DIFERENTES MTODOS DE COLETA DE FEZES SOBRE

OS COEFICIENTES DE DIGESTIBILIDADE APARENTE

PARA O TAMBAQUI (Colossoma macropomum)

Carolinne Silva da Mota

Orientador: Prof. Dr. Igo Gomes Guimares

JATA-GO

2012

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS

CAMPUS JATA

CURSO DE ZOOTECNIA

TRABALHO DE CONCLUSO DE CURSO

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS

CAMPUS JATA

CURSO DE ZOOTECNIA

TRABALHO DE CONCLUSO DE CURSO

DIFERENTES MTODOS DE COLETA DE FEZES SOBRE OS

COEFICIENTES DE DIGESTIBILIDADE APARENTE PARA O TAMBAQUI

(Colossoma macropomum)

Relatrio de projeto orientado apresentado ao Colegiado do Curso de Zootecnia, como

parte das exigncias para a obteno do ttulo de

Bacharel em Zootecnia.

Orientador

Prof. Dr. Igo Gomes Guimares

JATA-GO

2012

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS

CAMPUS JATA

CURSO DE ZOOTECNIA

CAROLINNE SILVA DA MOTA

AVALIAO DE DIFERENTES MTODOS DE COLETA DE FEZES SOBRE

A ESTIMATIVA DOS COEFICIENTES DE DIGESTIBILIDADE APARENTE

PARA O TAMBAQUI (Colossoma macropomum)

Relatrio de projeto orientado apresentado

ao Colegiado do Curso de Zootecnia, como

parte das exigncias para a obteno do ttulo de

Bacharel em Zootecnia.

APROVADA em 9 de outubro de 2012.

_____________________________________________

Prof. Dr. Otto Mack Junqueira

Membro da Banca

_____________________________________________

MS. Janana Gomes Arajo

Membro da Banca

_____________________________________________

Prof. Dr Igo Gomes Guimares

Orientador

JATA-GO

2012

Dedico ao meu pai, Sebastio Antnio da Mota,

a minha me Jacy Silva da Mota e a meu irmo

Jair Silva da Mota. Distncia ou tempo algum

apagaro do meu corao o amor e dedicao,

ensinamentos e apoio de vocs recebidos.

AGRADECIMENTOS

Ao meu querido orientador, Igo Gomes Guimares, que foi durante todo esse

tempo de orientao atencioso e dedicado, sempre me mostrando o caminho certo, e

sendo malevel com meus exageros e ataques de loucura, voc sempre ser meu

exemplo. O meu sincero obrigada.

A minha querida Co-Orientadora Janana Gomes Arajo, que meu grande

exemplo de como ser uma boa aluna, professora, orientadora, profissional, pessoa,

amiga, me, esposa, mulher. Tenho muito orgulho de falar que trabalhei ao seu lado. O

meu extremo obrigada.

Universidade Federal de Gois, que me acolheu de braos abertos e me

proporcionou um ensino de qualidade e me ensinou a ter espao na sociedade, sendo

justa e correta. Obrigada.

Universidade Federal Rural da Amaznia (UFRA), que me ofereceu com muito

custo, a primeira fase da minha formao, foi em suas instalaes que descobri como a

vida. Obrigada.

Pontifica Universidade Catlica de Gois (PUC), que me cedeu suas instalaes,

equipamentos, funcionrios e condio para execuo desse trabalho, me tratando de

igual com seus alunos. Obrigada.

Aos professores: Raquel Salgado, Josemir Gonalves, Maria do Socorro, Eduardo,

Luiz Rennan, Kaliandra Alves, Mrcia, Vincios, Roberta de Assis, Vera Banys, Arthur,

Karina, Mrcia, Fernando, obrigada por terem e estarem contribuindo com a minha

formao.

Aos meus amigos: Thalita Araujo, Fabiany Gonalves, Paulo Henrique Arruda,

Alexandre Figueiredo, Carla Furtado, Dyulie Antunes, Murillo Machado, Nayara, que

so meus amigos e companheiros de todas as horas.

Aos meus colegas de graduao: Mateus, Gilberto, Eduardo, Mrcia, Thayane,

Vanessa, Rozilda, Iracema, Nayane, Lara, Samara, Diego, Machel, Virgilho, Gabriel,

Cigano, Hugo, Vincios, Nayana, e a todos aqueles que diretamente ou indiretamente

me ajudaram na minha formao e na construo de um belo grupo de amizades.

Aos meus amigos do grupo de Pesquisa em Organismos Aquticos LAPAQ-

UFG- Jata, Thiago Quirino, Thiago Morais, Alana Lucena, CristielleColto e ao Tiago

Aguiar quem me ajudoubastante para realizao deste trabalho. Obrigada.

Ao Senhor Jos Neves, tcnico do Laboratrio de Solos e todos os funcionrios da

PUC-GO Bloco G, que me ajudaram interinamente com a maior dedicao e carinho

como dado a uma filha.

Ao meu querido Bile (Sandro Henrique), pelo amor e compreenso oferecido

durante todo esse trabalho, levantando de madrugada, dormindo tarde, escutando

atentamente meus choros e desesperos, voc segurou minhas mos quando meus joelhos

j no aguentavam mais segurar o meu corpo. Obrigada.

LISTA DE ILUSTRAES

Anexo I

Figura I. Sistema Guelph (Fonte: CHO, C.Y.; COWEY, C.B.; WATANABE, T..

Methodological approaches to research and development. In: Cho, C.Y., Cowey, C.B.,

Watanabe, T. (Eds.), Finfish Nutrition in Asia. IDRC, Ottawa, Canada, pp. 1080.

1985.)

Figura II. Coleta mecnica (Fonte: CHOUBERT, G.; DE LA NOUE Jr., J.; Luquet, P.

Digestibility in fish: improved device for the automatic collection of feces.

Aquaculture 29, 185189. 1982.)

Anexo II

Grfico 1. Coeficientes de digestibilidade aparente do fsforo nas fezes do tambaqui

sobre diferentes tempos de coleta (60, 120, 240 e 480 minutos) pelo mtodo de

decantao.

Grfico 2. Coeficientes de digestibilidade aparente da matria seca nas fezes do

tambaqui sobre diferentes tempos de coleta (60, 120, 240 e 480 minutos) pelo mtodo

de decantao.

Grfico 3. Coeficientes de digestibilidade aparente da energia nas fezes do tambaqui

sobre diferentes tempos de coleta (60, 120, 240 e 480 minutos) pelo mtodo de

decantao.

Figura I. Aqurio de alimentao (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura II. Animais experimentais (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura III. Incubadoras adaptadas para coleta de fezes por decantao (Fonte: Arquivo

Pessoal).

Figura IV. Coleta noturna de contedo fecal (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura V. Recipiente coletor de fezes acoplado a incubadora (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura VI. Identificao e armazenamento das amostras fecais (Fonte: Arquivo

Pessoal).

Figura VII. Trato digestrio do tambaqui todo removido (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura VIII. Corte longitudinal do trato digestrio at o cecos pilricos (Fonte: Hugo

Vinicius Pereira).

Figura IX. Remoo das fezes de dentro do trato digestrio com pincel (Fonte:Hugo

Vinicius Pereira).

Anexo III

Normas para preparao de trabalhos cientficos para publicao na Revista Brasileira

de Zootecnia.

LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SMBOLOS

CDA= Coeficiente de digestibilidade aparente.

CDAPB = Coeficiente de digestibilidade aparente da Protena Bruta.

CDAMS = Coeficiente de digestibilidade aparente da Matria Seca.

CDAP = Coeficiente de digestibilidade aparente do Fsforo.

CDAEB = Coeficiente de digestibilidade aparente da Energia Bruta.

PB = Protena bruta.

EB = Energia bruta.

SUMRIO

CAPTULO 1 - CONSIDERAES GERAIS ....................................................................................... 1

1.2 MTODOS DE COLETA .................................................................................................. 6

CAPTULO 2 - PROJETO ORIENTADO .......................................................................................... 15

2.1 RESUMO .......................................................................................................................... 15

2.2 ABSTRACT ...................................................................................................................... 16

2.3 INTRODUO ................................................................................................................ 17

2.4 MATERIAL E MTODOS .............................................................................................. 18

2.4.1 rea e animais experimentais .................................................................................... 18

2.4.2 Dieta experimental ..................................................................................................... 19

2.4.3 Metodologia para coleta de fezes pelo mtodo de decantao ................................... 20

2.4.4 Metodologia de coleta de fezes pelo mtodo de dissecao ...................................... 22

2.4.5 Clculo dos CDAs e anlises qumicas ...................................................................... 22

2.4.6 Delineamento experimental e anlise estatstica dos dados ....................................... 23

2.5 RESULTADOS ................................................................................................................. 24

2.6 DISCUSSO .................................................................................................................... 27

2.7 CONCLUSO .................................................................................................................. 33

1

CAPTULO 1 - CONSIDERAES GERAIS

Nos ltimos anos, o cultivo intensivo e semi-intensivo de peixes tem sido

crescente no Brasil, principalmente pelo interesse nas espcies nativas tropicais, como o

pacu (Piaractus mesopotamicus) e o tambaqui (Colossoma macropomum), que

apresentam grande potencial para a piscicultura, uma vez que possuem carne de

excelente qualidade, alm da facilidade na adaptao de criao em cativeiro (Abimorad

& Carneiro, 2004).

