ANNELYZE PODOLAN KLOSTER
DESENVOLVIMENTO E ANAacuteLISE ldquoIN VITROrdquo DO EFEITO ANTIMICROBIANO DE BANDAGEM BUCAL
Dissertaccedilatildeo apresentada a Faculdade de Odontologia de Bauru da Universidade de Satildeo Paulo para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre em Odontologia Aacuterea de concentraccedilatildeo Odontopediatria Orientador Profa Dra Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado
BAURU 2011
Kloster Annelyze Podolan Desenvolvimento e anaacutelise ldquoin vitrordquo do efeito antimicrobiano de bandagem bucal Annelyze Podolan Kloster ndash Bauru 2011 101 p il 31cm Dissertaccedilatildeo (Mestrado) ndash Faculdade de Odontologia de Bauru Universidade de Satildeo Paulo Orientador Profa Dra Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado
K697d
Autorizo exclusivamente para fins acadecircmicos e cientiacuteficos a reproduccedilatildeo total ou parcial desta dissertaccedilatildeotese por processos fotocopiadores e outros meios eletrocircnicos Assinatura Data
Comitecirc de Eacutetica da FOB-USP Protocolo nordm Data
(Folha De Aprovaccedilatildeo)
ANNELYZE PODOLAN KLOSTER
Dados Curriculares
Nascimento
Naturalidade
Filiaccedilatildeo
2002 ndash 2006
2007 ndash 2008
2007 ndash 2008
2009 ndash 2011
17 de fevereiro de 1984
Cuiabaacute ndash MT
Ronaldo Kloster
Emeri Fatima Podolan Kloster
Curso de Graduaccedilatildeo em Odontologia pela Universidade
de CuiabaacuteUNIC ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Especializaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva pelo
Instituto IBPEX Facinter ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Especializaccedilatildeo em Odontopediatria pela
Universidade de CuiabaacuteUNIC ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Odontologia niacutevel de
Mestrado Aacuterea de Concentraccedilatildeo Odontopediatria pela
Faculdade de Odontologia de Bauru ndash Universidade de
Satildeo Paulo ndash Bauru ndash SP
DEDICATOacuteRIA
A Deus Pelo dom que me deste pelas oportunidades que me apresentaste e pela vitoacuteria
alcanccedilada obrigada Senhor
ldquoQuando a solidatildeo doeu em mim ()
Quando eu natildeo soube compreender a vida Tu vieste compreender por mim
Quando os meus olhos natildeo podiam ver Tua matildeo segura me ajudou a andar
Quando eu natildeo tinha mais amor no peito Teu amor me ajudou a amar
Quando os meus sonhos vi desmoronar me trouxeste outros pra recomeccedilar
Quando me esqueci que era algueacutem na vida Teu amor veio me relembrarrdquo
Aos meus pais Ronaldo e Emeacuteri
Mais uma vez este sonho realizado eacute nosso Obrigada pela confianccedila Acredito
que vocecircs nunca imaginaram que eu chegaria tatildeo longe Sei que natildeo foi tatildeo simples
como da uacuteltima vez a saudade foi nossa companheira e a nossa rotina foi diferente
nestes uacuteltimos anos mas o amor de vocecircs foi o combustiacutevel para que eu realizasse
mais este projeto e mesmo com mais esse tiacutetulo continuo sendo o reflexo de vocecircs e
dos valores que me ensinaram Amo muito vocecircs
Ao meu irmatildeo Filype
Dines vocecirc continua sendo o meu maior orgulho Obrigada por ter cuidado do
pessoal de casa enquanto eu natildeo pude estar laacute Obrigada pela paciecircncia e pela
compreensatildeo Espero que esta minha vitoacuteria lhe sirva de inspiraccedilatildeo agora eacute a sua
vez
Ao meu amor Paulo Artur
ldquoE mesmo que eu viva pra sempre e todos os meus sonhos sejam realizados as
minhas lembranccedilas de amor sempre seratildeo suasrdquo (Perhaps love)
Obrigada pelo seu amor pelo incentivo por ser mais ldquorazatildeordquo por ter me
esperado e por ter vencido comigo mais esse desafio Acredito que dessa vez
descobrimos o valor que temos na vida um do outro e hoje vivemos de amor sincero e
admiraccedilatildeo muacutetua pois muito do que sou hoje devo a vocecirc TE AMO
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
Agrave Professora Dra Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado que
se tornou uma referencia iacutempar para mim todo o meu agradecimento e minha
admiraccedilatildeo sua disposiccedilatildeo contagiante e seu espiacuterito inovador me fizeram aceitar a
ideacuteia de colocar em praacutetica esta pesquisa que hoje apresentamos com um resultado
muito feliz e que foi comemorado com muito entusiasmo aprendi com vocecirc que
nunca devemos desistir de uma ideacuteia por mais inusitada que ela seja Agradeccedilo a
oportunidade de ter feito parte do seu time de alunos orientados e de ter aprendido
muito com vocecirc Foi uma honra ter convivido com vocecirc professora Muito Obrigada
Agrave Professora Dra Silgia Aparecida da Costa que deu ldquovidardquo agraves nossas
bandagens e prontamente nos ajudou a realizar este projeto Sua disponibilidade
atenccedilatildeo e a maneira carinhosa com que sempre nos atendeu satildeo raras de serem
encontradas Obrigada pela sua preciosa colaboraccedilatildeo
Aos professores do Departamento de Odontopediatria da Faculdade de
Odontologia de Bauru sou imensamente grata por ter sido aluna de vocecircs e vou levar
cada ensinamento como liccedilotildees para toda a vida Prof Dr Ruy Abdo praacutetico e
dinacircmico Prof Dr Joseacute Eduardo de Oliveira Lima pelas conversas sinceras e
pelos conselhos que recebi durante as cliacutenicas da graduaccedilatildeo receba todo o meu
carinho e a minha admiraccedilatildeo Profa Dra Salete Moura Bonifaacutecio Silva agradeccedilo
pela atenccedilatildeo dedicaccedilatildeo e conhecimentos transmitidos e por ter despertado em mim
um apreccedilo pelos gatinhos Profa Dra Daniela Rios que nos recebeu tatildeo bem ouviu
nossas duacutevidas e sempre nos deu muito afeto continue recebendo bem os proacuteximos
que passarem por aqui e nunca perca o olhar doce de quem um dia jaacute foi aluna como
noacutes Agrave vocecirc que me permite chamaacute-la de Dani todo o meu carinho e amizade Agrave
Profa Dra Thais Marchini de Oliveira obrigada por ter me ensinado bem mais do
que eu vim aprender aqui Te levo no coraccedilatildeo e nunca vou me esquecer dos seus
conselhos e da sua maneira de levar a vida conte sempre comigo
Aos funcionaacuterios do Departamento D Lia Lilian Estela Faacutetima e
Alexandre companhias diaacuterias que foram muito importantes para que nossas
atividades dessem certo Sempre preocupadas para que nos sentiacutessemos bem
fizeram o nosso dia a dia ser muito mais agradaacutevel na companhia de vocecircs Obrigada
por tudo
Ao Andreacute teacutecnico do laboratoacuterio de Microbiologia que contribuiu
imensamente para que a fase laboratorial dessa pesquisa desse certo e que vibrou
junto comigo quando vimos os microrganismos crescendo no meio de cultura muito
muito obrigada Sua gentileza e paciecircncia comigo valeram ouro
Aos meus pacientes que me permitem ser ldquoTia Annerdquo e me motivam a
aprimorar meus conhecimentos para ganhar sorrisos como a maior recompensa do
meu trabalho
Aos colegas da Poacutes Graduaccedilatildeo em Odontopediatria Ana Paula Flaacutevia
Janaiacutena Maisa Vanessa Adriana Ana Liacutedia Akio Carla Juliana Natalino Susi
Sileide Tatiana e Priscila agradeccedilo a vocecircs os momentos de convivecircncia a
oportunidade de partilhar conhecimentos e de aprender com vocecircs Espero que a
distacircncia natildeo nos deixe perder o contato e que eu receba sempre boas notiacutecias de
vocecircs Sucesso amigos
Luciana bahiana linda e chique Muito sucesso pra vocecirc em todos os seus
projetos Obrigada pela companhia e pelas conversas animadas
Aos amigos da Patologia e da Dentiacutestica que navegaram comigo neste
mesmo barco e que foram oacutetimas companhias do meu dia a dia de mestrado
Tamara e Bianca lindas Obrigada pela companhia divertida de vocecircs
Sucesso Contem sempre comigo
Aos meus amigos que resistiram agrave minha ausecircncia que torceram por mim
e que eu pude contar em todos os momentos mesmo de longe amo vocecircs Em
especial a Juliana e a sua famiacutelia que me hospedaram com muito carinho em cada
maratona de idas e vindas o meu carinho e a minha amizade sempre
Ao Prof Dr Luiz Evaristo Ricci Volpato meu professor e amigo de todos
os momentos obrigada por me apresentar agrave FOB e toda a sua dimensatildeo e pelo
incentivo para que eu realizasse mais este sonho Seus conselhos valem ouro pra
mim e esse foi mais um precioso que eu recebi
Ao Prof Dr Heitor Marques Honoacuterio que colaborou na realizaccedilatildeo dos
testes estatiacutesticos desta pesquisa o meu agradecimento
Ao Cnpq pela concessatildeo da bolsa de estudos deste mestrado
Agraves minhas amigas Flaacutevia Janaiacutena e Maisa
ldquoQuem me daraacute um ombro amigo quando eu precisar
E se eu cair se eu vacilar quem vai me levantarrdquo
ldquoSou eu quem vai ouvir vocecirc quando o mundo natildeo puder te entender
Foi Deus quem te escolheu pra ser o melhor amigo que eu pudesse terrdquo
Amigos pra sempre Bons Amigos que nasceram pela feacute (de que tudo daria certo)
Amigos pra sempre Para sempre amigos sim se Deus quiser
ldquoQuem eacute que vai me acolher na minha indecisatildeo
Se eu me perder pelo caminho quem me daraacute a matildeordquo
ldquoFoi Deus quem consagrou vocecirc e eu para sermos bons amigos num soacute coraccedilatildeo
Por isso eu estarei aqui quando tudo parecer sem soluccedilatildeordquo
Peccedilo a Deus que te guarde e te decirc a sua Paz
Eu jamais poderia imaginar que o meu mestrado em Bauru me daria de presente 3
amigas como vocecircs Eu apenas tinha pedido a Deus que me desse forccedila pra dar
conta desse projeto e Ele me mandou vocecircs Natildeo foi por acaso natildeo foi forccedilado natildeo foi
arranjado foi sincero foi amizade verdadeira dessas que a gente leva pela vida toda
Acreditem vocecircs fizeram a diferenccedila na minha vida nesses dois anos e eu sei que
tambeacutem marquei a vida de vocecircs Aqui fomos um grupo tudo nosso foi dividido os
pacientes os seminaacuterios os problemas as anguacutestias as decepccedilotildees as coisas boas
as conquistas as risadas as caronas tudo absolutamente tudo Fomos o apoio a
ldquofamiacuteliardquo o socorro a conselheira uma da outra a companhia do fim de semana
chuvoso o desabafo quando a professora ldquoenlouqueciardquo ou quando o namorado pisava
na bola Cada uma sabe o quanto esses momentos foram importantes e levaremos
para sempre essa amizade que nos fez ser pessoas melhores que nos fez felizes
durante esse momento uacutenico para cada uma de noacutes Obrigada pelos momentos felizes
e pela amizade sincera que vivemos Amo muito vocecircs
Anne
ldquoNunca houve noite que pudesse impedir o nascer do sol e a
esperanccedilardquo
Autor desconhecido
ldquoEacute apenas com o coraccedilatildeo que se pode ver direito o essencial eacute
invisiacutevel aos olhosrdquo
Antoine Saint-Exupeacutery
RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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Kloster Annelyze Podolan Desenvolvimento e anaacutelise ldquoin vitrordquo do efeito antimicrobiano de bandagem bucal Annelyze Podolan Kloster ndash Bauru 2011 101 p il 31cm Dissertaccedilatildeo (Mestrado) ndash Faculdade de Odontologia de Bauru Universidade de Satildeo Paulo Orientador Profa Dra Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado
K697d
Autorizo exclusivamente para fins acadecircmicos e cientiacuteficos a reproduccedilatildeo total ou parcial desta dissertaccedilatildeotese por processos fotocopiadores e outros meios eletrocircnicos Assinatura Data
Comitecirc de Eacutetica da FOB-USP Protocolo nordm Data
(Folha De Aprovaccedilatildeo)
ANNELYZE PODOLAN KLOSTER
Dados Curriculares
Nascimento
Naturalidade
Filiaccedilatildeo
2002 ndash 2006
2007 ndash 2008
2007 ndash 2008
2009 ndash 2011
17 de fevereiro de 1984
Cuiabaacute ndash MT
Ronaldo Kloster
Emeri Fatima Podolan Kloster
Curso de Graduaccedilatildeo em Odontologia pela Universidade
de CuiabaacuteUNIC ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Especializaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva pelo
Instituto IBPEX Facinter ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Especializaccedilatildeo em Odontopediatria pela
Universidade de CuiabaacuteUNIC ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Odontologia niacutevel de
Mestrado Aacuterea de Concentraccedilatildeo Odontopediatria pela
Faculdade de Odontologia de Bauru ndash Universidade de
Satildeo Paulo ndash Bauru ndash SP
DEDICATOacuteRIA
A Deus Pelo dom que me deste pelas oportunidades que me apresentaste e pela vitoacuteria
alcanccedilada obrigada Senhor
ldquoQuando a solidatildeo doeu em mim ()
Quando eu natildeo soube compreender a vida Tu vieste compreender por mim
Quando os meus olhos natildeo podiam ver Tua matildeo segura me ajudou a andar
Quando eu natildeo tinha mais amor no peito Teu amor me ajudou a amar
Quando os meus sonhos vi desmoronar me trouxeste outros pra recomeccedilar
Quando me esqueci que era algueacutem na vida Teu amor veio me relembrarrdquo
Aos meus pais Ronaldo e Emeacuteri
Mais uma vez este sonho realizado eacute nosso Obrigada pela confianccedila Acredito
que vocecircs nunca imaginaram que eu chegaria tatildeo longe Sei que natildeo foi tatildeo simples
como da uacuteltima vez a saudade foi nossa companheira e a nossa rotina foi diferente
nestes uacuteltimos anos mas o amor de vocecircs foi o combustiacutevel para que eu realizasse
mais este projeto e mesmo com mais esse tiacutetulo continuo sendo o reflexo de vocecircs e
dos valores que me ensinaram Amo muito vocecircs
Ao meu irmatildeo Filype
Dines vocecirc continua sendo o meu maior orgulho Obrigada por ter cuidado do
pessoal de casa enquanto eu natildeo pude estar laacute Obrigada pela paciecircncia e pela
compreensatildeo Espero que esta minha vitoacuteria lhe sirva de inspiraccedilatildeo agora eacute a sua
vez
Ao meu amor Paulo Artur
ldquoE mesmo que eu viva pra sempre e todos os meus sonhos sejam realizados as
minhas lembranccedilas de amor sempre seratildeo suasrdquo (Perhaps love)
Obrigada pelo seu amor pelo incentivo por ser mais ldquorazatildeordquo por ter me
esperado e por ter vencido comigo mais esse desafio Acredito que dessa vez
descobrimos o valor que temos na vida um do outro e hoje vivemos de amor sincero e
admiraccedilatildeo muacutetua pois muito do que sou hoje devo a vocecirc TE AMO
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
Agrave Professora Dra Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado que
se tornou uma referencia iacutempar para mim todo o meu agradecimento e minha
admiraccedilatildeo sua disposiccedilatildeo contagiante e seu espiacuterito inovador me fizeram aceitar a
ideacuteia de colocar em praacutetica esta pesquisa que hoje apresentamos com um resultado
muito feliz e que foi comemorado com muito entusiasmo aprendi com vocecirc que
nunca devemos desistir de uma ideacuteia por mais inusitada que ela seja Agradeccedilo a
oportunidade de ter feito parte do seu time de alunos orientados e de ter aprendido
muito com vocecirc Foi uma honra ter convivido com vocecirc professora Muito Obrigada
Agrave Professora Dra Silgia Aparecida da Costa que deu ldquovidardquo agraves nossas
bandagens e prontamente nos ajudou a realizar este projeto Sua disponibilidade
atenccedilatildeo e a maneira carinhosa com que sempre nos atendeu satildeo raras de serem
encontradas Obrigada pela sua preciosa colaboraccedilatildeo
Aos professores do Departamento de Odontopediatria da Faculdade de
Odontologia de Bauru sou imensamente grata por ter sido aluna de vocecircs e vou levar
cada ensinamento como liccedilotildees para toda a vida Prof Dr Ruy Abdo praacutetico e
dinacircmico Prof Dr Joseacute Eduardo de Oliveira Lima pelas conversas sinceras e
pelos conselhos que recebi durante as cliacutenicas da graduaccedilatildeo receba todo o meu
carinho e a minha admiraccedilatildeo Profa Dra Salete Moura Bonifaacutecio Silva agradeccedilo
pela atenccedilatildeo dedicaccedilatildeo e conhecimentos transmitidos e por ter despertado em mim
um apreccedilo pelos gatinhos Profa Dra Daniela Rios que nos recebeu tatildeo bem ouviu
nossas duacutevidas e sempre nos deu muito afeto continue recebendo bem os proacuteximos
que passarem por aqui e nunca perca o olhar doce de quem um dia jaacute foi aluna como
noacutes Agrave vocecirc que me permite chamaacute-la de Dani todo o meu carinho e amizade Agrave
Profa Dra Thais Marchini de Oliveira obrigada por ter me ensinado bem mais do
que eu vim aprender aqui Te levo no coraccedilatildeo e nunca vou me esquecer dos seus
conselhos e da sua maneira de levar a vida conte sempre comigo
Aos funcionaacuterios do Departamento D Lia Lilian Estela Faacutetima e
Alexandre companhias diaacuterias que foram muito importantes para que nossas
atividades dessem certo Sempre preocupadas para que nos sentiacutessemos bem
fizeram o nosso dia a dia ser muito mais agradaacutevel na companhia de vocecircs Obrigada
por tudo
Ao Andreacute teacutecnico do laboratoacuterio de Microbiologia que contribuiu
imensamente para que a fase laboratorial dessa pesquisa desse certo e que vibrou
junto comigo quando vimos os microrganismos crescendo no meio de cultura muito
muito obrigada Sua gentileza e paciecircncia comigo valeram ouro
Aos meus pacientes que me permitem ser ldquoTia Annerdquo e me motivam a
aprimorar meus conhecimentos para ganhar sorrisos como a maior recompensa do
meu trabalho
Aos colegas da Poacutes Graduaccedilatildeo em Odontopediatria Ana Paula Flaacutevia
Janaiacutena Maisa Vanessa Adriana Ana Liacutedia Akio Carla Juliana Natalino Susi
Sileide Tatiana e Priscila agradeccedilo a vocecircs os momentos de convivecircncia a
oportunidade de partilhar conhecimentos e de aprender com vocecircs Espero que a
distacircncia natildeo nos deixe perder o contato e que eu receba sempre boas notiacutecias de
vocecircs Sucesso amigos
Luciana bahiana linda e chique Muito sucesso pra vocecirc em todos os seus
projetos Obrigada pela companhia e pelas conversas animadas
Aos amigos da Patologia e da Dentiacutestica que navegaram comigo neste
mesmo barco e que foram oacutetimas companhias do meu dia a dia de mestrado
Tamara e Bianca lindas Obrigada pela companhia divertida de vocecircs
Sucesso Contem sempre comigo
Aos meus amigos que resistiram agrave minha ausecircncia que torceram por mim
e que eu pude contar em todos os momentos mesmo de longe amo vocecircs Em
especial a Juliana e a sua famiacutelia que me hospedaram com muito carinho em cada
maratona de idas e vindas o meu carinho e a minha amizade sempre
Ao Prof Dr Luiz Evaristo Ricci Volpato meu professor e amigo de todos
os momentos obrigada por me apresentar agrave FOB e toda a sua dimensatildeo e pelo
incentivo para que eu realizasse mais este sonho Seus conselhos valem ouro pra
mim e esse foi mais um precioso que eu recebi
Ao Prof Dr Heitor Marques Honoacuterio que colaborou na realizaccedilatildeo dos
testes estatiacutesticos desta pesquisa o meu agradecimento
Ao Cnpq pela concessatildeo da bolsa de estudos deste mestrado
Agraves minhas amigas Flaacutevia Janaiacutena e Maisa
ldquoQuem me daraacute um ombro amigo quando eu precisar
E se eu cair se eu vacilar quem vai me levantarrdquo
ldquoSou eu quem vai ouvir vocecirc quando o mundo natildeo puder te entender
Foi Deus quem te escolheu pra ser o melhor amigo que eu pudesse terrdquo
Amigos pra sempre Bons Amigos que nasceram pela feacute (de que tudo daria certo)
Amigos pra sempre Para sempre amigos sim se Deus quiser
ldquoQuem eacute que vai me acolher na minha indecisatildeo
Se eu me perder pelo caminho quem me daraacute a matildeordquo
ldquoFoi Deus quem consagrou vocecirc e eu para sermos bons amigos num soacute coraccedilatildeo
Por isso eu estarei aqui quando tudo parecer sem soluccedilatildeordquo
Peccedilo a Deus que te guarde e te decirc a sua Paz
Eu jamais poderia imaginar que o meu mestrado em Bauru me daria de presente 3
amigas como vocecircs Eu apenas tinha pedido a Deus que me desse forccedila pra dar
conta desse projeto e Ele me mandou vocecircs Natildeo foi por acaso natildeo foi forccedilado natildeo foi
arranjado foi sincero foi amizade verdadeira dessas que a gente leva pela vida toda
Acreditem vocecircs fizeram a diferenccedila na minha vida nesses dois anos e eu sei que
tambeacutem marquei a vida de vocecircs Aqui fomos um grupo tudo nosso foi dividido os
pacientes os seminaacuterios os problemas as anguacutestias as decepccedilotildees as coisas boas
as conquistas as risadas as caronas tudo absolutamente tudo Fomos o apoio a
ldquofamiacuteliardquo o socorro a conselheira uma da outra a companhia do fim de semana
chuvoso o desabafo quando a professora ldquoenlouqueciardquo ou quando o namorado pisava
na bola Cada uma sabe o quanto esses momentos foram importantes e levaremos
para sempre essa amizade que nos fez ser pessoas melhores que nos fez felizes
durante esse momento uacutenico para cada uma de noacutes Obrigada pelos momentos felizes
e pela amizade sincera que vivemos Amo muito vocecircs
Anne
ldquoNunca houve noite que pudesse impedir o nascer do sol e a
esperanccedilardquo
Autor desconhecido
ldquoEacute apenas com o coraccedilatildeo que se pode ver direito o essencial eacute
invisiacutevel aos olhosrdquo
Antoine Saint-Exupeacutery
RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
Referencias 95
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ANNELYZE PODOLAN KLOSTER
Dados Curriculares
Nascimento
Naturalidade
Filiaccedilatildeo
2002 ndash 2006
2007 ndash 2008
2007 ndash 2008
2009 ndash 2011
17 de fevereiro de 1984
