Contagem de Lactobacillus da saliva.

Salvador, Maio de 2014.

Gram positivos Acidúricos e Acidogênicos Precisam de sítios retentivos

( fóssulas, fissuras, sulcos...)

São bactérias utilizadas na indústria de laticínios e podem ser encontradas com freqüência no estômago , no intestino, na vagina e na cavidade oral (principalmente no dorso da língua, palato duro, mucosa vestibular, saliva e biofilme).

Geralmente não são patogênicos, mas podem agravar o desenvolvimento da doença cárie. São bacilos gram-positivos não esporulados.

Isolar e contar Lactobacillus presentes na saliva para avaliar o risco de agravamento da doença cárie no indivíduo.

Coletar aproximadamente 2mL de saliva em uma placa estéril

Retirar 1mL de saliva com a pipeta e realizar diluições seriadas em tubos contendo 9 mL de salina

Colocar o volume a ser semeado (0,1 mL) da diluição 10 -² na placa de Petri e posteriormente colocar o Ágar Rogosa

Submeter a placa a movimentos rotatórios suaves, com a finalidade de misturar o inóculo, com o ágar;

Semeadura Pour Plate Esperar solidificar o meio; Incubar a 37°C por 72 horas

Placa contendo 2 mL

de saliva 1/10 1/100

Placa de Petri.

Salina-9mL

Volume a ser semeado: 0,1 mL Meio seletivo para Lactobacillus: Ágar

Rogosa - Contém: Ácido acético, pH ácido(5.4) e

glicídios (substrato) Técnica de semeadura: Pour Plate O objetivo da técnica de semeadura em Pour

Plate é obter colônias isoladas (qualitativo) ou para realizar contagem de colônias em placas (quantitativo). Nesta técnica deve-se tomar cuidado para não adicionar o meio em temperatura elevada sobre o inóculo o que poderá matar as bactérias.

• Colônias Discóides ou em formato de

“Alpiste”• Realizar a contagem do número de

colôniasFazer coloração de Gram para confirmar se é Lactobacillus.

N° de colônias= 12

Volume semeado= 0,1mL

Fator de diluição= 1\100 ou 10-²

N° de Lactobacillus:

Atividade de cárie:

0 a 1000 Pequena ou nenhuma

1001 a 5000 Leve

5000 a 10000 Moderada

>10000 Alta

JORGE, A. O. Microbiologia bucal. 1ª ed. São Paulo: Santos, 1995. 121 p.