A produo aqucola mundial tem crescido significativamente, atingindo a marca

de 60 milhes de toneladas em 2010. Este crescimento decorre da alta demanda por

pescado pela populao, com crescimento mdio anual de 6,6%, chegando a um

consumo 18,4 kg per capita/ano (The Stateof World Fisheries and Aquaculture- Sofia,

2012).

O tambaqui o segundo maior peixe de escamas do Brasil, sendo a principal

espcie da Amaznia cultivada no pas, cuja produo nacional em 2008 foi de 46 mil

toneladas (MPA, 2010b) tendo um crescimento de 66% em relao ao ano de 2007, o

que destaca o rpido crescimento desta espcie em territrio nacional. Segundo o

IBAMA (2008), o tambaqui o 4 pescado mais cultivado do pas, perdendo somente

para o camaro, tilpia e carpa. Entre 2003 e 2009, a produo desta espcie cresceu

123%, com taxa mdia anual de 14% (MPA, 2010b).

Pertencente classe Actinopterygii, ordem Characiformes e famlia Characidae

(Britski, 1977), o tambaqui um peixe de piracema nativo das bacias dos rios

Amazonas e Orinoco, com alto potencial para a aquicultura. A popularidade do

tambaqui atribuda facilidade de produo de alevinos, rpido crescimento,

resistncia a elevadas temperaturas da gua dos viveiros, ao manuseio, e baixos nveis

de oxignio dissolvido necessrio (Silva et al., 1986; Arajo-Lima & Gomes, 2005;

2

Porto, et al. 2005; Paula, 2009). Esta espcie, em situao de hipxia, apresenta

adaptaes comportamentais e fisiolgicas para suportar a adversidade como: aumento

da respirao e batimento cardaco, aumento da afinidade da hemoglobina pelo

oxignio, reduo do metabolismo e baixa taxa de crescimento (Val & Almeida-Val,

1995; Gomes et al., 2006).

Durante a dcada de 80 alguns pesquisadores caracterizaram o tambaqui como

tendo hbito alimentar onvoro com tendncia herbvoria, sendo ainda considerada

espcie filtradora e frugvora (Goulding et al., 1980; Carvalho et al., 1981; Flamm et al.,

1983; Machado-Allinson et al., 1982; Piedade et al., 1985; Soares et al., 1986; Goulding

& Carvalho, 1982; Saint Paul et al., 1986).

Mesmo estando em grande expanso produo de espcies nativas, em especial

do tambaqui, os estudos so escassos sobre manejo alimentar, nutricional, reprodutivo e

comportamento desta espcie, os quais so dominados por algumas instituies de

ensino e pesquisa, e setores privados, como fbricas de rao. Mesmo assim, a

exigncia nutricional especifica do tambaqui ainda no foi tabulada como j existem

relatos especficos para a tilpia no Brasil e no mundo (Furuya, 2010 e NRC, 2011).

Portanto, a criao do tambaqui depende especialmente em sistemas semi-intensivos ou

intensivos de produo e do uso de raes balanceadas e de boa qualidade, permitindo

melhor aproveitamento dos nutrientes pela espcie, j que os custos com alimentao

so relativamente altos, representando o maior percentual dos custos operacionais (em

torno de 70%).

Do ponto de vista da aquicultura sustentvel, para a formulao ideal de rao

deve-se levar em considerao a digestibilidade dos ingredientes, a qual pode ser

influenciada por vrios fatores, como a densidade de estocagem, a qualidade e a

3

quantidade dos alimentos, influncia do sexo, idade, tamanho, tempo, frequncia

alimentar e, principalmente, dos mtodos de avaliao da digestibilidade.

A determinao doscoeficientes de digestibilidade aparente (CDA) dos nutrientes

medida pela diferena (expressa como percentagem) entre a ingesto de nutrientes e a

excreo de nutrientes fecais com a utilizao de marcadores indigestveis. Sendo

assim, a melhor forma de produzir dietas nutricionalmente balanceadas, quantificando a

capacidade desses animais de digerir e assimilar os nutrientes dos alimentos. Portanto,

experimentos de digestibilidade tm fundamental importncia para a quantificao de

valores nutricionais para formulao de dietas espcie-especificas nutricionalmente

balanceada.

A digestibilidade de uma dieta ou de um ingrediente pode ser determinada direta

ou indiretamente. O ambiente aqutico o grande desafio para pesquisas de

digestibilidade em peixes, pois dificulta a separao das fezes na gua, a mensurao do

consumo de alimento, alm da contaminao com o alimento no ingerido. O mtodo

direto, que tem como objetivo a coleta total das fezes, no tem sido utilizado

rotineiramente para determinao dos coeficientes de digestibilidade dos alimentos para

peixes, principalmente pelo estresse ocasionado e dificuldade de coleta, apesar de

existirem tcnicas adaptadas para coleta total de excretas, como: cmara metablica

(Halver et al., 1989), sistema de filtragem contnua adaptada para a coleta total de fezes

(Choubert et al., 1979; Choubert et al., 1982) e sistema de bolsa coletora de fezes (Vidal

Junior, 2000).

No mtodo indireto, os coeficientes de digestibilidade aparente so estimados pela

diferena de concentrao de um marcador indigestvel e dos nutrientes no alimento e

nas fezes, de forma que a coleta total das fezes no necessria (Halver et al., 1989).

Contudo, a coleta das fezes pode ser efetuada de duas maneiras: a) as excretas podem

4

ser obtidas diretamente do tanque ou aqurio de cultivo aps a defecao (coleta com o

peixe dentro da gua); b) as amostras podem ser coletadas diretamente do intestino

posterior antes de serem defecadas pelo peixe (coleta com o peixe fora da gua) (Portz

et al. 2001).

A fim de evitar a lixiviao de nutrientes na gua, vrios autores tm ressaltado

que mtodos de coleta de fezes fora do ambiente aqutico, como o mtodo de

dissecao (Smith & Lovell, 1971; Smith & Lovell, 1973; Austreng et al., 1978;

Windell et al., 1978; Henken et al., 1985), ou o mtodo de compresso ou massagem

abdominal (Inaba et al., 1962; Nose et al., 1967; Austreng et al., 1978; Windeil et al.,

1978; Vens-Cappel et al., 1985) e de suco anal (Lovell et al., 1977; Windell et al.,

1978; Brown et al., 1985) apresentam-se como tcnicas mais adequadas, como para o

salmo (Salmo salar), que produz fezes que se dissipam facilmente na gua. A

lixiviao pode ser altamente significativa no mtodo indireto por decantao, quando

grandes instalaes so utilizadas para a manuteno destes peixes, devido distncia

que os excrementos teriam de percorrer na gua, antes que pudessem ser recolhidos por

decantao ou remoo fsica (Abimorad & Carneiro, 2004).

Porm, tais mtodos requerem a manipulao frequente dos peixes, acarretando

em estresse. Alm destes fatores, estes mtodos de coleta podem incorrer no erro de

subestimar a digestibilidade devido aos peixes possurem a caracterstica de absorver os

nutrientes at a regio final do intestino, ou seja, o nus.

Outros autores criaram metdos que visavam a coleta das fezes dentro da gua,

como a cmara metablica (Smith et al.,1971), pipetagem imediata das fezes (Alliot et

al., 1978), decantao, (Cho et al., 1985) ou por filtrao contnua (Choubert et al., 1979;

Choubert et al.,1982). Estes mtodos, mesmo sendo eficientes em diminuir a

mortalidade e o estresse nos animais, tm como principal problema a tendncia a

5

acelerar a lixiviao (De La Noiie & Choubert, 1986), exceto a filtrao contnua, que

o mais eficiente em minizar a lixiviao dos nutrientes na gua.

