ESTUDIO FITOQUÍMICO DE ESTUDIO FITOQUÍMICO DE

Piper pesaresanum Piper pesaresanum Y Y Piper Piper crassinerviumcrassinervium (Piperaceae)(Piperaceae)

ANGÉLICA GIRALDO ARICAPAANGÉLICA GIRALDO ARICAPA

DIRECTOR DEL PROYECTODIRECTOR DEL PROYECTO

JAIME NIÑO OSORIOJAIME NIÑO OSORIO

CONTENIDO DE CONTENIDO DE

EXPOSICIÓNEXPOSICIÓN •• DESCRIPCIÓN DE LA FAMILIA DESCRIPCIÓN DE LA FAMILIA

PiperaceaePiperaceae

•• JUSTIFICACIÓN DEL PROYECTOJUSTIFICACIÓN DEL PROYECTO

•• OBJETIVOSOBJETIVOS

•• SECCIÓN EXPERIMENTALSECCIÓN EXPERIMENTAL

•• RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN

•• RESUMENRESUMEN

DESCRIPCIÓN DE LA DESCRIPCIÓN DE LA

FAMILIA PiperaceaeFAMILIA Piperaceae

DESCRIPCIÓN DE LA DESCRIPCIÓN DE LA

FAMILIA PiperaceaeFAMILIA Piperaceae

CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN

TAXONÓMICATAXONÓMICA

GÉNEROSGÉNEROS GÉNEROSGÉNEROS

CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA

DE LA FAMILIA PiperaceaeDE LA FAMILIA Piperaceae

Reino: PLANTAE Reino: PLANTAE

División: ANGIOESPERMAEDivisión: ANGIOESPERMAE

Clase: MAGNIOLOPSIDAClase: MAGNIOLOPSIDA

Orden: PIPERALESOrden: PIPERALES

Familia: PIPERACEAEFamilia: PIPERACEAE

Género: Género: PiperPiper

Especies: Especies: Piper pesaresanumPiper pesaresanum

Piper crassinerviumPiper crassinervium

DESCRIPCIÓN DE LA DESCRIPCIÓN DE LA

FAMILIA PiperaceaeFAMILIA Piperaceae

CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN

TAXONÓMICATAXONÓMICA

GÉNEROSGÉNEROS GÉNEROSGÉNEROS

GÉNEROS DE LA GÉNEROS DE LA

FAMILIA FAMILIA

Piperaceae Piperaceae

PiperPiper PiperPiper

PiperomiaPiperomia PiperomiaPiperomia PothomarphePothomarphe PothomarphePothomarphe

OttoniaOttonia OttoniaOttonia

SarcorhachisSarcorhachis SarcorhachisSarcorhachis TrianaeopiperTrianaeopiper TrianaeopiperTrianaeopiper

GÉNERO GÉNERO PiperPiper

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN

DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN

GEOGRÁFICAGEOGRÁFICA

ESPECIES ESPECIES ESPECIES ESPECIES

ESTUDIADASESTUDIADAS

DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL GÉNERO GÉNERO Piper Piper EN AMÉRICAEN AMÉRICA

GÉNERO GÉNERO PiperPiper

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN

DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN

GEOGRÁFICAGEOGRÁFICA

ESPECIES ESPECIES ESPECIES ESPECIES

ESTUDIADASESTUDIADAS

PRINCIPALES NÚCLEOS PRINCIPALES NÚCLEOS

FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL

GÉNERO GÉNERO PiperPiper

PRINCIPALES NÚCLEOS PRINCIPALES NÚCLEOS

FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL

GÉNERO GÉNERO PiperPiper ALCALOIDES Y ALCALOIDES Y

AMIDASAMIDAS LIGNANOSLIGNANOS LIGNANOSLIGNANOS PROPENILFENOLESPROPENILFENOLES PROPENILFENOLESPROPENILFENOLES

TERPENOSTERPENOS TERPENOSTERPENOS ESTEROIDESESTEROIDES ESTEROIDESESTEROIDES FLAVONOIDESFLAVONOIDES FLAVONOIDESFLAVONOIDES

Aristolactama A II- Piper longum

β-Pinone-Piper nigrum

Aschatin-Piper cubeba Heterotropan-Piper cubeba

Estigmasterol - Piper aduncum 5,7-dimetiloxiflavona-P.

hostmanianum

GÉNERO GÉNERO PiperPiper

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN

DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN

GEOGRÁFICAGEOGRÁFICA

ESPECIES ESPECIES ESPECIES ESPECIES

ESTUDIADASESTUDIADAS

ESPECIES ESTUDIADASESPECIES ESTUDIADAS

Piper pesaresanumPiper pesaresanum Piper pesaresanumPiper pesaresanum Piper crassinerviumPiper crassinervium Piper crassinerviumPiper crassinervium

JUSTIFICACIÓN DEL JUSTIFICACIÓN DEL

PROYECTOPROYECTO

JUSTIFICACIÓN DEL JUSTIFICACIÓN DEL

PROYECTOPROYECTO

Piper Piper pesaresanum pesaresanum

y y Piper Piper crassinerviumcrassinervium

ACTIVIDAD ACTIVIDAD ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

ACTIVIDADACTIVIDAD ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN DE NÚCLEOS DE NÚCLEOS

FITOQUÍMICOSFITOQUÍMICOS

JUSTIFICACIÓN DEL JUSTIFICACIÓN DEL PROYECTOPROYECTO

Especie Actividad biológica Referencia

Piper hispidum Antifúngico contra

Cladosporium sphaerospernum Navickiene et al., 2000

Piper tuberculatum Antifúngico contra

Cladosporium sphaerospernum Navickiene et al., 2000

Piper sarmentosum Analgésico, antiinflamatorio,

anticarcinogénico

Zakaria et al., 2010;

Zainal et al., 2009

Piper capense Antiparasitario Kaou et al., 2010

Piper dilatatum Antifúngico contra

Cladosporium sphaerospernum Terreaux et al., 1998

Piper chaba Hepatoprotectiva Matsuda et al., 2009

Rama et al., 2011

Piper kadsura Antineuroinflamatoria Hyun et al., 2010

Piper longum Insecticida - acaricida Park et al., 2002

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANA CONTRA:ANTIBACTERIANA CONTRA:

Escherichia coliEscherichia coli Escherichia coliEscherichia coli Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus

RESISTENCIA DE RESISTENCIA DE Escherichia coli Escherichia coli A A

ALGUNOS ANTIBIÓTICOSALGUNOS ANTIBIÓTICOS

0

10

20

30

40

50

60

% d

e R

es

iste

nc

ia

Antibióticos

Fuente : Organización Panamerica de la Salud (http://www.paho.org/Spanish/HCP/HCT/antimicrob_index.htm)

PORCENTAJE DE RESISTENCIA A LOS PORCENTAJE DE RESISTENCIA A LOS

ANTIBIÓTICOS DE ANTIBIÓTICOS DE Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus

0

10

20

30

40

50

60

70

80

% d

e R

es

iste

nc

ia

Año

Fuente : National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System (Campaña de Prevención de la Resistencia a los Antimicrobianos) (2009)

ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA

CONTRA CONTRA Mycosphaerella fijiensis Mycosphaerella fijiensis MoreletMorelet

EFECTOS EFECTOS

CONTROLES CONTROLES

ANTIFÚNGICOS SINTÉTICOS ANTIFÚNGICOS SINTÉTICOS

CONTRA SIGATOKA NEGRACONTRA SIGATOKA NEGRA

ANTIFÚNGICOS SINTÉTICOS

SISTÉMICOS

TRIAZOLES

BENZIMIDAZOLES

PENETRANTES MORFOLINAS

DE CONTACTO

CARBAMATOS

CLORADOS

ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA

CONTRA CONTRA Mycosphaerella fijiensis Mycosphaerella fijiensis MoreletMorelet

EFECTOS EFECTOS

CONTROLES CONTROLES

EFECTOS DE LA SIGATOKA EFECTOS DE LA SIGATOKA

NEGRANEGRA

• Disminución de la

capacidad fotosintética.

