Vitória Müller Rathke

1

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

INSTITUTO DE QUIacuteMICA

Vitoacuteria Muumlller Rathke

Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo por HPLC-DAD para a determinaccedilatildeo

de aacutecido foacutelico em farinhas de trigo

Porto Alegre novembro de 2016

2





Monografia apresentada junto agrave atividade de

ensino ldquoProjeto Tecnoloacutegicordquo do Curso de

Quiacutemica Industrial realizado na UFRGS sob

a supervisatildeo do Prof Eliseu Rodrigues

Prof Dr Eliseu Rodrigues

Orientador

Porto Alegre 2016

3

3

AGRADECIMENTOS

Agradeccedilo ao meu orientador Eliseu Rodrigues por toda ajuda e

empenho nesse trabalho por me ensinar a por em praacutetica os

conhecimentos sobre cromatografia por depositar confianccedila

em mim e por toda paciecircncia Ao meu chefe Jonathan Vaz

Martins Silva por todo auxiacutelio ajuda e por acreditar que esse

trabalho seria possiacutevel Aos meus colegas de trabalho e a

minha famiacutelia por acreditarem que eu era capaz de chegar ateacute

aqui As minhas grandes amigas e amigos da faculdade

principalmente agrave Letiacutecia Deacutebora Mariana e Pedro por toda

parceria apoio e amizade ao longo desses 5 anos

4

4

RESUMO

A importacircncia dos folatos para a sauacutede humana associada a sua perda

significativa durante o processamento dos alimentos levou o Brasil a estabelecer a

obrigatoriedade de fortificaccedilatildeo de farinhas de trigo e milho com no miacutenimo 150 g de

aacutecido foacutelico por 100 g de produto O monitoramento dos niacuteveis dessa vitamina nos

produtos fortificados depende de meacutetodos analiacuteticos confiaacuteveis e viaacuteveis

economicamente Neste contexto o objetivo desse trabalho foi desenvolver um meacutetodo

analiacutetico por cromatografia liacutequida de alta eficiecircncia com detector de arranjo de diodos

(HPLC-DAD) para a determinaccedilatildeo de aacutecido foacutelico em farinhas de trigo e milho Aleacutem

disso o meacutetodo foi aplicado em cinco amostras comerciais de farinha de trigo Nesse

meacutetodo o aacutecido foacutelico foi separado em uma coluna C18 utilizando um gradiente de aacutegua

e acetonitrila ambas acidificadas com 01 de aacutecido foacutermico O meacutetodo foi

desenvolvido e validado com sucesso apresentando um custo baixo por amostra

facilidade na sua execuccedilatildeo linearidade na faixa de concentraccedilatildeo de 013 a 300 microgmL-

1 baixos valores de limites de detecccedilatildeo (004 gmL-1) e quantificaccedilatildeo (011 gmL-1)

recuperaccedilatildeo na faixa de 96-113 e repetibilidade inferior a 10 A aplicaccedilatildeo do

meacutetodo revelou que 40 das amostras comerciais de farinha de trigo analisadas natildeo

estatildeo de acordo com a legislaccedilatildeo brasileira Nossos resultados sugerem que os oacutergatildeos de

fiscalizaccedilatildeo devem atuar de maneira mais efetiva no monitoramento dos niacuteveis de aacutecido

foacutelico adicionados na farinha de trigo bem como as induacutestrias devem adotar um

controle de qualidade maior na fortificaccedilatildeo destes produtos

Palavras-chave vitaminas aacutecido foacutelico validaccedilatildeo fortificaccedilatildeo

5

5

ABSTRACT

The importance of folates to human health associated with their significant

loss during food processing led Brazil to establish the obligatory fortification of wheat

and corn flours with at least 150 g of folic acid per 100 g of product Monitoring

vitamin levels in fortified products depends on reliable and economically feasible

analytical methods In this context the objective of this work was to develop an

analytical method by high performance liquid chromatography with diode arrangement

detector (HPLC-DAD) for the determination of folic acid in wheat and corn flours In

addition the method was applied to five commercial samples of wheat flour In this

method folic acid was separated on a C18 column using a gradient of water and

acetonitrile both acidified with 01 formic acid The method was developed and

validated successfully presenting a low cost per sample ease of execution linearity in

the concentration range of 013 to 300 μgmL-1 low detection limit values (004

gmL-1) and quantification (011 gmL-1) recovery in the range of 96-113 and

repeatability less than 10 The application of the method revealed that 40 of the

commercial samples of wheat flour analyzed are not in accordance with the Brazilian

legislation Our results suggest that surveillance agencies should act more effectively in

monitoring the folic acid levels added in wheat flour as well as industries should adopt

a higher quality control in the fortification of these products

Key words vitamins folic acid validation fortification

6

6

LISTAS DE FIGURAS

Figura 1 Estrutura quiacutemica do aacutecido foacutelico 13

Figura 2 Estrutura quiacutemica dos folatos (nlt10) 14

Figura 3 Estabilidade do aacutecido foacutelico (05 gmL-1) dissolvido em diferentes soluccedilotildees

23


233


24

Figura 6 Curva analiacutetica de aacutecido foacutelico 255

Figura 7 Cromatograma obtido por HPLC-DAD do padratildeo de aacutecido foacutelico (30 gmL-

1) As condiccedilotildees cromatograacuteficas estatildeo descritas no texto 255

Figura 8 Cromatograma obtido por HPLC-DAD do aacutecido foacutelico de uma amostra de

farinha de trigo As condiccedilotildees cromatograacuteficas estatildeo descritas no texto 277


farinha de milho As condiccedilotildees cromatograacuteficas estatildeo descritas no texto 29

7

7

LISTAS DE TABELAS

Tabela 1 Concentraccedilatildeo meacutedia de folatos em alguns alimentos 14

Tabela 2 Recomendaccedilatildeo nutricional de folatos para cada idade e sexo 15

Tabela 3 Porcentagem de degradaccedilatildeo em tampatildeo fosfato pH 70 tampatildeo fosfato pH

90 e na fase moacutevel de trecircs concentraccedilotildees da curva analiacutetica 24

Tabela 4 Recuperaccedilatildeo e repetibilidade do meacutetodo 26

Tabela 5 Teor de aacutecido foacutelico em amostras comerciais de farinha de trigo 27

Tabela 6 Avaliaccedilatildeo de custos para o desenvolvimento do projeto tecnoloacutegico 30

Tabela 7 Avaliaccedilatildeo de custos fixos 31

Tabela 8 Avaliaccedilatildeo de custos para a anaacutelise de uma amostra em triplicata 32