Todos os mtodos de coleta de fezes existentes apresentam vantagens e

desvantagens, particularmente em relao facilidadeda coleta da amostra e da natureza

representativa das fezes recolhidas. No entanto, a coleta de amostras representativas de

fezes em peixes menores de 1 kg problemtica, tanto no mtodo direto como no

indireto. Como por exemplo, a utilizao de uma cmara de metabolismo (Smith et al.,

1971) impraticvel devido ao tamanho do peixe, como tambm o mtodo dissecao,

devido necessidade do sacrificio dos animais, bem como a dificuldade de coleta.

Mtodos que contam coma coleta de fezes na gua so propensos a

superestimativa do CDA como um resultado da lixiviao dos nutrientes a partir das

fezes (Smith et al., 1980; Brown & Robinson,1989; Spyridakis et al., 1989; Hajen et al.,

1993). Neste contexto, Cho et al.(1982) concluiram que as fezes so mais vulnerveis

lixiviao quando os peletes fecais eram quebrados durante o processo de coleta e

quando o tempo de contato das fezes com a gua maior, entretanto, Satoh et al. (1992)

trabalhando com truta arco-ris (Oncorhynchus mykiss) afirmaram que o tempo de

recuperao fecal tem pouco efeito sobre a lixiviao de nutrientes.

Portanto, as tcnicas de coleta de fezes podem afetar os resultados do CDA.

Windell et al. (1978) e Vens-Cappell (1985), trabalhando com truta arco-ris

(Oncorhynchus mykiss), e Abimorad e Carneiro (2004), trabalhando com pacu

(Piaractus mesopotamicus), demonstraram claramente que os valores de digestibilidade

podem variar de acordo com o mtodo de coleta de fezes. Assim, erros inerentes aos

vrios mtodos devem ser quantificados, a fim de selecionar o mtodo mais apropriado

que gerem dados mais fidedignos de digestibilidade.

6

1.2 MTODOS DE COLETA

A cincia da nutrio de peixes comeou quase 80 anos atrs. Muitos

pesquisadores desde este tempo vem tentado avaliar a eficincia de alimentos para

peixes (Belal et al., 2005), aprimorando tecnologias, metodologias e usando tcnicas

semelhantes s utilizadas para determinao de digestibilidade em animais

homeotrmicos (aves, ovinos, caprinos, bovinos, sunos, entre outros). Porm algumas

destas tcnicas no poderiam ser feitas sem aceitar um nvel de erro significativo devido

aos peixes viverem em ambiente diferente.

Na avaliao de alimentos para animais, desejvel ter um mtodo rpido e

simples para a determinao da digestibilidade, e para os animais domsticos ensaios de

digesto so realizados rotineiramente. Para os peixes, o ambiente aqutico dificulta a

medio do consumo de rao e separao das fezes na gua.

Delmondes & Bomfim (2004), destacaram todas as metodologias de coleta de

fezes de peixes para determinao de coeficientes de digestibilidade, relatando

caractersticas e desvantagens de cada mtodo de coleta.

Uma das metodologias mais utilizadas em trabalhos de digestibilidade o mtodo

caracterizado como decantao, desenvolvido por Cho et al. (1985), sendo tambm

chamado de Sistema Guelph. Consiste de tanque (s) com fundo inclinado ou

afunilado e sistema (s) de drenagem comum a uma nica coluna de decantao (Anexo

I, Figura I). Os peixes so livremente alimentados neste sistema e aps um perodo de

alimentao, as fezes so coletadas por 9-16 h. No final do perodo, a coluna de

sedimentao aberta e as fezes so removidas, sendo seu principal problema a

lixiviao de nutrientes (Cho et al., 1985; Allan et al., 2000). Segundo Storebakken et

al. (1998), o mtodo de decantao adequado para obteno de fezes de peixes

pequenos, porm, um nmero relativamente alto de unidades animais deve ser

7

considerado, j que se tratando de uma coleta com grande quantidade de gua a perda

principalmente por lixiviao, muito alta, superestimando os valores de

digestibilidade.

Mesmo sendo ainda um mtodo muito utilizado, alm do problema de lixiviao o

mtodo de Sistema Guelph ainda tem uma desvantagem em sua metodologia, pois o

contedo fecal acaba ficando aderido em sua estrutura (Abimorad e Carneiro, et al.

2004), principalmente os indicadores inertes, como o xido de crmio, no expressando

assim os valores reais de digestibilidade, j que ela calculada de acordo com a

concentrao deste indicador nas fezes.

Observando os problemas no Sistema Guelph, Choubert et al. (1982) criaram uma

nova tcnica, desenvolvida com o objetivo de minimizar os efeitos estressores para os

peixes causados pelos mtodos j existentes e diminuir as perdas ocorridas por

movimentao do bolo fecal, denominada coleta mecnica (Anexo I, Figura II). Neste

mtodo, a gua passa por uma tela separadora que se move atravs de esteira, separando

todas as fezes e depositando-as em uma caixa de coleta. Porm, neste mtodo

necessrio equipamento especializado e um sistema de drenagem projetado

especialmente para o viveiro ou tanque (Portz et al., 2001).

Outra tcnica desenvolvida para esse tipo de trabalho se trata da pipetagem direta

no fundo do tanque, desenvolvida por Watanable & Ohta (1995), onde os tanques

possuem fundo com leve declividade para acumulao das fezes em determinado ponto

para serem removidas da gua atravs de fina mangueira de pipetagem para uma coluna

separada do tanque. Sua desvantagem est na possibilidade de maior lixiviao dos

componentes das fezes, em virtude do turbilhonamento proporcionado com a sifonagem

e pelo contato direto dos peixes com as fezes possibilitando assim o consumo das

excretas.

8

Nas tcnicas de coleta com os peixes dentro da gua, a lixiviao de materiais para

a gua o nico erro importante, que acarreta na maior estimativa da digestibilidade

(Percival et al.,2001). Segundo Spyridakis et al. (1989), h tendncia dos mtodos que

utilizam material fecal naturalmente evacuado na gua apresentarem valores maiores de

digestibilidade, em razo da lixiviao de nutrientes na gua, como se essa frao de

nutriente tivesse sido aproveitada pelo peixe.

Observando os problemas nas metodologias existentes, tcnicas de coleta de fezes

com o peixe fora da gua foram desenvolvidas para superar o problema de lixiviao

atravs da coleta de fezes diretamente a partir do trato intestinal dos peixes.

Nose et al. (1960) desenvolveu a tcnica denominada como compresso ou

massagem abdominal, onde o peixe previamente anestesiado e as fezes so extradas

atravs de uma cuidadosa compresso ventral. A desvantagem deste mtodo a

possibilidade de contaminao das fezes pela urina, estresse, coleta de fludos do

intestino ou material no digerido ou absorvido, e necessidade de peixes de tamanho

superior (ao redor de 100g) na quantidade mnima de 30 animais (Nose et al.,1961;

Austreng et al., 1978; Storebakken et al., 1998; Percival et al., 2001).

Outro mtodo testado em alguns trabalhos foi denominado suco anal (Lovell et

al., 1977; Windell et al., 1978; Brown et al., 1985), que se trata de uma cnula

introduzida no nus do peixe previamente anestesiado, realizando-se uma leve suco

empregada com o auxilio de uma seringa para coleta fecal na regio posterior do

intestino. A desvantagem desse mtodo se trata do decorrente estresse provocado pela

manipulao excessiva dos peixes e coleta dos fluidos e/ou epitlio intestinal ou de

material no digerido ou absorvido (Percival et al., 2001).

A dissecao outro mtodo de coleta de fezes bastante utilizado, porm a

desvantagem de se ter que sacrificar os animais torna o mtodo invivel, do ponto de

9

vista tico. Os peixes so previamente anestesiados e sacrificados, realizando corte

longitudinal sob a cavidade abdominal para a coleta do contedo fecal na parte terminal

do intestino. O problema desse mtodo est relacionado com a possibilidade de ocorrer

redistribuio de material fecal no trato intestinal aps a eutansia, passando material

menos digerido para o intestino posterior, alm de ser necessria uma quantidade alta de

animais para a coleta de amostras suficiente para anlises (Austreng et al., 1978;

Storebakken et al., 1998; Allan et al., 1999; Percival et al., 2001). Este mtodo pode ser

realizado sem que os peixes passem um perodo de adaptao dieta, possibilitando a

utilizao dos animais imediatamente aps o ensaio de crescimento, quando o estresse

j no prejudicial para o desempenho do peixe.

Cho et al.(1985), trabalhando com truta arco-iris (Oncorhynchus mykiss),

avaliaram a suco anal, extruso e dissecao e observaram que houve subestimao

da digestibilidade dos nutrientes por contaminao com fluido corporal, epitlio

intestinal, e as enzimas em excesso.

