumentar Americana do Ministeacuterio da Sauacutede por atenderem

a alguns dos criteacuterios que atribuem a uma espeacutecie a capacidade vetorial

segundo Killick-Kendrick amp Ward (1981) Killick-Kendrick (1990) e Ready

(2013) Cabe ressaltar que o papel vetorial de cada uma dessas espeacutecies

dependeraacute da espeacutecie de Leishmania presente no intestino da sua

capacidade de se infectar e transmitir o parasito a um novo hospedeiro (Brasil

2010 Pita-Pereira et al 2009 2011)

O principal vetor da LV nas Ameacutericas eacute o flebotomiacuteneo Lutzomyia

longipalpis espeacutecie bem adaptada ao ambiente peridomeacutestico e com ampla

42

distribuiccedilatildeo geograacutefica (Brasil 2010) poreacutem outros flebotomiacuteneos tambeacutem

podem estar participando do ciclo de LV principalmente nas aacutereas onde Lu

longipalpis eacute ausente (de Souza et al 2003 de Carvalho et al 2010)

Lutzomyia cruzi parece participar como vetor nos municiacutepios de Corumbaacute e

LadaacuterioMS na fronteira entre Brasil e Boliacutevia (Dos Santos et al 1998) e

Pintomyia (Pifanomyia) evansi eacute tambeacutem um importante vetor na Colocircmbia

(Travi et al 1990 Oviedo amp Moreno 1995 Montoya-Lerma amp Lane 1996 Travi

et al 1996) e Venezuela (Pifano 1964 Feliciangeli et al 1998)

43

18 Flebotomiacuteneos no DF

Atualmente conhece-se 29 espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF (Quadro1)

QUADRO 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte

Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al

2015 Galati 2015

Espeacutecies

Brumptomyia avellari (Costa Lima 1932)

Brumptomyia pintoi (Costa Lima 1932)

Micropygomyia longipennis (Barretto 1946)

Micropygomyia acanthopharynx (Martins Falcatildeo amp Silva 1962)

Micropygomyia quinquefer (Dyar 1929)

Evandromyia bacula (Martins Falcatildeo amp Silva 1965)

Evandromyia evandroi (Costa Lima amp Antunes 1936)

Evandromyia corumbaensis (Galati Nunes Oshiro amp Rego 1989)

Evandromyia teratodes (Martins Falcatildeo amp Silva 1964)

Evandromyia sallesi (Galvatildeo amp Coutinho 1939)

Evandromyia saulensis (Floch amp Abonnenc 1944)

Evandromyia lenti (Mangabeira 1938)

Pintomyia christenseni (Young amp Duncan 1994)

Pintomyia kuscheli (Le Pont Martinez Torrez-Espejo amp Dujardin 1998)

Pintomyia monticola (Costa Lima 1932)

Pintomyia fischeri (Pinto 1926)

Sciopemyia servulolimai (Damasceno amp Causey 1945)

Continua

44

Sciopemyia sordellii (Shannon amp Del Ponte 1927)

Lutzomyia longipalpis (Lutz amp Neiva 1912)

Lutzomyia ischnacantha Martins Souza amp Falcatildeo 1962

Psathyromyia lutziana (Costa Lima 1932)

Psathyromyia runoides (Fairchild amp Hertig 1953)

Psathyromyia brasiliensis (Costa Lima 1932)

Psathyromyia aragaoi (Costa Lima 1932)

Psathyromyia shannoni (Dyar 1929)

Nyssomyia whitmani (Antunes amp Coutinho 1939)

Nyssomyia neivai (Pinto 1926)

Nyssomyia intermedia (Lutz amp Neiva 1912)

Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira 1942)

No trabalho de Carvalho et al (2010) foram coletados mais de 17 mil

flebotomiacuteneos de 27 espeacutecies em diversos ambientes como nas diferentes

fitofisionomias do Cerrado abrigo de animais e no intradomiciacutelo Os autores

identificaram mais duas espeacutecies consideradas vetoras Ny neivai e Ps davisi

que auxiliaram no mapeamento das aacutereas de risco agrave transmissatildeo de

Leishmania

Ferreira et al (2014) analisaram a ocorrecircncia de flebotomiacuteneos em matas

de galeria do Distrito Federal (DF) nas estaccedilotildees seca e chuvosa Os autores

natildeo capturaram flebotomiacuteneos em novembro (estaccedilatildeo chuvosa) e em maio

(estaccedilatildeo seca) foram capturados 250 exemplares identificados como

Psathyromyia runoides (799) Pintomyia monticola (97) Mi quinquefer

(37) Pa shannoni (3) Bi flaviscutellata (07) Brumptomyia sp (07)

Pi kuscheli (07) Pa lutziana (Costa Lima) (07) e Sciopemyia sordellii

(07) De acordo com os resultados os autores relataram que em matas de

galeria do DF haveria maior ocorrecircncia de flebotomiacuteneos na estaccedilatildeo seca no

Continuaccedilatildeo QUADRO 1

45

niacutevel do solo e em aacutereas preservadas As espeacutecies Pa runoides Pi kuscheli

e Mi quinquefer foram registradas pela primeira vez no DF

Informaccedilotildees relevantes relacionadas agrave riqueza de espeacutecies abundacircncia

ocorrecircncia em distintas eacutepocas do ano somam dados que podem ser usados

para a melhor compreensatildeo da epidemiologia das doenccedilas e conhecimento

do comportamento dos flebotomiacuteneos nas matas de galeria proacuteximas agraves aacutereas

urbanas no DF

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp

Segundo Ashford (1996) o reservatoacuterio de uma infecccedilatildeo eacute definido como

o sistema ecoloacutegico no qual um agente infeccioso sobrevive

persistentemente Para as infecccedilotildees de transmissatildeo vetorial o sistema

compreenderia um ou mais vetores e um ou mais mamiacuteferos hospedeiros

que viveriam sob condiccedilotildees de densidade populacional proximidade espacial

entre outros fatores que permitiriam a transferecircncia continuada do agente

entre eles O autor designa o hospedeiro mamiacutefero responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo em longo prazo do agente infeccioso de hospedeiro reservatoacuterio

e define como zoonose uma doenccedila causada por parasitos cujos hospedeiros

satildeo o homem e outros mamiacuteferos

Entretanto a definiccedilatildeo de reservatoacuterio tem sofrido mudanccedilas significativas

no uacuteltimo seacuteculo fazendo-se necessaacuterio o estudo das zoonoses a partir de

perspectivas mais abrangentes Atualmente aceita-se que um reservatoacuterio

pode ser uma espeacutecie ou um complexo delas responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo

do parasito na natureza Dentro desse sistema-reservatoacuterio cada hospedeiro

desenvolve papeis diferentes na transmissatildeo em um determinado tempo e

espaccedilo isso eacute considera-se que ldquohospedeiros de manutenccedilatildeordquo sejam os

mamiacuteferos que podem ser infectados e mantecircm a infecccedilatildeo e que

ldquohospedeiros amplificadoresrdquo sejam os mamiacuteferos que aleacutem de manterem a

46

infecccedilatildeo desempenham uma caracteriacutestica que favoreccedila a transmissatildeo como

a presenccedila de mais parasitos no sangue e pele por periacuteodos maiores (Roque

amp Jansen 2014) Um estudo de reservatoacuterios silvestres e sinantroacutepicos de

espeacutecies de Leishmania nas Ameacutericas distinguiu as espeacutecies de mamiacuteferos

silvestres e sinantroacutepicos encontrados infectados com Leishmania spp

classificando-os em hospedeiros e potenciais reservatoacuterios (Roque amp

Jansen 2014) de acordo com a capacidade de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo ou de

transmissibilidade dos parasitos aos vetores por meio de xenodiagnoacutestico

positivo ou culturas de pele ou sangue

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de hospedeiros e

reservatoacuterios

Desde o seacuteculo passado a comunidade cientiacutefica tem demonstrado que

diferentes e numerosos mamiacuteferos silvestres podem se tornar infectados com

espeacutecies de Leishmania aleacutem das espeacutecies domeacutesticas e sinantroacutepicas

(animais natildeo domesticados que habitualmente compartilham e aproveitam-se

do ecoacutetopo humano) (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006 Roque amp Jansen

2014) Entretanto o foco deve ser mudado para a identificaccedilatildeo de espeacutecies

que podem servir como fontes de infecccedilatildeo para vetores e amplificaccedilatildeo de

focos enzooacuteticos temporalmente e regionalmente especiacuteficos constituindo

um risco para a transmissatildeo humana Esta mudanccedila depende da melhor

compreensatildeo de sistemas reservatoacuterios e do papel desempenhado por cada

espeacutecie de mamiacutefero na manutenccedilatildeo destes parasitos na natureza (Roque amp

Jansen 2014) Diversas espeacutecies das ordens Didelphimorphia Pilosa

Cingulata Rodentia Carnivora Primata e Chiroptera foram recentemente

classificadas como hospedeiros ou potenciais reservatoacuterios por Roque amp

Jansen (2014)

47

Os catildees domeacutesticos (Canis familiaris) satildeo considerados eficientes

reservatoacuterios de L infantum devido agrave alta susceptibilidade agrave infecccedilatildeo ao

frequentemente elevado parasitismo nesta espeacutecie e por causa da sua iacutentima

relaccedilatildeo com o homem tanto nas zonas urbanas quanto rurais (Dantas-Torres

amp Brandatildeo-Filho 2006) Os catildees como importantes reservatoacuterios domeacutesticos

de L infantum satildeo responsabilizados pela manutenccedilatildeo das endemias nos

grandes centros urbanos (Silva et al 2001 Medeiros et al 2005) Uma

consideraacutevel gama dos catildees infectados por espeacutecies de Leishmania satildeo

assintomaacuteticos seja por um determinado periacuteodo de tempo que pode chegar

a anos ateacute nunca apresentar sinais cliacutenicos ou sintomas da doenccedila Poreacutem

os catildees natildeo satildeo as uacutenicas fontes de infecccedilatildeo em todos os focos de LV no

Brasil (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Tambeacutem existe uma forte

tendecircncia para que os catildees assumam o papel de principais reservatoacuterios

domeacutesticos para L braziliensis o agente etioloacutegico da LTA mais disseminado

(Aguilar et al 1989 Madeira et al 2003 2006 Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho

2006 Castro et al 2007 Quaresma et al 2011) Entre os estudos que relatam

casos de infecccedilatildeo mista por L infantum e L braziliensis encontra-se os

trabalhos de Madeira et al (2006) e Quaresma et al (2011)

Aleacutem dos carniacutevoros descritos por Roque amp Jansen (2014) Cerdocyon

thous popularmente conhecido como cachorro do mato ou guaraxaim jaacute era

suspeito de desempenhar o papel de hospedeiro reservatoacuterio primaacuterio de L

infantum no Norte do Brasil (Lainson et al 1969) Os mesmos autores

descreveram a eficiecircncia dessa espeacutecie como fonte de infecccedilatildeo em 1990

Este caniacutedeo tambeacutem tem sido incriminado como hospedeiro reservatoacuterio

primaacuterio na Venezuela (Lainson et al 1987) Figueiredo et al (2008) relataram

o primeiro caso de L infantum em cachorro-vinagre (Speothos venaticus) no

Brasil no Estado do Mato Grosso Os autores chamam a atenccedilatildeo para os

controles parasitoloacutegicos em animais silvestres mantidos em cativeiros

principalmente quando estes fazem intercacircmbios entre zooloacutegicos brasileiros

Tambeacutem no Mato Grosso Souza et al (2010) relataram a infecccedilatildeo de

caniacutedeos silvestres por L infantum mantidos em cativeiro Foram coletadas

amostras de pele medula oacutessea e linfonodos de seis raposas (Cerdocyon

thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus) para detecccedilatildeo e

48

caracterizaccedilatildeo de Leishmania sp pela teacutecnica de PCR-RFLP Todos os

animais pesquisados apresentaram-se positivos para L infantum O estudo

destaca a importacircncia de monitoramento adequado dos animais e do maior

controle desta enfermidade jaacute que os animais estudados estavam em

ambientes de recreaccedilatildeo puacuteblica

De maneira geral as taxas de infecccedilatildeo em caniacutedeos natildeo domeacutesticos satildeo

baixas mas pode ser alta agraves vezes como observado nas raposas da

Ameacuterica do Sul (Lainson et al 1987) Poreacutem caniacutedeos silvestres

normalmente natildeo vivem perto de habitaccedilotildees humanas e logo eles teriam um

papel secundaacuterio na importacircncia da epidemiologia da LV enzooacutetica (Dantas-

Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Millaacuten et al (2016) encontraram Leishmania

sp em 375 das 32 raposas cinzas (Pseudalopex griseus) capturadas na

Patagocircnia Argentina Os achados dos autores tecircm elevada significacircncia pela

extensatildeo da aacuterea de distribuiccedilatildeo das leishmanioses na Ameacuterica do Sul por

suportar a existecircncia de um ciclo silvestre na ausecircncia de catildees e ainda na

transmissatildeo indicando que ou a distribuiccedilatildeo de flebotomiacuteneos eacute mais ampla

do que se pensava ou que a transmissatildeo de Leishmania por outros

artroacutepodes poderia ser possiacutevel

De acordo com Medeiros et al (2005) marsupiais didelfiacutedeos estatildeo entre

os principais reservatoacuterios rurais da doenccedila Didelphis albiventris foi o primeiro

mamiacutefero silvestre natildeo canino a ser descrito como hospedeiro de L infantum

no Novo Mundo (Sherlock et al 1984) Em aacutereas endecircmicas do Brasil e na

Colocircmbia espeacutecies de Didelphis tecircm frequentemente abrigado L infantum

(Corredor et al 1989 Travi et al 1994 Sherlock 1996 Cabrera et al 2003

Humberg et al 2012 Carreira et al 2012) e a presenccedila de D albiventris

poderia ser um fator associado a ocorrecircncia de infecccedilotildees assintomaacuteticas por

Leishmania na periferia de centros urbanos (Carranza-Tamayo et al 2016)

Outros marsupiais como Didelphis marsupialis Philander opossum e

Metachirus nudicaudatus jaacute foram detectados com Leishmania amazonensis

(Lainson et al 1981) mostrando que esses mamiacuteferos desempenham papel

importante na manutenccedilatildeo de Leishmania na natureza Em Barra de

Guaratiba estado do Rio de Janeiro a distacircncia das casas para as bordas

49

florestais sua altitude e a presenccedila de D marsupialis nos quintais das casas

foram considerados fatores preditores para infecccedilatildeo por L infantum em catildees

(Cabrera et al 2003)

Roedores sinantroacutepicos da famiacutelia Muridae como o rato de telhado (Rattus

rattus) e o camundongo (Mus musculus) compotildeem a lista de espeacutecies de

potenciais reservatoacuterios ou hospedeiros conforme a espeacutecie de Leishmania

encontrada e o local (Roque amp Jansen 2014) Rattus rattus jaacute foi encontrado

naturalmente infectado por L infantum (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

De Lima et al (2002) isolaram Leishmania braziliensis de R rattus na

Venezuela e Brandatildeo-Filho (2003) encontrou L braziliensis por meio de

eletroforese enzimaacutetica multilocus nesse mesmo hospedeiro Esse processo

de domiciliaccedilatildeo facilita a ligaccedilatildeo entre os ambientes peridomeacutestico e o

silvestre (Lainson et al1969) podendo estabelecer novos padrotildees

epidemioloacutegicos de LV particularmente no ciclo urbano de transmissatildeo

(Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

Helhazar et al (2013) reportaram pela primeira vez em Portugal a

infecccedilatildeo natural por L infantum em M musculus e em Rattus norvegicus

(ratazana) sugerindo que estes animais provavelmente desempenham papeacuteis

como potenciais reservatoacuterios no ciclo bioloacutegico do parasito Os autores

relatam que M musculus e R norvegicus satildeo animais que se proliferam muito

raacutepido e tecircm uma expectativa de vida de 12 e 24 meses respectivamente o

que poderia manter o parasito disponiacutevel por pelo menos um ano mesmo

durante a baixa atividade dos flebotomiacuteneos em determinadas estaccedilotildees do

ano Na Venezuela De Lima e colaboradores (2002) isolaram L braziliensis

em Sigmodon hispidus (rato do algodatildeo) aleacutem do R rattus

Mais de 200 espeacutecies de roedores estatildeo distribuiacutedas em haacutebitats semi-

aquaacuteticos terrestres e semi-fossoriais no Brasil (Bonvicino et al 2008) Esta

caracteriacutestica eacute provavelmente a principal razatildeo que explica a sua exposiccedilatildeo

aos diferentes ciclos de transmissatildeo de vaacuterias espeacutecies de Leishmania no

ambiente silvestre (Roque amp Jansen 2014a)

50

No Brasil Paacutedua et al (2011) relataram infecccedilatildeo natural por L braziliensis

no roedor sinantroacutepico M musculus e no roedor silvestre Necromys lasiurus a

partir de anaacutelises moleculares (PCR-RFLP) de medula oacutessea femoral e

fragmentos de pele Freitas et al (2012) no Estado de Mato Grosso uma

regiatildeo endecircmica para leishmaniose cutacircnea relataram infecccedilatildeo natural nas

mesmas espeacutecies e utilizando a mesma metodologia que Paacutedua et al (2011)

mostraram que a presenccedila de Leishmania em roedores sinantroacutepicos pode

ser uma ameaccedila aos humanos devido a cohabitaccedilatildeo de domiciacutelios humanos

nessa aacuterea de estudo

No Brasil existem poucos estudos de infecccedilatildeo natural de Leishmania em

roedores caviomorfos e cerca de 90 espeacutecimes foram analisados (Lainson et

al 1981 Quaresma et al 2011) Estudos experimentais apontaram duas

espeacutecies de caviomorfos como reservatoacuterios potenciais para Leishmania

Thrichomys laurentius infectado por L infantum e L braziliensis (Roque et al

2010) e Proechimys semispinosus infectados com L infantum (Travi et al

2002) Lainson amp Shaw (1968) encontraram o parasito L amazonensis no

roedor Proechimys guyannensis no norte do estado do Paraacute (Lainson amp Shaw

1972) Proechimys cuvieri foi descrito como hospedeiro de Leishmania spp

na Guiana Francesa por Dedet et al (1985)

Um estudo de Brandatildeo-Filho et al (1994) em pequenos mamiacuteferos

provaacuteveis reservatoacuterios de L braziliensis em Amaraji Pernambuco encontrou

amostras de esfregaccedilos hepaacuteticos e esplecircnicos com amastigotas em

Nectomys squamipes N lasiurus e tambeacutem em R rattus Apoacutes quase 10

anos um estudo realizado na mesma localidade de Pernambuco identificou L

braziliensis em R rattus e N lasiurus (Brandatildeo-Filho et al 2003)

Forattini et al (1972 1973) isolaram Leishmania de Akodon arviculoides

Oryzomys nigripes e Oryzomys capito laticeps Telleria et al (1999)

identificaram Leishmania amazonensis em Akodon spp por PCR kDNA

Exames histoloacutegicos de lesotildees nos roedores Oryzomys spp Nectomys

spinosus amoenus e Nectomys rattus revelaram amastigotas compatiacuteveis com

Leishmania (Lainson amp Shaw 1970) Leishmania amazonensis foi isolada de

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 A Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO 2016

27

Figura 2 Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte Rey 2002ndash CD room (Modificado)

32

Figura 3 Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral Leishmaniases (LV) CL Cutaneous Leishmaniases (LT) Fonte TDR ndash Wellcome Trust

34

Figura 4 Ilustraccedilatildeo das subunidades SSU e LSU intercaladas por espaccediladores de conservaccedilatildeo intermediaacuteria ITS (ITS1 e ITS2 espaccediladores internos transcritos) e ETS (espaccedilador externo transcrito) flanqueados pelo espaccedilador intergenocircmico (IGS) Fonte Vilgalyslab Duke University

63

Figura 5 Matas de Galeria amostradas em Brasiacutelia A Parque Nacional de Brasiacutelia B Fazenda Aacutegua Limpa C Jardim Botacircnico de Brasiacutelia D Reserva Bioloacutegica da Contagem

68

Figura 6 Localizaccedilatildeo geograacutefica das quatro aacutereas de estudo no Distrito Federal A PNB Parque Nacional de Brasiacutelia (PA PB) B REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem (RA RB) C FAL Fazenda Aacutegua Limpa da UNB (BA BB) D JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia (JA JB) Fonte Google Earth 2014

69

Figura 7 Armadilhas utilizadas nas amostragens de flebotomiacuteneos A armadilha do tipo HP B Armadilha do tipo Shannon

70

Figura 8 Armadilhas utilizadas para amostragens de mamiacuteferos A Armadilha tipo Tomahawk localizada no solo B Armadilha tipo Tomahawk com pequeno mamiacutefero capturado C Armadilha tipo Sherman localizada em estrato arboacutereo

72

Figura 9 Roedor marcado por um brinco de identificaccedilatildeo (observar a ponta da pinccedila)

73

Figura10 Base de trabalho de campo 74

Figura 11 Procedimentos de pesagem (A) e exame cliacutenico geral em roedor e marsupial (B)

75

Figura 12 Roedor apoacutes coleta de tecido A seta aponta o local da coleta da ponta de orelha

76

Capiacutetulo 1

Figura 1 Porcentagem de armadilhas positivas para flebotomiacuteneos em quatro matas de galeria no Distrito Federal em maio e setembro de 2014 FAL = Fazenda Aacutegua Limpa REBIO = Reserva Bioloacutegica da Contagem PNB = Parque Nacional de Brasiacutelia JBB = Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

86

Figura 2 A) Genitaacutelia de macho de Brumptomyia brumpti (10x) B) genitaacutelia masculina de Brumptomyia guimaraesi (10x) C) toacuterax do macho de Brumptomyia guimaraesi (10X) (Montados em baacutelsamo de canadaacute)

89

Figura 3 D) Cabeccedila de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (10x) E) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Micropygomyia ferreirana (40x) F) espermateca de Micropygomyia ferreirana (40x) (Montados em baacutelsamo do Canadaacute

90

Figura 4 G) Faringe e cibaacuterio de fecircmea de Evandromyia bourrouli (40x) H) espermateca de Evandromyia bourrouli (40X) I) genitaacutelia masculina de Evandromyia bourrouli (40X)

91

Figura 5 J) Ascoacuteide em flagelocircmeros de Psathyromyia pradobarrientosi (40X) K) Genitaacutelia masculina de Psathyromyia pradobarrientosi (10X) L) porccedilatildeo final do ducto ejaculatoacuterio de Psathyromyia pradobarrientosi (40X)

92

Capiacutetulo 2

Figura 1 Fluxograma explicativo dos meacutetodos utilizados para a obtenccedilatildeo e processamento dos flebotomiacuteneos

102

Figura 2 Amplificaccedilatildeo do gene Cacophany em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-R22 Amostras de flebotomiacuteneos

110

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de SSUrRNA em gel de agarose visualizado por luz ultra-violeta Peso Molecular (MW) 100bp R15-

R28 Amostras de flebotomiacuteneos Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

111

Capiacutetulo 3

Figura 1 Roedores capturados no presente trabalho A Oecomys bicolor B Calomys expulsus C Hylaeamys magacephalus D Rhipidomys macrurus E Nectomys rattus F Necromys lasiurus Fonte A B C D e F - Bonvicino (2008) E ndash Arquivo pessoal

125

Figura 2 Marsupiais capturados no presente trabalho A Didelphis albiventris B Gracilinanus agilis C e D Monodelphis americana Fonte arquivo pessoal

125

Figura 3 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 4 13 1617 20 21 25 82 e 86 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 4 Amplificaccedilatildeo de ITS-1 em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 48 55 70 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

134

Figura 5 Amplificaccedilatildeo de SSU rRNA em gel de agarose visualizado por luz ultravioleta Peso molecular (MW) 100bp Nuacutemeros correspondem agraves amostras de mamiacuteferos Amostras positivas 02 11 13 16 17 20 25 41 58 e 90 Controles positivos Lb (L braziliensis) e Lc (L infantum)

135

LISTA DE QUADROS E TABELAS

Quadro 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al 2015 Galati 2015

43

Capiacutetulo 1

Tabela 1 Nuacutemeros do cataacutelogo institucional dos voucheres de

espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados no presente estudo

84

Tabela 2 Espeacutecies de flebotomiacuteneos capturados nas quatro aacutereas de estudo do Distrito Federal em maio e setembro de 2014 Novos registros para o Distrito Federal Novo registro para o cerrado Riqueza total de espeacutecies nas matas de galeria 16 espeacutecies

