Post on 23-Oct-2015
o DOCENTE : Blga: Carmen Aquije Blgo: Manuel Fasabi
o TEMA : Tecnología del ADN Recombinante
o INTEGRANTES :
Mora Torero, Bruno
Zavaleta Gonzales, Alfredo Soplin Villacorta, Gabriela
Mayorca Apaza, Melissa
Romero Arango, Juan
Los 70s
ADN
Adelantos Tecnológic
os
Serie de Técnicas
INTRODUCCIÓN
HISTORIA / DESCUBRIMIENTO
Daniel Nathans Hamilton Smith
ENZIMA DE RESTRICCIÓN
DEFINICIÓN
Es la unión artificial de dos fragmentos de ADN.
Conjuntos de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo para su posterior inoculación en otro organismo. La tecnología del ADN recombinante
comprende una serie de técnicas que permiten cortar, aislar, pegar,
reproducir y secuenciar fragmentos específicos del ADN de cualquier
organismo.
Existen varias líneas de investigación, las cuales son: El conocimiento de las enzimas de restricción. La replicación y reparación de ADN. La replicación de virus y plásmidos. La síntesis química de secuencias de nucleótidos
FINES Ayudan a la
investigación de enfermedades como el cáncer.
Producción de vacunas, tratamientos para la diabetes y la producción de alimentos enriquecidos.
IMPORTANCIAS Se puede usar para la obtención de hormonas como la
insulina o de crecimiento.
Se pueden usar para la creación de técnicas génicas para el tratamiento de enfermedades genéticas, como
la enfermedad de Huntington.
LAS HERRAMIENTAS DE LA TECNOLOGÌA DEL
ADN RECOMBINANTE
A finales de 1960 surge el
conjunto de técnicas en
laboratorios muy
revolucionarias que
permitían modificar el ADN ;
a este conjunto se le conoce
como ingenierías genéticas.
Esta Ingeniería permite cortar y empalmar fragmentos de ADN, para crea combinaciones no existentes en la naturaleza; y todo esto es posible gracias a herramientas:
Enzimas de restricción
(fragmentación del ADN). Ligasa
( unión de fragmentos de ADN). Los vectores o técnicas
de transformación genética
(transformación de células).
Y MEDIANTE PROCESOS COMO:
1. Electroforesis en geles de agarosa: Técnica de separación molecular basada en la diferente movilidad de las moléculas cuando son sometidas a un campo eléctrico continuo
2. Amplificación del ADN por técnica de PCR: Permite amplificar ADN obteniendo millones de copias de segmentos específicos.
3. Secuenciación del ADN: Determina la secuencia de nucleótidos de un fragmento de ADN.
LAS HERRAMIENTAS DE LA TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE
Enzimas de Restricción o Retrictasas.- Son encimas bacterias con capacidad de reconocer lugares específicos
de la cadena de ADN y cortar la secuencia; obteniendo fragmentos de restricción que se separan mediante electroforesis sobre geles.
Estas son tres enzimas de restricción de las más usadas (En la actualidad se comercializan más de 100) y los organismos de procedencia, junto con la secuencia de reconocimiento y el
lugar por donde realizan el corte de ADN.
LOS VECTORES DE CLONADO.-
Son pequeñas moléculas de ADN, que tienen capacidad para autor replicarse dentro de las células hospedadoras.
Se utilizan con frecuencia dos tipos de vectores: Plásmidos y virus.
PLÁSMIDOS: Son moléculas de ADN circular; se replican con independencia del cromosoma bacteriano al tener su propio origen de replicación.
BACTERIÓFAGOS: Se trata de insertar el gen deseado en un fragmento de ADN vírico .
En el siguiente paso se insertará este ADN por el proceso de la transducción.
CÓSMIDOS: Se empaqueta en el interior de un fago.
Además del origen de replicación, los vectores de clonación deben llevar otros genes
denominados marcadores que sirven para identificar las células que contienen el vector de clonación:
Genes de resistencia a antibióticos. Sirven para identificar bacterias que contienen el vector de clonación.
Genes de luminiscencia. En este caso, la célula que contenga el gen que se quiere clonar, tendrá la propiedad de emitir luz ( se da cuando la célula es eucariota).
MÉTODOS DE INTRODUCCIÓN DEL VECTOR: Este método dependerá del tipo de célula. En bacterias (células procariotas)
TRANSFORMACIÓN.- Consigue artificialmente sometiendo a la célula bacteriana a tratamientos físicos y químicos.
TRANSDUCCIÓN.- Utilizando como vector de clonación el genoma del virus.
Enzima Endonucleasa
Fragmentos del ADN
“Fragmentos de
Restricción”
PROCEDIMIENTO- OBTENCIÓN
ADN del Plásmido
ADN a multiplica
r
“ADN Ligasa”
PROCEDIMIENTO - INSERCIÓN
PROCEDIMIENTO
PCR (Polymerase
Chain Reaction ) Revoluciono
el Diagnostico Molecular
Obtención millones de copias de
ADN Se lleva a cabo en
pequeños tubos de ensayo.
DIAGNOSTICO MOLECULAR
1er ciclo - Separar la doble cadena de ADN
(94-96 ºC)
2do ciclo (Anillamiento de los Cebadores con las
secuencias complementarias del
ADN)
Ciclo de Extensión (ADN Polimeraza sintetiza nuevas
hebras de ADN que serán
complementarias a la cadena original.)
MECANISMO PCR
Se necesita oligonucleótidos que actúan como cebadores.
MECANISMO DEL PCR
AVANCES DE LA PCR EN LA MEDICINA ACTUAL
PCR Cuantitativo
Detección de Mutaciones
AVANCES DE LA PCR EN LA MEDICINA ACTUAL
Estudios Evolutivos
Obtención de huellas
APLICACIONES DEL ADN
RECOMBINANTE
En el esquema se indica en el lugar en el que corta la enzima de restricción en ambas hebras.
Ha quedado rota la molécula de ADN, quedando unos bordes pegajosos por donde puede unirse este ADN, con otro aunque sea de
una especie diferente.
CORTE ESPECIFICO DEL ADN
Insulina artificial
Vacunas recombinantes Proteínas
recombinantes
Alimentos transgénicos
Clonación de animales
APLICADO EN LA MEDICINA,CIENCIA, AGRICULTURA
Insulina artificial Vacuna contra VPH
PROCESOS DE LA APLICACIÓN DE ADN
Proteínas Recombinantes (fabricación hormona de crecimiento)
Plantas transgénicas
Clonaciones
DESVENTAJAS