Alexandre Karam

7/30/2019 Alexandre Karam

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ALEXANDRE MELO KARAM

OZONIOTERAPIA NA REPARAO TECIDUAL DE FERIDAS

INDUZIDAS EM PELE DE RATOS

BARRETOS

2012

Curso de Mestrado em Cincias Odontolgicas


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OZONIOTERAPIA NA REPARAO TECIDUAL DE FERIDAS

INDUZIDAS EM PELE DE RATOS

BARRETOS

2012

Curso de Mestrado em Cincias Odontolgicas

Dissertao apresentada ao Curso de Mestradoem Cincias Odontolgicas do Centro

Universitrio da Fundao Educacional de

Barretos, como parte dos requisitos para obteno

do Ttulo de Mestre em Cincias Odontolgicas,

na rea de Implantodontia

Orientadora: Profa. Dra. Juliana Rico Pires

Co-Orientadores: Prof. Dr. Valdir Gouveia GarciaProfa. Dra. Elizngela Partata Zuza


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Karam, Alexandre Melo.Ozonioterapia na reparao tecidual de feridas induzidas em

pele de ratos / Alexandre Melo Karam. Barretos: [s.n.], 2012.

59 f.; 30 cm.

Dissertao (Mestrado) Centro Universitrio da FundaoEducacional de Barretos, Curso de Mestrado em CinciasOdontolgicas

Orientadora: Profa. Dra. Juliana Rico Pires

1. Ozonioterapia 2. Terapia bio-oxidativa 3. Oznio 4. Ratos5. Reparao tecidual 6. Pele de ratosI. Ttulo.


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DADOS CURRICULARES

ALEXANDRE MELO KARAM

Nascimento 15 de outubro de 1974, em Salvador/BA - Brasil

Filiao Alfredo Augusto KaramMaria Jos Melo Karam

1993/1999 Curso de Odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana -

BA.

2007/2009 Curso de especializao em Periodontia do Centro Baiano de Estudos

Odontolgicos - CEBEO BA.

2010/2012 Curso de Mestrado em Cincias Odontolgicas do Centro

Universitrio da Fundao Educacional de Barretos, rea de

concentrao - Implantodontia.


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DEDICATRIA

A Deus,

Sobre todas as coisas, sobre todos ns, dedico este trabalho. Que ele possa de alguma

forma, ajudar a odontologia e a medicina a desvendar um pouco dos mistrios que

guarda para a humanidade em sua infinita sabedoria e bondade.

Aos meus pais,

Maria Jos e Alfredo Karam que me deram o dom da vida e a oportunidade de estudo,

fazendo possvel minha realizao profissional com dignidade e honestidade.

A minha esposa,

Luciana Karam, amor da minha vida.

Com admirao, agradeo por sua compreenso, carinho, presena e incondicional

apoio ao longo do perodo da elaborao deste trabalho, sendo fundamental para sua

concluso.

Ao meu filho,

Arthur Karam pelos dias de renncia e compreenso, quando das minhas ausncias nas

viagens a Barretos, das horas dedicadas pesquisa em dentrimento das nossas

brincadeiras e lutas pueris, sendo sempre a alegria e a razo do meu viver.

Ao meus sogros,

Vera e Luciano, que muito nos apoiaram e continuam nos apoiando no nosso regresso de

Portugal.

"A todos Aqueles que atravancam o meu caminho... Eles passaro. Eu passarinho!"

Mrio Quintana (Adaptado)


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AGRADECIMENTOS ESPECIAIS

"Se de cada minuto, os sessenta segundos, tu puderes tornar com o teu suor

fecundos... A Terra ento ser tua, e os bens que se no somem, e o que melhor,

meu filho, ento sers Homem!".

Rudyard Kipling

minha orientadora,

Prof. Dr Juliana Rico Pires, que com sua brilhante capacidade profissional,

inteligncia e conhecimentos profundos transformou meu rude e tosco projeto numa obra

laboriasamente vicejante. Com sua infinita afabilidade sempre agradecia minha

colaborao, quando na verdade a gratido era toda minha.

Ao coordenador do Mestrado em Barretos,

Prof. Dr.Benedicto Eghbert Corra de Toledo, que com sua compreenso ateno e

apoio, tornou possvel a realizao de mais uma etapa acadmica. Muito Obrigado!

coordenadora do Mestrado em Salvador,

Prof. Dr Letcia Helena Theodoro, que com sua experincia nos orientou, com sua

pacincia e cordialidade soube habilidosamente nos conduzir no caminho do saber e nos

deu ferramentas valiosssimas para nossa atual conquista, ferramentas essas que

nortearo tantos outros passos que viro.

Ao Mestre querido e amigo,

Prof. Dr. Valdir Gouveia Garcia, pela dedicao e sabedoria, pelos incentivos

pesquisa, pelos conhecimentos profundos e experincia em tcnicas de laboratrio e pela

inestimvel contribuio no experimento desse trabalho que, sem o mesmo, ao final no

chegaramos.


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Mestre querida e amiga,Prof. Dr. Ana Emlia Faria Pontes,pela expressiva e marcante contribuio em nossa

formao, pela inestimvel contribuio nas anlises estatsticas desse trabalho.

Ao Mestre querido e amigo,

Prof. Dr. Celso Eduardo Sakakura, pelas exaustivas viagens a Salvador; por muitas

vezes pegar na mo nos momentos mais difceis das cirurgias nos ambulatrios.

Ao Mestre querido e mais novo amigo,

Prof. Dr. Cleverton Roberto de Andrade pela sua inestimvel contribuio para o

desenvolvimento deste trabalho, junto s anlises histopatlgicas, cujo conhecimento

muito enriqueceu nossos resultados.

secretria do Departamento de Coordenao de Ps-Graduao do UNIFEB

Sr Snia Augusto que com sua dedicao e pacincia nos acolheu em Barretos e de

tudo fez para que o transcorrer do curso fosse o mais proveitoso possvel.

Ao comandante do biotrio do UNIFEB,

Senhor Darcy, que com a benevolncia de um pai me acolheu em seu recinto e tratou

com a mxima ateno a prole do nosso estudo.


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AGRADECIMENTOS

Ao Reitor do Centro Universitrio da Fundao Educacional de Barretos Prof.

Dr. Reginaldo da Silva, Pr-Reitora de Graduao Profa. Dra. Sissi Kawai

Marcos e Pr-Reitora de Ps-Graduao e Pesquisa Profa. Dra. Fernanda

Scarmato de Rosa.

A todos os demais Professores do Programa de Ps-Graduao em Cincias

Odontolgicas: Elcio Marcantonio Jr., Elizangela Partata Zuza, Fernando

Salimon Ribeiro, Alex Tadeu Martins.

A todos os colegas da ps- graduao, pelo apoio que demos uns aos outros,

durante todo perodo que estivemos juntos, tornando essa jornada muito mais

agradvel. Sucesso e felicidades a todos!

A todos os Funcionrios da Clnica de Odontologia do CEBEO-BA, que por

estarem sempre presentes e disposio, proporcionaram na clnica um

aprendizado muito mais eficiente.

A todos,

Que de alguma maneira, contriburam para o resultado final deste trabalho.


