MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 1
Métodos de
Contagem
Bactéria ViáveisContagem em Placa
Métodos Turbidimétricos
Determinação do NMP
Bactérias Totais
Contagens Microscópicas
Atividade Metabólica
Contagem em Membrana Filtrante
PRINCÍPIO BÁSICO DOS MÉTODOS
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 3
MÉTODOS DE CONTAGEM MICROSCÓPICA
Principais Características:
➔ Contam células vivas e mortas;
➔ Mais adequado para amostras liquidas;
➔ População deve ser elevada;
➔ A amostra deve possuir pouco material particulado;
➔ Rápido e com resultados imediatos;
➔ Resultados podem bastante ser influenciados pelo executor;
➔ Mais fácil para culturas mono-microbianas e de células isoladas;
➔ Não é adequado para bactérias móveis;
➔ É um método de contagem direto;
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 4
MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS
Métodos
TurbidimétricosPor Comparação
➔ A turvação da amostra bacteriana é
determinada espectrofotometricamente;
➔ A turvação da amostra bacteriana é
comparada visualmente com padrões;
Diretos
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 5
MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS
Quanto menor a quantidade de bactérias maior a transmitância (T)
menor a absorbância (Abs)
Quanto maior a quantidade de bactérias menor a transmitância (T)
maior a absorbância (Abs)
Curva
PadrãoLeitura
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 6
MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS
Abs
Contagem de Bactérias / mL
Leitura
Curva Padrão
3.000
0,860
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 7
Principais Características:
➔ Contam células vivas e mortas;
➔ Mais adequado para amostras liquidas;
➔ A amostra “não deve” possuir particulado;
➔ População deve ser elevada;
➔ Rápido e com resultados imediatos;
MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS
➔ É um método de contagem indireto;
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 8
MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - POR COMPARAÇÃO
Tubo da
Escala
Quantidade de Bactérias
x 106 bactérias /mL
0,5 150 (1,5 x 108)
1 300 (3,0 x 108)
2 600 (6,0 x 108)
3 900 (9,0 x 108)
4 1200 (1,2 x 109)
5 1500 (1,5 x 109)
6 1800 (1,8 x 109)
7 2100 (2,1 x 109)
8 2400 (2,4 x 109)
9 2700 (2,7 x 109)
10 3000 (3,0 x 109)
Escala de McFarland
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 9
Principais Características:
➔ Contam células vivas e mortas;
➔ Mais adequado para amostras liquidas;
➔ A amostra “não deve” possuir particulado;
➔ É um método de contagem indireto;
➔ População deve ser elevada;
➔ Rápido e com resultados imediatos;
MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - POR COMPARAÇÃO
➔ Resultados dependem do executor;
➔ Resultados imprecisos;
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 10
MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE METABÓLICA
➔ A população é determinada a partir da Atividade Metabólica das células;
Principais Características:
➔ É um método de contagem indireto;
➔ Aplicações bastante específicas;
Vitamina + Cultura = Crescimento Biomassa
Carboidrato + Cultura = Fermentação Dosagem de Ácidos
Fonte de Energia + Cultura = Bioluminescência Dosagem da Luz Emitida
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 11
Resultado Negativo
Resultado Positivo
10 ml
1 ml
0,1 ml
MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL
Tabela específica para:
• Número de tubos (3 series 5 tubos);
• Volumes utilizados (10, 1 e 0,1 mL)
NMP = 110 bactérias / 100 ml
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 12
MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL
Principais Características:
➔ Contam células vivas;
➔ É um método de contagem estatístico;
➔ É um método TRABALHOSO;
➔ É um método DISPENDIOSO;
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 13
CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA
Diluição Seriada
na Razão 1/10
Contagem de Colônias
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 14
CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA
Técnica de
Espalhamento
em Superfície
(“Spread-Plate”)
Técnica de
Espalhamento em
Profundidade
(“Pour-Plate”)
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 15
CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA
Técnica de
Espalhamento
em Superfície
(“Spead-Plate”)
➔ Possibilita o uso de “Meios Opacos”;
➔ Não existe choque térmico “devido” ao meio de cultura ;
➔ Inóculo de 0,1 a 0,5 mL;
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 16
CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA
Técnica de
Espalhamento em
Profundidade
(“Pour-Plate”)
➔ Não possibilita o uso de “Meios Opacos”;
➔ Existe choque térmico “na adição” do meio de cultura;
➔ Inóculo de 1 a 5 mL;
➔ Detecção difícil de colônias no interior do meio de cultura
45 a 50ºC
MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA 17
CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA
Contagem de Colônias
Determinação da Contagem de
Unidades Formadoras de Colônias
na Amostra
Inverso da Diluição da Amostra
Fator de Correção de Volume do Inóculo
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