MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 1

Métodos de

Contagem

Bactéria ViáveisContagem em Placa

Métodos Turbidimétricos

Determinação do NMP

Bactérias Totais

Contagens Microscópicas

Atividade Metabólica

Contagem em Membrana Filtrante

PRINCÍPIO BÁSICO DOS MÉTODOS

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 2

MÉTODOS DE CONTAGEM MICROSCÓPICA

1025250 X=

0,001 mL

1 mm3

=

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 3

MÉTODOS DE CONTAGEM MICROSCÓPICA

Principais Características:

➔ Contam células vivas e mortas;

➔ Mais adequado para amostras liquidas;

➔ População deve ser elevada;

➔ A amostra deve possuir pouco material particulado;

➔ Rápido e com resultados imediatos;

➔ Resultados podem bastante ser influenciados pelo executor;

➔ Mais fácil para culturas mono-microbianas e de células isoladas;

➔ Não é adequado para bactérias móveis;

➔ É um método de contagem direto;

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 4

MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS

Métodos

TurbidimétricosPor Comparação

➔ A turvação da amostra bacteriana é

determinada espectrofotometricamente;

➔ A turvação da amostra bacteriana é

comparada visualmente com padrões;

Diretos

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 5

MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS

Quanto menor a quantidade de bactérias maior a transmitância (T)

menor a absorbância (Abs)

Quanto maior a quantidade de bactérias menor a transmitância (T)

maior a absorbância (Abs)

Curva

PadrãoLeitura

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 6

MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS

Abs

Contagem de Bactérias / mL

Leitura

Curva Padrão

3.000

0,860

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 7

Principais Características:

➔ Contam células vivas e mortas;

➔ Mais adequado para amostras liquidas;

➔ A amostra “não deve” possuir particulado;

➔ População deve ser elevada;

➔ Rápido e com resultados imediatos;

MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS

➔ É um método de contagem indireto;

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 8

MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - POR COMPARAÇÃO

Tubo da

Escala

Quantidade de Bactérias

x 106 bactérias /mL

0,5 150 (1,5 x 108)

1 300 (3,0 x 108)

2 600 (6,0 x 108)

3 900 (9,0 x 108)

4 1200 (1,2 x 109)

5 1500 (1,5 x 109)

6 1800 (1,8 x 109)

7 2100 (2,1 x 109)

8 2400 (2,4 x 109)

9 2700 (2,7 x 109)

10 3000 (3,0 x 109)

Escala de McFarland

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 9

Principais Características:

➔ Contam células vivas e mortas;

➔ Mais adequado para amostras liquidas;

➔ A amostra “não deve” possuir particulado;

➔ É um método de contagem indireto;

➔ População deve ser elevada;

➔ Rápido e com resultados imediatos;

MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - POR COMPARAÇÃO

➔ Resultados dependem do executor;

➔ Resultados imprecisos;

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 10

MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE METABÓLICA

➔ A população é determinada a partir da Atividade Metabólica das células;

Principais Características:

➔ É um método de contagem indireto;

➔ Aplicações bastante específicas;

Vitamina + Cultura = Crescimento Biomassa

Carboidrato + Cultura = Fermentação Dosagem de Ácidos

Fonte de Energia + Cultura = Bioluminescência Dosagem da Luz Emitida

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 11

Resultado Negativo

Resultado Positivo

10 ml

1 ml

0,1 ml

MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL

Tabela específica para:

• Número de tubos (3 series 5 tubos);

• Volumes utilizados (10, 1 e 0,1 mL)

NMP = 110 bactérias / 100 ml

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 12

MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL

Principais Características:

➔ Contam células vivas;

➔ É um método de contagem estatístico;

➔ É um método TRABALHOSO;

➔ É um método DISPENDIOSO;

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 13

CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA

Diluição Seriada

na Razão 1/10

Contagem de Colônias

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 14

CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA

Técnica de

Espalhamento

em Superfície

(“Spread-Plate”)

Técnica de

Espalhamento em

Profundidade

(“Pour-Plate”)

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 15

CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA

Técnica de

Espalhamento

em Superfície

(“Spead-Plate”)

➔ Possibilita o uso de “Meios Opacos”;

➔ Não existe choque térmico “devido” ao meio de cultura ;

➔ Inóculo de 0,1 a 0,5 mL;

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 16

CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA

Técnica de

Espalhamento em

Profundidade

(“Pour-Plate”)

➔ Não possibilita o uso de “Meios Opacos”;

➔ Existe choque térmico “na adição” do meio de cultura;

➔ Inóculo de 1 a 5 mL;

➔ Detecção difícil de colônias no interior do meio de cultura

45 a 50ºC

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 17

CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA

Contagem de Colônias

Determinação da Contagem de

Unidades Formadoras de Colônias

na Amostra

Inverso da Diluição da Amostra

Fator de Correção de Volume do Inóculo

X

X

MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 18

CONTAGEM DE VIÁVEIS EM MEMBRANA FILTRANTE

Permite a Análise de

“Grandes” Volumes

Meio de Cultura