Cuiabaacute ndash MT
Ronaldo Kloster
Emeri Fatima Podolan Kloster
Curso de Graduaccedilatildeo em Odontologia pela Universidade
de CuiabaacuteUNIC ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Especializaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva pelo
Instituto IBPEX Facinter ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Especializaccedilatildeo em Odontopediatria pela
Universidade de CuiabaacuteUNIC ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Odontologia niacutevel de
Mestrado Aacuterea de Concentraccedilatildeo Odontopediatria pela
Faculdade de Odontologia de Bauru ndash Universidade de
Satildeo Paulo ndash Bauru ndash SP
DEDICATOacuteRIA
A Deus Pelo dom que me deste pelas oportunidades que me apresentaste e pela vitoacuteria
alcanccedilada obrigada Senhor
ldquoQuando a solidatildeo doeu em mim ()
Quando eu natildeo soube compreender a vida Tu vieste compreender por mim
Quando os meus olhos natildeo podiam ver Tua matildeo segura me ajudou a andar
Quando eu natildeo tinha mais amor no peito Teu amor me ajudou a amar
Quando os meus sonhos vi desmoronar me trouxeste outros pra recomeccedilar
Quando me esqueci que era algueacutem na vida Teu amor veio me relembrarrdquo
Aos meus pais Ronaldo e Emeacuteri
Mais uma vez este sonho realizado eacute nosso Obrigada pela confianccedila Acredito
que vocecircs nunca imaginaram que eu chegaria tatildeo longe Sei que natildeo foi tatildeo simples
como da uacuteltima vez a saudade foi nossa companheira e a nossa rotina foi diferente
nestes uacuteltimos anos mas o amor de vocecircs foi o combustiacutevel para que eu realizasse
mais este projeto e mesmo com mais esse tiacutetulo continuo sendo o reflexo de vocecircs e
dos valores que me ensinaram Amo muito vocecircs
Ao meu irmatildeo Filype
Dines vocecirc continua sendo o meu maior orgulho Obrigada por ter cuidado do
pessoal de casa enquanto eu natildeo pude estar laacute Obrigada pela paciecircncia e pela
compreensatildeo Espero que esta minha vitoacuteria lhe sirva de inspiraccedilatildeo agora eacute a sua
vez
Ao meu amor Paulo Artur
ldquoE mesmo que eu viva pra sempre e todos os meus sonhos sejam realizados as
minhas lembranccedilas de amor sempre seratildeo suasrdquo (Perhaps love)
Obrigada pelo seu amor pelo incentivo por ser mais ldquorazatildeordquo por ter me
esperado e por ter vencido comigo mais esse desafio Acredito que dessa vez
descobrimos o valor que temos na vida um do outro e hoje vivemos de amor sincero e
admiraccedilatildeo muacutetua pois muito do que sou hoje devo a vocecirc TE AMO
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
Agrave Professora Dra Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado que
se tornou uma referencia iacutempar para mim todo o meu agradecimento e minha
admiraccedilatildeo sua disposiccedilatildeo contagiante e seu espiacuterito inovador me fizeram aceitar a
ideacuteia de colocar em praacutetica esta pesquisa que hoje apresentamos com um resultado
muito feliz e que foi comemorado com muito entusiasmo aprendi com vocecirc que
nunca devemos desistir de uma ideacuteia por mais inusitada que ela seja Agradeccedilo a
oportunidade de ter feito parte do seu time de alunos orientados e de ter aprendido
muito com vocecirc Foi uma honra ter convivido com vocecirc professora Muito Obrigada
Agrave Professora Dra Silgia Aparecida da Costa que deu ldquovidardquo agraves nossas
bandagens e prontamente nos ajudou a realizar este projeto Sua disponibilidade
atenccedilatildeo e a maneira carinhosa com que sempre nos atendeu satildeo raras de serem
encontradas Obrigada pela sua preciosa colaboraccedilatildeo
Aos professores do Departamento de Odontopediatria da Faculdade de
Odontologia de Bauru sou imensamente grata por ter sido aluna de vocecircs e vou levar
cada ensinamento como liccedilotildees para toda a vida Prof Dr Ruy Abdo praacutetico e
dinacircmico Prof Dr Joseacute Eduardo de Oliveira Lima pelas conversas sinceras e
pelos conselhos que recebi durante as cliacutenicas da graduaccedilatildeo receba todo o meu
carinho e a minha admiraccedilatildeo Profa Dra Salete Moura Bonifaacutecio Silva agradeccedilo
pela atenccedilatildeo dedicaccedilatildeo e conhecimentos transmitidos e por ter despertado em mim
um apreccedilo pelos gatinhos Profa Dra Daniela Rios que nos recebeu tatildeo bem ouviu
nossas duacutevidas e sempre nos deu muito afeto continue recebendo bem os proacuteximos
que passarem por aqui e nunca perca o olhar doce de quem um dia jaacute foi aluna como
noacutes Agrave vocecirc que me permite chamaacute-la de Dani todo o meu carinho e amizade Agrave
Profa Dra Thais Marchini de Oliveira obrigada por ter me ensinado bem mais do
que eu vim aprender aqui Te levo no coraccedilatildeo e nunca vou me esquecer dos seus
conselhos e da sua maneira de levar a vida conte sempre comigo
Aos funcionaacuterios do Departamento D Lia Lilian Estela Faacutetima e
Alexandre companhias diaacuterias que foram muito importantes para que nossas
atividades dessem certo Sempre preocupadas para que nos sentiacutessemos bem
fizeram o nosso dia a dia ser muito mais agradaacutevel na companhia de vocecircs Obrigada
por tudo
Ao Andreacute teacutecnico do laboratoacuterio de Microbiologia que contribuiu
imensamente para que a fase laboratorial dessa pesquisa desse certo e que vibrou
junto comigo quando vimos os microrganismos crescendo no meio de cultura muito
muito obrigada Sua gentileza e paciecircncia comigo valeram ouro
Aos meus pacientes que me permitem ser ldquoTia Annerdquo e me motivam a
aprimorar meus conhecimentos para ganhar sorrisos como a maior recompensa do
meu trabalho
Aos colegas da Poacutes Graduaccedilatildeo em Odontopediatria Ana Paula Flaacutevia
Janaiacutena Maisa Vanessa Adriana Ana Liacutedia Akio Carla Juliana Natalino Susi
Sileide Tatiana e Priscila agradeccedilo a vocecircs os momentos de convivecircncia a
oportunidade de partilhar conhecimentos e de aprender com vocecircs Espero que a
distacircncia natildeo nos deixe perder o contato e que eu receba sempre boas notiacutecias de
vocecircs Sucesso amigos
Luciana bahiana linda e chique Muito sucesso pra vocecirc em todos os seus
projetos Obrigada pela companhia e pelas conversas animadas
Aos amigos da Patologia e da Dentiacutestica que navegaram comigo neste
mesmo barco e que foram oacutetimas companhias do meu dia a dia de mestrado
Tamara e Bianca lindas Obrigada pela companhia divertida de vocecircs
Sucesso Contem sempre comigo
Aos meus amigos que resistiram agrave minha ausecircncia que torceram por mim
e que eu pude contar em todos os momentos mesmo de longe amo vocecircs Em
especial a Juliana e a sua famiacutelia que me hospedaram com muito carinho em cada
maratona de idas e vindas o meu carinho e a minha amizade sempre
Ao Prof Dr Luiz Evaristo Ricci Volpato meu professor e amigo de todos
os momentos obrigada por me apresentar agrave FOB e toda a sua dimensatildeo e pelo
incentivo para que eu realizasse mais este sonho Seus conselhos valem ouro pra
mim e esse foi mais um precioso que eu recebi
Ao Prof Dr Heitor Marques Honoacuterio que colaborou na realizaccedilatildeo dos
testes estatiacutesticos desta pesquisa o meu agradecimento
Ao Cnpq pela concessatildeo da bolsa de estudos deste mestrado
Agraves minhas amigas Flaacutevia Janaiacutena e Maisa
ldquoQuem me daraacute um ombro amigo quando eu precisar
E se eu cair se eu vacilar quem vai me levantarrdquo
ldquoSou eu quem vai ouvir vocecirc quando o mundo natildeo puder te entender
Foi Deus quem te escolheu pra ser o melhor amigo que eu pudesse terrdquo
Amigos pra sempre Bons Amigos que nasceram pela feacute (de que tudo daria certo)
Amigos pra sempre Para sempre amigos sim se Deus quiser
ldquoQuem eacute que vai me acolher na minha indecisatildeo
Se eu me perder pelo caminho quem me daraacute a matildeordquo
ldquoFoi Deus quem consagrou vocecirc e eu para sermos bons amigos num soacute coraccedilatildeo
Por isso eu estarei aqui quando tudo parecer sem soluccedilatildeordquo
Peccedilo a Deus que te guarde e te decirc a sua Paz
Eu jamais poderia imaginar que o meu mestrado em Bauru me daria de presente 3
amigas como vocecircs Eu apenas tinha pedido a Deus que me desse forccedila pra dar
conta desse projeto e Ele me mandou vocecircs Natildeo foi por acaso natildeo foi forccedilado natildeo foi
arranjado foi sincero foi amizade verdadeira dessas que a gente leva pela vida toda
Acreditem vocecircs fizeram a diferenccedila na minha vida nesses dois anos e eu sei que
tambeacutem marquei a vida de vocecircs Aqui fomos um grupo tudo nosso foi dividido os
pacientes os seminaacuterios os problemas as anguacutestias as decepccedilotildees as coisas boas
as conquistas as risadas as caronas tudo absolutamente tudo Fomos o apoio a
ldquofamiacuteliardquo o socorro a conselheira uma da outra a companhia do fim de semana
chuvoso o desabafo quando a professora ldquoenlouqueciardquo ou quando o namorado pisava
na bola Cada uma sabe o quanto esses momentos foram importantes e levaremos
para sempre essa amizade que nos fez ser pessoas melhores que nos fez felizes
durante esse momento uacutenico para cada uma de noacutes Obrigada pelos momentos felizes
e pela amizade sincera que vivemos Amo muito vocecircs
Anne
ldquoNunca houve noite que pudesse impedir o nascer do sol e a
esperanccedilardquo
Autor desconhecido
ldquoEacute apenas com o coraccedilatildeo que se pode ver direito o essencial eacute
invisiacutevel aos olhosrdquo
Antoine Saint-Exupeacutery
RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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2003 252(1) 41-51
50 Rodrigues MR Maciel SM Ferreira FBA Piovezan FPieralisi FJS
PoliFrederico RC Anaacutelise do sorotipo e dos genes para mutacinas em
streptococcus mutans isolados de preacute-escolares com diferentes experiecircncias
de caacuterie Cienc Odontol Bras 2008 11 (4) 40-46
51 Roumlrig KCO Colacite J Abegg MA Produccedilatildeo de fatores de virulecircncia in vitro
por espeacutecies patogecircnicas do gecircnero Candida Revista da Sociedade
Brasileira de Medicina Tropical 2009 42(2)225-227
52 Roumlsing CK Maltz M Oppermann RV Controle quiacutemico do biofilme
supragengival Cadernos da ABOPREV 2005 51-8
53 Sassone LM Fidel RAS Murad CF Fidel SR Hirata Jr R Antimicrobial
activity of sodium hypoclorite and chlorhexidine by two different tests Aust
Endod J 2008 34(1) 19-24
54 Semenoff TADV Borges AH Pedro FLM Silva Junior A Caporossi LS
Semenoff-Segundo A Comparative analyses of antimicrobial activity of 2
chlorhexidine Revista odonto ciecircncia 2010 1 1-5
55 Senel S et al Chitosan films and hydrogels of clorhexidine gluconate for oral
mucosal delivery International Journal of Pharmaceutics 2000193 197-
203
56 Silva TC Estudo dos efeitos da terapia fotodinamica sobre Streptococcus
mutans[Tese] Bauru (SP) Faculdade de Odontologia de Bauru
Universidade de Satildeo Paulo2010
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57 Spin-Neto R Pavone C Freitas RM Marcantonio RAC Marcantonio-Jr E
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deacetylation process on the physicochemical characteristics of chitosan from
squid chitin Polymer 2000 41 2463-69
59 Tolentino ES Chinellato LEM Tarzia O Avaliaccedilatildeo da aceitaccedilatildeo de pacientes
em relaccedilatildeo ao uso de antissepticos orais e estudo do pH das diferentes
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60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
com siacutendrome de Down ocorrecircncia e inibiccedilatildeo do crescimento por
Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
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61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
bacteacuterias orais [Dissertaccedilatildeo] Satildeo Carlos (SP) Faculdade de Odontologia
Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
bucal raacutedio e quimioinduzida Rev Bras Otorrinolaringol 2007 73 (4) 562-8
63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
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65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
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cavidade oral de indiviacuteduos HIV positivos Rev Soc Bras Med Trop 2007
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66 Zanatta FB Rosing CK Clorexidina mecanismo de accedilatildeo e evidencias atuais
de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
ANNELYZE PODOLAN KLOSTER
Dados Curriculares
Nascimento
Naturalidade
Filiaccedilatildeo
2002 ndash 2006
2007 ndash 2008
2007 ndash 2008
2009 ndash 2011
17 de fevereiro de 1984
Cuiabaacute ndash MT
Ronaldo Kloster
Emeri Fatima Podolan Kloster
Curso de Graduaccedilatildeo em Odontologia pela Universidade
de CuiabaacuteUNIC ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Especializaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva pelo
Instituto IBPEX Facinter ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Especializaccedilatildeo em Odontopediatria pela
Universidade de CuiabaacuteUNIC ndash Cuiabaacute ndash MT
Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Odontologia niacutevel de
Mestrado Aacuterea de Concentraccedilatildeo Odontopediatria pela
Faculdade de Odontologia de Bauru ndash Universidade de
Satildeo Paulo ndash Bauru ndash SP
DEDICATOacuteRIA
A Deus Pelo dom que me deste pelas oportunidades que me apresentaste e pela vitoacuteria
alcanccedilada obrigada Senhor
ldquoQuando a solidatildeo doeu em mim ()
Quando eu natildeo soube compreender a vida Tu vieste compreender por mim
Quando os meus olhos natildeo podiam ver Tua matildeo segura me ajudou a andar
Quando eu natildeo tinha mais amor no peito Teu amor me ajudou a amar
Quando os meus sonhos vi desmoronar me trouxeste outros pra recomeccedilar
Quando me esqueci que era algueacutem na vida Teu amor veio me relembrarrdquo
Aos meus pais Ronaldo e Emeacuteri
Mais uma vez este sonho realizado eacute nosso Obrigada pela confianccedila Acredito
que vocecircs nunca imaginaram que eu chegaria tatildeo longe Sei que natildeo foi tatildeo simples
como da uacuteltima vez a saudade foi nossa companheira e a nossa rotina foi diferente
nestes uacuteltimos anos mas o amor de vocecircs foi o combustiacutevel para que eu realizasse
mais este projeto e mesmo com mais esse tiacutetulo continuo sendo o reflexo de vocecircs e
dos valores que me ensinaram Amo muito vocecircs
Ao meu irmatildeo Filype
Dines vocecirc continua sendo o meu maior orgulho Obrigada por ter cuidado do
pessoal de casa enquanto eu natildeo pude estar laacute Obrigada pela paciecircncia e pela
compreensatildeo Espero que esta minha vitoacuteria lhe sirva de inspiraccedilatildeo agora eacute a sua
vez
Ao meu amor Paulo Artur
ldquoE mesmo que eu viva pra sempre e todos os meus sonhos sejam realizados as
minhas lembranccedilas de amor sempre seratildeo suasrdquo (Perhaps love)
Obrigada pelo seu amor pelo incentivo por ser mais ldquorazatildeordquo por ter me
esperado e por ter vencido comigo mais esse desafio Acredito que dessa vez
descobrimos o valor que temos na vida um do outro e hoje vivemos de amor sincero e
admiraccedilatildeo muacutetua pois muito do que sou hoje devo a vocecirc TE AMO
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
Agrave Professora Dra Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado que
se tornou uma referencia iacutempar para mim todo o meu agradecimento e minha
admiraccedilatildeo sua disposiccedilatildeo contagiante e seu espiacuterito inovador me fizeram aceitar a
ideacuteia de colocar em praacutetica esta pesquisa que hoje apresentamos com um resultado
muito feliz e que foi comemorado com muito entusiasmo aprendi com vocecirc que
nunca devemos desistir de uma ideacuteia por mais inusitada que ela seja Agradeccedilo a
oportunidade de ter feito parte do seu time de alunos orientados e de ter aprendido
muito com vocecirc Foi uma honra ter convivido com vocecirc professora Muito Obrigada
Agrave Professora Dra Silgia Aparecida da Costa que deu ldquovidardquo agraves nossas
bandagens e prontamente nos ajudou a realizar este projeto Sua disponibilidade
atenccedilatildeo e a maneira carinhosa com que sempre nos atendeu satildeo raras de serem
encontradas Obrigada pela sua preciosa colaboraccedilatildeo
Aos professores do Departamento de Odontopediatria da Faculdade de
Odontologia de Bauru sou imensamente grata por ter sido aluna de vocecircs e vou levar
cada ensinamento como liccedilotildees para toda a vida Prof Dr Ruy Abdo praacutetico e
dinacircmico Prof Dr Joseacute Eduardo de Oliveira Lima pelas conversas sinceras e
pelos conselhos que recebi durante as cliacutenicas da graduaccedilatildeo receba todo o meu
carinho e a minha admiraccedilatildeo Profa Dra Salete Moura Bonifaacutecio Silva agradeccedilo
pela atenccedilatildeo dedicaccedilatildeo e conhecimentos transmitidos e por ter despertado em mim
um apreccedilo pelos gatinhos Profa Dra Daniela Rios que nos recebeu tatildeo bem ouviu
nossas duacutevidas e sempre nos deu muito afeto continue recebendo bem os proacuteximos
que passarem por aqui e nunca perca o olhar doce de quem um dia jaacute foi aluna como
noacutes Agrave vocecirc que me permite chamaacute-la de Dani todo o meu carinho e amizade Agrave
Profa Dra Thais Marchini de Oliveira obrigada por ter me ensinado bem mais do
que eu vim aprender aqui Te levo no coraccedilatildeo e nunca vou me esquecer dos seus
conselhos e da sua maneira de levar a vida conte sempre comigo
Aos funcionaacuterios do Departamento D Lia Lilian Estela Faacutetima e
Alexandre companhias diaacuterias que foram muito importantes para que nossas
atividades dessem certo Sempre preocupadas para que nos sentiacutessemos bem
fizeram o nosso dia a dia ser muito mais agradaacutevel na companhia de vocecircs Obrigada
por tudo
Ao Andreacute teacutecnico do laboratoacuterio de Microbiologia que contribuiu
imensamente para que a fase laboratorial dessa pesquisa desse certo e que vibrou
junto comigo quando vimos os microrganismos crescendo no meio de cultura muito
muito obrigada Sua gentileza e paciecircncia comigo valeram ouro
Aos meus pacientes que me permitem ser ldquoTia Annerdquo e me motivam a
aprimorar meus conhecimentos para ganhar sorrisos como a maior recompensa do
meu trabalho
Aos colegas da Poacutes Graduaccedilatildeo em Odontopediatria Ana Paula Flaacutevia
Janaiacutena Maisa Vanessa Adriana Ana Liacutedia Akio Carla Juliana Natalino Susi
Sileide Tatiana e Priscila agradeccedilo a vocecircs os momentos de convivecircncia a
oportunidade de partilhar conhecimentos e de aprender com vocecircs Espero que a
distacircncia natildeo nos deixe perder o contato e que eu receba sempre boas notiacutecias de
vocecircs Sucesso amigos
Luciana bahiana linda e chique Muito sucesso pra vocecirc em todos os seus
projetos Obrigada pela companhia e pelas conversas animadas
Aos amigos da Patologia e da Dentiacutestica que navegaram comigo neste
mesmo barco e que foram oacutetimas companhias do meu dia a dia de mestrado
Tamara e Bianca lindas Obrigada pela companhia divertida de vocecircs
Sucesso Contem sempre comigo
Aos meus amigos que resistiram agrave minha ausecircncia que torceram por mim
e que eu pude contar em todos os momentos mesmo de longe amo vocecircs Em
especial a Juliana e a sua famiacutelia que me hospedaram com muito carinho em cada
maratona de idas e vindas o meu carinho e a minha amizade sempre
Ao Prof Dr Luiz Evaristo Ricci Volpato meu professor e amigo de todos
os momentos obrigada por me apresentar agrave FOB e toda a sua dimensatildeo e pelo
incentivo para que eu realizasse mais este sonho Seus conselhos valem ouro pra
mim e esse foi mais um precioso que eu recebi
Ao Prof Dr Heitor Marques Honoacuterio que colaborou na realizaccedilatildeo dos
testes estatiacutesticos desta pesquisa o meu agradecimento
Ao Cnpq pela concessatildeo da bolsa de estudos deste mestrado
Agraves minhas amigas Flaacutevia Janaiacutena e Maisa
ldquoQuem me daraacute um ombro amigo quando eu precisar
E se eu cair se eu vacilar quem vai me levantarrdquo
ldquoSou eu quem vai ouvir vocecirc quando o mundo natildeo puder te entender
Foi Deus quem te escolheu pra ser o melhor amigo que eu pudesse terrdquo
Amigos pra sempre Bons Amigos que nasceram pela feacute (de que tudo daria certo)
Amigos pra sempre Para sempre amigos sim se Deus quiser
ldquoQuem eacute que vai me acolher na minha indecisatildeo
Se eu me perder pelo caminho quem me daraacute a matildeordquo
ldquoFoi Deus quem consagrou vocecirc e eu para sermos bons amigos num soacute coraccedilatildeo
Por isso eu estarei aqui quando tudo parecer sem soluccedilatildeordquo
Peccedilo a Deus que te guarde e te decirc a sua Paz
Eu jamais poderia imaginar que o meu mestrado em Bauru me daria de presente 3
amigas como vocecircs Eu apenas tinha pedido a Deus que me desse forccedila pra dar
conta desse projeto e Ele me mandou vocecircs Natildeo foi por acaso natildeo foi forccedilado natildeo foi
arranjado foi sincero foi amizade verdadeira dessas que a gente leva pela vida toda
Acreditem vocecircs fizeram a diferenccedila na minha vida nesses dois anos e eu sei que
tambeacutem marquei a vida de vocecircs Aqui fomos um grupo tudo nosso foi dividido os
pacientes os seminaacuterios os problemas as anguacutestias as decepccedilotildees as coisas boas
as conquistas as risadas as caronas tudo absolutamente tudo Fomos o apoio a
ldquofamiacuteliardquo o socorro a conselheira uma da outra a companhia do fim de semana
