Hematologia

ROTEIRO DE PRTICA: CONFECO E COLORAO DE ESFREGAO SANGUNEO

Os elementos celulares do sangue espalhados em uma camada nica sobre a superfcie de uma lmina de microscopia, quando fixados e tratados com corantes especiais, adquirem morfologia e colorao adequadas para o estudo microscpico detalhado e preciso.

A confeco do esfregao sanguneo o fator importante para a realizao de um exame microscpico satisfatrio. O esfregao de boa qualidade deve ser fino, regular, contnuo, livre de falhas e paradas e de bordas livres, sem falhas na cauda, para haver boa distribuio das clulas, onde possvel fazer uma contagem do nmero de clulas sanguneas.

Objetivo: realizar as tcnicas de confeco e colorao do esfregao sanguneo para identificao dos

componentes celulares do sangue humano.

Material:

Lminas de vidro Amostra de sangue Papel absorvente Capilar ou pipeta Corantes

Procedimento:

Confeco do Esfregao:

1. Realizar a limpeza de duas lminas com gaze ou papel absorvente (retirar resqucios de gordura ou outros materiais); 2. Com um tubo tipo microcapilar ou uma pipeta colocar uma pequena gota de sangue a 2 cm, aproximadamente, da extremidade de uma das lminas de microscopia limpa e desengordurada; 3. Utilizar a outra lmina como guia (extensora); 4. Encostar a lmina guia na gota de sangue, utilizando um ngulo de 45; 5. Realizar um ligeiro movimento para trs, a fim de que o sangue se difunda uniformemente ao longo da

borda da lmina; 6. Em seguida com um movimento uniforme e contnuo para frente, fazer a lmina guia deslizar sobre a

outra, espalhando o sangue em uma camada delgada e uniforme (figura); 7. Esperar o esfregao secar completamente; 8. Realizar a colorao conforme tcnica abaixo

Colorao do Esfregao: Corantes hematolgicos so substncias qumicas que apresentam cor definida pela presena de grupos atmicos ou radicais cromforos na sua molcula. Permitem a colorao tanto de estruturas nucleares como citoplasmticas das clulas. Corantes cidos: so sais cujo cido corado e a base incolor - EOSINA Corantes bsicos: so sais cuja base corada e o cido incolor AZUL DE METILENO Corantes neutros: apresentam tanto cido como base corados

Diversos corantes podem ser usados em hematologia para evidenciar alteraes celulares importantes como o Wright, o Giemsa e o May-Grnwald Giemsa, mas em geral exigem um tempo e um custo maior para colorao. O PANTICO: um corante muitos utilizado em hematologia e baseia-se no princpio de colorao rpida estabelecida por Romanowsky onde a extenso hematolgica submetida ao de um FIXADOR e duas solues CORANTES, por meio de imerses de poucos segundos em cada. Fixador: Metanol Corante cido: Eosina que cora estruturas acidfilas como o citoplasma Corante bsico: Azul de metileno que cora estruturas basfilas como o ncleo 1. Preencher 3 recipientes com as solues n 1, 2 e 3 respectivamente; 2. Submergir as lminas na soluo n 1 mantendo-se um movimento contnuo de cima para baixo ou para

os lados durante 05 segundos (5 imerses de 1 segundo cada) e deixar escorrer bem; 3. Submergir as lminas na soluo n 2 mantendo-se um movimento contnuo de cima para baixo ou para

os lados durante 05 segundos (5 imerses de 1 segundo cada) e deixar escorrer; 4. Submergir as lminas na soluo n 3 mantendo-se um movimento contnuo de cima para baixo ou para

os lados durante 05 segundos (5 imerses de 1 segundo cada) e deixar escorrer bem; 5. Lavar com gua corrente; 6. Secar ao ar na posio vertical e com o final da extenso voltado para cima. gua Tamponada: Os corantes so sensveis s variaes de pH. Resultados satisfatrios so obtidos usando-se gua destilada tamponada com pH entre 6,6 a 7,0.