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SUMRIO

RESUMO................................................................................................................ 8

ABSTRACT............................................................................................................ 9

1 INTRODUO ................................................................................................. 10

2 OBJETIVO......................................................................................................... 13

3 METODOLOGIA .............................................................................................. 14

4 RESULTADOS.................................................................................................. 23

5 DISCUSSO ..................................................................................................... 35

6 CONCLUSO ................................................................................................... 40

7 REFERNCIAS................................................................................................. 41

8 ANEXOS ........................................................................................................... 46


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RESUMO

Karam, A. M. Ozonioterapia na reparao tecidual de feridas induzidas em pele de

ratos. [Dissertao de Mestrado]. Barretos: Curso de Mestrado em Cincias

Odontolgicas do UNIFEB; 2012.

A literatura tem destacado a utilizao da oxignio-ozonioterapia como terapia

coadjuvante em situaes mdicas de necroses isqumicas, spticas e

avasculares. At o momento, em revista da literatura, no foi encontrado algum

trabalho que avaliasse os efeitos sistmicos da utilizao desta terapia emreparao tecidual. Dessa forma, o presente estudo indito teve por finalidade

avaliar os efeitos da terapia bio-oxidativa com gs oznio, na cicatrizao de

ferida de pele em ratos. Para tanto, 30 ratos Wistar machos foram submetidos

leso tecidual (1,0cm) na pele do dorso (baseline). Logo aps a induo da

ferida, os animais foram aleatoriamente divididos em dois grupos de 15 animais,

sendo o grupo I constitudo de animais que receberam simulao da aplicao

do gs oznio (controle) e o grupo II- constitudo de animais que receberam

tratamento com gs oznio (teste). Os animais foram eutanasiados aos 7 e 15

dias aps baseline, amostras da regio lesionada foram removidas, fixadas em

formol e submetidas analise macroscpica, histomorfolgica e histomtrica.

Os resultados deste ensaio randomizado mostraram que os grupos tratados com

oznio (grupo II) apresentaram inflamao mista aos 7 dias, transladando para

ausncia de inflamao no 15 dia, enquanto o grupo controle (grupo I) exibiu

inflamao aguda no 7 dia, transladando para inflamao crnica que aumentou

significativamente do 7 para o 15 dia. No 7. dia, o grupo II apresentou

contrao da ferida de forma estatisticamente maior, se comparado ao grupo I

(ANOVA- Bonferroni). O grupo II apresentou maior grau de neo-vascularizao

que o grupo I (Kruskal-Wallis). No 15 dia, os dois grupos (I e II) apresentaram

re-epitelizao completa, entretanto, o grupo II apresentou completa

regenerao muscular e alta proliferao de anexos cutneos. Concluiu-se que a

terapia bio-oxidativa com gs oznio apresentou efeito bio-estimulador,

aumentando a reparao e regenerao tecidual em pele de ratos.


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Palavras-chave: ozonioterapia; terapia bio-oxidativa; oznio; ratos; reparao

tecidual; pele de ratos.


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ABSTRACT

Karam, A. M. Ozone therapy in the healing of wounds induced in rat skin

[Dissertao de Mestrado]. Barretos: Curso de Mestrado em Cincias

Odontolgicas do UNIFEB; 2012.

Literature has emphasized oxygen-ozone therapy as adjuvant treatment in medical

situations of ischemic, septic and avascular necrosis. The literature review hasnt

found any study about the sistemic effects of this therapy in tecidual reparation

yet. The object of this inedited study was evaluate the effects of bio-oxidativetherapy with ozone gas in cutaneous wounds made in rat skin. Therefore, 30 male

Wistar rats were subjected to tissue injury (1.0 cm) in the dorsum skin (baseline).

Immediately after wound induction, animals were randomly divided into two

groups of 15, group I consisting of those which received sham application of

ozone gas (control) and the group II consisting of rats that were treated with ozone

gas. The animals were euthanized at 7 and 15 days after baseline, samples of the

injured area were removed, fixed in formalin and submitted to macroscopic,

histologic and histometric analysis.The results of this randomized trial showed

that the group treated with ozone (group II) showed mixed inflammation at 7

days, moving to absence of inflammation at day 15, while the control group

(group I) exhibited acute inflammation on day 7, moving to chronic inflammation

that significantly increased from 7th to 15th day. On the 7th day, group II had

statistically higher wound contraction when compared to group I (ANOVA-

Bonferroni). Group II had a higher neo-vascularization degree than group I

(Kruskal-Wallis). On day 15, the two groups (I and II) showed complete re-

epithelialization, however, group II showed complete muscle regeneration and

higher proliferation of skin appendages. The study concluded that bio-oxidation

treatment with ozone gas provided bio-stimulator effect, enhancing tissue repair

and regeneration in rat skin.

Key-words: ozonetherapy, bio-oxidative therapy, ozone, rats, tissue repair, rats

skin.


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PREFCIO

O presente estudo parte de um projeto inserido na linha de pesquisa

Teraputica da Doena Periodontal, a qual objetiva o desenvolvimento e/ou

avaliao de modalidades teraputicas empregadas no tratamento da doena

periodontal ou peri-implantar. Dessa forma, estudos preliminares, incluindo

estudo das tcnicas, dosagens e efeito reparador tecidual do gs oznio so

imprescindveis para possibilitar a aplicao desta terapia na odontologia,

particularmente na periodontia e implantodontia, em cujas temticas esto

inseridas no programa de mestrado do UNIFEB.


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1 INTRODUO

A Oxignio-ozonioterapia uma terapia bio-oxidativa que tem como

base a utilizao da mistura gasosa de oxignio e oznio medicinais (Bocci,

2006). Dentre os seus efeitos teraputicos, tem sido associado com melhora dometabolismo e da oxigenao tecidual perifrica (Bocci, 2006). Sua primeira

aplicao em medicina, que se tem notcia, foi a utilizao do oznio gasoso

para tratamento de gangrena ps-traumtica em soldados alemes, durante a

primeira grande guerra mundial (Bocci 2004). A aplicao do oznio foi

reconhecida como modalidade teraputica no tratamento de patologias oculares,

ortopdicas, dermatolgicas, pulmonares, renais, hematolgicas (Bocci, 2004;

Baysan, Lynch, 2005) e no tratamento de infeces virais (Emerson et al., 1982;

Wells et al., 1991), fngicas (Shargawi et al., 1999; Lpez et al., 2003) e

bacterianas agudas e crnicas (Velano et al., 2001; Estrela et al., 2006; Cardoso

et al., 2008).

Estudos (Guerra et al., 1997; Bocci, 2006) relatam algumas vias de

administrao do oznio, tais como auto-hemoterapia, insuflao retal, bolsa

hermtica de oznio (bagging) e aplicaes tpicas por meio de gua e do leo

ozonizados. A ozonioterapia, realizada por meio de insuflao retal de mistura

gasosa de oxignio-oznio, diferentemente do que acontece com a mucosa

respiratria, que possui uma fina camada de fluidos ricos em cidos graxos


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poliinsaturados, encontra na mucosa intestinal o glicoclix e uma espessa

cobertura de gua contendo mucoprotenas e outras secrees com alta

capacidade anti-oxidante. Alm desta mucosa, h uma grande variedade de

contedo fecal que pode minimizar a atividade oxidante do oznio (Bocci,

2006).