chuvoso o desabafo quando a professora ldquoenlouqueciardquo ou quando o namorado pisava
na bola Cada uma sabe o quanto esses momentos foram importantes e levaremos
para sempre essa amizade que nos fez ser pessoas melhores que nos fez felizes
durante esse momento uacutenico para cada uma de noacutes Obrigada pelos momentos felizes
e pela amizade sincera que vivemos Amo muito vocecircs
Anne
ldquoNunca houve noite que pudesse impedir o nascer do sol e a
esperanccedilardquo
Autor desconhecido
ldquoEacute apenas com o coraccedilatildeo que se pode ver direito o essencial eacute
invisiacutevel aos olhosrdquo
Antoine Saint-Exupeacutery
RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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DEDICATOacuteRIA
A Deus Pelo dom que me deste pelas oportunidades que me apresentaste e pela vitoacuteria
alcanccedilada obrigada Senhor
ldquoQuando a solidatildeo doeu em mim ()
Quando eu natildeo soube compreender a vida Tu vieste compreender por mim
Quando os meus olhos natildeo podiam ver Tua matildeo segura me ajudou a andar
Quando eu natildeo tinha mais amor no peito Teu amor me ajudou a amar
Quando os meus sonhos vi desmoronar me trouxeste outros pra recomeccedilar
Quando me esqueci que era algueacutem na vida Teu amor veio me relembrarrdquo
Aos meus pais Ronaldo e Emeacuteri
Mais uma vez este sonho realizado eacute nosso Obrigada pela confianccedila Acredito
que vocecircs nunca imaginaram que eu chegaria tatildeo longe Sei que natildeo foi tatildeo simples
como da uacuteltima vez a saudade foi nossa companheira e a nossa rotina foi diferente
nestes uacuteltimos anos mas o amor de vocecircs foi o combustiacutevel para que eu realizasse
mais este projeto e mesmo com mais esse tiacutetulo continuo sendo o reflexo de vocecircs e
dos valores que me ensinaram Amo muito vocecircs
Ao meu irmatildeo Filype
Dines vocecirc continua sendo o meu maior orgulho Obrigada por ter cuidado do
pessoal de casa enquanto eu natildeo pude estar laacute Obrigada pela paciecircncia e pela
compreensatildeo Espero que esta minha vitoacuteria lhe sirva de inspiraccedilatildeo agora eacute a sua
vez
Ao meu amor Paulo Artur
ldquoE mesmo que eu viva pra sempre e todos os meus sonhos sejam realizados as
minhas lembranccedilas de amor sempre seratildeo suasrdquo (Perhaps love)
Obrigada pelo seu amor pelo incentivo por ser mais ldquorazatildeordquo por ter me
esperado e por ter vencido comigo mais esse desafio Acredito que dessa vez
descobrimos o valor que temos na vida um do outro e hoje vivemos de amor sincero e
admiraccedilatildeo muacutetua pois muito do que sou hoje devo a vocecirc TE AMO
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
Agrave Professora Dra Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado que
se tornou uma referencia iacutempar para mim todo o meu agradecimento e minha
admiraccedilatildeo sua disposiccedilatildeo contagiante e seu espiacuterito inovador me fizeram aceitar a
ideacuteia de colocar em praacutetica esta pesquisa que hoje apresentamos com um resultado
muito feliz e que foi comemorado com muito entusiasmo aprendi com vocecirc que
nunca devemos desistir de uma ideacuteia por mais inusitada que ela seja Agradeccedilo a
oportunidade de ter feito parte do seu time de alunos orientados e de ter aprendido
muito com vocecirc Foi uma honra ter convivido com vocecirc professora Muito Obrigada
Agrave Professora Dra Silgia Aparecida da Costa que deu ldquovidardquo agraves nossas
bandagens e prontamente nos ajudou a realizar este projeto Sua disponibilidade
atenccedilatildeo e a maneira carinhosa com que sempre nos atendeu satildeo raras de serem
encontradas Obrigada pela sua preciosa colaboraccedilatildeo
Aos professores do Departamento de Odontopediatria da Faculdade de
Odontologia de Bauru sou imensamente grata por ter sido aluna de vocecircs e vou levar
cada ensinamento como liccedilotildees para toda a vida Prof Dr Ruy Abdo praacutetico e
dinacircmico Prof Dr Joseacute Eduardo de Oliveira Lima pelas conversas sinceras e
pelos conselhos que recebi durante as cliacutenicas da graduaccedilatildeo receba todo o meu
carinho e a minha admiraccedilatildeo Profa Dra Salete Moura Bonifaacutecio Silva agradeccedilo
pela atenccedilatildeo dedicaccedilatildeo e conhecimentos transmitidos e por ter despertado em mim
um apreccedilo pelos gatinhos Profa Dra Daniela Rios que nos recebeu tatildeo bem ouviu
nossas duacutevidas e sempre nos deu muito afeto continue recebendo bem os proacuteximos
que passarem por aqui e nunca perca o olhar doce de quem um dia jaacute foi aluna como
noacutes Agrave vocecirc que me permite chamaacute-la de Dani todo o meu carinho e amizade Agrave
Profa Dra Thais Marchini de Oliveira obrigada por ter me ensinado bem mais do
que eu vim aprender aqui Te levo no coraccedilatildeo e nunca vou me esquecer dos seus
conselhos e da sua maneira de levar a vida conte sempre comigo
Aos funcionaacuterios do Departamento D Lia Lilian Estela Faacutetima e
Alexandre companhias diaacuterias que foram muito importantes para que nossas
atividades dessem certo Sempre preocupadas para que nos sentiacutessemos bem
fizeram o nosso dia a dia ser muito mais agradaacutevel na companhia de vocecircs Obrigada
por tudo
Ao Andreacute teacutecnico do laboratoacuterio de Microbiologia que contribuiu
imensamente para que a fase laboratorial dessa pesquisa desse certo e que vibrou
junto comigo quando vimos os microrganismos crescendo no meio de cultura muito
muito obrigada Sua gentileza e paciecircncia comigo valeram ouro
Aos meus pacientes que me permitem ser ldquoTia Annerdquo e me motivam a
aprimorar meus conhecimentos para ganhar sorrisos como a maior recompensa do
meu trabalho
Aos colegas da Poacutes Graduaccedilatildeo em Odontopediatria Ana Paula Flaacutevia
Janaiacutena Maisa Vanessa Adriana Ana Liacutedia Akio Carla Juliana Natalino Susi
Sileide Tatiana e Priscila agradeccedilo a vocecircs os momentos de convivecircncia a
oportunidade de partilhar conhecimentos e de aprender com vocecircs Espero que a
distacircncia natildeo nos deixe perder o contato e que eu receba sempre boas notiacutecias de
vocecircs Sucesso amigos
Luciana bahiana linda e chique Muito sucesso pra vocecirc em todos os seus
projetos Obrigada pela companhia e pelas conversas animadas
Aos amigos da Patologia e da Dentiacutestica que navegaram comigo neste
mesmo barco e que foram oacutetimas companhias do meu dia a dia de mestrado
Tamara e Bianca lindas Obrigada pela companhia divertida de vocecircs
Sucesso Contem sempre comigo
Aos meus amigos que resistiram agrave minha ausecircncia que torceram por mim
e que eu pude contar em todos os momentos mesmo de longe amo vocecircs Em
especial a Juliana e a sua famiacutelia que me hospedaram com muito carinho em cada
maratona de idas e vindas o meu carinho e a minha amizade sempre
Ao Prof Dr Luiz Evaristo Ricci Volpato meu professor e amigo de todos
os momentos obrigada por me apresentar agrave FOB e toda a sua dimensatildeo e pelo
incentivo para que eu realizasse mais este sonho Seus conselhos valem ouro pra
mim e esse foi mais um precioso que eu recebi
Ao Prof Dr Heitor Marques Honoacuterio que colaborou na realizaccedilatildeo dos
testes estatiacutesticos desta pesquisa o meu agradecimento
Ao Cnpq pela concessatildeo da bolsa de estudos deste mestrado
Agraves minhas amigas Flaacutevia Janaiacutena e Maisa
ldquoQuem me daraacute um ombro amigo quando eu precisar
E se eu cair se eu vacilar quem vai me levantarrdquo
ldquoSou eu quem vai ouvir vocecirc quando o mundo natildeo puder te entender
Foi Deus quem te escolheu pra ser o melhor amigo que eu pudesse terrdquo
Amigos pra sempre Bons Amigos que nasceram pela feacute (de que tudo daria certo)
Amigos pra sempre Para sempre amigos sim se Deus quiser
ldquoQuem eacute que vai me acolher na minha indecisatildeo
Se eu me perder pelo caminho quem me daraacute a matildeordquo
ldquoFoi Deus quem consagrou vocecirc e eu para sermos bons amigos num soacute coraccedilatildeo
Por isso eu estarei aqui quando tudo parecer sem soluccedilatildeordquo
Peccedilo a Deus que te guarde e te decirc a sua Paz
Eu jamais poderia imaginar que o meu mestrado em Bauru me daria de presente 3
amigas como vocecircs Eu apenas tinha pedido a Deus que me desse forccedila pra dar
conta desse projeto e Ele me mandou vocecircs Natildeo foi por acaso natildeo foi forccedilado natildeo foi
arranjado foi sincero foi amizade verdadeira dessas que a gente leva pela vida toda
Acreditem vocecircs fizeram a diferenccedila na minha vida nesses dois anos e eu sei que
tambeacutem marquei a vida de vocecircs Aqui fomos um grupo tudo nosso foi dividido os
pacientes os seminaacuterios os problemas as anguacutestias as decepccedilotildees as coisas boas
as conquistas as risadas as caronas tudo absolutamente tudo Fomos o apoio a
ldquofamiacuteliardquo o socorro a conselheira uma da outra a companhia do fim de semana
chuvoso o desabafo quando a professora ldquoenlouqueciardquo ou quando o namorado pisava
na bola Cada uma sabe o quanto esses momentos foram importantes e levaremos
para sempre essa amizade que nos fez ser pessoas melhores que nos fez felizes
durante esse momento uacutenico para cada uma de noacutes Obrigada pelos momentos felizes
e pela amizade sincera que vivemos Amo muito vocecircs
Anne
ldquoNunca houve noite que pudesse impedir o nascer do sol e a
esperanccedilardquo
Autor desconhecido
ldquoEacute apenas com o coraccedilatildeo que se pode ver direito o essencial eacute
invisiacutevel aos olhosrdquo
Antoine Saint-Exupeacutery
RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS
Agrave Professora Dra Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado que
se tornou uma referencia iacutempar para mim todo o meu agradecimento e minha
admiraccedilatildeo sua disposiccedilatildeo contagiante e seu espiacuterito inovador me fizeram aceitar a
ideacuteia de colocar em praacutetica esta pesquisa que hoje apresentamos com um resultado
muito feliz e que foi comemorado com muito entusiasmo aprendi com vocecirc que
nunca devemos desistir de uma ideacuteia por mais inusitada que ela seja Agradeccedilo a
oportunidade de ter feito parte do seu time de alunos orientados e de ter aprendido
muito com vocecirc Foi uma honra ter convivido com vocecirc professora Muito Obrigada
Agrave Professora Dra Silgia Aparecida da Costa que deu ldquovidardquo agraves nossas
bandagens e prontamente nos ajudou a realizar este projeto Sua disponibilidade
atenccedilatildeo e a maneira carinhosa com que sempre nos atendeu satildeo raras de serem
encontradas Obrigada pela sua preciosa colaboraccedilatildeo
Aos professores do Departamento de Odontopediatria da Faculdade de
Odontologia de Bauru sou imensamente grata por ter sido aluna de vocecircs e vou levar
cada ensinamento como liccedilotildees para toda a vida Prof Dr Ruy Abdo praacutetico e
dinacircmico Prof Dr Joseacute Eduardo de Oliveira Lima pelas conversas sinceras e
pelos conselhos que recebi durante as cliacutenicas da graduaccedilatildeo receba todo o meu
carinho e a minha admiraccedilatildeo Profa Dra Salete Moura Bonifaacutecio Silva agradeccedilo
pela atenccedilatildeo dedicaccedilatildeo e conhecimentos transmitidos e por ter despertado em mim
um apreccedilo pelos gatinhos Profa Dra Daniela Rios que nos recebeu tatildeo bem ouviu
nossas duacutevidas e sempre nos deu muito afeto continue recebendo bem os proacuteximos
que passarem por aqui e nunca perca o olhar doce de quem um dia jaacute foi aluna como
noacutes Agrave vocecirc que me permite chamaacute-la de Dani todo o meu carinho e amizade Agrave
Profa Dra Thais Marchini de Oliveira obrigada por ter me ensinado bem mais do
que eu vim aprender aqui Te levo no coraccedilatildeo e nunca vou me esquecer dos seus
conselhos e da sua maneira de levar a vida conte sempre comigo
Aos funcionaacuterios do Departamento D Lia Lilian Estela Faacutetima e
Alexandre companhias diaacuterias que foram muito importantes para que nossas
atividades dessem certo Sempre preocupadas para que nos sentiacutessemos bem
fizeram o nosso dia a dia ser muito mais agradaacutevel na companhia de vocecircs Obrigada
por tudo
Ao Andreacute teacutecnico do laboratoacuterio de Microbiologia que contribuiu
imensamente para que a fase laboratorial dessa pesquisa desse certo e que vibrou
junto comigo quando vimos os microrganismos crescendo no meio de cultura muito
muito obrigada Sua gentileza e paciecircncia comigo valeram ouro
Aos meus pacientes que me permitem ser ldquoTia Annerdquo e me motivam a
aprimorar meus conhecimentos para ganhar sorrisos como a maior recompensa do
meu trabalho
Aos colegas da Poacutes Graduaccedilatildeo em Odontopediatria Ana Paula Flaacutevia
Janaiacutena Maisa Vanessa Adriana Ana Liacutedia Akio Carla Juliana Natalino Susi
Sileide Tatiana e Priscila agradeccedilo a vocecircs os momentos de convivecircncia a
oportunidade de partilhar conhecimentos e de aprender com vocecircs Espero que a
distacircncia natildeo nos deixe perder o contato e que eu receba sempre boas notiacutecias de
vocecircs Sucesso amigos
Luciana bahiana linda e chique Muito sucesso pra vocecirc em todos os seus
projetos Obrigada pela companhia e pelas conversas animadas
Aos amigos da Patologia e da Dentiacutestica que navegaram comigo neste
mesmo barco e que foram oacutetimas companhias do meu dia a dia de mestrado
Tamara e Bianca lindas Obrigada pela companhia divertida de vocecircs
Sucesso Contem sempre comigo
Aos meus amigos que resistiram agrave minha ausecircncia que torceram por mim
e que eu pude contar em todos os momentos mesmo de longe amo vocecircs Em
especial a Juliana e a sua famiacutelia que me hospedaram com muito carinho em cada
maratona de idas e vindas o meu carinho e a minha amizade sempre
Ao Prof Dr Luiz Evaristo Ricci Volpato meu professor e amigo de todos
os momentos obrigada por me apresentar agrave FOB e toda a sua dimensatildeo e pelo
incentivo para que eu realizasse mais este sonho Seus conselhos valem ouro pra
mim e esse foi mais um precioso que eu recebi
Ao Prof Dr Heitor Marques Honoacuterio que colaborou na realizaccedilatildeo dos
testes estatiacutesticos desta pesquisa o meu agradecimento
Ao Cnpq pela concessatildeo da bolsa de estudos deste mestrado
Agraves minhas amigas Flaacutevia Janaiacutena e Maisa
ldquoQuem me daraacute um ombro amigo quando eu precisar
E se eu cair se eu vacilar quem vai me levantarrdquo
ldquoSou eu quem vai ouvir vocecirc quando o mundo natildeo puder te entender
Foi Deus quem te escolheu pra ser o melhor amigo que eu pudesse terrdquo
Amigos pra sempre Bons Amigos que nasceram pela feacute (de que tudo daria certo)
Amigos pra sempre Para sempre amigos sim se Deus quiser
ldquoQuem eacute que vai me acolher na minha indecisatildeo
Se eu me perder pelo caminho quem me daraacute a matildeordquo
ldquoFoi Deus quem consagrou vocecirc e eu para sermos bons amigos num soacute coraccedilatildeo
Por isso eu estarei aqui quando tudo parecer sem soluccedilatildeordquo
Peccedilo a Deus que te guarde e te decirc a sua Paz
Eu jamais poderia imaginar que o meu mestrado em Bauru me daria de presente 3
amigas como vocecircs Eu apenas tinha pedido a Deus que me desse forccedila pra dar
conta desse projeto e Ele me mandou vocecircs Natildeo foi por acaso natildeo foi forccedilado natildeo foi
arranjado foi sincero foi amizade verdadeira dessas que a gente leva pela vida toda
Acreditem vocecircs fizeram a diferenccedila na minha vida nesses dois anos e eu sei que
tambeacutem marquei a vida de vocecircs Aqui fomos um grupo tudo nosso foi dividido os
pacientes os seminaacuterios os problemas as anguacutestias as decepccedilotildees as coisas boas
as conquistas as risadas as caronas tudo absolutamente tudo Fomos o apoio a
ldquofamiacuteliardquo o socorro a conselheira uma da outra a companhia do fim de semana
chuvoso o desabafo quando a professora ldquoenlouqueciardquo ou quando o namorado pisava
na bola Cada uma sabe o quanto esses momentos foram importantes e levaremos
para sempre essa amizade que nos fez ser pessoas melhores que nos fez felizes
durante esse momento uacutenico para cada uma de noacutes Obrigada pelos momentos felizes
e pela amizade sincera que vivemos Amo muito vocecircs
Anne
ldquoNunca houve noite que pudesse impedir o nascer do sol e a
esperanccedilardquo
Autor desconhecido
ldquoEacute apenas com o coraccedilatildeo que se pode ver direito o essencial eacute
invisiacutevel aos olhosrdquo
Antoine Saint-Exupeacutery
RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
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PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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203
56 Silva TC Estudo dos efeitos da terapia fotodinamica sobre Streptococcus
mutans[Tese] Bauru (SP) Faculdade de Odontologia de Bauru
Universidade de Satildeo Paulo2010
Referencias 100
57 Spin-Neto R Pavone C Freitas RM Marcantonio RAC Marcantonio-Jr E
Chitosan based biomaterials with medical and dental application literature
review Rev Odontol UNESP 37(2) 155-161 2008
58 Tolaimate DJ Rhazi M Alaguiacute A Vicendon M Vottero P On the influence of
deacetylation process on the physicochemical characteristics of chitosan from
squid chitin Polymer 2000 41 2463-69
59 Tolentino ES Chinellato LEM Tarzia O Avaliaccedilatildeo da aceitaccedilatildeo de pacientes
em relaccedilatildeo ao uso de antissepticos orais e estudo do pH das diferentes
soluccedilotildees Rev Bras Odontol 2010 67(1)13-18
60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
com siacutendrome de Down ocorrecircncia e inibiccedilatildeo do crescimento por
Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
38(5)383-386
61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
bacteacuterias orais [Dissertaccedilatildeo] Satildeo Carlos (SP) Faculdade de Odontologia
Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
bucal raacutedio e quimioinduzida Rev Bras Otorrinolaringol 2007 73 (4) 562-8
63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
(3)749-53
65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
cavidade oral de indiviacuteduos HIV positivos Rev Soc Bras Med Trop 2007
40(3)272-276
66 Zanatta FB Rosing CK Clorexidina mecanismo de accedilatildeo e evidencias atuais
de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
Ao Andreacute teacutecnico do laboratoacuterio de Microbiologia que contribuiu
imensamente para que a fase laboratorial dessa pesquisa desse certo e que vibrou
junto comigo quando vimos os microrganismos crescendo no meio de cultura muito
muito obrigada Sua gentileza e paciecircncia comigo valeram ouro
Aos meus pacientes que me permitem ser ldquoTia Annerdquo e me motivam a
aprimorar meus conhecimentos para ganhar sorrisos como a maior recompensa do
meu trabalho
Aos colegas da Poacutes Graduaccedilatildeo em Odontopediatria Ana Paula Flaacutevia
Janaiacutena Maisa Vanessa Adriana Ana Liacutedia Akio Carla Juliana Natalino Susi
Sileide Tatiana e Priscila agradeccedilo a vocecircs os momentos de convivecircncia a
oportunidade de partilhar conhecimentos e de aprender com vocecircs Espero que a
distacircncia natildeo nos deixe perder o contato e que eu receba sempre boas notiacutecias de
vocecircs Sucesso amigos
Luciana bahiana linda e chique Muito sucesso pra vocecirc em todos os seus
projetos Obrigada pela companhia e pelas conversas animadas
Aos amigos da Patologia e da Dentiacutestica que navegaram comigo neste
mesmo barco e que foram oacutetimas companhias do meu dia a dia de mestrado
Tamara e Bianca lindas Obrigada pela companhia divertida de vocecircs
Sucesso Contem sempre comigo
Aos meus amigos que resistiram agrave minha ausecircncia que torceram por mim
e que eu pude contar em todos os momentos mesmo de longe amo vocecircs Em
especial a Juliana e a sua famiacutelia que me hospedaram com muito carinho em cada
maratona de idas e vindas o meu carinho e a minha amizade sempre
Ao Prof Dr Luiz Evaristo Ricci Volpato meu professor e amigo de todos
os momentos obrigada por me apresentar agrave FOB e toda a sua dimensatildeo e pelo
incentivo para que eu realizasse mais este sonho Seus conselhos valem ouro pra
mim e esse foi mais um precioso que eu recebi
Ao Prof Dr Heitor Marques Honoacuterio que colaborou na realizaccedilatildeo dos
testes estatiacutesticos desta pesquisa o meu agradecimento
Ao Cnpq pela concessatildeo da bolsa de estudos deste mestrado
Agraves minhas amigas Flaacutevia Janaiacutena e Maisa
ldquoQuem me daraacute um ombro amigo quando eu precisar
E se eu cair se eu vacilar quem vai me levantarrdquo
ldquoSou eu quem vai ouvir vocecirc quando o mundo natildeo puder te entender
Foi Deus quem te escolheu pra ser o melhor amigo que eu pudesse terrdquo
Amigos pra sempre Bons Amigos que nasceram pela feacute (de que tudo daria certo)
Amigos pra sempre Para sempre amigos sim se Deus quiser
ldquoQuem eacute que vai me acolher na minha indecisatildeo
Se eu me perder pelo caminho quem me daraacute a matildeordquo
ldquoFoi Deus quem consagrou vocecirc e eu para sermos bons amigos num soacute coraccedilatildeo
Por isso eu estarei aqui quando tudo parecer sem soluccedilatildeordquo
Peccedilo a Deus que te guarde e te decirc a sua Paz
Eu jamais poderia imaginar que o meu mestrado em Bauru me daria de presente 3
amigas como vocecircs Eu apenas tinha pedido a Deus que me desse forccedila pra dar
conta desse projeto e Ele me mandou vocecircs Natildeo foi por acaso natildeo foi forccedilado natildeo foi
