Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica

IX Semana de Biologia da UFPB

Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM

Biossegurança e Rotina LaboratorialBiossegurança e Rotina Laboratorial

Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica

Técnicas MicrobiológicasTécnicas Microbiológicas

BiossegurançaBiossegurança

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BiossegurançaBiossegurança

Conjunto de procedimentos, ações, técnicas, metodologias, equipamentos e dispositivos capazes de eliminar ou minimizar riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, desenvolvimento, tecnológico, ensino e prestação de serviços, que podem comprometer a saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.

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HistóricoHistórico

Conclusão:“A manipulação de culturas, espécies ou inalação de poeira contendo a bactéria Brucella é eminentemente perigosa para os trabalhadores de um laboratório.”

1941 – Meyer e Eddie – 74 casos de brucelose associados a laboratórios

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222 infecções, sendo 21 fatais – 12% por acidentes relatados

1949 – Sulkin e Pike – Pesquisa sobre infecções associadas a laboratórios

HistóricoHistórico

1342 casos de infecções, sendo 72% das infecções por brucelose, tuberculose, tifo e infecção estreptocócica

1951 - Sulkin e Pike – Nova pesquisa

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HistóricoHistórico

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HistóricoHistórico

1974 – Classificação de Risco dos Agentes Etiológicos

1980 – Precauções universais na manipulação de fluídos corpóreos

1984 – Primeiro Workshop Brasileiro de Biossegurança - Fiocruz

1995 – Lei Brasileira de Biossegurança – Lei 897/95

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1999 – Fundação da Associação Nacional de Biossegurança (ANBio)

1999 – Primeiro Congresso Brasileiro de Biossegurança

2000 – Biossegurança como discíplina científica universitária

2001 – Indução de ações em biossegurança pelo CNPq

HistóricoHistórico

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Tipos de RiscosTipos de Riscos

Físicos

Químicos

Biológicos

Acidentes e Ergonômicos

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Tipos de RiscosTipos de Riscos

Físicos

Químicos

Biológicos

Acidentes e Ergonômicos

-Provocados por algum tipo de energia;

- A caracterização depende do equipamento;

- Principais:* Equipamentos que geram calor ou chamas;

* Equipamentos de baixa temperatura;

* Material radioativo

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Tipos de RiscosTipos de Riscos

-Conhecimento das substâncias químicas;

- Cuidados adequados para o manuseio.

Físicos

Químicos

Biológicos

Acidentes e Ergonômicos

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Tipos de RiscosTipos de Riscos

- Decorrentes da exposição à produtos de animais, vegetais e microrganismos;

- Agentes microbiológicos:* Grau de patogenicidade* Poder de invasão* Resistência a esterilização* Virulência* Capacidade mutagênica

- Vias de contaminação.

Físicos

Químicos

Biológicos

Acidentes e Ergonômicos

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Tipos de RiscosTipos de Riscos

- Fatores que gerem situações de risco para a integridade física e moral;

- Fatores que possam interferir nas características psicofisiológicas.

Físicos

Químicos

Biológicos

Acidentes e Ergonômicos

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Classificação dos MicroorganismosClassificação dos Microorganismos

Classe 2:

Risco individual moderado e baixo risco para a comunidade.

Nível de Segurança 2

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Uso de BarreirasUso de Barreiras

Equipamentos de Proteção Individual (EPI):

Proteção contra o contato com agentes infecciosos, tóxicos ou corrosivos, calor excessivo, fogo dentre outros.

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Uso de BarreirasUso de Barreiras

Equipamentos de Proteção Coletiva:

Proteção dos pesquisadores, do ambiente e da pesquisa desenvolvida.

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BiossegurançaBiossegurança

Manuseio de produtos biológicos envolve:

Limpeza

Desinfecção

Esterilização

Descontaminação

Anti-sepsia

Assepsia

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EsterilizaçãoEsterilização

Calor

Radiação

Filtração

Processos Físicos:

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EsterilizaçãoEsterilização

Calor

Radiação

Filtração

- Calor úmido (vapor sob pressão) – Autoclave, maior poder de penetração e redução do número de microrganismos.

