Resumo: 05.001

Effects of streptozotocin–induced diabetes on muscarinic acethylcholine receptors in the rat hippocampus.

Autores 1DACOSTA, A. K. T.

1, ALPONTI, R. F.

1, SILVEIRA, P. F.

1, ABDALLA, F. M. F.

1, ABDALLA, F.

M. F. 1 Laboratório de Farmacologia - IB

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq and CAPES

Resumo Introdução Metabolic syndrome is close related to diabetes mellitus type 2, obesity and neurodegenerative processes, being a serious public health problem. In turn, muscarinic acethylcholine receptors (mAChRs) in the hippocampus participate decisively in the modulation of cognitive functions, learning and memory, which are compromised in neurodegenerative processes (Auton. Autacoid Pharmacol. 26: 219, 2006). Diabetes-induced muscarinic M1 receptor downregulation was reported previously in the cerebral cortex (J. Ethnopharmacol. 116: 296, 2008), brainstem (Eur. J. Pharmacol. 608: 14, 2009) and pancreatic islets (Biogerontology 11: 151, 2010) of streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats. At present, the effects of hyperglycemia on the expression of mAChRs have not been explored in the hippocampus. Objetivos The present investigation reports the effect of STZ–induced diabetes on the expression and affinity of mAChRs. Código de Experimentação Animal no. 953/12 Código de Experimentação Humana Métodos To induce diabetes, STZ diluted in citrate buffer pH 4.5 was intraperitoneally (ip) administered (50 mg/kg BM) between 3:00 and 4:00 h of light period to weaned 21-25 days old male Wistar rats that had been fasted for 18 h. The normal control group received only citrate buffer. After 30 h, STZ-injected animals with blood glucose levels higher than 200 mg/dL (STZ-diabetic), and those injected only with citrate buffer with blood glucose levels between 60 and 90 mg/dL (control), were selected. The experimental procedures were conducted according to guidelines for the care and use of laboratory animals as approved by the Research Ethical Committee from Instituto Butantan (no. 953/12). Resultados In experiments of saturation, hippocampus membranes, obtained from control and STZ-diabetic rats at 140 days of age, were incubated with [3H]QNB (0.05-8.0 nM) in the absence and presence of atropine (1 mM) (30°C/1h). Scatchard analysis of specific binding yielded a dissociation constant (KD) of 0.48 ± 0.11 (n=3) and 0.10 ± 0.01 nM (n=2), respectively, for control and STZ-diabetic. The binding capacity (Bmax) obtained was, respectively, 987.23 ± 99.48 (n=3) and 77.47 ± 1.33 fmol/mg protein (n=2) for control and STZ-diabetic. Conclusão The results indicate that the STZ-induced diabetes decreases the expression and increases the affinity of mAChRs in the rat hippocampus. These actions of diabetes on mAChRs in hippocampus might be a key step mediating cellular events important for learning and memory.

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Palavras-chaves: streptozotocin, diabetes, muscarinic acethylcholine receptors, hippocampus, rat

Resumo: 05.002

PREVIOUS STRESS IN THE ADOLESCENCE MODIFIES THE RESPONSE OF THE HPA AXIS IN ADULT MALE RATS

Autores 1TRASLAVIÑA, G.

1, FRANCI, C. R.

1, FRANCI, C. R.

1 Fisiologia - FMRP-USP

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPESP

Resumo Introdução Adolescence is a transitional time from childhood to adulthood that involves the maturation of social and cognitive behavior. In rodents, this period can be divided in three stages according to postnatal age (P): an early adolescence (from P21 to P34), a middle (from P34 to P46) and late adolescence (from P46 to P59). During this phase the neurological development is reached and structures involved in stress and behavior responses can be vulnerable to environmental factors. The hypothalamus-pituitary-adrenal (HPA) axis is considered to be the final common pathway to the stress response. The effect of adolescent stress on the adult HPA response is not completed clarified. Objetivos We aimed to verify if the nature and the length of stressors applied in the adolescence modify the response of the HPA axis in the adult age through measurement of plasma corticosterone (CT) and progesterone (P4). Código de Experimentação Animal 161/2011 Código de Experimentação Humana Métodos After 5 days of acclimation, Wistar male rats on P26 day were divided in the following groups: animals subjected to 1 (acute) or 7 (chronic) times of metabolic stress by insulin injection, immune stress by lipopolysaccharide injection or restraint stress for 1 hour. Non-stressed control animals were injected with saline 0.9%. Once ended stress protocols, the animals continued in the grouped cages until reach the adult phase (P61). At morning of this day, all rats were submitted to acute restraint for 30 minutes and blood samples were taken each 15 minutes for 90 minutes to measure CT and P4 by radioimmunoassay. The statistical analysis was performed using Mixed Linear Model in SAS v.91 software. This protocol was approved by the Ethics Committee for Research Involving Animals of the Medical School of Ribeirão Preto, University of São Paulo (No. 161/2011). Resultados Plasma CT and P4 increased in response to acute adult restraint reaching a peak about 200% and 400% from their basal