Henken et al. (1985) com o objetivo de comparar metodologias de coleta de fezes

com o bagre africano (Aquamonstrus devastadorus), obtiveram material para anlise a

partir das seguintes tcnicas: coleta total (fezes por sedimentao e sem o uso de

marcador); pela dissecao do tero final do intestino dos peixes, a partir de rao

marcada com o Cr2O3, e coleta por sedimentao tambm com rao marcada com o

Cr2O3. Concluram que os valores dos coeficientes de digestibilidade obtidos pelo

ltimo mtodo foram mais seguros.

Portz et al. (2001) observaram que as estimativas de digestibilidade dos

ingredientes da trutas arco-ris (Oncrhynchus mykiss) obtidos a partir de anlises de

fezes coletadas por decantao, teriam valores cerca de 10% inferiores aos da anlise

10

das fezes coletadas diretamente do peixe, o que indica que alguns nutrientes so

lixiviados na gua.

A determinao de um mtodo de coleta de fezes eficiente e que demostre os

valores reais de digestibilidade dos nutrientes no tem s importncia na piscicultura, e

sim para todos os organismos aquticos, como relatado por Mourio et al. (2006), que

trabalharam com diferentes mtodos de coleta de fezes para determinao da

digestibilidade proteica r-touro (Rana catesbeiana), concluram que as informaes

obtidas com uma espcie no devem ser generalizadas exatamente para outras, devido a

fatores especficos como comportamento e consistncia das fezes. Portanto, novos

estudos deveriam ser realizados e podem ser to importantes a ponto de impedir a

utilizao de determinados mtodos.

Desta forma, a coleta de fezes a atividade que exige maior ateno e preciso em

experimentos de digestibilidade, independentemente da escolha do mtodo. Em

trabalhos com a truta arco-ris, Smith et al. (1980) mostraram que significativa

quantidade de nitrognio fecal pode ser lixiviada na gua antes da coleta,

superestimando os coeficientes de digestibilidade. Portanto, um mtodo de coleta de

fezes mais adequado para os estudos de digestibilidade em peixes indispensvel para

que se obtenha preciso nos resultados (Austreng et al., 1978; Smith et al., 1980).

11

2. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ABIMORAD, E.G.; CARNEIRO, D.J. Mtodos de Coleta de Fezes e Determinao dos

Coeficientes de Digestibilidade da Frao Protica e da Energia de Alimentos para o

Pacu, Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887), Revista Brasileira de

Zootecnia, v.33, n.5, p.1101-1109, 2004.

ALLAN, G.J., ROWLAND, S.J., PARKINSON, S., STONE, D.A.J., JANTRAROTAI,

W. 1999. Nutrient digestibility for juvenile silver perch Bidyanus bidyanus:

development of methods. Aquaculture 170, 131145.

ALLAN, G.L.; PARKINSON, S.; BOOTH, M.A.; STONE, D.A.J.; ROWLAND, S.J.;

FRANCES, J.; WARNER-SMITH, R. Replacement of fish meal in diets for

Australian silver perch, Bidyanus bidyanus: I. Digestibility of alternative

ingredients. Aquaculture v.186, p.293310, 2000.

ALLIOT, E.; PASTOREAUDT, A.; PELAEZ HUDLET, J. et al. Utilisation des farines

vgetales et des levedures cultives sur alcanes pour I alimentation du bar

(Dicentrarchus labrax). In: WORLD SYMPOSIUM FINFISH NUTRITION

FISHFEED TECHNOLOGY, 1978, Hambur. Proceedings Berlin: Heenemann,

1978. V. 2, p.229-238.

ARAJO-LIMA, C.A.R.M.; GOMES, L.C. Tambaqui (Colossoma macropomum). In:

BALDISSEROTTO, B., GOMES, L.C. (Org.). Espcies nativas para piscicultura

no Brasil. Santa Maria: Editora UFMS, 2005. p. 175-202.

AUSTRENG, E. Digestibility determination in fish using chromic oxide marking and

analysis of contents from different segments of the gastrointestinal

tract.Aquaculture 13, 265272, 1978.

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15

CAPTULO 2 - DIFERENTES MTODOS DE COLETA DE FEZES SOBRE OS

COEFICIENTES DE DIGESTIBILIDADE APARENTE PARA O TAMBAQUI

(Colossoma macropomum)

2.1 RESUMO

O presente estudo teve como objetivo determinar o melhor mtodo de coleta de

fezes do tambaqui, comparando os mtodos de decantao em diferentes tempos de

coleta (60, 120, 240 e 480 minutos) e o mtodo de dissecao. Foram utilizados oitenta

juvenis de tambaqui (167,546,71g), distribudos em quatro tanques experimentais.

Aps a coleta de fezes pelo mtodo de decantao, os peixes foram sacrificados depois

de receberem cinco refeies com intervalos de duas horas um dia antes do sacrifcio,

sendo o material fecal recolhido aps os cecos pilricos. As variveis avaliadas foram

coeficiente de digestibilidade aparente da protena bruta (CDAPB), matria seca

(CDAMS), fsforo (CDAP) e da energia bruta (CDAEB). Conclui-se que o CDAPB dos

tempos de coleta por decantao no tiveram diferena, porm em comparao entre os

mtodos, o CDAPB foi menor no mtodo de dissecao. Houve diferena significativa

(P

16

2.2 ABSTRACT

The present study aimed to determine the best faeces collection method for

tambaqui by comparing the sedimentation method at different sampling times (60, 120,

240 and 480 minutes) and the dissection method. Eighty tambaqui juveniles (167,54

6,71g) were randomly stocked into four experimental aquaria. After the collection of

faeces by sedimentation, fishes were sacrificed after receiving five meals with intervals

of two hours a day before the sacrifice, and fecal material being collected after the

pyloric caeca. The variables evaluated were apparent digestibility coefficients of crude

protein (ADCCP), dry matter (ADCDM), phosphorus (ADCP) and gross energy (ADCGE).

ADCCP were not affected by sampling time in the sedimentation method. However,

ADCCP were lower in the dissection method compared to sedimentation. There were

significant differences (P

17

2.3 INTRODUO

Vrias metodologias tm sido utilizadas para determinar os coeficientes de

digestibilidade dos nutrientes em ingredientes e raes para peixes. Dentre os mtodos

mais empregados, destacam-se: a) pipetagem direta no fundo do tanque (Watanable &

Ohta, 1995), b) filtragem contnua (Choubert et al., 1979), c) coleta mecnica (Choubert

et al., 1982), d) decantao (Cho et al., 1985), e) extruso (Nose et al., 1960), f) suco

anal (Lovell et al., 1977) e g) dissecao (Austreng et al., 1978).

Trabalhos recentes (Delmondes & Bomfim, 2004), tm demonstrado preocupao

com o estresse a que so submetidos os peixes independente do mtodo utilizado, e

principalmente sobre a confiabilidade de cada mtodo, j que problemas como

contaminao das fezes e lixiviao dos nutrientes podem interferir nos valores reais

dos coeficientes de digestibilidade dos alimentos contidos nas dietas.

Estudos sobre a digestibilidade da protena, energia, matria seca e de minerais

dos principais produtos e subprodutos produzidos no Brasil utilizados na elaborao de

raes so de fundamental importncia nos aspectos nutricional e econmico,

resultando em maior preciso no balanceamento das dietas para organismos aquticos.

Portanto, para determinar a exigncias de peixes, e principalmente do tambaqui

(Colossoma macropomum), fundamental que se conhea o nvel de aproveitamento

dos ingredientes da dieta.

Experimentos de digestibilidade realizados com peixes, especialmente com o

tambaqui (principal espcie nativa do Brasil), ainda so escassos, principalmente no que

diz respeito ao mtodo de coleta que minimize o efeito do ambiente aqutico nos dados

de digestibilidade dos nutrientes. Devido importncia desta espcie para aquicultura

nacional e o reduzido volume de trabalhos que avaliem um mtodo preciso de

determinao da digestibilidade dos nutrientes para o tambaqui. Desta forma, o presente

18

trabalho teve como objetivo determinar a lixiviao dos nutrientes das fezes do

tambaqui e qual o melhor tempo de coleta de fezes. Assim como, comparar dois

mtodos de coleta distintos (decantao e dissecao).

2.4 MATERIAL E MTODOS

2.4.1 rea e animais experimentais

O experimento foi conduzido na Pontifcia Universidade Catlica de Gois

PUC- Campus II, Goinia, no Laboratrio de Produo de Organismos Aquticos -

LAPOA, nos perodos de janeiro a maio de 2012 com durao do perodo experimental

de 30 dias mais sete dias de perodo de adaptao.

