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UFMS/CCBS - Departamento de MorfofisiologiaAULA PRÁTICA

Enzima Invertase/ e ação de inibidoresProfª Drª Fabiana Fonseca Zanoelo

Fundamentação TeóricaAs reações químicas conduzidas pelos organismos vivos são, na sua grande maioria, catalisadas

enzimaticamente, tornando a velocidade das mesmas compatíveis com as exigências metabólicas.

Assim a levedura (Saccharomyces cerevisiae), por intermédio da "invertase" hidrolisa a

sacarose resultando numa mistura equimolecular de glicose e frutose, açúcares esses que sãoabsorvidos pela célula. A membrana plasmática é impermeável à sacarose, e a levedura acaba

excretando a invertase (sendo, pois, uma exoenzima) para a hidrólise ocorrer fora da célula de levedura.

Ensaio enzimáticoEm 14 tubos de ensaio (para a primeira reação e 14 para a segunda), enumerados de 0 a 5 (2x), pipetar os

volumes (em mL) das soluções conforme indica o quadro que se segue:

SEM INIBIDOR TUBO

(NO)SACAROSE30mM (mL)

ÁGUA INVERTASEDILUÍDA (mL)

0 0,0 2,0 0,51 0,4 1,6 0,5

2 0,8 1,2 0,53 1,2 0,8 0,54 1,6 0,4 0,55 2,0 0,0 0,5

COM INIBIDOR TUBO

(NO)SACAROSE30mM (mL)

 

ÁGUA(mL)

INIBIDOR (mL)

INVERTASEDILUÍDA (mL)

0 0,0 2,0 0,05 0,51 0,4 1,6 0,05 0,52 0,8 1,2 0,05 0,5

3 1,2 0,8 0,05 0,54 1,6 0,4 0,05 0,55 2,0 0,0 0,05 0,5

• Incubar todos os tubos a 37oC, por 15 minutos.

• Retirar 0,2mL e adicionar no tubo com 0,2mL de DNS.

• Ferver por 5 minutos.

• Adicionar 2mL de água destilada.

• Agitar e fazer leitura em 540 nm.

Sacarose

Invertase

Glicose Frutose

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