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values in the control stressed animals, respectively. This response was affected independently by the nature and the length of stressors applied in the adolescence. The statistical analysis showed that the HPA response in the adulthood was lower in the animals submitted to chronic stress in the adolescence. The total P4 response in adult rats previously submitted to chronic metabolic (52 ± 12 ng/ml x min), immune (65 ± 13 ng/ml x min) or restraint (96 ± 13 ng/ml x min) stress was lower than in acute stress groups (145 ± 45, 230 ± 28 and 188 ± 26 ng/ml x min, respectively) and similar to non-stressed group (42 ± 8 ng/ml x min). The total CT response in animals previously exposed to metabolic chronic stress (403 ± 31 ng/ml x min) was lower than its correspondent acute metabolic group (769 ± 104 ng/ml x min). Besides among the groups with previous chronic stress, the metabolic stress group responded in lower magnitude than restraint stress grou p < br> Conclusão The chronic but not the acute stress applied in the beginning of the adolescence decreases the response of the HPA axis in the adulthood. This effect is altered by the nature of the stressor seen that the chronic metabolic but not the immune or restraint stress had a larger effect

Palavras-chaves: adolescence, corticosterone, HPA axis, progesterone, stress

Resumo: 05.003

AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DO RESVERATROL SOBRE A DENSIDADE RADIOGRÁFICA DE VÉRTEBRAS DE RATAS OVARIECTOMIZADAS.

Autores

1FABRICIO, V.

1, PASTOR, F. A. C.

1, BIFFE, B. G.

2, LOUZADA, M. J. Q.

1, NONAKA, K. O.

1

Departamento de Ciências Fisiológicas - UFSCar, 2 Departamento de Apoio, Produção e Saúde Animal

- UNESP

Apoio Financeiro: CAPES-DS

Resumo Introdução Resveratrol (3,5,4’ trihidroxiestilbeno) é um polifenol encontrado em algumas plantas e frutos. Há indícios de que ele possa estar associado à prevenção da osteoporose devido à sua ação similar a de um Selective Estrogen Receptor Modulator (SERM), também utilizado para este fim. Entretanto, o mecanismo pelo qual o resveratrol promove efeitos benéficos continua incerto em alguns aspectos. Objetivos O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do resveratrol em ratas adultas jovens ovariectomizadas na prevenção da osteopenia. Código de Experimentação Animal 041/2010-UFSCar Código de Experimentação Humana

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Métodos O modelo experimental utilizado foi o animal - ratas Wistar distribuídas em 3 grupos com 10 animais cada: grupo intactas (INT) com animais intactos, grupo controle ovariectomizadas (OVX) com animais ovariectomizados tratados com uma solução 1:1 de salina e Dimetilsulfóxido (DMSO) a 0,1ml/kg massa córporea (MC), grupo ovariectomizadas + resveratrol (OVX + RES) com animais ovariectomizados tratados com resveratrol (0,7 mg/kg MC) solubilizado em solução 1:1 de salina e DMSO. As soluções foram administradas intraperitonealmente, 7 vezes por semana, por 12 semanas. A densidade das vértebras L4 foi realizada através da técnica de Densidade Radiográfica (mmAl), utilizando como instrumento para obtenção dos dados o programa Image J®. Os dados obtidos em cada grupo (média ± desvio padrão) foram comparados entre si por meio do teste paramétrico Anova One-Way, seguido pelo teste de comparação múltipla de Tukey. Adotou-se nível de significância menor ou igual a 0,05 (p 0,05). Resultados Com a análise dos dados observou-se uma diminuição da densidade mineral óssea do grupo OVX em relação ao grupo INT (1,938±0,190 mmAl do grupo INT versus 1,516± 0,148 mmAl do grupo OVX, p Conclusão Os nossos resultados, além de confirmar a ovariectomia válida para estudo de osteoporose por déficit de estrógeno, também mostram que as ratas tratadas com resveratrol apresentaram uma proteção à espoliação óssea induzida pela ovariectomia, observada pelo aumento da densidade mineral óssea. Entretanto, é uma proteção parcial, pois os valores não atingiram os níveis do grupo controle intacto.

Palavras-chaves: densidade óptica radiográfica, osteoporose, ratas, resveratrol, tecido ósseo

Resumo: 05.004

Cirurgia bariátrica de bypass gástrico (CBG) melhora a ação da insulina através das reduções dos níveis de BCAAs, da ativação de mTOR e do estresse de retículo endoplasmático (ER) no tecido adiposo de pacientes obesos

Autores 1ARAÚJO, T. G.

1, OLIVEIRA, A. G. D.

1, CARVALHO, B. M.

1, SAAD, M. J. A.

1 Medicina Interna

- UNICAMP

Apoio Financeiro: CNPq / Fapesp

Resumo Introdução Estudos recentes sugerem um papel importante do metabolismo de aminoácidos de cadeia ramificada (BCAAs) no início da patogênese do diabetes tipo 2 e também indicam que os níveis e perfis de BCAAs podem ajudar na avaliação do risco de diabetes. Além disso, foi demonstrado que a cirurgia bariátrica de bypass gástrico (CBG) foi capaz de induzir tanto a redução nos níveis de BCAA quanto à melhoria na resistência à insulina e no controle glicêmico. Está bem estabelecido que a ativação crônica da proteína mTOR promove a resistência à insulina, mecanismo este associado ao estresse de retículo endoplasmático (RE). Neste sentido, supomos que a redução dos níveis de BCAAs induzida por CBG pode resultar em uma redução significativa na atividade da mTOR associada com tecidos marcadores de estresse do RE.

