Finalidade .

Princpio .

Caractersticas do sistema .

Sistema enzimtico para determinao do cido ricopor reao de ponto final em amostras de sangue, urina e lquidos(amnitico e sinovial).

O cido rico determinado de acordo com as seguintesreaes:

Uricasecido rico + O + H O Alantona + CO + H O

Peroxidase2H O + DHBS + 4-aminoantipirina Antipirilquinonimina + 4 H O

O cido rico oxidado pela uricase a alantoina e perxido de hidrognio.O perxido de hidrognio, na presena da peroxidase, reage com o DHBSe a 4-aminoantipirina, formando o cromognio antipirilquinonimina. Aintensidade da cor vermelha formada diretamente proporcional concentrao do cido rico na amostra.

A dosagem de cido ricoutilizando a reao de Trinder caracteriza-se por ser um mtodo direto, defcil aplicao em sistemas automticos, que tem a especificidade dauricase. Muitos produtos utilizam o fenol como reagente de acoplamento.Entretanto, a baixa sensibilidade do fenol e a incompatibilidade de pHtimo entre a uricase de origem animal e a peroxidase criam sriosobstculos confiabilidade do mtodo.

A Labtest, com o sistema cido rico Liquiform, supera estasdificuldades substituindo o fenol pelo cido 3,5-dicloro-2-hidroxibenzenosulfonato (DHBS), que 4 vezes mais sensvel, permitindo uma relaoadequada entre amostras e reagentes, possibilitando obter umasensibilidade tima em relao a baixa concentrao do analito.

O reagente disponibilizado sob a forma lquida e distribudo em doisreagentes permitindo a sua utilizao em sistemas automticos,facilitando a eliminao da ao de interferentes.

A metodologia monorreagente pode ser aplicada utilizando um Reagentede Trabalho que estvel at a data de expirao dos reagentes que ocompe, quando mantido entre 2 e 8 C. O Reagente de Trabalho obtmdesempenho adequado mesmo em situaes de baixas demandas doteste. O sistema permite ainda preparar o volume de Reagente deTrabalho necessrio para uma medio da concentrao do cido rico.

A linearidade do mtodo de 20 mg/dL, o que diminui a necessidade deefetuar diluies em um nmero significativo de amostras.

O reagente foi desenvolvido com um conjunto especial de surfactantesque promovem a clarificao de turbidez ocasionada por lpides, o quereduz significativamente a interferncia causada por hiperlipmia nadeterminao da concentrao de cido rico.

[Somente para diagnstico in vitro]

2 2 2 2 2

2 2 2

O mtodo proposto facilmente aplicvel maioria dos analisadoresautomticos e semi-automticos capazes de medir uma reao de pontofinal entre 490 e 540 nm.

Enzimtico - Trinder

Contm tampo 155 mM, 4-aminoantipirina 0,1 mM, peroxidase1000 U/L, azida sdica 0,02% e surfactantes.

Contm tampo 155 mM, DHBS 2,5 mM, uricase 300 U/L, azidasdica 0,02% e surfactantes.

Contm cido rico 6,0 mg/dL. Armazenar bem vedado para evitarevaporao.

Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condiesindicadas, so estveis at a data de expirao impressa no rtulo.Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos contaminao denatureza qumica e microbiana que podem provocar reduo daestabilidade.

O conjunto de um frasco deReagente 1 e um frasco de Reagente 2 permite preparar o Reagente deTrabalho. Transferir o contedo de um frasco de Reagente 2 para umfrasco de Reagente 1 e homogeneizar suavemente. Identificar o frasco doReagente de Trabalho e anotar a data de expirao.

Estudos demonstram que o reagente de trabalho apresenta elevadaestabilidade. Aps o preparo, deve-se considerar que a data de expiraodo reagente de trabalho a mesma dos reagentes que o compe, desdeque mantido entre 2 e 8 C, em recipiente fechado e quando no houvercontaminao qumica ou microbiana. O desenvolvimento de coloraolevemente rsea no Reagente de Trabalho normal e no afeta o seudesempenho.

