Material Genético → DNA
graças aos conhecimentos sobre a estrutura, modo de replicação e mecanismos de expressão → modificaçõesno modo de ação dos genes
Definição
É a aplicação de conhecimentos sobre os seres vivos objetivando a melhoria das condições de vida humana
Exemplos clássicosemprego de leveduras na produção de
pãocerveja e choppvinho
emprego de bactérias na produção dequeijosiogurtes
estratégias de melhoramento de plantasobtenção do milho híbridoobtenção do cultivar Piranão (ESALQ-USP)
AplicaçõesMedicina – TERAPIA GÊNICA
MEDICINA VETERINÁRIA – produção de HCAgronomia – produção de plantas transgênciasGeologia – bactérias lixiviadoras na extração de metais preciososEcologia – bactérias degradadoras de petróleoProdução de fármacos
insulinainterferonsantibióticosetc
Sistema de proteção do patrimônio genético
mecanismo que monitora a entrada de material genético exógeno nas células vivas (preservação da integridade do DNA)
dois tipos de componentesenzimas de restrição (tipos I, II e III)enzimas de metilação
alvo → seqüências especiais de nucleotídeos
Uso biotecnológico
trata-se de uma maneira de construir moléculas de DNA recombinantesusando uma alternativa não convencional
TECNOLOGIA DO DNA RECOMBINANTE
Ferramentas de trabalho
Enzimas de restrição (tipo II)reconhecem seqüências específicas de nucleotídeos no DNA - palíndromosatuam como verdadeiras tesouras moleculares
Enzimas de metilaçãoreconhecem seqüências específicas de nucleotídeos no DNA - palíndromosmarcam o patrimônio genético celular
Conceito de Palíndromo:“seqüência simétrica de letrasseqüência simétrica de letras”
Exemplos usando o alfabeto:SUBINOONIBUS
ROMAMETEMAMOR
Exemplo usando o alfabeto do DNA:
Resolução dos fragmentos de restrição
montagem do gelcolocação das amostrascorrida eletroforéticacoloraçãoobservação dos resultados
Exemplo do λ cortado com Hind III
padrão de bandas bem separadasé muito usado com referência de tamanho
Vetores de clonagem
Definição:São entidades celulares que carregam fragmentos de DNA gerados por ação de enzimas de restrição.
Em geral são elementos genéticos extra-cromossomicos, com tamanhos variados e que apresentam mecanismos próprios de replicação.
Exemplo de Engenharia Genética
Pequena planta transgênica de fumo
Expressando o gene da luciferina, uma proteína típicamente encontrada em vagalumes
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