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Objetivos Desta forma, o presente estudo foi realizado com o objetivo de determinar os níveis circulantes de BCAAs, de analisar a via de sinalização da mTOR, bem como marcadores teciduais de estresse de RE e também avaliar a sensibilidade à insulina e sua sinalização em tecidos-alvo de pacientes obesos em períodos distintos de avaliação, ou seja, antes da realização da CBG e também com 1 e 6 meses após a CBG. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana (n°359/2010) Métodos Para o desenvolvimento deste trabalho, 15 indivíduos obesos (média de IMC 47,8 ± 3,2 kg/m2, sendo 4 do sexo masculino e 11 do sexo feminino) que foram programados para passar por CBG participaram deste estudo. Também incluímos onze indivíduos magros, aparentemente saudáveis, como grupo controle (média de IMC de 24,3 ± 3,0 kg/m2, sendo 3 homens e 8 mulheres). O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Estadual de Campinas (n°359/2010) e foi realizado em conformidade com a Declaração de Helsinki. Resultados Nossos resultados demostraram que antes da realização da CBG os indivíduos obesos apresentaram níveis circulantes mais elevados de BCAAs e também aumento dos níveis de fosforilação da mTOR, p70S6K, JNK, PERK e IRS-1ser312 no músculo e tecido adiposo, em comparação com indivíduos magros. Em seguida, demonstramos que os níveis de BCAAs foram diminuídos em ambas as situações, ou seja, com 1 e 6 meses após a CBG, também observamos que esta redução foi acompanhada pela diminuição nos níveis de fosforilação da mTOR, p70S6K, JNK, acompanhados por uma atenuação dos níveis de fosforilação da IRS-1ser312 no tecido adiposo. Conclusão Em resumo, a CBG pode induzir uma importante redução nos níveis de BCAAs, que por sua vez diminui a ativação da mTOR, resultando numa melhora da ação da insulina nestes pacientes. Assim, estes resultados sugerem um possível mecanismo pelo qual a cirurgia bariátrica pode melhorar a sensibilidade à insulina e controle glicêmico em pacientes obesos.

Palavras-chaves: Cirurgia bariátrica de bypass gástrico, BCAAs, Resistência à insulina, Estresse de retículo endoplasmático, mTOR

Resumo: 05.005

SULFONYLHYDRAZONE DERIVATIVE REDUCES MECHANICAL ALLODYNIA AND THERMAL HYPERALGESIA IN STREPTOZOTOCIN-INJECTED RATS

Autores

1SOUZA, B. J.

1, PEREIRA, S. L.

1, TRACHEZ, M. M.

1, MONTEIRO, C. E. S.

1, COSTA, F. P.

1,

ROMEIRO, N. C. 1, LIMA, L. M.

1, BARREIRO, E. J.

1, SUDO, R. T.

1, ZAPATA-SUDO, G.

1

Instituto de Ciências Biomédicas - UFRJ

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Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, CAPES, INCT, PRONEX

Resumo Introdução Diabetes mellitus (DM) is a metabolic disorder characterized by hyperglycemia. Neuropathic pain is a significant cause of impairment among DM patients and peripheral neuropathy has been associated with an increased risk of mortality in this population. Objetivos This study describes the beneficial effects of a novel sulfonylhydrazone derivative (LASSBio-1473) in a model of diabetes induced by streptozotocin (STZ) in rats. Código de Experimentação Animal DFBCICB 041 Código de Experimentação Humana Métodos Male Wistar rats (180–220 g) received a single intravenous injection of STZ (60 mg/kg) to induce diabetes. STZ-treated rats were randomly divided into two groups (n = 5 per group) treated with vehicle (dimethyl sulfoxide, DMSO) or LASSBio-1473 (20 mg/kg, i.p.). These groups were compared with a control group of non-diabetic rats. Plasma glucose levels were examined in blood samples collected by tail-vein puncture, using the Accu-Check® Performa monitoring system (Roche, Mannheim, Germany). Blood glucose, mechanical allodynia and thermal hyperalgesia were evaluated before and weekly after the STZ injection during 6 weeks. Six weeks after the induction of diabetes, rats with glucose levels > 350 mg/dL were treated with either vehicle or LASSBio-1473 for 14 days. After the first administration of vehicle or LASSBio-1473, mechanical allodynia and thermal hyperalgesia were measured 30, 60, 120, 180 and 240 min after injection. Mechanical allodynia and thermal hyperalgesia were examined before and 1, 7, 10 and 15 days after treatment. All data were expressed as mean ± standard error of the mean (SEM). For the comparison of groups, two-way ANOVA was used and differences were considered significant when P was <0.05. Resultados The blood glucose levels of diabetic rats were increased from 126.0 ± 3.4 mg/dL before STZ injection to 555.9 ± 16.9 mg/dL (P Conclusão The novel sulfonylhydrazone derivative ameliorated mechanical allodynia and thermal hyperalgesia in rats with STZ-induced diabetes.

Palavras-chaves: streptozotocin, neuropathic pain, mechanical allodynia, thermal hyperalgesia, sulfonylhydrazone

Resumo: 05.006

DESENVOLVIMENTO SEXUAL DE RATOS MACHOS EXPOSTOS AS BENZOFENONAS NA VIDA INTRAUTERINA E NEONATAL

Autores

1VISCARDI, A.

1, NASSR, A. C. C.

1, TRAWITZKI, H.

1, FRANÇA, I. E.

1, GALLO, J. S.

2,

GUIMARÃES, N. 1, NONAKA, K. O.