8

8

LISTA DE ABREVIATURAS

UFRGS - Universidade Federal do Rio Grande do Sul

ICTA - Instituto de Ciecircncia dos Alimentos

CIENTEC - Fundaccedilatildeo de Ciecircncia e Tecnologia

ANVISA - Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria

INMETRO - Instituto Nacional de Metrologia Qualidade e Tecnologia

RDC - Resoluccedilatildeo da Diretoria Colegiada

HPLC - High Performance Liquid Chromatography

DAD - Detector de Arranjo de Diodos

THF - Tetrahidrofolato

5-MTHF - 5-Metiltetraidrofolato

5-FTHF - 5-Formiltetraidrofolato

UV-Vis - Espectroscopia Ultravioleta no Visiacutevel

PTFE - Politetrafluoretileno

LD - Limite de Detecccedilatildeo

LQ - Limite de Quantificaccedilatildeo

DPR - Desvio-padratildeo Relativo

SPE - Extraccedilatildeo em Fase Soacutelida

9

9

SUMAacuteRIO

AGRADECIMENTOS 3

RESUMO 4

ABSTRACT 5

LISTAS DE FIGURAS 6

LISTAS DE TABELAS 7

LISTA DE ABREVIATURAS 8

SUMAacuteRIO 9

1 INTRODUCcedilAtildeO 11

2 OBJETIVO 12

3 REVISAtildeO BIBLIOGRAacuteFICA 13

31 Estrutura propriedades quiacutemicas e fiacutesicas importacircncia dos folatos para a sauacutede e

fontes 13

32 Perdas com o processamento 15

33 Legislaccedilatildeo brasileira 16

34 Meacutetodos para a determinaccedilatildeo de folatos e aacutecido foacutelico em alimentos 16

4 METODOLOGIA 19

41 Materiais 19

411 Solventes e reagentes 19

412 Amostras 19

42 Meacutetodos 19

10

10

421 Preparo do padratildeo de aacutecido foacutelico 19

422 Preparo da curva analiacutetica de aacutecido foacutelico 20

423 Extraccedilatildeo do aacutecido foacutelico da farinha de trigo 20

424 Condiccedilotildees cromatograacuteficas 20

425 Quantificaccedilatildeo 21

426 Validaccedilatildeo do Meacutetodo 21

5 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO 22

51 Experimentos iniciais 22

52 Validaccedilatildeo do meacutetodo 24

521 Linearidade 24

522 Recuperaccedilatildeo e repetibilidade 26

53 Aplicaccedilatildeo do meacutetodo 26

531 Farinhas de trigo 27

532 Farinhas de milho 28

54 Avaliaccedilatildeo de custos 29

6 CONCLUSAtildeO 34

7 REFEREcircNCIAS 35

11

11

1 INTRODUCcedilAtildeO

Os folatos satildeo importantes como coenzimas no metabolismo de aacutecidos nucleacuteicos

e aminoaacutecidos atuando como mediadores nas transformaccedilotildees de carbonos A

deficiecircncia severa de folatos leva agrave anemia megaloblaacutestica e problemas na formaccedilatildeo do

tubo neural em fetos Considerando isso a suplementaccedilatildeo ou fortificaccedilatildeo tem sido

sugerida natildeo soacute para lactantes e graacutevidas mas tambeacutem para mulheres com intenccedilatildeo de

engravidar A importacircncia dos folatos para a sauacutede associada a sua significativa perda

durante o processamento dos alimentos levou vaacuterios paiacuteses como o Brasil a incluir na

legislaccedilatildeo a obrigatoriedade de fortificaccedilatildeo de farinhas com folatos sendo que a forma

quiacutemica escolhida eacute a de aacutecido foacutelico (ANVISA) A RDC nordm 344 de 13 de dezembro de

2002 estabelece que as farinhas de trigo e milho devem conter no miacutenimo 150 g de

aacutecido foacutelico a cada 100 g de produto

O monitoramento da concentraccedilatildeo de aacutecido foacutelico pelas induacutestrias produtoras de

farinhas de trigo e milho depende de meacutetodos analiacuteticos confiaacuteveis e viaacuteveis

economicamente Considerando isso neste trabalho foi conduzida a validaccedilatildeo de um

meacutetodo por cromatografia liacutequida de alta eficiecircncia acoplada a um detector de arranjo

de diodos (HPLC-DAD) para a determinaccedilatildeo de aacutecido foacutelico em farinhas de trigo e

milho

12

12

2 OBJETIVO

O objetivo deste trabalho foi desenvolver um meacutetodo e validaacute-lo por HPLC-

DAD para a determinaccedilatildeo de aacutecido foacutelico em farinhas de trigo e milho o qual seraacute

incluiacutedo nos serviccedilos de anaacutelise de alimentos prestados por uma empresa

Para a realizaccedilatildeo desse objetivo foram realizadas as seguintes etapas (1deg)

pesquisa na literatura dos meacutetodos por HPLC-DAD publicados para a determinaccedilatildeo de

aacutecido foacutelico em farinhas (2deg) otimizaccedilatildeo das condiccedilotildees de preparo do padratildeo de aacutecido

foacutelico (3deg) validaccedilatildeo do meacutetodo por HPLC-DAD avaliando os seguintes paracircmetros

analiacuteticos linearidade limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo repetibilidade e exatidatildeo

(atraveacutes de testes de recuperaccedilatildeo) e finalmente (4deg) aplicaccedilatildeo do meacutetodo validado em

amostras de farinha de trigo

13

13

3 REVISAtildeO BIBLIOGRAacuteFICA

31 Estrutura propriedades quiacutemicas e fiacutesicas importacircncia dos folatos para a

sauacutede e fontes

O aacutecido foacutelico (C19H19N7O6O) tambeacutem conhecido como vitamina B9

representa a forma sinteacutetica e mais estaacutevel dos folatos11 A sua estrutura eacute composta por

um grupo pteridina um aacutecido p-amino benzoico e um resiacuteduo de glutamato (Figura 1)

O aacutecido foacutelico eacute um composto hidrossoluacutevel amarelo-alaranjado inodoro e cristalino

Ele decompotildee-se a 250 degC possui baixa solubilidade em aacutegua com pH neutro sendo

bastante soluacutevel em soluccedilatildeo aquosa aacutecida ou alcalina e insoluacutevel em solventes

orgacircnicos12

Nos alimentos a vitamina B9 estaacute na forma de folatos Os folatos possuem uma

estrutura de aacutecido pteroilpoliglutacircmico (Figura 2) com o grupo pteridina reduzido e

com um nuacutemero variaacutevel de resiacuteduos de glutamato Na Tabela 1 estatildeo apresentados os

teores de folatos de alguns alimentos A anaacutelise dessa tabela permite destacar alguns

alimentos ricos em folatos tais como o fiacutegado o farelo de trigo e o espinafre12

Fonte Autora Vitoacuteria Muumlller Rathke

O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2

Figura 1 Estrutura quiacutemica do aacutecido foacutelico

14

14


Tabela 1 Concentraccedilatildeo meacutedia de folatos em alguns alimentos

Fonte (RG-nutri 2010)

A absorccedilatildeo intestinal do aacutecido foacutelico da dieta eacute de 23-60 enquanto nos

suplementos ou alimentos enriquecidos eacute de 9823

Os folatos satildeo importantes para processos bioquiacutemicos como a formaccedilatildeo de

proteiacutenas estruturais hemoglobina5 e essenciais pra a formaccedilatildeo dos gloacutebulos vermelhos

para a siacutentese de aacutecidos nucleicos e para o desenvolvimento do sistema nervoso e da

medula oacutessea4 Durante a gravidez eacute fundamental para a sauacutede do feto visto que

participa do processo de multiplicaccedilatildeo celular formaccedilatildeo do tubo neural no aumento

dos eritroacutecitos alargamento do uacutetero e crescimento da placenta245 Os requerimentos

dessa vitamina variam com o sexo a idade o periacuteodo de gestaccedilatildeo e lactaccedilatildeo (Tabela 2)