Opcionalmente, pode-se preparar menor volume do Reagente deTrabalho utilizando a proporo 4 volumes do Reagente 1 e 1 volume doReagente 2. Para preparar o volume de reagente necessrio para realizarum teste, misturar 0,8 mL do Reagente 1 e 0,2 mL do Reagente 2.Para preservar seu desempenho, o reagente deve permanecer fora dageladeira somente o tempo necessrio para se obter o volume a serutilizado. Evitar exposio luz solar direta.

Metodologia .

Reagentes

1. -

2. -

3. -

Preparo do reagente de trabalho .

Reagente 1 - Armazenar entre 2 - 8 C

Reagente 2 - Armazenar entre 2 - 8 C

Padro - Armazenar entre 2 - 8 C

CIDO RICO LiquiformInstrues de Uso

Ref.: 140MS 10009010071

01 Portugus - Ref.: 140

1

2

No utilizar o Reagente quando sua absorbncia medida contra gua em505 nm for igual ou maior que 0,300 ou quando se mostrar turvo e comsinais de contaminao.

Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados namanipulao do reagente. Os reagentes contem azida sdica que txica.No ingerir e, no caso de contato com os olhos deve-se lavarimediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxliomdico. A azida pode formar compostos altamente explosivos comtubulaes de chumbo ou cobre. Portanto, utilizar grande volume de guapara descartar os reagentes.

Cuidados com o tempo de reao, temperatura de trabalho e pipetagensso extremamente importantes para obteno de resultados corretos.

Os reagentes devem ser manuseados seguindo as boas prticas delaboratrio que incluem evitar ingesto e contato com pele, mucosas eolhos.

Banho-maria ou incubador mantido temperatura constante (37 C).

Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia entre490 e 540 nm.

Pipetas para medir amostras e reagentes.

Cronmetro.

O cido rico est aumentado nas 24horas que sucedem a ingesto de lcool.

As concentraes sricas de cido rico apresentam grandes variaesno dia-a-dia e sazonais num mesmo indivduo. O cido rico se eleva como stress, estados de jejum prolongado e aumento de peso corporal.

O cido ascrbico (vitamina C), por ser uma substncia redutora,consome o perxido de hidrognio, levando a obteno de resultadosfalsamente diminudos. O paciente deve ser orientado a no ingeriralimentos ou utilizar medicamentos contendo cido ascrbico at 48horas antes da realizao do exame .

Usar soro, plasma (EDTA, Heparina), urina e lquidos (amnitico esinovial). O analito estvel 3 dias entre 2 a 8 C e 6 meses a 10 Cnegativos.

Deve ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP) paracolheita, preparao e armazenamento da amostra. Enfatizamos que oserros devidos amostra podem ser muitos maiores que erros ocorridosdurante o procedimento analtico.

Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangueno transmitem infeces, todas elas devem ser consideradas comopotencialmente infectantes. Portanto, ao manuse-las, deve-se seguir asnormas estabelecidas para biossegurana.

Material necessrio no fornecido

1.2.

3.4.

Influncias pr-analticas .

12

Para descartar os reagentes e o material biolgico sugerimos aplicar asnormas locais, estaduais ou federais de proteo ambiental.

A utilizao de plasma fluoretado leva a obteno de resultadosfalsamente diminudos. Fluoreto atua como inibidor da uricase.Metodologia birreagente considerar os seguintes valores parainterferentes:Valores de bilirrubina at 5 mg/dL e hemoglobina at 200 mg/dL eamostras com triglicrides at 1200 mg/dL no produzem interfernciassignificativas.

Metodologia monorreagente considerar os seguintes valores parainterferentes:Valores de bilirrubina at 5 mg/dL e hemoglobina at 50 mg/dL eamostras com triglicrides at 1200 mg/dL no produzem interfernciassignificativas.

Para avaliar a concentrao aproximada da hemoglobina em umaamostra hemolisada pode-se proceder do seguinte modo: diluir 0,04 mLda amostra em 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85 %) e medir aabsorbncia entre 405 ou 415 nm acertando o zero com gua deionizadaou destilada.

Hemoglobina (mg/dL) Absorbncia x 601Hemoglobina (mg/dL) Absorbncia x 467

Amostras: Soro, plasma (EDTA, Heparina), urina e lquidos (amnitico esinovial).

