Normas de laboratório, limpeza, secagem, montagem e esterilização de material usado em microbiologia

Instituto Federal do Ceará – Campus Sobral

Curso Superior de Tecnologia em Saneamento Ambiental

Disciplina de Análises Microbiológicas 

Professor:Michael Viana

Objetivo

• Caracterizar a estrutura e o funcionamento de um laboratório de microbiologia

• Executar técnicas de preparo e montagem de material para esterilização

Normas adotadas no laboratório de microbiologia

• Desinfetar a bancada de trabalho antes e depois de cada análise‐ Etanol, álcool iodado...

• Não comer ou fumar no laboratório‐ Contamina o ambiente e o alimento pode ser contaminado

• Usar sempre jaleco‐ Mas evitar sair do laboratório vestido com ele

• Lavar bem as mãos ao entrar e ao sair do laboratório

Normas adotadas no laboratório de microbiologia

• Organização do material usado• Cada aluno é responsável pelo seu material• Seguir as normas de uso dos aparelhos• Cuidado ao manipular equipamentos

‐ Ex: bico de Bunsen

• “Flambar” alças, agulhas e pinças antes e após o uso

• Não correr ou frescar no laboratório• Lavar as suas vidrarias após o uso

Normas adotadas no laboratório de microbiologia

• Utilizar óculos de proteção e luvas• Calçados fechados• Prender os cabelos longos• Não pipetar com a boca

Limpeza, secagem, montagem e esterilização de 

material usado em microbiologia

Introdução

• Microrganismos são encontrados:‐ Solo‐ Ar‐ Água‐ Alimentos‐ Esgoto‐ Corpo humano‐ Plantas‐ Animais e etc.

Culturas mistas

Introdução

• Em laboratório  necessidade de se trabalhar com culturas puras

• Para obtenção de culturas puras:‐ Materiais e equipamentos especiais‐ Uso de técnicas específicas (esterilização* e assepsia**)

* Eliminação ou remoção de toda e qualuqer forma de vida em um material ou ambiente** conjunto de medidas que impede a entrada de microrganismos onde eles não são desejados

Introdução

• Identificação

• Caracterização

• Quantificação

• conservação

Materiais e equipamentos especiais

Materiais e equipamentos especiais

• Cultivo de microrganismos

• Esterilização

• Transferência de microrganismos

• Preservação de microrganismos

Materiais e equipamentos especiais

• Cultivo de microrganismos ‐ VIDRARIAS‐ Tubos de ensaio

‐ Pipetas Pasteur

‐ Pipetas

‐ Becker

Materiais e equipamentos especiais

• Cultivo de microrganismos ‐ VIDRARIAS‐ Placa de Petri

‐ Balões volumétricos

‐ Erlenmeyers

Materiais e equipamentos especiais

• Cultivo de microrganismos – CÂMARAS DE CULTIVOS‐ Banhos‐Maria

‐ Agitador rotatório

‐ Incubadoras

Materiais e equipamentos especiais

• Cultivo de microrganismos – CÂMARAS DE INOCULAÇÃO‐ Câmara asséptica ‐ Câmaras de fluxo laminar

Materiais e equipamentos especiais

• Esterilização‐ Autoclave ‐ Forno Pasteur

Materiais e equipamentos especiais

• Transferência de microrganismos‐ Alça de inoculação

‐ Pipetas‐ Pipetas de Pasteur

‐ Swab

Materiais e equipamentos especiais

• Preservação de microrganismos‐ Refrigeradores

‐ Liofilizador

‐ Frezzer

‐ Câmara com N2 gasoso

Materiais e equipamentos especiais

• Outros materiais‐ Bico de Bunsen

‐ Balança de pesagem

‐ Lâminas e lamínulas

‐ Algodão

Materiais e equipamentos especiais

• Outros materiais‐ Papel de embrulho

‐ Espátulas

‐ Pinças

‐ espátula de Drigalsky

Lavagem, secagem e esterilização de vidraria

Lavagem de vidraria

• Objetivo‐ Manter vidraria limpa para usos posteriores

• Sabão / Detergente• Solução sulfocrômica• Água• Água destilada

Secagem da vidraria

• Estufa a 70°C

• Autoclave  antes da análise microbiológica e se o material estiver contaminado

• Água fervente• Forno, etc..

Esterilização de vidraria

Preparo e montagem do material do laboratório

Preparo e montagem do material do laboratório

Evita a contaminação da amostra e do operador

Enrolar em papel em papel ou em recipientes metálicos

Deverão ser desenroladas antes da análise

Preparo e montagem do material do laboratório

Tampa de algodão hidrofóbico  “filtro”: permite a entrada de ar e retém microrganismos

Pode ser utilizado tampas de metal ou plásticos

Manobras assépticas

Manobras assépticas

• Técnicas que impedem a entrada de microrganismos onde estes não são desejados, garantindo a assepsia

• Contaminação:‐ Pelo ar‐ Bancadas‐ Saliva

• Impede contaminação do operador ou do ambiente

Manobras assépticas

• Bico de Bunsen  “zona de segurança”

Manobras assépticas

1. Trabalhar em áreas submetidas previamente a limpeza e desinfecção

2. Trabalhar dentro da zona de segurança (bico de Bunsen)

3. Flambar ao rubro alças antes e depois da inoculação

4. Deixar esfriar a alça dentro da zona de segurança ou do recipiente com meio de cultura

5. Flambar rapidamente a boca dos tubos ao abrir e ao fechá‐los

Manobras assépticas

6. A tampa NUNCA deve ser colocada sobre a bancada

7. Desembrulhar a pipeta dentro da zona de segurança