Concentraccedilatildeo de folatos em g100g-1

Fiacutegado de galinha cru 590

Farelo de trigo 260

Espinafre cozido 140

Broacutecolis cozido 110

Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n

Figura 2 Estrutura quiacutemica dos folatos (nlt10)

15

15

Tabela 2 Recomendaccedilatildeo nutricional de folatos para cada idade e sexo

Fonte Dietary Reference Intakes Recommended Intakes for Individuals Vitamins

Food and Nutrition Board Institute of Medicine National Academies 2004

32 Perdas com o processamento

Em alimentos a estabilidade dos folatos eacute afetada pelas caracteriacutesticas da matriz

dos meacutetodos de processamento industriais ou caseiros empregados e de fatores como

luz pH temperatura empregados no processamento13 Processos como a refrigeraccedilatildeo o

congelamento a desidrataccedilatildeo a fermentaccedilatildeo a pasteurizaccedilatildeo e esterilizaccedilatildeo podem

influenciar significativamente na retenccedilatildeo dessa vitamina nos alimentos14

A estabilidade dos folatos eacute maior em meio alcalino do que em meio aacutecido

devido a isso se utiliza tampotildees neutros ou baacutesicos tanto na extraccedilatildeo quanto na

Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600

Lactaccedilatildeo 500

16

16

quantificaccedilatildeo do aacutecido foacutelico7 Os folatos apresentam estabilidades diferentes sendo o

aacutecido foacutelico o mais estaacutevel e atraente para os fabricantes jaacute que o seu processo de

fabricaccedilatildeo eacute mais barato A lixiviaccedilatildeo eacute outro mecanismo importante envolvido em

perdas de folatos principalmente quando frutas e vegetais satildeo processados em contato

com a aacutegua18 como no branqueamento

A degradaccedilatildeo dos folatos eacute raacutepida principalmente em temperaturas altas e em

presenccedila de oxigecircnio podendo ser evitadadiminuiacuteda por antioxidantes Em geral o

processamento de alimentos a temperaturas elevadas resulta em perdas consideraacuteveis de

folatos a cocccedilatildeo dos alimentos reduz bastante o seu teor16 Por exemplo a retenccedilatildeo dos

folatos em vegetais apoacutes o cozimento variou de 17 para 87 no caso do

Tetrahidrofolato (THF) 53 a 94 para 5-Metiltetraidrofolato (5-MTHF) e 39 a 108

para 5-formiltetraidrofolato (5-FTHF) dependendo da matriz de alimento o tipo de

isocircmero e os meacutetodos de cozimento utilizados19

33 Legislaccedilatildeo brasileira

Devido aos altos iacutendices de anemia megaloblaacutestica e de doenccedilas causadas pela

deficiecircncia de folatos2 o Ministeacuterio da Sauacutede e a Anvisa tornaram obrigatoacuterio a

fortificaccedilatildeo das farinhas de trigo e milho1 com aacutecido foacutelico

Em dezembro de 2002 foi publicada a Resoluccedilatildeo ndash RDC no 344 que estabelece

que as farinhas de trigo e de milho vendidas diretamente ao consumidor e aquelas

utilizadas como mateacuteria-prima pelas induacutestrias na fabricaccedilatildeo de outros produtos devem

ser fortificadas com no miacutenimo 150 g a cada 100 g de farinha1 A escolha desses

produtos baseia-se no grande consumo da populaccedilatildeo em geral de produtos feitos a partir

dessas farinhas

34 Meacutetodos para a determinaccedilatildeo de folatos e aacutecido foacutelico em alimentos

Na literatura haacute um grande nuacutemero de meacutetodos descritos para a determinaccedilatildeo de

folatos e aacutecido foacutelico os quais podem ser divididos em (1) meacutetodos

espectrofotomeacutetricos (2) meacutetodos microbioloacutegicos e (3) meacutetodos por cromatografia

17

17

liacutequida de alta eficiecircncia (HPLC) utilizando detector de fluorescecircncia ou UV-Vis ou

detector de arranjo de diodos

A determinaccedilatildeo de aacutecido foacutelico diretamente por espectrofotometria foi relada na

literatura Neste meacutetodo o aacutecido foacutelico foi extraiacutedo usando soluccedilatildeo de NaOH (01

molL-1) e depois foi realizada a leitura no comprimento de maacutexima absorccedilatildeo do aacutecido

foacutelico ou seja a 280 nm Os resultados encontrados com esse meacutetodo foram de 96-

100 de recuperaccedilatildeo 034 de repetitibilidade e limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo

de 008 e 024 μgmL-1 respectivamente8

O meacutetodo microbioloacutegico baseia-se na relaccedilatildeo quantitativa entre o conteuacutedo de

folatos e o crescimento dos microrganismos a partir da medida da turbidez da soluccedilatildeo

O crescimento dos microrganismos depende da quantidade de folatos presente na

amostra sendo que este crescimento eacute proporcional agrave turbidez do meio Este meacutetodo

que requer equipamentos de baixo custo determina a quantidade total de folatos e eacute

muito sensiacutevel Poreacutem pode ocorrer interferecircncia de outros compostos presentes na

matriz que podem estimular ou inibir o crescimento dos microrganismos Aleacutem disso

pode ocorrer interferecircncia de outros compostos que absorvem a 280 nm tais como

proteiacutenas e compostos fenoacutelicos Assim natildeo eacute um meacutetodo com grande exatidatildeo16

Outro meacutetodo utilizado eacute a cromatografia liacutequida de alta eficiecircncia (HPLC) com

detecccedilatildeo por fluorescecircncia Nesse meacutetodo a moleacutecula sofre derivatizaccedilatildeo preacute-coluna

Pode ser utilizado um oxidante de ceacuterio (IV) tri-hidroxi-hidroperoacutexido de reator

empacotado para a oxidaccedilatildeo O meacutetodo eacute baseado na clivagem oxidativa do aacutecido foacutelico

em produtos altamente fluorescentes como 2-amino-4-hidroxipteridina 6-

carboxaldeiacutedo e o aacutecido 2-amino-4-hidroxipteridina-6-carboxiacutelico20 Essa teacutecnica utiliza

comprimentos de onda de excitaccedilatildeo e emissatildeo de 367 e 463 nm respectivamente O

meacutetodo mostrou recuperaccedilatildeo de 9931 desvio-padratildeo relativo de 17 e limite de

detecccedilatildeo de 007 ngmL-1 20

O meacutetodo mais largamente utilizado para a determinaccedilatildeo de aacutecido foacutelico e

folatos eacute a cromatografia liacutequida de alta eficiecircncia com detector de arranjo de diodos

tanto para farinhas quanto para outros alimentos Nesse meacutetodo jaacute foi relatada a

separaccedilatildeo dos folatos utilizando tanto colunas C18 quanto colunas C30 poreacutem a mais

amplamente utilizada eacute a C18 As curvas analiacuteticas obtidas apresentam uma boa

linearidade com R2 gt09915 Aleacutem disso foram alcanccedilados baixos limites de detecccedilatildeo e

