APLICAÇÃO DO LASER DE BAIXA INTENSIDADE EM FUNGO

Candida albicans PARA VERIFICAR SUA INFLUÊNCIA NA

PROLIFERAÇÃO CELULAR: IN VITRO

FARINAZZO, A. F. 1

; TOFFOLI, L.²; FRIES, L. M. V.³; CAPEL, L.M. M.4;

NOWOTNY, J. P.5

Resumo: O objetivo foi avaliar o efeito do LASER com dose de

2J/cm² e o comprimento de onda a 660nm na proliferação do fungo Candida

albicans. O trabalho foi realizado in vitro, no primeiro dia: foi preparado o

meio e esterilizado os materiais, segundo: ativado o fungo, terceiro: preparo

do grupo controle e irradiação do fungo, e no quarto: realizado a contagem

com o espectrofotômetro. Foi observado que com a irradiação houve a

proliferação celular. Palavras-chave: Candida albicans; fototerapia; LASER.

Abstract: The objective was to evaluate the effect of LASER dose of

2J/cm ² and wavelength at 660nm in the proliferation of the fungus Candida

albicans. The work was conducted in vitro, on the first day, the medium was

prepared and sterilized materials, on the second day: enabled the fungus,

third day: preparation of the control group and irradiation of the fungus, and

the fourth day conducted the count with the spectrophotometer. It was

observed that irradiation was with cell proliferation. Keyword: Candida

albicans, phototherapy, LASER.

INTRODUÇÃO

Os fungos são organismos eucariontes, haploides podendo ser

unicelulares ou multicelulares (FISHER; COOK, 2001).

Existem relações entre as células fúngicas e as células animais,

sendo assim se tornam difícil o tratamento das infecções causadas por

fungos, pois existe o risco de combater as células infectadas e também as

hospedeiras (FISHER; COOK, 2001, SCHAECHTER et al, 2002, HARVEY;

CHAMPE; FISHER, 2008).

A Candida albicans é reconhecida por ser oportunista, hoje ela é

vista como a responsável pelas mais graves doenças causadas por fungos

(FISHER; COOK, 2001).

Elas são encontradas em pequeno número na pele humana porem é

capaz de colonizar rapidamente uma pele lesada (FISHER; COOK, 2001).

Cremer foi o pioneiro da fototerapia em 1958, onde pouco se sabia

sobre o seu mecanismo de ação, seus efeitos colaterais e os equipamentos

eram precários (FACCHINI et al., 2000).

O tratamento é realizado através da luz a partir de lâmpadas

fluorescentes, LASERs e LEDs. (CALIFANO, 2006; CORAZZA, 2005).

O LASER possui características como emissão de luz coerente,

monocromática, colimada e polarizada com grande concentração de energia

que é adequado a produzir alterações físicas e biológicas. (CHAVANTES,

2009; GIRRO; GIRRO, 2002).

A interação do LASER com o sistema biológico depende da

dosimetria, do comprimento de onda, do tipo do tecido e do tempo de

irradiação. Sua aplicação pode resultar em uma inibição ou uma excitação

do tecido (AIMBIRE 2006; CASTRO 2005; MEYER et al, 2010).

Com o estudo in vitro é possível padronizar a amostra, deixando-a

homogênea e controlando a temperatura (CARNEVALLI, 2011).

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito terapêutico da fototerapia,

in vitro, utilizando LASER na indução da proliferação celular, tendo como

hipótese a ser provada, a eficácia desse meio terapêutico.

METODOLOGIA

1° Dia – Local de estudo e Meios de cultivo: o estudo foi conduzido

no Laboratório de Microbiologia do Centro Universitário de Maringá. O meio

de cultura utilizado para o cultivo de Candida albicans foi Caldo Sabouraud

com dextrose a 2% e Salina a 0,85% para diluição. Anteriormente ao uso, o

meio, estante com ponteira e dois Erlenmeyer lacrados com boneca de

algodão e papel craft foram devidamente acondicionados e esterilizados.

2° Dia – Ativação do fungo Candida albicans: Dentro do fluxo laminar

em temperatura ambiente foi retirado uma alçada do fungo Candida albicans

e transferida para um tubo de ensaio contendo Caldo Sabouraud para sua

ativação. A alça bacteriológica foi esterilizada antes e após o procedimento

em bico de Bunsen. Em seguida, o tubo contendo a levedura foi levado à

estufa para o crescimento por um período de 24 horas em temperatura de

36,5ºC.