arranjado foi sincero foi amizade verdadeira dessas que a gente leva pela vida toda
Acreditem vocecircs fizeram a diferenccedila na minha vida nesses dois anos e eu sei que
tambeacutem marquei a vida de vocecircs Aqui fomos um grupo tudo nosso foi dividido os
pacientes os seminaacuterios os problemas as anguacutestias as decepccedilotildees as coisas boas
as conquistas as risadas as caronas tudo absolutamente tudo Fomos o apoio a
ldquofamiacuteliardquo o socorro a conselheira uma da outra a companhia do fim de semana
chuvoso o desabafo quando a professora ldquoenlouqueciardquo ou quando o namorado pisava
na bola Cada uma sabe o quanto esses momentos foram importantes e levaremos
para sempre essa amizade que nos fez ser pessoas melhores que nos fez felizes
durante esse momento uacutenico para cada uma de noacutes Obrigada pelos momentos felizes
e pela amizade sincera que vivemos Amo muito vocecircs
Anne
ldquoNunca houve noite que pudesse impedir o nascer do sol e a
esperanccedilardquo
Autor desconhecido
ldquoEacute apenas com o coraccedilatildeo que se pode ver direito o essencial eacute
invisiacutevel aos olhosrdquo
Antoine Saint-Exupeacutery
RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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Agraves minhas amigas Flaacutevia Janaiacutena e Maisa
ldquoQuem me daraacute um ombro amigo quando eu precisar
E se eu cair se eu vacilar quem vai me levantarrdquo
ldquoSou eu quem vai ouvir vocecirc quando o mundo natildeo puder te entender
Foi Deus quem te escolheu pra ser o melhor amigo que eu pudesse terrdquo
Amigos pra sempre Bons Amigos que nasceram pela feacute (de que tudo daria certo)
Amigos pra sempre Para sempre amigos sim se Deus quiser
ldquoQuem eacute que vai me acolher na minha indecisatildeo
Se eu me perder pelo caminho quem me daraacute a matildeordquo
ldquoFoi Deus quem consagrou vocecirc e eu para sermos bons amigos num soacute coraccedilatildeo
Por isso eu estarei aqui quando tudo parecer sem soluccedilatildeordquo
Peccedilo a Deus que te guarde e te decirc a sua Paz
Eu jamais poderia imaginar que o meu mestrado em Bauru me daria de presente 3
amigas como vocecircs Eu apenas tinha pedido a Deus que me desse forccedila pra dar
conta desse projeto e Ele me mandou vocecircs Natildeo foi por acaso natildeo foi forccedilado natildeo foi
arranjado foi sincero foi amizade verdadeira dessas que a gente leva pela vida toda
Acreditem vocecircs fizeram a diferenccedila na minha vida nesses dois anos e eu sei que
tambeacutem marquei a vida de vocecircs Aqui fomos um grupo tudo nosso foi dividido os
pacientes os seminaacuterios os problemas as anguacutestias as decepccedilotildees as coisas boas
as conquistas as risadas as caronas tudo absolutamente tudo Fomos o apoio a
ldquofamiacuteliardquo o socorro a conselheira uma da outra a companhia do fim de semana
chuvoso o desabafo quando a professora ldquoenlouqueciardquo ou quando o namorado pisava
na bola Cada uma sabe o quanto esses momentos foram importantes e levaremos
para sempre essa amizade que nos fez ser pessoas melhores que nos fez felizes
durante esse momento uacutenico para cada uma de noacutes Obrigada pelos momentos felizes
e pela amizade sincera que vivemos Amo muito vocecircs
Anne
ldquoNunca houve noite que pudesse impedir o nascer do sol e a
esperanccedilardquo
Autor desconhecido
ldquoEacute apenas com o coraccedilatildeo que se pode ver direito o essencial eacute
invisiacutevel aos olhosrdquo
Antoine Saint-Exupeacutery
RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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squid chitin Polymer 2000 41 2463-69
59 Tolentino ES Chinellato LEM Tarzia O Avaliaccedilatildeo da aceitaccedilatildeo de pacientes
em relaccedilatildeo ao uso de antissepticos orais e estudo do pH das diferentes
soluccedilotildees Rev Bras Odontol 2010 67(1)13-18
60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
com siacutendrome de Down ocorrecircncia e inibiccedilatildeo do crescimento por
Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
38(5)383-386
61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
bacteacuterias orais [Dissertaccedilatildeo] Satildeo Carlos (SP) Faculdade de Odontologia
Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
bucal raacutedio e quimioinduzida Rev Bras Otorrinolaringol 2007 73 (4) 562-8
63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
(3)749-53
65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
cavidade oral de indiviacuteduos HIV positivos Rev Soc Bras Med Trop 2007
40(3)272-276
66 Zanatta FB Rosing CK Clorexidina mecanismo de accedilatildeo e evidencias atuais
de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
ldquoNunca houve noite que pudesse impedir o nascer do sol e a
esperanccedilardquo
Autor desconhecido
ldquoEacute apenas com o coraccedilatildeo que se pode ver direito o essencial eacute
invisiacutevel aos olhosrdquo
Antoine Saint-Exupeacutery
RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
Referencias 95
REFEREcircNCIAS
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RESUMO
A busca por um dispositivo terapecircutico que possa ser aplicado em feridas e
lesotildees da mucosa oral eacute um desafio para a Odontologia O objetivo deste trabalho foi
desenvolver uma bandagem bucal com capacidade de liberaccedilatildeo de faacutermacos e avaliar
in vitro sua eficiecircncia antimicrobiana sobre os microrganismos Streptococcus mutans e
Candida albicans A bandagem foi feita a partir de quitosana que eacute um biopoliacutemero
com caracteriacutesticas especiacuteficas Este biopoliacutemero eacute biocompatiacutevel biodisponiacutevel
biodegradaacutevel tem accedilatildeo antimicrobiana pode ser indicado para uso em vaacuterios
segmentos da aacuterea da sauacutede e possui baixo custo A bandagem possibilitou a
incorporaccedilatildeo de um faacutermaco antimicrobiano e neste caso foi incorporada a clorexidina
eficaz no tratamento de lesotildees ulceradas traumatismos e feridas ciruacutergicas
amplamente utilizado em odontologia Sendo assim foram desenvolvidas cinco tipos
de bandagens bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 02 bandagem de
quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a
10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 20 e quitosana a 5 sem
adiccedilatildeo de clorexidina Obtidas as amostras foi testada a accedilatildeo antimicrobiana das
bandagens frente aos microrganismos Calbicans e Smutans atraveacutes de antibiograma
Para efeito comparativo foram testados geacuteis nas seguintes formulaccedilotildees gel de
quitosana gel de quitosana e clorexidina 02 e 20 e gel de clorexidina 02 e 20
sobre os mesmos tipos de microrganismos Os resultados obtidos foram submetidos agrave
anaacutelise estatiacutestica onde se observou que as bandagens que continham quitosana pura
natildeo inibiram o crescimento de microrganismos e as bandagens com clorexidina a 20
formaram os maiores halos de inibiccedilatildeo para Calbicans e Smutans (166mm e 250mm
respectivamente) Dentre os geacuteis testados o gel de clorexidina 20 teve melhor
resultado para ambos os microrganismos e o gel de quitosana pura assim como a
bandagem de igual composiccedilatildeo tambeacutem natildeo foram eficientes Conclui-se que a
bandagem possui eficaacutecia na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos Candida
albicans e Streptococcus mutans Sugerimos que mais estudos ainda satildeo necessaacuterios
para o aprimoramento deste dispositivo inovador
Palavras chave curativos hidrocoloacuteides quitosana clorexidina teste de
sensibilidade microbiana cicatrizaccedilatildeo
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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ABSTRACT
DEVELOPMENT AND IN VITRO ANALYSIS OF ANTIMICROBIAL EFFECT OF ORAL BANDAGE
The search for a therapeutic device that can be applied to wounds and oral
lesions is a challenge for dentistry The purpose of this study was to develop a bandage
capable of release drugs and evaluate in vitro yours antimicrobial efficiency on
Streptococcus mutans and Candida albicans The bandage was made of chitosan
whichrsquos a biopolymer with specific characteristics This biopolymer are biocompatible
biodegradable bio-obtainable antimicrobiotic can be indicated for use in several
segments of healthcare and have low cost The bandage allowed the incorporation of
antimicrobial drugs and in this case was incorporated chlorhexidine effective on
treatment of ulcerated lesions trauma and surgical wounds widely used in dentistry
Thus were developed five types of bandages with the following concentrations of
chlorhexidine chitosan bandage 5 + chlorhexidine 02 chitosan bandage 5 +
chlorhexidine 06 chitosan bandage 5 + chlorhexidine 10 chitosan bandage 5
+ chlorhexidine 20 and chitosan 5 without addition of chlorhexidine With obtained
samples the antimicrobial action of the bandages were tested against Calbicans and
Smutans microorganisms through sensitivity For comparison we tested gels with
these formulations chitosan gel chitosan gel and chlorhexidine 02 and 20 and
chlorhexidine 02 and 20 over the same kind of microorganisms The obtained
results were analyzed statistically where were observed that the pure chitosan
bandages didnrsquot inhibit the growth of microorganisms and the bandage with 20
chlorhexidine formed the largest halo of inhibition for Calbicans and Smutans (166
mm and 250 mm respectively) Among the tested gels 20 chlorhexidine gel showed
better results for both microorganisms and the pure chitosan gel as well as the
bandage with the same composition was also not effective We conclude that the oral
bandage has efficacy in inhibiting the growth of microorganisms Calbicans and
Smutans More studies are still needed for improving this innovative device
Key words Bandage chitosan chlorhexidine products with antmicrobial action wound healing
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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streptococcus mutans isolados de preacute-escolares com diferentes experiecircncias
de caacuterie Cienc Odontol Bras 2008 11 (4) 40-46
51 Roumlrig KCO Colacite J Abegg MA Produccedilatildeo de fatores de virulecircncia in vitro
por espeacutecies patogecircnicas do gecircnero Candida Revista da Sociedade
Brasileira de Medicina Tropical 2009 42(2)225-227
52 Roumlsing CK Maltz M Oppermann RV Controle quiacutemico do biofilme
supragengival Cadernos da ABOPREV 2005 51-8
53 Sassone LM Fidel RAS Murad CF Fidel SR Hirata Jr R Antimicrobial
activity of sodium hypoclorite and chlorhexidine by two different tests Aust
Endod J 2008 34(1) 19-24
54 Semenoff TADV Borges AH Pedro FLM Silva Junior A Caporossi LS
Semenoff-Segundo A Comparative analyses of antimicrobial activity of 2
chlorhexidine Revista odonto ciecircncia 2010 1 1-5
55 Senel S et al Chitosan films and hydrogels of clorhexidine gluconate for oral
mucosal delivery International Journal of Pharmaceutics 2000193 197-
203
56 Silva TC Estudo dos efeitos da terapia fotodinamica sobre Streptococcus
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Universidade de Satildeo Paulo2010
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deacetylation process on the physicochemical characteristics of chitosan from
squid chitin Polymer 2000 41 2463-69
59 Tolentino ES Chinellato LEM Tarzia O Avaliaccedilatildeo da aceitaccedilatildeo de pacientes
em relaccedilatildeo ao uso de antissepticos orais e estudo do pH das diferentes
soluccedilotildees Rev Bras Odontol 2010 67(1)13-18
60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
com siacutendrome de Down ocorrecircncia e inibiccedilatildeo do crescimento por
Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
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61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
bacteacuterias orais [Dissertaccedilatildeo] Satildeo Carlos (SP) Faculdade de Odontologia
Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
bucal raacutedio e quimioinduzida Rev Bras Otorrinolaringol 2007 73 (4) 562-8
63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
(3)749-53
65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
cavidade oral de indiviacuteduos HIV positivos Rev Soc Bras Med Trop 2007
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66 Zanatta FB Rosing CK Clorexidina mecanismo de accedilatildeo e evidencias atuais
de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
LISTA DE ILUSTRACcedilOtildeES
- FIGURAS
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina 47
Figura 232 - Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana 48
Figura 233 - Estrutura quiacutemica da quitosana 49
Figura 411 - Quitosana pura em flocos 60
Figura 412 - Bandagem de quitosana contendo faacutermaco embalada e esterilizada 60
Figura 413 - Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a
20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana 5 + clorexidina
a 20 61
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser
plaqueado 63
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Agar Sabourad 64
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio
de cultura Agar Sabourad 65
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a
formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento 65
Figura 451 ndash Placas de cultura contendo meio de cultura SB20 66
Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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Figura 452 ndash Streptococcus mutans visto por microscopia 67
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura 68
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura 68
Figura 455 ndash Bandagem sobre meio de cultura 69
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB20 69
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC 70
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre
cultura de Smutans 71
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo 71
- GRAacuteFICOS
Graacutefico 51 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Calbicans em ordem
decrescente de tamanho
77
Graacutefico 52 - Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre cultura de Smutans em ordem
decrescente de tamanho
79
LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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LISTA DE TABELAS
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Calbicans (plt005) n=03
75
Tabela 52 -
Tabela 53 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Calbicans(plt005) n=03
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=03
76
77
Tabela 54 -
Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans(plt005) n=03
78
LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
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2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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LISTA DE ABREVIATURA E SIGLAS
Smutans Streptococcus mutans
Calbicans Candida albicans
UTIN Unidade de Terapia Intensiva Neonatal
UTI Unidade de Terapia Intensiva
FDA Food and Drug Admnistration
ADA American Dental Association
DNA Acido desoxirribonucleacuteico
RNA Acido ribonucleacuteico
min minutos
h hora
Ltda limitada
FOB Faculdade de Odontologia de Bauru
USP Universidade de Satildeo Paulo
BHI Brain Heart Infusion
ufc unidade formadora de colocircnia
LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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LISTA DE SIacuteMBOLOS
percentual
degC grau Celcius
C Carbono
H Hidrogecircnio
Cl Cloro
N Nitrogecircnio
O Oxigecircnio
g grama
cmsup3 centiacutemetro cuacutebico
Ca Caacutelcio
β beta
p valor da probabilidade
lt menor
ml mililitro
trade trademark
mm miliacutemetro
nm nanocircmetro
m metro
reg marca registrada
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 33
2 REVISAtildeO DE LITERATURA 39
21 MICROBIOTA ORAL 41
211 STREPTOCOCCUS MUTANS (Smutans) 41
212 CANDIDA ALBICANS (Calbicans) 43
22 CLOREXIDINA 45
23 QUITINA E QUITOSANA 47
3 PROPOSICcedilAtildeO 53
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS 57
41 MATERIAIS 59
42 DESENVOLVIMENTO DOS GEacuteIS 61
421 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA 61
422 PREPARO DO GEL DE QUITOSANA COM CLOREXIDINA 61
43 DESENVOLVIMENTO DAS BANDAGENS 62
44 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Calbicans 62
45 MEacuteTODO AGAR DIFUSAtildeO E TESTE ANTIMICROBIANO Smutans 66
46 ANAacuteLISE ESTATIacuteSTICA 72
5 RESULTADOS 73
6 DISCUSSAtildeO 81
7 CONCLUSOtildeES 89
REFEREcircNCIAS 93
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
1 Introduccedilatildeo
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
(3)749-53
65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
cavidade oral de indiviacuteduos HIV positivos Rev Soc Bras Med Trop 2007
40(3)272-276
66 Zanatta FB Rosing CK Clorexidina mecanismo de accedilatildeo e evidencias atuais
de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
1 Introduccedilatildeo 35
1 INTRODUCcedilAtildeO
A busca por alternativas terapecircuticas que possam ser aplicadas em
feridas ciruacutergicas feridas oriundas de traumatismos fiacutesicos eou quiacutemicos e outras
lesotildees ulceradas nos tecidos moles da boca eacute realizada haacute algumas deacutecadas por
pesquisadores (ANDERS 1989 NEEDLMAN 1997 SENEL 2000) Esta questatildeo se
faz particularmente significativa quando relacionada ao tratamento destas feridas
eou lesotildees em crianccedilas nas diversas faixas etaacuterias A obtenccedilatildeo de um veiacuteculo
alternativo que natildeo seja liacutequido poacute gel ou creme para aplicar nestas feridas que
permita o contato do faacutermaco por um tempo mais prolongado com o tecido afetado
seraacute de grande contribuiccedilatildeo para favorecer o processo de reparo pois a peliacutecula de
saliva que por vezes atua como um elemento protetor da mucosa lubrificando-a
constantemente em outras impede a penetraccedilatildeo de medicamentos nos tecidos
solubilizando-os mais rapidamente antes da sua completa accedilatildeo Nesta oacutetica o
controle da infecccedilatildeo bucal eacute sempre um desafio pois a boca eacute um meio onde
existem muitos microrganismos Aleacutem disso quatro fatores podem comprometer a
cicatrizaccedilatildeo a presenccedila de corpos estranhos no tecido mole necrose isquemia e
tensatildeo na ferida ciruacutergica mesmo em indiviacuteduos saudaacuteveis Com relaccedilatildeo aos corpos
estranhos algumas consequecircncias podem acontecer durante o processo cicatricial
caso eles estejam presentes O mais comum eacute a proliferaccedilatildeo de bacteacuterias e fungos
contaminando o tecido e favorecendo sua proliferaccedilatildeo (PETERSON 2005)
Sendo assim satildeo justificados esforccedilos em pesquisas para desenvolver
algum tipo de produto eou material com accedilatildeo antimicrobiana que possa ser utilizado
em tecidos uacutemidos como eacute o caso da mucosa oral Este produto eou material
idealmente deveraacute ter a capacidade de adesatildeo nestas aacutereas e ser reabsorvido no
meio bucal apoacutes o tempo necessaacuterio para que a accedilatildeo do faacutermaco possa ser efetiva
Outro elemento que deveraacute ser cuidadosamente avaliado eacute o tipo de faacutermaco a ser
utilizado e a sua compatibilidade com o produto que seraacute utilizado como veiacuteculo para
a incorporaccedilatildeo dos mesmos
Dentre a grande variedade dos poliacutemeros naturais que podem ser
utilizados para aplicaccedilotildees na aacuterea da sauacutede especial interesse tem sido dado agrave
quitina e agrave quitosana (SENEL 2000 HOVEN et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007
LI et al 2005 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitina eacute um poliacutemero natural
sendo o segundo polissacariacutedeo mais abundante na natureza depois da celulose
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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deacetylation process on the physicochemical characteristics of chitosan from
squid chitin Polymer 2000 41 2463-69
59 Tolentino ES Chinellato LEM Tarzia O Avaliaccedilatildeo da aceitaccedilatildeo de pacientes
em relaccedilatildeo ao uso de antissepticos orais e estudo do pH das diferentes
soluccedilotildees Rev Bras Odontol 2010 67(1)13-18
60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
com siacutendrome de Down ocorrecircncia e inibiccedilatildeo do crescimento por
Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
38(5)383-386
61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
bacteacuterias orais [Dissertaccedilatildeo] Satildeo Carlos (SP) Faculdade de Odontologia
Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
bucal raacutedio e quimioinduzida Rev Bras Otorrinolaringol 2007 73 (4) 562-8
63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
(3)749-53
65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
cavidade oral de indiviacuteduos HIV positivos Rev Soc Bras Med Trop 2007
40(3)272-276
66 Zanatta FB Rosing CK Clorexidina mecanismo de accedilatildeo e evidencias atuais
de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
1 Introduccedilatildeo 36
(BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Pode ser
encontrada em abundacircncia no exoesqueleto da maioria dos crustaacuteceos como
caranguejos camarotildees lagostas e cutiacuteculas de alguns insetos (HOVEN et al 2007
HIRANO 1999) Modificando quimicamente a quitina se obteacutem a quitosana que eacute