Homogeneizar a urina, separar 10 mL, acertar o pH entre 7,0 e 9,0com NaOH 5% e aquecer 10 minutos a 56 C para dissolver os cristais deurato e cido rico. Diluir a urina 1:10 (0,1 mL de urina + 0,9 mL de guadestilada). Multiplicar o resultado obtido por 10.

Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:

Misturar e incubar em banho-maria a 37 C durante 5 minutos. O nvelgua no banho deve ser superior ao nvel do reagente nos tubos deensaio. Determinar as absorbncias do teste e padro em 505 nm ou filtroverde (490-540 nm) acertando o zero com o branco. A cor estvel por30 min.

O procedimento sugerido para a medio adequado para fotmetroscujo volume mnimo de soluo para leitura igual ou menor que 1,0 mL.Deve ser feita uma verificao da necessidade de ajuste do volume para ofotmetro utilizado. Os volumes de amostra e reagente podem sermodificados proporcionalmente sem prejuzo para o desempenho doteste e o procedimento de clculo se mantm inalterado.

405

415

Urina .

Procedimentos para realizao do ensaio

02

Interferncias

Portugus - Ref.: 140

Procedimento

AmostraBranco

1,0 mL 1,0 mL

Teste

0,02 mL0,02 mL

Padro

1,0 mLPadro (N 3)Reagente de Trabalho

Amostra

Precaues e cuidados especiais

O resultado da medio linear at 20 mg/dL. Quando for obtido um valorigual ou maior que 20 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L(0,85%), realizar nova medio e multiplicar o resultado pelo fator dediluio.

Diluir a amostra (com pH entre 7,0 e 9,0 e aquecida 10 minutos a56 C) 1:20 ou 1:40 com gua destilada ou deionizada e repetir amedio. Multiplicar o resultado obtido por 20 (vinte) ou 40 (quarenta),conforme diluio previamente utilizada.

O laboratrio deve manter umprograma de controle interno da qualidade que defina claramente osregulamentos aplicveis, objetivos, procedimentos, critrios paraespecificaes da qualidade e limites de tolerncia, aes corretivas eregistro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados paraavaliar a impreciso e desvios de calibrao.

Sugere-se que as especificaes para o coeficiente de variao e o errototal sejam baseadas nos componentes da variao biolgica (VB) .

Sugere-se utilizar as preparaes estabilizadas da linha Qualitrol H -Labtest para controle interno da qualidade em ensaios de qumica clnica.

Os intervalos devem ser usados apenascomo orientao. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seusprprios intervalos de referncia na populao atendida.

250 a 750 mg/24 horas

Unidades convencionais (mg/dL) x 59,5 = Unidades SI( mol/L)

Em duas amostras com concentraode cido rico iguais a 5,9 e 6,3 mg/dL foram adicionadas quantidadesdiferentes do analito obtendo-se recuperaes entre 99,6 e 100,2%.

O erro sistemtico total mdio obtido em uma amostra com valor de cidorico de 8,0 mg/dL foi igual 0,01 mg/dL ou 0,15%. O erro sistemtico totalobtido menor que o erro sistemtico total da especificao desejvelbaseada nos componentes da Variao Biolgica que 4,9%.

O mtodo proposto foicomparado com outro produto de metodologia similar, sendo obtidos osseguintes resultados:

Urina .

Urina .

Converso .

Controle interno da qualidade .

Intervalo de referncia .

Caractersticas de desempenho

Estudo de recuperao .

Estudo de comparao de mtodos .

9,10

13

Em caso de reduo de volumes fundamental que se observe o volumemnimo necessrio para leitura fotomtrica. Volumes da amostramenores que 0,01 mL so crticos em aplicaes manuais e devem serusados com cautela porque aumentam a impreciso da medio.

Absorbncia do Testecido rico (mg/dL) = x 6

Absorbncia do Padro

Absorbncia do Teste = 0,214Absorbncia do Padro = 0,163

0,214cido rico (mg/dL) = x 6 = 7,9

0,163

O resultado tambm pode ser obtido utilizando o fator de calibrao.