18

18

quantificaccedilatildeo 006 e 018 gg-1 respectivamente7 assim como recuperaccedilatildeo de 90-104

15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais

411 Solventes e reagentes

A acetonitrila (grau HPLC) e o metanol (grau HPLC) foram adquiridos da JT

Baker O aacutecido foacutermico e o hidroacutexido de soacutedio foram comprados respectivamente da

Merck e da Dinamica O fosfato dissoacutedico foi adquirido da Nuclear Os filtros utilizados

para a filtraccedilatildeo das fases moacuteveis foram o acetato de celulose (Sartorius Stedim 02 m)

para a fase aquosa e o PTFE (Sartorius Stedim 045m) para a fase organica O padratildeo

de aacutecido foacutelico foi adquirido da ecircxodo Cientiacutefica (982 de pureza) O filtro utilizado

para as amostras foi de acetato de celulose (Sartorius Stedim 02 m) Todas as

soluccedilotildees foram preparadas com aacutegua ultrapura produzida por um sistema Milli-Q

412 Amostras

O meacutetodo foi aplicado em 5 amostras de farinha de trigo do tipo 1 adquiridas em

um supermercado de Satildeo Leopoldo - RS

Uma amostra branco (sem adiccedilatildeo de aacutecido foacutelico) foi doada pela empresa Tondo

SA As amostras foram acondicionadas nas suas embalagens originais ateacute o momento

das anaacutelises

42 Meacutetodos

421 Preparo do padratildeo de aacutecido foacutelico

Uma soluccedilatildeo-estoque de aacutecido foacutelico (500 μgmL-1) foi preparada dissolvendo o

padratildeo em uma soluccedilatildeo de hidroacutexido de soacutedio (01 molL-1 pH 127)

20

20

422 Preparo da curva analiacutetica de aacutecido foacutelico

A partir da soluccedilatildeo-estoque (500 microgmL-1) foram preparadas 8 concentraccedilotildees de

aacutecido foacutelico (0125 a 300 microgmL-1) atraveacutes da diluiccedilatildeo em tampatildeo fosfato de soacutedio

dibaacutesico (005 molL-1 pH 90)

423 Extraccedilatildeo do aacutecido foacutelico da farinha de trigo

A extraccedilatildeo foi realizada adicionando 5 mL da soluccedilatildeo tampatildeo fosfato de soacutedio

dibaacutesico (005 molL-1 pH 90) agrave 05g de farinha de trigo em um tubo falcon Essa

mistura foi submetida agrave agitaccedilatildeo em vortex (Phoenix Luferco Modelo AP56) por 5

min O extrato obtido foi centrifugado a 3000 g por 15 min O sobrenadante foi

recolhido submetido a uma nova centrifugaccedilatildeo a 13000 g por 5 min e filtrado em filtro

de acetato de celulose e injetado no HPLC-DAD

424 Condiccedilotildees cromatograacuteficas

A determinaccedilatildeo de aacutecido foacutelico foi realizada por cromatografia liacutequida de alta

eficiecircncia em um HPLC da marca Shimadzu equipado com um desgaseficador (DGU-

20A3R) duas bombas (LC-20AD) um injetor automaacutetico (Shimadzu SIL-20A HT) um

forno de coluna (Shimadzu CTO-20A) um software (Shimadzu LC Solution Version

125 SP4) e um detector de arranjo de diodos (DAD) (Shimadzu SPD-M20A) O aacutecido

foacutelico foi separado em uma coluna C18 X-Bridge Shield RP18 (150mm x 46mm x

5microm) antecedida por uma coluna de guarda Waters XBridge Shield RP18 5 m A

temperatura da coluna foi mantida em 35 ordmC A separaccedilatildeo do aacutecido foacutelico foi realizada

utilizando um gradiente de eluiccedilatildeo com acetonitrila (Fase moacutevel B) e aacutegua acidificada

com aacutecido foacutermico (01 pH 26) (Fase moacutevel A) O gradiente foi iniciado com 8 de

Fase moacutevel B e durante 10 min foi linearmente aumentado para 26 que foi mantida

isocraticamente por 5 min Apoacutes esse tempo a concentraccedilatildeo de Fase moacutevel B foi

aumentada linearmente durante 6 min para 50 e mantida isocraticamente por 9 min

Posteriormente a proporccedilatildeo de Fase moacutevel B voltou para 8 dentro de 5 min O fluxo

foi mantido em 07 mLmin-1 e o volume de injeccedilatildeo foi de 20microL O aacutecido foacutelico foi

monitorado no comprimento de onda de 280 nm

21

21

425 Quantificaccedilatildeo

A quantificaccedilatildeo foi realizada utilizando uma curva analiacutetica de aacutecido foacutelico

nas concentraccedilotildees de 0125 a 300 microgmL-1 Para construir a curva analiacutetca os volumes

adequados de soluccedilatildeo estoque foram diluiacutedos na soluccedilatildeo tampatildeo de fosfato de soacutedio

bibaacutesico (005 molL-1 pH 90) para proporcionar as concentraccedilotildees da curva Para essa

determinaccedilatildeo quantitativa foi realizada uma anaacutelise de regressatildeo linear sendo os valores

de x as concentraccedilotildees de aacutecido foacutelico e os valores de y as respectivas aacutereas dos picos

cromatograacuteficos

426 Validaccedilatildeo do Meacutetodo

A validaccedilatildeo do meacutetodo foi realizada avaliando os seguintes parametros

analiacuteticos linearidade limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo recuperaccedilatildeo e repetibilidade

A linearidade foi estimada pelo valor do R2 obtido da anaacutelise de regressatildeo e o

criteacuterio de aceitaccedilatildeo segundo o Inmetro e a Anvisa estaacute descrito abaixo24 Os valos de

limites de detecccedilatildeo (LD) e quantificaccedilatildeo (LQ) foram calculados a partir da curva

analiacutetica de acordo com as equaccedilotildees abaixo

Criteacuterio de aceitaccedilatildeo Inmetro Rsup2 ge 090

Criteacuterio de aceitaccedilatildeo Anvisa Rsup2 ge 099

S

sx33LD Equaccedilatildeo 1

S

sx10LQ Equaccedilatildeo 2

onde

s = erro padratildeo da curva analiacutetica

S = coeficiente angular da curva analiacutetica

22

22

5 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

51 Experimentos iniciais

O desenvolvimento do meacutetodo e sua validaccedilatildeo apresentada nesse trabalho foi

baseada em um meacutetodo existente12 com algumas modificaccedilotildees A primeira modificaccedilatildeo

foi em relaccedilatildeo ao aacutecido utilizado para acidificar as fases moacuteveis onde foi substituiacutedo o

aacutecido aceacutetico pelo aacutecido foacutermico As fases moacuteveis foram inicialmente acidificadas com

1 de aacutecido foacutermico poreacutem o pH da fase moacutevel ficou muito baixo (pH 21) Um pH

nessa faixa pode acarretar a hidroacutelise da fase estacionaacuteria da coluna cromatograacutefica