Foram utilizados 80 juvenis de tambaqui com peso mdio inicial de

167,546,71g, provenientes do setor de piscicultura da UFG, Campus Samambaia

Goinia GO, onde foi realizada a alevinagem em tanques escavados. Antes do

alojamento, os peixes foram tratados com banhos profilticos de imerso em

permanganato de potssio (KMnO4), com a diluio de um grama/50L de gua, onde

os peixes permaneceram por uma hora segundo a recomendao de Pavanelli (1998).

Aps o banho profiltico, os peixes foram anestesiados com uma soluo de

benzocana (ethyil-p-aminobenzoato) na proporo de 100mg/L de gua (Roubach, et

al. 2001) para efetiva pesagem dos grupos, que foram distribudos aleatoriamente em

grupos de 20 peixes em quatro aqurios com capacidade para 310L cada, abastecidos

com gua de poo artesiano, termostatizados e com aerao constante por turbina de ar,

instalados em sistema de recirculao fechado (Anexo 2, Figura 1), sendo a vazo de

gua das caixas reguladas para 2,5L/min., e troca diria de 30% da gua do sistema.

Estas caixas foram utilizadas somente para alimentao dos peixes.

19

A gua era proveniente de poo artesiano, sendo tratada por filtros fsicos,

ultravioleta e biolgico antes de retornar s caixas. Os parmetros de qualidade de gua

como temperatura, oxignio dissolvido e pH foram monitorados diariamente com

auxlio de oxmetro digital e pHmetro, e, semanalmente, monitorados amnia, nitrito e

nitrato por kit comercial (Alfakit). A temperatura da gua dos aqurios foi mantida

dentro da faixa de conforto para a espcie (27,0 2,0C), sendo aferida s 8:00 e 16:00

horas.

2.4.2 Dieta experimental

A dieta experimental foi confeccionada com ingredientes convencionais de forma

a atender as exigncias nutricionais da espcie, com 28%PB g/kg-1

e 4.300 cal/g/ EB

(Tabela 1). Os valores digestveis da protena e da energia de cada alimento foram

calculados de acordo com os valores de coeficiente de digestibilidade aparente obtidos

para tilpia por Pezzato et al. (2002) e Guimares (2008). Os ingredientes foram modos

em moinho de facas, com peneira apresentando dimetro menor que 0,5mm,

posteriormente foram homogeneizados em misturador automtico, e para confeco dos

grnulos experimentais a mistura recebeu cerca de 40% de gua com temperatura de

aproximadamente 65C, sendo assim imediatamente granulada por meio de um moinho

de carne, empregando-se matrizes para obteno de grnulos com os dimetros de

3,5mm. Aps a peletizao, os grnulos foram desidratados a 55,0C por 24 horas em

estufa com circulao de ar forada, posteriormente, trituradas e o tamanho do grnulo

ajustado ao tamanho da boca do peixe, sendo armazenados por resfriamento a -5,0C.

20

Tabela 1. Composio percentual e proximal da rao experimentala

Ingredientes g kg-1

Farelo de Soja 490

Farinha de Peixe 50

Fub de Milho 270

Farelo de Trigo 60

DL-metionina 1

Cr2O3 1

leo de Soja 65

Fosfto Biclcico 56

Vitamina C 0.8

Sal Comum 1

Premix Vitamnicob 5

BHTc 0.2

Total 1000

28%PB g/kg-1 e 4.300 cal/g/ EB; bPremix vitamnico, nveis de garantia por kg da dieta: vitamina A, 16060 UI; vitamina D3, 4510 UI;

vitamina E, 250 UI; vitamina K, 30 mg; vitamina B1, 32 mg; vitamina B2, 32 mg; pantotenato de

clcio, 80 mg; niacina, 170 mg; biotina, 10 mg; cido flico, 10 mg; vitamina B12, 32 g; vitamina

B6, 32 mg.cAntioxidante Butil Hidroxitolueno.

2.4.3 Metodologia para coleta de fezes pelo mtodo de decantao

Foi avaliada a digestibilidade da matria seca, protena, energia bruta e do

fsforo de uma dieta referncia para o tambaqui de acordo com o procedimento descrito

por Guimares et al. (2008), em que os peixes so alimentados em aqurios fora do

sistema coletor de fezes.

Cada grupo de 20 peixes foi considerado uma unidade experimental, totalizando

quatro repeties. Estes quatro grupos de peixes foram transferidos dos aqurios de

alimentao para os aqurios de coletas por um perodo de cinco dias, necessrio para

obteno de amostras suficientes para realizao das anlises. Os tratamentos foram:

(T1) primeiro perodo (60 min. aps a primeira sedimentao dos pletes fecais); (T2)

segundo perodo (120 min. aps sedimentao dos primeiros pletes fecais); (T3)

terceiro perodo (240 min. aps sedimentao dos primeiros pletes fecais); (T4) quarto

21

perodo (480 min. aps sedimentao dos primeiros pletes fecais). A coleta ocorreu no

perodo noturno aps os peixes terem recebido rao durante o dia.

Os peixes foram alimentados trs vezes ao dia, prximo saciedade, nos

horrios de 8:00, 12:00 e 16:00, durante os sete dias de adaptao. No dia de coleta a

frequncia foi elevada para quatro vezes (9h, 11h, 14h e 17h). Em seguida, com auxlio

de pu, os 20 peixes de cada grupo, eram transferidos para os quatro aqurios de

coleta, permanecendo das 18h00min at 8h00min do dia seguinte.

O sistema de coleta de fezes, com capacidade para 200L de gua, apresentando

formato cnico, que possibilitam a coleta das fezes por gravidade, as quais

sedimentavam em recipiente de rosca acoplado a um registro de esfera no fundo de cada

aqurio (Anexo 2, Figura 3, e 5). Os mesmos eram equipados com termostatos

regulados para 28C e mangueiras acopladas com pedras porosas para aerao, por

turbina de ar comprimido.

Esta transferncia possibilitou a obteno de fezes sem contaminao por

sobras de rao ou acmulo de nutrientes na gua dos aqurios de coleta, pois se

realizava sifonamento das caixas de alimentao antes da transferncia e descartavam-se

os sedimentos dos coletores de fezes aps 30 minutos de permanncia dos peixes nos

coletores. Toda a gua utilizada nos aqurios de coleta foi substituda para evitar

contaminao nas coletas seguintes.

Aps a sedimentao dos primeiros grnulos fecais era observado o horrio para

marcar o tempo de coleta (tratamentos) assim, realiza-se o fechamento do registro e

retirada do recipiente de acrlico, retirando-se o excedente de gua e transferindo para

recipientes de vidro estreis devidamente identificados com os horrios da primeira

visualizao das fezes e do horrio da retirada (correspondente ao tratamento) e

simultaneamente das quatro unidades experimentais (Anexo 2, Figuras 4 e 6), e

22

imediatamente as amostras eram conservadas em freezer (-20C). Com a obteno de

trs pools de amostras por tratamento, realizou-se a pr-secagem (65 C) e as amostras

de fezes foram modas com pistilo de vidro separadamente, sendo retiradas escamas

com auxlio de pina.

Foram obtidas quatro amostras de fezes de cada tratamento por unidade

experimental, das quais foi avaliado o teor de protena bruta (PB), energia bruta (EB),

crmio e do fsforo, determinando a digestibilidade da PB, matria seca, energia e

disponibilidade de fsforo pelo tambaqui.

2.4.4 Metodologia de coleta de fezes pelo mtodo de dissecao

Esta etapa do experimento ocorreu aps o perodo de coleta de fezes por

decantao. Os peixes de todos os grupos passaram por um perodo de reabilitao de

cinco dias recebendo a dieta sem manejo que promovesse estresse e comprometesse o

trnsito gastrointestinal. Aps esse perodo, intensificou o fornecimento da dieta

recebendo 6 refeies com intervalos de 2 horas um dia antes do sacrifcio. No dia do

sacrifcio, os animais foram novamente alimentados para estimulao do bolo fecal 2

horas antes do sacrifcio. A eutansia dos peixes foi realizada por meio de

aprofundamento do plano anestsico com alta dose de benzocana e corte da medula,

posteriormente eviscerados e o trato digestrio dissecado cuidadosamente para a

retirada do material fecal aps os cecos pilricos. As fezes foram identificadas e

congeladas para posterior anlise como descrito anteriormente (Anexo 2, Figura 7, 8 e

9).