um derivado soluacutevel em soluccedilotildees de aacutecido aceacutetico diluiacuteda A quitosana eacute um
biopoliacutemero relevante no que tange a biodisponibilidade biocompatibilidade e
biodegradabilidade de baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental
jaacute que as carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes que satildeo rejeitados
pela induacutestria pesqueira o que reduz assim o impacto ambiental Eacute utilizada na aacuterea
farmacecircutica nutricional agricultura e terapia geneacutetica entre outras aacutereas
(AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) A quitosana possui propriedades uacutenicas o
que a torna interessante para inuacutemeras aplicaccedilotildees na aacuterea de sauacutede (KURITA et al
2000 TOLAIMATE et al 2000) Este poliacutemero apresenta grande versatilidade para
formar filmes geacuteis fibras matrizes polimeacutericas para liberaccedilatildeo controlada de
faacutermacos estruturas porosas para engenharia de tecidos o que a torna bastante
atrativa para aacuterea da sauacutede (WESKA et al 2007 JAYAKUMAR et al 2007 REGE
et al 2003 MADIHALLY et al 1999)
Dentre os faacutermacos de accedilatildeo antimicrobiana utilizados em Odontologia
a clorexidina eacute um dos mais potentes sendo que vaacuterios estudos confirmaram que eacute
altamente eficaz no controle dos microrganismos bucais (FARDAK e TURNBULL
1985 FERJERSKOV e THYLSTRUP 1996 ADDY 2005 VON BLUCHER 2007
ZANATTA 2007 SEMENOFF et al 2010) Pode ser apresentada na forma de
diversos sais como o gluconato o digluconato o acetato e o hidrocloridrato sendo
que o digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua e em
pH fisioloacutegico dissociar-se liberando o componente catiocircnico (ADDY 2005) Em
baixas concentraccedilotildees (menor que 012) a clorexidina eacute bacteriostaacutetica e em altas
concentraccedilotildees (acima de 05) bactericida (SASSONE et al 2008)
Contudo como a maioria dos antimicrobianos e antifuacutengicos a clorexidina
natildeo possui capacidade intriacutenseca de se ligar agrave mucosa oral O uso dessas
substacircncias pode ser feito com formulaccedilotildees melhoradas por meio de agentes
carreadores A quitosana eacute um poliacutemero biocompativel que tem sido proposto como
um poliacutemero bioadesivo capaz de fixar o medicamento na mucosa buca
(KNAPCZYC 1994 MIYAZAKI et al 1994) Estudos mostraram que hidrogeacuteis de
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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(3)749-53
65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
cavidade oral de indiviacuteduos HIV positivos Rev Soc Bras Med Trop 2007
40(3)272-276
66 Zanatta FB Rosing CK Clorexidina mecanismo de accedilatildeo e evidencias atuais
de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
1 Introduccedilatildeo 37
quitosana prolongam tanto o tempo de retenccedilatildeo quanto o de liberaccedilatildeo da droga na
mucosa bucal (NEEDLEMAN et al 1997)
Considerando o exposto se faz pertinente o desenvolvimento e a
avaliaccedilatildeo de um material eou produto incorporado de um antimicrobiano que possa
ser aplicado na mucosa bucal
1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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1 Introduccedilatildeo 38
2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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2 Revisatildeo de Literatura
2 Revisatildeo de Literatura 41
2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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2 REVISAtildeO DE LITERATURA
21 - Microbiota Oral A cavidade oral eacute uma extensatildeo da parte externa do corpo humano e
possui uma microbiota proacutepria compreendendo um grupo diversificado de
microrganismos que incluem bacteacuterias fungos micoplasmas protozoaacuterios e
possivelmente uma microbiota viral que pode existir de tempos em tempos em
situaccedilotildees de desequiliacutebrio no organismo A mucosa jugal o dorso da liacutengua e as
superfiacutecies dentaacuterias satildeo altamente colonizadas por estes microrganismos A
aquisiccedilatildeo da microbiota oral residente ocorre no nascimento e eacute um processo natural
de colonizaccedilatildeo sendo que espeacutecies distintas de bacteacuterias podem ser isoladas na
boca de bebecircs apoacutes poucas horas do seu nascimento (FEJERSKOV 1996)
A microbiota oral estaacute diretamente relacionada com a formaccedilatildeo de
biofilme dentaacuterio e com as doenccedilas decorrentes dele Prevenir e controlar as
afecccedilotildees que ocorrem na boca do ser humano consiste em reduzir estes
microrganismos de maneira eficiente (SILVA 2010 OLIVEIRA 2004)
Satildeo vaacuterios os microrganismos bucais mas neste capiacutetulo seratildeo feitas
referecircncias a apenas dois de maior interesse na Odontologia e que foram alvos do
presente trabalho que satildeo eles Streptococcus mutans e Candida albicans
211 - Streptococcus mutans (S mutans)
Os estreptococos constituem um dos mais populosos grupos de bacteacuterias
da boca Formados por um conjunto heterogecircneo de cocos que se dividem num soacute
plano os estreptococos agrupam-se em cadeias de tamanhos variaacuteveis e embora
estes microrganismos faccedilam parte da microbiota oral normal muitos deles satildeo
considerados importantes agentes infecciosos para o homem quando haacute um
desequiliacutebrio e sua contagem aumenta Satildeo agentes etioloacutegicos associados agrave
bacteremias endocardites abcessos infecccedilotildees do trato geniturinaacuterio e infecccedilotildees de
feridas em geral
O biofilme dentaacuterio aderido agrave superfiacutecie do dente eacute o habitat principal de
mais de 500 diferentes espeacutecies bacterianas e entre elas estatildeo os estreptococos Os
do grupo mutans (S mutans) estudados em especiacutefico neste trabalho satildeo cocos
gram-positivos alfa hemoliacuteticos e anaeroacutebios facultativos (NISERGARD E
NEWMAN 1997 OLIVEIRA 2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO
2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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2 Revisatildeo de Literatura 42
2010) Satildeo considerados como os principais microrganismos causadores da caacuterie
dentaacuteria devido agrave sua capacidade de metabolizar os carboidratos presentes na dieta
e transformaacute-los em aacutecidos sendo o principal o aacutecido laacutectico Sua presenccedila
aumentada no meio bucal resulta na diminuiccedilatildeo do pH e provoca a desmineralizaccedilatildeo
do esmalte e dentina quando esta estaacute exposta Aleacutem da produccedilatildeo de aacutecido a partir
de accediluacutecares a capacidade de aderir agrave superfiacutecie dentaacuteria onde crescem em forma
de biofilmes a toleracircncia de pH baixo e produccedilatildeo de bacteriocinas satildeo importantes
fatores de virulecircncia de S mutans (NISERGARD E NEWMAN 1997 OLIVEIRA
2004 RODRIGUES 2008 BANU2010 PARTHO 2010) Eacute um dos microrganismos
responsaacuteveis pela formaccedilatildeo do biofilme maduro que de fato eacute imprescindiacutevel para a
ocorrecircncia da caacuterie tambeacutem eacute o principal agente causador da endocardite
bacteriana (PARTHO 2010) O acuacutemulo do biofilme pode ser considerado um
promotor da alteraccedilatildeo da composiccedilatildeo microbioloacutegica local e consequentemente
conduz ao estabelecimento de outras doenccedilas bucais(BAEHNI E TAKEUCHI
2003)
A produccedilatildeo de polissacariacutedeos extracelulares caracterizados por sua
viscosidade favorece a aderecircncia do Smutans agrave superfiacutecie dentaacuteria contribuindo
para a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio cariogecircnico
Linhagens de S mutans satildeo classificadas dentro de trecircs sorotipos (c e e f) e
a especificidade soroloacutegica eacute definida pelo polissacariacutedeo ramnose-glicose (RGP)
presente em sua parede celular A maioria dos indiviacuteduos eacute colonizada com somente
um sorotipo de S mutans e suspeita-se que o sorotipo c deva ser o progenitor dos
outros sorotipos As linhagens com sorotipo e e f devem ter sido originadas a partir
de uma mutaccedilatildeo pontual no loco determinante do sorotipo c ou uma deleccedilatildeo de uma
porccedilatildeo deste loco O papel das mutacinas (produtos gerados pelo Smutans) in vivo
ainda natildeo estaacute claro entretanto a atividade antimicrobiana destas substacircncias deve
conferir uma vantagem ecoloacutegica para a produccedilatildeo de linhagens na comunidade
bacteriana assim como no biofilme dentaacuterio e pode tambeacutem ser importante para o
estabelecimento do microrganismo in vivo (RODRIGUES et al 2008) As mutacinas
podem apresentar um importante papel bioloacutegico na regulaccedilatildeo e composiccedilatildeo do
biofilme dental tanto na atividade de sinergismo como de antagonismo sugerindo
que o largo espectro de mutacinas pode ser mais importante na colonizaccedilatildeo e
estabilizaccedilatildeo das espeacutecies cariogecircnicas mantendo e estabelecendo nichos e
atividade microbiana altamente complexa Talvez esse componente explique por que
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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com siacutendrome de Down ocorrecircncia e inibiccedilatildeo do crescimento por
Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
38(5)383-386
61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
bacteacuterias orais [Dissertaccedilatildeo] Satildeo Carlos (SP) Faculdade de Odontologia
Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
bucal raacutedio e quimioinduzida Rev Bras Otorrinolaringol 2007 73 (4) 562-8
63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
(3)749-53
65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
cavidade oral de indiviacuteduos HIV positivos Rev Soc Bras Med Trop 2007
40(3)272-276
66 Zanatta FB Rosing CK Clorexidina mecanismo de accedilatildeo e evidencias atuais
de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
2 Revisatildeo de Literatura 43
uma vez que Smutans estejam estabelecidos satildeo dificilmente eliminados da
microbiota oral (RODRIGUES et al 2008 PARTHO 2010)
Assim estudar agentes que possam atuar no controle da populaccedilatildeo do
Smutans eacute de grande importacircncia para o controle das doenccedilas bucais e manter o
equiliacutebrio da microbiota oral favorecendo processos de reparo de lesotildees e feridas
212 - Candida albicans (C albicans)
As leveduras do gecircnero Candida satildeo microrganismos integrantes da
microbiota oral do homem desde o nascimento (VIEIRA et al 2005) Esta condiccedilatildeo
microbioloacutegica propicia comumente uma relaccedilatildeo de equiliacutebrio entre parasita-
hospedeiro diante da manutenccedilatildeo da integridade das barreiras teciduais relaccedilatildeo
harmocircnica da microbiota autoacutectone e funcionamento adequado do sistema
imunoloacutegico humano havendo em contrapartida por parte do fungo leveduriforme
permanecircncia equilibrada da capacidade de aderecircncia e da produccedilatildeo de enzimas e
toxinas (NISERGARD E NEWMAN 1997 VIEIRA 2005 BOTERO 2008 RORIG
2009) Alteraccedilotildees fiacutesicas quiacutemicas iatrogecircnicas e mecacircnicas que ocorrem na
cavidade oral bem como a mastigaccedilatildeo podem entre diversos fatores descritos
favorecer a ruptura do equiliacutebrio estabelecido entre o fungo e o hospedeiro fazendo
com que as infecccedilotildees por Candida sejam de origem geralmente endoacutegena
(GIANNINI E SHETTY 2011 BOTERO 2008 MENEZES 2008 VIEIRA et al
2005)
A C albicans eacute considerada o principal agente etioloacutegico da candidiacutease
uma infecccedilatildeo oportunista relacionada com locais e fatores predisponentes
sistecircmicos (GIANNINI E SHETTY 2011 PINTO et al 2006 NISERGARD E
NEWMAN 1997) Em consequecircncia haacute interesse nos fatores de virulecircncia destas
leveduras para estabelecer estrateacutegias de prevenccedilatildeo e de controle com antifuacutengicos
A habilidade de produzir enzimas hidroliacuteticas eacute considerada um importante fator de
virulecircncia As principais enzimas produzidas por leveduras do gecircnero Candida satildeo
as proteinases e as fosfolipases Outra caracteriacutestica associada com a
patogenicidade em humanos eacute a propriedade de multiplicaccedilatildeo a altas temperaturas
como 39ordmC e 42ordmC (RORIG 2009) Devido agrave neutropenia decorrente do tratamento
de pacientes submetidos agrave quimioterapia infecccedilotildees por C albicans satildeo mais
2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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2 Revisatildeo de Literatura 44
frequentes e tendem a potencializar os sinais e sintomas causando desconforto e
dificultando a recuperaccedilatildeo do paciente (PINTO et al2006 HESPANHOL 2010)
O tratamento da candidiacutease oral em geral eacute instituiacutedo empiricamente
apesar desta infecccedilatildeo apresentar-se com sintomas e aparecircncia macroscoacutepica
bastante variaacuteveis (GIANNINI E SHETTY 2011 WINGETER et al 2007) Esse
polimorfismo exigiria do cliacutenico a necessidade de adequaccedilatildeo da terapecircutica e isto
contribui para o aparecimento de espeacutecies de leveduras resistentes Este fato aliado
a pouca disponibilidade de novos produtos desenvolvidos pela induacutestria
farmacecircutica tem motivado vaacuterios estudos sobre a susceptibilidade in vitro dos
fungos agentes de infecccedilotildees humanas bem como alternativas para seu tratamento
(WINGETER et al 2007)
Infecccedilotildees fuacutengicas de origem hospitalar passaram a ter grande
importacircncia nos uacuteltimos anos pelo aumento progressivo e pelas elevadas taxas de
morbidade e mortalidade O ambiente hospitalar contribui para a disseminaccedilatildeo
dessas infecccedilotildees que satildeo de origem endoacutegena e outras podem tambeacutem ser
adquiridas por via exoacutegena pelas matildeos dos funcionaacuterios do hospital infusos
contaminados biomateriais e fontes inanimadas ambientais (MARTINS-DINIZ et al
2005) Segundo estudo de Martins-Diniz e colaboradores (2005) que isolou e
quantificou fungos em ambiente hospitalar e de funcionaacuterios para medir niacuteveis de
contaminaccedilatildeo verificaram que C albicans foi a espeacutecie que prevaleceu nas
amostras da equipe de profissionais e concluiu que a presenccedila de leveduras nas
matildeos desses profissionais tem preocupado as equipes de controle de infecccedilatildeo
hospitalar pois podem ser fonte potencial de contaminaccedilatildeo e disseminaccedilatildeo de
microrganismos Candida albicans eacute a principal espeacutecie capaz de provocar infecccedilatildeo
hospitalar tambeacutem em Unidade de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN) Acredita-se
que a maioria dos episoacutedios de candidemia sejam adquiridos de origem endoacutegena
pela translocaccedilatildeo do patoacutegeno atraveacutes da mucosa do trato gastrointestinal local
onde a colonizaccedilatildeo por este fungo ocorre em ateacute 70 da populaccedilatildeo normal
Qualquer variaacutevel que provoque desequiliacutebrio da microbiota ou lesatildeo da mucosa
gastrointestinal pode ser um agente facilitador de translocaccedilatildeo de Candida do luacutemen
intestinal para os capilares mesenteacutericos (BORGES et al 2009) Segundo Oliveira et
al(2007) infecccedilotildees respiratoacuterias adquiridas em ambiente hospitalar podem estar
2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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2 Revisatildeo de Literatura 45
associadas ao biofilme bucal jaacute que estes pacientes possuem higiene deficiente da
boca durante o periacuteodo de internaccedilatildeo Este biofilme tambeacutem pode ajudar a abrigar
colocircnias de patoacutegenos pulmonares facilitando assim o desenvolvimento de
pneumonias Os autores propotildeem uma revisatildeo dos procedimentos especiacuteficos para
o controle destes patoacutegenos na cavidade oral e que devem ser considerados na
prevenccedilatildeo de pneumonia nasocomial especialmente em pacientes de UTI
22 - Clorexidina
A clorexidina eacute um composto quiacutemico sintetizado em laboratoacuterio desde
1954 Eacute definida como uma biguanidina catiocircnica que apresenta uma moleacutecula
simeacutetrica consistindo de dois aneacuteis 4-clorofenil e dois grupos biguanida conectados
por uma cadeia de hexametileno central (11rsquo hexametilenobis [5-(p-
clorofenil)biguanida]) Entre os antisseacutepticos de uso bucal eacute um dos agentes
antimicrobianos mais potentes e estudados sendo considerada altamente eficaz e
em geral referenciada como padratildeo para estudos de comparaccedilatildeo da eficaacutecia de
outros agentes antimicrobianos aplicados em Odontologia Pode ser apresentada na
forma de diversos sais como o gluconato digluconato acetato e hidrocloridrato
sendo que a digluconato eacute a forma mais indicada por ter maior solubilidade em aacutegua
e dissociar-se em pH fisioloacutegico liberando o componente catiocircnico Sua foacutermula
molecular eacute C22H30Cl2N10 2C6H12O7 com peso molecular de 89777 densidade =
106 g cm3 e ponto de ebuliccedilatildeo = 134ordmC (LASCALA 2002)
Em baixas concentraccedilotildees (menor que 01) moleacuteculas de baixo peso
molecular escoam especialmente potaacutessio e foacutesforo dando a clorexidina a
caracteriacutestica de ser bacteriostaacutetica e em altas concentraccedilotildees (acima de 01) a
clorexidina atua de forma bactericida devido a precipitaccedilatildeo ou coagulaccedilatildeo do
citoplasma das bacteacuterias causada pela ligaccedilatildeo cruzada com as proteiacutenas
(SASSONE et al 2008 MENEZES 2008) Devido a sua carga positiva eacute adsorvida
sobre a hidroxiapatita do esmalte dentaacuterio proteiacutenas salivares biofilme dentaacuterio e
macromoleacuteculas aacutecidas das superfiacutecies bucais Atraveacutes destes locais de retenccedilatildeo o
faacutermaco eacute gradualmente liberado por difusatildeo e a concentraccedilatildeo na boca eacute mantida
em um niacutevel suficiente para criar um meio bacteriostaacutetico ateacute 24 horas apoacutes a sua
utilizaccedilatildeo(ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 BONESVOLL et al 1974) A
moleacutecula catiocircnica (positiva) da clorexidina interage com a bacteacuteria provavelmente
2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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2 Revisatildeo de Literatura 46
em decorrecircncia da adsorccedilatildeo agrave parede celular aniocircnica (negativa) alterando as
estruturas da superfiacutecie e aumentando a permeabilidade da membrana bacteriana
facilitando a entrada da clorexidina no citoplasma O equiliacutebrio osmoacutetico eacute perdido e
em consequumlecircncia ocorre uma precipitaccedilatildeo dos constituintes citoplasmaacuteticos o que
impede a reparaccedilatildeo da membrana celular causando a morte da bacteacuteria
(MENEZES 2008VON BLUCHER 2007)
Pesquisas tecircm revelado que a clorexidina aleacutem de possuir uma accedilatildeo
imediata sobre os microrganismos bucais devido agraves suas propriedades catiocircnicas
une-se tambeacutem agrave hidroxiapatita do esmalte dos dentes e agrave mucina salivar formando
uma peliacutecula orgacircnica na superfiacutecie dos dentes e nas proteiacutenas salivares que
funciona como um reservatoacuterio (ZANATTA 2007)
Os mecanismos de adsorccedilatildeo e liberaccedilatildeo gradual foram testados in vitro e
in vivo com clorexidina marcada radioativamente sendo que moleacuteculas de
clorexidina aderidas agraves proteiacutenas salivares satildeo liberadas sob a forma ativa quando a
sua concentraccedilatildeo no meio diminui o que pode ocorrer de 8 a 12 horas apoacutes a
absorccedilatildeo inicial e apoacutes 24 horas concentraccedilotildees reduzidas podem ainda ser
detectadas prevenindo assim a colonizaccedilatildeo bacteriana e o efeito inibidor residual da
formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007VON BLUCHER 2007 LASCALA
2002 BONESVOLL et al 1974)
A quantidade de clorexidina retida na cavidade bucal aumenta quase que
proporcionalmente com a concentraccedilatildeo da foacutermula farmacecircutica A penetraccedilatildeo da
clorexidina atraveacutes da mucosa oral intacta eacute inexistente ou muito limitada Cerca de
30 da clorexidina utilizada para bochechos fica retida ou adsorvida na peliacutecula
adquirida nas proteiacutenas salivares e na mucosa oral Apoacutes o bochecho a quantidade
retida na boca eacute constantemente deslocada dos seus siacutetios de ligaccedilatildeo pelos iacuteons
Ca++ presentes na saliva (ZANATTA 2007)
A clorexidina tem se mostrado um efetivo agente antimicrobiano no
tratamento de gengivite dispersor da placa jaacute formada e na inibiccedilatildeo da
recolonizaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio (ZANATTA 2007 CURY et al 1999) Esta accedilatildeo
pode ser atribuiacuteda a uma reduccedilatildeo do nuacutemero de bacteacuterias na saliva evitando o
desencadear do quadro inflamatoacuterio da gengivite O digluconato de clorexidina sob a
forma de bochechos (02) aplicaccedilatildeo toacutepica (2) ou em pastas dentifriacutecias (06 ou
08) em humanos ou animais reduz a formaccedilatildeo do biofilme dentaacuterio e
consequentemente a gengivite (LASCALA 2002)
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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soluccedilotildees Rev Bras Odontol 2010 67(1)13-18