Assim modificou-se o meacutetodo para uma concentraccedilatildeo de 01 de aacutecido foacutermico no

qual a fase moacutevel apresentou um pH de 26

Na sequecircncia foram iniciados os experimentos para a construccedilatildeo da curva

analiacutetica seguindo exatamente o meacutetodo descrito por Alaburda et al (2008) onde a

curva analiacutetica foi preparada em tampatildeo fosfato pH 70 As curvas analiacuteticas preparadas

com esse tampatildeo fosfato pH 70 apresentaram grande variabilidade entre os dias

Assim surgiu a hipoacutetese de que o aacutecido foacutelico estava sofrendo degradaccedilatildeo ao longo do

experimento nessa condiccedilatildeo de pH

Para avaliar a hipoacutetese conduzimos um experimento para avaliar a estabilidade

do aacutecido foacutelico A estabilidade foi avaliada em trecircs diferentes condiccedilotildees (1) aacutecido foacutelico

dissolvido nas fases moacuteveis (composiccedilatildeo inicial do gradiente) (2) tampatildeo fosfato pH

70 e (3) tampatildeo fosfato de soacutedio bibaacutesico (01 molL-1 pH 90) O experimento foi

conduzido atraveacutes do monitoramento da absorbancia do aacutecido foacutelico a 280 nm durante 4

horas a temperatura ambiente (20plusmn2 degC) No experimento foi avaliada a estabilidade de

trecircs concentraccedilotildees de aacutecido foacutelico (05 - 10 - 30 gmL-1) Os resultados (Figuras 3 4

5 e Tabela 3) indicaram que o aacutecido foacutelico degrada significativamente em tampatildeo

fosfato (pH 70) o que explica a grande variaccedilatildeo entre os dias dos coeficientes

angulares das curvas analiacuteticas obtidas inicialmente Em contrapartida os resultados

indicaram que o aacutecido foacutelico eacute mais estaacutevel em tampatildeo fosfato pH 90 Assim a partir

desse experimento as concentraccedilotildees da curva analiacutetica e as amostras foram preparadas

utilizando tambeacutem tampatildeo fosfato pH 90

23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)

Tampatildeo de fosfato pH70


Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)

Tampatildeo fosfato pH

70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)

Tampatildeo de fosfato pH 70


Fase moacutevel

Tabela 3 Porcentagem de degradaccedilatildeo em tampatildeo fosfato pH 70 tampatildeo

fosfato pH 90 e na fase moacutevel de trecircs concentraccedilotildees da curva analiacutetica

52 Validaccedilatildeo do meacutetodo

521 Linearidade

A determinaccedilatildeo da linearidade foi obtida a partir da construccedilatildeo de trecircs curvas

analiacuteticas independentes Os dados obtidos foram submetidos agrave anaacutelise de regressatildeo da

qual foram obtidas a equaccedilatildeo da reta (y = ax + b) valor do R2 e o valor do erro padratildeo

de degradaccedilatildeo pH 70 pH 90 Fase moacutevel

05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992

Erro padratildeo = 8254

0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a

Concentraccedilatildeo (gmL-1)

O valor de R2 obtido (Figura 6) confirma que o meacutetodo possui boa linearidade

na faixa de concentraccedilatildeo de 0125 a 300 gmL-1 Os valores dos limites de detecccedilatildeo e

quantificaccedilatildeo foram de 004 e 011 gmL-1 respectivamente Na Figura 7 eacute

apresentado um cromatograma caracteriacutestico do padratildeo de aacutecido foacutelico

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)

Figura 6 Curva analiacutetica de aacutecido foacutelico


1)As condiccedilotildees cromatograacuteficas estatildeo descritas no texto

AacuteCIDO FOacuteLICO

26

26

522 Recuperaccedilatildeo e repetibilidade

Com o objetivo de avaliar a exatidatildeo foram realizadas testes de recuperaccedilatildeo na

amostra branco Os resultados de recuperaccedilatildeo foram utilizados para estimar a

repetibilidade do meacutetodo A primeira natildeo foi bem sucedida O limitante nessa etapa foi a

pequena massa de aacutecido foacutelico que tiacutenhamos que medir para adicionar agrave farinha Como

tiacutenhamos 1 kg de amostra branco era necessaacuterio adicionar 15 mg de padratildeo Contudo

essa medida em balanccedila analiacutetica apresentou um grande erro analiacutetico sendo obtidos

valores de recuperaccedilatildeo muito superiores a 100

Portanto optou-se por uma adiccedilatildeo de padratildeo em soluccedilatildeo (soluccedilatildeo de 20 μgmL-

1) diretamente na via de anaacutelise em 3 replicatas de amostra branco A recuperaccedilatildeo foi

realizada para a concentraccedilatildeo de 150 μg100g-1 Os resultados obtidos estatildeo descritos

abaixo na Tabela 4

Tabela 4 Recuperaccedilatildeo e repetibilidade do meacutetodo

Replicata Concentraccedilatildeo de aacutecido foacutelico (microg100g-1) Recuperaccedilatildeo

1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9

O paracircmetro para uma boa recuperaccedilatildeo de acordo com o INMETRO para

concentraccedilotildees de gmL-1 eacute valores na faixa de 80-120 entatildeo eacute possiacutevel afirmar que

se obteve bons resultados A repetibilidade intra-dia do meacutetodo foi estimada pela

avaliaccedilatildeo dos resultados das trecircs replicatas de amostras branco que foram fortificadas

Os resultados (Tabela 4) indicam que o meacutetodo possui uma boa repetibilidade com um

DPR menor do que 10

53 Aplicaccedilatildeo do meacutetodo

27

27

531 Farinhas de trigo

O meacutetodo foi aplicado em 5 amostras de farinha de trigo Na Figura 8 eacute

mostrada a separaccedilatildeo do aacutecido foacutelico e na Tabela 5 os resultados encontrados

Tabela 5 Teor de aacutecido foacutelico em amostras comerciais de farinha de trigo

Marca

Meacutedia plusmn desvio-padratildeo

(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29


farinha de trigo As condiccedilotildees cromatograacuteficas estatildeo descritas no texto

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)

aacutecido foacutelico

28

28

Os resultados dos teores de aacutecido foacutelico nas amostras de farinha de trigo

analisadas mostraram que 40 das farinhas de trigo estatildeo com a concentraccedilatildeo abaixo

do miacutenimo estabelecido pela legislaccedilatildeo brasileira (150 g100g-1) Essa menor

concentraccedilatildeo de aacutecido foacutelico pode ter ocorrido devido agrave adiccedilatildeo proposital de menores

quantidades ou pode estar relacionado agrave falta de controle de qualidade na etapa de

fortificaccedilatildeo da farinha de trigo na induacutestria

Em estudo com farinhas de trigo consumidas no Brasil foi encontrada uma

porcentagem similar (51) de amostras de farinha de trigo com teores de aacutecido foacutelico

abaixo do miacutenimo estabelecido pela legislaccedilatildeo brasileira7

Essa menor concentraccedilatildeo de aacutecido foacutelico encontrada em uma porcentagem

significativa de amostras de farinha de trigo tem como principal consequecircncia agrave

disponibilizaccedilatildeo de um produto com um menor valor nutricional em relaccedilatildeo a essa