85

Tabela 3

Lista atualizada de espeacutecies de flebotomiacuteneos no Distrito Federal Brasil Novo registro para o Brasil Riqueza total 35 espeacutecies

87

Capiacutetulo 2

Tabela 1 Identificaccedilatildeo molecular dos ldquopoolsrdquo de flebotomiacuteneos fecircmeas

submetidos aos exames moleculares por aacuterea espeacutecie mecircs de coleta e nuacutemero de indiviacuteduos em cada ldquopoolrdquo

107

Capiacutetulo 3

Tabela 1 Espeacutecies de roedores e marsupiais didelfiacutedeos coletadas

nos meses de maio e setembro de 2014 na FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal Brasil

124

Tabela 2

Distribuiccedilatildeo das espeacutecies de mamiacuteferos capturados nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014

126

Tabela 3 Dados brutos da morfometria corporal sexo e idade das espeacutecies de mamiacuteferos capturadas nas aacutereas de estudo nos meses de maio e setembro de 2014 As linhas realccediladas em amarelo correspondem aos animais positivos nos testes moleculares

127

Tabela 4

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU de Tripanossomatiacutedeos e ITS1 de Leishmania spp em animais da FAL REBIO PNB e JBB Distrito Federal

133

Tabela 5

Nuacutemero de amostras de orelhas positivas para os marcadores moleculares SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos e ITS-1 de Leishmania spp em animais da FAL PNB e JBB Distrito Federal

136

ABREVIATURAS E SIGLAS

APA Aacutereas de Proteccedilatildeo Ambiental

APPs Aacutereas de Preservaccedilatildeo Permanente

CEUA Comitecirc de Eacutetica de Uso Animal

DF Distrito Federal

DNA Aacutecido Desoxirribonucleacuteico

ELISA Ensaio de Imunoabsorccedilatildeo Enzimaacutetica

ETS Espaccedilador Externo Transcrito

FAL Fazenda Aacutegua Limpa

GDF Governo do Distrito Federal

IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos

Naturais Renovaacuteveis

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e Estatiacutestica

IBRAM Instituto Brasiacutelia Ambiental

ICMBio Instituto Chico Medes de Biodiversidade

IGS Espaccediladores Intergecircnicos

IGS Espaccedilador Intergenocircmico

IM Intramuscular

ITS Internal Transcribed Spacer-

Regiatildeo Espaccediladora Transcrita Interna

ITS-1 Espaccediladores Internos Transcritos 1

ITS-2 Espaccediladores Internos Transcritos 2

JBB Jardim Botacircnico de Brasiacutelia

KOH Hidroacutexido de Potaacutessio

LC Leishmaniose Cutacircnea

LMC Leishmaniose Muco-cutacircnea

LSU Subunidade Maior

LTA Leishmaniose Tegumentar Americana

LV Leishmaniose Visceral

mgKg Miligramas por quilo

PBS Phosphate-buffered saline - Tampatildeo Fosfato Salino

PCR Polymerase Chain Reaction -Reaccedilatildeo da Polimerase em

Cadeia

PCR-RFLP Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restriccedilatildeo

PNB Parque Nacional de Brasiacutelia

RBC-DF Reserva da Biosfera do Cerrado no DF

RCO Regiatildeo Centro-Oeste

REBIO Reserva Bioloacutegica da Contagem

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia Indireta

RNA Aacutecido Ribonucleacuteico

RNAr RNA ribossocircmico

SINAN-NET Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo

SSU Subunidade Menor

UC Unidades de Conservaccedilatildeo

UNB Universidade de Brasiacutelia

OMSWHO Organizaccedilatildeo Mundial de SauacutedeWorld Health Organization

OPAS Organizaccedilatildeo Pan-Americana da Sauacutede

CAPES Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento de Pessoal de Niacutevel

Superior

dNTPs

Deoxyribonucleotide Triphosphates ndash Desoxirribonucleotiacutedeo

Trifosfato)

Taq Thermus aquaticus

pb pares de bases

FINANCIAMENTO

O estudo foi financiado pela CAPES (processo ndeg127611 edital Parasitologia

Baacutesica) e pelo Programa de Poacutes-graduaccedilatildeo em Medicina Tropical da

Universidade de Brasiacutelia

Sumaacuterio

1 INTRODUCcedilAtildeO

23

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas 23

12 Definiccedilatildeo 25

13 Epidemiologia 26

14 Agente Etioloacutegico 31

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose 35

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF 38

17 Vetores

40

18 Flebotomiacuteneos no DF 43

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp 45

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de Hospedeiros e Reservatoacuterios

46

111 A questatildeo ambiental do Distrito Federal 52

112 A fragmentaccedilatildeo florestal e as leishmanioses 55

113 Estrateacutegias de controle das leishmanioses 57

114 Diagnoacutestico parasitoloacutegico e imunoloacutegico das leishmanioses 58

115 Diagnoacutestico molecular das leishmanioses 61

116 Diagnoacutestico molecular da infecccedilatildeo por tripanossomatiacutedeos utilizando genes ribossocircmicos

62

2 JUSTIFICATIVA 64

3 OBJETIVOS 66

4 MATERIAL E MEacuteTODOS 67

41 Aacutereas de estudo 67

42 Amostragem de flebotomiacuteneos 70

43 Montagem dissecccedilatildeo e identificaccedilatildeo dos flebotomiacuteneos 71

44 Captura dos pequenos mamiacuteferos 71

45 Contenccedilatildeo e marcaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos 73

46 Coleta de material bioloacutegico 75

5 Resultados 77

51 Capiacutetulo 1 - Lista atualizada de flebotomiacuteneos (Diptera Psychodidae Phlebotominae) do Distrito Federal Brasil

77

RESUMO 78

Introduccedilatildeo 79

Material e Meacutetodos 80

Aacutereas de Estudo 80

Amostragem dos flebotomiacuteneos 81

Anaacutelise estatiacutestica 82

Resultados 82

Aspectos morfoloacutegicos para novos registros

88

Discussatildeo 93

52 Capiacutetulo 2 - Avaliaccedilatildeo de infecccedilatildeo natural por Leishmania spp em flebotomiacuteneos de matas de galeria do Distrito Federal Brasil

98

RESUMO 98

1 Introduccedilatildeo 100

2 Material e Meacutetodos 101

21 Amostragem dissecccedilatildeo e montagem dos flebotomiacuteneos 102

22 Extraccedilatildeo de DNA 103

23 PCR dirigida ao gene Cacophany 103

24 PCR dirigida ao gene SSU rDNA de tripanossomatiacutedeos 104

25 PCR dirigida ao ITS-I do rDNA 105

3 Resultados 106

4 Discussatildeo 111

53 Capiacutetulo 3 Ocorrecircncia de pequenos mamiacuteferos infectados por Leishmania spp em Matas de Galeria do Distrito Federal Brasil

115

RESUMO 115

1 Introduccedilatildeo 116

2 Material e meacutetodos 118

21 Aacuterea de estudo amostragem e identificaccedilatildeo dos pequenos mamiacuteferos

118

22 Amostras bioloacutegicas e extraccedilatildeo do DNA 119

23 PCR dirigida ao gene SSU rRNA de tripanossomatiacutedeos 120

24 PCR dirigida ao ITS- 1 do rRNA 121

25 Aspectos eacuteticos 122

26 Anaacutelise de dados 122

3 Resultados 123

4 Discussatildeo 137

41 Composiccedilatildeo da comunidade de mamiacuteferos no momento das coletas

137

42 Infecccedilatildeo natural por Leishmania spp nos pequenos mamiacuteferos das Matas de Galeria estudadas no Distrito Federal Brasil

141

6 Consideraccedilotildees Finais 148

7 Conclusotildees 151

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS 152

9 ANEXOS 190

RESUMO

O conhecimento relacionado agrave transmissatildeo enzooacutetica de espeacutecies de

Leishmania no Distrito Federal ainda eacute escasso e a participaccedilatildeo de

flebotomiacuteneos e mamiacuteferos silvestres no ciclo de transmissatildeo desses

protozoaacuterios eacute objeto do presente estudo As aacutereas estudadas foram as matas

de galeria da Fazenda Aacutegua Limpa da Universidade de Brasiacutelia Reserva

Bioloacutegica da Contagem Parque Nacional de Brasiacutelia e Jardim Botacircnico de

Brasiacutelia em maio e setembro de 2014 O Capiacutetulo 1 traz a atualizaccedilatildeo da lista de

espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF Com esforccedilo de captura de 1280 armadilhas

HP e 16 armadilhas do tipo Shannon foram capturados 1209 flebotomiacuteneos

pertencentes a 16 espeacutecies Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espeacutecie

mais capturada Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia guimaraesi Br

brumpti Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas

pela primeira vez no DF ampliando a distribuiccedilatildeo geograacutefica das mesmas e

elevando para 35 o nuacutemero de espeacutecies registradas nessa unidade da

federaccedilatildeo O Capiacutetulo 2 analisou a infecccedilatildeo natural dos flebotomiacuteneos

capturados por Leishmania DNA foi extraiacutedo de 569 fecircmeas agrupadas em 87

ldquopoolsrdquo A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada agrave

amplificaccedilatildeo do gene cacophony da regiatildeo IVS6 A detecccedilatildeo dos

tripanossomatiacutedeos foi feita pela amplificaccedilatildeo das regiotildees SSU rRNA e ITS-1

Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp entretanto os

resultados do presente estudo natildeo implicam na inexistecircncia de vetores

infectados nestas matas de galeria O Capiacutetulo 3 analisou a ocorrecircncia e infecccedilatildeo

em pequenos mamiacuteferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp nas

mesmas aacutereas dos flebotomiacuteneos e nos mesmos periacuteodos Amostras de tecido

(fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamiacuteferos capturados e utilizadas

para a detecccedilatildeo molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e

PCR com alvo na regiatildeo ITS em 153 amostras Com um total de 5120

armadilhas-noite 172 pequenos mamiacuteferos foram capturados pertencentes agrave

trecircs espeacutecies de marsupiais (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis e

Monodephis americana) e seis espeacutecies de roedores (Rhipidomys macrurus

Oecomys bicolor Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys

rattus e Necromys lasiurus) Vinte amostras (1307) foram positivas

considerando ambos os marcadores moleculares quatro somente para SSU e

quatro somente para ITS As espeacutecies infectadas por Leishmania spp foram

Rhipidomys macrurus Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris Estas espeacutecies

devem participar da transmissatildeo enzooacutetica de Leishmania na REBIO FAL e JBB

sendo este o primeiro relato de mamiacuteferos silvestres infectados por este parasito

nestas duas uacuteltimas aacutereas Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se

que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espeacutecies incriminadas

vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenccedilatildeo da

transmissatildeo enzooacutetica desses tripanossomatiacutedeos

Palavras chaves Transmissatildeo enzooacutetica Leishmania spp roedores

marsupiais Phlebotominae Cerrado

ABSTRACT

Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce

and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis

transmission cycle is the subject of this study All samples were captured in

gallery forests of four areas Aacutegua Limpa Farm Biological Reserve of Contagem

Brasiliarsquos National Park and Botanic Garden of Brasiacutelia on May and September

2014 Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal

District The entire capture effort entailed 1280 HP light traps and 16 Shannon

traps 16 species were identified Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the

most captured species Psathyromyia pradobarrientosi Brumptomyia

guimaraesi Br brumpti Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli

were registered for the first time in the Federal District elevating to 35 the number

of reported species at this federation unit Chapter 2 follows up the study of

Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies

DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools Fragments that

corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples

demonstrating the quality of the extracted DNA Trypanosomatids detection was

performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions All samples tested

negative for Leishmania spp Therefore negative results in the present study do

not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and

surroundings Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small

mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of

sandflies and during the same periods Tissue samples (ear tips) were obtained

from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested

PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples The entire

capture effort entailed 5120 night-traps and 172 small mammals from three

marsupials species (Didelphis albiventris Gracilinanus agilis and Monodephis

americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus Oecomys bicolor

Calomys expulsus Hyleaemys megacephalus Nectomys rattus and Necromys

lasiurus) were captured Twenty samples (1307) were positive considering

both molecular markers four samples only for SSU and four sampes only for ITS

Leishmania spp infected species were Rhipidomys macrurus Gracilinanus

agilis and Didelphis albiventris These species might participate in the enzootic

transmition of Leishmania at REBIO FAL and JBB This is the first report of

Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas Considering all

results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species

from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the

maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Key words Enzootic transmission Leishmania spp rodents marsupials

