ACADÊMICOS:Kelton SilvaMarlon AlmeidaRichardson FrazãoOlivaldo Ataíde

MACAPÁ-APOUTUBRO/2004 www.oncogenes.com.br

E. Coli: Mais utilizada como organismo hospedeiro,disponibilidade de maiores vetores de clonagem para este.

E. coli Estuda Características Básicas da Biologia Molecular

- Estrutura e Função do Gene

S. cerevisiaeAtravés da clonagem, controle a melhora a Síntese de produtos Metabólicos

- Hormônio, tal como a Insulina;- Introdução de resistência a herbicida em uma planta cultivável.

- VETORES DE CLONAGEM PARA ORGANISMOS DIFERENTES DE E. COLI

Levedura Saccharomyces cerevisiae- Uma das mais utilizadas;

- Processo de clonagem estimulado pela descoberta do plasmídeo 2 µm;

- Vantagens da utilização do círculo 2 µm para um vetor de clonagem;

- Desvantagens da utilização do círculo 2 µm para um vetor de clonagem.

Vetores baseados no plasmídeo 2 µm- Denominados de Plasmídeos epissômicos para leveduras ou YEps;

- YEp13 = contém apenas a origem de replicação;

- YEp13 = apresenta várias características dos vetores de leveduras.

Plasmídeo 2 µm de levedura. REP1 REP2 estão envolvidos na replicação do plasmídeo, e FLP codifica uma proteína que pode converter a forma A do plasmídeo para forma B, na qual a ordem dos genes foi reorganizada pela

combinação intramolecular. A função de D não é exatamente conhecida

Outros tipos de Vetores de clonagem para leveduras

1 – Plasmídeos integrativos para levedura (YIps)

- Basicamente plasmídeos bacteriano;

- Não pode replicar-se;

- Sua sobrevivência depende de sua interação no DNA cromossomal.

2 – Plasmídeos replicativos para levedura (YRps)

- Capacidade de multiplicar-se como plasmídeos independentes;

- Possuem uma seqüência de DNA cromossômico ;

Cromossomos artificiais de leveduras

- Conseqüência da pesquisa sobre cromossomos eucarióticos

- Possuem uma seqüência de DNA cromossômico ;

- Capacidade de multiplicar-se como plasmídeos independentes;

Outros tipos de Vetores de clonagem para leveduras

Cromossomos artificiais de leveduras (YACs)

- Uma abordagem nova para a clonagem gênica;

- O desenvolvimento dos YACs foi subproduto de pesquisas sobre cromossomos eucarióticos;

- Identificando componentes fundamentais de um cromossomo, como:

- Centrômero, essencial para que os cromossomos sejam corretamente distribuídos para as células-filhas durante a divisão celular;

- Telômeros, são necessárias para as extremidades serem replicadas corretamente, além de impedirem que o cromossoma seja degradado por exonucleases;

- As origens de replicação, posições ao longo do cromossomo, nas quais a replicação do DNA inicia, similares à origem de replicação de um plasmídeo.

Foram desenvolvidos na década de 80, originando os GM

1 – Vetores baseados nos plasmídeos que ocorrem normalmente em Agrobacterium;

2 - Transferência gênica direta utilizando diversos tipos de DNA plasmidial;

3 – Vetores baseados nos vírus de plantas.

Três tipos de Vetores têm sido empregados:

- Deu origem ao atualmente chamado de OGM’s;

- Apresentando benefícios potenciais muito importantes;

- Produção de plantas resistentes a vírus e insetos.

Menor Engenheiro genético da Natureza.

- O A. tumefaciens geneticamente programa as células da planta para seu próprio benefício.

- É encontrado do Solo;

- Causador da doença do tumor da Galha em muitas espécies de plantas;

- A capacidade de causar a doença está associada a presença do Plasmídeo Ti das células bacterianas;

Percebe-se então que o Plasmídeo Ti poderia ser utilizado para introduzir novos genes no interior de células vegetais.

Se a A. tumefaciens com plasmídeo Ti modificado foi inserido pelo ferimento no caule. Somente as células do tumor da galha resultante irão possuir o gene clonado.

- Plasmídeo de Agrobacterium rhyzogenes;

- Semelhante ao Ti;

- A diferença está no T-DNA;

- O plasmídeo Ri não resulta em um tumor de Galha, mas na doença da raiz Cabeculada.

- É diferente da integração de um vetor de levedura no cromossomo, pois não há necessidade de uma região de Homologia. Entre o plasmídeo bacteriano e o DNA da planta.

- A integração ocorre aleatoriamente em qualquer cromossomo da Planta.

- O uso seria conveniente, pois a transformação seria obtida simplesmente por meio da fricção do DNA viral sobre a superfície de uma folha;

- O problema do uso, está no seu Genoma, que é o RNA, não sendo úteis como Vetores de Clonagem;

- Apenas duas classes de Vírus de DNA são utilizados, os caulimovírus e os Geminivírus.

- São usados para a síntese de proteínas Recombinantes;

- Desenvolver Técnicas para a Teoria Gênica;

- Existem dois sistemas de clonagens para Animais:

- Vetores de Clonagem para Mamíferos;

- Vetores de Clonagem para Insetos.

- A mosca-das-frutas Drosophila melanogaster, é o mais importante organismo com constituição gênica para vetores de clonagem;

- Como nenhum plasmídeo é conhecido na Drosophila, a clonagem é obtida, através de um transposon, chamado elemento “P”

- Vetores Virais não são Desenvolvidos para a clonagem gênica em Drosophila;

- Outros insetos, possuem como vetores de clonagem o vírus bacolovírus;

- A utilização dos vetores destes vírus está na produção de proteínas recombinantes.

Realizada por 3 Razões:

1 – Para obtenção de um gene nocaute;

2 – Para produção de proteína Recombinante;

3 – Na teoria Gênica

• Atualmente, os retrovírus são os vetores mais utilizados para a clonagem de genes em células de mamíferos.

- Realizada através de microinjeção de plasmídeos bacterianos, dentro do núcleo das células de mamíferos;

- É mais satisfatório que a utilização de um vetor Viral, pois evita a possibilidade de que o DNA viral infecte as células e promova mutações.

 ALBERTS, Bruee. Biologia Molecular da Célula. 3ª Edição. Porto Alegre. Artes Médicas, 1997.

BROWN, T. A. Genética – um enfoque celular. Ed: Guanabara Koogan. 3º Edição. Rio de Janeiro, 1999.

ZAHA, A. Biologia Molecular Básica. Ed. Mercado Aberto. Porto Alegre, 1996.

http://www.biomania.com.br http://router.ceap.tche.br/projetos/8sClonagem/clonagem.htm http://pt.wikipedia.org/wiki/Fago

http://www.dbio.uevora.pt/LBM/Foco/Vectores/vectores.html