Produção in vitro de embriões bovinos com suplementação de modificadores do

metabolismo do triacilglicerol.

Orientado: Camila Gabriela Pereira VaqueroOrientador: Prof. Dr. Felipe Perecin

Laboratório de Morfofisiologia Molecular e Desenvolvimento da Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos da Universidade de São Paulo

Roteiro

I. Produção in vitro de embriões bovinos no BrasilII. Efeitos da suplementação no meio de cultivoIII. Biossíntese de triacilglicerolIV. ObjetivosV. Metodologia e Delineamento experimentalVI. Perspectivas da suplementação

PIV no Brasil•Rebanho nacional: 190 milhões de animais (IBGE, 2011)

•Avanço das biotécnicas de PIV

•Acelera o melhoramento genético

•Evita descarte precoce de fêmeas de alto valor genético com infertilidade adquirida

•Segundo IETS: 453.471 embriões produzidos in vitro em 2011

•Brasil: 86% do total dos embriões PIV

• Entrave: Criotolerância de embriões de PIV

Soro Fetal Bovino (SFB)

• Clivagem• Desenvolvimento• Morfologia• Síndrome do Feto Grande• Acúmulo de lipídeo

• Criotolerância

Fonte: Abe et al., 2002.

Cultivo in vitro

• Primeiras clivagens• Ativação genoma embrionário• Compactação da mórula• Diferenciação nos 2 tipos celulares

Suplementação com Ácido LinoléicoConjugado (CLA)

• Reduzir o acúmulo lipídico em embriões

Fonte: Rahme, L. S. T., 2012

Suplementação com CLA

• Aumenta a fluidez da membrana

incorporação do CLA

• Aumenta a taxa de sobrevivência após a vitrificação

Fonte: Pereira et al., 2007.

Suplementação com Etossulfato de Fenazina (PES)

Fonte: Sudano et al., 2013.

PES PES

Suplementação com PES

Fonte: De La Torre-Sanchez et al. 2006; Sudano et al., 2013.

A homeostase de lipídeos

Fonte: Horton et al., 2002

Biossíntese dos TAGs

Fonte: Horton et al., 2002

Genes regulados pelo SREBP-1c.

Estearoyl Co-A Desaturase (SCD)

Lee et al., 1998.

Objetivo Geral

• Avaliar os efeitos do CLA e do PES sobre o desenvolvimento embrionário e sobre o metabolismo dos triacilgliceróis.

Objetivos Específicos

• Taxa de clivagem e de blastocisto com CLA e PES (Experimento 1)

• Expressão gênica (Experimento 1):- estearoil coenzima A dessaturase (SCD) - fatores de transcrição SREBP-1c (sterol regulatory element-binding proteins)

• Taxa de gestação com 30 e 60 dias (Experimento 2)

Metodologia

CLA SEM CLA

PES CLA + PES PES

SEM PES CLA CONTROLE

No meio de Cultivo:

Delineamento Experimental

ovários

oócitosCCOs

MIV/FIV

Cultivo in vitro

controle

Taxa de desenvolvimento

Expressão gênica

CLA

Taxa de desenvolvimento

Expressão gênica

PES

Taxa de desenvolvimento

Expressão gênica

CLA + PES

Taxa de desenvolvimento

Expressão gênica

Experimento 1:

Delineamento ExperimentalOPU

Vacas Holandesas

oócitosCOC's

MIV/FIV

Cultivo in vitro

controle

Taxa de desenvolvimento Vitrificação

Transferência dos embriões

Taxa de prenhez

Suplemento com melhor taxa de desenvolvimento e biossíntese de TAG

Taxa de desenvolvimento Vitrificação

Transferência dos embriões

Taxa de prenhez

Experimento 2:

Contribuição deste projeto para a área de conhecimento

• Melhorar as taxas de produção in vitro e a competência embrionária

• Compreender os efeitos dos sistemas in vitro sobre os mecanismos de acúmulo de lipídeos

Obrigada