1 Ciências Fisiológicas - UFSCar,

2 Ciências Fisiológicas -

UFSCar - UNICEP

Apoio Financeiro: CAPES

Resumo Introdução O uso extensivo de filtros UV tipo benzofenonas (BP) como fotoestabilizadores em cosméticos e embalagens alimentícias leva milhões de consumidores à exposição diária a estes compostos. A literatura demonstra que as BP podem desempenhar atividades estrogênicas, capazes de provocar alterações nos parâmetros reprodutivos do sexo masculino. Objetivos Avaliar os possíveis efeitos tardios das benzofenonas 3 e 4 sobre o desenvolvimento do sistema reprodutor masculino na pré-puberdade, puberdade e maturidade sexual em descendentes de ratas expostos in útero e durante a lactação. Código de Experimentação Animal 005/2012 Código de Experimentação Humana Métodos Protocolo Comitê de Ética em Experimentação Animal n°005/2012. Ratas prenhes, distribuídas em 3 grupos: 7 tratadas com BP3 370 mg/kg (1/20 da DL50), 6 tratadas com BP4 177 mg/kg (1/20 da DL50), e 5 controles (C) que receberam óleo de canola (veículo). O tratamento foi realizado do 12°dia de prenhez até o fim da lactação, via gavage. Resultados Apresentados como média ± erro padrão da média. Foram observados sinais físicos externos como a idade (dias) em que ocorreu a descida testicular (C = 19,7 ± 0,21; BP3 = 20,3 ± 0,21 e BP4 = 9,9 ± 0,18, n = 10) e a separação prepucial (C = 43,6 ± 0,60; BP3 = 43,3 ± 0,48 e BP4 = 43,2 ± 0,37; n = 10), não ocorrendo diferenças estatísticas significativas entre os descendentes controles e tratados. Aos 40 dias (40d, pré-puberdade), 60 dias (60d, puberdade) e 150 dias (150d, maturidade sexual) foram pesados os testículos direito (TD) e esquerdo (TE), os epidídimos direito e esquerdo (ED e EE), a próstata (P), e a vesícula seminal (V) aos 60 e 150 dias. [40d] Controle – TD: 0,674 ± 0,032, TE: 0,696 ± 0,033, ED: 0,099 ± 0,005, EE: 0,097 ± 0,005, P: 0,064 ± 0,006, n = 6; BP3 – TD: 0,674 ± 0,016, TE: 0,700 ± 0,016, ED: 0,089 ± 0,002, EE: 0,105 ± 0,003, P: 0,071 ± 0,003, n = 8; BP4 – TD: 0,812 ± 0,036, TE: 0,813 ± 0,036, ED: 0,216 ± 0,039, EE: 0,204 ± 0,035, P: 0,080 ± 0,006, n = 6. [60d] Controle – TD: 1,325 ± 0,020, TE: 1,332 ± 0,017, ED: 0,294 ± 0,007, EE: 0,288 ± 0,007, P: 0,266 ± 0,006, V: 0,636 ± 0,025, n = 7; BP3 – TD: 1,369 ± 0,013, TE: 1,373 ± 0,011, ED: 0,315 ± 0,005, EE: 0,310 ± 0,005, P: 0,288 ± 0,005, V: 0,692 ± 0,023, n = 10; BP4 – TD: 1,395 ± 0,038, TE: 1,327 ± 0,014, ED: 0,296 ± 0,008, EE: 0,281 ± 0,008, P: 0,246 ± 0,011, V: 0,574 ± 0,021, n = 8. [150D] Controle – TD: 1,599 ± 0,015, TE: 1,657 ± 0,018, ED: 0,657 ± 0,004, EE: 0,668 ± 0,008, P: 0,752 ± 0,015, V: 1,609 ± 0,053, n = 7; BP3 – TD: 1,734 ± 0,011, TE: 1,745 ± 0,011, ED: 0,705 ± 0,005, EE: 0,702 ± 0,007, P: 0,740 ± 0,019, V: 1,951 ± 0,043, n = 9; BP4 – TD: 1,670 ± 0,014, TE: 1,666 ± 0,013, ED: 0,674 ± 0,007, EE: 0,650 ± 0,006, P: 0,697 ± 0,013, V: 1,657 ± 0,051, n = 8. A análise de variância paramétrica (ANOVA) não mostrou diferenças significativas entre os descendentes tratados e controles em nenhum dos parâmetros investigados. Conclusão

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Os resultados obtidos demonstram que baixas concentrações de benzofenonas 3 e 4 não provocam efeitos adversos sobre o desenvolvimento sexual de descendentes machos.

Palavras-chaves: benzofenonas, desenvolvimento sexual, sistema reprodutor

Resumo: 05.007

POSSIVEL CORRELAÇÃO ENTRE O NIVEL DE ESTRESSE OXIDATIVO NO FLUIDO FOLICULAR E O SUCESSO DO TRATAMENTO DE PACIENTES SUBMETIDAS À FERTILIZAÇÃO IN VITRO.

Autores

1PIZARRO, B. M.

1, FORTUNATO, R. S.

1,2, ANTUNES, R. A.

2, MANCEBO, A. C. A.

2, AREAS,

P. C. F. 1, CORDEIRO, A.

2, SOUZA, M. C. B.

1, Ortiga-Carvalho, T. M.

