Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia...

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Aspectos importantes de microbiologia : coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar

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Aspectos importantes de microbiologia

coleta preservaccedilatildeo de espeacutecimes e noccedilotildees de

biologia molecularMaria Clara Padoveze

Divisatildeo de Infecccedilatildeo Hospitalar

Microbiologia ndash Surtos de IH

bull Todo resultado liberado pelo laboratoacuterio de microbiologia eacute consequumlecircncia da qualidade da amostra recebida

bull O material coletado deve ser representativo do processo infeccioso investigado devendo ser eleito o melhor siacutetio da lesatildeo evitando contaminaccedilatildeo com as aacutereas adjacentes

bull A coleta e o transporte inadequados podem ocasionar falhas no isolamento do agente etioloacutegico e favorecer o desenvolvimento da flora contaminante induzindo a um resultado inapropriado

bull procedimentos adequados de coleta devem ser adotados para evitar o isolamento de um ldquofalsordquo agente etioloacutegico

bull Na amostra devem estar identificadosndash 1048707 Nome e registro do pacientendash 1048707 Leito ou ambulatoacuterio e especialidadendash 1048707 Material colhidondash 1048707 Data hora e quem realizou a coleta

Microbiologia ndash Surtos de IH

Consideraccedilotildees gerais da coleta

bull 1048707 Colher antes da antibioticoterapia sempre que possiacutevelbull 1048707 Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais

cliacutenicosbull 1048707 Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha

maior probabilidade de ser isoladobull 1048707 Considerar o estaacutegio da doenccedila na escolha do material

Patoacutegenos enteacutericos causadores de diarreacuteia estatildeo presentes em maior quantidade e satildeo mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarreacuteica do processo infeccioso intestinal

bull 1048707 Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa anaacutelise microbioloacutegica

bull O pedido do exame deve conter as informaccedilotildees necessaacuterias para o perfeito desenvolvimento da anaacutelise cliacutenica do espeacutecime

Consideraccedilotildees de seguranccedila

bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento

bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica

bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de

coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte

externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)

bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material

bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados

bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios

bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos

bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio

Consideraccedilotildees de seguranccedila

TRANSPORTE DAS AMOSTRAS

bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para

ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo

ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida

ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar

ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte

Amostras Inadequadas

bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)

bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a

temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem

tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida

colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes

microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees

natildeo apropriadas

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

PREPARO DE CULTURAS

bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso

Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado

incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento

e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Microbiologia ndash Surtos de IH

bull Todo resultado liberado pelo laboratoacuterio de microbiologia eacute consequumlecircncia da qualidade da amostra recebida

bull O material coletado deve ser representativo do processo infeccioso investigado devendo ser eleito o melhor siacutetio da lesatildeo evitando contaminaccedilatildeo com as aacutereas adjacentes

bull A coleta e o transporte inadequados podem ocasionar falhas no isolamento do agente etioloacutegico e favorecer o desenvolvimento da flora contaminante induzindo a um resultado inapropriado

bull procedimentos adequados de coleta devem ser adotados para evitar o isolamento de um ldquofalsordquo agente etioloacutegico

bull Na amostra devem estar identificadosndash 1048707 Nome e registro do pacientendash 1048707 Leito ou ambulatoacuterio e especialidadendash 1048707 Material colhidondash 1048707 Data hora e quem realizou a coleta

Microbiologia ndash Surtos de IH

Consideraccedilotildees gerais da coleta

bull 1048707 Colher antes da antibioticoterapia sempre que possiacutevelbull 1048707 Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais

cliacutenicosbull 1048707 Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha

maior probabilidade de ser isoladobull 1048707 Considerar o estaacutegio da doenccedila na escolha do material

Patoacutegenos enteacutericos causadores de diarreacuteia estatildeo presentes em maior quantidade e satildeo mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarreacuteica do processo infeccioso intestinal

bull 1048707 Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa anaacutelise microbioloacutegica

bull O pedido do exame deve conter as informaccedilotildees necessaacuterias para o perfeito desenvolvimento da anaacutelise cliacutenica do espeacutecime

Consideraccedilotildees de seguranccedila

bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento

bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica

bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de

coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte

externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)

bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material

bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados

bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios

bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos

bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio

Consideraccedilotildees de seguranccedila

TRANSPORTE DAS AMOSTRAS

bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para

ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo

ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida

ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar

ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte

Amostras Inadequadas

bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)

bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a

temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem

tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida

colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes

microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees

natildeo apropriadas

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

PREPARO DE CULTURAS

bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso

Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado

incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento

e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 3: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

bull procedimentos adequados de coleta devem ser adotados para evitar o isolamento de um ldquofalsordquo agente etioloacutegico

bull Na amostra devem estar identificadosndash 1048707 Nome e registro do pacientendash 1048707 Leito ou ambulatoacuterio e especialidadendash 1048707 Material colhidondash 1048707 Data hora e quem realizou a coleta

Microbiologia ndash Surtos de IH

Consideraccedilotildees gerais da coleta

bull 1048707 Colher antes da antibioticoterapia sempre que possiacutevelbull 1048707 Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais

cliacutenicosbull 1048707 Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha

maior probabilidade de ser isoladobull 1048707 Considerar o estaacutegio da doenccedila na escolha do material

