Flávia Aleixo VasconcellosDoutoranda em Biotecnologia
Universidade Federal de PelotasUniversidade Federal de Pelotas
Centro de BiotecnologiaCentro de Biotecnologia
OBJETIVO DA AULA
CONHECER E DESCREVER
OS PRINCIPAIS MÉTODOS DE ESTERILIZAÇÃO
APLICADOS EM LABORATÓRIO
ESTERILIZAÇÃO
Processo que DESTRÓI ou ELIMINA
agentes transmissíveis das superfícies e equipamentos.
FUNGOS, BACTÉRIAS, VÍRUS e ESPOROS
DESINFECÇÃO X ANTISSEPSIA
DESINFECÇÃO
“Limpar” um OBJETO ou INSTRUMENTOS
de organismos patogênicosDESINFETANTESDESINFETANTES
São agentes antimicrobianos aplicados à OBJETOS e INSTRUMENTOS
para destruir microorganismos.
ANTISSEPSIA
“Limpar” um TECIDO VIVO
de organismos patogênicos
ANTISSÉPTICOSANTISSÉPTICOS
São substâncias antimicrobianas aplicadas a TECIDOS VIVOS
para reduzir a possibilidade de infecção.
OBS: Álcool 70% - maior difusão e menor evaporação
ASSEPSIA
ASSEPSIA
Métodos físicos
CALOR SECOFORNO PASTEUR ou ESTUFA
Provoca a OXIDAÇÃO dos constituintes celulares,
DESNATURAÇÃO e a COAGULAÇÃO das proteínas
Indicação - Metais, Vidros, Pós
Contra-indicação - Tecidos, Borrachas e Líquidos
Tempo e Temperatura:
2h à 170°C
ou
12h à 120°C
Métodos físicos
CALOR ÚMIDO
AUTOCLAVE
TERMOCOAGULAÇÃO das proteínas bacterianas.
Elimina bactérias, vírus, fungos, esporos (exceção: prions)
Indicação - Metais, Vidros, Tecidos, Borrachas
Contra-indicação - (alguns) Tecidos, Borrachas e Líquidos
Tempo e Temperatura
15-20 min à 121°CAvaliação da eficácia:
– Fita adesiva
– Tubos com suspensão de esporos de Bacillus stearothermophylus
(12 min a 121°C)
PRÁTICAPRÁTICA
Métodos físicos
RADIAÇÃO por RAIOS GAMA COBALTO
altera a COMPOSIÇÃO MOLECULAR das células,
sofrem IONIZAÇÃO,
ficando carregadas negativa ou positivamente, modificando o DNA (Processo a frio, por isso não danifica embalagens e invólucros)
Indicação: Plásticos descartáveis
por ULTRAVIOLETA 15min – Somente superfícies
Métodos físicos
FILTRAÇÃO
A técnica é considerada esterilizante conforme o diâmetro dos POROS.
diâmetro igual ou inferior a 0.2 μm
( embora não retenham VÍRUS)
Os FILTROS podem ser de vários tipos :
ex: velas porosas, discos de amianto, filtros de vidro poroso, de celulose, e filtros “millipore” (membranas de acetato de celulose ou de policarbonato
Indicação: Líquidos
Métodos químicos
Gases e Líquidos
Formaldeído
180 min a temp. 50-60°C
Utilizado em processos fechados, (autoclave especial)
A esterilização é eficiente, depende
de umidade local controlada.
Desvantagens
Requer equipamento específico
Controle rigoroso
Glutaraldeído
Vantagem
Facilidade de uso
Desvantagens
É tempo dependente
Necessário a imersão total do material.
Alergênico, tóxico e irritante.
Mycobacterias podem ser resistentes, bem como esporos.
DESINFECÇÃO: ....considerações sobre SOLUÇÕES GERMICIDAS
DESINFECÇÃO DE BAIXO NÍVEL(tempo de exposição< ou= a 10 minutos)
São destruídas as bactérias em forma vegetativa, alguns vírus e alguns fungos. O Mycobacterium tuberculosis, os esporos bacterianos ,o vírus da Hepatite B (HBV) e os vírus lentos sobrevivem.
Ex:Álcool etílico e isopropílico, Hipoclorito de Sódio Fenólicos, Iodóforos*, Quaternário de amônia,
DESINFECÇÃO DE MÉDIO NÍVEL (depende da concentração e/ou período de exposição)
Além…são atingidos o Mycobacterium tuberculosis, a maioria dos vírus (inclusive o HBV) e a maioria dos fungos.
Ainda sobrevivem os Mycobacterium intracelulares, os esporos bacterianos e os vírus lentos.
Ex:Álcool etílico e isopropílico (70 a 90%), Fenólicos, Iodóforos, Hipoclorito de Sódio(100ppm) Pasteurização 75o C a 30 minutos.
DESINFECÇÃO DE ALTO NÍVEL (Tempo de exposição >ou= 20 minutos )
Resistem apenas alguns tipos de esporos bacterianos mais resistentes e os vírus lentos
Ex: Glutaraldeído, Solução de Peróxido de Hidrogênio, Hipoclorito de sódio (1000ppm), Cloro e compostos clorados
Mais resistentes Príons
Esporos bacterianos
Micobactéria
Cistos de protozoários
Protozoários vegetativos
Bactéria Gram-negativa
Fungo e maioria de esporos de fungos
Vírus não envelopados
Bactérias Gram-positivo
Menos Resistentes Vírus sem envelope lipídico
Método IDEAL de Esterilização
• Rápido• Eficaz contra todos microrganismos
• Não tóxico• De fácil penetração
• Estável• Aplicável a vários materiais e tecido humano
• Sem odor e cor• Custo reduzido
OBRIGADA!
ANTES e DEPOIS.......
“ENCARE A TÉCNICA ÉSTERIL NÃO APENAS COMO UMA MANEIRA DE ABRIR E
MANIPULAR AS CULTURAS EM AMBIENTE ESTÉRIL, MAS COMO UMA MANEIRA DE PENSAR E DE AGIR
SEMPRE NO LABORATÓRIO.”
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