vitamina comprometendo seriamente o objetivo da fortificaccedilatildeo Um estudo sobre a

importacircncia da correta fortificaccedilatildeo foi realizado nos Estados Unidos onde se verificou

que aproximadamente 20 da populaccedilatildeo americana consome menos do que a metade

da ingestatildeo diaacuteria recomendada12 Jaacute no Brasil 152 da populaccedilatildeo brasileira apresenta

deficiecircncia em aacutecido foacutelico22 Um maior estudo foi realizado sobre o aumento dessa

vitamina no organismo apoacutes um mecircs de ingestatildeo de farinhas de trigo e milho

fortificadas e houve um aumento consideraacutevel tanto para crianccedilas quanto para adultos

de respectivamente 57 e 17422 O enriquecimento dos alimentos inclusive das

farinhas tem sido uma estrateacutegia para aumentar os niacuteveis de folatos tendo a vantagem

de alcanccedilar uma ampla parte da populaccedilatildeo sem a necessidade de mudanccedilas nos haacutebitos

alimentares16 sendo uma forma mais eficaz devido ao baixo custo quando comparado

com mudanccedilas nas dietas ou administraccedilatildeo de suplementos21

Depois do iniacutecio da fortificaccedilatildeo obrigatoacuteria das farinhas os niacuteveis meacutedios de

folato no soro sanguiacuteneo em mulheres natildeo graacutevidas mas em idade reprodutiacutevel mais do

que dobraram A fortificaccedilatildeo tem sido responsaacutevel pela reduccedilatildeo de 16-78 de defeitos

do tubo neural16

532 Farinhas de milho

29

29

Natildeo foi possiacutevel aplicar o meacutetodo validado as amostras de de farinha de milho

Apenas uma amostra de farinha de milho foi testada e a anaacutelise do cromatograma

obtido indicou uma co-eluiccedilatildeo (Figura 9)

Uma possiacutevel soluccedilatildeo futura para a determinaccedilatildeo de aacutecido foacutelico em farinha de

milho seraacute a utilizaccedilatildeo da teacutecnica de extraccedilatildeo em fase soacutelida (SPE) A teacutecnica SPE

apresenta diversas vantagens com relaccedilatildeo ao meacutetodo claacutessico utilizado nesse trabalho

tais como praticidade melhor separaccedilatildeo maior sensibilidade poreacutem tem algumas

limitaccedilotildees como a etapa de dessorccedilatildeo do analito aprisionado no cartucho de SPE que

requer geralmente o uso de solventes toacutexicos17 Natildeo foi utilizada nesse trabalho devido

agrave falta da mesma no ICTA e a sua compra levaria mais tempo do que o disponiacutevel para a

finalizaccedilatildeo desse projeto tecnoloacutegico

54 Avaliaccedilatildeo de custos

Os custos foram avaliados considerando o desenvolvimento de uma curva

analiacutetica com 8 pontos e a anaacutelise de uma amostra em triplicata As cotaccedilotildees de preccedilos

foram realizadas na distribuidora VWR que dispotildee de vaacuterias marcas como Merck e J T


farinha de milho As condiccedilotildees cromatograacuteficas estatildeo descritas no texto

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)

aacutecido foacutelico + outros

compostos

30

30

Baker e tambeacutem na Sigma-Aldrich Os valores utilizados para a construccedilatildeo do preccedilo

final satildeo baseados no menor valor encontrado conforme consta na Tabela 6

Tabela 6 Avaliaccedilatildeo de custos para o desenvolvimento do projeto tecnoloacutegico

a Sigma b Distribuidora VWR c Sartorius d Unifil

Para calcular o valor final para a execuccedilatildeo dessa anaacutelise deve-se levar em conta

gastos como energia (HPLC-DAD centriacutefuga computador e voacutertex) assim como o

custo relativo de matildeo de obra e o preccedilo das lampadas do detector que satildeo caras e tecircm

limite de uso conforme consta na Tabela 7 Em todos os valores satildeo considerados os

Reagente Tamanho da

embalagem Preccedilo (R$)

Quantidade

utilizada Custo (R$)

Acetonitrila (grau HPLC) 4L 8154b 15L 3058

Metanol (grau HPLC) 4L 1380a 2L 690

aacutecido Foacutermico (98-100) 1L 3273b 3mL 098

Hidroacutexido de Soacutedio

(pellets) 1kg 4302a 2g 0086

Fosfato Dissoacutedico Anidro 1kg 5302a 14g 074

Padratildeo

aacutecido Foacutelico (gt98) 100g 18789a 50mg 094

Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100

unid 1200c 2unid 240

Membrana filtrante Acetato

de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012

Membrana Teflon (PTFE)

022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31

gastos por kWh dos equipamentos utilizados no Instituto de Ciecircncia e Tecnologia de

Alimentos da UFRGS e considerando o valor em reais por kWh da AES SUL (1kWh =

R$ 100) Os valores de depreciaccedilatildeo do aparelho natildeo foram colocados nesse trabalho

pois dependem de cada aparelho

Tabela 7 Avaliaccedilatildeo de custos fixos

Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140

Centriacutefuga 2 200 1h 20

Vortex 013 013 15min 003

Computador 025 025 9h 225

Lacircmpada D2 (Deuteacuterio) 203 203 9h 183

Lacircmpada W (Tungstecircnio) 011 011 9h 103

Matildeo-de-obra 2619 10h 2619

Total (R$) 2994

Valor considerando a matildeo-de-obra de um funcionaacuterio teacutecnico da Fundaccedilatildeo de Ciecircncia

e Tecnologia (CIENTEC)

Entatildeo o valor final para essa anaacutelise considerando a execuccedilatildeo da curva de

calibraccedilatildeo e uma amostra com trecircs replicatas eacute de R$ 71940

Na empresa prestadora de serviccedilo de anaacutelise o provaacutevel caacutelculo de custo para

essa anaacutelise originaraacute um valor final bem inferior ao valor final apresentado Na

empresa eacute feito um caacutelculo de gastos por amostra e mais um adicional pela curva visto

que uma curva tem estabilidade maior do que um dia (testes sobre estabilidade da curva

natildeo foram efetuados por falta de tempo) e podem ser realizadas mais de uma amostra

por dia O valor adicional pela curva depende de cada local conforme seus gastos e

quantidade de serviccedilo mas os outros valores podem ser estimados conforme consta

abaixo na Tabela 8

32

32

Tabela 8 Avaliaccedilatildeo de custos para a anaacutelise de uma amostra em triplicata

Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)

Acetonitrila (grau HPLC) 4L 8154b 253mL 516

Metanol (grau HPLC) 4L 1380a 40mL 138

Aacutecido Foacutermico (98-100) 1L 3273b 0025mL 001

Hidroacutexido de Soacutedio (pellets) 1kg 4302a 2g 009


Materiais

Membrana Acetato de Celulose

022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12

Membrana filtrante Acetato de

Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 3unid 753


022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35

Centriacutefuga 2 200 15min 05

Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33

Entatildeo o valor da anaacutelise se torna acessiacutevel e barato admitindo-se que o valor

final para uma amostra seja R$ 1244 mais o percentual em cima da curva analiacutetica

enquanto apenas a curva o valor eacute de R$ 59500 Algumas empresas rotineiramente

calculam 10-20 sobre um custo ldquofixordquo que eacute distribuiacutedo entre diversas amostras

visando ter um menor preccedilo para o cliente e mesmo assim obter um lucro consideraacutevel

