41ºSalvador
Mesa Redonda : Garantia da Qualidade em Microbiologia
41º Congresso Brasileiro de Patologia Clínica/Medicina Laborator41º Congresso Brasileiro de Patologia Clínica/Medicina Laboratorialial
Salvador, 05 de setembro de 2007Salvador, 05 de setembro de 2007
Controle de Meios de Cultura Prontos
GUILHERME FERREIRA DE OLIVEIRA
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Meios de Cultura Microbiológicos
Robert Koch (1876) Meios desidratados
Preparo a partir de
componentes básicos
(CHAPIN & MURRAY, 1999)
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Meios preparados no próprio laboratório:
Documentar a sistemática de aprovação de insumos, reagentes e equipamentos
Rotulagem completa com: Nome do meio, no do lote, data e responsável pelo preparo, validade, condições de armazenamento e riscos potenciais.
Controle do pHProva de esterilidadeProvas funcionais com microrganismos de referência,
comprovando habilidade de suportar crescimento e reatividade bioquímica
Ser capaz de rastrear a responsabilidade por cada etapa da preparação
Armazenamento adequadoMão de obra ($)Energia elétrica ($)Câmara de fluxo laminar ($)Espaço Físico ($)
RDC 302 (2005) ; Norma PALC ( 2007); Microbiology check-list CAP (2006)
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Aquisição de meios prontosAquisição de meios prontos
“A necessidade contenção dos custos pressiona cada vez mais a gestão do laboratório clinico.”
“Fabricantes especializados com competência e integridade reconhecidos, tem melhores condições de garantir a qualidade dos meios produzidos a um custo acessível”
Am J Clin Pathol. v.88, n.2, 210-5 p. (1987)
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Garantia da qualidade dos meios prontos
Seqüência de procedimentos:Seqüência de procedimentos:
Escolha do fornecedor
Inspeção de recebimento
Uso adequado
Procedimentos adicionais de CQ
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Escolha do fornecedorEscolha do fornecedorUtilizar insumos de boa qualidade.
Comprovar a aplicação das melhores
práticas de fabricação (CLSI M22-A3, 2004),inclusive contratualmente.
Fornecer documentação comprobatória do
cumprimento das normas mais atualizadas.
Consumidor:
- Manter registros do fornecimento.
- Re-avaliar periodicamente o fornecedor.
RDC 302 (2005) ; Norma PALC ( 2007); Microbiology check-list CAP (2006)
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Inspeção de recebimento:Inspeção de recebimento:Registrar data de recebimento, número do lote, data de
validade, se as embalagens estão preservadas;
Transporte me condições adequadas ;
Coloração apropriada;
Consistência e hidratação adequadas;
Evidência de congelamento;
Profundidade (espessura ≥ 3 mm);
Superfície (presença de bolhas e enrrugamento);
Hemólise;
Contaminação;
Placas e/ou tubos quebrados .
CLSI, M22-A3 - Volume 24, número 19, 2004
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Uso adequadoUso adequado• O fabricante deve fornecer o certificado de CQ de cada lote conforme recomendações do CLSI;
• Armazenamento em temperatura adequada, protegido da luz, com embalagens preservadas e com identificação visível;
• Não usar após excedido o prazo de validade.
• Registrar Não conformidades;
• Registrar Ações Corretivas;
• Devem fazer parte da avaliação do fornecedor.;
RDC 302 (2005) ; Norma PALC ( 2007); Microbiology check-list CAP (2006)
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É necessário realizar nova rotina de É necessário realizar nova rotina de garantia da qualidade dos meiosgarantia da qualidade dos meios,, além além daquela realizados pelo fabricante?daquela realizados pelo fabricante?