Phlebotominae Brazilian savanna

23

1 Introduccedilatildeo

11 Revisatildeo Histoacuterica das Leishmanioses nas Ameacutericas

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) eacute uma doenccedila existente

desde a antiguidade cujos relatos e descriccedilotildees datam do seacutec I dC (Basano

amp Camargo 2004) Altamirano-Enciso et al (2003) relataram trecircs teorias de

origem da doenccedila nas Ameacutericas A primeira de 1890 em que Juliano Moreira

amp Aguiar Pupo propunham uma origem mediterracircnea enfatizando que os

casos observados em pacientes da Bahia (Brasil) doenccedila chamada ldquobotatildeo da

Bahiardquo eram parecidos ao ldquobotatildeo do Orienterdquo Segundo os mesmos autores a

LTA teria sido introduzida pelos feniacutecios ou siacuterios que supostamente

chegaram ao nordeste do Brasil ainda na Antiguidade No entanto tais

viagens jamais foram comprovadas historicamente ou arqueologicamente

A segunda teoria eacute a de origem andina formulada a partir dos

descobrimentos de peccedilas de ceracircmica preacute-colombianas ou ldquohuacos peruanosrdquo

em 1895 e reforccedilada pelos documentos do seacuteculo XVI Contudo a discussatildeo

dos dados histoacutericos dividiu-se em dois grupos uma primeira corrente

representada pelos defensores das chamadas ldquoevidecircnciasrdquo histoacutericas cujos

argumentos se reforccedilam pelos estudos das representaccedilotildees de lesotildees feitas

em objetos de ceracircmica e outro grupo de estudiosos que questionava essa

fonte histoacuterica por ser descrita por cronistas que natildeo eram meacutedicos Atribui-se

a essa discussatildeo grande importacircncia porque se passaram quase 80 anos

desde que Eduardo Rabello (1925) propocircs que as origens da leishmaniose

muco-cutacircnea (LMC) estariam inicialmente focalizadas nos territoacuterios frios

sugerindo as regiotildees da Boliacutevia e do Peru predominando esta teoria na

literatura biomeacutedica

24

Mais recentemente a chamada teoria monofileacutetica para origem das

leishmacircnias foi formulada por Thomas-Soccol et al (1993) que baseando-se

em estudos de DNA mitocondrial de 20 espeacutecies de leishmacircnias do mundo

consideram que os subgecircneros Viannia e Leishmania propostos por Lainson

amp Shaw (1972) tiveram origem comum desde os periacuteodos Cretaacuteceo e

Juraacutessico haacute 120 milhotildees de anos quando os continentes estavam unidos na

Pangeacuteia Contudo a questatildeo do local de origem das leishmacircnias continua

controversa entre as regiotildees Neotropical Paleaacutertica e Africana

Cerqueira no Brasil em 1855 observou a existecircncia da forma cutacircnea

identificando-a clinicamente como ldquobotatildeo de Biskrardquo e Breda em 1895 na

Itaacutelia descreveu a doenccedila em italianos provenientes de Satildeo Paulo

Lindenberg (1909) encontrou ldquoformas de Leishmaniardquo idecircnticas agrave

Leishmania tropica da leishmaniose do Velho Mundo em lesotildees cutacircneas de

indiviacuteduos que trabalhavam nas matas do interior do Estado de Satildeo Paulo o

que confirmou a natureza leishmanioacutetica das lesotildees cutacircneas e nasofariacutengeas

(Basano amp Camargo 2004) Gaspar Vianna redescreveu o parasito como L

braziliensis por consideraacute-lo diferente da L tropica e assim denominou-se o

agente etioloacutegico da uacutelcera de Bauru ferida brava ou nariz de tapir

(Basano amp Camargo 2004)

No Brasil ateacute a deacutecada de 1970 todos os casos de LTA eram atribuiacutedos a

L braziliensis (Basano amp Camargo 2004) entretanto com o progresso das

pesquisas ecoepidemioloacutegicas e com o desenvolvimento das teacutecnicas

moleculares outras espeacutecies foram descritas sendo registradas ateacute o

momento sete espeacutecies causadoras da LTA (Brasil 2010) A leishmaniose

visceral (LV) era confundida no passado com outras doenccedilas endecircmicas e de

apresentaccedilatildeo cliacutenica semelhante como a malaacuteria em humanos (Palmer

1998)

No iniacutecio de 1903 James Homer Wright de Baltimore observou formas de

protozoaacuterios em uacutelcera cutacircnea de uma crianccedila da Armecircnia suspeita de ser

acometida pelo Botatildeo do Oriente e propocircs o nome de Welcozoma tropicum

para o agente causal hoje conhecido como L tropica Em 30 de maio desse

25

ano o inglecircs William Boog Leishman obteve uma bioacutepsia de fiacutegado de um

soldado inglecircs morto pela doenccedila febre de dum-dumou kala-azar na Iacutendia

Dois meses depois em 11 de julho Charles Donovan tambeacutem em bioacutepsia do

baccedilo de outro soldado morto descobriu independentemente o agente

etioloacutegico do calazar que era semelhante ao parasito da tripanossomiacutease em

sua fase intracelular (Altamirano-Enciso et al 2003)

O nome do gecircnero Leishmania foi criado pelo meacutedico inglecircs Ronald Ross

mas o termo Leishmania donovani para o agente da LV foi proposto por

Laveran amp Mesnil em 1903 embora segundo Basano amp Camargo (2004)

Cunningham em 1885 na Iacutendia foi o primeiro a observar o parasito do gecircnero

em casos de LV A partir daquele ano foram descritos outros

tripanossomatiacutedeos em paiacuteses do mar Mediterracircneo e da Aacutesia araacutebica As

duacutevidas de que L donovani e L tropica fossem tripanossomatiacutedeos e natildeo

piroplasmas soacute foram dissipadas quando Rogers amp Nicolle (1904) e

posteriormente Nicolle (1908) e Carlos Chagas (1908) demonstraram as

formas flageladas de ambos os parasitos em meio de aacutegar sangue ldquoin vitrordquo

Sergent et al (1921) reproduziram o rdquobotatildeo do Orienterdquo em hamsters ao

inocularem macerados de Phlebotomus papatasi alimentados em soldados

franceses na Argeacutelia comprovando a associaccedilatildeo entre L tropica e

flebotomiacuteneos No Brasil Henrique Aragatildeo (1922) estudou um surto de LTA

no Rio de Janeiro e associou os casos agrave presenccedila de elevada quantidade de

flebotomiacuteneos infectados por L braziliensis Ao inocular triturados destes

flebotomiacuteneos no focinho de catildees foi observada ulceraccedilatildeo com a presenccedila

de formas amastigotas intracelulares (Altamirano-Enciso et al 2003)

12 Definiccedilatildeo

As leishmanioses satildeo um conjunto de doenccedilas resultantes da infecccedilatildeo

por protozoaacuterios digeneacuteticos (Negratildeo amp Ferreira 2014) pertencentes ao filo

Euglenozoa classe Kinetoplastea ordem Trypanosomatida famiacutelia

26

Trypanosomatidae (Cavalier-Smith 2016) gecircnero Leishmania (Ross 1903)

com caraacuteter zoonoacutetico Esses protozoaacuterios satildeo transmitidos por insetos

vetores conhecidos por flebotomiacuteneos (Laurenti 2010 Ready 2013) O fator

em comum das espeacutecies de Leishmania estaacute na necessidade de passar por

um hospedeiro invertebrado obrigatoriamente um flebotomiacuteneo (ver item 17)

para se reproduzirem e atingirem a forma infectante (Jones et al 2003)

As doenccedilas estatildeo amplamente distribuiacutedas em todo o mundo e dividem-se

em dois grandes grupos as leishmanioses dermotroacutepicas e as leishmanioses

viscerotroacutepicas (Negratildeo amp Ferreira 2009)

13 Epidemiologia

As leishmanioses representam uma das endemias de maior

importacircncia em sauacutede puacuteblica no mundo (Laurenti 2010) As mesmas satildeo

consideradas emergentes em franca expansatildeo associada agrave pobreza e ao

deslocamento da populaccedilatildeo para aacutereas com ciclos de transmissatildeo existentes

sendo incluiacutedas na lista de Doenccedilas Tropicais Negligenciadas (WHO 2014)

As leishmanioses tecircm ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica sendo possiacutevel observar

casos da doenccedila em todos os continentes com exceccedilatildeo da Antaacutertica (Figura

1) (WHO 2009)

27

FIGURA 1 Distribuiccedilatildeo geograacutefica dos casos de leishmanioses em 2013 A

Leishmaniose Tegumentar (LT) B Leishmaniose Visceral (LV) Fonte WHO

2016

Segundo a Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede (WHO 2016) satildeo estimados

900 mil a 16 milhatildeo de novos casos de leishmanioses destes 02 a 04

milhatildeo de novos casos de LV e 07 a 12 milhotildees de novos casos de LT onde

20 mil a 30 mil mortes ocorrem anualmente no mundo Ainda de acordo com

A

B

28

dados da WHO (2016) mais de 98 paiacuteses e territoacuterios satildeo endecircmicos para as

leishmanioses Destes 72 paiacuteses estatildeo em processo de desenvolvimento

incluindo 13 dos menos desenvolvidos e sua notificaccedilatildeo eacute compulsoacuteria em

apenas 30 deles (Negratildeo amp Ferreira 2014) Nas Ameacutericas as leishmanioses

ocorrem em 21 paiacuteses com expansatildeo geograacutefica associada agrave antropizaccedilatildeo

dos ciclos de transmissatildeo de Leishmania com o desmatamento abertura de

estradas e urbanizaccedilatildeo de aacutereas primitivas que tem favorecido o ciclo

peridomiciliar da doenccedila (Dedet 1999 Negratildeo amp Ferreira 2014)

As formas viscerotroacutepica e dermotroacutepica tecircm despertado especial

interesse devido a sua importacircncia meacutedica e econocircmica em aacutereas endecircmicas

em regiotildees tropicais e subtropicais da Ameacuterica Aacutefrica Iacutendia e paiacuteses nas

margens do Mediterracircneo (Negratildeo amp Ferreira 2009)

A LTA eacute encontrada em todos os paiacuteses das regiotildees tropicais e

subtropicais do mundo (Gontijo amp Carvalho 2003) exceto na Austraacutelia Nova

Zelacircndia e algumas ilhas do Paciacutefico Essa irregularidade na distribuiccedilatildeo

mundial eacute enfatizada pelo fato que os 90 dos casos tem ocorrido em apenas

seis paiacuteses Afeganistatildeo Brasil Iratilde Peru Araacutebia Saudita e Siacuteria (WHO 2008

Negratildeo amp Ferreira 2014) A doenccedila eacute descrita em quase todos os paiacuteses

americanos do sul dos Estados Unidos agrave Patagocircnia ao norte extremo da

Argentina (Millaacuten et al 2016) com exceccedilatildeo do Uruguai e do Chile (Lainson

1981) verificando-se a distribuiccedilatildeo das diversas formas clinico

epidemioloacutegicas com estreita relaccedilatildeo com condiccedilotildees floriacutesticas e fauniacutesticas

(Teodoro 1997) Na Ameacuterica Latina eacute assinalada desde a peniacutensula de

Yucataacuten Meacutexico (Castro 2002) compreendendo as proviacutencias do norte da

Argentina (Salomoacuten 2010 Millaacuten et al 2016) alcanccedilando maior importacircncia no

Brasil aleacutem do Peru

Negratildeo amp Ferreira (2014) consideraram que na Ameacuterica do Sul a LTA

apresenta dois padrotildees epidemioloacutegicos o padratildeo claacutessico constituiacutedo por

surtos epidecircmicos associados agrave derrubada de matas para a construccedilatildeo de

estradas e povoados e o padratildeo associado agraves formas de ocupaccedilatildeo do espaccedilo

em regiotildees de colonizaccedilatildeo antiga

29

A maioria dos casos de leishmanioses nas Ameacutericas eacute proveniente do

Brasil (Alvar et al 2012) onde as mesmas apresentam distribuiccedilatildeo em todas

as regiotildees geograacuteficas desde 2003 com maior incidecircncia observada no