Existem duas vias de metabolizao do oznio, a primeira consiste na

reduo do oznio pelos sistemas anti-oxidantes do organismo (cido ascrbico,

catalase, glutationa peroxidase, vitaminas A e E) levando produo de espcies

reativas de oxignio (ROS), as quais desencadeiam vias metablicas no sangue

(Bocci, Aldinucci, 2006). Na segunda via, os compostos hidrofbicos presentes

no sangue (cido aracdnico, quilomcrons) reagem com o oznio, produzindo

produtos de oxidao lipdica (LOPS), os quais desencadearo reaes em

cascata, ativando fatores angiognicos, imunolgicos, sanguneos e neurolgicos

(Bocci, Aldinucci, 2006). ROS e LOPS levam o plasma a evento de pico de

estresse oxidativo, ocasionando dissociao da oxi-hemoglobina e aumentando a

distribuio de oxignio para os tecidos isqumicos (Bocci, 2006),

provavelmente pelo aumento da expresso do 2,3-DPG (2,3 difosfoglicetaro) ou

por efeito Bohr, alm de acelerar eventos de gliclise, com aumento dabiodisponibilidade de ATPs no organismo.

Algumas teorias sugerem que a oxidao do gs sobre as cadeias cido-

lipdicas da parede bacteriana leva morte dos microrganismos (Dahnhardt et

al., 2006). Aps sua difuso no interior da clula, o gs oznio oxida

aminocidos e cidos nuclicos (Velano et al., 2001), impedindo replicao


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celular e levando desnaturao e morte do microrganismo (Emerson et al.,

1981; Wells et al., 1991).

Estudos tm mostrado que a terapia bio-oxidativa com gs oznio

biocompatvel, atua no processo de metabolismo mediado por oxignio, no

processo de clcio, fsforo e metabolismo frreo (Bocci, 1999; Baysan et al,

2000; Vannucchi et al., 2005), alm de apresentar ao germicida, analgsica

(Agrillo et al., 2007) e reparativa (Huth et al., 2006; Agrillo et al., 2007).

Adicionalmente, estudos (Agrillo et al., 2006; Agrillo et al., 2007) tem

demonstrado a utilizao de ozonioterapia em associao com procedimentos

cirrgicos em pacientes que fazem uso de bifosfonatos, com intuito de prevenir

e/ ou evitar o surgimento de osteonecrose. Alm disso, a ozonioterapia tem sido

indicada para tratamento de osteorradionecrose (Stubinger et al., 2006) e

reparao de defeitos sseos (Agrillo et al., 2006).

Estudos tm demonstrado que o oznio veiculado atravs do azeite de

oliva possui propriedades reparadoras (Kim et al., 2009), com aumento de

expresso de mediadores inflamatrios, tais como fator de crescimendo derivado

de plaquetas (PDGF), fator transformador de crescimento beta (TGF-) e fator de

crescimento vascular (GVF). Outros estudos, realizados in vitro, atravs deexposies de culturas de clulas epiteliais demonstraram que exposies curtas e

repetidas ao estresse oxidativo com oznio melhoram a plasticidade celular

atravs da induo de vias anti-apoptticas como resposta adaptativa celular ao

estresse sofrido (Brink et al., 2008).


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Apesar de Oliveira (2007), em uma reviso sistemtica sobre a utilizao

teraputica do gs oznio em feridas concluir que no h na literatura estudos

controlados e randomizados de qualidade sobre o assunto, todos os estudos

analisados apontaram resultados favorveis utilizao do gs oznio em feridas.

Dessa forma, acredita-se que a terapia bio-oxidativa com gs oznio pode

favorecer e acelerar o processo de angiognese e de reparao tecidual.

Este trabalho inicial indito foi realizado com o objetivo principal de

avaliar os efeitos da terapia com oznio, por insuflao retal, portanto com o uso

do gs para efeitos sistmicos sobre o processo de reparao tecidual.


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2 OBJETIVO

O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da terapia bio-

oxidativa com gs oznio, na reparao tecidual de ferida induzida em pele de

ratos.


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3 METODOLOGIA

O presente estudo foi desenvolvido no laboratrio experimental do

Departamento de Mestrado em Cincias Odontolgicas rea de Periodontia e

Implantodontia do Centro Universitrio da Fundao Educacional de Barretos

UNIFEB, aps aprovao da Comisso de tica no Uso de Animal (CEUA) da

Faculdade de Odontologia de Araatuba UNESP (02048/2011) Anexo 1.

3.1 Animais

No presente trabalho foram utilizados 24 ratos Wistar machos, pesando

entre 250 e 275g. Os animais foram mantidos em gaiolas plsticas, separados de

acordo com o grupo experimental, contendo cinco ratos em cada caixa, em sala

com temperatura ambiente controlada entre 20-22C, e com umidade relativa entre

50-52%, com ciclos de luz-escuro de 12 horas e, alimentados com rao normal

de origem industrial (Purina Labina) e gua ad libitum.

3.2. Desenho experimental

Os ratos foram divididos aleatoriamente em dois grupos com 12

animais cada: I Simulao da ozonioterapia (Grupo Controle) e II Tratamento

com ozonioterapia (Grupo Teste). Cada grupo sofreu no dia zero (baseline) do

estudo, uma inciso circular de 1,0cm de dimetro no dorso do animal, por meio

de utilizao do punch metlico cortante. Os animais do grupo II iniciaram o


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processo de terapia bio-oxidativa com oznio, imediatamente aps a leso da pele.

Para o grupo I foram realizadas simulaes dos procedimentos necessrios

aplicao do oznio. Durante os demais perodos do experimento, nas semanas

subseqentes, foi mantida a terapia bio-oxidativa, sempre realizada 2 vezes por

semana. Seis animais de cada grupo foram sacrificados por meio de eutansia nos

perodos experimentais de 7 e 15 dias. Logo aps a eutansia, foi realizada anlise

macroscpica do tamanho e caractersticas clnicas da ferida. Posteriormente, a

pele dos animais foi removida, as quais foram fixadas em formol tamponado a

4%, para posterior anlise histolgica dos espcimes de cada animal.

3.3. Induo da ferida

Os animais tiveram a rao suspensa por quatro horas antes dos

procedimentos cirrgicos, porm permaneceram com acesso gua ad libitum. Os

procedimentos anestsicos foram realizados em todos os animais da mesma

forma, colocando-os em campnula de plstico fechada com algodo hidrfilo

umedecido com ter etlico, at atingir o nvel de anestesia, com nenhum

movimento da cabea, extremidades ou tronco, desaparecimento dos reflexos

palpebrais e ritmo respiratrio constante. Aps anestesiados, todos submeteram-seao mesmo procedimento operatrio que consistiu inicialmente na epilao por

trao manual dos plos do dorso com extenso de 6cm no comprimento e 4cm na

largura, caudalmente a uma linha imaginria que passasse na borda inferior das

orelhas. A seguir foi realizada inciso circular de 1cm de dimetro no centro da


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rea epilada, com umpunch metlico cortante, restringindo-se derme e epiderme

(Figura 1).

3.4. Ozonioterapia

A dose de oznio utilizada foi representada pela concentrao de O3

(expressada por mg/L) pelo volume(L) de gs (O2-O3), sendo considerada a

concentrao de 3%. Dessa forma, uma mistura gasosa O2-O3 na concentrao de

50g de oznio, foi obtida de gerador de oznio medicinal Philozon, que produz

oznio apartir de oxignio medicinal, com fluxo constante de 1L/min. A

concentrao do oznio foi medida com preciso por meio de um

espectofotmetro com 254nm.