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SurveysSurveys do CAPdo CAP1984 1988 2001
Survey do CAP (2001)Taxa de falha variou entre 0,10% e 9,87% (média de 1,01%)
- Ausência de crescimento (39,9%)- Ausência de inibição ( 28,6%)- Contaminação (17,9%)- Hemólise (7,2%)- Defeito na superfície do meio (16,3%)
Falhas :
Arch Pathol Lab Med – vol. 127, n.6, p.661-665 (2003)
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CLSICLSI –– ClinicalClinical andand LaboratoryLaboratory Standards Standards InstituteInstitute.*.*
CLSI - Quality Control for CommerciallyPreapared Microbical Culture Media; AprovedStandard – Third Edition. CLSI, M22-A3 -Volume 24, número 19, 2004
(*) – Nova denominação do NCCLS – National Comittee for clinical Laboratory Satndards
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Classificação dos meios de cultura quanto á necessidade de realizar rotina de garantia da qualidade após aquisição do meio de cultura manufaturado:
MeiosMeiosProntos
NÃO ISENTOS(NONEXEMPT)
ISENTOS(EXEMPT) Prontos
≤ 0,5% de falhas > 0,5% de falhas
CLSI, M22-A3 - Volume 24, número 19, 2004
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Categoria: Meios Bacteriológicos GeraisCategoria: Meios Bacteriológicos Gerais
• Nutrient broth • Blood agar• Chocolate agar• Thyoglicolate broth• Urease agar
NÃO-ISENTOSISENTOS
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para HemoculturaCategoria: Meios para Hemocultura
• BHI – Brain Heart Infusion• Biphasic blood culture bottlemedium• Centrifugation/Isolation tubes(adult)• Thiol blood culture broth• Trypticase soy blood culturebroth• Peptone broth
NÃO-ISENTOSISENTOS
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para bactérias Categoria: Meios para bactérias GramGram PositivasPositivas
• Todd-Hewitt broth• Desoxycholate broth• Trans-vaginal broth• Chocolate agar withpiridoxal
• Columbia (CNA) agar• Selective media for enterococciwith or without azide • LIM broth• Mannitol Salt agar• Phenylethyl alcohol (PEA) Agar• Selective agar for Group A Streptococcus• Sheep blood agar withsulfamethoxazole/trimetoprim(SXT)• Enterococcus (Streptococcus) faecalis broth
NÃO-ISENTOSISENTOS
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para bactérias Categoria: Meios para bactérias GramGram NegativasNegativas
• MacConkey sorbitol agar• Chocolate agar with bacitracin
• Cefsoludin irgasan novobiocin (CIN) agar• Citrate agar• Cystine lactose electrolyte deficient (CLED) agar• Eosin methylene blue (EMB) agar• Gram-negative (GN) broth• Hektoen (HEK) agar• MacConkey agar• Salmonella-Shigella (SS) agar• Selenite broth• Thiosulfate citrate bile salts sucrose (TCBS) agar• Triple sugar iron (TSI) agar• Trypticase soy agar with sheep blood withampicillin• Xylose lysine desoxycholate (XLD) agar
NÃO-ISENTOSISENTOS
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para Categoria: Meios para Neisseriagonorrhoeae
• Martin-Lewis agar• Chocolate agar withisoVitaleX®
• New York City agar
• Thayer-Martin agar(modified)• GC-Lect
NÃO-ISENTOSISENTOS
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para Categoria: Meios para Bordetellapertussis
• Reagan-Lowe agar• Bordet Gengou agar
NÃO-ISENTOSISENTOS
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para Categoria: Meios para Legionella sp.
• Selective Legionellaagar DGVP
• Legionella selective(CYE/BCYE) agar
NÃO-ISENTOSISENTOS
CYE/BCYE: Buffered Charcoal Yeast Extract.
DGVP: Dye Glycine Vancomycin Polymyxin B.
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para Categoria: Meios para Bukholderiacepacia
• OFPBL agar• Pseudomonas cepacia(PC) agar
NÃO-ISENTOSISENTOS
OFPBL: Oxidatve Fermentative Polymyxin B, Bacitracin, Lactose)
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para Categoria: Meios para Campylobacter
• Campylobacter bloodagar (Blaser)• Campylobacter agarwith CVA
• Charcoal selectiveagar with CVC
NÃO-ISENTOSISENTOS
CVC: Cefoperazone, Vancomicin, Cicloheximida.