60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
com siacutendrome de Down ocorrecircncia e inibiccedilatildeo do crescimento por
Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
38(5)383-386
61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
bacteacuterias orais [Dissertaccedilatildeo] Satildeo Carlos (SP) Faculdade de Odontologia
Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
bucal raacutedio e quimioinduzida Rev Bras Otorrinolaringol 2007 73 (4) 562-8
63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
(3)749-53
65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
cavidade oral de indiviacuteduos HIV positivos Rev Soc Bras Med Trop 2007
40(3)272-276
66 Zanatta FB Rosing CK Clorexidina mecanismo de accedilatildeo e evidencias atuais
de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
2 Revisatildeo de Literatura 47
O uso repetido da soluccedilatildeo de clorexidina faz com que o nuacutemero de
microrganismos aeroacutebicos e anaeroacutebicos na saliva seja reduzido em 80-90 A
FDA (Food and Drug Administration) e a ADA (American Dental Association)
autorizaram o uso da clorexidina como agente efetivo para controle de placa
baseado em suas propriedades anti-placa e para o combate agrave gengivite (ZANATTA
2007 ROSING et al 2005 CARRANZA 1997)
23 - Quitina e Quitosana
A quitina eacute um poliacutemero natural sendo o segundo polissacariacutedeo mais
abundante na natureza depois da celulose (LENARDON et al 2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 BERGER et al 2004 PANCHENCE et al 2000
KUBOTA et al 2000) Eacute um mucopolissacariacutedeo que compotildee a estrutura do
exoesqueleto de crustaacuteceos insetos e algumas espeacutecies de fungos sendo
degradada pela enzima quitinase (KUMAR 2000 VIEIRA 2005 SPIN NETO 2008
MARTINEZ-CAMACHO 2010) A quitina in natura eacute encontrada como um material
esbranquiccedilado duro e anelaacutestico com baixiacutessima solubilidade e reatividade
quiacutemica sendo tambeacutem natildeo imunogecircnico Por ser altamente nitrogenada eacute utilizada
rotineiramente como material quelante em reaccedilotildees quiacutemicas (MUZZARELLI 1973)
Eacute um poliacutemero natildeo ramificado formado por unidades de N-acetil-Dglucosaminas
unidas por ligaccedilotildees -(14) formando cadeias de vaacuterias centenas de unidades
(Figura 231) (HOVEN et al 2007 CANELLA et al 2001) A sua estrutura quiacutemica
eacute semelhante agrave da celulose na qual os grupos hidroxila (celulose) da posiccedilatildeo C-2
satildeo substituiacutedos pelo grupo acetamida (KUMAR 2000)
Figura 231 - Estrutura quiacutemica da quitina
2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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2 Revisatildeo de Literatura 48
Partindo-se da mateacuteria-prima bruta apoacutes lavagem abundante banhos
aacutecidos retiram todo o conteuacutedo mineral das cascas e banhos baacutesicos promovem
sua desproteinizaccedilatildeo aliada a uma leve desacetilaccedilatildeo (SPIN NETO 2008) Este
processo chamado de N-desacetilaccedilatildeo consiste na remoccedilatildeo controlada dos grupos
acetil (C2H3O) em meio alcalino de modo a tornar o produto final soluacutevel em
soluccedilotildees de aacutecidos diluiacutedos Natildeo eacute um processo faacutecil devido agrave natureza cristalina da
quitina (CANELLA et al 2001 ARGUELLES et al 2001)Da desacetilaccedilatildeo da
quitina obteacutem-se a quitosana (Figura 232)
Figura 132 ndash Reaccedilatildeo da conversatildeo da quitina em quitosana
A quitosana eacute um biopoliacutemero com relevantes propriedades estruturais
como a biodisponibilidade biocompatibilidade aos tecidos e biodegradabilidade
Estas propriedades incluem a formaccedilatildeo de filmes quelaccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos e
caracteriacutesticas estruturais oacutepticas (MARTINEZ-CAMACHO2010
BURKATOVSKAYA et al 2008 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
Possui baixo custo e de grande importacircncia econocircmica e ambiental jaacute que as
carapaccedilas dos crustaacuteceos satildeo resiacuteduos abundantes e que satildeo rejeitados pela
induacutestria pesqueira reduzindo assim o impacto ambiental (AZEVEDO et al 2007
PILLAI 2009)
Quimicamente a quitosana tem alto peso molecular sendo uma
poliamina que apresenta propriedades que se relacionam com a presenccedila de grupos
aminos livres em sua estrutura (Figura 233) o que a torna apta agrave aplicaccedilatildeo em
diversas aacutereas (PILLAI 2009 BURKATOVSKAYA et al 2008 AZEVEDO et al
2007 VIEIRA 2005 SENEL 2000 NEEDLMAN 1997)
2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
Referencias 95
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2 Revisatildeo de Literatura 49
Figura 232 - Estrutura quiacutemica da quitosana
A dissoluccedilatildeo da quitosana daacute origem a fibras filmes lacircminas e geacuteis que
podem ser utilizados diretamente ou transformados em outros materiais na tentativa
de utilizaccedilatildeo como biomateriais(MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Algumas das principais aacutereas de aplicaccedilatildeo da quitosana satildeo agricultura
(mecanismos defensivos e adubo para plantas) tratamento de aacutegua (floculante para
clarificaccedilatildeo remoccedilatildeo de iacuteons metaacutelicos poliacutemero ecoloacutegico e reduccedilatildeo de odores)
induacutestria alimentiacutecia (fibras dieteacuteticas redutor de colesterol conservante para
molhos fungicida e bactericida recobrimento de frutas) induacutestria de cosmeacuteticos
(esfoliante para a pele tratamento de acne hidratante capilar creme dental) e
biofarmacecircutica (imunoloacutegico antitumoral hemostaacutetico e anticoagulante) Poreacutem
sua aplicaccedilatildeo mais nobre eacute na aacuterea biomeacutedica (suturas ciruacutergicas implantes
dentaacuterios reconstituiccedilatildeo oacutessea lentes de contato liberaccedilatildeo controlada de drogas
em animais e humanos encapsulamento de materiais) (PILLAI 2009
BURKATOVSKAYA 2006 KHOR 2003)
Camacho-Martinez et al 2010 afirmam que a quitosana possui propriedades
antimicrobianas e fungistaacuteticas Trecircs mecanismos tecircm sido propostos para explicar
as propriedades antimicrobianas da quitosana No primeiro as cargas positivas
presentes na cadeia polimeacuterica de quitosana devido ao seu grupo amino interagem
com as cargas negativas obtidas a partir dos resiacuteduos de macromoleacuteculas
(lipopolissacariacutedeos e proteiacutenas) nas membranas das ceacutelulas microbianas
interferindo com a troca de nutrientes entre o exterior e o interior da ceacutelula Essas
cargas podem tambeacutem competir com o caacutelcio para os locais eletronegativos na
membrana comprometendo a sua integridade e causando a liberaccedilatildeo de material
intracelular resultando em morte celular O segundo mecanismo propotildee que a
quitosana atua como um agente quelante criando compostos a partir de metais
2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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2 Revisatildeo de Literatura 50
essenciais para ceacutelula o terceiro mecanismo estabelece que a quitosana de baixo
peso molecular eacute capaz de entrar nuacutecleo da ceacutelula interagindo com o DNA
interferindo na siacutentese de RNA mensageiro afetando a siacutentese de proteiacutenas e
inibindo a accedilatildeo de vaacuterias enzimas Esses mecanismos satildeo baseados em resultados
de investigaccedilotildees anteriores onde a quitosana foi adicionada ao meio de cultura em
estado liacutequido ou soacutelido No caso dos filmes de quitosana o mecanismo de inibiccedilatildeo
natildeo foi explicado mas existem fatores externos como condiccedilotildees anaeroacutebicas ou
asfixia que devem ser considerados Filmes de quitosana satildeo biodegradaacuteveis
biocompatiacuteveis flexiacuteveis duraacuteveis fortes duros e difiacuteceis de quebrar tem valores
moderados de aacutegua e permeabilidade ao oxigecircnio Apesar de natildeo ter realizado
testes em estreptococos ou candida este estudo de Martinez-Camacho et al 2010
mostrou que a atividade antifungica de filmes de quitosana foi positiva para diversos
tipos de fungos (MARTINEZ-CAMACHO et al 2010)
Burkatovskaya et al 2006 desenvolveu uma bandagem feita de acetato de
quitosana associada a um agente hemostaacutetico A hemostasia que antes era feita a
partir da compressatildeo do ferimento com ataduras de gaze hoje pode ser realizada a
partir da aplicaccedilatildeo desta bandagem que conteacutem elementos que favorecem esse
processo de reparo Os pesquisadores mostraram que em muitos casos ao fechar
um ferimento jaacute infectado com um curativo comum pode-se aumentar a proliferaccedilatildeo
bacteriana no local e tornar a ferida potencialmente contaminada para o individuo
Desta maneira a bandagem feita com quitosana que possui propriedades
naturalmente antimicrobianas agregou duas vantagens relevantes potencial
antimicrobiano e capacidade hemostaacutetica
Spin Neto et al (2008) ressaltaram que a proacutepria estrutura quiacutemica da
quitosana similar agrave estrutura do aacutecido hialurocircnico reforccedila a indicaccedilatildeo do uso deste
biopoliacutemero como agente cicatrizador e reparador pois a quitosana eacute capaz de
aumentar as funccedilotildees de ceacutelulas inflamatoacuterias como os leucoacutecitos polimorfonucleares
e macroacutefagos promovendo organizaccedilatildeo celular e atuando no reparo de feridas
amplas Berger (2004) avaliou os benefiacutecios da quitosana em forma de hidrogeacuteis e
suas aplicaccedilotildees biomeacutedicas e concluiu que haacute viabilidade da utilizaccedilatildeo deste veiacuteculo
para aproveitar as propriedades antimicrobianas e de cicatrizaccedilatildeo da quitosana
Senel et al (2000) desenvolveram formulaccedilotildees contendo quitosana como
agente carreador de clorexidina para a cavidade oral Geacuteis (na concentraccedilatildeo de 1 ou
2) e filmes de quitosana foram preparados contendo 01 ou 02 de clorexidina e
2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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2 Revisatildeo de Literatura 51
suas propriedades de liberaccedilatildeo in vitro foram avaliados A accedilatildeo antifungica da
quitosana em si bem como as vaacuterias formulaccedilotildees contendo clorexidina foram
examinadas A liberaccedilatildeo de clorexidina gel foi mantida por 3 horas e a liberaccedilatildeo
prolongada foi observada para os filmes Nenhum atraso foi observado em liberaccedilatildeo
de Clorexidina de ambos os geacuteis ou filmes e a maior atividade antifuacutengica foi
observada no gel de quitosana 2 adicionado Clorexidina 01 Senel et al (2000)
concluiram que a quitosana aleacutem de ter potencial antifungico eacute capaz de prolongar o
tempo e a quantidade de clorexidina na cavidade oral
Needlman (1997) investigou o possiacutevel papel da quitosana goma xantana e
poli oacutexido de etileno como auxiliares de administraccedilatildeo de medicamentos toacutepicos
aplicados sobre a mucosa oral jaacute que os trecircs possuem boas propriedades de
bioadesividade Foram realizados estudos in vitro que mostraram que a liberaccedilatildeo
do medicamento que continha quitosana foi significativamente maior do que para
outros geacuteis ou o grupo controle Em contraste a goma xantana deu tempo mais
prolongado de adesatildeo na mucosa oral (1535 min) seguido de (oacutexido de etileno)
(893 min) e quitosana (426 mim) e esses tempos foram significativamente
diferentes entre si (p lt005) Os resultados deste estudo sugerem que as
propriedades bioadesivas de um gel aquoso podem ser diretamente relacionadas agrave
sua manutenccedilatildeo na cavidade oral
Desta maneira haacute justificativas na literatura para o desenvolvimento de um
novo produto capaz de agregar os benefiacutecios da quitosana e clorexidina na reduccedilatildeo
de microrganismos do meio bucal
2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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2 Revisatildeo de Literatura 52
3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
Referencias 95
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3 Proposiccedilatildeo
3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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3 Proposiccedilatildeo 55
3 PROPOSICcedilAtildeO
O presente estudo teve como objetivo
31- Desenvolver uma bandagem bucal biodegradaacutevel incorporada a
um faacutermaco e avaliar sua accedilatildeo antimicrobiana nos seguintes microrganismos
bucais Streptococcus mutans e Candida albicans
32 - Comparar a efetividade da accedilatildeo antimicrobiana da bandagem com
um gel de clorexidina em diferentes concentraccedilotildees
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
3 Proposiccedilatildeo 56
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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de sua eficaacutecia no contexto do biofilme supragengival ScientificA 2007 1(2)
35-43
Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
4 Materiais e Meacutetodos
4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 59
4 MATERIAIS E MEacuteTODOS
41 Materiais
A quitosana empregada neste estudo eacute um produto comercial
(Sigma Aldrich St Louis USA) sendo segundo informaccedilatildeo do fabricante
procedente da purificaccedilatildeo de quitinas extraiacutedas de cascas de caranguejos O
material apresenta-se em aspecto de flocos com tom levemente amarelado e eacute
classificado como de meacutedia massa molar (Figura 411)
O faacutermaco empregado neste estudo foi a clorexidina (soluccedilatildeo a
20) - CEP- grade CAS nordm 1847251-0 da Empresa Evoluk Degussa Brasil Ltda
Todos os demais solventes empregados neste estudo foram de grau analiacutetico
As amostras das bandagens em diferentes concentraccedilotildees e os geacuteis
testados foram preparadas no Laboratoacuterio de Quiacutemica da Escola de Artes Ciecircncias
e Humanidades da Universidade de Satildeo Paulo As Bandagens foram embaladas
individualmente e esterilizadas em oacutexido de Etileno (ESTERICAP Brazil) (Figura
412)
Cinco bandagens de diferentes composiccedilotildees foram testadas sobre cada
microrganismo Bandagem com Quitosana 5 Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 02 Bandagem com Quitosana 5 + clorexidina a 06 Bandagem
com Quitosana 5 + clorexidina a 10 e Bandagem com Quitosana 5 +
clorexidina a 20
Para efeito comparativo tambeacutem foram testados 5 tipos de gel nas
seguintes composiccedilotildees Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de
clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de Quitosana
5 + clorexidina a 20 (Figura 413)
Para os testes in vitro da accedilatildeo antimicrobiana das bandagens e dos geacuteis
foram utilizados os microrganismos Candida albicans e Streptococcus mutans de
estoque do laboratoacuterio de Microbiologia da FOB USP congelados a - 85degC em BHI
(Brain Heart Infusion) com 20 de glicerol
4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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4 Materiais e Meacutetodos 60
Figura 411 ndash Quitosana pura em flocos (Foto gentilmente cedida por Eduardo Cesar Revista Fapesp 2010)
Figura 412 ndash Bandagem de Quitosana contendo faacutermaco (embalada e esterilizada)
4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
Referencias 95
REFEREcircNCIAS
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4 Materiais e Meacutetodos 61
42 Desenvolvimento dos Geacuteis
421 Preparo do gel de quitosana
Os geacuteis foram preparados dissolvendo-se 5 g de quitosana em 100 ml de
uma soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico 2 (mv) obtendo-se assim a concentraccedilatildeo de 5 A
soluccedilatildeo foi mantida sob agitaccedilatildeo durante 24 h Posteriormente a soluccedilatildeo foi filtrada
em tela de nylon utilizando-se uma bomba de vaacutecuo O gel filtrado foi colocado em
um banho de ultra-som sendo mantida a temperatura de 30ordmC por 1 h Apoacutes esta
etapa o gel foi armazenado a 4ordmC para posterior utilizaccedilatildeo
422 Preparo do gel de quitosana com clorexidina
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
Figura 413 ndash Gel de Quitosana 5 Gel de clorexidina a 02 Gel de clorexidina a 20 Gel de Quitosana 5 + clorexidina a 02 e Gel de
Quitosana 5 + clorexidina a 20
4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 62
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada lacrada e
mantida a temperatura de 4ordmC
43 Desenvolvimento das Bandagens
O gel de quitosana preparado no item 421 foi utilizado para incorporaccedilatildeo
do faacutermaco clorexidina nas concentraccedilotildees de 02 e 2 (mm) Para o preparo do
gel de clorexidina a 02 (mm) foi pesada em uma balanccedila analiacutetica uma massa do
faacutermaco de 004g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso
atingisse 20 g O gel a 2 (mm) foi preparado pesando-se uma massa do faacutermaco
de 04 g e a seguir foi feito a adiccedilatildeo do gel de quitosana ate que o peso atingisse 20
g Apoacutes a adiccedilatildeo do faacutermaco e do gel a mistura foi homogeneizada e foi colocada
em um banho ultra-som durante 15 min Posteriormente 5 g do gel a 02 (mm) foi
adicionado sob uma placa de Petri que foi colocada em uma balanccedila analiacutetica
devidamente tarada Apoacutes a pesagem efetuou-se a homogeneizaccedilatildeo do gel sob a
placa para garantir a uniformidade das bandagens O mesmo procedimento foi
repetido para o gel na concentraccedilatildeo a 2 (mm) sendo preparado um total de 4
placas para cada concentraccedilatildeo As placas preparadas foram colocadas em uma
estufa a 45ordmC durante 24 horas para a secagem das bandagens Apoacutes 24 horas as
bandagens foram removidas das placas foram embaladas e esterilizadas com em
oacutexido de Etileno
44 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para C albicans
O meio de cultura Sabouraud Aacutegar (Difcotrade) utilizado para os testes com
C albicans foi preparado seguindo as recomendaccedilotildees do fabricante em frascos tipo
ldquoalematildeordquo contendo 65g do meio para 100ml de aacutegua destilada que em seguida
foram autoclavados a 121degC por 15 minutos Foi distribuiacutedo 20ml do meio de cultura
ainda em estaacutegio liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 441)
Estas placas foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do
teste de esterilidade
4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 63
Figura 442 ndash Microrganismo inoculado em meio de cultura pronto para ser plaqueado
Os microrganismos utilizados (C albicans) foram repicados em meio Agar BHI
(Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram armazenados em
estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por espectrofotometria a 660nm
(OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1 equivalente ao padratildeo 05 de
McFarland (figura 442)
Figura 441 ndash Placa de petri contendo meio de cultura Aacutegar Sabourad
4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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4 Materiais e Meacutetodos 64
Figura 444 ndash Bandagens dispostas sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Calbicans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura Sabouraud Agar
(Figura 443) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada
bandagem recortadas em discos de 06mm (Figura 444) e trecircs amostras de cada
gel (discos de papel esteacuteril de 06mm embebidos em gel) a serem testadas (Figura
445) As placas de petri contendo C albicans foram incluiacutedas em estufa
bacterioloacutegica a temperatura de 37degC pelo periacuteodo de 48 horas a fim de se observar
o crescimento dos microrganismos (Figura 446)
Figura 443 ndash Plaqueamento de Calbicans sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 65
Figura 445 ndash Discos contendo gel em diferentes composiccedilotildees dispostos sobre meio de cultura Aacutegar Sabourad
Figura 446 ndash Cultivo de Calbicans apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo evidenciando a formaccedilatildeo de halos de inibiccedilatildeo de crescimento
4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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4 Materiais e Meacutetodos 66
Figura 451 ndash Placas de petri contendo meio de cultura SB20
45 Meacutetodo Aacutegar Difusatildeo e Teste Antimicrobiano para Smutans
O meio de cultura Sacarose-Bacitracina 20 - SB20 (Difcotrade) utilizado
para os testes com Smutans foi preparado de acordo com a recomendaccedilatildeo do
fabricante onde foram utilizados 200g de sacarose e 20g do meio para 100ml de
aacutegua destilada e 10ml de bacitracina Este preparo foi autoclavado a 121degC por 15
minutos e em seguida foi distribuiacutedo 20 ml do meio de cultura ainda em estaacutegio
liacutequido em placas de petri (90x15mm) esterilizadas (Figura 451) Estas placas
foram incluiacutedas em estufa a 37degC por 24 horas para verificaccedilatildeo do teste de
esterilidade
Os microrganismos utilizados (S mutans) (Figura 452) foram repicados
em meio Agar BHI (Brain Heart Infusion Difcotrade) caldo 20 de glicerol e foram
armazenados em estufa a 37degC por 24 horas Foram entatildeo suspensos por
espectrofotometria a 660nm (OD 800) a morada de turbidez 15 x 108ufc ml-sup1
equivalente ao padratildeo 05 de McFarland
4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 67
