As doenças auto-imunes
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8/14/2019 As doenas auto-imunes
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As doenas auto-imunes so um tipo de desordem imunolgica caracterizada pela
diminuio da tolerncia aos componentes do prprio organismo, de modo que ocorre uma
falha no mecanismo de distino entre antgenos constituintes do organismo e aqueles
externos, como vrus e bactrias. Atingindo cerca de 3-5% da populao mundial, asdoenas auto-imunes tm sua origem na complexa interao entre fatores ambientais e
fatores intrnsecos ao organismo, tais como predisposio gentica, alteraes hormonais emesmo uma reduo no controle imuno-regulatrio. O estudo da expresso gnica de doenas auto-imunes pode fornecer evidncias dos
elementos envolvidos tanto no surgimento quanto na progresso e definio do grau de
severidade dessas doenas. Alm disso, possvel aplicar o conhecimento adquirido naconduo mais efetiva do tratamento e na identificao de alvos especficos para o
desenvolvimento de potenciais terapias.
A tecnologia de cDNA microarrays representa uma poderosa ferramenta para tal
propsito, j que possibilita o estudo do perfil de expresso de milhares de genes ao mesmotempo. A utilizao de arranjos de cDNA em alta densidade permite a investigao do
padro de expresso gnica a partir da comparao dos nveis relativos de expresso.
A proposta deste trabalho utilizar a tecnologia de cDNA microarrays para comparar operfil de expresso gnica de linfcitos provenientes de indivduos agrupados segundo trs
doenas auto-imunes distintas, tomando como controle indivduos normais. Foram
utilizados 12 pacientes com lpus eritematoso sistmico (LES), 6 pacientes com artritereumatide (AR), 6 pacientes com diabetes mellitus do tipo 1 (DM1) e 11 controles.
Essa tarefa foi realizada atravs de duas abordagens complementares: a primeira
consistiu em determinar quais genes so diferencialmente expressos em cada uma das trsdoenas, ou seja, observar os genes que se apresentam de maneira exclusiva em cada
doena auto-imune; a segunda consistiu em analisar os genes comumente expressos nessas
trs desordens, elaborando, dessa forma, um padro de expresso gnica da auto-
imunidade. Preparaes de RNA total provenientes de linfcitos do sangue perifrico dos pacientes
com LES, AR e DM1 e dos indivduos normais foram marcadas com CyDye. O
delineamento experimental consistiu em marcar as amostras de pacientes e controles comum mesmo fluorocromo Cy5 (vermelho) e combin-los num mesmo microarray com
amostras de RNA (cDNA) de referncia marcados com Cy3 (fluorocromo verde).
Os microarrays em lminas de vidro foram preparados com uma seleo de 4.500seqncias de cDNA em duplicata. Todas as hibridaes com microarrays foram realizadas
num sistema automatizado, e as imagens das hibridaes foram geradas num scanner
confocal a laser. Atravs de ferramentas computacionais, as imagens das hibridaes foram
submetidas aos procedimentos de quantificao, normalizao, anlise estatstica eagrupamento hierrquico.
A quantificao das imagens correspondeu atribuio de valores numricos
quantitativos a partir da intensidade do sinal de cada ponto, levando em considerao osinal do background e a filtragem de valores negativos ou nulos. A normalizao de todos
os dados aconteceu por meio de normalizaes intra e entre slides, utilizando mtodos
como o Printtip Lowes e o re-escalonamento dos valores M pelo valor da MedianAbsolute Deviation. A anlise estatstica foi realizada atravs de vrios algoritmos
estatstico-matemticos com o objetivo de selecionar genes significantemente expressos.
Por fim, o agrupamento hierrquico foi obtido de maneira no-supervisionada a partir do
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mtodo dos vizinhos mais prximos, no qual a correlao de Pearson foi utilizada como
medida de similaridade.
O agrupamento hierrquico mostra claramente a separao dos indivduos de acordo
com a doena auto-imune, o que indica uma similaridade no perfil de expresso gnica dospacientes com a mesma doena auto-imune, ao mesmo tempo em que demonstra uma
diferena no padro de expresso desses genes em cada uma das doenas. Os pacientes com LES apresentaram 331 genes diferencialmente expressos quandocomparados aos respectivos controles (p < 0.05). Os pacientes com AR, por sua vez,
apresentaram 303 genes diferencialmente expressos com relao aos seus controles. A
comparao entre os pacientes com DM1 e os respectivos controles no demonstrou genessignificantemente expressos.
Dos genes diferencialmente expressos obtidos para cada uma das doenas auto-imunes,
pde-se observar que 68 genes so comuns entre LES e AR, o que tornou possvel elucidar
um padro de expresso da auto-imunidade. Alm disso, foi possvel determinar os genesexclusivos de cada doena auto-imune: so 263 genes exclusivos para LES e 235 genes
exclusivos para AR, os quais esto associados a processos celulares importantes para a
reao auto-imune, tais como inflamao, metabolismo e comunicao celulares.