• Disminución de peso del

fruto de 50-100%.

• Uso de fungicidas de

alto costo (En Colombia

30 millones de dólares al

año).

• Contaminación del

medio ambiente y se ve

afectada la salud del

agricultor.

AGENTE ANTIFÚNGICO DE ORIGEN AGENTE ANTIFÚNGICO DE ORIGEN

NATURALNATURAL

• Evite la germinación de ascosporas de M. fijiensis

• Disminuya el costo de su tratamiento por año.

• Reducir el impacto ambiental y el riesgo de enfermedades por la exposición a los fungicidas

OBJETIVOSOBJETIVOS

OBJETIVO GENERALOBJETIVO GENERAL RealizarRealizar elel estudioestudio fitoquímicofitoquímico dede loslos

extractosextractos dede laslas especiesespecies PiperPiper crassinerviumcrassinervium yy PiperPiper pesaresanumpesaresanum

(Piperaceae)(Piperaceae) yy lala determinacióndeterminación dede lala

actividadactividad antibacterianaantibacteriana contracontra

EscherichiaEscherichia colicoli yy StaphylococcusStaphylococcus aureusaureus

yy antifúngicaantifúngica contracontra MycosphaerellaMycosphaerella fijiensisfijiensis MoreletMorelet

OBJETIVOS ESPECÍFICOSOBJETIVOS ESPECÍFICOS •• EvaluarEvaluar lala actividadactividad antifúngicaantifúngica yy antibacterianaantibacteriana inin vitrovitro

dede loslos extractosextractos dede hexano,hexano, diclorometano,diclorometano, metanolmetanol yy

metanolmetanol––aguaagua ((99::11),), dede lala parteparte aéreaaérea dede PP..

pesaresanumpesaresanum yy PP.. crassinerviumcrassinervium..

•• CaracterizarCaracterizar aa travéstravés dede lala marchamarcha fitoquímicafitoquímica loslos

metabolitosmetabolitos secundariossecundarios enen loslos extractosextractos dede hexano,hexano,

diclorometano,diclorometano, metanolmetanol yy metanolmetanol--aguaagua ((99::11),), dede laslas

especiesespecies PP.. pesaresanumpesaresanum yy PP.. crassinerviumcrassinervium..

•• SepararSeparar elel extractoextracto concon actividadactividad antifúngicaantifúngica contracontra

MycosphaerellaMycosphaerella fijiensisfijiensis MoreletMorelet y/oy/o antibacterianaantibacteriana

contracontra EscherichiaEscherichia colicoli yy StaphylococcusStaphylococcus aureusaureus,, porpor

cromatografíacromatografía dede columnacolumna..

•• EvaluarEvaluar lala actividadactividad fungicidafungicida contracontra MM.. fijiensisfijiensis MoreletMorelet

y/oy/o bactericidabactericida contracontra EE.. colicoli yy SS.. aureusaureus dede laslas

fraccionesfracciones dede mayormayor pesopeso obtenidasobtenidas dede loslos extractosextractos dede

hexano,hexano, diclorometano,diclorometano, metanolmetanol yy metanolmetanol--aguaagua ((99::11))

activosactivos..

•• EstablecerEstablecer loslos perfilesperfiles cromatográficoscromatográficos porpor HPLCHPLC dede loslos

extractosextractos dede PP.. pesaresanumpesaresanum yy PP.. crassinerviumcrassinervium concon

actividadactividad antifúngicaantifúngica y/oy/o antibacterianaantibacteriana..

OBJETIVOS ESPECÍFICOSOBJETIVOS ESPECÍFICOS

SECCIÓN SECCIÓN

EXPERIMENTALEXPERIMENTAL

MATERIAL MATERIAL VEGETALVEGETAL DE DE Piper Piper pesaresanum pesaresanum Y Y Piper crassinerviumPiper crassinervium

Fue recolectado en el Parque Regional Fue recolectado en el Parque Regional

Natural UcumaríNatural Ucumarí

Santa Rosa Pereira

Piper Piper pesaresanum pesaresanum

(FJR 3996)(FJR 3996) Coordenadas:Coordenadas:

N 04N 04°° 42’ 24,1’’ y 42’ 24,1’’ y

W 075W 075°° 32’ 53,0’’32’ 53,0’’

con una altura de 2020 con una altura de 2020

msnm msnm

Piper Piper crassinervium crassinervium

(FJR 4021)(FJR 4021) Coordenadas:Coordenadas:

N 04N 04°° 42’ 25,7’’ y42’ 25,7’’ y

W 075W 075°° 32’ 53,0’’32’ 53,0’’

con una altura de 2063 con una altura de 2063

msnm msnm

MATERIAL MATERIAL VEGETALVEGETAL DE DE Piper Piper pesaresanum pesaresanum Y Y Piper crassinerviumPiper crassinervium

ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE

P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

OBTENCIÓN DE EXTRACTOS OBTENCIÓN DE EXTRACTOS

MATERIAL VEGETALMATERIAL VEGETAL MATERIAL VEGETALMATERIAL VEGETAL SECADOSECADO SECADOSECADO MATERIAL MOLIDOMATERIAL MOLIDO MATERIAL MOLIDOMATERIAL MOLIDO

MASERACIÓN MASERACIÓN

PASIVAPASIVA

CONCENTRARCONCENTRAR SOXHLETSOXHLET

OBTENCIÓN DE EXTRACTOS OBTENCIÓN DE EXTRACTOS

Piper Piper pesaresanumpesaresanum

••557 g557 g

Piper Piper crassinerviumcrassinervium

••584584 gg

MATERIAL VEGETAL SECO MATERIAL VEGETAL SECO

Y MOLIDOY MOLIDO

OBTENCIÓN DE EXTRACTOSOBTENCIÓN DE EXTRACTOS

((ExtExt con 2L HEX ) x 3con 2L HEX ) x 3 ((ExtExt con 2L HEX ) x 3con 2L HEX ) x 3

((ExtExt con 2L DCM) x 3con 2L DCM) x 3 ((ExtExt con 2L DCM) x 3con 2L DCM) x 3

((ExtExt con con ) x 3) x 3 ((ExtExt con con 2LMeOH2LMeOH) x 3) x 3

((ExtExt en Soxhlet) x 48 Horasen Soxhlet) x 48 Horas ((ExtExt en Soxhlet) x 48 Horasen Soxhlet) x 48 Horas

ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE

P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANA POR DIFUSIÓN EN ANTIBACTERIANA POR DIFUSIÓN EN POZOSPOZOS

SOLUCIÓNSOLUCIÓN ADICIONAR M. O.ADICIONAR M. O. ADICIONAR EL AGARADICIONAR EL AGAR ADICIONAR EL AGARADICIONAR EL AGAR

REALIZAR 7 POZOSREALIZAR 7 POZOS REALIZAR 7 POZOSREALIZAR 7 POZOS ADICIONAR EXTRACTOS ADICIONAR EXTRACTOS ADICIONAR EXTRACTOS ADICIONAR EXTRACTOS

Y CONTROLESY CONTROLES LECTURALECTURA

4000 2000

1000 500 250

Cp Cn

CRITERIO DE EVALUACIÓN: CÁLCULO CRITERIO DE EVALUACIÓN: CÁLCULO

DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA

INHIBITORIA (ICINHIBITORIA (IC5050))

Cálculo del porcentaje de inhibición:

y = 38.563x - 52.967 R² = 0.9923

48

53

58

63

68

73

78

83

88

2,6 2,8 3 3,2 3,4 3,6

% d

e in

hib

ició

n

Logaritmo en base 10 de las concentraciones evaluadas

ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE

P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICA CONTRA

Mycosphaerella fijiensis

FASES DE REPRODUCCIÓN DE FASES DE REPRODUCCIÓN DE

Mycosphaerella fijiensisMycosphaerella fijiensis Morelet Morelet

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICA CONTRA ANTIFÚNGICA CONTRA M. M. fijiensis fijiensis MoreletMorelet

Fase sexualFase sexual

••Elongación Elongación del tubo del tubo

germinativogerminativo

Fase asexualFase asexual

••Crecimiento Crecimiento ••Crecimiento Crecimiento radialradial

ESTADÍO 1 ESTADÍO 2 ESTADÍO 3 ESTADÍO 4 ESTADÍO 5 ESTADÍO 6

PREPARACIÓN DE LA CÁMARA PREPARACIÓN DE LA CÁMARA

HÚMEDA PARA ACTIVACIÓN DE HÚMEDA PARA ACTIVACIÓN DE

ASCOSPORASASCOSPORAS

MATERIAL INFECTADO HUMEDECER CÁMARA HÚMEDA

ELONGACIÓN DEL TUBO ELONGACIÓN DEL TUBO

GERMINATIVOGERMINATIVO

Sumergir los discos con Sigatoka

en agua destilada por 5 minutos

Retirar el exceso de agua sin

tocar las hojas de plátano

infectadas.

Envenenamiento de agar

Permitir la descarga de las ascosporas sobre el

agar durante 8 a 10 horas

Continua…

ENVENENAMIENTO DE AGAR ENVENENAMIENTO DE AGAR

(2%)(2%)

CONCENTRACIÓN DE

EXTRACTO 1000 mg/L

CONTROL POSITIVO BENLATE 1mg/L

CONTROL NEGATIVO SOLVENTES DE LA

SOLUCIÓN MADRE

ELONGACIÓN DEL TUBO ELONGACIÓN DEL TUBO

GERMINATIVOGERMINATIVO

Sumergir los discos con Sigatoka

en agua destilada por 5 minutos

Retirar el exceso de agua sin

tocar las hojas de plátano

infectadas.

Envenenamiento de agar

Permitir la descarga de las ascosporas sobre el

agar durante 8 a 10 horas

Continua…

ELONGACIÓN DEL TUBO ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVOGERMINATIVO

Retirar los discos e incubar a 26°C durante 24 a 48 horas

Determinar el porcentaje de ascosporas con: GN:

Germinación normal, GD: Germinación deforme, GC:

Germinación corta y NG: No germinada

Realizar el conteo de 150 ascosporas en 3 campos diferentes

distribuidos en las 2 cajas de petri correspondientes,

… Continuación

LECTURA DEL BIOENSAYO CONTRA LECTURA DEL BIOENSAYO CONTRA

Mycosphaerella fijiensis Mycosphaerella fijiensis Morelet FASE Morelet FASE

SEXUALSEXUAL

A) Germinación normal B) No germinados A) Germinación normal B) No germinados

C) Germinación corta y D) Germinación deformeC) Germinación corta y D) Germinación deforme

CRECIMIENTO RADIAL

DESCARGADESCARGA

MONOSPÓRICOMONOSPÓRICO

CÁMARA HÚMEDA CÁMARA HÚMEDA

CRECIMIENTO EN 14 A 20 CRECIMIENTO EN 14 A 20

DÍASDÍAS

ADICIONAR SOBRE ADICIONAR SOBRE

AGAR ENVENENADOAGAR ENVENENADO

SIEMBRA POR SIEMBRA POR

SUPERFICIESUPERFICIE

SOLUCIÓNSOLUCIÓN

CRECIMIENTO RADIAL

LECTURA DEL BIOENSAYO LECTURA DEL BIOENSAYO

CONTRA CONTRA Mycosphaerella fijiensis Mycosphaerella fijiensis Morelet FASE ASEXUALMorelet FASE ASEXUAL

ElEl análisisanálisis estadísticoestadístico

porpor lala pruebaprueba dede

KruskalKruskal Wallis,Wallis, aa

travéstravés deldel softwaresoftware

InfostatInfostat

ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE

P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

CROMATOGRAFÍA DE CAPA CROMATOGRAFÍA DE CAPA

DELGADA (CCD)DELGADA (CCD)

SISTEMAS DE ELUCIÓN DE PLACAS

HEXANO DCM, MeOH y

MeOH-H2O (9:1)

HEXANO–

ACETATO DE

ETILO (7:3)

HEXANO-ACETATO

DE ETILO-

METANOL

(7:2.5:0.5)

EXT: HEXANOEXT: HEXANO

PRUEBA DE

FLAVONOIDES

UV: 380 nm

EXT: HEXANO

PRUEBA DE

COMPUESTOS

FENÓLICOS

REVELADOR: FeCl3

NÚCLEOS FITOQUÍMICOSNÚCLEOS FITOQUÍMICOS GRUPO

FITOQUÍMICO PATRÓN REVELADOR QUÍMICO

CARACTERÍSTICA DE LA

MANCHA

Alcaloides y

heterociclos de

nitrógeno

Quinina Dragendorff Naranja brillante o Marron.

Terpenos y

esteroides Lanosterol Libermann – Burchard

Verde, rojas, amarillas,

positivas para esteroides y

azules verdosas positivas

para terpenos.

Fenoles Catecol Cloruro férrico Azul oscuro

Flavonoides Kaempferol Tricloruro de aluminio Intensas fluorescencias

Taninos Ácido gálico y

Ácido tánico Cloruro Férrico Manchas azules oscuras

Lactonas Cumarina Cloruro de

hidroxilamina Café oscuro

Cumarinas Cumarina Hidróxido de potasio al

5% en metanol. Manchas azules intensas

Saponinas Diosgenina Ácido sulfúrico al 10%

en etanol.

Inicialmente se ven de un

color rosa pálido y luego se

tornan de color café.