Figura 452 ndash Streptococcos mutans visto por microscopia
Swabs esteacutereis foram mergulhados na suspensatildeo de Smutans e foi
realizado o plaqueamento das amostras sobre o meio de cultura SB20 (Figura
453) Sobre o meio plaqueado foram colocadas trecircs amostras de cada bandagem
(Figuras 454 e 455) e trecircs amostras de cada gel a serem testadas (Figura 456)
As placas contendo Smutans foram incluiacutedas em microaerofilia (Figura 457) e
levadas a estufa bacterioloacutegica a 37degC tambeacutem pelo periacuteodo de 48 horas a fim de
promover o crescimento dos microrganismos e posteriormente observarmos os halos
de inibiccedilatildeo de crescimento bacteriano formados (Figura 458)
4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 68
Figura 453 ndash Plaqueamento de Smutans sobre meio de cultura
Figura 454 ndash Bandagem sobre meio de cultura
4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 69
Figura 455 ndash Bandagens sobre meio de cultura
Figura 456 ndash Discos contendo gel sobre meio de cultura SB 20
4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 70
As amostras de bandagem possuiacuteam o formato circular com 6mm de
diacircmetro Os discos de papel esteacutereis os quais foram mergulhados no gel tambeacutem
mediam 6mm de diacircmetro
Zonas de inibiccedilatildeo de crescimento dos microrganismos ao redor das
amostras de bandagens e discos contendo os geacuteis foram medidas apoacutes o periacuteodo de
incubaccedilatildeo Para medir a zona de inibiccedilatildeo foi considerada a distacircncia em linha reta
entre uma margem a outra do halo (circunferecircncia) de inibiccedilatildeo passando pelo centro
do discobandagem A mediccedilatildeo repetida 3 vezes foi realizada com reacuteguas esteacutereis
divididas em miliacutemetros (001m) (Figura 459)
Figura 457 ndash Placas de petri em microaerofilia em estufa bacterioloacutegica a 37degC
4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 71
Figura 458 ndash Halo de inibiccedilatildeo formado ao redor das amostras de bandagem sobre cultura de Smutans
Figura 459 ndash Mediccedilatildeo dos halos de inibiccedilatildeo
4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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4 Materiais e Meacutetodos 72
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Os dados obtidos foram compilados no programa Excel (Windows 7reg) e
os procedimentos estatiacutesticos foram realizados no programa SigmaPlot 110 for
Windows
Os dados obtidos foram analisados por meio do teste de Anaacutelise de
Variacircncia (ANOVA) a um criteacuterio (grupo) Como os resultados apresentaram
diferenccedila estatisticamente significante entre os grupos aplicou-se o Teste de Tukey
para as comparaccedilotildees muacuteltiplas adotando-se sempre um niacutevel de significacircncia de
5 Contudo na comparaccedilatildeo entre os grupos de geacuteis para Smutans os dados natildeo
apresentaram distribuiccedilatildeo normal (Teste de Kolmogorov-Smirnov) sendo para estes
utilizado o teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey
(plt005)
5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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5 Resultados
5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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5 Resultados 75
5 RESULTADOS
Cinco amostras de bandagens ndash bandagem de quitosana a 5 +
clorexidina a 02 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina a 06 bandagem
de quitosana a 5 + clorexidina a 10 bandagem de quitosana a 5 + clorexidina
a 20 e quitosana a 5 sem adiccedilatildeo de clorexidina ndash foram testadas a fim de
avaliar o seu potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Calbicans O halo de
inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio
padratildeo de cada resultado apresentado na tabela 51
Tabela 51 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre C albicans (plt005) n=3
BANDAGEM Calbicans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 10667a 0577 06 13000b 0000 10 14333 b 0577 20 16667c 1155
QUITOSANA PURA
0000 d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a um
criteacuterio seguido do teste de Tukey) mostrou que a bandagem de concentraccedilatildeo 20
de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada a bandagem de
quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de clorexidina a 02 foi
o menor seguido das bandagens de clorexidina a 06 e 10 que natildeo tiveram
diferenccedila estatisticamente significante entre si O melhor resultado foi o da
bandagem de clorexidina a 20 que formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre C
albicans (TABELA 51)
Para efeito comparativo foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano
de cinco tipos de geacuteis sobre C albicans nas seguintes concentraccedilotildees gel de
clorexidina a 02 gel de clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02
gel de clorexidina + quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo
5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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5 Resultados 76
formado por cada disco impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o
desvio padratildeo apresentados na tabela 52
Tabela 52 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel sobre C albicans (plt005) n=3
GEL Calbicans Meacutedia Desvio Padratildeo
CHX 02 14667a 0577 CHX 20 22667b 0577
CHX+QUIT 02 10000c 0000 CHX+QUIT 20 20333d 0577
QUITOSANA PURA
0000e 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 226 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 203 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (ANOVA a um criteacuterio seguido do teste de Tukey)
mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de meacutedia quando
comparada ao gel de quitosana pura como ilustrado na tabela 52
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre Calbicans foram dispostas na figura 51 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre o
microrganismo
Para avaliar o potencial antimicrobiano frente ao microrganismo Smutans
cinco amostras de bandagens com diferentes concentraccedilotildees de faacutermaco (clorexidina
a 02 clorexidina a 06 clorexidina a 10 clorexidina a 20 e apenas com
quitosana pura) foram testadas O halo de inibiccedilatildeo formado por cada bandagem foi
medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo de cada resultado apresentado
na tabela 53
5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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5 Resultados 77
Figura 51 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Calbicans em ordem decrescente de tamanho
Tabela 53 - Meacutedia e desvio padratildeo do halo de inibiccedilatildeo das amostras de
bandagem sobre Smutans (plt005) n=3
BANDAGEM Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo
02 20667a 0577 06 22667b 1155 10 24000bc 0000 20 25000c 1000
QUITOSANA PURA
0000d 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O teste comparativo das diferentes formulaccedilotildees de bandagem (ANOVA a
um criteacuterio seguido do teste de Tukey) sobre S mutans mostrou que a bandagem de
concentraccedilatildeo 20 de clorexidina teve maior diferenccedila de meacutedia quando comparada
a bandagem de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado pela bandagem de
clorexidina a 02 foi o menor (206mm) Entre os valores meacutedios dos halos
formados pelas bandagens de clorexidina a 06 e 10 natildeo houveram diferenccedilas
5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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5 Resultados 78
estatisticamente significantes entre si bem como entre as bandagens de clorexidina
a 10 e a 20 A bandagem de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo
sobre S mutans (TABELA 53)
Foram analisados tambeacutem o efeito antimicrobiano de cinco tipos de geacuteis
sobre S mutans nas seguintes concentraccedilotildees gel de clorexidina a 02 gel de
clorexidina a 20 gel de clorexidina + quitosana a 02 gel de clorexidina +
quitosana 20 e gel de quitosana pura O halo de inibiccedilatildeo formado por cada disco
impregnado pelo gel foi medido em miliacutemetros e a meacutedia e o desvio padratildeo
apresentados na tabela 54
54 ndash Meacutedia desvio padratildeo e mediana do halo de inibiccedilatildeo das amostras de gel
sobre Smutans (plt005) n=3
GEL Smutans
Meacutedia Desvio Padratildeo Mediana
CHX 02 2400a 0000 24000 CHX 20 29000ab 1000 29000
CHX+Q 02 22000a 0000 22000 CHX+Q 20 27000a 0000 27000 QUITOSANA
PURA 0000ac 0000 0000
Letras diferentes indicam diferenccedila estatisticamente significantes entre os grupos
O potencial antimicrobiano do gel de clorexidina a 20 foi maior
apresentando meacutedia do halo de inibiccedilatildeo de 290 mm seguido do gel de clorexidina +
quitosana a 20 que apresentou halo de 270 mm O teste comparativo das
diferentes formulaccedilotildees de gel (teste natildeo parameacutetrico de Kruskal-Wallis seguido do
teste de Tukey) mostrou que o gel de clorexidina a 20 teve maior diferenccedila de
meacutedia quando comparada ao gel de quitosana pura uacutenica comparaccedilatildeo que teve
diferenccedila estatisticamente significante Os demais valores natildeo obtiveram diferenccedilas
estatisticamente significante como ilustrado na tabela 54
As meacutedias obtidas por cada formulaccedilatildeo de gel e bandagem testados
sobre S mutans foram dispostos na figura 52 que mostra em ordem decrescente
qual formulaccedilatildeo foi mais eficiente ou seja formou o maior halo de inibiccedilatildeo sobre S
mutans (em miliacutemetros)
5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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5 Resultados 79
Figura 52 ndash Valores de meacutedia (em miliacutemetros) do halo de inibiccedilatildeo formado por
bandagens e geacuteis sobre Smutans em ordem decrescente de tamanho
5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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5 Resultados 80
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
6 Discussatildeo
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
6 Discussatildeo 83
6 Discussatildeo
Este estudo teve como finalidade o desenvolvimento de um dispositivo
inovador chamado de ldquobandagem bucalrdquo que pudesse ser utilizada em tecidos
uacutemidos no interior da cavidade oral ulcerados eou cortados em funccedilatildeo de um
procedimento ciruacutergico ou traumatismo A intenccedilatildeo eacute que permaneccedila em iacutentimo
contato com o tecido e libere um agente antimicrobiano eliminando a contaminaccedilatildeo
bacteriana do tecido e assim favoreccedila a cicatrizaccedilatildeo dessas feridas O processo de
elaboraccedilatildeo deste novo produto foi intenso e vaacuterios testes foram feitos ateacute que se
chegasse a um resultado que pudesse dar iniacutecio aos testes propostos
Uma consideraccedilatildeo a ser feita eacute que pelo fato da bandagem bucal ser
uma proposta nova houve dificuldade em detectar na literatura trabalhos correlatos
que permitam uma discussatildeo mais aprofundada do tema
Quando o paciente adulto ou infantil apresenta lesotildees na mucosa oral
(aftas ulceraccedilotildees rompimento da continuidade da mucosa) as opccedilotildees de
tratamento mesmo que paliativo satildeo limitadas A Odontologia tem hoje a disposiccedilatildeo
geacuteis e soluccedilotildees antisseacutepticas colutoacuterios e formulaccedilotildees em orabase que apresentam
eficiecircncia para o fim a que se destinam poreacutem dificultam a adesatildeo do paciente ao
tratamento (SENEL 2000 PETELIN et al 2004 TOLENTINO 2010) Volpato et al
(2007) em revisatildeo de literatura a respeito de opccedilotildees de tratamento para mucosite
bucal radio e quimio induzida em pacientes com cacircncer elucidaram que muitas satildeo
as intervenccedilotildees potencialmente possiacuteveis de serem empregadas nesses pacientes
poreacutem os benefiacutecios das teacutecnicas ainda satildeo desconhecidos e ainda natildeo haacute um
consenso com relaccedilatildeo a protocolos de controle e prevenccedilatildeo prejudicando a
qualidade de vida dos pacientes envolvidos (VOLPATO et al 2007) Para o
tratamento de estomatite aftosa recorrente tambeacutem natildeo haacute consenso quanto ao tipo
de tratamento mais indicado Estudos apontam que corticoacuteides toacutepicos e
enxaguatoacuterios satildeo alternativas para minimizar a dor e aumentar o tempo de
cicatrizaccedilatildeo da ferida poreacutem a eficaacutecia do tratamento consiste no maacuteximo tempo de
contato entre a ferida e o medicamento (QUIJANO et al 2008)
A bandagem bucal desenvolvida neste estudo tem como componente
estrutural principal a quitosana (originaacuterio do esqueleto de crustaacuteceos) um agente
biodisponiacutevel encontrado em abundacircncia na natureza A quitosana eacute tambeacutem
biodegradaacutevel e natildeo poluente do meio ambiente (BERGER et al 2004
6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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6 Discussatildeo 84
PANCHENCE et al 2000 KUBOTA et al 2000) Outra caracteriacutestica que favorece
a escolha desta mateacuteria prima no desenvolvimento das bandagens eacute o baixo custo
jaacute que satildeo aproveitadas as carapaccedilas de crustaacuteceos rejeitados pela induacutestria
alimentiacutecia e pesqueira Sendo assim a bandagem bucal torna-se uma alternativa
viaacutevel do ponto de vista da sustentabilidade
A biocompatibilidade da quitosana eacute evidenciada em vaacuterios estudos
(BURKATROVSKAYA 2006 AZEVEDO et al 2007 PILLAI 2009) Pelas
caracteriacutesticas de conjugar a biodegradabilidade biocompatibilidade e bioatividade eacute
ampla a aplicabilidade da quitosana na formulaccedilatildeo de biomateriais Na aacuterea
odontoloacutegica a quitosana foi utilizada pela primeira vez em forma de geacuteis
antimicrobianos em mucosa e canais radiculares mas estudos vecircm demonstrando
que a quitosana pode ser utilizada como membrana periodontal agente cicatrizador
de defeitos oacutesseos e bolsas periodontais Outra aplicaccedilatildeo importante da quitosana eacute
como agente facilitador na entrega de drogas sistecircmicas ou locais os chamados
ldquodrug-delivery systemsrdquo Estes sistemas satildeo capazes de proporcionar a liberaccedilatildeo
lenta e controlada dos medicamentos mantendo uma oacutetima resposta da droga e
diminuindo seus efeitos colaterais Desta maneira a quitosana estaacute sendo testada e
utilizada como liberador de medicamentos na mucosa oral canais radiculares
dentina cariada e bolsas periodontais (SPIN-NETO et al 2008)
Diante das boas propriedades apresentadas pela quitosana e da
necessidade de se desenvolver um novo dispositivo ineacutedito capaz de promover o
reparo da mucosa oral e a descontaminaccedilatildeo da mesma este estudo se ateve ao
desenvolvimento de uma bandagem bucal com accedilatildeo antimicrobiana e a anaacutelise
deste dispositivo frente a Calbicans e Smutans
A quitosana aleacutem de ser o componente estrutural da bandagem bucal
desenvolvida possui tambeacutem accedilatildeo antimicrobiana comprovada por vaacuterios autores
Ballal et al (2009) e Oliveira (2004) evidenciaram em seus estudos que a quitosana
quando associada a clorexidina tem alto potencial antimicrobiano frente a Candida
albicans e Streptococcos mutans Aleacutem da accedilatildeo antimicrobiana possui tambeacutem accedilatildeo
hemostaacutetica e estimula a cicatrizaccedilatildeo Burkatovskaya (2006) apresenta em seu
estudo uma bandagem hemostaacutetica feita a base de acetato de quitosana que tem
por finalidade o controle do sangramento e a accedilatildeo antimicrobiana quando colocada
em contato com feridas ciruacutergicas Esta bandagem mostrou ser bactericida com
6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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6 Discussatildeo 85
relaccedilatildeo ao alginato curativo e a prata sulfadiazina quando em contato com feridas
feitas em ratos contaminadas por estafilococos e pseudomonas
Optou-se pela clorexidina como agente antimicrobiano a ser associado
agrave quitosana na bandagem bucal por ser o antimicrobiano largamente utilizado pela
odontologia quando se deseja controlar Smutans e Calbicans (ZUCCO 2010
TOLENTINO 2010 MEIRA et al 2007 KARL 2007 ZANATTA 2007 CURY et al
1999) Clorexidina eacute eficaz como um enxaguatoacuterio bucal mas em comparaccedilatildeo agraves
soluccedilotildees as formulaccedilotildees em geacuteis podem prolongar significativamente o tempo de
permanecircncia na cavidade bucal e consequentemente melhorar o efeito terapecircutico
do antimicrobiano No estudo de Senel (2000) que avaliou geacuteis e filmes com accedilatildeo
antimicrobiana para tratamento de doenccedilas periodontais tanto o gel quanto o filme
de clorexidina foram preparados com quitosana como agente liberador do
antimicrobiano para a cavidade oral permanecendo na mucosa e liberando a droga
por um longo periacuteodo de tempo aumentando assim o efeito cliacutenico devido agrave
propriedade bioadesiva e alta viscosidade da quitosana
O presente estudo utilizou Aacutegar Sabourad e Sacarose- Bacitracina 20
como meio de cultura uma vez que estes meios satildeo facilmente disponiacuteveis e
comumente usados para cultura de C albicans e S mutans O teste de difusatildeo em
aacutegar foi empregado neste estudo para determinar a eficiencia antimicrobiana das
bandagens e geacuteis testados O teste de difusatildeo em aacutegar geralmente eacute um meacutetodo
aceito para testar a atividade antimicrobiana de medicamentos e soluccedilotildees
odontoloacutegicas Eacute um teste padronizado tornando-o reprodutiacutevel e simples para
executar e relativamente barato No entanto alguns fatores como o pH do substrato
periacuteodo de incubaccedilatildeo sensibilidade toxicidade e capacidade de difusatildeo da droga
pode ter um impacto sobre a atividade antimicrobiana dos meios de cultura nas
placas
Neste estudo foram testadas bandagens feitas a partir de quitosana (5g) e
que continham ou natildeo clorexidina em diferentes concentraccedilotildees (02 06 10 e
20) Para efeito comparativo tambeacutem foram desenvolvidos geacuteis de quitosana
(20g) clorexidina (02 e 20) e quitosana associada a clorexidina (02 e 20)
Para que houvesse uma padronizaccedilatildeo os testes foram realizados tendo por base o
meacutetodo de antibiograma (Kirby-Bauer) onde se tem a difusatildeo do medicamento
atraveacutes de discos de papel esteacutereis sobre meio de cultura rico em nutrientes onde os
microrganismos podem se multiplicar O agente antimicrobiano se difunde na aacuterea
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
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and characterization International Journal of Pharmaceutics
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50 Rodrigues MR Maciel SM Ferreira FBA Piovezan FPieralisi FJS
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Semenoff-Segundo A Comparative analyses of antimicrobial activity of 2
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em relaccedilatildeo ao uso de antissepticos orais e estudo do pH das diferentes
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Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
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Referencias 101
67 Zucco DL Rossi B Lopes CMCF Franccedila PHC Schubert EW Efeito de
clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
6 Discussatildeo 86
ao redor de cada disco e um halo de lise bacteriana se torna visiacutevel Como a
concentraccedilatildeo do medicamento eacute maior no centro e menor nos limites do halo o
diacircmetro eacute sugestivo para a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima Dessa maneira as
bandagens tambeacutem foram esterilizadas e dimensionadas em circulos com o
diacircmetro semelhante aos discos de papel utilizados para que os halos formados
pudessem ser comparados
A bandagem feita apenas de quitosana natildeo permitiu a formaccedilatildeo de halo
de inibiccedilatildeo de crescimento em cultura de Calbicans natildeo tendo portanto a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana comprovada Como jaacute foi elucidado estudos afirmam
que a quitosana tem propriedade antimicrobiana e outros atestam esta propriedade
como eacute o caso do estudo de Burkatovskaya et al (2006) que mostrou a eficaacutecia de
acetato de quitosana frente aos microrganismos Stafilococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa e Proteus mirabilis O estudo de Ballal et al (2009)
verificou a formaccedilatildeo de halo de inibiccedilatildeo do gel de quitosana frente a Calbicans e
Enterococcus faecalis mas considerou a formulaccedilatildeo feita apenas de quitosana a
menos eficiente quando comparada a quitosana combinada a outros agentes
antimicrobianos No presente estudo os resultados obtidos mostraram a ineficiecircncia
da bandagem de quitosana frente a Calbicans jaacute que natildeo houve a formaccedilatildeo de
halo de inibiccedilatildeo Alguns ajustes na composiccedilatildeo da bandagem bem como na
concentraccedilatildeo de quitosana empregada na foacutermula podem ser feitos e novos testes
poderatildeo ser realizados para que dados conclusivos sejam obtidos
Quando analisadas as amostras de bandagem compostas por quitosana e
clorexidina em diferentes concentraccedilotildees frente a C albicans observamos que todas