6Fator de Calibrao =

Absorbncia do Padro

6Fator de Calibrao = = 36,8

0,163

cido rico (mg/dL) = 0,214 x 36,8 = 7,9

mg/dL x volume urinrio (mL)Urina (mg/24 horas) =

100

O padro rastrevel ao Standard Reference Material (SRM) 913 doNational Institute of Standards and Technology (NIST).

Obter o fator de calibrao ao usar novo lote de reagentes ou quando ocontrole interno da qualidade indicar.

Branco de reagente: gua deionizada ou soluo de cloreto de sdio150 mmol/L (0,85%);Calibrador: usar calibrador protico. A concentrao de cido rico nocalibrador Calibra H - Labtest rastrevel ao SRM 913 do NIST.

Quando o controle interno da qualidade indicar;Quando utilizar o lote de um novo reagente;Quando utilizar novo frasco de reagente de um mesmo lote, caso um novacalibrao tenha sido realizada durante a utilizao do frasco anterior.

Clculos

Calibrao

Exemplo

Exemplo

Rastreabilidade do sistema

Calibraes manuais

Sistemas automticos

Intervalo de Calibraes

03 Portugus - Ref.: 140

Linearidade

Soro (mg/dL)

Crianas11

Adultos

HomemMulherHomemMulher

2,5 a 7,00,5 a 5,01,5 a 6,0

1,5 a 6,0

O erro sistemtico total verificado nos nveis de deciso 2,0; 8,0 e10,7 mg/dL foram iguais a 0,02; 0,17 e 0,26 ou 1,00; 2,17 e 2,43%,respectivamente.O erro sistemtico total obtido menor que o erro sistemtico total daespecificao desejvel baseada nos componentes da VariaoBiolgica que 4,9%.

Os estudos de preciso foram realizadosutilizando 40 amostras com concentraes mdias iguais a 2,1; 8,6 e11,7 mg/dL.

O erro total (erro aleatrio + erro sistemtico) estimado emconcentraes iguais a 2,0; 8,0 e 10,7 mg/dL so iguais a 3,45%, 4,04%e 4,32%, respectivamente.Os resultados indicam que o mtodo atende a especificao desejvelpara o erro total ( 12,4%) baseada nos componentes desejvel daVariao Biolgica.

Uma amostra no contendo cidorico foi utilizada para calcular o limite de deteco do ensaio tendo sidoencontrado um valor igual a 0,02 mg/dL, equivalente a mdia de 10ensaios mais trs desvios padro.

Duas amostras com valores iguala 24,9 e 23,2 mg/dL foram utilizadas para avaliar a resposta do sistemanas diluies da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando fatoresde diluio que variaram de 2 a 16 foram encontradas recuperaesmdias de 101%. O erro sistemtico total obtido menor que o errosistemtico total da especificao desejvel baseada nos componentesda Variao Biolgica que 4,9%.

Estudos de preciso .

Sensibilidade metodolgica .

Efeitos de diluio da matriz .

Significado clnico .

Observaes

1.

2.

Referncias

Numerosas doenas, condies fisiolgicas,alteraes bioqumicas, fatores sociais e ambientais esto associados aelevaes na concentrao do urato plasmtico. Entre as etiologias dahiperuricemia esto: insuficincia renal, cetoacidose, excesso de lactato,uso de diurticos e em todas as patologias em que a destruio denucleoprotenas est aumentada. O aumento de urato est positivamenterelacionado a hiperlipidemia, obesidade, arterosclerose, diabetesmellitus e hipertenso, embora os mecanismos destas alteraes aindano sejam bem compreendidas.

A gota, manifestao clnica da hiperuricemia, classificada comoprimria, secundria ou idioptica. A gota secundria uma complicaopouco comum quando relacionada frequncia de hiperuricemia. importante mencionar que a colchicina, utilizadas no caso da gotaaguda, no modifica valores de cido rico.

So pouco frequentes as causas da hipouricemia ocorrendo na sndromede Fanconi, doena de Wilson, acromegalia, anemia perniciosa edoenas malignas como linfoma de Hodgkin e carcinoma broncognico.