Nordeste brasileiro (WHO 2014) No Brasil estatildeo incluiacutedas na lista de

doenccedilas que compotildeem o Sistema de Informaccedilatildeo de Doenccedilas de Notificaccedilatildeo

Compulsoacuteria (Brasil 2010)

De acordo com WHO (2016) no ano de 2014 foram notificados 3453

casos de LV no Brasil dos quais 82 com confirmaccedilatildeo laboratorial Para a

leishmaniose tegumentar (LT) foram notificados 19402 casos e 89

confirmados por exames De acordo com a mesma fonte 43 da populaccedilatildeo

brasileira estaacute sob o risco de LV (86997054 200362200) e 70 sob o risco

de LT (139396846200362200) Entre os fatores de risco para a ocorrecircncia

das leishmanioses encontra-se a subnutriccedilatildeo com dietas pobres em

proteiacutenas ferro vitamina A e zinco que pode comprometer a imunidade dos

indiviacuteduos aumentando o risco de uma infecccedilatildeo se agravar a precariedade

das condiccedilotildees sanitaacuterias domeacutesticas como a falta de gestatildeo de resiacuteduos e

esgoto a ceacuteu aberto que podem aumentar os locais de criaccedilatildeo e repouso de

flebotomiacuteneos e bem como o seu acesso aos seres humanos a migraccedilatildeo e

a exposiccedilatildeo ocupacional onde as pessoas ao se movimentarem ou se

estabelecerem em aacutereas de florestas ficam mais proacuteximas do habitat de

flebotomiacuteneos mudando o perfil epidemioloacutegico das doenccedilas (WHO 2014)

Negratildeo amp Ferreira (2014) estudaram a dispersatildeo da LT nas Ameacutericas e

relataram que o crescimento migratoacuterio aliado ao processo histoacuterico de

organizaccedilatildeo espacial nas uacuteltimas deacutecadas tem propiciado a proliferaccedilatildeo de

aacutereas de alto risco e infecccedilatildeo por Leishmania em aacutereas urbanas brasileiras

ora associadas a aacutereas verdes e outras como consequecircncia do desequiliacutebrio

ecoloacutegico evidenciada em algumas aacutereas periurbanas ou associadas agraves

aacutereas de desmatamentos Os mesmos autores enfatizaram que dentro dos

limites geograacuteficos da ocorrecircncia da doenccedila sua extensatildeo e severidade

variavam pelo endemismo ou ocorrecircncia esporaacutedica com condiccedilotildees

ecoloacutegicas especiacuteficas em diferentes regiotildees A distribuiccedilatildeo espacial da

doenccedila em territoacuterio brasileiro eacute resultado de diferentes condiccedilotildees geograacuteficas

30

ou ecoloacutegicas potencializadas pelo planejamento governamental inadequado

ou ineficiente em accedilotildees que promovam a conscientizaccedilatildeo visando o controle

prevenccedilatildeo ou detecccedilatildeo precoce da infecccedilatildeo em aacutereas de risco Para os

centros urbanos eacute de grande importacircncia o conhecimento de aacutereas que

podem oferecer risco agrave populaccedilatildeo exposta agraves formas de LTA de ocorrecircncia

ligadas ao ambiente (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Outro aspecto relevante dentro deste contexto de expansatildeo e urbanizaccedilatildeo

das leishmanioses em todo o mundo e principalmente no Brasil eacute a

possibilidade de se adquirir a doenccedila a partir de transfusotildees sanguiacuteneas (Luz

et al 1997 Urias et al 2009) Este fato eacute agravado em funccedilatildeo do diagnoacutestico

soroloacutegico para a LV natildeo estar incluiacutedo ainda na triagem dos doadores do

paiacutes (Laurenti 2010) que se restringe a triagem laboratorial normatizada das

seguintes doenccedilas doenccedila de Chagas siacutefilis hepatite B HIV malaacuteria HTLV

1 e 2 (Anvisa 2004)

Karagiannis-Voules et al (2013) associaram as doenccedilas a fatores soacutecio-

econocircmicos e agrave precipitaccedilatildeo Clima precipitaccedilatildeo temperatura e umidade satildeo

fatores que podem alterar as distribuiccedilotildees e influenciar na sobrevivecircncia e no

tamanho das populaccedilotildees de vetores e de hospedeiros reservatoacuterios

Flutuaccedilotildees na temperatura podem ter um efeito profundo no ciclo de

desenvolvimento de promastigotas de Leishmania em flebotomiacuteneos

permitindo a transmissatildeo do parasito em aacutereas anteriormente natildeo endecircmicas

para as doenccedilas Alteraccedilotildees climaacuteticas que levam agrave seca fome e inundaccedilotildees

podem levar ao deslocamento em massa e a migraccedilatildeo de pessoas para aacutereas

com transmissatildeo de leishmanioses (WHO 2014)

Acredita-se que os nuacutemeros de casos notificados natildeo correspondam a

evoluccedilatildeo da LTA devido agrave demora com que o paciente procura o sistema de

sauacutede e o difiacutecil diagnoacutestico por parte do proacuteprio sistema Mesmo levando-se

em conta as falhas de notificaccedilatildeo compulsoacuteria eacute evidente o crescente nuacutemero

de casos novos e a intensidade que atinge o homem sendo proporcional agraves

alteraccedilotildees ambientais decorrentes de atividades humanas em aacutereas

especiacuteficas na aacuterea de estudo proposta A prevalecircncia das diferentes

leishmanioses no continente americano eacute difiacutecil de ser mensurada devido

31

principalmente a subnotificaccedilotildees diagnoacutesticos incorretos afecccedilotildees

inaparentes variaccedilotildees de resposta do hospedeiro e multiplicidade de agentes

etioloacutegicos envolvidos (Marzochi 1992)

14 Agente Etioloacutegico

As infecccedilotildees em seres humanos e em animais por protozoaacuterios do

gecircnero Leishmania recebem denominaccedilotildees variadas mas podem ser

agrupadas com base em suas caracteriacutesticas comuns De acordo com

Akhoundi et al (2016) satildeo conhecidas 53 espeacutecies de Leishmania

pertencentes a cinco subgecircneros e complexos (Leishmania Viannia

Sauroleishmania complexo L enriettii e Paraleishmania) Desse total 31

espeacutecies parasitam espeacutecies de mamiacuteferos sendo que pelo menos 20 delas

infectam seres humanos Uma vez que as formas amastigotas satildeo

morfologicamente similares (Jubb et al1993 Palmer 1998) a diferenciaccedilatildeo

das espeacutecies que parasitam seres humanos eacute realizada por testes

moleculares indispensaacuteveis para o diagnoacutestico (Zampieri et al 2016)

As espeacutecies de Leishmania tecircm ciclos bioloacutegicos similares (Laurenti

2010) apresentando duas formas principais a amastigota observada dentro

de ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear em tecidos dos hospedeiros

vertebrados e a promastigota encontrada no sistema digestoacuterio de

flebotomiacuteneos fecircmeas (Figura 2) (Rey 2002) Ambos amastigotas e

promastigotas dividem-se repetidamente por divisatildeo binaacuteria (Palmer 1998)

32

FIGURA 2 ndash Forma Amastigota (A) e Promastigota (B) de Leishmania Fonte

Rey 2002ndash CD room (Modificado)

No hospedeiro vertebrado as formas amastigotas encontram-se no

interior de vacuacuteolos parasitoacuteforos em macroacutefagos e ceacutelulas reticuloendoteliais

e medem cerca de 1 a 2 microm de largura por 2 a 4 microm de comprimento (Palmer

1988 Jones et al 2003) Esta forma se multiplica por divisatildeo assexuada ateacute o

rompimento da ceacutelula disseminando-se pela via hematogecircnica e linfaacutetica

para outros tecidos ricos em ceacutelulas do sistema fagocitaacuterio mononuclear como

linfonodos fiacutegado baccedilo medula oacutessea placas de Peyer por exemplo

iniciando uma reaccedilatildeo inflamatoacuteria e proporcionando a atraccedilatildeo de outros

macroacutefagos gerando um ldquociclo viciosordquo (Figura 3) (Palmer 1998 Basano amp

Camargo 2004)

A forma amastigota da Leishmania eacute tipicamente ovoacuteide ou esfeacuterica

natildeo possui flagelo e nem membrana ondulatoacuteria (Palmer 1998) apenas um

rudimento de flagelo que estaacute presente na bolsa flagelar caracterizada como

uma pequena invaginaccedilatildeo da membrana do parasito (Figura 2) (Laurenti

2010) Nas preparaccedilotildees coradas por Romanovsky esses organismos

apresentam um citoplasma azul paacutelido contendo nas proximidades da

33

extremidade posterior um nuacutecleo uacutenico avermelhado com um cariossoma

central que se cora mais profundamente Tangenciando e anterior ao nuacutecleo

encontra-se um corpo em forma de bastonete e com uma cor violeta escuro o

cinetoplasto que conteacutem o corpo parabasal e o blefaroplasto em forma de

pinta (Figura 2) (Jones et al 2003) A forma amastigota conteacutem duas

concentraccedilotildees de DNA no nuacutecleo e em uma mitococircndria modificada o

cinetoplasto (Palmer 1998)

No seu hospedeiro invertebrado ou em culturas os organismos

assumem formas que variam desde a forma amastigota ateacute a forma de pro-

mastigota essa uacuteltima eacute esguia e fusiforme medindo cerca de 14 a 20microm de

comprimento e 15 a 4microm de largura Esta forma tem motilidade por meio de

um flagelo que se origina no blefaroplasto e projeta-se desde o poacutelo anterior

do organismo O cinetoplasto se situa na extremidade anterior do corpo

(Figura 2) (Jones et al 2003)

O flebotomiacuteneo hospedeiro invertebrado ao sugar sangue de um

animal infectado se infecta ao ingerir histioacutecitos da derme ou monoacutecitos do

sangue contendo formas amastigotas de Leishmania em seu citoplasma

(Basano amp Camargo 2004) Em seu intestino meacutedio e glacircndulas salivares as

leishmacircnias sofrem modificaccedilotildees morfoloacutegicas e bioquiacutemicas se congregam

na vaacutelvula cardiacuteaca onde o intestino anterior projeta-se no intestino meacutedio e

se transformam em promastigotas (com flagelo livre) que aderem ao epiteacutelio

do tubo digestoacuterio onde se multiplicam amplamente por divisotildees binaacuterias A

populaccedilatildeo daiacute resultante migra para a parte anterior do tubo digestoacuterio do

inseto diferenciando-se para formas promastigotas infectantes por volta de 3-

4 dias com invasatildeo da faringe do inseto sendo tambeacutem as chamadas formas

de promastigotas metaciacuteclicas encontradas na buco-faringe destes insetos

Quando os parasitos atingem o proacute-ventriacuteculo do inseto causam uma

obstruccedilatildeo no tubo digestoacuterio dificultando a ingestatildeo de sangue e levando a

fecircmea entatildeo faminta a picar muitas vezes pessoas ou animais Tais insetos

ao sugarem sangue (injetando na picada da pele a sua saliva e a saliva

apresentando propriedade anticoagulante homesostaacutetica anesteacutesica e

vasodilatadora) injetam tambeacutem as formas infectantes da Leishmania a qual

34

caindo na circulaccedilatildeo sanguiacutenea deste novo hospedeiro (vertebrado) vai

desenvolver a doenccedila numa das formas cliacutenicas conhecidas (Figura 3)

(Palmer 1998) ou na maioria dos casos levar a infecccedilotildees assintomaacuteticas e

autoresolutivas (Fukutani 2014)

FIGURA 3 ndash Ciclo bioloacutegico de parasitos do gecircnero Leishmania VL Visceral