Para fins de um resultado mais soacutelido considerando 10 sobre o custo da curva

analiacutetica a anaacutelise tem um valor de mercado de R$ 18500

34

34

CONCLUSAtildeO

Neste trabalho foi desenvolvido com sucesso um meacutetodo analiacutetico por HPLC-

DAD simples barato e confiaacutevel para a determinaccedilatildeo de aacutecido foacutelico em farinha de

trigo Um total de 5 amostras de farinha de trigo comerciais foram analisadas sendo que

uma porcentagem significativa apresentou teores de aacutecido foacutelica abaixo do estabelecido

pelo legislaccedilatildeo brasileira

Nossos resultados sugerem que os oacutergatildeos de fiscalizaccedilatildeo devem atuar de

maneira mais efetiva no monitoramento dos niacuteveis de aacutecido foacutelico adicionados na

farinha de trigo bem como as induacutestrias devem adotar um controle de qualidade maior

na fortificaccedilatildeo destes produtos

35

35

7 REFEREcircNCIAS

[1] BRASIL Ministeacuterio da Sauacutede Agecircncia Nacional de Vigilancia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo

RDC n 344 Brasiacutelia Distrito Federal Dezembro 2002

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Determination of folic acid in enriched wheat and corn flour by means of high

performance liquid chromatography Revista Instituto Adolfo Lutz Vol 63 paacuteg

149-154 2004


Validaccedilatildeo de metodologia para a determinaccedilatildeo de aacutecido foacutelico em margarina

enriquecida e avaliaccedilatildeo da estabilidade da vitamina durante estocagem Revista

Instituto Adolfo Lutz Vol 63 paacuteg 10-14 2004


Metodologia analiacutetica para determinaccedilatildeo de folatos e aacutecido foacutelico em alimentos

Quiacutemica Nova Vol29 2006

[6] SANTOS LEONOR MARIA PACHECO PEREIRA MICHELLE ZANON Efeito

da fortificaccedilatildeo com aacutecido foacutelico na reduccedilatildeo dos defeitos do tubo neural Cadernos

de Sauacutede Puacuteblica Vol 23 paacuteg 17-24 2007

36

36

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RUVIERI VALTER SABINO MYMA Determination of folic acid in fortified

wheat flours Revista Journal of Food Composition and Analysis Vol 21 paacuteg 336 -

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foacutelico por espectrofotometria-UV Alimentos e Nutriccedilatildeo Araraquara Vol 24 paacuteg

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PIRES Maria A F VEGA Oscar B LEBRE Daniel T A validated method to

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Acid-fortified Flour Optimised and Fast Sample Preparation Coupled with a

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GLORIMAR O papel do aacutecido foacutelico na prevenccedilatildeo e na terapecircutica oncoloacutegica

revisatildeo Revista Brasileira de Cancerologia Vol 48 paacuteg 597-607 2002

[12] ALABURDA JANETE SHUNDO LUZI Aacutecido foacutelico e fortificaccedilatildeo de

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37

37

[13] CORREIA Laura Fernandes Melo FARAONI Aureacutelia Santos PINHEIRO-

SANTrsquoANA Helena Maria Efeitos do processamento industrial sobre a

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combined methods Ciecircncia Tecnolia Alimentos Vol 19 paacuteg 211-213 1999

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Korean Chemical Society Vol 32 2011

[16] LMP Santos MZ Pereira Efeito da fortificaccedilatildeo com aacutecido foacutelico na reduccedilatildeo

dos defeitos do tubo neural Caderno de Sauacutede Puacuteblica Vol 23 paacuteg 17-24 2007

[17] BARRIONUEVO Wilma Regina LANCcedilAS Fernando Mauro Extraccedilatildeo em fase

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Catherine MGC Folates in Fruits and Vegetables Contents Processing and

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528 2016

38

38

[19] DELCHIER N RINGLING C MAINGONNAT J-F RYCHLIK M RENARD

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BAGARY Ramzia Online pre-column derivatization with chromatographic

separation to determine folic acid Journal of Chromatographic Science Vol 51 paacuteg

544-551 2013

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grain an economic analysis American Journal Public Health Vol 85 paacuteg 667-76

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[22] BRITTOA Jeacutessica Carrilho Brittoa CANCcedilADO Rodolfo GUERRA-

SHINOHARA Elvira Maria Concentrations of blood folate in Brazilian studies

prior to and after fortification of wheat and cornmeal (maize flour) with folic acid

A review Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia Vol 36 paacuteg 275-286

2013

[23] UEHARA Sofia Kimi ROSA Glorimar Association between folic acid

deficiency and disease and prevention strategies a critical view Revista Nutriccedilatildeo

Vol 23 2010

[24] RIBANI Marcelo BOTTOLI Carla Beatriz Grespan COLLINS Carol H

JARDIM Isabel Cristina S Fontes MELO Luacutecio Flaacutevio Costa Validaccedilatildeo em

meacutetodos cromatograacuteficos e eletroforeacuteticos Quiacutemica Nova Vol27 paacuteg 771-780