2.4.5 Clculo dos CDAs e anlises qumicas

Os CDAs foram determinados por meio do mtodo de coleta parcial de fezes,

utilizando-se o xido de crmio como indicador inerte na concentrao de 0,1%, crmio

23

recomendado por Bremer-Neto et al. (2005). Aps a realizao da anlise quantitativa

do xido de crmio, e de posse dos valores de protena e energia presentes nas dietas e

nas fezes, os CDA dos nutrientes foram calculados pela frmula proposta por Nose

(1966):

CDA (%) = 100100

%Cr2O3 na dieta

X

% de nutrientes ou EB nas fezes

% Cr2O3 nas fezes % de nutrientes ou EB na dieta

A determinao da digestibilidade da matria seca foi efetuada de acordo com a

frmula apresentada abaixo:

CDA MS (%) = 100 x (1 - % Cr2O3 na dieta / % Cr2O3 nas fezes)

As anlises qumico-bromatolgicas foram realizadas no Laboratrio de Solos e

Limnologia da PUC-GO e no Laboratrio de Bromatologia do Departamento de

Produo Animal da Escola de Veterinria UFG, Campus Samambaia, segundo os

protocolos do A.O.A.C. (1995), sendo a protena pelo mtodo de Kjeldhal, o fsforo e

crmio por espectrofotometria de luz a 420 e 550 mm, respectivamente. A concentrao

de crmio nas raes e nas fezes foram realizadas de acordo com Bremer-Neto et al.

(2005) A energia foi determinada com bomba calorimtrica realizada pelo Laboratrio

de Enzimologia e anlises bromatolgicas do Instituto de Qumica e Biotecnologia da

UFAL,

2.4.6 Delineamento experimental e anlise estatstica dos dados

O delineamento estatstico utilizado no experimento foi o inteiramente

casualisado com cinco tratamentos (mtodos de coleta e tempo de coleta) e quatro

repeties. Os resultados dos estudos foram avaliados por meio da tcnica da anlise de

24

varincia e, quando significativo, foi aplicado o teste de comparaes mltiplas de

mdias de Student Newman Kews (SNK). Para determinar o comportamento das

variveis frente aos diferentes perodos de coleta, foi utilizada a anlise de regresso,

excluindo para esta anlise os dados do mtodo de dissecao. Todas as anlises foram

realizadas utilizando o procedimento GLM do pacote computacional SAS, ao nvel de

5,0% de significncia.

2.5 RESULTADOS

Os valores mdios dos coeficientes de digestibilidade aparente das fezes do

tambaqui sobre diferentes tempos de coleta (60, 120, 240 e 480 minutos) pelo mtodo

de decantao e dissecao esto apresentados na Tabela 2.

Tabela 2. Valores mdios de coeficiente de digestibilidade aparente dos nutrientes

obtidos pelos mtodos de dissecao e decantao para o tambaqui1

Mtodos de

coleta

Coeficientes de Digestibilidade2

CDAMS

(%)

CDAPB

(%)

CDAP

(%)

CDAEB

(%)

Dissecao 68,62 2,61 d 86,77 1,27 b 54,21 3,37 a 70,45 1,14 d

Decantao

60 min 77,64 2,06 a 89,84 1,36ab 19,59 2,83 d 84,62 0,93 a

120 min 75,81 0,99 ab 91,10 1,33 a 39,56 2,51 b 82,72 0,54 ab

240 min 72,82 2,13 bc 87,71 1,93 ab 30,38 3,01 c 78,57 1,91 c

480 min 71,11 2,41 dc 90,74 2,51 a 59,34 3,25 a 81,15 2,60 b

Linear P < 0,0001 ns P < 0,0001 ns

Quadrtico P < 0,0001 ns ns P < 0,0001

1 Teste linear e quadrtico apenas avaliado nos intervalos de coleta do mtodo de decantao

ns No significativo ao nvel de 5% de probabilidade, SNK

2Coeficiente de digestibilidade aparente da protena bruta (CDAPB), fsforo (CDAP), matria seca (CDAMS) e energia bruta

(CDAEB).

Neste trabalho, os mtodos de coleta e o tempo de permanncia das fezes na gua

no mtodo de decantao influenciaram significativamente os coeficientes de

25

digestibilidade (P

26

Os valores do CDAP no ltimo horrio de coleta por decantao (480 minutos)

(59,34%) no diferiu do mtodo de dissecao (54,21%) (P

27

Grfico 3. Coeficientes de digestibilidade aparente da energia bruta nas fezes do Tambaqui sobre diferentes tempos

de coleta (60, 120, 240 e 480 minutos) pelo mtodo de decantao.

2.6 DISCUSSO

Os mtodos de determinao da digestibilidade so utilizados pelos nutricionistas

como forma de avaliar o valor nutricional dos alimentos, sendo ferramenta importante

para a seleo de ingredientes que possam compor a dieta, e ainda, um dado

extremamente importante quando se pretende formular dietas ambientalmente corretas.

Entretanto, dependendo do mtodo de coleta de fezes utilizado para avaliao da

digestibilidade, pode apresentar maior ou menor discrepncia dos resultados.

Apesar da importncia da digestibilidade, poucos so os estudos que avaliam

essas metodologias para espcies de peixes nativas do Brasil ou da Amrica Latina,

principalmente o tambaqui. At o presente momento, apenas trs trabalhos contriburam

para a determinao da digestibilidade e a velocidade de trnsito pelo trato

gastrointestinal do tambaqui (Silva et al., 1999; Silva et al., 2000; Silva et al., 2003).

Portanto, a utilizao de referncias metodolgicas de coleta de fezes para o tambaqui

so baseadas em atribuies a diferentes espcies de peixes. Segundo Mourin et al.

0 100 200 300 400 500 600

78

79

80

81

82

83

84

85

86

87

88

Y =88.45-0.06473 X+1.03002E-4 X2

R2 = 0.975

CD

A d

a e

ne

rgia

bru

ta (

%)

Intervalos de coleta (minutos)

28

(2006), Informaes obtidas com uma espcie no devem ser generalizadas exatamente

para outras, devido a fatores especficos como comportamento e consistncia das fezes.

Novos estudos deveriam ser realizados a ponto de evitar a utilizao de determinados

mtodos, e apontar metodologias que comprovem de forma fidedigna os CDA dos

nutrientes (protena, matria seca, energia bruta e fsforo) com uma maior preciso para

a formulao de dietas especificas para o tambaqui.

possvel observar uma queda dos valores de CDA da MS medida que o tempo

de coleta foi aumentado, afirmando assim, a influncia do tempo de coleta sobre o teor

de matria seca das fezes. Este resultado est diretamente relacionado com a

concentrao de crmio nas fezes, que foi diminuindo gradativamente no contedo

fecal. Este fato pode ser explicado pelo possvel efeito residual do crmio no recipiente

coletor de fezes, j que este no era lavado entre uma coleta e outra. Essa possibilidade

foi relatada por Percival et al. (2001) que observaram que o crmio apresenta afinidade

por materiais plsticos e acrlicos, podendo assim interferir nos valores de

digestibilidade.

O CDAMS da dissecao (68,62%) foi menor que o encontrado para o CDA da MS

pelo mtodo de decantao. Esse resultado pode ser explicado pelo fato do alimento no

ter sido completamente digerido e absorvido dentro do trato digestrio, conforme

relatado por Austreng et al. (1978).

Comparando-se com os resultados de digestibilidade da protena da dieta obtida

pelo mtodo de decantao em relao ao mtodo de dissecao, os valores

apresentaram-se pouco divergentes. Por outro lado, os valores mdios sugerem que, no

sistema de decantao de fezes os intervalos de coleta podem no influenciar nos

valores de CDAPB, sendo esse nutriente pouco influenciado pela lixiviao. Entretanto

observou-se uma reduo do valor mdio do CDAPB do mtodo de dissecao em

29

comparao aos valores mdios do mtodo de decantao. Resultado que pode ser

atribudo segundo Inaba et al. (1962) ao nitrognio presente nas fezes, proveniente de

enzimas digestivas ou de clulas da descamao da parede do intestino e, ainda, do

alimento que seria digerido ao longo do trato digestrio. Assim, este fato pode explicar

os menores valores de CDAPB que reduz o valor de digestibilidade da protena bruta.

No presente estudo, quanto maior o intervalo de coleta, maior o CDA do fsforo,

comprovando assim que este elemento, por ser um mineral solvel (Gillis et al.,1962;

Sullivan et al., 1992) pode sofrer influncia do tempo de coleta, aumentando a

lixiviao do mesmo para a gua.