Leishmaniasis (LV) CL Cutaneous Leishmaniasis (LT) Fonte TDR ndash

Wellcome Trust

35

15 Espeacutecies de Leishmania e formas cliacutenicas de leishmaniose

Os protozoaacuterios do gecircnero Leishmania apresentam diferentes

distribuiccedilotildees geograacuteficas e as enfermidades por eles causadas satildeo

relativamente distintas embora possa haver superposiccedilatildeo nos sinais e

cliacutenicos e lesotildees (Jones et al 2003) Cerca de 20 espeacutecies de Leishmania satildeo

patogecircnicas para o ser humano (Laurenti 2010) As leishmanioses se

manifestam de quatro formas diferentes a depender da espeacutecie de

Leishmania envolvida e do estado imunoloacutegico do hospedeiro i) visceral

tambeacutem conhecida como calazar a forma mais grave da doenccedila ii) cutacircnea

a mais comum iii) mucocutacircnea e iv) cutacircnea difusa A LV eacute uma doenccedila

crocircnica sistecircmica que afeta os oacutergatildeos como o fiacutegado e o baccedilo A LTA inclui

as formas cutacircnea cutacircnea difusa e mucocutacircnea caracterizadas pela

formaccedilatildeo de uacutelceras na pele (Brasil 2006 2010)

A LV eacute principalmente causada por L donovani (Jubb et al 1993) Nas

Ameacutericas Central e Sul Leishmania infantum (syn L chagasi) eacute a espeacutecie

envolvida na patogenia (Brasil 2006)

A patogenia das leishmanioses eacute fortemente influenciada por fatores

inerentes ao hospedeiro como suas caracteriacutesticas geneacuteticas e resposta

imunoloacutegica por fatores inerentes ao parasito como a virulecircncia da espeacutecie

de Leishmania infectante e por fatores inerentes ao vetor como sua

capacidade vetorial Como resultado dessa interaccedilatildeo entre as diferentes

espeacutecies do parasito do vetor e dos mecanismos da resposta imunoloacutegica do

hospedeiro vertebrado um espectro de manifestaccedilotildees cliacutenicas

histopatoloacutegicas e imunoloacutegicas eacute observado no homem (Laurenti 2010)

Imunologicamente apoacutes a inoculaccedilatildeo do parasito aqueles animais que seratildeo

resistentes agrave infecccedilatildeo promovem a ativaccedilatildeo de ceacutelulas TCD4+Th1 que

produziratildeo entre outras as citocinas interferon gama fator de necrose

tumoral alfa e interleucinas (IL) 2 e 12 Estas por sua vez ativaratildeo

macroacutefagos que faratildeo a destruiccedilatildeo das formas amastigotas intracelulares

(Pinelli et al 1995) Segundo os mesmos autores as ceacutelulas TCD8 citotoacutexicas

36

tambeacutem podem estar envolvidas na resistecircncia agrave doenccedila Jaacute nos animais que

manifestaratildeo sinais cliacutenicos da doenccedila haveraacute uma supressatildeo das ceacutelulas

TCD4+Th1 e ativaccedilatildeo das ceacutelulas TCD4+Th2 com produccedilatildeo de IL-4 IL-5 IL-

6 IL-10 IL-13 responsaacuteveis pela proliferaccedilatildeo de ceacutelulas B e

consequentemente produccedilatildeo de grande quantidade de anticorpos (Pinelli et al

1994 1999) Anticorpos estes natildeo protetores mas muitas vezes danosos

pois formaratildeo imunocomplexos que poderatildeo ser depositados nas membranas

basais de vaacuterios oacutergatildeos (Slappendel 1988 Martinez-Moreno et al 1995)

Usualmente a LV eacute observada como enfermidade debilitante crocircnica

com periacuteodos de febre perda de peso gradual anemia e leucopenia (Jones et

al 2003) Patologicamente o fiacutegado pode conter numerosos granulomas e eacute

simetricamente aumentado e marrom escuro O baccedilo eacute maior em duas a trecircs

vezes o seu tamanho normal simetricamente aumentado e marrom-escuro a

preto na sua superfiacutecie capsular Os linfonodos estatildeo moderadamente

aumentados e irregulares sem outras mudanccedilas significativas na cavidade

abdominal exceto os rins que podem estar mais escuros que o normal (Jubb

et al 1993) A medula oacutessea eacute uniformemente avermelhada e amolecida

(Jones et al 2003)

As lesotildees microscoacutepicas da LV caracterizam-se por uma infiltraccedilatildeo

maciccedila em vaacuterios sistemas do organismo de enormes macroacutefagos cujo

citoplasma estaacute repleto de leishmacircnias A arquitetura dos linfonodos e do

baccedilo pode estar completamente obscurecida pelas ceacutelulas fagocitaacuterias

(Jones et al 2003)

Os foliacuteculos esplecircnicos satildeo hiperplaacutesicos geralmente com hialinose

folicular Em casos avanccedilados haacute atrofia de nodos e baccedilo e as aacutereas dos

sinus podem estar difusamente ocupadas por grandes macroacutefagos altamente

carregados com organismos intracitoplasmaacuteticos e numerosas ceacutelulas

plasmaacuteticas As lesotildees na medula oacutessea podem ser focais e consistem de

grupos de macroacutefagos epitelioacuteides com organismos fagocitados As

alteraccedilotildees renais satildeo variaacuteveis e podem consistir em manchas intersticiais

com algum envolvimento parasitaacuterio (Jubb et al 1993) e por este motivo

utiliza-se os criteacuterios de classificaccedilatildeo da Organizaccedilatildeo Mundial da Sauacutede que

37

inclui glomerulopatias com alteraccedilotildees miacutenimas glomeruloesclerose

segmentar focal glomerulonefrite membranoproliferativa glomerulonefrite

proliferativa mesangial glomerulonefrite membranosa glomerulonefrite

crescecircntica e glomerulonefrite crocircnica (Churg et al 1985)

A LT eacute causada por 18 espeacutecies de Leishmania patogecircnicas para os

seres humanos (Ready 2013) A LT causada por L tropica e L major ocorre

principalmente no sul da Europa e nos paiacuteses do norte da Aacutefrica que

circundam o Mediterracircneo (Jones et al 2003) Nas Ameacutericas assim

denominada LTA a infecccedilatildeo humana ocorre por 11 espeacutecies (Ready 2013)

agrupadas nos subgecircneros Leishmania e Viannia onde as trecircs espeacutecies mais

importantes do subgecircnero Leishmania satildeo L mexicana L amazonensis e L

venezuelensis e do subgecircnero Viannia satildeo L braziliensis L panamensis L

peruviana e L guyanensis

A infecccedilatildeo caracteriza-se por uacutelceras ou noacutedulos uacutenicos ou muacuteltiplos na

pele com lento desenvolvimento e que habitualmente cicatrizam-se

espontaneamente depois de um periacuteodo de meses (Jones et al 2003) As

lesotildees cutacircneas tomam forma de uma uacutelcera crocircnica que se desenvolve de

paacutepulas inflamatoacuterias no local da picada do inseto Linfoacutecitos e ceacutelulas

plasmaacuteticas margeiam a lesatildeo e os neutroacutefilos satildeo atraiacutedos para os debris

Quando a inflamaccedilatildeo se estende agrave borda epitelial a ulceraccedilatildeo ocorre Muitos

parasitos estatildeo no interior de histioacutecitos e alguns estatildeo livres no tecido (Jubb

et al 1993) As lesotildees de longa duraccedilatildeo estatildeo circunscritas por um tecido

conjuntivo fibroblaacutestico o que lhes daacute um aspecto de granuloma tiacutepico (Jones

et al 2003)

A leishmaniose mucocutacircnea uma das formas cliacutenicas da LTA ocorre

no Meacutexico e nas Ameacutericas Central e do Sul A infecccedilatildeo parece com a

cutacircnea mas aleacutem da pele com frequecircncia as uacutelceras crocircnicas com bordas

elevadas e fundo granuloso estatildeo localizadas nas junccedilotildees mucocutacircneas e

podem ocorrer nas cavidades oral e nasal (Jones et al 2003 Brasil 2010

Laurenti 2010)

38

No Brasil jaacute foram identificadas sete espeacutecies responsaacuteveis pela LTA

sendo seis do subgecircnero Viannia e uma do subgecircnero Leishmania As trecircs

espeacutecies mais encontradas satildeo L braziliensis L guyanensis e L

amazonensis As espeacutecies L lainsoni L naiffi L lindenbergi e L shawi foram

identificadas mais recentemente em estados das regiotildees Norte e Nordeste

(Brasil 2010)

16 Leishmanioses no Centro Oeste e no DF

Entre 2001 e 2012 cerca de 3000 casos confirmados de LV e 50 mil de

LTA foram registrados na regiatildeo Centro-Oeste do Brasil (RCO)

(wwwsaudegovbr) onde haacute pelo menos 127 espeacutecies de flebotomiacuteneos

registradas (Almeida et al 2015) Essa regiatildeo eacute coberta em sua maioria pelo

bioma Cerrado onde haacute vasta expansatildeo agropecuaacuteria e ocupaccedilatildeo do solo

devido o crescimento urbano desordenado o que poderia favorecer a

ocorrecircncia das leishmanioses (Galati et al 1996 Carranza-Tamayo et al

2010) O Centro-Oeste se destaca atualmente por estar se tornando um poacutelo

de atraccedilatildeo de populaccedilatildeo das demais regiotildees brasileiras devido agrave expansatildeo

da fronteira agriacutecola (Negratildeo amp Ferreira 2014)

Um estudo da distribuiccedilatildeo territorial da LTA no Brasil (Negratildeo amp Ferreira

2014) mostrou que o Centro-Oeste corresponde a segunda maior regiatildeo em

coeficiente de detecccedilatildeo da doenccedila de 2001 a 2010 (199 casos por 100000

habitantes) Em Goiaacutes o nuacutemero de municiacutepios com registro da doenccedila

passou de 71 (306) em 1994 para 118 (487) em 1999 o que

corresponde a um acreacutescimo de 67 (Costa 2005) O Estado do Mato Grosso

eacute detentor do terceiro maior coeficiente de detecccedilatildeo ndash 765 casos por 100000

habitantes O Distrito Federal (DF) registra a transmissatildeo da LTA de

ocorrecircncia ciacuteclica desde 1992 e a partir de entatildeo apresenta coeficientes de

detecccedilatildeo bem inferiores ao que eacute considerado como baixo segundo

paracircmetros do Ministeacuterio da Sauacutede (lt25 casos por 100000 habitantes)

39

(Carvalho et al 2010) Com a expansatildeo das fronteiras agriacutecolas nesta regiatildeo

principalmente nos estados de Mato Grosso e Goiaacutes estes Estados passaram

a ser importante rota de fixaccedilatildeo do homem

No DF haacute evidecircncia de transmissatildeo autoacutectone de LTA O nuacutemero de casos

notificados de LTA procedentes do DF nos anos de 2003 2004 e 2005 foi de

31 57 e 26 respectivamente (Sampaio et al 2009) O primeiro caso de LV

autoacutectone no DF ocorreu em 2005 e trecircs oacutebitos foram confirmados ateacute 2009

(Carranza-Tamayo et al 2010) Entre 2007 e 2012 24 casos humanos de LV

autoacutectone foram registrados (SESDF 2012) Em 2013 foram notificadas no

Sistema de Informaccedilatildeo de Agravos de Notificaccedilatildeo ndash SINANNET 98 pessoas

com suspeita de LV e 47 foram confirmadas sendo dois casos autoacutectones

provenientes de Sobradinho e Lago Norte dos quais um veio a oacutebito

Segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das Leishmanioses no DF para

o ano de 2015 dos 142 casos de LV notificados 39 foram confirmados

destes trecircs autoacutectones e 36 importados Foram atendidos 39 pacientes nas

unidades hospitalares do DF desses quatro evoluiacuteram a oacutebito dos quais um

autoacutectone da RA da Fercal e trecircs importados De janeiro a marccedilo de 2016

foram notificados 28 casos de LV dentre eles um caso autoacutectone proveniente

do Lago Norte aleacutem de sete importados e dois em investigaccedilatildeo para a

definiccedilatildeo do Local Provaacutevel de Infecccedilatildeo (LPI) Dos dez casos confirmados em

2016 foram atendidos dez pacientes nas unidades hospitalares do DF

desses dois evoluiacuteram a oacutebito dos quais um importado do estado de Goiaacutes e

um encontra-se em investigaccedilatildeo para definir o LPI

Em relaccedilatildeo agrave LTA no DF segundo dados do Boletim Epidemioloacutegico das