A limpeza e secagem adequadas do material utilizado so fatoresfundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultadoscorretos.

O laboratrio clnico tem como objetivo fornecer resultados exatos eprecisos. A utilizao de gua de qualidade inadequada uma causapotencial de erros analticos. A gua utilizada no laboratrio deve ter aqualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes,usar nas medies e para uso no enxgue final da vidraria, a gua deve terresistividade 1 megaohm.cm ou condutividade 1 microsiemens/cm econcentrao de silicatos

8. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981,27:493-501.

9. Ricos C, Desirable Specifications for Total Error, Imprecision, and Bias,derived from intra- and inter-individual biologic variation. Disponvelem: http://westgard.com/biodatabase1.htm (acesso em 10/08/2012).

10. Basques JC. Especificaes da Qualidade Analtica. LabtestDiagnstica 2005.

11. Ferraz MHC, Delgado RB. Valores de Referncia para ExamesLaboratoriais. In: Leo E, Corra EJ, Viana MB, Mota JAC (Ed).Pediatria Ambulatorial. 3a. edio Belo Horizonte: Coopmed, 1988:837-848.

12. Martinello F, Silva E.L. Interferncia do cido ascrbico nasdeterminaes de parmetros bioqumicos sricos: estudos in vivo ein vitro. Jorn. Bras. Pat. Med. Lab, 2003;39:323-334.

13. Labtest: Dados de arquivo.

O nmero de testes

Esto disponveis as aplicaes para

garante o desempenho deste produto dentro dasespecificaes at a data de expirao indicada nos rtulos, desde que oscuidados de utilizao e armazenamento indicados nos rtulos e nestasinstrues sejam seguidos corretamente.

em aplicaes automticas depende dos

parmetros de programao.

sistemas automticos.

[Termos e Condies de Garantia]

A Labtest Diagnstica

Informaes ao consumidor

05 Portugus - Ref.: 140

Edio: Abril, 2013Ref.: 280113

Copyright by Labtest Diagnstica S.A.Reproduo sob prvia autorizao

Apresentao

Produto Referncia Contedo

140-1/100

cido ricoLiquiform

140-1/250

1 x 20 mL1 x 5 mL

1 x 80 mL12

1 x 50 mL1 x 5 mL

1 x 200 mL12

CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br

Labtest Diagnstica S.A.

Servio de Apoio ao Cliente 0800 031 34 11 (Ligao Gratuita)e-mail: sac@labtest.com.br

06 Portugus - Ref.: 140

Smbolos utilizados com produtos diagnsticos in vitroSmbolos usados con productos diagnsticos in vitro

Symbols used with ivd devices

Representante Autorizado na Comunidade EuropeiaRepresentante autorizado en la Comunidad EuropeaAuthorized Representative in the European Community

Contedo suficiente para < n > testesCC

ontenido suficiente para < n > testsontains sufficient for < n > tests

Data limite de utilizao (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa)Estable hastaUse by

(aaaa-mm-dd o mm/aaaa)(yyyy-mm-dd or mm/yyyy)

Limite de temperatura (conservar a)Temperatura limiteTemperature limitation

(conservar a)(store at)

Material CalibradorMaterial CalibradorCalibrator Material

Material CalibradorMaterial CalibradorCalibrator Material

Consultar instrues de usoConsultar instrucciones de usoConsult instructions for use

Adies ou alteraes significativasCambios o suplementos significativosSignificant additions or changes

LiofilizadoLiofilizadoLyophilized

Produto diagnstico in vitroDispositivo de diagnstico in vitroIn vitro diagnostic device

Nmero do catlogoNmero de catlogoCatalog Number

Ref.: 201112

CorrosivoCorrosivoCorrosive

Controle negativoControl negativoNegative control

Controle positivoControl positivoPositive control

ControleControlControl

ControleControlControl

Marca CEMarcado CECE Mark

TxicoTxicoPoison

ReagenteReactivoReagent

Nmero do loteDenominacin de loteBatch code

Risco biolgicoRiesgo biolgicoBiological risk

Fabricado porElaborado porManufactured by

Perodo aps aberturaPerodo post-aberturaPeriod after-opening