Centro Universitário de Belo Horizonte

Biomedicina Microbiologia Clínica Profª: Carla Pataro

Relatório de aula prática n°08

Identificação de Mycobacterium

Coloração de Ziehl-Neelsen

Liana Leuck

Leticia Oliveira

Belo Horizonte 2017/1

1. Introdução

Muitos dos exames realizados nos laboratórios precisam ser rápidos e precisos. As

técnicas de coloração são um meio de direcionar o diagnóstico. O gênero

Mycobacterium é composto por bacilos aeróbios e imóveis. Sua parede celular (com

estrutura típica de bactérias Gram-positiva) é de natureza lipídica, sendo hidrofóbica,

o que a torna resistente a técnicas de coloração comuns. Essa mesma característica

permite que depois de corados não cedam à descoloração por soluções álcool-ácidas,

por esse motivo são chamados bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR). As

micobactérias apresentam taxa de crescimento lento, de 3 dias em algumas espécies

até 8 semanas em outras, enquanto que não se tem relatos positivos do cultivo em

laboratório da M. leprae. As espécies de maior importância médica são a M.

tuberculosis e a M. leprae. M. leprae é o agente etiológico da hanseníase, caracteriza-

se por lesões na pele, mucosa e nervos periféricos. A M.tuberculosis pode se

manifestar de diferentes formas mas a mais comum é a pulmonar, causando a

tuberculose, a única forma clínica contagiosa, ela se dissemina de pessoa a pessoa

através de aerossóis infecciosos. A tuberculose pode permanecer latente e ser

reativada quando a resposta imunológica do paciente enfraquecer em decorrência da

idade avançada, doença ou terapias imunossupressoras. Indivíduos imunodeprimidos

correm mais risco de serem infectados a qualquer tempo. Os sintomas são

inespecíficos, incluem mal-estar, perda de peso, tosse e sudorese noturna. O escarro

pode se apresentar escasso ou sanguinolento e purulento. O diagnóstico é feito a

partir de evidências radiográficas e reforçado pela baciloscopia com o método de

Ziehl-Neelsen ou por culturas.A coloração de Ziehl-Neelsen é bastante útil por ser

rápida e de fácil execução. A amostra é colocada na lâmina e corada com fucsina,

descorada com álcool-ácido e contra corada. Desse modo,os BAAR permanecem

corados com uma tonalidade vermelha e outras bactérias e estruturas ficam azuladas.

2. Objetivo

Essa prática tem como objetivo conhecer a técnica de coloração de Ziehl-Neelsen,

utilizada para identificação de Mycobacterium.

3. Metodologia

3.1 Materiais

Lâminas de microscopia

Alça de platina

Cultura bacteriana a ser analisada;

Óleo de imersão

Microscópio

Bico de Bunsen

Solução de cristal violeta

Solução de azul de metileno;

Solução de álcool-ácido

Solução de fucsina

Papel macio

3.2 Método

Preparar um esfregaço não muito espesso no centro da lâmina;

fixar;

Cobrir o esfregaço com fucsina fenicada (carbofucsina);

Aquecer a lâmina até sair vapor por 3 vezes;

Aguardar 5 min.; Lavar;

Descorar usando a solução descolorante (álcool/ácido), cpbrindo a lâmina e

deixando por 1 minuto; Lavar;

Cobrir com o azul de metileno por 1 minuto; Lavar;

Levar ao microscópio com objetiva de imersão.

4. Resultados e discussão

4.1. O resultado foi observado em uma lâmina já corada, pertencente ao laboratório

da UniBH, pois o Mycobacterium nao pode ser manipulado em laboratórios que não

ofereçam nível de segurança adequado, pois são transmitidos por vias aéreas.

Imagem 1: Lâmina corada com técnica de Ziehn Nielseen. Fonte: laboratório de microbiologia-UNIBH.

No microscópio, pode-se observar a presença de mais de 10 microrganismos por

campo (Imagem 1), o que indica um resultado positivo para contaminação por

Mycobacterium.

5. Conclusão

Nesta coloração, as bactérias álcool-ácido resistentes coram-se em vermelho, pois

não sofrem ação da solução descolorante álcool-ácido. Já os demais microrganismos

e artefatos coram-se, primariamente com fucsina, e, após adição da solução de álcool-

ácido, descoram-se, absorvendo em seguida o pigmento azul do contra corante azul

de metileno. O objetivo de aquecer o esfregaço é que a única forma da fucsina

penetrar nos micro-organismos álcool-ácido resistentes é aquecendo-se a lâmina.

Referências Bibliográficas

Microbiologia Médica de Jawetz, Melnick e Adelberg / Geo. F. Books… [et

al]; [tradução técnica: José Procópio Moreno Senna]. - 25. ed. - Porto Alegre:

AMGH,2012. KONEMAN, Elner W. Diagnóstico microbiológico: Texto e Atlas colorido.

5.ed. São Paulo: MEDSI, 2001. 1465 p. TORTORA, Gerard J; FUNKE, Berdell R; CASE, Christine L. Microbiologia.

8. ed. Porto Alegre Artmed, 2006 894 p.