Diagnóstico microbiológico
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Coleta de material clínico para Coleta de material clínico para diagnóstico microbiológicodiagnóstico microbiológico
Profa. Camila CoelhoProfa. Camila Coelho
Universidade Federal do CearáUniversidade Federal do CearáFaculdade de Medicina de SobralFaculdade de Medicina de SobralMicrobiologia MédicaMicrobiologia Médica
Coleta de material clínico
• O material colhido deve ser representativo do
processo infeccioso investigado
• Melhor sítio da lesão
• Evitar contaminação com as áreas adjacentes
Coleta de material clínico
• Coleta ou transporte inadequados:
- Falhas no isolamento do agente etiológico
- Favorecer o desenvolvimento da microbiota
contaminante
• Tratamento inapropriado
Recomendações para a coletaRecomendações para a coleta• Colher antes da antibioticoterapia, sempre que possível;
• Instruir claramente o paciente sobre o procedimento;
• Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais clínicos;
• Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha maior probabilidade de
ser isolado;
Recomendações para a coleta
• Considerar o estágio da doença na escolha do
material.
Ex: patógenos entéricos, causadores de diarréia,
estão presentes em maior quantidade e são mais
facilmente isolados durante a fase aguda ou
diarréica do processo infeccioso intestinal.
Recomendações para a coletaRecomendações para a coleta
• Quantidade suficiente de material deve ser coletado
para permitir uma completa análise microbiológica.
Caso a quantidade seja pequena, priorize os exames;
• O pedido do exame deve conter dados como idade,
doença de base e indicação do uso de antibióticos.
Biossegurança
• Equipamentos de proteção individual (EPIs) e coletiva (EPCs)
Biossegurança
• Frascos de coleta
Estéreis!Estéreis!
Identificação amostra / pacienteIdentificação amostra / paciente
• Especificar o que se pretende isolar: aeróbia, anaeróbia, fungos, micobactérias...
• Relatar pesquisa de microrganismos não usuais
• Nome e idade do paciente;• Hora e local da coleta;• Anotar uso de antibióticos;• Possível suspeita clínica
Transporte das amostrasTransporte das amostras• Meios para transporte
• Exemplos:
Transporte de amostras
clínicas para o laboratório
Meios inertes:
Preservam viabilidade
Evitam proliferação
Meio Stuart ou Amies:Meio Stuart ou Amies: bactérias bactérias aeróbias ou anaeróbias facultativas aeróbias ou anaeróbias facultativas
((Neisseria, Streptococcus, Neisseria, Streptococcus, enterobactérias)enterobactérias)
Meio de Cary-blair: Meio de Cary-blair: enteropatógenos enteropatógenos fezes (fezes (Campylobacter, Yersinia, Vibrio Campylobacter, Yersinia, Vibrio
choleraecholerae) e anaeróbios) e anaeróbios
Coleta microbiológica: Material ClínicoColeta microbiológica: Material Clínico
• Quais tipos?Não estéreis – Amostras do trato respiratório superior – Amostras de fezes– Amostras de urina– Secreções genitais– Feridas e abscessos– Pele, pêlos e unha– Secreção de ouvido– Secreção ocular
• Quais tipos?Estéreis– Líquidos orgânicos
• Pleural• Peritoneal• Pericárdico• Medula óssea• Cefalorraquidiano (líquor)• Sangue
Coleta microbiológica: Material ClínicoColeta microbiológica: Material Clínico
Coleta de amostras do trato respiratório Coleta de amostras do trato respiratório superiorsuperior
• SECREÇÃO DE OROFARINGE
TRANSPORTEColocar swab em meio
Stuart ou AmiesAcondicionar Tº ambiente
até 6hColetar outro swab p/ confecção esfregaço
MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSStreptococcus pyogenes,
Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Staphylococcus aureus,
enterobactérias e BGNNF.
• ASPIRAÇÃO DO SEIO MAXILAR
Coleta de amostras do trato respiratório Coleta de amostras do trato respiratório superiorsuperior
• AMOSTRA DE ESCARRO
• ASPIRADO TRAQUEAL– Obtido de pacientes UTI com uso de aparelhos de respiração mecânica– Seguir técnica de aspiração asséptica com sonda de aspiração
• Amostras questionáveis: dificuldade de avaliação do patógeno principal!
Coleta de amostras do trato respiratório Coleta de amostras do trato respiratório inferiorinferior
MICRORGANISMOS ENVOLVIDOS
Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, S.
aureus, enterobactérias, BGNNF, Mycoplasma
pneumoniae, Chlamydia spp., Mycobacterium tuberculosis
• LAVADO BRONCOALVEOLAR
• Transporte e acondicionamento• Temperatura ambiente (25-28ºC) dentro de 2h após a coleta• Refrigerar (2-8ºC) até 12h
Coleta de amostras do trato respiratório Coleta de amostras do trato respiratório inferiorinferior
Injeção de 100ml de solução fisiológica estéril utilizando o canal do broncoscópioApós 3 a 5 minutos, recuperar por aspiração
um volume de no mínimo 40%
• Material clínico– Secreção ocular– lentes de contato– solução de limpeza
• Coleta e transporte
Coleta de secreção ocularColeta de secreção ocularMICRORGANISMOS ENVOLVIDOS
Conjuntivites bacterianas mucopurulentas: Pseudomonas
aeruginosa, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Neissseria
gonorroheae e Chlamydia trachomatis.