2004

2





Monografia apresentada junto agrave atividade de

ensino ldquoProjeto Tecnoloacutegicordquo do Curso de

Quiacutemica Industrial realizado na UFRGS sob

a supervisatildeo do Prof Eliseu Rodrigues

Prof Dr Eliseu Rodrigues

Orientador

Porto Alegre 2016

3

3

AGRADECIMENTOS











4

4

RESUMO






















5

5

ABSTRACT




















6

6

LISTAS DE FIGURAS




23


233


24








7

7

LISTAS DE TABELAS










8

8



















9

9

SUMAacuteRIO

AGRADECIMENTOS 3

RESUMO 4

ABSTRACT 5

LISTAS DE FIGURAS 6

LISTAS DE TABELAS 7


SUMAacuteRIO 9


2 OBJETIVO 12



fontes 13




4 METODOLOGIA 19

41 Materiais 19


412 Amostras 19

42 Meacutetodos 19

10

10










521 Linearidade 24






6 CONCLUSAtildeO 34


11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

3

3

AGRADECIMENTOS











4

4

RESUMO






















5

5

ABSTRACT




















6

6

LISTAS DE FIGURAS




23


233


24








7

7

LISTAS DE TABELAS










8

8



















9

9

SUMAacuteRIO

AGRADECIMENTOS 3

RESUMO 4

ABSTRACT 5

LISTAS DE FIGURAS 6

LISTAS DE TABELAS 7


SUMAacuteRIO 9


2 OBJETIVO 12



fontes 13




4 METODOLOGIA 19

41 Materiais 19


412 Amostras 19

42 Meacutetodos 19

10

10










521 Linearidade 24






6 CONCLUSAtildeO 34


11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

4

4

RESUMO






















5

5

ABSTRACT




















6

6

LISTAS DE FIGURAS




23


233


24








7

7

LISTAS DE TABELAS










8

8



















9

9

SUMAacuteRIO

AGRADECIMENTOS 3

RESUMO 4

ABSTRACT 5

LISTAS DE FIGURAS 6

LISTAS DE TABELAS 7


SUMAacuteRIO 9


2 OBJETIVO 12



fontes 13




4 METODOLOGIA 19

41 Materiais 19


412 Amostras 19

42 Meacutetodos 19

10

10










521 Linearidade 24






6 CONCLUSAtildeO 34


11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

5

5

ABSTRACT




















6

6

LISTAS DE FIGURAS




23


233


24








7

7

LISTAS DE TABELAS










8

8



















9

9

SUMAacuteRIO

AGRADECIMENTOS 3

RESUMO 4

ABSTRACT 5

LISTAS DE FIGURAS 6

LISTAS DE TABELAS 7


SUMAacuteRIO 9


2 OBJETIVO 12



fontes 13




4 METODOLOGIA 19

41 Materiais 19


412 Amostras 19

42 Meacutetodos 19

10

10










521 Linearidade 24






6 CONCLUSAtildeO 34


11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

6

6

LISTAS DE FIGURAS




23


233


24








7

7

LISTAS DE TABELAS










8

8



















9

9

SUMAacuteRIO

AGRADECIMENTOS 3

RESUMO 4

ABSTRACT 5

LISTAS DE FIGURAS 6

LISTAS DE TABELAS 7


SUMAacuteRIO 9


2 OBJETIVO 12



fontes 13




4 METODOLOGIA 19

41 Materiais 19


412 Amostras 19

42 Meacutetodos 19

10

10










521 Linearidade 24






6 CONCLUSAtildeO 34


11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

7

7

LISTAS DE TABELAS










8

8



















9

9

SUMAacuteRIO

AGRADECIMENTOS 3

RESUMO 4

ABSTRACT 5

LISTAS DE FIGURAS 6

LISTAS DE TABELAS 7


SUMAacuteRIO 9


2 OBJETIVO 12



fontes 13




4 METODOLOGIA 19

41 Materiais 19


412 Amostras 19

42 Meacutetodos 19

10

10










521 Linearidade 24






6 CONCLUSAtildeO 34


11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

8

8



















9

9

SUMAacuteRIO

AGRADECIMENTOS 3

RESUMO 4

ABSTRACT 5

LISTAS DE FIGURAS 6

LISTAS DE TABELAS 7


SUMAacuteRIO 9


2 OBJETIVO 12



fontes 13




4 METODOLOGIA 19

41 Materiais 19


412 Amostras 19

42 Meacutetodos 19

10

10










521 Linearidade 24






6 CONCLUSAtildeO 34


11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

9

9

SUMAacuteRIO

AGRADECIMENTOS 3

RESUMO 4

ABSTRACT 5

LISTAS DE FIGURAS 6

LISTAS DE TABELAS 7


SUMAacuteRIO 9


2 OBJETIVO 12



fontes 13




4 METODOLOGIA 19

41 Materiais 19


412 Amostras 19

42 Meacutetodos 19

10

10










521 Linearidade 24






6 CONCLUSAtildeO 34


11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

10

10










521 Linearidade 24






6 CONCLUSAtildeO 34


11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

11

11


















milho

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

12

12

2 OBJETIVO











13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

13

13



sauacutede e fontes







orgacircnicos12







O

NH

OOH

O

OH

NH

N

N

NH

N

O

NH2


14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

14

14















Farelo de trigo 260



Farinha de aveia 60

Laranja 37

O

NH

NH

NH NH

N

O

NH2

NH

NH

O

OOH

OOH

O

OH

n


15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

15

15












Idade g por dia

Lactantes

0 a 6 meses 65

7 a 12 meses 80

Crianccedilas

1 a 3 anos 150

4 a 8 anos 200

Homens

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Mulheres

9 a 13 anos 300

14 a 70 anos 400

gt 70 anos 400

Gravidez 600


16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

16

16























dessas farinhas





17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

17

17

































18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

18

18


15

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

19

19

4 METODOLOGIA

41 Materiais










412 Amostras





das anaacutelises

42 Meacutetodos




20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

20

20





























21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

21

21


















S


S


onde



22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

22

22






























23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

23

23

0

001

002

003

004

005

006

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel



0

001

002

003

004

005

006

007

008

009

0 1 2 3 4 5

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)


70


90

Fase moacutevel

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

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Aacutere

a






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0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

24

24

01

012

014

016

018

02

0 2 4 6

Ab

sorb

acircn

cia

a 2

80

nm

Tempo (h)



Fase moacutevel




521 Linearidade





05gmL-1 58 2 17

10gmL-1 20 5 6

30gmL-1 10 6 4


25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

25

25

y = 89612x - 4804

Rsup2 = 0992


0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

0 1 2 3 4

Aacutere

a






0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

25

Inte

nsid

ade

(mA

u)

Tempo (min)





26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

26

26












abaixo na Tabela 4



1 170 113

2 146 97

3 144 96

Meacutedia 153 102

Desvio-padratildeo

relativo (DPR) 9 9






DPR menor do que 10


27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

27

27





Marca


(μg100g-1)

1 189 plusmn 17

2 269 plusmn 165

3 95 plusmn 17

4 81 plusmn 22

5 160 plusmn 29



0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

5

10

15

20

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

28

28




























do tubo neural16


29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

29

29


















0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0

10

20

30

40

50

60

Inte

nsi

dad

e (m

Au

)

Tempo (min)


compostos

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

30

30









Reagente Tamanho da


Quantidade








Padratildeo


Materiais

Membrana Acetato de

Celulose 022m

Caixa com 100



de Celulose 020m

Caixa com 100

unid 25100d 12unid 3012


022m

Caixa com 100


Total (R$) 4200

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

31

31






Equipamento Consumo

(kWh)

Preccedilo por hora

(R$)

Tempo

utilizado

Custo

(R$)

HPLC-DAD 155 155 9h 140


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 2994












abaixo na Tabela 8

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

32

32


Reagente Tamanho da

embalagem

Preccedilo

(R$)

Quantidade

utilizada

Custo

(R$)






Materiais


022m

Caixa com 100

unid 1200c 1unid 12


Celulose 020m

Caixa com 100



022m

Caixa com 100

unid 4900c 1unid 49

Equipamento

HPLC-DAD

Consumo

(kWh)

155

Preccedilo por

hora (R$)

155

Tempo

utilizado

225h

Custo

(R$)

35


Vortex 013 013 15min 003





Total (R$) 1244




33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

36




342 2007




275-282 2013














37

37




2008

















528 2016

38

38







544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

33

33








34

34

CONCLUSAtildeO










35

35

7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

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342 2007




275-282 2013














37

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2008

















528 2016

38

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544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

34

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CONCLUSAtildeO










35

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7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

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342 2007




275-282 2013














37

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2008

















528 2016

38

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544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

35

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7 REFEREcircNCIAS









149-154 2004











36

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342 2007




275-282 2013














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2008

















528 2016

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544-551 2013



1995





2013



Vol 23 2010




2004

36

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342 2007




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2008

















528 2016

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Vol 23 2010




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2008

















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Vol 23 2010




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Vol 23 2010




2004

Vitória Müller Rathke

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