Western Blot

Wendy Espinel MoralesDiego Fernando CadenaEnmanuel Ortiz Jiménez

*Western Blot

Es una técnica que se utiliza para identificar y localizar proteínas con base en su capacidad para unirse a anticuerpos específicos.

*Western blot y HIV

Básicamente se basa en la separación de las proteínas obtenidas de HIV-1 procedentes del lisado del cultivo del virus y purificadas por centrifugación.

Proteína ObtenidaSe coloca

Gel de poliacrilamida

En forma

Laminas delgadasSe efectúa

ELECTROFORESIS

Donde

Proteínas de menor peso

(p17, p24)

Proteínas de mayor peso

Migran mas lejos

Se mantienen cerca al lugar de

deposito

Después de transferirlo a una tira de nitrocelulosa y haber pasado por unos

procesos de incubación revelara una banda coloreada en las zonas correspondientes a los

Ac específicos.

Esta prueba generalmente se considera una prueba sensible para las proteínas del core y algo menos para las de envoltura.

Localización

Función VIH-2

Envoltura UniónFusión

gp 105

Core Proteína mayorProteína terminal

p24p17

Polimerasa Transcriptasa inversaIntegrasaRibonucleasaProteasa

p 68/53p 34

p 11

Proteínas del VIH2

Tipos de resultados

PositivoNegativo

Indeterminado

Positivo

Requiere al menos de dos bandas de envoltura, que se considera la

más específica.

Negativo

Se obtiene por la ausencia de bandas.

Indeterminado

Aparece algunas bandas pero no para considerarse como

positivo.

Causas de WB indeterminado

•Reactividad inespecífica

•Infección por HIV-2 u otros retrovirus

•Seroconversión al vih-1

•Hijo de madre seropositiva

•Divergencias genéticas de la cepa del HIV-1

Criterios de OMS para resultados

1.Presencia aislada de p17 se suele considerar como negativa y no requiere

seguimiento ulterior

Criterios de OMS para resultados

2. Presencia de una sola banda de la envoltura es un patrón infrecuente,

que puede observarse en la seroconversión y en la infección por

hiv-2

Criterios de OMS para resultados

3. Patrones gag/pol sin env pueden deberse también a una

seroconversión (resultado indeterminado)

Desventajas

A. Principal desventaja es el elevado precio, que lo hace inviable como prueba de confirmación en algunos países.

B. La variabilidad reaccional que existe en las bandas según el tipo de ensayo, el tipo de las muestras, las condiciones técnicas y la subjetividad de la interpretación de la intensidad de las bandas, que siempre depende del observador.

Otras aplicaciones

Detección de mutaciones puntuales: como delecciones, inversiones cromosómicas, entre otras. Diagnostico Prenatal: como enfermedades genéticas de una forma tempranaDiagnostico de infecciones por virus, bacterias y parásitos.Oncogenes

Bibliografía

•http://www.bio-rad.com/prd/en/US/CDG/PDP/527f0b18-e467-493a-b82a-874027ba390e/GS%20HIV-1%20Western%20Blot

• http://www.ctv.es/USERS/fpardo/vih4.htm