Leishmanioses no DF para o ano de 2015 foram confirmados 50 casos

destes 35 satildeo residentes do DF 14 de outras Unidades Federadas e um da

Guiana Francesa Dos 50 casos confirmados 35 satildeo importados nove

indeterminados seis em investigaccedilatildeo e nenhum autoacutectone Natildeo foi registrado

nenhum oacutebito relacionado agrave LTA no periacuteodo Dados do Boletim

Epidemioloacutegico de janeiro a marccedilo de 2016 confirmam sete casos da doenccedila

mas nenhum caso autoacutectone foi registrado Aleacutem disso nos uacuteltimos anos tecircm

sido registrados casos de LV em catildees domeacutesticos nas regiotildees norte e sul do

40

DF que vem sofrendo com a urbanizaccedilatildeo descontrolada da sua aacuterea rural

(Carranza-Tamayo et al 2010 Cardoso et al 2015)

17 Vetores

Flebotomiacuteneos (ordem Diptera famiacutelia Psychodidae subfamiacutelia

Phlebotominae) satildeo insetos com ampla distribuiccedilatildeo geograacutefica ocorrendo sob

as mais diversas condiccedilotildees climaacuteticas e de altitude nos ambientes silvestres

rurais e urbanos Atualmente conhece-se cerca de 1003 espeacutecies das quais

537 estatildeo presentes na regiatildeo Neotropical e Neoaacutertica destas 277 foram

registradas no Brasil representando 28 do total e 53 das que ocorrem na

Regiatildeo Neotropical (Shimabukuro et al 2017) Dezenove espeacutecies de

flebotomiacuteneos estatildeo incriminadas como vetoras de espeacutecies de Leishmania

(Basano amp Camargo 2004 Shimabukuro amp Galati 2010)

Flebotomiacuteneos satildeo insetos pequenos de cor parda (ldquomosquito-palhardquo) e

de corpo cerdoso que normalmente natildeo ultrapassam 05 cm de comprimento

tecircm pernas longas e delgadas e apresentam como caracteriacutestica o voo

saltitante Ao contraacuterio dos outros diacutepteros os flebotomiacuteneos mantecircm a

postura ereta das asas mesmo em repouso Apenas as fecircmeas fazem

repasto sanguiacuteneo por serem adaptadas com o aparelho bucal picador-

sugador (Killick-Kendrick1999 Basano amp Camargo 2004) A hematofagia eacute

indispensaacutevel ao desenvolvimento ovariano (Carrera 1991) Entre os

inuacutemeros nomes populares que variam segundo os paiacuteses e as suas regiotildees

encontram-se mosquito palha asa dura asa branca tatuquira birigui

cangalha cangalhinha ligeirinho peacutela-eacutegua arrupiado (Martins et al 1978)

As formas imaturas podem ser encontradas em seus criadouros em solo

uacutemido mas natildeo molhado e em detritos ricos em mateacuteria orgacircnica em

decomposiccedilatildeo (Brazil amp Brazil 2003)

41

As fecircmeas dos flebotomiacuteneos geralmente apresentam haacutebito noturno

procuram fazer repasto sanguiacuteneo ao entardecer e comeccedilo da noite quando

transmitem o parasito para o novo hospedeiro Jaacute os machos alimentam-se de

frutas seiva de plantas entre outros por breve periacuteodo (Killick-

Kendrick1999) Durante o dia os flebotomiacuteneos procuram abrigo ou no

interior das residecircncias ou em matas em local protegido dos ventos Satildeo

frequentemente encontrados em tocas de outros animais como tatu buracos

em paredes de construccedilotildees ocos de paus ou bambus ou similares Em matas

fechadas devido a pouca luz em seu interior podem ser vistos mesmo

durante o dia inclusive ativos a procura de possiacuteveis animais ou o proacuteprio

homem para ser sugado (Basano amp Camargo 2004)

Killick‐Kendrick (1990) propotildeem quatro criteacuterios que devem ser

observados antes de se incriminar uma espeacutecie como vetora de zoonoses

satildeo eles alimentar-se em humanos e no reservatoacuterio animal manter os

parasitos apoacutes a ingestatildeo exibir parasitos indistinguiacuteveis daqueles isolados

de pacientes e transmitir o parasito pela picada Adicionalmente Ready (2013)

propotildee o criteacuterio relacionado a influecircncia da abundacircncia do vetor na

incidecircncia da leishmaniose comprovada por modelos matemaacuteticos

No Brasil as principais espeacutecies envolvidas na transmissatildeo da LTA satildeo

Bichromomyia flaviscutellata Nyssomyia whitmani Ny umbratilis Ny neivai

Psychodopygus wellcomei e Migonemyia migonei (Barbosa et al 2008 Ready

2013 Diniz et al 2014) Estas espeacutecies de flebotomiacuteneos foram definidas

como potenciais vetores de acordo com o Manual de Vigilacircncia da

Leishmaniose Tegumentar Americana do Ministeacuterio da Sauacutede por atenderem

a alguns dos criteacuterios que atribuem a uma espeacutecie a capacidade vetorial

segundo Killick-Kendrick amp Ward (1981) Killick-Kendrick (1990) e Ready

(2013) Cabe ressaltar que o papel vetorial de cada uma dessas espeacutecies

dependeraacute da espeacutecie de Leishmania presente no intestino da sua

capacidade de se infectar e transmitir o parasito a um novo hospedeiro (Brasil

2010 Pita-Pereira et al 2009 2011)

O principal vetor da LV nas Ameacutericas eacute o flebotomiacuteneo Lutzomyia

longipalpis espeacutecie bem adaptada ao ambiente peridomeacutestico e com ampla

42

distribuiccedilatildeo geograacutefica (Brasil 2010) poreacutem outros flebotomiacuteneos tambeacutem

podem estar participando do ciclo de LV principalmente nas aacutereas onde Lu

longipalpis eacute ausente (de Souza et al 2003 de Carvalho et al 2010)

Lutzomyia cruzi parece participar como vetor nos municiacutepios de Corumbaacute e

LadaacuterioMS na fronteira entre Brasil e Boliacutevia (Dos Santos et al 1998) e

Pintomyia (Pifanomyia) evansi eacute tambeacutem um importante vetor na Colocircmbia

(Travi et al 1990 Oviedo amp Moreno 1995 Montoya-Lerma amp Lane 1996 Travi

et al 1996) e Venezuela (Pifano 1964 Feliciangeli et al 1998)

43

18 Flebotomiacuteneos no DF

Atualmente conhece-se 29 espeacutecies de flebotomiacuteneos no DF (Quadro1)

QUADRO 1 Fauna flebotomiacutenica do Distrito Federal ateacute 2015 Fonte

Carvalho et al 1989 Carvalho et al 2010 Ferreira et al 2014 Almeida et al

2015 Galati 2015

Espeacutecies

Brumptomyia avellari (Costa Lima 1932)

Brumptomyia pintoi (Costa Lima 1932)

Micropygomyia longipennis (Barretto 1946)

Micropygomyia acanthopharynx (Martins Falcatildeo amp Silva 1962)

Micropygomyia quinquefer (Dyar 1929)

Evandromyia bacula (Martins Falcatildeo amp Silva 1965)

Evandromyia evandroi (Costa Lima amp Antunes 1936)

Evandromyia corumbaensis (Galati Nunes Oshiro amp Rego 1989)

Evandromyia teratodes (Martins Falcatildeo amp Silva 1964)

Evandromyia sallesi (Galvatildeo amp Coutinho 1939)

Evandromyia saulensis (Floch amp Abonnenc 1944)

Evandromyia lenti (Mangabeira 1938)

Pintomyia christenseni (Young amp Duncan 1994)

Pintomyia kuscheli (Le Pont Martinez Torrez-Espejo amp Dujardin 1998)

Pintomyia monticola (Costa Lima 1932)

Pintomyia fischeri (Pinto 1926)

Sciopemyia servulolimai (Damasceno amp Causey 1945)

Continua

44

Sciopemyia sordellii (Shannon amp Del Ponte 1927)

Lutzomyia longipalpis (Lutz amp Neiva 1912)

Lutzomyia ischnacantha Martins Souza amp Falcatildeo 1962

Psathyromyia lutziana (Costa Lima 1932)

Psathyromyia runoides (Fairchild amp Hertig 1953)

Psathyromyia brasiliensis (Costa Lima 1932)

Psathyromyia aragaoi (Costa Lima 1932)

Psathyromyia shannoni (Dyar 1929)

Nyssomyia whitmani (Antunes amp Coutinho 1939)

Nyssomyia neivai (Pinto 1926)

Nyssomyia intermedia (Lutz amp Neiva 1912)

Bichromomyia flaviscutellata (Mangabeira 1942)

No trabalho de Carvalho et al (2010) foram coletados mais de 17 mil

flebotomiacuteneos de 27 espeacutecies em diversos ambientes como nas diferentes

fitofisionomias do Cerrado abrigo de animais e no intradomiciacutelo Os autores

identificaram mais duas espeacutecies consideradas vetoras Ny neivai e Ps davisi

que auxiliaram no mapeamento das aacutereas de risco agrave transmissatildeo de

Leishmania

Ferreira et al (2014) analisaram a ocorrecircncia de flebotomiacuteneos em matas

de galeria do Distrito Federal (DF) nas estaccedilotildees seca e chuvosa Os autores

natildeo capturaram flebotomiacuteneos em novembro (estaccedilatildeo chuvosa) e em maio

(estaccedilatildeo seca) foram capturados 250 exemplares identificados como

Psathyromyia runoides (799) Pintomyia monticola (97) Mi quinquefer

(37) Pa shannoni (3) Bi flaviscutellata (07) Brumptomyia sp (07)

Pi kuscheli (07) Pa lutziana (Costa Lima) (07) e Sciopemyia sordellii

(07) De acordo com os resultados os autores relataram que em matas de

galeria do DF haveria maior ocorrecircncia de flebotomiacuteneos na estaccedilatildeo seca no

Continuaccedilatildeo QUADRO 1

45

niacutevel do solo e em aacutereas preservadas As espeacutecies Pa runoides Pi kuscheli

e Mi quinquefer foram registradas pela primeira vez no DF

Informaccedilotildees relevantes relacionadas agrave riqueza de espeacutecies abundacircncia

ocorrecircncia em distintas eacutepocas do ano somam dados que podem ser usados

para a melhor compreensatildeo da epidemiologia das doenccedilas e conhecimento

do comportamento dos flebotomiacuteneos nas matas de galeria proacuteximas agraves aacutereas

urbanas no DF

19 Hospedeiros e reservatoacuterios de Leishmania spp

Segundo Ashford (1996) o reservatoacuterio de uma infecccedilatildeo eacute definido como

o sistema ecoloacutegico no qual um agente infeccioso sobrevive

persistentemente Para as infecccedilotildees de transmissatildeo vetorial o sistema

compreenderia um ou mais vetores e um ou mais mamiacuteferos hospedeiros

que viveriam sob condiccedilotildees de densidade populacional proximidade espacial

entre outros fatores que permitiriam a transferecircncia continuada do agente

entre eles O autor designa o hospedeiro mamiacutefero responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo em longo prazo do agente infeccioso de hospedeiro reservatoacuterio

e define como zoonose uma doenccedila causada por parasitos cujos hospedeiros

satildeo o homem e outros mamiacuteferos

Entretanto a definiccedilatildeo de reservatoacuterio tem sofrido mudanccedilas significativas

no uacuteltimo seacuteculo fazendo-se necessaacuterio o estudo das zoonoses a partir de

perspectivas mais abrangentes Atualmente aceita-se que um reservatoacuterio

pode ser uma espeacutecie ou um complexo delas responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo

do parasito na natureza Dentro desse sistema-reservatoacuterio cada hospedeiro

desenvolve papeis diferentes na transmissatildeo em um determinado tempo e

espaccedilo isso eacute considera-se que ldquohospedeiros de manutenccedilatildeordquo sejam os

mamiacuteferos que podem ser infectados e mantecircm a infecccedilatildeo e que

ldquohospedeiros amplificadoresrdquo sejam os mamiacuteferos que aleacutem de manterem a