CVA: Cefoperazone, Vancomicin, Anphotericin B.
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para AnaeróbiosCategoria: Meios para Anaeróbios
• CDC anaerobe 5% sheepblood agar with PEA
• Anaerobic blood agar• Anaerobic phenylethyl alcohol(PEA) agar• Bacteroides bile esculin (BBE) agar• Brucella agar• Brucella agar w/hemin/vitamin K• Brucella laked blood agar with KV• CDC anaerobe laked blood agarwith KV• CDC anaerobic 5% sheep bloodwith KV• Egg yolk (modified) agar• Kanamicin laked blood agar
NÃO-ISENTOSISENTOS
KV: Kanamicin, Vancomycin) (modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para Categoria: Meios para MicobactériasMicobactérias
• Middlebrook 7H10 agar• Middlebrook 7H11 agar• American TrudeauSociety (ATS) agar• Mitchison’s agar• Petragnani medium
• AFB biphasic bottle medium• Middlebrook 7H9 broth• Lowestein-Jensen media• Middlebrook agar• Automated AFB bottle broths
NÃO-ISENTOSISENTOS
AFB: Acid Fast Bacilli.
(modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Categoria: Meios para FungosCategoria: Meios para Fungos
• Cornmeal agar with tween• Sabouraud dextrose agarwith CC• BIGGY agar• Birdseed agar• Brain Heart infusion agarwith 5% sheep blood/PS• Dermatophyte test medium• Potato flakes agar with orwithout CC
• Cornmeal agar• Inhibitory mould agar• Inhibitory mould agar withgentamicin• Soy peptone agar with CC withoutpH indicators• Potato dextrose agar• Brain Herat Infusion agar with 5% sheep blood with CG• Sabouraud dextrose agar• Sabouraud dextrose agar with CG
NÃO-ISENTOSISENTOS
CC: CAF-GentamicinaCG: Cicloheximina- CAFPS: Penicilina – Estreptomicina)BIGGY: Bismuth Sulfite Glucose Glycine Yeast) (modificado de CLSI M22 A-3, 2004)
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Procedimentos adicionais de CQTeste de esterilidade:
• Opcionalmente, o laboratório pode realizar teste de esterilidade em amostragem dos meios isentos (exempt)
• Escolher aleatoriamente amostra do lote de meios, durante a inspeção de recebimento e incubar a 35oC, durante 72 h.
CLSI, M22-A3 - Volume 24, número 19, 2004
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Procedimentos adicionais de CQ.Procedimentos adicionais de CQ.Casos omissos...Casos omissos...
“Qualquer usuário que utilizar meio de cultura pronto, fora das situações especificadas no documento CLSI M22-A3, deverá realizar rotina completa de testes apropriados para a garantia da qualidade dos resultados.”
CLSI, M22-A3 - Volume 24, número 19, 2004
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Referências úteis:
• CLSI - Quality Control for Commercially Preapared MicrobicalCulture Media; Aproved Standard – Third Edition. M22-A3 – vol. 24, n. 19, 2004.
• CLSI – Protocols for Evaluating Dehydratated Mueller-Hinton agar; aproved standard – Second Edition. M6-A, vol. 16, n. 9, 2006.
• RDC 302 de 13 de outubro de 2005. Dispõe sobre Regulamento Técnico para funcionamento de Laboratórios Clínicos
• Norma PALC – Sociedade Brasileira de Patologia Clínica / Medicina Laboratorial (2007)
• JONES, R.N. et al. Arch Pathol Lab Med – vol. 127, n.6, p.661-665 (2003)
• MURRAY, P.R., et al. Manual of Clinical Microbiology 8th edition. American Society of Clinical Microbiology (2003).
• Microbiology Check-list – College of American Pathologist (31/01/2006)
• Technical Manual of Microbiological Mediahttp://www.remel.com/IFUs/TM93.pdf
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