Os dados do CDAP foram similares no mtodo de dissecao e no mtodo de

decantao no intervalo de 480 min. Estes resultados no podem ser explicados

logicamente, j que, bem conhecido que o aumento da permanncia das fezes na gua

promove maior lixiviao de compostos solveis, aumentando desta forma o CDA dos

nutrientes (Potrich, 2011; Bueno, 2011; Diemer et al., 2011). Entretanto, o fsforo

apresentou maior digestibilidade quando coletado no trato digestrio, fato este, que no

era esperado.

O fsforo absorvido tanto em processo passivo como ativo nos peixes,

entretanto, seu local de absoro varia entre as espcies, podendo ocorrer ao longo de

todo o trato digestrio, assim como em compartimentos especializados como nos cecos

pilricos dos salmondeos (Sugiura & Ferraris, 2004; Hua & Bureau, 2010). A alta

digestibilidade observada no mtodo de dissecao pode estar relacionada com uma

eficiente absoro deste mineral nos cecos pilricos do tambaqui, entretanto so

necessrios maiores estudos sobre a fisiologia digestiva desta espcie para confirmar

esta hiptese. Deve-se ressaltar, ainda, que devido ao pequeno volume de fezes

produzidos pelos peixes no perodo de 60 min de permanncia na gua possa ainda ter

30

afetado a concentrao de crmio nas fezes coletadas, podendo indicar que este

marcador possa no ser um indicador adequado para estudos de digestibilidade com o

tambaqui, ou mesmo que o nvel de 0,1% de crmio nas dietas no seja o mais

adequado.

A energia bruta est relacionada diretamente com concentrao de compostos

orgnicos presentes nos alimentos, ou seja, protena, lipdeos e carboidratos que

compem a matria seca. Estes compostos apresentam diferentes graus de combusto,

os quais fornecem energia em maior ou menor grau aos animais. Portanto, o CDA da

MS possui alta correlao com o CDA da EB. Desta forma, a reduo no CDA da EB

com o aumento do tempo de coleta de fezes apresentou comportamento similar aos

dados do CDA da MS do presente estudo. Entretanto, uma leve diferena no

comportamento das variveis foi observada aps 314 min, com o aumento no CDA da

EB (Grfico 3). Este fato pode estar relacionado com a possvel lixiviao de alguns

compostos que no foram avaliados, como lipdeos e carboidratos, reduzindo o teor de

EB nas fezes e assim, aumentado o CDA da EB.

Neste estudo foi observado que os diferentes mtodos de coleta de fezes avaliados

apresentaram baixos coeficientes de variao, indicando a possibilidade de utilizao

destas metodologias para a coleta de fezes do tambaqui. Como pode ser observado, o

tambaqui apresenta fezes de formato granular sem cobertura mucosa. Este fato inerente

espcie pode influenciar os resultados de digestibilidade, pois a perda dos compostos

orgnicos pode ser maior pela estrutura fsica das fezes.

Todos os nutrientes esto sujeitos ao processo de lixiviao quando as fezes

permanecem por curtos perodos no corpo aqutico. Este fato pde ser observado com

diversas espcies de peixes como tilpia do Nilo, truta, salmo, pacu, e peixes

siluriformes (De La Noue&Choubert, 1986; Hajen et al., 1993a; Watanabe et al.,1996;

31

Storebakken et al., 1999; Pezzato et al., 2002; Abimorad & Carneiro, 2004) e tambm

em anfbios, como descrito por Mourin et al. (2006) que trabalharam com diferentes

mtodos de coleta de fezes para determinao da digestibilidade protica em alimentos

para r-touro (Rana catesbeiana). Afirmaram que as diferentes metodologias

influenciaram os valores dos coeficientes de digestibilidade aparente da frao protica

da dieta.

Silva et al. (1999) no encontraram diferenas significativas avaliando os mtodos

de decantao e o mtodo de dissecao para a determinao da digestibilidade de

alimentos para o tambaqui, o que contradiz com o resultado encontrado no presente

estudo.

Os CDAs apresentados para a MS (68,62%) e EB (70,45%) no mtodo de

dissecao demostram a possvel digesto parcial destes nutrientes. Resultados de

pesquisa com o salmo e truta arco-ris (Inaba et al., 1962; Hajen et al., 1993;

Storebakken et al., 1998), tem indicado que o alimento presente na poro posterior do

intestino mostra-se parcialmente digerido, sendo a digestibilidade obtida pelo mtodo

de dissecao subestimada , uma vez que a digesto e a absoro ocorre at o final do

intestino.

As diferenas encontradas nesse estudo confirmam os resultados obtidos por

Windell et al.(1978) com juvenis de trutas arco-ris. Esses autores tambm compararam

esses dois mtodos para estudo de digestibilidade e encontraram coeficientes de

digestibilidade significativamente menores para a matria seca, protena bruta e extrato

etreo pelo mtodo de dissecao, possivelmente pela provvel contaminao da

amostra por secrees naturais do animal. Pode-se inferir, portanto, que tais secrees

digestrias aumentaram a concentrao de MS, PB e EB, diluram o marcador externo

(Cr2O3) e possibilitaram essas distores nos resultados.

32

Colaborando com os resultados do presente trabalho, Spyridakis et al. (1989)

concluram que o mtodo de coleta de fezes com sistema de decantao foi o mais

apropriado para trabalhos com digestibilidade para peixes, pois no havia manipulao

dos peixes, no provocando estresse, e as fezes eram coletadas automaticamente,

medida que eram evacuadas.

Estudo realizado por Abimorad et al. (2004), foram avaliados quatro mtodos de

coleta de fezes (dissecao, extruso, sistema Ghelph e sistema de Guelph modificado)

para o pacu. Relataram que todos os mtodos estudados podem ser adotados com

segurana para a espcie estudada, desde que sejam rigorosamente aplicados, e o

intervalo de tempo entre as coletas de fezes em estudos de digestibilidade, por

intermdio dos sistemas de Guelph, no ultrapasse 30 minutos.

Resultado semelhante foi encontrado por Hajen et al. (1993a), que determinaram a

digestibilidade de diferentes ingredientes por meio da obteno de fezes pelo Sistema

Guelphe por dissecao, para o chinook salmon (Oncorhincus tshawytscha), e no

encontraram diferenas significativas entre os valores obtidos pelos dois mtodos.

Apesar de ter sido encontrado diferena nos CDAs dos nutrientes entre os

mtodos de coleta, a diferena numrica no foi to acentuada, demostrando assim a

possvel utilizao de ambos os mtodos. Um dos fatores que podem contribuir para a

reduo dos nveis de lixiviao dos nutrientes pode ser a incluso de aglutinantes nas

dietas para determinao da digestibilidade de modo a melhorar a consistncia das fezes

dessa espcie. Estudos esto sendo focados nesta rea (Cantelmo et al., 1999; Cantelmo

et al., 2002), comprovando que a adio de aglutinantes melhora significativamente a

resistncia fsica dos grnulos fecais, sendo necessrio assim maiores estudos sobre as

concentraes e eficincia sobre a utilizao deste aditivo para cada espcie, como

alternativa para minimizar os efeitos da lixiviao.

33

2.7 CONCLUSO

Ambos os mtodos de coleta de fezes estudados podem ser adotados, desde que

usados de forma criteriosa. A coleta que tem por objetivo determinar macros nutrientes

(protena, energia bruta e matria seca) pelo mtodo de decantao no deve ultrapassar

314 minutos. Enquanto para o fsforo, o ideal que sejam coletadas as fezes por

decantao at 60 minutos ou pelo mtodo de dissecao utilizando o tero final do

trato gastrointestinal.

34

2.8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ABIMORAD, E.G.; CARNEIRO, D.J. Mtodos de Coleta de Fezes e Determinao dos

Coeficientes de Digestibilidade da Frao Protica e da Energia de Alimentos para o

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CANTELMO, O.A.; PEZZATO, L.E.; BARROS, M.M. et al. Caractersticas fsicas de

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1978.

37

Anexo I

Figura I. Sistema Guelph: (Fonte: CHO, C.Y., COWEY, C.B., WATANABE, T.,

1985.Methodological approaches to research and development. In: Cho, C.Y., Cowey,

C.B., Watanabe, T. (Eds.), Finfish Nutrition in Asia. IDRC, Ottawa, Canada, pp. 1080.

Figura II. Coleta mecnica: (Fonte: CHOUBERT, G., DE LA NOUE Jr., J.,Luquet, P.,

1982. Digestibility in fish: improved device for the automatic collection of feces.

Aquaculture 29, 185189.)

38

Anexo II

Figura I. Aqurio de alimentao (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura II. Animais experimentais (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura III. Incubadoras adaptadas para coleta de fezes por decantao (Fonte: Arquivo

Pessoal).