1 Instituto de Biofísica -

UFRJ, 2 Clínica de Reprodução Humana - Fertipraxis

Apoio Financeiro: Faperj/CNPq

Resumo Introdução Estudos sugerem que o estresse oxidativo influencia de maneira prejudicial o desenvolvimento embrionário, em que um aumento nos níveis de espécies reativas de oxigênio (ERO) no fluido folicular (FF) estaria associado a ausência e/ou não maturação de oócitos, má qualidade embrionária e insucesso na gravidez. Objetivos Estudar 150 mulheres submetidas a procedimento de fertilização in vitro e nestas mensurar e correlacionar níveis de biomarcadores do estresse oxidativo (EO) no FF tais como: grupamento tiol reduzido, atividade catalásica (AC) e peroxidação lipídica (PL) com as taxas de gravidez, transferência de embrião, presença e maturação do oócito no foliculo aspirado. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 02213812.4.0000.5275 Métodos 36 mulheres com idade entre 29-48 anos (35,22 ± 0,7217) com índice de massa corporal de 23,10 ± 0,6707 submetidas a fertilização in vitro entre setembro de 2012 e fevereiro de 2013 foram incluídas. Aprovado pela plataforma Brasil em 06/09/2012 (02213812.4.0000.5275). Amostras de FF foram coletadas no dia da captação dos oócitos, 36h após a injeção de gonadotrofina coriônica, sendo utilizado o primeiro folículo aspirado assim como o embrião gerado a partir do oócito desta coleta. A determinação dos níveis do grupamento tiol no FF foram medidos utilizando reagente 5,5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB) e a absorbância foi analisada à 412 ɳm. Na medida da AC as amostras foram incubadas à 37°C por 30 min. com solução de H2O2 em seguida a concentração de H2O2 foi determinada incubando-se a mistura com uma

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solução Amplex Red + peroxidase de raiz forte, a leitura foi realizada por espectrofotometria a 571/585 ɳm. A PL foi verificada através das concentrações de TBARS no FF utilizando ácido tricloroacético 10%, ácido tiobarbitúrico 0,8%, SDS 8,1% e butanol, após centrifugadas avaliação deu-se por espectrofotômetria em 532 ɳm. Todas as informações foram apresentadas com a média ± EPM. Análise estatística através do teste t não pareado, two-tailed. As diferenças foram consideradas significativas quando p < 0,05. Resultados Comparando-se na seguinte ordem, presença e ausência de oócito no FF estudado, observa-se que no grupo com oócito apresentou tendência a aumento na AC (1537±215 N=17 vs. 1104±184 U catalase/mg de proteína N=19; p=0,13), entretanto, os níveis de grupos tiol (5,29±0,38 N=17 vs. 5,49±0,44 µMolar DTNB reduzido/mg de proteína N=19; p=0,73) e PL (1,83±0,19 N=16 vs. 2,11±0,19 ηg MDA/µl de FF N=18; p=0,31) não apresentaram nenhuma diferença. Mulheres que engravidaram apresentaram tendência a aumento da AC em relação as não grávidas (1533±319 U/mg N=9 vs. 1234±160 U/mg N=27; p=0,37), como também observou-se tendência a aumento da AC em mulheres que tiveram o embrião transferido no mesmo ciclo (1380±161 U/mg N=29 vs. 1013 ± 312 U/mg N=7; p=0,32) daquelas que transferiram em outro ciclo. Os níveis de grupos tiol e PL não apresentaram diferença nos quesitos avaliados. Conclusão Resultados preliminares não mostram diferenças significativas entre os níveis de grupos tiol, AC e PL com os parâmetros avaliados, porém, espera-se que, com o aumento no número de pacientes estudadas, as diferenças observadas quanto aos níveis de AC e de PL tornem-se significativas.

Palavras-chaves: estresse oxidativo, fertilização in vitro, fluido folicular

Resumo: 05.008

O EFEITO DA RADIAÇÃO EMITIDA POR APARELHO CELULAR SOBRE FOSFORILAÇÃO DE ERK1 E ERK2 DE CÉLULAS DO HIPOTÁLAMO DE RATOS WISTAR

Autores 1JÚNIOR, L.C.J.

1, REZENDE, C.O.

1, MUSSO, C. M.

1, Goulart, E.

1, COSTA, T. G.

1, Garcia, R. M.

G. 1 Biologia - UFJF

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, Fapemig, UFJF

Resumo Introdução O uso de aparelhos celulares tem aumentado significativamente. Diversos estudos têm buscado avaliar possíveis efeitos da radiação emitida por aparelhos celulares sobre tecidos. A unidade hipotálamo-hipófise atua de forma coordenada controlando o sistema endócrino. As enzimas ERK1 e ERK2 são importantes na síntese e secreção de hormônios hipofisários e hipotalâmicos. Objetivos Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da radiação emitida por telefones móveis sobre a fosforilação de ERK1 e ERK2 nas células hipotalâmicas em ratos Wistar.

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Código de Experimentação Animal 059/2012 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos (Rattus norvegicus) machos, com 60 dias de vida e pesando 200±20 g foram expostos a radiação emitida por um aparelho celular l (1800 MHz) durante 1 ou 3 horas. Os hipotálamos foram removidos e a análise das proteínas foi feita via Western blot utilizando anticorpos específicos. As comparações foram feitas usando teste t de Student, considerando significativos os valores de p Resultados Nos animais expostos por 1 hora, foi observado aumento significativo nos níveis de ERK1 fosforilada (controle: 0,03±0,001 n=5; exposto: 0,03±0,0008 n=5; p 0,05) e ERK2 (controle: 0,02±0,002 n=4; exposto: 0,02±0,002 n=5; p > 0,05) fosforiladas. Conclusão Os resultados sugerem que a exposição dos animais à radiação eletromagnética de radiofreqüência emitida por telefones móveis por 1 hora pode alterar as vias de sinalização das quais participam ERK1 e ERK2 nas células hipotalâmicas, alterando o seu funcionamento, efeito que desaparece em exposição mais prolongada.

Palavras-chaves: Radiação, Aparelho celular, ERK, hipotálamo

Resumo: 05.009

Melatonin restore insulin sensitivity and mitochondrial function in skeletal muscle cells.

