Western blot
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Transcript of Western blot
Western Blot
Wendy Espinel MoralesDiego Fernando CadenaEnmanuel Ortiz Jiménez
*Western Blot
Es una técnica que se utiliza para identificar y localizar proteínas con base en su capacidad para unirse a anticuerpos específicos.
*Western blot y HIV
Básicamente se basa en la separación de las proteínas obtenidas de HIV-1 procedentes del lisado del cultivo del virus y purificadas por centrifugación.
Proteína ObtenidaSe coloca
Gel de poliacrilamida
En forma
Laminas delgadasSe efectúa
ELECTROFORESIS
Donde
Proteínas de menor peso
(p17, p24)
Proteínas de mayor peso
Migran mas lejos
Se mantienen cerca al lugar de
deposito
Después de transferirlo a una tira de nitrocelulosa y haber pasado por unos
procesos de incubación revelara una banda coloreada en las zonas correspondientes a los
Ac específicos.
Esta prueba generalmente se considera una prueba sensible para las proteínas del core y algo menos para las de envoltura.
Localización
Función VIH-2
Envoltura UniónFusión
gp 105
Core Proteína mayorProteína terminal
p24p17
Polimerasa Transcriptasa inversaIntegrasaRibonucleasaProteasa
p 68/53p 34
p 11
Proteínas del VIH2
Tipos de resultados
PositivoNegativo
Indeterminado
Positivo
Requiere al menos de dos bandas de envoltura, que se considera la
más específica.
Negativo
Se obtiene por la ausencia de bandas.
Indeterminado
Aparece algunas bandas pero no para considerarse como
positivo.
Causas de WB indeterminado
•Reactividad inespecífica
•Infección por HIV-2 u otros retrovirus
•Seroconversión al vih-1
•Hijo de madre seropositiva
•Divergencias genéticas de la cepa del HIV-1
Criterios de OMS para resultados
1.Presencia aislada de p17 se suele considerar como negativa y no requiere
seguimiento ulterior
Criterios de OMS para resultados
2. Presencia de una sola banda de la envoltura es un patrón infrecuente,
que puede observarse en la seroconversión y en la infección por
hiv-2
Criterios de OMS para resultados
3. Patrones gag/pol sin env pueden deberse también a una
seroconversión (resultado indeterminado)
Desventajas
A. Principal desventaja es el elevado precio, que lo hace inviable como prueba de confirmación en algunos países.
B. La variabilidad reaccional que existe en las bandas según el tipo de ensayo, el tipo de las muestras, las condiciones técnicas y la subjetividad de la interpretación de la intensidad de las bandas, que siempre depende del observador.
Otras aplicaciones
Detección de mutaciones puntuales: como delecciones, inversiones cromosómicas, entre otras. Diagnostico Prenatal: como enfermedades genéticas de una forma tempranaDiagnostico de infecciones por virus, bacterias y parásitos.Oncogenes
Bibliografía
•http://www.bio-rad.com/prd/en/US/CDG/PDP/527f0b18-e467-493a-b82a-874027ba390e/GS%20HIV-1%20Western%20Blot
• http://www.ctv.es/USERS/fpardo/vih4.htm