Imediatamente aps obteno da mistura gasosa, que foi colhida por

intermdio de seringa plstica tipo Luer siliconizada, esta foi administrada por

insuflao retal, por meio de utilizao de catter de Nelaton n 8, o qual foi

inserido 6,0cm no reto do animal, seguindo a metodologia de Fernndez et al

(2008). O protocolo com Ozonioterapia foi constitudo de insuflao retal de

uma mistura gasosa de O2-O3 na concentrao de 50g/mL, totalizando o

volume de 4,0-5,0mL por sesso (Figura 2).


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Figura 1. Ferida de pele induzida (1cm ou 10mm)

Figura 2. Tcnica de insuflao retal de uma mistura gasosa de O2-O3


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3.5. Eutansia

Os perodos de eutansia dos animais foram de 7 e 15 dias aps o

baseline, perodos estes em que 6 animais de cada grupo foram eutanasiados por

meio de superdosagem anestsica (Tiopental 150 mg/Kg) (Cristalia, produtos

qumicos Farmacuticos LTDA, Itapira, So Paulo, Brasil).

3.6. Avaliao macroscpica

Aps a morte, os animais foram fixados prancha cirrgica, do mesmo

modo que no ato operatrio, e tiveram as feridas examinadas com auxlio de lupa

com 2,5 vezes de aumento para verificao de crostas, secrees, cicatrizes

hipertrficas e o tamanho da ferida residual no maior eixo, medidas com sonda

periodontal milimetrada (PCPN115BR, Hu-Friedy, Chicago, IL). Nesse tempo, os

achados foram anotados em ficha e foi feito o registro fotogrfico com cmera

digital com zoom de 1,3 de aproximao fixada em trip. A medida do maior

dimetro foi determinada usando uma sonda periodontal milimetrada. Aps este

procedimento, a rea da pesquisa foi retirada com margem de 1cm de pele em

torno da leso. Todos os espcimes foram fixados em soluo de paraformaldedo

a 4% por 48 horas e encaminhados para processamento laboratorial.

3.7. Avaliao histolgica

Todos os espcimes foram fixados em soluo de paraformaldedo a 4%

por 48 horas. Em seguida, os espcimes foram embebidos em parafina. A partir de

ento, o bloco obtido foi cortado com intuito de obter vrios espcimes com 4 m

em espessura. Os cortes histolgicos escolhidos foram da parte central e


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representativa da leso que foram corados com hematoxilina eosina (H.E.) e

Tricmico de Masson (T.M.); este ltimo usado para colorao especfica de

colgeno. Os espcimes foram destinados para anlise histolgica descritiva por

meio de microscopia de luz convencional e anlise histomtrica.

De cada ferida foram obtidas seis lminas que foram avaliadas quanto

presena de vasos sanguneos na rea de cicatrizao, bem como, re-epitelizao,

proliferao de colgeno, presena de fibroblastos, leuccitos mono e

polimorfonucleares.

A anlise histolgica foi realizada por dois examinados previamente

treinados e calibrados, cegos para os grupos de estudo, em dois momentos

distintos cada. Foi realizada anlise qualitativa e quantitativa segundo os escores

descritos abaixo:

Contrao da Ferida (CO): 0 ausente; 1 incio (1/3 do tamanhoinicial); 2 metade (2/3 do tamanho inicial); 3 completa (3/3 do

tamanho fechamento absoluto), considerando o fechamento da

ferida pelo tecido conjuntivo.

Re-epitelizao (RE): 0 ausente; 1 incio (1/3 do tamanho inicial);2 metade (2/3 do tamanho inicial); 3 completa (3/3 do tamanho

fechamento absoluto), considerando o fechamento da ferida pelo

tecido epitelial.

Inflamao Aguda (IA): 0 ausente; 1 leve; 2 moderada; 3 intensa, considerando o tipo celular predominante.


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Inflamao Crnica (IC): 0 ausente; 1 leve; 2 moderada; 3 intensa, considerando o tipo celular predominante.

Inflamao Mista (IM): 0 ausente; 1 leve; 2 moderada; 3 intensa, considerando o tipo celular predominante.

Edema (E): 0 ausente; 1 leve; 2 moderada; 3 intenso,considerando a presena de lquido eosinoflico entre as clulas.

Hemorragia (H): 0 ausente; 1 pouca; 2 moderada; 3 intensa,considerando a presena de extravasamento sanguneo no tecido

conjuntivo.

Vasos (V): 0 ausente; 1 pouco; 2 moderado; 3 intenso,considerando o nmero de vasos.

Membrana fibrino purulenta (MFP): 0 ausente; 1 fina; 2 mdia;3 larga, considerando a espessura da membrana.

Anexos Cutneos (AC): 0 ausente; 1 pouco; 2 moderado; 3 intenso, considerando o nmero de anexos, na regio superior e

inferior do tecido conjuntivo.

3.8. Avaliao Histomtrica

Esta anlise foi realizada com auxlio do programa Leica Application

Suite 3.8.0 (Leica Microsystems LTD, Heerburg, Alemanha). As medidas foram

realizadas na regio de tecido conjuntivo, considerando a rea de contrao da

ferida. Para determinao desta rea de interesse, inicialmente foi estabelecido um

traado linear estendendo-se do tecido epitelial ao tecido muscular, na direo das


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fibras musculares incisadas, por meio do punch. A partir desta delimitao foi

realizada a mensurao das reas de contrao do tecido conjuntivo em direo ao

centro da ferida. A mensurao das reas de contrao da ferida foi realizada em

triplicata, com intervalo de uma semana de cada avaliao e por dois

examinadores previamente treinados e cegos para o grupo de anlise (Figuras 3 e

4).

Para obteno das imagens panormicas das leses, foram tiradas 4 a 8

fotos da amostra com aumento de 4x, sendo que cada foto apresentava em sua

extremidade, reas coincidentes s imagens contguas. Utilizando um programa

analisador de imagens foi possvel unir as imagens atravs de costura digital,

por intermdio de sobreposio dos pixels coincidentes.

3.9. Anlise Estatstica

A anlise estatstica foi desenvolvida por meio de um programa

especfico (BioEstat 5.0, Sociedade Civil Mamirau / MCT CNPq, Belm,

Brasil), considerando a hiptese nula baseada na ausncia de diferena entre as

modalidades de tratamento ( = 5%). A unidade de anlise foi o animal. A anlise

conjunta dos efeitos do dia (7 e 15) e do grupo (controle e teste) de varivel

numrica (rea cirrgica) foi feita pelo teste de ANOVA, seguida pelo teste

Bonferroni. As variveis da avaliao histolgica dos dados categricos foram

analisadas pelo teste Kruskal-Wallis. O nvel de significncia, utilizado para se

rejeitar a hiptese de nulidade foi de 5% (p


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Figura 3. Delimitao da rea de contrao do tecido conjuntivo das bordas da

ferida, colorao T.M. (Foto panormica 4x)

Figura 4. Mensurao da rea de contrao do tecido conjuntivo, colorao T.M.