Autores

1,5TEODORO, B. G.

1, SAMPAIO, I. H.

1, QUEIROZ, A. L.

2, BOMFIM, L. H. M.

1, SOUSA, T. A.

3,

ALBERICI, L. C. 4, VIEIRA, E.

1,2, SILVEIRA, L. D. R.

1 FMRP - Dpto de Bioquímica - USP,

2

EEFERP - USP, 3 FCFRP - USP,

4 CIBERDEM - CIBERDEM,

5 Campus Sertãozinho - IFSP

Apoio Financeiro: CNPq/FAPESP

Resumo Introdução The neurohormone melatonin regulates the sleep-awake cycles, amplitudes, phasing and coupling of circadian rhythms. Reduced melatonin levels are observed in several diseases such as mood disorders, sleep disturbances, cancer and type 2 diabetes. Recent studies have highlighted an important link between melatonin and type 2 diabetes. Although many studies have demonstrated the beneficial effects of melatonin in type 2 diabetes, not so much is known regarding the metabolic pathways involved in the melatonin signaling. In this work, we showed that melatonin restored the insulin response in rat skeletal muscle cells exposed to palmitic acid.

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Objetivos Our hypothesis is that melatonin induces the transcription of genes associated with upregulation of genetic program of the oxidative metabolism. Under such condition, the mitochondrial function is restored increasing the insulin response in insulin-resistant muscle cells. Código de Experimentação Animal 092/2010 Código de Experimentação Humana Métodos The procedures of cell isolation were previously approved by the Institutional Ethical Commit for use of laboratory animals from University of São Paulo – Campus of Ribeirão Preto (Approval No. 092/2010). After differentiation, the myotubes were incubated with palmitate (750 uM) and/or melatonin (10nM) for 24h. Previously, palmitic acid and/or melatonin were added to DMEM (1:200) containing albumin (1%). The glucose uptake was determined by 2-deoxy-[2,63H]-glucose (0.1µCi/mL) uptake. The oxygen consumption was measured by a Clark Type Electrode (Hansatech Instruments), utilizing oligomicin and CCCP as a negative and positive control, respectively. The Tricarboxylic acid cycle intermediates (citrate, malate, oxaloacetate and isocitrate were determinated enzimatically. The protein content of pAkt, Akt, pCreb, Creb, CAMKII, pAMPK, AMPK, PKA substrates and beta-actin were determined by western blotting. The mRNA content of PGC1alpha; and Creb were determined by RT-PCR. The inhibition of Creb transcription was performed utilizing siRNA. Resultados Melatonin restored (0,19±0,02mM)insulin response in palmitic acid (0,05±0,01mM)treated cells as demonstrated by elevated glucose uptake (p < 0.05). This effect was combined with elevated mitochondrial respiration (Control: 23,43±0,79; palmitate: 18,59±0,79 nmol de O2/min; palmitate plus Melatonin 21,59±0,8 nmol de O2/min)and TCA cycle intermediates (pamitate have reduced by 50% the TCA intermediates and Melatonin have restores and even elevated by 30% the TCA intermediates) in skeletal muscle cells treated with palmitic acid. Interestingly, the melatonin induced- effect on CAMKII kinase (Control: 1,1±0,3, palmitate 0,6±0,12; palmitate plus melatonin: 1,6±0,23 relative protein Expression) and pCreb (Control: 1,2±0,3, palmitate 0,3±0,02; palmitate plus melatonin: 1,3±0,33 relative protein Expression) pathway increased the PGC-1alpha transcription. In contrast, the Creb inhibition was demonstrated to markedly reduce the cell respiration (Control: 22,3±0,59; siRNA CREB: 15,5±0,66 nmol de O2/min) as well as the Akt phosphorylation level in control cells. Conclusão we demonstrated new pathways regulated by melatonin in primary skeletal muscle cells. Melatonin by activating CAMKII kinase and pCreb might increase the PGC-1 alpha expression leading to improvements in the levels of TCA cycles intermediates, mitochondrial respiration and recovery of palmitate-induced insulin resistance in primary skeletal muscle cells. The new pathways found in this study will help to unravel the beneficial effects of melatonin in insulin resistance states such as obesity and type 2 diabetes.

Palavras-chaves: insulin sensitivity, Melatonin, mitochondrial function

Resumo: 05.010

EFEITO DO HIPERTIREOIDISMO SOBRE A REGENERAÇÃO MUSCULAR APÓS LESÃO AGUDA

EM RATOS

Autores 1MATOS, M. S.

1, ALBUQUERQUE, J. P. C.

1, FORTUNATO, R. S.

1, CARVALHO, D. P.