Amidas Formamida Cloruro de

hidroxilamina Color morado

ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE

P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

ANÁLISIS HPLCANÁLISIS HPLC--MS DE LOS EXTRACTOS MS DE LOS EXTRACTOS

ACTIVOS DE ACTIVOS DE P. pesaresanum P. pesaresanum y y

P. crassinervium P. crassinervium (Scott et al., 2005)(Scott et al., 2005)

Condiciones del análisis

Columna Zorbax Eclipse XDB-C18

Sistema de elución Elución en gradiente

CH3CN- H2O

Flujo 0,4 mL/min

Volumen de inyección 2 µL

Detector DAD

Tiempo de corrida 20 min

Modo Ion positivo

Ionización APCI

Rango de masas 100-370 m/z

Longitud de onda para

identificación de amidas

insaturadas

205 y 340 nm

Longitud de onda para

compuestos fenólicos 254 y 280 nm

ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE

P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANÁLISIS ESTRUCTURALANÁLISIS ESTRUCTURAL

ANÁLISIS ESTRUCTURALANÁLISIS ESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS

DE DE P. pesaresanum P. pesaresanum y y P. crassinervium P. crassinervium POR CROMATOGRAFÍA DE COLUMNAPOR CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA

SOPORTE SÍLICA GEL

SISTEMA DE ELUCIÓN

Gradiente de polaridad

ascendente al 5% con

solventes hexano–

acetato de etilo–metanol

DIÁMETRO 8 cm

ALTURA 80 cm

SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS

DE DE P. pesaresanum P. pesaresanum y y P. crassinervium P. crassinervium POR CCDPOR CCD--PP

Cromatoplacas:Cromatoplacas: sílica sílica

gel de 20x20 cm y gel de 20x20 cm y

1.5mm de espesor.1.5mm de espesor.

Sistema de elución: Sistema de elución:

CloroformoCloroformo--metanol metanol

(80:20) + 1% de (80:20) + 1% de

ButanolButanol

ANÁLISIS POR CGANÁLISIS POR CG--EM DE LOS EM DE LOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

Condiciones del análisis

Columna

RTX-5Sil MS de 30 m

de largo, 0,25 mm de

diámetro y 0,25 µm de

espesor.

Ionización EI

Temperatura de horno 50°C

Temperatura de

inyección: 230°C

Modo de inyección: Split

Presión 88.3 Kpa

Flujo de columna 1.5 mL/min

Temperatura de

ionización

260°C y de interfase

280°C

ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE

P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA

DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

ANÁLISIS ESTRUCTURALANÁLISIS ESTRUCTURAL

ESPECTROSCOPÍA ESPECTROSCOPÍA INFRARROJO INFRARROJO -- BRUKERBRUKER

RESONANCIA MAGNÉTICA RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR NUCLEAR –– BRUKER 300 HzBRUKER 300 Hz

ESPECTROMETRÍA DE ESPECTROMETRÍA DE MASASMASAS

•• HPLCHPLC--MSMS

RESULTADOS Y RESULTADOS Y

DISCUSIÓNDISCUSIÓN

RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS

SECUNDARIOSSECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

OBTENCIÓN DE EXTRACTOSOBTENCIÓN DE EXTRACTOS

RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS

SECUNDARIOSSECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE

Piper crassinerviumPiper crassinervium

Piper crassinervium

Extracto S. aureus E. coli

Hexano X X

Diclorometano X X

Metanol X X

Metanol-agua (9:1) X X

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum

Piper pesaresanum

Extracto S. aureus E. coli

Hexano X X

Diclorometano X

Metanol X X

Metanol-agua (9:1) X X

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA CONTRA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA CONTRA

S. aureus S. aureus DEL EXTRACTO DE DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE P. pesaresanumP. pesaresanum

EXTRACTO CRUDO DE

DICLOROMETANO

EXTRACTO CRUDO DE

DICLOROMETANO

y = 38.563x - 52.967 R² = 0.9923

48

53

58

63

68

73

78

83

88

2,6 2,8 3 3,2 3,4 3,6

% d

e in

hib

ició

n

Logaritmo en base 10 de las concentraciones evaluadas

ICIC5050 parapara elel extractoextracto

dede diclorometanodiclorometano

fuefue dede 468468..8484 mg/Lmg/L

ESPECIES DEL GÉNERO ESPECIES DEL GÉNERO Piper Piper CON CON

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANAACTIVIDAD ANTIBACTERIANA

CONTRA E. coli

P. multiplinervium

P. lanceafolium

CONTRA S. aureus

P. aduncum

P. porphyrophyllum

P. multiplinervium

P. nigrum

RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS

SECUNDARIOSSECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA

CONTRA CONTRA Mycosphaerella Mycosphaerella fijiensis fijiensis DE LAS ESPECIES:DE LAS ESPECIES:

crassinerviumcrassinervium Piper Piper

crassinerviumcrassinervium (Pc)(Pc)

FJRFJR--40214021

Piper Piper

pesaresanumpesaresanum ((PpPp))

FJRFJR--39963996

ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO

DE DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. P. crassinervium crassinervium

CRECIMIENTO RADIAL DE CRECIMIENTO RADIAL DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. crassinerviumP. crassinervium

PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS EXTRACTOS DE P. crassinervium

EXTRACTO PORCENTAJE DE

INHIBICIÓN

HEXANO 50%

DICLOROMETANO 60%

METANOL 25%

METANOL-AGUA (9:1) 13,3%

ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO

DE DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. P. pesaresanumpesaresanum

CRECIMIENTO RADIAL DE CRECIMIENTO RADIAL DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. pesaresanumP. pesaresanum

PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS EXTRACTOS DE P. pesaresanum

EXTRACTO PORCENTAJE DE INHIBICIÓN

HEXANO 100%

DICLOROMETANO 76%

METANOL 30%

METANOL-AGUA (9:1) 2%

COMPARACIÓN DE ESPECIES COMPARACIÓN DE ESPECIES

CON ACTIVIDAD ANTIFÚNGICACON ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA

ESPECIE FAMILIA EXTRACTO FASE DE

REPRODUCCIÓN % DE

INHIBICIÓN

Topobea cf discolor Melastomataceae Metanol Sexual 100

Phenax rubra Urticaceae Metanol

Sexual

82

Passiflora antioquiensis

Passifloraceae Metanol

Sexual

85

Piper pesaresanum Piperaceae Metanol Sexual 100

Piper pesaresanum Piperaceae

Hexano Asexual 100

Phyllantus sp Euphorbiaceae Metanol Asexual 100

RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS

SECUNDARIOSSECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

CARACTERIZACIÓN FITOQUÍMICACARACTERIZACIÓN FITOQUÍMICA

Nombre científico Extracto

Metabolitos secundarios analizados

Alc

alo

ide

s

Es

tero

ide

s y

Tri

terp

en

os

Sa

po

nin

as

Fe

nó

les

Fla

vo

no

ide

s

Ta

nin

os

La

cto

na

s

Cu

ma

rin

as

Am

ida

s

Piper crassinervium

Hexano + + - + ++ ++ + + +

Diclorometano - - + ++ ++ + + - -

Metanol - + + + ++ - + ++ ++

Metanol - Agua

(9:1) - - + + + - ++ - +

Piper pesaresanum

Hexano ++ + + + ++ ++ + ++ +

Diclorometano ++ - + + ++ + - ++ +

Metanol - + + ++ ++ + - ++ -

Metanol - Agua

(9:1) - - + - + + + ++ -

(-) Ausente; (+) Presente; (++) Abundante

ESPECIES ACTIVAS DEL ESPECIES ACTIVAS DEL

GÉNERO GÉNERO PiperPiper

Especie Metabolitos

secundarios Referencia

Piper hispidum Amidas Navickiene et al., 2000

Piper tuberculatum Amidas Navickiene et al., 2000

Piper sarmentosum Alcaloides Zakaria et al., 2010; Zainal et

al., 2009

Piper capense Amidas Kaou et al., 2010

Piper

dilatatum

Chalconas y

derivados del ácido

benzóico

Terreaux et al., 1998

Piper chaba Amidas y alcaloides Matsuda et al., 2009

Rama et al., 2011

Piper kadsura Neolignanos Hyun et al., 2010

Piper longum Amidas Park et al., 2002

ENFOQUE DEL ESTUDIO ENFOQUE DEL ESTUDIO

Piper crassinerviumPiper crassinervium Piper crassinerviumPiper crassinervium Elongación del tubo germinativoElongación del tubo germinativo

CrecimientoCrecimiento radialradial ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA

Extracto S. aureus E. coli

Hexano X X

Diclorometano X X

Metanol X X

Metanol-agua

(9:1) X X

PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS

EXTRACTOS DE P. crassinervium

EXTRACTO PORCENTAJE DE

INHIBICIÓN

HEXANO 50%

DICLOROMETANO 60%

METANOL 25%

METANOL-AGUA

(9:1) 13,3%

ENFOQUE DEL ESTUDIO ENFOQUE DEL ESTUDIO Piper pesaresanumPiper pesaresanum Piper pesaresanumPiper pesaresanum

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA

Extracto S. aureus E. coli

Hexano X X

Diclorometano X

Metanol X X

Metanol-agua (9:1) X X

Elongación del tubo germinativoElongación del tubo germinativo

CrecimientoCrecimiento radialradial

PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS EXTRACTOS

DE P. pesaresanum

EXTRACTO PORCENTAJE DE

INHIBICIÓN

HEXANO 100%

DICLOROMETANO 76%

METANOL 30%

METANOL-AGUA (9:1) 2%

RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS

SECUNDARIOSSECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

PIPERAMIDAS IDENTIFICADAS CON LA PIPERAMIDAS IDENTIFICADAS CON LA

METODOLOGÍA A 205 Y 340 METODOLOGÍA A 205 Y 340 nmnm Especie donde

se encuentra Piperamida

tr

(min) Estructura

Espectro de masas M+

m/z (Int rel)

P. tuberculatum Pellitorina 6.00 223.1(10);182.0(10);181.1

(100)

P. guinense Piperilina 6.20

273.1(15);

272.1(100);201.0(40);

135.0(10)

P. guinense y P.

tuberculatum

4,5-

dihidropiperlongumini

na

6.87 277.1(15); 276.1(100);

135.0(45)

P. longum Piperlonguminina 7.02 275.1(15); 274(100);

201.0(40); 135.0(25)

P. nigrum 4,5-dihidropiperina 7.48 289.1(18);288.1(100);135.0(1

0)

P. nigrum Piperina 7.73 287.1(20;)286.1(100);201.0(3

5);135.0(5)

P. nigrum Pipercida 12.12 357.1 (25); 356.1 (100); 255.1

(10); 234.1(5); 135.0(25)

O

CH3

CH3

NHCH3

O

O

O

N

O

O

O

NH

CH3

CH3

O

O

O

NH

CH3

CH3

O

NO

O

O

O

O

N

H

O

O

O

N

CH3

CH3

HPLCHPLC--MS PARA EXTRACTOS MS PARA EXTRACTOS

ACTIVOS DE ACTIVOS DE P. pesaresanumP. pesaresanum EXTRACTO DE DICLOROMETANOEXTRACTO DE DICLOROMETANO EXTRACTO DE DICLOROMETANOEXTRACTO DE DICLOROMETANO EXTRACTO DE METANOLEXTRACTO DE METANOL EXTRACTO DE METANOLEXTRACTO DE METANOL

254 nm

340 nm

205 nm

280 nm

254 nm

340 nm

205 nm

280 nm

ESPECTRO DE MASAS PARA EL COMPUESTO COMÚN

EN LOS EXTRACTOS DE DICLOROMETANO Y METANOL

DE P. pesaresanum

COMPARACIÓN DE SEÑALES DEL COMPARACIÓN DE SEÑALES DEL

COMPUESTO IDENTIFICADO Y LA PIPERCIDA COMPUESTO IDENTIFICADO Y LA PIPERCIDA

(Amida insaturada de (Amida insaturada de Piper Piper nigrumnigrum))

PIPERCIDA

COMPUESTO

356,1 (100) 355(10)

234.1 (5) 235.0 (25)

135.0 (25) 122.0 (100)

H

O

O

O

N

CH3

CH3 CH3O

O

O

O

N

ESTRUCTURA POSIBLE DEL

COMPUESTO PRESENTE EN LOS DE

DICLOROMETANO Y METANOL

ACTIVOS DE P. pesaresanum

CH3O

O

O

O

N

RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS

SECUNDARIOSSECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS

SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LAS ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LAS

FRACCIONESFRACCIONES Fracción

Bioensayo 1 Bioensayo 2

Concentraciones en ppm (Cp) Concentraciones en ppm (Cp)

1000 500 250 75 62,5 250 1000 500 250 75 62,5 250

DCM-Pp-2

X X X X X 18 X X X X X 16

X X X X X 18 X X X X X 18

X X X X X 14 X X X X X 17

DCM-Pp--3

X X X X X 18 X X X X X 16

X X X X X 18 X X X X X 14

X X X X X 18 X X X X X 15

DCM-Pp--4

13 11 X X X 16 X X X X X 16

15 12 X X X 18 X X X X X 16

14 11 X X X 18 X X X X X 15

DCM-Pp--5

14 12 X X X 18 14 12 X X X 17

14 11 X X X 19 14 11 X X X 15

14 11 X X X 19 14 11 X X X 16

DCM-Pp--6

17 X X X X 19 17 X X X X 16

X X X X X 19 X X X X X 16

X X X X X 22 X X X X X 16

DCM-Pp--7

X X X X X 20 X X X X X 16

X X X X X 18 X X X X X 16

X X X X X 18 X X X X X 17

DCM-Pp--8

X X X X X 18 X X X X X 15

X X X X X 18 X X X X X 15

X X X X X 17 X X X X X 15

DCM-Pp--9

18 16 12 10 8 18 12 10 8 X X 15

19 14 12 11 9 18 12 9 7 X X 14

17 14 12 10 9 19 11 8 8 6 X 15

DCM-Pp--10

14 12 10 9 8 16 12 10 8 6 X 15

13 11 9 9 7 16 12 8 7 6 X 14

14 11 9 9 8 15 13 11 8 6 X 16

DCM-Pp--11

22 18 16 14 11 16 21 19 16 12 11 16

19 17 14 13 11 18 22 19 18 14 12 15

19 16 13 13 11 14 15 14 12 11 9 14

CONCENTRACIÓN MEDIA CONCENTRACIÓN MEDIA INHIBITORIA (ICINHIBITORIA (IC5050))