(20x)


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4 RESULTADOS

4.1. Anlise Macroscpica

Desconsiderando a presena de pelos, na anlise do tamanho da ferida

residual, pode-se observar que os animais do grupo controle (I) apresentavam aos

7 dias de reparao, um tamanho mdio de 9 (0,5) mm, enquanto o grupo teste

(II), o tamanho mdio foi de 7 (0,5) mm (Figuras 5 e 6). Analisando a ferida

residual em 15 dias de reparao tecidual, pode-se observar que o grupo controle

(I) apresentava tamanho mdio de 3 (0,5) mm e o grupo teste (II) apresentava

completa reparao tecidual (Figuras 7 e 8).

Nenhum dos grupos apresentou cicatrizes hipertrficas, nem secrees

purulentas, entretanto, no 3. dia, os animais do grupo controle apresentaram

ferida com aspecto cruento enquanto os animais do grupo teste, apresentaram

crostas cicatriciais maiores se comparadas aos do grupo controle.


29/61

27

Figura 5: Medio da ferida residual no dia 7 do grupo I

Figura 6: Medio da ferida residual no dia 7 do grupo II

Figura 7: Medio da ferida residual no dia 15 do grupo I

Figura 8: Medio da ferida residual no dia 15 do grupo II


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28

Figura 9: Corte histolgico da ferida aps 7 dias de reparao tecidual no grupo I

(controle), colorao T.M. (Foto Panormica 4x)

Figura 10: Corte histolgico da ferida aps 15 dias de reparao tecidual no grupo

I (controle), colorao T.M.


II (teste), colorao T.M.


II (teste), colorao T.M.


31/61

29

Nos animais do grupo I (controle) no 7 dia de reparao da ferida, o

tecido conjuntivo apresentava poucos vasos, pouca hemorragia e edema

intersticial moderado. O processo inflamatrio apresentava carter agudo intenso

na poro mais coronal da leso, com predomnio de neutrfilos, enquanto na

poro inferior, apresentava caracterstica de inflamao mista moderada com

predomnio de macrfagos e linfcitos. A membrana fibrino-purulenta

apresentava-se com espessura larga e contaminada (Figuras 13, 14, 15 e 16).

No 15. dia, o grupo I (controle) apresentava um processo inflamatrio

misto na poro inferior do tecido em grau leve, com predomnio de linfcitos.

(Figuras 17 e 18).

No grupo II (teste) no 7. dia de cicatrizao, o tecido conjuntivo

apresentava vasos em quantidade moderada, pouca hemorragia e edema

intersticial moderado. O processo inflamatrio apresentava carter agudo

moderado na poro mais coronal da leso, com predomnio de neutrfilos,

enquanto na poro inferior, apresentava caracterstica de inflamao mista

moderada com predomnio de macrfagos e linfcitos (Figuras 19, 20 e 21).

No 15. dia, o grupo II (teste) apresentava ausncia de processo

inflamatrio, regenerao muscular completa, intensa formao de folculospilosos e tecido conjuntivo denso (Figuras 22, 23 e 24).


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30

Figura 13: Grupo I no 7. dia, interface do corte, membrana fibrino-purulenta espessa,

colorao H.E. (4,0x)

Figura 14: Grupo I no 7. dia, infiltrado inflamatrio intenso, colorao H.E. (20x)

Figura 15: Grupo I no 7. dia, membrana fibrino-purulenta, intenso infiltrado de

neutrfilos, colorao H.E. (40x)

14

15


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31

Figura 16: Grupo I no 7. dia, processo inflamatrio misto moderado, contendo

macrfagos, linfcitos, vasos e edema, colorao H.E. (40x)

Figura 17: Grupo I no 15. dia, interface do corte, colorao H.E. (3,2x)

Figura 18: Grupo I no 15. dia, re-epitelizao completa, processo inflamatrio misto

leve, colorao H.E. (20x)


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32

Figura 19: Grupo II no 7. dia, interface do corte, membrana fibrino-purulenta fina,

colorao H.E. (3,2x)

Figura 20: Grupo II no 7. dia, processo inflamatrio misto moderado, contendo

predomnio de macrfagos e linfcitos, colorao H.E. (20x)

Figura 21: Grupo II no 7. dia, processo inflamatrio misto moderado e novos vasos,

colorao H.E. (40x)


35/61

33

Figura 22: Grupo II no 15. dia, interface do corte, re-epitelizao completa, colorao

H.E. (3,2x)

Figura 23: Grupo II no 15. dia, regenerao muscular completa, colorao H.E. (20x)

Figura 25: Grupo II no 15. dia, folculos pilosos formados, tecido conjuntivo denso,

colorao H.E. (40x)


36/61

34

Anlise Quantitativa

Conforme os dados da tabela 1, ambos os grupos (I e II) apresentaram

aumento significantemente dos escores de contrao da ferida (p


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35

Tabela 1: Frequncia de escores nos grupos experimentais (n=6).EscoreParmetro Perodo Grupo

0 1 2 3

Diferena

significanteValor p*

I - 6 - - a7 diasII - 1 5 - bI - - - 6 a

Contrao da ferida15 dias

II - - - 6 b


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36

4.3. Avaliao Histomtrica

Como no perodo de 15 dias, o fechamento da ferida apresentava-se

completo nos dois grupos (I e II), a mensurao das reas de contrao da ferida

foi realizada somente no perodo de 7 dias de reparo tecidual. Neste contexto,

pode-se observar que os animais do grupo II (teste) apresentavam mdia de rea

de contrao do tecido conjuntivo, estatisticamente maior que o grupo I (controle)

(Tabela 2).

Tabela 2: Mdia da rea de Contrao de Ferida no perodo de 7 dias

Grupo I

Mdia (DP)

Grupo II

Mdia (DP)Valor dep

rea (m2) 3514,89 (1303,13) 6558,93 (2413,3)* 0,029

* Diferena estatsticamente significante entre grupos, pelo teste ANOVA(Bonferroni), para p0,05.


39/61

37

5 DISCUSSO

A retirada de fragmento de pele induz a formao de soluo de

continuidade que preenchida por fibrina, cogulo e exsudado inflamatrio,

formando a crosta que recobre a ferida (Simes et al., 1985 Simes et al., 1986).

Segundo Nitz et al. (2006), o processo de reparao de leses de pele por

segunda inteno, em casos quando os bordos no esto perfeitamente coaptados e

que a leso se encontra extensa e infectada, com grande destruio tecidual,

inicia-se com a formao do cogulo, seguida de liberao de mediadores pr-

inflamatrios, desenvolvendo reao inflamatria aguda (Kim et al., 2009). No

incio da fase inflamatria do processo de cicatrizao h aumento da

permeabilidade vascular, extravasamento de plasma, hemcias, plaquetas e

leuccitos, destacando-se os neutrfilos, moncitos e macrfagos (Simes et al.,

1986).

No presente estudo apontamos diferenas interessantes em relao ao

curso do processo reparativo. Enquanto que no grupo I (controle), ao 7o. dia, foi

observado resposta inflamatria aguda intensa, tecido de coagulao necrtico e

reas infectadas, no grupo II (teste), o processo inflamatrio encontradocaracterizou-se por estgio mais avanado (misto), sem infeco. Nossos achados

esto em concordncia com os resultados de Rodrigues et al. (2004), os quais

verificaram que as feridas em dorso de ratos tratadas com leo de girassol

ozonizado, ao stimo dia, apresentavam tecido epitelial de granulao maduro e,

comparado com o controle negativo (leo de girassol sem oznio), que ainda


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38

apresentavam reas de coagulao necrticas e infiltrado inflamatrio agudo e

comparado tambm com o controle positivo (associao de clostebol e

neomicina), que ainda possua intensa neovascularizao e processo inflamatrio

ativo, com reas ulceradas. Adicionalmente est em concordncia com os achados

de Valacchi et al. (2011), que constataram diminuio do tempo de cicatrizao ao

utilizar leo de ssamo ozonizado sobre feridas induzidas em ratos ao stimo dia

de avaliao.