Patoacutegenos enteacutericos causadores de diarreacuteia estatildeo presentes em maior quantidade e satildeo mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarreacuteica do processo infeccioso intestinal

bull 1048707 Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa anaacutelise microbioloacutegica

bull O pedido do exame deve conter as informaccedilotildees necessaacuterias para o perfeito desenvolvimento da anaacutelise cliacutenica do espeacutecime

Consideraccedilotildees de seguranccedila

bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento

bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica

bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de

coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte

externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)

bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material

bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados

bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios

bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos

bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio

Consideraccedilotildees de seguranccedila

TRANSPORTE DAS AMOSTRAS

bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para

ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo

ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida

ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar

ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte

Amostras Inadequadas

bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)

bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a

temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem

tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida

colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes

microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees

natildeo apropriadas

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

PREPARO DE CULTURAS

bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso

Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado

incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento

e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 4: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

Consideraccedilotildees gerais da coleta

bull 1048707 Colher antes da antibioticoterapia sempre que possiacutevelbull 1048707 Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais

cliacutenicosbull 1048707 Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha

maior probabilidade de ser isoladobull 1048707 Considerar o estaacutegio da doenccedila na escolha do material

Patoacutegenos enteacutericos causadores de diarreacuteia estatildeo presentes em maior quantidade e satildeo mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarreacuteica do processo infeccioso intestinal

bull 1048707 Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa anaacutelise microbioloacutegica

bull O pedido do exame deve conter as informaccedilotildees necessaacuterias para o perfeito desenvolvimento da anaacutelise cliacutenica do espeacutecime

Consideraccedilotildees de seguranccedila

bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento

bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica

bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de

coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte

externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)

bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material

bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados

bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios

bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos

bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio

Consideraccedilotildees de seguranccedila

TRANSPORTE DAS AMOSTRAS

bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para

ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo

ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida

ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar

ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte

Amostras Inadequadas

bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)

bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a

temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem

tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida

colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes

microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees

natildeo apropriadas

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

PREPARO DE CULTURAS

bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso

Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado

incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento

e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 5: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

Consideraccedilotildees de seguranccedila

bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento

bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica

bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de

coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte

externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)

bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material

bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados

bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios

bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos

bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio

Consideraccedilotildees de seguranccedila

TRANSPORTE DAS AMOSTRAS

bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para

ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo

ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida

ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar

ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte

Amostras Inadequadas

bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)

bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a

temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem

tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida

colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes

microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees

natildeo apropriadas

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

PREPARO DE CULTURAS

bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso

Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado

incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento

e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 6: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material

bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados

bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios

bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos

bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio

Consideraccedilotildees de seguranccedila

TRANSPORTE DAS AMOSTRAS

bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para

ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo

ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida

ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar

ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte

Amostras Inadequadas

bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)

bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a

temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem

tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida

colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes

microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees

natildeo apropriadas

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

PREPARO DE CULTURAS

bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso

Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado

incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento

e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 7: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

TRANSPORTE DAS AMOSTRAS

bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para

ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo

ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida

ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar

ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte

Amostras Inadequadas

bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)

bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a

temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem

tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida

colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes

microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees

natildeo apropriadas

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

PREPARO DE CULTURAS

bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso

Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado

incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento

e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 8: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

Amostras Inadequadas

bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)

bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a

temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem

tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida

colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes

microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees

natildeo apropriadas

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

PREPARO DE CULTURAS

bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso

Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado

incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento

e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 9: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

PREPARO DE CULTURAS

bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso

Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado

incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento

e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 10: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

PUREZA DAS CULTURAS

bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza

bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada

VIABILIDADE DA CULTURA

bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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ESTOQUE DE CULTURAS

bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia

bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada

MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 12: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

Surtosbull Colher material indicado pelo estudo

epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos

resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e

epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que

envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade

bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 13: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do

diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da

susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade

ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais

bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente

bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)

bull Manter a confidencialidade

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Page 14: Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia molecular Maria Clara Padoveze Divisão de Infecção Hospitalar.

Surtos

bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido

ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada

ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)

ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia

Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Pseudo-surtos

bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico

bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede

Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Anaacutelise Fiscal

Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm

Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Anaacutelise fiscal

bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos

Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra

representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade

bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de

medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ

FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]

Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem

bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado

2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais

bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente

bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998

Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Exemplos de tipagem molecular

Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004

Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Tipagem molecular

bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares

bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos fenotiacutepicos

ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)

bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados

Caracterizaccedilatildeo de clones

Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

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bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Meacutetodos genotiacutepicos

bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por

clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento

bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras

bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo

ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade

Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

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Meacutetodos genotiacutepicos

Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado

na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo

bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias

bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo

Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Meacutetodos genotiacutepicos

bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos

Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Tipagem molecular

bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno

bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento

bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto

Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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Referecircncias Bibliograacuteficas

bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr

bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave

epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999

bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP

bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre

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