FRACCIÓN DCM 9 FRACCIÓN DCM-Pp-9

y = 30.299x - 5.735 R² = 0.9461

45

55

65

75

85

95

1,7 2,2 2,7 3,2

% d

e in

hib

ició

n

Log en base 10 de las concentraciones

FRACCIÓN DCM FRACCIÓN DCM-Pp-10

y = 32.057x + 0.557 R² = 0.9092

50

60

70

80

90

100

1,50 2,00 2,50 3,00

% d

e in

hib

ició

n

Log en base 10 de las concentraciones

FRACCIÓN DCMFRACCIÓN DCM-Pp-11

y = 40,148x - 4,139 R² = 0,9678

50,0

70,0

90,0

110,0

1,50 2,00 2,50 3,00 3,50

% d

e in

hib

ició

n

Logaritmo en base 10 de las concentraciones evaluadas

Código IC50 (mg/L)

DCM-Pp 468,84

DCM-Pp–9 69,19

DCM-Pp–10 38,93

DCM-Pp–11 22,31

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS

SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE

Piper pesaresanumPiper pesaresanum

RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE

EXTRACTOSEXTRACTOS

CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN

FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ACTIVIDAD ACTIVIDAD

ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS

SECUNDARIOSSECUNDARIOS

EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR IR –– EM EM -- RMNRMN

ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS

ANÁLSIS ANÁLSIS

ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR RMN EM

ESPECTRO IR DE LA FRACCIÓN ESPECTRO IR DE LA FRACCIÓN

DCMDCM--PpPp--1111--8 DEL EXTRACTO DE 8 DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DICLOROMETANO P. pesaresanumP. pesaresanum

Aromaticidad

ANÁLISIS ANÁLISIS

ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR RMN MS

SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE

Piper pesaresanumPiper pesaresanum

RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR DE RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR DE

LA FRACCIÓN DCMLA FRACCIÓN DCM--PpPp--88--6 DEL EXTRACTO 6 DEL EXTRACTO

DE DICLOROMETANO DE DE DICLOROMETANO DE P. pesaresanumP. pesaresanum

RMN-1H COSY COSY 11HH--11HH

ESPECTRO RMN-1H DE LA FRACCIÓN

DCM-Pp-11-8-6 DEL EXTRACTO DE

DICLOROMETANO DE P. pesaresanum

ESPECTRO COSY 1H-1H DE LA MUESTRA

DCM-Pp-11- 8-6 DEL EXTRACTO DE

DICLOROMETANO DE P. pesaresanum

ANÁLSIS ANÁLSIS

ESTRUCTURALESTRUCTURAL

IR RMN MS

RESULTADOS CGRESULTADOS CG--MS DE LA FRACCIÓN MS DE LA FRACCIÓN

DCMDCM--PpPp--10 DEL EXTRACTO DE 10 DEL EXTRACTO DE

DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum

COMPUESTOS EN EL GENERO

Piper

COMPUESTOS REPORTADOS COMPUESTOS DETECTADOS

4-isoprenil-1metil-3-ciclohexenen-1-ol

Piper nigrum

4-Isopropenil-1-metil-1,2-

ciclohexanodiol

EN RESUMEN EN RESUMEN Piper pesaresanumPiper pesaresanum

Piper pesaresanum

Actividad antibacteriana contra S. aureus

El extracto de diclorometano IC50 de

468, 84 mg/L fracciones polares:

DCM-Pp-9 69,19 mg/L

DCM-Pp-10 38,93 mg/L

DCM-Pp-11 22,31 mg/L

Actividad antifúngica Extracto metanol inhibió el 100% de

la germinación de ascosporas y el

de diclorometano un 96%

Análisis HPLC-MS Se identificó un compuesto con

características estructurales a la

Pipercida aislada de Piper nigrum

Separaciones y análisis de IR y

RMN

Se identificaron los grupos

funcionales del compuesto

separando

BIBLIOGRAFÍA

Anastasiou D. M., Morgan Margie., Ruanec P. J., Steenbergena J. N., Katza B.

D., Aldera J.D., Thornea G. M (2008). In vitro activity of daptomycin against

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Yamaguchi L. F., Lago J. H. G., Tanizaki T. M., Mascio P. D. and Kato J. M.

(2006). Antioxidant activity of prenylated hydroquinone and benzoic acid

derivatives from Piper crassinervium Kunth. Phytochemistry 67: 1838 – 1843.

GRACIAS!!!

DIREFENCIA EN LOS TIPOS DE DIREFENCIA EN LOS TIPOS DE

IONIZACIÓN IONIZACIÓN

IONIZACIÓN EI IONIZACIÓN EI IONIZACIÓN APCI IONIZACIÓN APCI

COMPUESTOS AISLADOS DE COMPUESTOS AISLADOS DE

Piper crassinerviumPiper crassinervium

Ácido [4-hidroxy-(3’-7’-dimetil6’

Ácido [4-hidroxy-(3’-7’-dimetil-10-oxo-octa-2’-E-6’-dienil)benzoico]

Ácido[4-hidroxi-3-(3’,7’-dimetil -6’

Ácido[4-hidroxi-3-(3’,7’-dimetil-3’-hidroxi-1’-oxo-6’-octenyl)benzoico]

1,4-dihidroxi-2-(3’,7’-dimetiloctadienil)benceno

1,4-dihidroxi-2-(3’,7’-dimetil-1’-oxo-2'-E-6’-octadienil)benceno

Isosakuratenina Isosakuratenina Sakuratenina Sakuratenina

ANOVAANOVA

Es una medida de la dispersión de sus datos con respecto a su media. Como establece diferencia entre las medias poblaciones; es un método matemático creado para probar la hipótesis de que las medias aritméticas de más de 2 grupos poblacionales son iguales.

Para la correcta aplicación de ANOVA se requiere el cumplimiento de cuatro supuestos estadísticos que sustentan la validez de las conclusiones de esta prueba:

a) Respuestas normalmente distribuídas

b) Homogeneidad de varianzas

c) Error experimental distribuído homogéneamente

d) Un modelo matemático conocido

ANOVAANOVA

ANÁLISIS ESTADÍSTICO NO ANÁLISIS ESTADÍSTICO NO

PARAMÉTRICOPARAMÉTRICO

Analiza los procedimientos inferenciales que se encuentran sujetos a la forma de distribución de la población y no requieren que las observaciones estén dadas en escala de intervalo.