O aumento de fibras colgenas at o 7 dia promove diminuio do fluxo

sanguneo, diminuindo consequentemente, os constituintes do tecido de

granulao, fazendo com que este mude sua estrutura, passando a constituir um

tecido conjuntivo tpico. Adicionalmente, neste perodo, os miofibroblastos por

meio de capacidade contrctil, promovem a retrao da ferida, que pode chegar

de 50 a 70% do tamanho inicial (Nitz et al, 2006). Fato este que justifica os

achados macroscpicos e histomtricos do presente estudo. Entretanto, ressalta-

se que a contrao no grupo II (teste) mostrou-se mais evidente no perodo de 7

dias. Alguns estudos relatam que este fato seja devido a ozonioterapia estimular

a neovascularizao tecidual e consequentemente, induzir a um aumento da

oxigenao dos tecidos e estimular a diferenciao celular e funcional dosmiofibroblastos, auxiliando, assim, a reparao tecidual (Clavo et al., 2003;

Modarresi et al., 2010). Reforando, desta forma, a justificativa para a

ocorrncia de completa regenerao muscular no 15 dia, observada no grupo

tratado com ozonioterapia (teste).


41/61

39

Considerando estudos com o uso do oznio, acredita-se que sob

diferentes formas de aplicao, o oznio, tem possibilitado maior aumento da

quantidade de leuccitos polimorfonucleares, maior sntese de protenas

(Gracer, Bocci, 2005), maior liberao de fatores de crescimento para a

construo da matriz extracelular, tais como, fator transformador de crescimento

1 (TGF1) (Bocci et al., 1994) e fator de crescimento endotelial vascular

(VEGF) (Kwon et al., 2006), auxiliando no processo de reparao tecidual de

feridas drmicas (Traina, 2008). Adicionalmente, o estudo de Bocci (2004)

relata que o oznio atua na circulao sangunea, aumentando a concentrao de

clulas vermelhas e as taxas de hemoglobina, melhorando a reologia tecidual,

aumentando a circulao e oxigenao dos tecidos perifricos, aumentando

tambm a diapedese e fagocitose. Tais fatos podem explicar a acelerao do

processo de reparao tecidual observado no grupo II (teste), no perodo de 7

dias, caracterizado por maior contrao da ferida, infiltrado inflamatrio misto e

intensa neovascularizao.

Segundo Valacchi et al. (2011), os possveis mecanismos do leo

ozonizado podem ser sumarizados em: (i) oxidao dos agentes infecciosos; (ii)

citotoxicidade ocasionada pela atuao dos produtos derivados da peroxidaolipdica (LOPs); e (iii) liberao de fatores de crescimento e consequente

ativao de sistemas imunomoduladores devido o estresse oxidativo, tais como,

NFKappa-B.

A justificativa para acesso via insuflao retal indicada por ser uma

tcnica incua, sem qualquer efeito colateral ou dano ao animal ou ser humano,


42/61

40

comprovada pelos estudos de Bocci (1996); Lon et al. (1998); Batista et al.

(2001); Eliakim et al. (2001); Calunga et al. (2005) e Fernndez et al. (2008).

Segundo Bocci (1996) apesar da via retal para aplicao da mistrura de gs oznio

ser emprica, considerada uma tcnica fcil, prtica, atxica e apresentando

atuao no fgado via circulao porta. Lon et al. (1998), relataram qua a

administrao da mistura de gs composto por oznio por via retal induz a

tolerncia tecidual e do fgado, aos radicais livres liberados. Adicionalmente,

Fernndez et al. (2008), relataram que doses de gs oznio por meio da tcnica de

insuflao retal, promove um pr-condicionamento oxidativo rpido e transitrio,

capaz de desenvolver um efeito protetor no fgado, preservando a funo

mitocondrial das clulas, controlando a liberao de mediadores inflamatrios,

impedindo danos celulares e teciduais maiores.

Observou-se que o gs oznio, aplicado por insuflao retal em ratos,

dentro do protocolo utilizado neste estudo, demonstrou ter propriedades

imunomoduladoras, alterando a resposta inflamatria, bem como propriedades

reparadoras e regenerativas, pois foi constatada maior contrao da ferida ao

stimo dia de avaliao, sugerindo diminuio no tempo de reparo da leso de

pele e maior qualidade tecidual com tecido conjuntivo denso e maduro, ao 15dia, juntamente com completa regenerao do tecido muscular lesionado do grupo

teste.

Dessa forma, a realizao de um estudo bem delineado e de qualidade que

avaliasse a utilizao do oznio como nica interveno no tratamento de feridas,

sem a adio de vis, era imprescindvel para comprovar a hiptese de que a


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41

terapia bio-oxidativa com gs oznio oferece benefcios adicionais processos

reparativos em tecido. Sugerindo indicao da aplicao clnica desta terapia

como opo de tratamento a pacientes com problemas de imunidade, coagulao,

reparo e cicatrizao, ocasionando resultados satisfatrios em menor tempo e

menos gastos com medicaes e hospitalizaes.


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42

6 CONCLUSO

Dentro do atual desenho Experimental a terapia bio-oxidativa com gs

oznio mostrou possuir:

Efeito imuno-modulador, pois alterou os padres celulares da respostainflamatria;

Efeito reparador, pois acelerou o processo de reparao; Efeito angiognico, pois aumentou o nmero de novos vasos formados; Efeito proliferativo, pois aumentou a expresso de anexos cutneos; Efeito regenerador, pois regenerou o tecido muscular lesionado;

Dessa forma, concluiu-se que a terapia bio-oxidativa com gs oznio

apresentou efeito bio-estimulador, aumentando a reparao e regenerao tecidual

em pele de ratos.


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8 ANEXOS


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ANEXO 1. Comisso de tica no Uso de Animal (CEUA)


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ANEXO 2. Artigo de Reviso da Literatura aceito para publicao na

Revista Cincia e Cultura.

Publicao prevista para maio de 2012.


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Modulao do estresse oxidativo com ozonioterapia e suas implicaes emperiodontopatias

Modulation of oxidative stress with ozone-therapy and its implications inperiodontal disease

Ozonioterapia em periodontopatias

rea de Conhecimento: Cincias da Sade Odontologia

Alexandre Melo KARAM1; Teresinha Costa de SANTANA2; Elizangela PartataZUZA3; Juliana Rico PIRES3*.