as bandagens que continham Clorexidina nas concentraccedilotildees 02 06 10 e
20 foram eficientes ou seja todas elas inibiram de certa forma o crescimento de
Calbicans Apenas entre as bandagens com concentraccedilotildees de 06 e 10 natildeo
houveram diferenccedilas estatisticamente significantes entre o tamanho do halo de
inibiccedilatildeo formado (130mm e 143 mm respectivamente) A bandagem na
concentraccedilatildeo de clorexidina a 20 formou o maior halo de inibiccedilatildeo (166mm)
podendo ser considerada a mais eficaz Poreacutem sabe-se que em concentraccedilotildees
acima de 01 a clorexidina jaacute possui potencial bactericida fato que natildeo inviabiliza o
uso da bandagem de menor concentraccedilatildeo jaacute que a reduccedilatildeo da dose do
antimicrobiano natildeo diminui a eficaacutecia da bandagem e favorece a diminuiccedilatildeo dos
efeitos colaterais que possam ocorrer (manchamento nos dentes alteraccedilatildeo do
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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clorexidina em gel ou dentifriacutecio nos niacuteveis salivares de estreptococos do
grupo mutans em crianccedilas do distrito de Saiacute (Satildeo Francisco do Sul SC
Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
6 Discussatildeo 87
paladar entre outros) O estudo de Senel et al(2000) que testou filmes e geacuteis de
quitosana contendo clorexidina mostrou que os filmes contendo baixas
concentraccedilotildees de clorexidina (01 e 02) foram eficazes frente a Calbicans
concordando com dados obtidos em nosso estudo
Como meacutetodo comparativo aos testes realizados com as bandagens
foram testados geacuteis de quitosana pura geacuteis de quitosana e clorexidina a 02 e a
20 e geacuteis de clorexidina a 02 e a 20 jaacute que estas uacuteltimas formulaccedilotildees jaacute satildeo
utilizadas pela Odontologia como medicamento toacutepico sobre a mucosa bucal com o
intuito de reduccedilatildeo de microrganismos No caso dos geacuteis que foram testados frente a
Calbicans o melhor resultado foi obtido com o gel de clorexidina a 20 (226mm)
seguido do gel de quitosana e clorexidina a 20 (203mm) Apesar de haver
diferenccedila estatisticamente significante entre a accedilatildeo destes geacuteis (com ou sem
quitosana) ambos foram eficazes e alguns pontos devem ser considerados Para
Senel et al (2000) a quitosana combinada a clorexidina na forma de geacuteis funciona
como um potencializador do agente antimicrobiano que aumenta o tempo de
liberaccedilatildeo da clorexidina para o meio bucal Needlman (1997) estudou as
propriedades de bioadesividade da quitosana e verificou que esta tem a capacidade
liberar maior quantidade de faacutermaco para o meio
No estudo de Ballal et al (2009) concluiacuteram que o gel de clorexidina
20 combinado a quitosana foi mais eficaz que o gel que continha apenas
clorexidina a 20 quando este foi testado sobre cultura de Calbicans e Efaecalis
estes dados satildeo inversos aos obtidos em nosso estudo poreacutem podem atestar que a
quitosana quando combinada a clorexidina natildeo anula a eficiecircncia antimicrobiana da
mesma e pode potencializar a foacutermula a partir de suas outras caracteriacutesticas (tempo
e quantidade de medicamento liberado para o meio) de acordo com a accedilatildeo
esperada
A accedilatildeo do gel de quitosana pura testado neste estudo tambeacutem foi nula
para Calbicans Ballal et al (2009) comprovaram a eficiecircncia do gel de quitosana
sobre Calbicans poreacutem seu resultado (halo de 166 mm) ficou muito aqueacutem do
resultado obtido pelo gel de quitosana combinado a clorexidina (halo de 252mm)
Quando testada sobre culturas de Smutans as amostras de bandagem
apresentaram comportamento semelhante quando testadas sobre a cultura de
Calbicans A bandagem que continha apenas quitosana natildeo inibiu o crescimento de
Smutans O estudo de Vieira (2005) testou a eficaacutecia de bochechos com soluccedilatildeo de
6 Discussatildeo 88
quitosana a 04 sobre a reduccedilatildeo de estreptococos totais Smutans e lactobacilos
da microbiota oral e concluiu que a soluccedilatildeo de quitosana tambeacutem natildeo foi eficaz para
a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
placa visiacutevel nem do iacutendice de sangramento gengival
As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
citotoxicidade da bandagem absorccedilatildeo de aacutegua e perda de massa seu tempo de
degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
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a reduccedilatildeo de nenhum dos microrganismos pesquisados bem como do iacutendice de
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As bandagens de quitosana contendo clorexidina em diferentes
concentraccedilotildees se mostraram eficientes na reduccedilatildeo de Smutans O melhor resultado
foi obtido com a bandagem que continha clorexidina a 20 formando o maior halo
de inibiccedilatildeo (250mm) Este resultado natildeo demonstrou diferenccedila estatisticamente
significante com relaccedilatildeo agrave bandagem com clorexidina 10 (240mm) a bandagem
de 10 tambeacutem natildeo apresentou diferenccedila quando comparada a bandagem de
clorexidina 06 (halo de 226mm) poreacutem houve diferenccedila entre a bandagem de
20 e 06 Sendo assim o uso da concentraccedilatildeo de 10 seria indicado evitando
possiacuteveis efeitos colaterais que podem ser causados pela clorexidina
Os tipos de geacuteis testados sobre cultura de Smutans foram os mesmos
cinco testados sobre Calbicans O gel de quitosana pura natildeo formou halo de
inibiccedilatildeo demonstrando assim a sua ineficiecircncia frente a Smutans Quando
comparadas as cinco formulaccedilotildees de geacuteis entre si apenas o gel de quitosana teve
diferenccedila estatisticamente significante com o gel de clorexidina a 20 As demais
formulaccedilotildees natildeo apresentaram diferenccedilas estatisticamente significantes entre si Os
halos formados pelos geacuteis de clorexidina 20 gel quitosana com clorexidina a
20 gel de clorexidina a 02 e gel de quitosana com clorexidina 02 formaram
halos inibitoacuterios de 290mm 270mm 240mm e 220mm respectivamente o que
demonstra a eficaacutecia das formulaccedilotildees testadas
Sugerimos que novos estudos sejam realizados a fim de verificar a accedilatildeo
antimicrobiana da quitosana em diferentes concentraccedilotildees sobre microrganismos da
cavidade oral bem como avaliar a sua dinacircmica de accedilatildeo quando estiver combinada
a clorexidina (tempo de liberaccedilatildeo do faacutermaco quantidade de faacutermaco absorvido pela
mucosa tempo de dissoluccedilatildeo da bandagem entre outros)
Desenvolvida a bandagem bucal que foi proposta se faz necessaacuteria a
continuaccedilatildeo desta pesquisa e novos testes devem ser realizados ensaio da
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degradaccedilatildeo e teste de liberaccedilatildeo controlada do faacutermaco
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7 Conclusotildees
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aplicada pode-se concluir que
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A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
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18 Giannini PJ Shetty KV Diagnosis and management of oral candidiasis
Otolaryngol Clin N Am 2011 44 231ndash240
19 Hespanhol FL Tinoco EMB Teixeira HGC Falabella MEV Assis NMSP
Manifestaccedilotildees bucais em pacientes submetidos agrave quimioterapia Ciecircncia amp
Sauacutede Coletiva 2010 15(Supl 1)1085-1094
20 Hirano S Chitin and chitosan as novel biotechnological materials Polymer
International 1999 48 732-34
21 Hoven VP Tangpasuthadol V Angkitpaiboon Y Vallapa N Kiatkamjornwong
S Surface-charged chitosan Preparation and protein adsorption
Carbohydrate Polymers 2007 68 (1) 44-53
Referencias 97
22 Jayakumar R Nwe N Tokura S Tamura H Sulfated chitin and chitosan as
novel biomaterials International Journal of Biological Macromolecules
2007 40 (3) 175-81
23 Karl E Toledo OA Amorim RFSG Bezerra ACBAvaliaccedilatildeo do tratamento
intensivo com clorexidina na reduccedilatildeo das contagens salivares de
estreptococos grupo mutans na fase de dentadura mista Rev ABO nac
2007 14(6)348-351
24 Knapczyk J Preclinical study of antimycotic chitosan hydrogel efficacy In
Karnicki ZS Brzeski MM Bykowski PJ Wojtasz-Pajak A (Eds) Chitin World
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Paulo Artes Medicas 2002
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315
33 Martins-Diniz JN et al Monitoramento de fungos anemoacutefilos e de leveduras
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Referencias 98
34 Meira ALT Todescan SMC Azoubel E Bittencourt S Azoubel MCFUso de
antimicrobianos locais em periodontia uma abordagem criacutetica Periodontia
2007 17(1) 92-98
35 Menezes MM Oliveira LD Koga-Ito CY Jorge AOC Valera
MCConcentraccedilatildeo fungicida miacutenima das soluccedilotildees de clorexidina e hipoclorito
de soacutedio sobre Candida albicans Cienc Odontol Bras 2008 abrjun 11 (2)
23-28
36 Miyazaki S Nakayama A Oda M Takada M Attwood D Chitosan and
sodium alginate based bioadhesive tablets for intraoral delivery Biol Pharm
1994 Bull 17 745ndash747
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periodontal and oral mucosal drug delivery J Clin Periodontol 1997 24
394ndash400
39 Niesergard RJ Newman MG Microbiologia Oral e Imunologia2 ed Rio de
Janeiro Guanabara 1997
40 Oliveira LCBS et al A presenccedila de patoacutegenos respiratoacuterios no biofilme bucal
de pacientes com pneumonia nasocomial Rev bras ter intensiva 2007 19
(4)
41 Oliveira RA Avaliaccedilatildeo do efeito in vitro da quitosana e da associaccedilatildeo de
quitosanaclorexidina sobre saliva e Streptococcus mutans [Dissertaccedilatildeo] Satildeo
Carlos (SP) Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo
Paulo2004
42 Panchence JM Kohn J Biodegradable polymer In Lanza RP Langer R
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Press p 263-277
43 Partho C Anirban B Saswati B Indranil B ClpP of Streptococcus mutans
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and Antibiotic Tolerance Journal of Bacteriology 2010 192(5) 1312ndash1323
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1847-1851
48 Quijano D Rodriguez M Corticoides toacutepicos en la estomatitis aftosa
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307
49 Rege PR Garmise RJ Block LH Spray-dried chitinosans Part I preparation
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2003 252(1) 41-51
50 Rodrigues MR Maciel SM Ferreira FBA Piovezan FPieralisi FJS
PoliFrederico RC Anaacutelise do sorotipo e dos genes para mutacinas em
streptococcus mutans isolados de preacute-escolares com diferentes experiecircncias
de caacuterie Cienc Odontol Bras 2008 11 (4) 40-46
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por espeacutecies patogecircnicas do gecircnero Candida Revista da Sociedade
Brasileira de Medicina Tropical 2009 42(2)225-227
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53 Sassone LM Fidel RAS Murad CF Fidel SR Hirata Jr R Antimicrobial
activity of sodium hypoclorite and chlorhexidine by two different tests Aust
Endod J 2008 34(1) 19-24
54 Semenoff TADV Borges AH Pedro FLM Silva Junior A Caporossi LS
Semenoff-Segundo A Comparative analyses of antimicrobial activity of 2
chlorhexidine Revista odonto ciecircncia 2010 1 1-5
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56 Silva TC Estudo dos efeitos da terapia fotodinamica sobre Streptococcus
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Universidade de Satildeo Paulo2010
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deacetylation process on the physicochemical characteristics of chitosan from
squid chitin Polymer 2000 41 2463-69
59 Tolentino ES Chinellato LEM Tarzia O Avaliaccedilatildeo da aceitaccedilatildeo de pacientes
em relaccedilatildeo ao uso de antissepticos orais e estudo do pH das diferentes
soluccedilotildees Rev Bras Odontol 2010 67(1)13-18
60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
com siacutendrome de Down ocorrecircncia e inibiccedilatildeo do crescimento por
Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
38(5)383-386
61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
bacteacuterias orais [Dissertaccedilatildeo] Satildeo Carlos (SP) Faculdade de Odontologia
Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
bucal raacutedio e quimioinduzida Rev Bras Otorrinolaringol 2007 73 (4) 562-8
63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
(3)749-53
65 Wingeter MA Guilhermetti E Shinobu CS Takaki I Svidzinski TIE
Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
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40(3)272-276
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Brasil) RSBO 2010 7(1)27-34
7 Conclusotildees
7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
composta por quitosana e incorporada de Clorexidina como agente antimicrobiano
A anaacutelise in vitro desta bandagem foi realizada e constatou-se que a
bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
componentes natildeo estatildeo totalmente contra-indicadas
7 Conclusotildees 92
Referecircncias
Referencias 95
REFEREcircNCIAS
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59 Tolentino ES Chinellato LEM Tarzia O Avaliaccedilatildeo da aceitaccedilatildeo de pacientes
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7 Conclusotildees 91
7 Conclusotildees
Diante dos objetivos propostos para este estudo e da metodologia
aplicada pode-se concluir que
A bandagem bucal proposta foi desenvolvida e eacute estruturalmente
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bandagem bucal foi eficaz na inibiccedilatildeo do crescimento dos microrganismos
Calbicans e Smutans
O gel de clorexidina na concentraccedilatildeo de 20 apresenta-se como a forma
mais eficaz para a reduccedilatildeo de Calbicans e Smutans quando comparado aos
demais geacuteis eou bandagens compostos por quitosana e clorexidina ou apenas
quitosana poreacutem eacute importante elucidar que as formulaccedilotildees contendo os dois
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7 Conclusotildees 92
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Chlorhexidine gluconate and their combination in vitro Aust Endod J 2009
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Odontologiacutea Universidad de Antioquia 2008 20(1)72-86
12 Burkatovskaya M Castano AP Demidova-Rice TN Tegos GP Hamblin MR
Effect of chitosan acetate bandage on wound healing in infected and
noninfected wounds in mice Wound Repair Regen 2008 16(3) 425ndash431
13 Burkatovskaya M Tegos GP Swietlik E Demidova TN Castano AP Hamblin
MR Use of chitosan bandage to prevent fatal infections developing from
highly contaminated wounds of mice Biomaterials 2006 27 4157-4164
14 Canella KMC Garcia RB Caracterizaccedilatildeo de quitosana por cromatografia de
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41 Oliveira RA Avaliaccedilatildeo do efeito in vitro da quitosana e da associaccedilatildeo de
quitosanaclorexidina sobre saliva e Streptococcus mutans [Dissertaccedilatildeo] Satildeo
Carlos (SP) Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo
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50 Rodrigues MR Maciel SM Ferreira FBA Piovezan FPieralisi FJS
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60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
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6 Ballal NV Kundabala M Bhat KS Acharya S Ballal M Kumar R Prakash RY
susceptibility of Candida albicans and Enterococcus faecalis to Chitosan
Chlorhexidine gluconate and their combination in vitro Aust Endod J 2009
35 29ndash33
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Odontologiacutea Universidad de Antioquia 2008 20(1)72-86
12 Burkatovskaya M Castano AP Demidova-Rice TN Tegos GP Hamblin MR
Effect of chitosan acetate bandage on wound healing in infected and
noninfected wounds in mice Wound Repair Regen 2008 16(3) 425ndash431
13 Burkatovskaya M Tegos GP Swietlik E Demidova TN Castano AP Hamblin
MR Use of chitosan bandage to prevent fatal infections developing from
highly contaminated wounds of mice Biomaterials 2006 27 4157-4164
14 Canella KMC Garcia RB Caracterizaccedilatildeo de quitosana por cromatografia de
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Quiacutemica Nova 2001 24 13-17
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19 Hespanhol FL Tinoco EMB Teixeira HGC Falabella MEV Assis NMSP
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Sauacutede Coletiva 2010 15(Supl 1)1085-1094
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intensivo com clorexidina na reduccedilatildeo das contagens salivares de
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2007 14(6)348-351
24 Knapczyk J Preclinical study of antimycotic chitosan hydrogel efficacy In
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28 Lascala NT Moussalli NH Compecircndio terapecircutico periodontal3 ed Satildeo
Paulo Artes Medicas 2002
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sodium alginate based bioadhesive tablets for intraoral delivery Biol Pharm
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(4)
41 Oliveira RA Avaliaccedilatildeo do efeito in vitro da quitosana e da associaccedilatildeo de
quitosanaclorexidina sobre saliva e Streptococcus mutans [Dissertaccedilatildeo] Satildeo
Carlos (SP) Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo
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59 Tolentino ES Chinellato LEM Tarzia O Avaliaccedilatildeo da aceitaccedilatildeo de pacientes
em relaccedilatildeo ao uso de antissepticos orais e estudo do pH das diferentes
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60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
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62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
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40 Oliveira LCBS et al A presenccedila de patoacutegenos respiratoacuterios no biofilme bucal
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(4)
41 Oliveira RA Avaliaccedilatildeo do efeito in vitro da quitosana e da associaccedilatildeo de
quitosanaclorexidina sobre saliva e Streptococcus mutans [Dissertaccedilatildeo] Satildeo
Carlos (SP) Faculdade de Medicina de Ribeiratildeo Preto Universidade de Satildeo
Paulo2004
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Press p 263-277
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2003 252(1) 41-51
50 Rodrigues MR Maciel SM Ferreira FBA Piovezan FPieralisi FJS
PoliFrederico RC Anaacutelise do sorotipo e dos genes para mutacinas em
streptococcus mutans isolados de preacute-escolares com diferentes experiecircncias
de caacuterie Cienc Odontol Bras 2008 11 (4) 40-46
51 Roumlrig KCO Colacite J Abegg MA Produccedilatildeo de fatores de virulecircncia in vitro
por espeacutecies patogecircnicas do gecircnero Candida Revista da Sociedade
Brasileira de Medicina Tropical 2009 42(2)225-227
52 Roumlsing CK Maltz M Oppermann RV Controle quiacutemico do biofilme
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activity of sodium hypoclorite and chlorhexidine by two different tests Aust
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56 Silva TC Estudo dos efeitos da terapia fotodinamica sobre Streptococcus
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Universidade de Satildeo Paulo2010
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squid chitin Polymer 2000 41 2463-69
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em relaccedilatildeo ao uso de antissepticos orais e estudo do pH das diferentes
soluccedilotildees Rev Bras Odontol 2010 67(1)13-18
60 Vieira JDG et al Candida albicans isoladas da cavidade bucal de crianccedilas
com siacutendrome de Down ocorrecircncia e inibiccedilatildeo do crescimento por
Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
38(5)383-386
61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
bacteacuterias orais [Dissertaccedilatildeo] Satildeo Carlos (SP) Faculdade de Odontologia
Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
62 Volpato LER Silva TC Oliveira TM Sakai VT Machado MAAM Mucosite
bucal raacutedio e quimioinduzida Rev Bras Otorrinolaringol 2007 73 (4) 562-8
63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
prevenccedilatildeo de periimplantite Rio de Janeiro Dissertaccedilatildeo [Mestrado em
ciecircncia dos materiais] - Instituto Militar de Engenharia 2007
64 Weska RF Moura JM Batista LM Rizzi J Pinto LAA Optimization of
deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes Use of
response surface methodology Journal of Food Engineering 2007 80
(3)749-53
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Identificaccedilatildeo microbioloacutegica e sensibilidade in vitro de Candida isoladas da
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61 Vieira LB Eficacia do bochecho de quitosana a 04 sobre o biofilme e
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Universidade Federal do Rio Grande do Norte2005
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63 Von Bluumlcher AG Dispositivos para liberaccedilatildeo lenta de clorexidina para
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Streptomyces sp Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2005
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