Código

Versión

Fecha

Pagina

1. DATOS GENERALES DE LA ACTIVIDAD

RazónSocial____________________________________________________________

NIT.__________________________________________________________________

Actividad: ____________________________________________________

Representante Legal: _______________________C.C._________________________

Municipio: _____________________ Departamento:____________________________

Dirección: _____________________________________________________________

Teléfono: _______________Fax: _______________ E – mail: _________________

Presión barométrica: ___________ (mm Hg). ______ Altitud: ________msnm________

Temperatura ambiente:________(°C)

Producción horaria en Toneladas (en términos de producto terminado) relacionada con la fuente que se está midiendo): _______________ (Tn/h)

2. UBICACIÓN SEGÚN P.O.T - E.O.T ó P.B.O.T: Zona Urbana: ____ Zona Rural: ____

3. FECHA DE LA MEDICIÓN: ____________________________________________

4. NOMBRE DEL RESPONSABLE DE LA EVALUACIÓN DE EMISIONES ACREDITADO POR EL IDEAM: ____________________________

5. LABORATORIO QUE REALIZA LOS ANÁLISIS: ___________________________________

6. CONTAMINANTES A MEDIR:

Dióxido de Azufre: (SO2) ____ Óxidos de Nitrógeno (NOx) ____

Monóxido de Carbono (CO): ____ Dióxido de Nitrógeno (NO2): ____

Oxigeno (O2): ____ Oxido Nítrico (NO) ____

123-LCA-FOR-004

1

11/08/2011

1 de 1

IDENTIFICACION GENERAL DE LA EMPRESA

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

Código 123-LCA-FOR-005

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 1 de 3

Laboratoio: Calidad del Aire NUMERO:

Number

FIRMAS AUTORIZADAS

Authorized signatoriea

___________________________ __________________________

Técnico del Laboratorio Director del Laboratorio

Measurements made Head in Charge Laboratory

Fecha de emisión:

Date of issue:

Dirección: Laboratorio de Calidad del Aire de la Universidad Tecnológica de Pereira - Vereda la Julita Pereira (Risaralda). Tel: (6)3210961 ext 457

PRUEBA MEDIDA:

Test Measure

00000

AREA:

Area

DIRECCIÓN:

Adress

SOLICITANTE:

Customer

FECHA DE MEDICION:

Date of Measurement

FECHA DE SOLICITUD:

Date of Solicitation

Este certificado expresa fielmente el resultado de las mediciones realizadas. No podrá ser reproducido parcialmente, excepto cuando se haya obtenido previamente permiso por escrito del laboratorio que lo emite.

This certificate is an achúrate record of the performed measurements reults. This cetificate may not be partially or totaly reproduced, except the issuing laboratory.

Los resultados obtenidos en el presente certificado se refieren al momento y condiciones en que se realizaron las mediciones. El laboratorio que lo emite no se responsabiliza de los prejuicios que pueden derivarse del uso inadecuado en el proceso.

NÚMERO DE PÁGINAS DEL CERTIFICADO INCLUYENDO ANEXOS:

Number of pages of this Certificate and documents attached

Los certificados sin las firmas autorizadas no tienen validez.

The results of this certificate refer to the moment and conditions in wich the measurement werw made. The laboratory that issued it is not liable for the prejudice that may result from inappropriate use in the process.

Laboratorio de Calidad del Aire- Universidad Tecnológica de Pereira (Vereda la Julita) Tel: 3210961 ext 457 - Pereira (Risaralda).

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION

Código 123-LCA-FOR-005

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 2 de 3

No =H8

El XXXXX permite un error de indicación máximo: #¡REF! mm

La incertidumbre para la XXXX es de: #¡REF! mm

RESULTADOS DE LA MEDICION

Punto de Medida del XXXX Error del instrumento mm Incertidumbre Combinada de Medición

mm

METODO DE MEDICIÓN

INCERTIDUMBRE DE LA MEDICIÓN

La incertidumbre de medición ha sido calculada con un nivel de confianza de 95% utilizando un factor de cobertura de K=2.

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION

0,00

0,20

0,40

0,60

0,80

1,00

1,20

10 30 50 70 90 110 130 150

Err

or

del In

str

um

en

to (m

m)

Punto de Medida)

ERROR DE INDICACIÓN

Código 123-LCA-FOR-005

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 3 de 3

No #¡REF!

TRAZABILIDAD

OBSERVACIONES

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION

Código

Versión

Fecha

Pagina

Laboratoio: Calidad del Aire

EQUIPO: SERIAL:

MARCA: PROVEEDOR:

FECHA DE COMPRA:

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN 123-LCA-FOR-006

1

HOJA DE VIDA DEL TESTO 350 XL “Analizador de gases de combustión” 11/08/2011

1 de 2

DESCRIPCIONFECHA UBICACIÓN ACTUAL RESPONSABLE FIRMAN. DOC

SERVICIO

CLASE T o M

FECHA: Dia que realizo el servicio T: Traslado M: Mantenimiento

Código

Versión

Fecha

Pagina

Laboratoio: Calidad del Aire

EQUIPO: SERIAL:

MARCA: PROVEEDOR:

Caja de salida analógica

Caja de alimentación

Sonda de muestreo de combustión

Unidad de control

Logger

Caja analizadora de gases de combustión

VERIFICACION DE EQUIPO BUENO REGULAR MALO

FECHA DE MANTENIMIENTO:

BSERVACIONES

ESTADO GENERAL DEL EQUIPO ESTADO

HOJA DE VIDA DEL TESTO 350 XL “Analizador de gases de combustión” 11/08/2011

2 de 2

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN 123-LCA-FOR-006

1

Código 123-LCA-FOR-008

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 1 de 2

Laboratorio: FECHA: Nº

Dióxido de Azufre: (SO2) ____ Óxidos de Nitrógeno (NOx) ____

Monóxido de Carbono (CO): ____ Dióxido de Nitrógeno (NO2): ____

Oxigeno (O2): ____ Oxido Nítrico (NO) ____

HUMEDAD:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

2 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

3 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Xa= 0,00000

0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Ra= 0,00000

1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

2 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

3 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Xb= 0,00000

0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Rb= 0,00000

1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

2 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

3 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000

0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Xc= 0,00000

0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Rc= 0,00000

Media Observ. 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 X= 0,00000

Rp= 0,0000 Xdiff= 0,0000 Rprom= 0,0000 LSCR= #¡VALOR! D4= NO VALIDO

ELABORADO POR:

Media

Rango

REVISADO POR:

Media Observ.: Media de observaciones, es el promedio de todas la mediciones en un punto realizadas por todos los observadores.

Rp: es el rango de la media de observaciones "Media Observ.".

Rprom: es el promedio de los tres rangos de operador ((Ra+Rb+Rc)/3).

D4: es 3,2686 para cuando se hacer dos pruebas y 2,5735 para tres.

LCSR: representa el limite para las Rs individuales (LCSR=D4*Rprom). Se deben marcar los rangos individuales que se encuentren mas allá de este límite, identificar las causas y corregirlas. Se

deben repetir las lecturas con el mismo operario e instrumento como al principio o descartar los valores y volver hacer el promedio, volver a estimar R y los valores límite para las observaciones

restantes.