1. Aluno do Curso de Ps-Graduao, nvel Mestrado, em Cincias Odontolgicasdo Centro Universitrio da Fundao Educacional de Barretos - UNIFEB,Barretos, SP2. Professora Doutora Assistente do curso de graduao em odontologia daUniversidade Estadual de Feira de Santana UEFS, Coordenadora do curso deespecializao em periodontia do Centro Baiano de estudos Odontolgicos-CEBEO, Salvador, BA.3. Professora Doutora Assistente do Programa de Ps-Graduao em CinciasOdontolgicas do Centro Universitrio da Fundao Educacional de Barretos -UNIFEB, Barretos, SP

* Correspondncia para:Prof. Dr. Juliana Rico PiresCentro Universitrio da Fundao Educacional de Barretos UNIFEB. ProgramaMestrado em Cincias Odontolgicas.Avenida Professor Roberto Frade Monte, 389. CEP: 14080-530. Aeroporto,Barretos, So Paulo, BrasilTelefone: +55 17 3321-6468e-mail: [email protected]


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RESUMO

A doena periodontal, por seu carter intrnseco, uma enfermidade que produzestresse oxidativo crnico. capaz de influenciar o status oxidativo do plasma esofrer interferncias do mesmo conforme o status oxidativo geral do organismo esua capacidade antioxidante. A ozonioterapia uma terapia bio-oxidativa, como aoxigenao hiperbrica, que utiliza o oznio medicinal como princpio ativo,capaz de promover aumento dos nveis de enzimas antioxidantes como asglutationas, superxido dismutase e catalase. Estudos comprovam o efeitopreventivo de danos celulares mediados por radicais livres de oxignio quando doadvento do precondicionamento oxidativo com ozonioterapia. Procurou-se nestetrabalho avaliar, atravs de uma reviso de literatura, os possveis benefcios daozonioterapia aos portadores de doena periodontal. Concluiu-se que h

plausibilidade nas conjecturas dos efeitos benficos da ozonioterapia emperiodontia e que mais estudos so necessrios.Palavras-chave: Oznio; Estresse oxidativo; Periodontia.

ABSTRACT

Periodontal disease, for its intrinsic character, is an enfermity that produceschronic oxidative stress. It is capable to influence the oxidative status of theplasma and undergo interferences from it, according to the general oxidativestatus of the organism and its antioxidant capacity. The ozone-therapy is a bio-oxidative therapy, such as hyperbaric oxigenation, which uses medicinal ozone asactive principle, capable of promoting the increase of the antioxidant enzimes'levels, such as glutathiones, dismutase superoxide and catalase. Studies prove thepreventive effect of cellular damage mediated by free oxygen radicals when thereis an oxidative pre-conditioning with ozone-therapy. In this work, we sought toevaluate the possible benefits of ozone-therapy to carriers of periodontal disease,through the review of the literature. The conclusion was that the conjecturesregarding the beneficial effects of ozone-therapy in periodontal treatment areplausible, however further studies are necessary.

Key-words: Ozone; Oxidative Stress; Periodontology.

INTRODUO

Estresse oxidativo definido como um desequilbrio na relao entre oxidantes eantioxidantes, em favor dos pr-oxidantes como o nion superxido, o radicalhidroxil, o perxido de hidrognio, em detrimento das enzimas antioxidantes(BARREIROS e DAVID, 2006). As doenas periodontais tm sido implicadas nodesenvolvimento de estresse oxidativo crnico. Vrios estudos (CANAKCI etal.,2007; SAWAMOTO et al.2005; AKALIN et al., 2007; PRADEEP et al., 2007;

MOTOHIRA et al., 2007; TAMAKI et al., 2009; HAIXIANG et al., 2009)


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apontam a presena de malonildialdedo e outros produtos de peroxidaolipdica, bem como produtos derivados de hidroxilao de bases de DNA em

bolsas periodontais e fluido crevicular como consequncia de dano celular porradicais livres e estresse oxidativo crnico.O precondicionamento oxidativo com oznio vem sendo estudado e os

seus efeitos benficos conseguem prevenir os danos celulares causados porradicais ativos de oxignio atravs da promoo de aumentos dos nveis deantioxidantes intracelulares como as glutationas, catalase (CAT), peroxidases,superxido dismutase (SOD) (HAIXIANG et al., 2009; LEN et al., 1998;FORMAN et al., 1998; AJAMIEH et al, 2004; BOCCI, 2004).

Diante destes fatos, o objetivo deste estudo avaliar em uma reviso deliteratura os possveis efeitos benficos do precondicionamento oxidativo comozonioterapia sobre o curso da doena periodontal.

REVISO DE LITERATURA

Estresse oxidativo do plasma e em periodontopatias

A doena periodontal uma enfermidade que gera estresse oxidativocrnico, podendo influenciar e ser influenciada pelo status oxidativo geral doplasma. O achado de 8-Hidroxi-2-deoxiguanosina (8-OHdG) nos fluidoscorporais, especialmente em periodontite, no fluido crevicular, resultado dedanos ao DNA, pelo estresse oxidativo que causa hidroxilao de bases de DNA(BARREIROS e DAVID, 2006; SAWAMOTO et al., 2005). Foi encontradaestreita relao entre 8-OHdG e agentes patgenos periodontais, ratificando oestresse oxidativo crnico existente em periodontopatias (SAWAMOTO etal.2005).

Os nveis de malonildialdedo (MDA) e, portanto, de produtos deperoxidao lipdica, esto aumentados localmente no ambiente da bolsaperiodontal em periodontites crnicas. O status oxidativo total, tanto sistmicoquanto local, tambm est aumentado. Seus achados sugerem que aumentos dosprodutos de peroxidao lipdica e do status oxidativo total do soro podem terum importante papel na patologia da periodontite e estar estreitamenterelacionados com o status clnico periodontal (AKALIN et al., 2007).

Estudos mostram estreita relao entre a presena de neopterina nofluido crevicular gengival e periodontopatias. Seu aumento est relacionado coma progresso da doena periodontal, havendo sua diminuio quando dotratamento periodontal convencional por raspagem e alisamento radicular.Relatam tambm estreita relao da neopterina com situao de estresseoxidativo, por ser um fator ativador de moncito/macrfago, relacionados com aproduo de espcies reativas de oxignio e nitrognio que, em sinergia,amplificam potenciais citotxicos diretamente contra periodontopatgenos e,indiretamente, favorecendo destruio periodontal (PRADEEP et al., 2007).

Antioxidantes locais e sistmicos, bem como a total capacidadeantioxidante do organismo so afetadas pela doena periodontal, ainda mais em


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adio condio de pr-eclmpsia. Estes achados poderiam limitar aozonioterapia em gestantes (CANAKCI et al.,2007).

FORMAN et al. (1998), num estudo controlado, avaliaram os efeitos dehipxia e reperfuso em crebros de ratos. Relataram que em isquemia ereperfuso h um aumento dos nveis de ROS nos hemisfrios cerebrais e que aproduo de peroxinitrito dependente da disponibilidade de xido ntrico(NO).