1,

CORREA-DA-COSTA, V. M. 1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq

Resumo Introdução Os hormônio tireóideos são importantes tanto para a miogênese durante o desenvolvimento quanto para o processo de regeneração muscular pós-lesão e estudos recentes demonstram a importância da geração local do hormônio ativo, triiodotironina (T3) neste processo. Na regeneração muscular pós-lesão, mioblastos amadurecem devido a ativação e expressão de fatores de transcrição reguladores de músculo como o MyoD e a miogenina. Objetivos Avaliar o impacto do hipertireoidismo sobre a expressão de MyoD e miogenina, bem como sobre a geração local de hormônios tireóideos em etapas inicias da regeneração muscular esquelética. Código de Experimentação Animal IBCCF 080 Código de Experimentação Humana Métodos O estudo foi aprovado pela Comissão de Ética com Uso de Animais (CEUA) do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal do Rio de Janeiro (IBCCF 080). Foram utilizados ratos Wistar machos adultos e o hipertireoidismo foi induzido pelo tratamento com T4 (10μg/100g p.c.) durante 10 dias. Após 7 dias de tratamento, metade dos animais foi mantida intacta e a outra sofreu lesão no músculo solear, gerando os grupos: Controle (C); Controle Lesão (CL); Hipertireóideo (Hiper) e Hiper Lesão (HL) (n≥3 por grupo). 3 dias após a lesão (10 dias de tratamento), os animais foram sacrificados e os músculos soleares retirados para as análises. Os soros foram coletados para avaliação dos níveis séricos de T3 por RIE específico. A expressão de MyoD e miogenina foi avaliada por Western Blot e os níveis de mRNA das iodotironinas desiodases (D1, D2 e D3) foram analisados por PCR em tempo real, utilizando GAPDH como controle interno. Os dados foram expressos como média ± EPM e a análise estatístisca foi realizada por Two-Way ANOVA, seguido por pós-testes de comparações múltiplas de Bonferroni. Resultados A lesão per se não alterou o T3 sérico e o tratamento com T4 promoveu aumento significativo de T3 (C: 43,4±4,10; CL: 48,7±4,53; H: 426,7±183,9 e HL: 637,7±228,0 ng/dL). O hipertireoidismo aumentou a expressão de MyoD, se comparado ao grupo C, e a lesão promoveu aumento ainda maior nos dois grupos estudados (C: 0,68±0,132; CL: 1,58±0,132; H: 1,18±0,048 e HL:1,65±0,029 MyoD/GAPDH UA). A expressão de miogenina aumentou nos grupos lesados, independente do estado tireóideo (C: 0,60±0,03; CL: 1,1±0,06; H: 0,57±0,067 e HL:1,07±0,033 Miogenina/GAPDH UA). Os níveis de mRNA da D1 aumentaram, como esperado, pelo hipertireoidismo, porém ocorreu diminuição nos grupos lesados (C: 1,00±0,17; CL: 0,54±0,17; H: 1,39±0,143 e HL:0,81±0,178 UA). O oposto foi observado em relação a D2 (C: 1,00±0,157; CL: 5,46±0,154; H: 0,88±0,073 e HL: 3,35±0,194 UA) e D3 (C: 1,00±0,362; CL: 17,4±3,49; H: 2,76±0,778 e HL: 9,94±2,231 UA), cujos os mRNA aumentaram significativamente pela lesão. Conclusão Os hormônios tireóideos possuem um importante papel na regeneração muscular, regulando a expressão de MyoD, o

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mesmo não ocorrendo com a miogenina. A lesão aumentou a expressão de MyoD e miogenina, sugerindo um envolvimento de ambas do processo regenerativo precoce. A regulação das iodotironinas desiodases nesse processo sugere que o metabolismo local dos hormônios tireoidianos seja essencial para a regeneração muscular esquelética pós-lesão aguda.

Palavras-chaves: regeneracao muscular, hormonios tireoideos, lesao muscular aguda

Resumo: 05.011

AUMENTO DO CONTEÚDO INTERCELULAR DE PROTEÍNAS ASSOCIADAS À JUNÇÃO ADERENTE EM ILHOTAS PANCREÁTICAS DE ANIMAIS ALIMENTADOS COM DIETA HIPERLIPÍDICA POR 30 DIAS.

Autores

1CARVALHO, C. P. F.

1, MARTINEZ, C.

1, FONTES, C. C.

2, MASCHIO, D. A.

1, OLIVEIRA, C. A.

M. 1, BENFATO, I. D.

2, CANUTO, L. P.

2, COLLARES-BUZATO, C. B.

1 Biociências - UNIFESP-

BS, 2 Histologia e Embriologia - UNICAMP

Apoio Financeiro: CNPq, FAPESP

Resumo Introdução Há evidências que os contatos celulares mediados pelas junções intercelulares são fundamentais para a adequada secreção de insulina. No entanto, o estudo do papel de proteínas associadas à junção aderente para a função endócrina do pâncreas em modelos animais de diabetes tipo 2 é pouco explorado. Objetivos Esse trabalho teve como objetivos avaliar o padrão de distribuição celular de proteínas associadas à junção aderente, N-caderina, alfa e beta-cateninas, bem como investigar alterações no grau de fluorescência da marcação intercelular exibida por essas proteínas em ilhotas pancreáticas de camundongos C57BL6 alimentados com dieta hiperlipidica (21 g.%) por 30 dias. A administração de dieta hiperlipídica (HL) a animais dessa linhagem é empregada em modelos de indução da diabetes tipo 2. Código de Experimentação Animal CEEA IB-UNICAMP 1885-1 Código de Experimentação Humana não se aplica Métodos Parâmetros metabólicos como: ganho de peso, glicemia pós prandial, peso dos depósitos de gordura (gonadal, mesentérica e retroperitoneal) e insulinemia foram avaliados para o acompanhamento do modelo empregado. A análise semi-quantitativa do grau de fluorescência da marcação intercelular das proteínas N-caderina, alfa e beta-cateninas foi