Media

Rango

B

Analista Laboratorio Director del laboratorio

B

Rango

Media

0,0000

0,0000

0,0000

Media

C

Rango

MediaMedia

Rango

C

OBSERVADOR/

PRUEBA Nº

RESULTADOS DE LAS OBSERVACIONESMEDIA

A

0,0000

0,0000A

OBSERVADOR C:

DATOS GENERALES DEL ESTUDIO

TEMPERARTURA:

OBSERVADOR A:

OBSERVADOR B: TOLERANCIA:

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

ESTUDIO DE REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD

Calidad del Aire

CONTAMINANTES A MEDIR

Código 123-LCA-FOR-008

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 2 de 2

Laboratorio: FECHA: Nº

Repetibilidad: Variaciones del Equipo (EV)

Pruebas K1

EV= 0,0000 2 4,56 %EV= #¡DIV/0!

3 3,05

Reproducibilidad: Variaciones del Observador (AV)

AV= 0,0000 %AV= #¡DIV/0!

n: Número de datos Observ. 2 3

r: Número de Pruebas K2 3,65 2,79

R&R: Repetibilidad y Reproducibilidad

Datos K32 3,65

3 2,70

R&R= 0,0000 4 2,30 %R&R= #¡DIV/0!

5 2,08

Variación por partes (PV) 6 1,93

7 1,82

8 1,74

9 1,67

PV= 0,0000 10 1,62 %PV= #¡DIV/0!

Variación Total (TV) RESULTADO DEL ESTUDIO

#¡DIV/0!

TV= 0,0000

Criterios para aceptar el estudio: R&R<10% EXCELENTE

10%<=R&R<=20% BUENO #¡DIV/0!

20%<=R&R<=30% ACEPTABLE

R&R>30% NECESITA MEJORAS

Análisis de Mediciones Unitarias % Variaciones Totales (PV)

Calidad del AireCalidad del Aire

ANÁLISIS DE DATOS

ESTUDIO DE REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

Código 123-LCA-FOR-

009

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 1 de 1

Día Mes Año

R&R R&R

S

I

S: R&R: I :Repetibilidad y ReproducibilidadSupervisión Intercomparaciones

Diciembre Verificado

PLAN DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD

Abril Mayo JunioEQUIPO EneroFecha

Julio Septiembre Octubre NoviembreAgosto

SUPERVISIÓN DIRECTOR

Febrero

TESTO 350 XL “Analizador de

gases de combustión”

INTERCOMPARACIÓN

Marzo

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

AÑO:

Laboratorio: Calidad del Aire

2012

Código

Versión

Fecha

Pagina

Laboratorio: Calidad del Aire

Día Mes Año SI NO SI NO

26 10 2005

5 6 2008

VersiónNombre

NTC-ISO-IEC 17025 Requisitos Generales de Competencia

de Laboratorios de Ensayo y Calibración.

RESOLUCION 909 Por la cual se establecen las normas y

estandares de admision admisibles de contaminantes a la

atmosfera por fuentes fijas y se dictan otra disposiciones.

Entidades Asociadas

Revisión Página WEB

Firma

1 revisión 2 revisión

Cambios Cambios

2

1

1 de 1

ICONTEC

MINISTERIO DE AMBIENTE,

VIVIENDA Y DESARROLLO

TERRITORIAL

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

ACTUALIZACIÓN Y REVISIÓN DE NORMAS TÉCNICAS

123-LCA-FOR-010

1

11/08/2011

Fecha de

Actualización

Código

Versión

Fecha

Pagina

Laboratorio: Calidad de Aire

Fecha: _______________________ Pereira (Risaralda)

123-LCA-FOR-011

1

ACTA DE COMPROMISO ÉTICO 11/08/2011

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

1 de 1

____________________________ _____________________________

Firma del Empleado Firma Director del Laboratorio

Yo ___________________________ identificado con C.C. ________________________ de ____________________

doy fe de que me encuentro libre de cualquier presión indebida comercial, financiera u otra que pudiere influir en el criterio técnico del laboratorio,

además me comprometo a no realizar ninguna actividad que pueda poner en peligro o disminuir la confianza en la competencia, imparcialidad, criterio o

integridad operacional del laboratorio.

Acepto las sanciones legales a nivel civil y penal que correspondan en caso de cometer alguna infracción en el cumplimiento de mi deber.

Código

Versión

Fecha

Pagina

Laboratorio: Calidad del Aire

Fecha: Nombre del control:

1, Coincidencia con todas las respuestas 1. Datos Obtenidos

Evaluación Evaluación

Acciones a tomarAcciones a tomar

Revisar los procedimientos del laboratorioCapacitación del personal en...

Ejecución de la prueba por las personas a cargo

Análisis de los resutados de la prueba

Evaluación individual con cada persona

Capacitación manejo de equipos

Otras Acciones emprendidas (Descripción) Otras Acciones emprendidas (Descripción)

P C P C

Parte Teórica Parte Práctica

123-LCA-FOR-012

1

11/08/2011

1 de 1

CONTROLES DE APTITUD O CALIDAD

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

P: Acción Preventiva C: Acción Correctiva

Con diferencias Con diferenciasIguales

Causas EfectoIguales

Causas Efecto

Código 123-LCA-FOR-013

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 1 de 2

Laboratorio:

CÓDIGO

EMPRESA

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

SEGUIMIENTO AL SERVICIO

Calidad del Aire

TELÉFONO CORREOEMPRESA DIRECCIÓN

Código 123-LCA-FOR-014

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 1 de 1

Laboratoio: Calidad del Aire

Año Mes Día

Año Mes Día

CORREO CERTIFICADO:

Dióxido de Azufre: (SO2) ____ Óxidos de Nitrógeno (NOx) ____

Monóxido de Carbono (CO): ____ Dióxido de Nitrógeno (NO2): ____

Oxigeno (O2): ____ Oxido Nítrico (NO) ____

VALOR TOTAL:

ANALISTA DEL

ENSAYO:Nombres y Apellidos: Firma:

Observaciones:

ENTREGA DEL CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION

Fecha

MEDIO EMPLEADO

NOMBRE:

Correo electrónico:

Representante de la empresa: Cargo:

Teléfono / Fax:

Razón social: Nit:

MEDIO EMPLEADO

Nombres y Apellidos: Firma:ENTREGA

No DE RECIBO:

PERSONAL:

OTRO: CUÁL:

ENTREGADO (O ENVIADO ) A

CONTAMINANTES QUE SE DESEAN MEDIR

DATOS DE LA EMPRESA

E-mail: Correspondencia RadicaciónTelefónico:

Municipio / Departamento:

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

Fecha

Dirección:

GASES DE COMBUSTION

PEDIDO Y ACUERDO PARA LA MEDICION DE

Código 123-LCA-FOR-O15

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 1 de 1

Laboratorio:

AÑO:

Tiempo

estimado

Día Mes Horas Día Mes

Int: Capacitación interna Ext: Capacitación externo

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

PROGRAMA ANUAL DE CAPACITACIÓN Y FORMACIÓN

NúmeroTema de Capacitación o

FormaciónInt Ext

Fecha

planeada

Calidad del Aire

Funcionarios participantes

Nota de ejecución

Fecha

Firma

Código 123-LCA-FOR-016

Versión 1

Fecha 11/08/2011

Pagina 1 de 1

Laboratorio: Calidad del Aire

CÓDIGO EMPRESA DIRECCIÓN TELÉFONO

001

002

003

004

005

006

007

008

009

010

011

012

013

014

015

016

017

VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN

CLIENTES LABORATORIO - EMPRESA

CORREO