MOTOHIRA et al. (2007), relacionam hipxia e reoxigenao comtrauma oclusal, tabagismo e periodontite, concluindo que em periodontopatiash hipxia tecidual favorecendo produo de fator de crescimento endotelialvascular (VEGF), IL-6 e IL-1, reconhecidos como fatores de reabsoro sseaalveolar. Quando acontece reoxigenao logo aps eventos de hipoxia, levaria aum aumento dos nveis de nion superxido e outras espcies ativas de oxignio,

que por sua vez induzem a degradao do inibidor de NF-kB e sua ativao, queresultaria em concentraes desses mediadores a nveis mais elevados que emsituao de hipoxia, acarretando em leso por reperfuso. Portanto a doenaperiodontal associada a outras condicionais como tabagismo e trauma oclusal,levam o tecido periodontal a eventos constantes de hipxia e reoxigenao,situao que hipoteticamente aumentaria a morbidade da patologia periodontal,em vista da gerao de mediadores pr-inflamatrios e estimuladores dereabsoro ssea alveolar, tais como a IL1-, IL6 e VEGF. Verifica-se, pois, queh uma produo muito mais acentuada destes mediadores em situao dereoxigenao que nos momentos de hipxia. Isto ocorre, provavelmente, devidoao aumento de radicais livres de oxignio em excesso produzidos pelareperfuso e pelo despreparo tecidual quanto ao teor de enzimas anti-oxidantessuficientes para combater o estresse oxidativo gerado.

TAMAKI et al. (2008), alegam uma relao positiva entre condioperiodontal e o status oxidativo do plasma, podendo este afetar a taxa deprogresso da doena periodontal. TAMAKI et al. (2009) concluram que, empacientes com periodontite crnica, os nveis de metablitos reativos deoxignio esto elevados, em comparao com indivduos sem periodontite e queo tratamento periodontal convencional no-cirrgico consegue, alm demelhorar os parmetros clnicos periodontais, reduzir os nveis de espciesreativas de oxignio (ROS) no plasma.

HAIXIANG et al. (2009) relatam que h um aumento da capacidadetotal antioxidante da saliva em doentes com periodontopatias, podendosignificar uma resposta adaptativa do organismo ao extresse oxidativo geradopelas ROS produzidas nas periodontites, principalmente nas periodontitesagressivas.

Modulao do estresse oxidativo com ozonioterapia

LEN et al. (1998), num estudo controlado randomizado com ratos,constataram que a administrao prvia controlada de oznio via retal conseguepromover um precondicionamento oxidativo, prevenindo danos hepatocelulares

mediados por radicais livres. ALVES et al. (2004), em trabalho experimental


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com eqinos, relatam atenuao nas leses de reperfuso do jejuno em animaissubmetidos obstruo vascular quando tratados pela ozonioterapia.

AJAMIEH et al. (2004), num estudo experimental controlado com ratos,avaliaram o efeito do precondicionamento oxidativo com oznio sobre a geraode xido ntrico e o balano de oxireduo celular. Foram mensuradas comoparmetros as transaminases plasmticas (aspartato aminotransferase e alaninaaminotransferase), como indicadoras de danos hepatocelulares; nitritos enitratos, como indicadores da produo de xido ntrico; nveis de superxidodismutase, catalase e glutationa, como marcadores do sistema antioxidanteendgeno; malonildialdedo, 4-hidroxialcenos e hidroperxidos totais, comoindicadores de estresse oxidativo. Os resultados mostraram que oprecondicionamento oxidativo com oznio protege o fgado contra a injriapromovida pela isquemia e reperfuso atravs de mecanismos que promovem a

regulao das concentraes de xido ntrico endgeno e a manuteno doequilbrio de oxireduo celular.

BOCCI (2004), em experimento para avaliar a exposio de clulasmononucleares isoladas do sangue perifrico a concentraes de oznio namistura gasosa de oxignio-oznio de 1,0 a 80g/ml (variao de 0,02mM a1,68mM), relata que o status antioxidante total (TAS) do organismo humano,que varia normalmente de 1.3-1.8mM, diminui no mais que 20% nos primeiros5 minutos e retorna a valores originais dentro de 30 minutos. Salienta tambmque baixas concentraes de oznio estimulam a produo de IFN- e TNF-;concentraes superiores a 40g/ml, por outro lado, inibem a produo decitocinas.

MAJED et al. (2007), em estudo controlado sobre choque spticoquimicamente induzido atravs de inoculao de LPS de Eschecrichia coli emratos, analisou as alteraes enzimticas que ocorrem em mitocndrias elisossomos sobre lactato desidrogenase (LDH), succinato desidrogenase (SDH),adenosina trifosfatase (ATPase), fosfatase cida (AcPase) e -glucuronidase(BG) na intimidade tecidual do fgado, rins, pulmo e corao. Alguns animaisreceberam aplicao intraperitonial prvia da mistura gasosa de O2-O3. Osresultados demonstraram que a LPS suprimiu a atividade de todas as enzimas,excetuando LDH que aumentou quatro vezes sua atividade. A infusointraperitonial de O2-O3 causou pelo menos uma normalizao parcial das

reaes enzimticas.FERNNDEZ et al. (2008), avaliaram o efeito do precondicionamento

oxidativo com oznio sobre danos ao fgado de ratos, em processos de isquemia ereperfuso, atravs da utilizao de um agonista e antagonista do receptor deadenosina subtipo A1, CCPA (2-cloro N6 ciclopentiladenosina) e DPCPX (8-ciclopentil-1,3-dipropilxantina), respectivamente. Avaliaram a gerao de xidontrico, a atividade de adenisina deaminase e a preservao do balano deoxireduo celular. Estabeleceram anlise imunohistoqumica do NF-B, TNF-,protena de choque trmico 70 (HSP-70). Obtiveram como resultados que oCCPA mostrou um efeito similar ao precondicionamento oxidativo com oznio e

o DPCPX bloqueou o efeito protetor do mesmo. Constataram tambm que o


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precondicionamento oxidativo com oznio reduziu bastante a expresso do p65,diminuiu a produo de TNF- e promoveu uma reduo na imunoreatividade de

HSP-70.

DISCUSSO

Uma vez que, atravs de pr-condicionamento oxidativo do plasma comoznio, consegue-se minimizar os danos provocados por radicais livres deoxignio em injrias hepticas em eventos de hipxia e reperfuso (LEN et al.,1998; ALVES et al., 2004; FERNNDEZ et al., 2008 ) e h evidncias que ostatus oxidativo do plasma e o status oxidativo da doena periodontal somutuamente influenciados um pelo outro (PRADEEP et al., 2007; TAMAKI etal., 2008 ), levando-se tambm em considerao que o prprio organismo humano

j busca uma regulao positiva da capacidade antioxidante da saliva frente sinjrias das periodontopatias (HAIXIANG et al., 2009), bastante plausvelconjecturar que a modulao do status oxidativo do plasma e da sua capacidadeantioxidante, atravs do pr-condicionamento oxidativo com oznio, possaexercer algum efeito sobre a progresso da doena periodontal.

CONCLUSO

O pr-condicionamento oxidativo com oznio, pode exercer efeito sobre aprogresso da doena periodontal, uma vez que esta progresso se d, em parte, scustas da ao de mediadores inflamatrios gerados a partir da produo deradicais livres reativos de oxignio. Por meio de modulao do status oxidativo doplasma e da sua capacidade antioxidante atravs de estmulos repetitivos econtrolados, pr-oxidantes com a ozonioterapia, em que se alcanam nveismelhorados do sistema antioxidante enzimtico intracelular, bastante plausvelque esta vertente seja bastante til em situaes de periodontite, onde os fatoresimunolgicos do enfermo tm grande influncia sobre a progresso da doena.

A literatura atual ainda bastante carente de pesquisas que utilizem ensaisclnicos e laboratoriais controlados, necessitando que mais estudos sobre o temasejam desenvolvidos.

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Alexandre Karam

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