Figura IV. Coleta noturna de contedo fecal (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura V. Recipiente coletor de fezes acoplado a incubadora (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura VI. Identificao e armazenamento das amostras fecais (Fonte: Arquivo

Pessoal).

I II III

IV V VI

VII VIII IV

39

Figura VII. Trato digestrio do tambaqui todo removido (Fonte: Arquivo Pessoal).

Figura VIII. Corte longitudinal do trato digestrio at o cecos pilricos (Fonte: Hugo

Vinicius Pereira).

Figura IX. Remoo das fezes de dentro do trato digestrio com pincel (Fonte: Hugo

Vinicius Pereira).

7

Anexo III

Normas para preparao de trabalhos cientficos para

publicao na Revista Brasileira de Zootecnia

Estrutura do artigo (artigo completo)

O artigo deve ser dividido em

sees com ttulo centralizado, em

negrito, na seguinte ordem: Abstract,

Introduction, Material and Methods,

Results and Discussion, Conclusions,

Acknowledgments (opcional) e

References.

No so aceitos subttulos. Os

pargrafos devem iniciar a 1,0 cm da

margem esquerda.

Formatao de texto

O texto deve ser digitado em fonte

Times New Roman 12, espao duplo

(exceto Abstract e Tabelas, que devem ser

elaborados em espao 1,5), margens

superior, inferior, esquerda e direita de

2,5; 2,5; 3,5; e 2,5 cm, respectivamente.

O manuscrito pode conter at 25

pginas. As linhas devem ser numeradas

da seguinte forma: Menu ARQUIVO/

CONFIGURARPGINA/LAYOUT/N

MEROS DE LINHA.../ NUMERAR

LINHAS (numerao contnua) e a

paginao deve ser contnua, em

algarismos arbicos, centralizada no

rodap.

O arquivo dever ser enviado

utilizando a extenso.doc. No enviar

arquivos nos formatos pdf, docx, zip ou

rar.

Manuscritos com nmero de pginas

superior a 25 (acatando-se o mximo de

30 pginas) podero ser submetidos

acompanhados de carta encaminhada ao

Editor-chefe contendo justificativa para o

nmero de pginas excedentes. Em caso

de aceite da justificativa, a tramitao

ocorrer normalmente e, uma vez

aprovado o manuscrito, os autores devero

arcar com o custo adicional de publicao

por pginas excedentes. Caso no haja

concordncia com a justificativa por parte

do Editor-chefe, o manuscrito ser

reencaminhado aos autores para

adequao s normas, a qual dever ser

realizada no prazo mximo de 30 dias. Em

caso do no-recebimento da verso neste

prazo, proceder-se- ao cancelamento da

tramitao (no haver devoluo da taxa

de tramitao).

Ttulo

Deve ser preciso, sucinto e

informativo, com 20 palavras no mximo.

Digit-lo em negrito e centralizado,

segundo o exemplo: Valor nutritivo da

cana-de-acar para bovinos. Deve

apresentar chamada de rodap 1

somente quando a pesquisa foi financiada.

No citar parte da tese...

Autores

A RBZ permite at oito autores. A

primeira letra de cada nome/sobrenome

deve ser maiscula (Ex.: Anacleto Jos

Benevenutto). No list-los apenas com as

iniciais e o ltimo sobrenome (Ex.: A.J.

Benevenutto).

Digitar os nomes dos autores

separados por vrgula, centralizado e em

negrito, com chamadas de rodap

7

numeradas e em sobrescrito, indicando

apenas a instituio qual estavam

vinculados poca de realizao da

pesquisa (instituio de origem), e no a

atual. No citar vnculo empregatcio,

profisso e titulao dos autores. Informar

o endereo eletrnico somente do

responsvel pelo artigo.

Abstract

Deve conter no mximo 1.800

caracteres com espaos. As informaes

do abstract devem ser precisas. Abstracts

extensos sero devolvidos para adequao

s normas.

Deve sumarizar objetivos, material e

mtodos, resultados e concluses. No

deve conter introduo nem referncias

bibliogrficas.

O texto deve ser justificado e

digitado em pargrafo nico e espao 1,5,

comeando por ABSTRACT, iniciado a

1,0 cm da margem esquerda.

Key Words

Apresentar at seis (6) Key Words

imediatamente aps o abstract, em ordem

alfabtica. Devem ser elaboradas de modo

que o trabalho seja rapidamente resgatado

nas pesquisas bibliogrficas. No podem

ser retiradas do ttulo do artigo. Digit-las

em letras minsculas, com alinhamento

justificado e separadas por vrgulas. No

devem conter ponto-final.

Introduction

Deve conter no mximo 2.500

caracteres com espaos, resumindo a

contextualizao breve do assunto, as

justificativas para a realizao da pesquisa

e os objetivos do trabalho. Evitar

discusso da literatura na introduo. A

comparao de hipteses e resultados

deve ser feita na discusso.

Trabalhos com introduo extensa

sero devolvidos para adequao s

normas.

Material and Methods

Se for pertinente, descrever no

incio da seo que o trabalho foi

conduzido de acordo com as normas ticas

e aprovado pela Comisso de tica e

Biossegurana da instituio.

Descrio clara e com referncia

especfica original para todos os

procedimentos biolgicos, analticos e

estatsticos. Todas as modificaes de

procedimentos devem ser explicadas.

Results and Discussion

facultada ao autor a feitura desta

seo combinando-se os resultados com a

discusso ou em separado, redigindo duas

sees, com separao de resultados e

discusso.

Dados suficientes, todos com algum

ndice de variao, devem ser

apresentados para permitir ao leitor a

interpretao dos resultados do

experimento. Na seo discusso deve-se

interpretar clara e concisamente os

resultados e integr-los aos resultados de

literatura para proporcionar ao leitor uma

base ampla na qual possa aceitar ou

rejeitar as hipteses testadas.

Evitar pargrafos soltos, citaes

pouco relacionadas ao assunto e

cotejamentos extensos.

8

Conclusions

Devem ser redigidas em pargrafo

nico e conter no mximo 1.000

caracteres com espao.

Resuma claramente, sem

abreviaes ou citaes, as inferncias

feitas com base nos resultados obtidos

pela pesquisa. O importante buscar

entender as generalizaes que governam

os fenmenos naturais, e no

particularidades destes fenmenos.

As concluses so apresentadas

usando o presente do indicativo.

Acknowledgments

Esta seo opcional. Deve iniciar

logo aps as Concluses.

Abreviaturas, smbolos e unidades

Abreviaturas, smbolos e unidades

devem ser listados conforme indicado na

pgina da RBZ, link Instrues aos

autores, Abreviaturas.

Deve-se evitar o uso de abreviaes

no consagradas, como por exemplo: o

T3 foi maior que o T4, que no diferiu do

T5 e do T6. Este tipo de redao muito

cmoda para o autor, mas de difcil

compreenso para o leitor.

Os autores devem consultar as

diretrizes estabelecidas regularmente pela

RBZ quanto ao uso de unidades.

Estrutura do artigo (comunicao e

nota tcnica)

Devem apresentar antes do ttulo a

indicao da natureza do manuscrito

(Short Communication ou Technical

Note) centralizada e em negrito.

As estruturas de comunicaes e

notas tcnicas seguiro as diretrizes

definidas para os artigos completos,

limitando-se, contudo, a 14 pginas de

tamanho mximo.

As taxas de tramitao e de

publicao aplicadas a comunicaes e

notas tcnicas sero as mesmas destinadas

a artigos completos, considerando-se,

porm, o limite de 4 pginas no formato

final. A partir deste, proceder-se-

cobrana de taxa de publicao por pgina

adicional.

Tabelas e Figuras

imprescindvel que todas as

tabelas sejam digitadas segundo menu do

Microsoft Word Inserir Tabela, em

clulas distintas (no sero aceitas tabelas

com valores separados pelo recurso

ENTER ou coladas como figura). Tabelas

e figuras enviadas fora de normas sero

devolvidas para adequao.

Devem ser numeradas

sequencialmente em algarismos arbicos e

apresentadas logo aps a chamada no

texto.

O ttulo das tabelas e figuras deve

ser curto e informativo, evitando a

descrio das variveis constantes no

corpo da tabela.

Nos grficos, as designaes das

variveis dos eixos X e Y devem ter

iniciais maisculas e unidades entre

parnteses.

Figuras no originais devem conter,

aps o ttulo, a fonte de onde foram

extradas, que deve ser referenciada.

As unidades, a fonte (Times New

Roman) e o corpo das letras em todas as

figuras devem ser padronizados.

Os pontos das curvas devem ser

represen