46

infecccedilatildeo desempenham uma caracteriacutestica que favoreccedila a transmissatildeo como

a presenccedila de mais parasitos no sangue e pele por periacuteodos maiores (Roque

amp Jansen 2014) Um estudo de reservatoacuterios silvestres e sinantroacutepicos de

espeacutecies de Leishmania nas Ameacutericas distinguiu as espeacutecies de mamiacuteferos

silvestres e sinantroacutepicos encontrados infectados com Leishmania spp

classificando-os em hospedeiros e potenciais reservatoacuterios (Roque amp

Jansen 2014) de acordo com a capacidade de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo ou de

transmissibilidade dos parasitos aos vetores por meio de xenodiagnoacutestico

positivo ou culturas de pele ou sangue

110 Diversidade e espeacutecies mais importantes de hospedeiros e

reservatoacuterios

Desde o seacuteculo passado a comunidade cientiacutefica tem demonstrado que

diferentes e numerosos mamiacuteferos silvestres podem se tornar infectados com

espeacutecies de Leishmania aleacutem das espeacutecies domeacutesticas e sinantroacutepicas

(animais natildeo domesticados que habitualmente compartilham e aproveitam-se

do ecoacutetopo humano) (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006 Roque amp Jansen

2014) Entretanto o foco deve ser mudado para a identificaccedilatildeo de espeacutecies

que podem servir como fontes de infecccedilatildeo para vetores e amplificaccedilatildeo de

focos enzooacuteticos temporalmente e regionalmente especiacuteficos constituindo

um risco para a transmissatildeo humana Esta mudanccedila depende da melhor

compreensatildeo de sistemas reservatoacuterios e do papel desempenhado por cada

espeacutecie de mamiacutefero na manutenccedilatildeo destes parasitos na natureza (Roque amp

Jansen 2014) Diversas espeacutecies das ordens Didelphimorphia Pilosa

Cingulata Rodentia Carnivora Primata e Chiroptera foram recentemente

classificadas como hospedeiros ou potenciais reservatoacuterios por Roque amp

Jansen (2014)

47

Os catildees domeacutesticos (Canis familiaris) satildeo considerados eficientes

reservatoacuterios de L infantum devido agrave alta susceptibilidade agrave infecccedilatildeo ao

frequentemente elevado parasitismo nesta espeacutecie e por causa da sua iacutentima

relaccedilatildeo com o homem tanto nas zonas urbanas quanto rurais (Dantas-Torres

amp Brandatildeo-Filho 2006) Os catildees como importantes reservatoacuterios domeacutesticos

de L infantum satildeo responsabilizados pela manutenccedilatildeo das endemias nos

grandes centros urbanos (Silva et al 2001 Medeiros et al 2005) Uma

consideraacutevel gama dos catildees infectados por espeacutecies de Leishmania satildeo

assintomaacuteticos seja por um determinado periacuteodo de tempo que pode chegar

a anos ateacute nunca apresentar sinais cliacutenicos ou sintomas da doenccedila Poreacutem

os catildees natildeo satildeo as uacutenicas fontes de infecccedilatildeo em todos os focos de LV no

Brasil (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Tambeacutem existe uma forte

tendecircncia para que os catildees assumam o papel de principais reservatoacuterios

domeacutesticos para L braziliensis o agente etioloacutegico da LTA mais disseminado

(Aguilar et al 1989 Madeira et al 2003 2006 Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho

2006 Castro et al 2007 Quaresma et al 2011) Entre os estudos que relatam

casos de infecccedilatildeo mista por L infantum e L braziliensis encontra-se os

trabalhos de Madeira et al (2006) e Quaresma et al (2011)

Aleacutem dos carniacutevoros descritos por Roque amp Jansen (2014) Cerdocyon

thous popularmente conhecido como cachorro do mato ou guaraxaim jaacute era

suspeito de desempenhar o papel de hospedeiro reservatoacuterio primaacuterio de L

infantum no Norte do Brasil (Lainson et al 1969) Os mesmos autores

descreveram a eficiecircncia dessa espeacutecie como fonte de infecccedilatildeo em 1990

Este caniacutedeo tambeacutem tem sido incriminado como hospedeiro reservatoacuterio

primaacuterio na Venezuela (Lainson et al 1987) Figueiredo et al (2008) relataram

o primeiro caso de L infantum em cachorro-vinagre (Speothos venaticus) no

Brasil no Estado do Mato Grosso Os autores chamam a atenccedilatildeo para os

controles parasitoloacutegicos em animais silvestres mantidos em cativeiros

principalmente quando estes fazem intercacircmbios entre zooloacutegicos brasileiros

Tambeacutem no Mato Grosso Souza et al (2010) relataram a infecccedilatildeo de

caniacutedeos silvestres por L infantum mantidos em cativeiro Foram coletadas

amostras de pele medula oacutessea e linfonodos de seis raposas (Cerdocyon

thous) e um cachorro vinagre (Spheotos venaticus) para detecccedilatildeo e

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caracterizaccedilatildeo de Leishmania sp pela teacutecnica de PCR-RFLP Todos os

animais pesquisados apresentaram-se positivos para L infantum O estudo

destaca a importacircncia de monitoramento adequado dos animais e do maior

controle desta enfermidade jaacute que os animais estudados estavam em

ambientes de recreaccedilatildeo puacuteblica

De maneira geral as taxas de infecccedilatildeo em caniacutedeos natildeo domeacutesticos satildeo

baixas mas pode ser alta agraves vezes como observado nas raposas da

Ameacuterica do Sul (Lainson et al 1987) Poreacutem caniacutedeos silvestres

normalmente natildeo vivem perto de habitaccedilotildees humanas e logo eles teriam um

papel secundaacuterio na importacircncia da epidemiologia da LV enzooacutetica (Dantas-

Torres amp Brandatildeo-Filho 2006) Millaacuten et al (2016) encontraram Leishmania

sp em 375 das 32 raposas cinzas (Pseudalopex griseus) capturadas na

Patagocircnia Argentina Os achados dos autores tecircm elevada significacircncia pela

extensatildeo da aacuterea de distribuiccedilatildeo das leishmanioses na Ameacuterica do Sul por

suportar a existecircncia de um ciclo silvestre na ausecircncia de catildees e ainda na

transmissatildeo indicando que ou a distribuiccedilatildeo de flebotomiacuteneos eacute mais ampla

do que se pensava ou que a transmissatildeo de Leishmania por outros

artroacutepodes poderia ser possiacutevel

De acordo com Medeiros et al (2005) marsupiais didelfiacutedeos estatildeo entre

os principais reservatoacuterios rurais da doenccedila Didelphis albiventris foi o primeiro

mamiacutefero silvestre natildeo canino a ser descrito como hospedeiro de L infantum

no Novo Mundo (Sherlock et al 1984) Em aacutereas endecircmicas do Brasil e na

Colocircmbia espeacutecies de Didelphis tecircm frequentemente abrigado L infantum

(Corredor et al 1989 Travi et al 1994 Sherlock 1996 Cabrera et al 2003

Humberg et al 2012 Carreira et al 2012) e a presenccedila de D albiventris

poderia ser um fator associado a ocorrecircncia de infecccedilotildees assintomaacuteticas por

Leishmania na periferia de centros urbanos (Carranza-Tamayo et al 2016)

Outros marsupiais como Didelphis marsupialis Philander opossum e

Metachirus nudicaudatus jaacute foram detectados com Leishmania amazonensis

(Lainson et al 1981) mostrando que esses mamiacuteferos desempenham papel

importante na manutenccedilatildeo de Leishmania na natureza Em Barra de

Guaratiba estado do Rio de Janeiro a distacircncia das casas para as bordas

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florestais sua altitude e a presenccedila de D marsupialis nos quintais das casas

foram considerados fatores preditores para infecccedilatildeo por L infantum em catildees

(Cabrera et al 2003)

Roedores sinantroacutepicos da famiacutelia Muridae como o rato de telhado (Rattus

rattus) e o camundongo (Mus musculus) compotildeem a lista de espeacutecies de

potenciais reservatoacuterios ou hospedeiros conforme a espeacutecie de Leishmania

encontrada e o local (Roque amp Jansen 2014) Rattus rattus jaacute foi encontrado

naturalmente infectado por L infantum (Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

De Lima et al (2002) isolaram Leishmania braziliensis de R rattus na

Venezuela e Brandatildeo-Filho (2003) encontrou L braziliensis por meio de

eletroforese enzimaacutetica multilocus nesse mesmo hospedeiro Esse processo

de domiciliaccedilatildeo facilita a ligaccedilatildeo entre os ambientes peridomeacutestico e o

silvestre (Lainson et al1969) podendo estabelecer novos padrotildees

epidemioloacutegicos de LV particularmente no ciclo urbano de transmissatildeo

(Dantas-Torres amp Brandatildeo-Filho 2006)

Helhazar et al (2013) reportaram pela primeira vez em Portugal a

infecccedilatildeo natural por L infantum em M musculus e em Rattus norvegicus

(ratazana) sugerindo que estes animais provavelmente desempenham papeacuteis

como potenciais reservatoacuterios no ciclo bioloacutegico do parasito Os autores

relatam que M musculus e R norvegicus satildeo animais que se proliferam muito

raacutepido e tecircm uma expectativa de vida de 12 e 24 meses respectivamente o

que poderia manter o parasito disponiacutevel por pelo menos um ano mesmo

durante a baixa atividade dos flebotomiacuteneos em determinadas estaccedilotildees do

ano Na Venezuela De Lima e colaboradores (2002) isolaram L braziliensis

em Sigmodon hispidus (rato do algodatildeo) aleacutem do R rattus

Mais de 200 espeacutecies de roedores estatildeo distribuiacutedas em haacutebitats semi-

aquaacuteticos terrestres e semi-fossoriais no Brasil (Bonvicino et al 2008) Esta

caracteriacutestica eacute provavelmente a principal razatildeo que explica a sua exposiccedilatildeo

aos diferentes ciclos de transmissatildeo de vaacuterias espeacutecies de Leishmania no

ambiente silvestre (Roque amp Jansen 2014a)

50

No Brasil Paacutedua et al (2011) relataram infecccedilatildeo natural por L braziliensis

no roedor sinantroacutepico M musculus e no roedor silvestre Necromys lasiurus a

partir de anaacutelises moleculares (PCR-RFLP) de medula oacutessea femoral e

fragmentos de pele Freitas et al (2012) no Estado de Mato Grosso uma

regiatildeo endecircmica para leishmaniose cutacircnea relataram infecccedilatildeo natural nas

mesmas espeacutecies e utilizando a mesma metodologia que Paacutedua et al (2011)

mostraram que a presenccedila de Leishmania em roedores sinantroacutepicos pode

ser uma ameaccedila aos humanos devido a cohabitaccedilatildeo de domiciacutelios humanos

nessa aacuterea de estudo

No Brasil existem poucos estudos de infecccedilatildeo natural de Leishmania em

roedores caviomorfos e cerca de 90 espeacutecimes foram analisados (Lainson et

al 1981 Quaresma et al 2011) Estudos experimentais apontaram duas

espeacutecies de caviomorfos como reservatoacuterios potenciais para Leishmania

Thrichomys laurentius infectado por L infantum e L braziliensis (Roque et al

2010) e Proechimys semispinosus infectados com L infantum (Travi et al

2002) Lainson amp Shaw (1968) encontraram o parasito L amazonensis no

roedor Proechimys guyannensis no norte do estado do Paraacute (Lainson amp Shaw

1972) Proechimys cuvieri foi descrito como hospedeiro de Leishmania spp

na Guiana Francesa por Dedet et al (1985)

Um estudo de Brandatildeo-Filho et al (1994) em pequenos mamiacuteferos

provaacuteveis reservatoacuterios de L braziliensis em Amaraji Pernambuco encontrou

amostras de esfregaccedilos hepaacuteticos e esplecircnicos com amastigotas em

Nectomys squamipes N lasiurus e tambeacutem em R rattus Apoacutes quase 10

anos um estudo realizado na mesma localidade de Pernambuco identificou L

braziliensis em R rattus e N lasiurus (Brandatildeo-Filho et al 2003)

Forattini et al (1972 1973) isolaram Leishmania de Akodon arviculoides

Oryzomys nigripes e Oryzomys capito laticeps Telleria et al (1999)

identificaram Leishmania amazonensis em Akodon spp por PCR kDNA

Exames histoloacutegicos de lesotildees nos roedores Oryzomys spp Nectomys

spinosus amoenus e Nectomys rattus revelaram amastigotas compatiacuteveis com

Leishmania (Lainson amp Shaw 1970) Leishmania amazonensis foi isolada de