- Calor seco - Incineração, flambagem ar quente (estufa)

Processos Físicos:

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EsterilizaçãoEsterilizaçãoAUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a entrada de vapor sob pressão.

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ESTUFA - Calor secoAção: desnaturação das proteínas microbiana

EsterilizaçãoEsterilização

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EsterilizaçãoEsterilização

Calor

Radiação

Filtração

- Flambagem

Esterilização de alças e agulhas.

Processos Físicos:

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EsterilizaçãoEsterilização

Calor

Radiação

Filtração

- Radiação eletromagnética Exemplos:• microondas• radiação ultravioleta• raios X• raios γ• elétrons

Processos Físicos:

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Radiação ultravioleta – Capela de Fluxo Laminar

EsterilizaçãoEsterilização

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EsterilizaçãoEsterilização

Calor

Radiação

Filtração

- Remoção dos microrganismos de líquidos e gases sensíveis ao calor:

* Glicose

* Antibióticos

* Reagentes químicos

Processos Físicos:

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EsterilizaçãoEsterilização

Tipos de filtros:

A) Filtro de profundidadeB) Membrana filtranteC) Filtro de trilhas de nuleação

A) B) C)

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EsterilizaçãoEsterilizaçãoFiltração:

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EsterilizaçãoEsterilizaçãoFiltro de trilhas de nucleação - microscopia eletrônica de varredura

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EsterilizaçãoEsterilizaçãoProdutos Químicos – Desinfetantes e Esterilizantes

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Atividades no laboratório:

Planejamento das tarefas

Condições adequadas

Material necessário

Maior segurança

Menor desperdício

BiossegurançaBiossegurança

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Técnicas MicrobiológicasTécnicas Microbiológicas

Rotina LaboratorialRotina Laboratorial

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Cultivo e ManutençãoCultivo e Manutenção

Meios de Cultura:

Mistura de nutrientes requeridos para a sobrevivência e crescimento dos microorganismos em um sistema artificial.

Podem ser em caldo (líquido) ou ágar (sólido).

Meios líquidos - úteis para a obtenção de grande biomassa de microrganismos

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Cultivo e ManutençãoCultivo e Manutenção

Meios quimicamente definidos:(Meios com finalidades especiais)

Meios seletivos

Meios diferenciais

Meios de enriquecimento

Meios para anaeróbios

Meios para o cultivo de bactérias (Geral-BHI)

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Métodos de CultivoMétodos de Cultivo

Inoculação:

• Técnica de esgotamento por estrias

• Técnica da semeadura em superfície

• Inundação

• Diluição por extinção(Obtenção de cultura pura, originada à partir de uma

única célula (UFC) – A suspensão original da amostra é diluída seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluição))

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Medida do CrescimentoMedida do Crescimento

Método Quantitativo:• Avaliação do número de células - UFC/mL – Unidades Formadoras de Colônias por mL

ex.: Contagem celular microscópica ou eletrônica, contagem em placa ou através de membrana filtrante..

Método Qualitativo: Avaliação do peso celular ou estimativa de unidades de absorbância da massa de células

em caldo ou suspensões (turbidez)..

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Identificação dos MicroorganismosIdentificação dos Microorganismos

Características Culturais

Morfologia Colonial

Características Morfológicas

Coloração simples

Coloração diferencial

Coloração de Gram

Microscopia Óptica

Características Metabólicas

Características Fisiológicas

Características Antigênicas

Características patogênicas

Características genéticas

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EstocagemEstocagem

Conservação de Culturas Puras:

• Conservação por um curto período (dias a meses):

Armazenagem à temperatura de refrigeradores (4°C a 10°C) - Repiques freqüentes

• Conservação por longos períodos:Nitrogênio líquido a -196°CFreezers a -70°C/ -120°CLiofilização – congelamento a seco - viabilidade das

culturas por muitos anos - coleção de microrganismos como referência.

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Material: Material: Tubos Tubos de Cultura e Placas de Petri de Cultura e Placas de Petri

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Material Material Instrumentos Instrumentos para Transferência de Culturas para Transferência de Culturas

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Obrigada!!!!!Obrigada!!!!!