Disciplina: Preparações citológicas e análises citogenéticas Maria Isabel Afonso da Silva P ó...
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Disciplina: Preparações citológicas e análises citogenéticas
Maria Isabel Afonso da Silva
Pós-Graduação em Genética
Basofilia e Acidofilia: coloração do Panótico
Substratocatiônico
Substratoaniônico
Coranteaniônico
Corantecatiônico
Acidofilia
Basofilia
Afinidade eletrostática: um corante ionizado em uma solução reage com um substrato de carga
iônica oposta.
Reações Citoquímicas Mediadas por Ligações Eletrostáticas
Basofilia Corantes Básicos (Catiônicos)
Azul de metileno
Azul de toluidina
Azul de alcian
Substrato carregado negativamente (aniônico) reage eletrostaticamente com um corante carregado positivamente (catiônico).
Corantes:
Basofilia
Fosfatos
(ácidos nucléicos)
Sulfatos
(Glicosaminoglicanos sulfatados)
Carboxilas
(Proteínas e açúcares ácidos)
Grupamentos negativos
Basofilia
Xilydine Ponceau
Sírius Red
Orceína
Fast green
Os corantes reagem com os elementos que possuem cargas positivas na célulaEx: proteínas, que podem apresentar radicais básicos de seus aminoácidos ionizados (NH3+).
Reação de Acidofilia - Corantes ácidos (Aniônicos)
Grupamentos se ionizam na dependência de pHs diferenciados
Obtidos a partir de solução tampão em que os corantes são diluídos
Reação de Acidofilia
SUBSTRATO CORANTE EXEMPLOS
BASOFILIA
- aniônico
+ catiônico
- Azul de Toluidina - Azul de metileno - Azul de alcian - Hematoxilina
ACIDOFILIA
+ catiônico
- aniônico
- Xylidine ponceau - Sirius red - Fast Green - Eosina - Orceína
Hematoxilina (+)
Substratos (-)
Núcleos
(grupam/os fostato do DNA e RNA)
ácidos nucleicos, aminoácidos ácidos (aspártico, glutâmico).
Azul
Eosina (-)
Substratos (+)
Citoplasma
(grupam/o NH2+)
aminoácidos básicos (lisina, arginina, histidina)
Rosa
Hematoxilina Eosina
(Mus muscullus) (ASSIS & AZEREDO-
OLIVEIRA, 2002)
Hematoxilina Eosin
G
A
Ep
ML
V
A
L
Normal
Próstata
5.0 µm
5.0 µm
Glândulas acessórias de morcego
Basofilia: Como a hematoxilina- grupamentos fosfatos dos ácidos nucléicos (Núcleo)
Como a eosinaAmino de resíduos protéicos (NH3)- (núcleo e Citoplasma)
Acidofilia:
• Coloração de rotina para análise geral da morfologia das células sanguíneas• Facilita a identificação e diferenciação dos leucócitos
Panótipo (Hematocor-BiológicaR)
Reação de Acidofilia/Basofilia-Mediadas por Ligações Eletrostáticas
PANÓTICO RÁPIDO LB
1)Finalidade:Conjunto para coloração rápida em hematologia.
2) Princípio:A extensão hematológica é submetida à ação de um fixador e duas soluções corantes, por meio de imersões, ao final da última, encontra-se pronto para leitura.
CORANTE RAPIDO PARA HEMATOLOGIA COM1 FIXADOR-TRIARILMETANO E CORANTES / 2-XANTENO / 3-TIAZINA (de 500 ml)
O material deve ser mantido em temperatura ambiente, em local fresco, seco e protegido da incidência direta de luz solar
Panótico rápido 1: compõe-se por uma solução de triarilmetano a 0,1%. Panótico rápido 2: compõe-se por uma solução de xantenos a 0,1%. Panótico rápido 3: compõe-se por uma solução de tiazinas a 0,1%.
Phrynops geoffroanus ou “Cágado-de-Barbelas”
Amostras Sanguíneas
Punção Cardíaca
Seio venoso cervical
Descartada a primeira gota – técnica de esfregaço – extensões sangüíneas - fixação.
Hemograma
• Contagem de trombócitos• Contagem diferencial dos leucócitos:
- monócitos
- linfócitos
- neutrófilos
- azurófilos
- heterófilos
- eosinófilos
- basófilos
Células Vermelhas de Quelônios
Atuam na inflamação, promovem fagocitose; como célula hemostática
Monócito• Combate a doenças infecciosas. • 3% a 20%
Linfócitos
• Citoplasma basofílico.• Resposta imune - infecção viral.•15% a 90%
Neutrófilo
• Respondem à infecções bacterianas.• 0,5% a 10%
Azurófilo+Monócito
2% a 5%
Células brancas de Quelônios
Eosinófilo+Heterófilo
• Encontrados em infecções parasitárias.• 7% a 20%
Heterófilo
• Combate a infecções bacterianas.• 20% a 40%
Basófilo
• Reações imunes. • 10% a 25%
Células brancas de Quelônios
Constituem o maior nº de células do sangueEm média 4,5 milhões na mulher e 5,5 milhões no homem.Medem aproximadamente 7,5 um de diâmetro
Agranulócitos:• Núcleo sem segmentação e apenas granulações azurofílicas, quase imperceptíveis: • linfócitos e monócitos.
Granulócitos:• Núcleos lobulados de forma variável (polimórficos)• grânulos citoplasmáticos proeminentes, cujas características tintoriais diferem conforme a classe à qual pertence o granulócito: • neutrófilos, eosinófilos ou basófilos.
Neutrófilo
• 40-70%• Medem 12-15um de diâmetro.• O citoplasma é acidófilo, com muitos grânulos finos. • O núcleo possui cromatina em grumos, com 2-5 lóbulos distintos• Função fagocitária.
Linfócito
•20-50%• Medem de 6-12 um de diâmetro.• Possuem citoplasma basófilo, pequeno, escasso. • O núcleo apresenta-se esférico com cromatina bastante condensada.Linfócitos T: imunidade celularLinfócitos B: produção de anticorpos.
Monócito
•2-10%• diâmetro de 12-20 um.• Apresenta um núcleo irregular, frequentemente lobulado, e citoplasma cinza-azulado opaco, com grânulos azurófilos finos.• São células precursoras do sistema fagocítico mononuclear.
Eosinófilo
•0-8%• São ligeiramente maiores do que os neutrófilos: 12-17 um.• O núcleo é geralmente bilobulado, mas pode ser trilobulado.• Os grânulos são esféricos e maiores, preenchem o citoplasma e coram-se de avermelhado (eosina).• São importantes nas doenças alérgicas e parasitárias
Basófilo
• 0-3%• Apresentam o citoplasma com granulações pretas e grandes, irregulares, que têm afinidade por corantes básicos.• O núcleo tem dois segmentos, geralmente encobertos pelas granulações.• Estão envolvidos nas reações imediatas de hipersensibilidade (asma).
Plaquetas
• São pequenos fragmentos citoplasmáticos presentes no sangue circulante. • Medem 2-4um de diâmetro.• Atuam na coagulação sanguínea, na retração e dissolução de coágulos