3° dia - Irradiação das leveduras: Após 24 horas, o tubo de ensaio

contendo C. albicans foi retirado da estufa para que a mesma atingisse a

temperatura ambiente, sendo levado ao fluxo laminar em seguida. Dentro do

fluxo, foram transferidas 3 a 5 gotas da suspensão de Candida albicans com

a ajuda de pipeta automática para um tubo de ensaio contendo 6,0 mL de

solução salina 0,85%, onde foi utilizado o tubo número cinco da escala de

MacFarland, como padrão de comparação.

Em duas placas 96 wells, foram pipetados em cada poço 190µl e

Caldo Sabouraud e 10µl da suspensão de levedura preparada em salina.

Foram utilizados 24 poços de cada placa sendo selecionados da seguinte

forma: na horizontal somente as fileiras ímpares e na vertical as fileiras A, C,

E, e G, para que durante a aplicação do LASER o feixe de luz não

interferisse nos resultados dos poços próximos. Posteriormente, 200µl de

Caldo Sabouraud foram misturados a cada solução.

Foi selecionada uma placa aleatória para ser o grupo irradiado e

outra para ser o grupo controle, que não sofreu a ação do LASER. Os 24

poços da placa escolhida foram irradiados com o aparelho de LASER da

marca KLD, calibragem: Caneta 660nm - 20mw, dose: 2 J/cm²,

profundidade: superficial, frequência: contínuo. 200µl foram retirados dos 24

poços do grupo controle, sendo depositados em um Erlenmeyer fechado

com rolha de algodão e papel craft. O mesmo procedimento foi realizado

com o grupo irradiado e assim os dois recipientes foram levados à estufa em

36,5ºC por um período de 24 horas.

4° Dia – Contagem. Após 24 horas de incubação foi feita a contagem

indireta de crescimento com o auxílio de espectrofotômetro, onde foi

padronizada a frequência de 540 nm e descontado o valor do branco (meio

de cultura). Antes da leitura, as amostras foram diluídas, onde foi colocado

0,2 mL de Caldo Sabouraud em 2,8 mL de água destilada.

CONCLUSÃO

Foi utilizado o programa SPSS 17.0 para verificar os dados, foram

analisados as médias e o desvio padrão.

O trabalho foi dividido em duas amostras, cinco irradiados cinco

controle totalizando 10 grupos.

Tabela 1- resultados parciais com a média e o desvio padrão dos grupos.

Grupo Nº Média DP p*

CONTROLE 5 0,32 ±0,065 0,00*

IRRADIADO 5 0,41 ±0,054 0,00*

Pode-se concluir que com a irradiação do LASER com a dose de

2J/cm² e comprimento de onda 660nm houve um crescimento celular

significante no grupo irradiado em relação ao grupo controle.

REFERÊNCIAS AIMBIRE, F.; ALBERTINI, R.; PACHECO, M.T.T.; CASTRO-FARIA-NETO, H.C.; LEONARDO, P.S.L.M.; IVERSEN, V.V.; LOPES-MARTINS.; R.A.B.; BJORDAL J.M. Low-Level Laser Therapy Induces Dose-Dependent Reduction of TNF Levels in Acute Inflammation, In: Photomedicine and Laser Surgery,v. 24, n. 1, p. 33 – 37, 2006. CALIFANO, A. R. Analise eletromiográfica do músculo masseter e feixe anterior do músculo temporal após indução de fadiga muscular e aplicação de LED (640NM); SP 2006. 93f. Dissertação apresentada ao programa de Pós-Graduação em Bioengenharia do Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento da Universidade do Vale do Paraíba, São José dos Campos, 2006. CARNEVALLI, C. M. M. Efeito da radiação do diodo laser (λ=830nm) em cultura de fibroblastos (CHO-k1).São José dos Campos; SP 2001. 69f. Dissertação (Pós-Graduação em Engenharia Biomédica) – Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento da Universidade do Vale do Paraíba, 2001. CASTRO, J. L. F.; PINHEIRO, A. L. B.; WERNECK, C. E.; SOARES, C. P.; The Effect of Laser Therapy on the Proliferation of Oral KB Carcinoma Cells: An in Vitro Study,In: Photomedicine and Laser Surgery,v. 26, n. 6, p. 586 – 589, 2005. CHAVANTES, M., C. Laser em Biomedicina : Princípios e Prática. São Paulo: editora Atheneu, 2009, p. 17. CORAZZA. V. A. Fotobiomodulação comparativa entre o Laser e LED de baixa intensidade na angiogênese de feridas cutâneas de ratos; São Carlos; SP 2005. 89f. Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

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