Ceratite: Fusarium solani
• SECREÇÃO DE OUVIDO EXTERNO/MÉDIO– Anti-sepsia ouvido externo anti-séptico/solução fisiológica estéril– Aspiração / swab
• TRANSPORTE– Aspiração: 25-28°C por até 2h– Swab meio Amies: 25-28°C até 6h
Coleta de secreção do ouvidoColeta de secreção do ouvido
MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSOtite média :Streptococcus
pneumoniae, Haemophilus influenzae / Staphylococcus aureus e
enterobactérias. Otite externa: Pseudomonas aeruginosa
Coleta de fezes (coprocultura)Coleta de fezes (coprocultura)• Coleta
• Principais conservantes– Glicerina tamponada: Salmonella spp. e Shigella spp.– Cary-Blair:
MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSAgentes de gastroenterites:
Salmonella spp., Shigella spp., alguns sorotipos de Escherichia
coli e Campylobacter
1 a 2ml fase diarréica
• Transporte e acondicionamento– Fezes sem conservante temperatura 25-28°C / 1h– Fezes com conservante refrigeradas 2-8°C / 12h
• Atenção!!!: amostras não aceitáveis– Amostras sem conservantes obtidas há mais de três horas– Mistura de várias amostras colhidas no mesmo dia– Fezes líquidas colhidas ou enviadas em fraldas– Amostras de fezes contaminadas com urina
Coleta de fezes (coprocultura)Coleta de fezes (coprocultura)
Coleta de urinaColeta de urina• Amostra de urina de jato médio
• Amostra de urina de qualquer jato– Obtida com auxílio de saco coletor– Higienização / colocar saco coletor de forma asséptica– Laboratório recebe saco coletor fechado
MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSEnterobactérias: Escherichia coli,
Klebsiella pneumoniae, Proteus spp., Enterobacter spp.
Cocos Gram + : Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus spp.
• Urina coletada por punção suprapúbica
• Volume
• Transporte e acondicionamento– 25-28°C processadas até 2h– Refrigeradas (2-8°C) até 12h / conservante (ácido bórico): 25-28°C até 6h
Coleta de urinaColeta de urina
Pouco utilizada: crianças até 2 anosColher por punção vesical
(agulha e seringa)
Cultura: 2mlUrinálise: 10ml
• SECREÇÃO VAGINAL E CERVICAL
• SECREÇÃO URETRAL
Coleta de secreções genitaisColeta de secreções genitais
solução fisiológica: leveduras e tricomonas
solução fisiológica:
leveduras e tricomonas
• AMOSTRA PARA PESQUISA DE ESTREPTOCOCO BETA –HEMOLÍTICO DO GRUPO B
• Transporte e acondicionamento– 25-28°C: processadas em até 2h– Swab em meio de transporte: 25-28°C por até 6h
Coleta de secreções genitaisColeta de secreções genitais
Sem espéculo
terço distal da vagina
Amostra anorretal
Coleta de secreções genitaisColeta de secreções genitais
Infecções do trato genital/ manifestações clínicas
Agentes etiológicos
Vaginite Candida albicans (secreção espessa, esbranquiçada, prurido perivaginal); Gardnerella
vaginalis; Mycoplasma hominis
Cervicite - corrimento Neisseria gonorroheae; Chlamydia trachomatis
Doença inflamatória pélvica (DIP) N. gonorroheae, C. trachomatis, anaeróbios, bacilos gram negativos, Streptococcus e Micoplasmas
Uretrite – corrimento uretral, disúria N. gonorroheae, C. trachomatis, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum
Epididimite - dor N. gonorroheae, C. trachomatis, enterobactérias, Staphylococcus
Prostatite – disúria e polaciúria. Pode ocorrer bacteriúria persistente em
prostatites crônicas
Enterobacactérias, Staphylococcus, Streptococcus
Coleta de líquidos orgânicosColeta de líquidos orgânicos
• Materiais clínicos– Líquido pleural
– Líquido peritoneal
– Líquido pericárdico
– Líquido sinovial
– Medula óssea
– Líquido cefalorraquidiano
• MEDULA ÓSSEA
• Transporte e acondicionamento– Amostra mantida a 25-28°C por até 6h
Coleta de líquidos orgânicosColeta de líquidos orgânicos
• LÍQUIDO CEFALORRAQUIDIANO (LÍQUOR)– Meningites: bacterianas, virais e fúngicas
Coleta de líquidos orgânicosColeta de líquidos orgânicos
Microrganismo Faixa etáriaEscherichia coli, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes, herpes simples vírus 2
Recém-nascido
S. agalactiae. L. monocytogenes, E. coli < 2 meses
Vírus, Haemophilus influenzae, S. pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae.
