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I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Tpicos em Validao de M todos
Dr Oscar Bahia Filho
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1. Reconhece Padres,
2. Observa e mantm
sob controle,
3. Melhora
Sistema de Gestono Lab
Gestor
Barreira 1
Confiabilidade Instrumental
Barreira 2Gargalos da Anlise
Barreira 3
Significncia do resultado
Barreira 4
Cumprimento dos requisitos legais
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Mtodo AnalticoMtodo Analtico
Anlise de RotinaAnlise de Rotina
Como os de fora pensamque
Sistema AnalticoSistema AnalticoComo realmente
Rplica Experimental
Ens aio Local
Es tabilidade
Ajusta /
Verifica
Qualificao Instrumental
Avaliao
Matriz
Analitos
padro
Matriz
Analitos
Adequado?s
n Adequado?
sn
Otimiza Mtodo
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A validao do mtodo feita para garantir que a metodologiaanaltica exata, reprodutvel e flexvel sobre uma faixa especficaque uma substncia ser analizada.
uma avaliao que garante a conformidade com as exignciaslegais ou fim proposto (interesse de terceiros) do mtodo analtico
O processo que prove evidncia documentada de que realiza aquilopara o qual est indicado para fazer.
Obstculo: Linguagem Metrolgica x Linguagem Cientfica
Por que validar?
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Definies
ICH*
O objetivo da validao de um mtodo analtico demonstrar que adequado para o seu propsito.
*Internacional Conference on Harmonization of Technical Requiriments for Registration of Pharmaceuticals forHuman Use
USP**
Validao de um mtodo analtico o processo que fornece umaevidnciadocumentada, atravs de estudosde laboratrio, de que realizaaquilo para o qual indicadopara fazer.
A performance expressa em termos de caractersticas analticas.
**United States Pharmacopeia 24
Para quem?Para quem?
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Reconhecimento formal da competncia de um laboratrio para realizarensaios especficos
Voluntrio e aberto a qualquer tipo de laboratrio
Reconhecimento formal da competncia de um laboratrio para realizarensaios especficos
Voluntrio e aberto a qualquer tipo de laboratrio
Credenciamento / Avaliao
Um laboratrio de ensaios, deve ter meios para assegurar a qualidadede seus relatrios/laudos.
Os principais meios so:
usar mtodos validados,
ter POPs de controle interno da qualidade,
participar de programas de ensaios de proficincia, e
estar credenciado por Norma nacional/internacional
Um laboratrio de ensaios, deve ter meios para assegurar a qualidadede seus relatrios/laudos.
Os principais meios so:
usar mtodos validados,
ter POPs de controle interno da qualidade,
participar de programas de ensaios de proficincia, e
estar credenciado por Norma nacional/internacional
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Avaliao para Credenciamento
Exame de um laboratrio de calibrao ou ensaio para
determinar a conformidade com os requisitos de credenciamentopreviamente estabelecidos
Requisitos do Credenciamento*
NBR ISO/IEC 17025
NIT DICLA 028 (BPL)
NIT DICLA 083 (Lab. Clnicos)
outros
* Todas as normas fazem aluso a: Validao de mtodos e Estimativa da Incerteza da medida
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EuraChem,
ICH
US FDA
US EPA
ICH
USP
FAO/AIEA
Codex,
MAPA (CLAVE),
MS (ANVISA)
MMA (IBAMA)....
IUPAC(Interdivisional Working Party onHarmonisation of Quality Assurance
Schemes for Analytical Laboratories)
Protocolos de Validao
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Processo de Validao
Validao
Software
Hardware
Mtodo Analtico
Critrios Conformidade
A qualificao instrumental (IQ) uma etapa anterior ao processo devalidao.Antes de validar um mtodo, deve-se certificar que todos os esforos deotimizao j tenham sido esgotados para as condies locais do ensaio.
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Especificidade/ seletividade (interferncia)
LOD LOQ
Faixa (Linearidade)
Exatido (recuperao)Preciso ( Repetibilidade, Preciso intermediria e
Reprodutibilidade)
Robustez (resistncia a variaes intencionais)
Aplicabilidade (nvel)
Elementos da validao
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1. Linearidade e Faixa
Plano de Validao
Elemento de validao
- prepare 5 nveis de solues padro- adicione 0, 50, 75, 100 e 150% TD- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- grfico adequado- RSD 10%
Critrios de aceitao
- modelo de Regresso- mdia, SD e RSD%- LOD e LOQ (instrumental)- Limite superior (LSC) e inferior da curva (LIC)
Clculos
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2. Exatido
Plano de Validao
Elemento de validao
- 80 % recuperao 120- RSD (mdio) 15%
Critrios de aceitao
- % recuperao- mdia, SD e RSD%- LOD e LOQ (mtodo)
Clculos
- prepare 12 rplicas de placebo- fortifique 0, 80, 100 e 120% TD- mede 3 x cada
Tarefa experimental
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3. Seletividade/Especificidade
Plano de Validao
Elemento de validao
- prepare 5 rplicas de placebo- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- Concentrao equivalente do placebo- mdia, SD e RSD% Clculos
- mdia 33% do LOQ (mtodo)- RSD 15%
Critrios de aceitao
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4. Preciso (repe e repro)
Plano de Validao
Elemento de validao
- prepare 5 rplicas de placebo (2 labs mnimo)- fortifique com 100% LOQ- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- RSD 15%- 80 % recuperao 120
Critrios de aceitao
- % de recuperao- mdia, SD e RSD%- teste de significncia de Fisher
Clculos
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5. LOQ e LOD
Plano de Validao
Elemento de validao
- prepare 5 rplicas de placebo- fortifique 100% TD- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- 80 % recuperao 120- RSD (mdio) 15%
Critrios de aceitao
- % recuperao- mdia, SD e RSD%- LOD e LOQ (mtodo)
Clculos
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6. Robustez*
Plano de Validao
Elemento de validao
Tarefa experimental- Nas 12 rplicas do placebo e 5 nveis desoluo padro, medidas 3 x cada.
*Planejamento experimental (arranjo fatorial) minimiza esforos e promoveinformaes quanto a robustez.
Variaes intencionais- nvel de treinamento do tcnico,- diferentes dias,- diferentes fornecedores,- diferentes laboratrios,- pequenas mudanas nas etapas do mtodo- etc.
Clculos- dependem das variaes
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Testes Estatsticos
Usados para facilitar a tomada de decises, evitando as subjetivas, osmais comuns so:
Student
Distribuio normal dos valores experimentais Linearidade e Faixa,Robustez
Cochran
Testa a homogeneidade (varincia) dos dados Linearidade e Faixa,
Exadido, Preciso
Dixon
Descobre dados outliers se o teste de Cochram for falso Linearidade eFaixa, Exadido, Preciso
Fischer
Compara a varncia de duas populaes Linearidade e Faixa, Exadido,Preciso, Robustez
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Faix
aLi
near
Inclinaoa
LoQ
LoD
S/N > 10 e RSD < 10%
S/N > 3
u.
deResposta
u. de Concentrao
Interseob
LOD e LOQ
YL= yB + k * SBYL a menor leitura diferente do branco, yB a mdia das medidas do branco, SB o desvio
padro do branco e k fator (2,3, etc..)
IUPAC
LD = 3 * S/ a * C LQ = 10 * S / a * C
Referncia
S o desvio padro da medida, a a inclinao da curva de calibrao e C a concentrao usada