< 10 anos
Vírus, N. meningitidis Adulto jovem
S. pneumoniae, N. meningitidis, vírus Adulto
S. pneumoniae, bacilos gram negativos, L. monocytogenes
Idoso
Cryptococcus neoformans, L. monocytogenes Pacientes imunodeprimidos
• Coleta
• Transporte e acondicionamento– Frasco estéril a 25-28°C por até 2h– Volume: 1-2 ml
Coleta de líquidos orgânicosColeta de líquidos orgânicos
• LESÃO ABERTA
• ABSCESSO FECHADO
Coleta de feridas, abscessos e biópsiaColeta de feridas, abscessos e biópsia
Fazer anti-sepsia localAspirar secreção com agulha e seringaNão usar swab !
Não é recomendada coleta de lesões secas ou crostasDescontaminar a região c/ solução fisiológica, álcool 70%, solução de povidona-iodoColetar da região mais profunda e purulenta
MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSStreptococcus pyogenes, S. aureus,
Enterobactérias, Pseudomonas aeruginosa, entre outros
• FERIDA DE QUEIMADURA
• PÚSTULA E VESICULA
Coleta de feridas, abscessos e biópsiaColeta de feridas, abscessos e biópsia
Desbridamento e descontaminação da lesãoFragmento de tecido (biópsia): ideal para culturaColetar em swab estéril com meio de transporte
Selecionar pústula intactaFazer anti-sepsia e puncionarSe a lesão for seca, passar swab estéril firmemente sobre a lesão
• Biópsia
• Transporte e acondicionamento– Swab com meio de transporte: 25-28°C até 6h– Aspirados (agulha e seringa): 25-28°C por 2h – Biópsia: 25-28°C por 2h
Coleta de feridas, abscessos e biópsiaColeta de feridas, abscessos e biópsia
Enviar em frasco estéril. Não aceitar amostras em formol!
• ESCAMAS DE PELE
• PÊLOS E CABELOS
Coleta de pele, pêlos e unhasColeta de pele, pêlos e unhas
Cabelo: Retirar cabelos da região de alopécia com pinça flambada
Pêlos c/ lesões inflamatórias: fazer antibioticoterapia prévia
Dermatofitoses
Pitiríase versicolor
• UNHAS
• Transporte e acondicionamento– 25-28ºC: até 2h– Refrigeradas: até 12h
Coleta de pele, pêlos e unhasColeta de pele, pêlos e unhas
Várias unhas lesionadas: coleta individual!
Realizar coleta com tesouras, alicates e curetas dermatológicas estéreis
Onicomicoses:Lesão a partir do limbo da unha: dermatofíticaLesão a partir do leito ungueal: leveduras
Coleta de sangue para hemoculturaColeta de sangue para hemocultura
• Hemocultura : 2 frascos
• Número de amostras
Adulto: 2 ou 3 hemoculturas (24h)
Crianças: 1 hemocultura
• Volume de sangue e intervalo de coleta
– Adultos: em cada punção, de 8 a 10ml de sangue para cada frasco
– Crianças (de 1 a 6 anos): 1 a 5ml de sangue em frascos pediátricos
– Recém-nascidos: 0,5 a 1ml por punção venosa
MICRORGANISMOS ENVOLVIDOSGRAM + : Staphylococcus aureus,
Staphylococcus coagulase negativo, Enterococcus spp., Streptococcus
spp. GRAM - : Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella
spp., Enterobacter spp., Pseudomonas aeruginosa,
FUNGOS: Candida spp., Cryptococcus neoformans, etc.
anaeróbio
aeróbio
• Coleta
Coleta de sangue para hemoculturaColeta de sangue para hemocultura
• Coleta
Coleta de ponta de cateterColeta de ponta de cateterMICROORGANISMOS ENVOLVIDOS
Staphylococcus coagulase negativo, S. aureus, Enterobactérias, Pseudomonas
aeruginosa, Corynebacterium spp., Candida spp.
Fazer anti-sepsia do local que circunda o cateterRemover assepticamente o cateterCortar 5cm da ponta distal e colocar em frasco seco estéril
Transporte (20-25°C): até 1hRefrigerado: até 12h
Tipos de meios:• Caldo BHI (Brain Heart Infusion)
• Ágar sangue: gram positivos e negativos
• Ágar chocolate: fastidiosos
• Ágar Mac Conkey: gram negativos
• Ágar Salmonella-Shigella
• Caldo tetrationato: enterobactérias
• Ágar entérico Hektoen: enterobactérias
Semeadura de material clínicoSemeadura de material clínico
Ágar sangue
Ágar chocolate
Ágar Mac Conkey
Semeadura de material clínicoSemeadura de material clínico
• Ágar CLED (cistina lactose eletrólito deficiente): urina -gram positivos, gram negativos
• Löwestein jensen: micobactérias
• Ágar Sabouraud (pode ser acrescido de cloranfenicol ou cloranfenicol e cicloheximida): fungos
CLED Löwestein jensen Sabouraud