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realizada pelo software ImageJ em imagens de ilhotas, cujas secções de pâncreas foram submetidas a reações de imunoistoquímica. O grau de expressão dessas proteínas também foi avaliado, por Western Blot, em homogenados de ilhotas pancreáticas. Para análise estatística foi utilizado o teste t-Student ou Mann-Whitney (p < 0,05). Aprovação pelo CEEA IB-UNICAMP protocolo 1885-1. Resultados Animais alimentados com dieta HL apresentaram aumento significativo do ganho de peso corpóreo (14,1 ± 1,8% N=12), dos valores de glicemia pós-prandial (151,5 ± 8,0 mg/dL N=8) e da insulinemia (2,0 ± 0,5 ng/mL N=10), quando comparados aos valores do grupo controle: 4,7 ± 1,1% N=12, p < 0,0001; glicemia 120,8 ± 3,1 mg/dL N=8, p=0,003 e insulinemia 0,6 ± 0,1ng/mL N=12, p=0,003). Os pesos (g) dos depósitos de gordura acima mencionados também foram significativamente maiores em animais do grupo dieta HL (p≤0,01). A marcação para as proteínas N-caderina, alfa e beta-cateninas apresentou-se em forma de linha na região de contato intercelular entre as células endócrinas da ilhota pancreática, para ambos os grupos. O grau de fluorescência da marcação intercelular dessas proteínas foi significativamente maior em ilhotas do grupo dieta HL: N-caderina (p < 0,0001); alfa-catenina (p < 0,0001) e beta-catenina (p < 0,002), (N=4/grupo, por proteína). No entanto, dados preliminares de Western Blot não revelaram alteração do grau de expressão total (juncional e citoplasmática) dessas proteínas entre homogenados de ilhotas desses dois grupos (N=2-3 experimentos/proteína). Conclusão A análise do grau de fluorescência da marcação intercelular das proteínas N-caderina, alfa e beta-cateninas sugere um aumento do conteúdo intercelular dessas proteínas em ilhotas de animais que mostram distúrbio metabólico indicativo da fase inicial da pré-diabetes tipo 2 induzida por dieta HL.

Palavras-chaves: diabetes tipo 2, dieta hiperlipídica, junção aderente, junções celulares, pâncreas endócrino

Resumo: 05.012

CORTICOSTERONA REDUZ O COMPORTAMENTO MATERNO EM RATAS LACTANTES

Autores 1VILELA, F. C.

1, PEREIRA, A. S.

2, ANTUNES-RODRIGUES, J.

2, ELIAS, L. L. K.

1, GIUSTI-

PAIVA, A. 1 Depto Ciências Fisiológicas - Unifal-MG,

2 Fisiologia - FMRP-USP

Apoio Financeiro: Fapemig, Capes, Finep

Resumo Introdução Tem sido demonstrado que a administração de glicocorticoide reduz a secreção de ocitocina (OT) e prolactina (PRL). Contudo, é pouco descrito a influência da corticosterona (secretada em resposta, por exemplo, à administração de LPS) no comportamento materno. Objetivos Verificar a influência da administração de LPS sobre as respostas comportamentais e neuroendócrinas durante a lactação, e se estas respostas são mediadas pela liberação de corticosterona.

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Código de Experimentação Animal CEUA 255/2009; 466/2012 Código de Experimentação Humana Métodos Ratas lactantes no 7º dia de lactação (DL) foram divididas em 4 grupos (n=8): salina/salina, metirapona/salina, salina/LPS e metirapona/LPS. As ratas foram tratadas com salina (1 mL/kg, i.p.) ou metirapona (50 mg/kg, i.p.) 10 e 2 horas antes da administração de LPS (500 µg/kg, i.p.) ou salina (1 mL/kg, i.p.). A ninhada (previamente padronizada em 8 filhotes) foi removida da caixa moradia e 2 horas após a administração de salina ou LPS, os filhotes foram recolocados na caixa moradia e filmados por 30 minutos. Para as dosagens hormonais, foi realizada uma separação maternal de 12 horas e o sangue foi coletado 15 minutos após o início da amamentação. Para avaliar a influência direta da corticosterona central, ratas lactantes no 2º DL, foram submetidas à cirurgia estereotáxica para implante de uma cânula no ventrículo lateral. No 7º DL, as ratas foram tratadas com corticosterona (5ng/5μl, i.c.v.) ou veículo (5μl, i.c.v.) e após 30 minutos foi realizada a avaliação do comportamento materno e o ganho de peso da ninhada. Todos os experimentos foram conduzidos com aprovação do Comitê de Ética de Uso de Animais (255/2009, 466/2012). Resultados O tratamento com LPS diminuiu o tempo de lambida nos filhotes (390.40±33.19 para 168±25.61s; p Conclusão O tratamento com LPS reduziu o comportamento materno, a secreção de OT e PRL em ratas lactantes. Essas alterações podem ser mediadas pela corticosterona uma vez que a metirapona reverteu os efeitos produzidos pelo LPS e a corticosterona reduziu o comportamento materno e o ganho de peso da ninhada.

Palavras-chaves: glicocorticoide, lactação, comportamento

Resumo: 05.013

CORRELAÇÃO ENTRE OS NÍVEIS DE HEMOGLOBINA GLICADA DE PACIENTES COM DIABETES MELLITUS TIPO 2 E A ATIVIDADE DE ENZIMAS ANTIOXIDANTES E ÓXIDO NÍTRICO SÉRICOS

Autores

1ALMEIDA, D. B. R.

3, TABOADA, G. F.

2, SOUZA, K. L. A..

2, FERREIRA, A. C. F.

2,

CARVALHO, D. P. D. 1,2

, CARDOSO, L.C. 1 Patologia - UFF,

2 Biofísica - UFRJ,

3 Clínica Médica-

Endocrinologia - UFF

Apoio Financeiro: : FAPERJ/CNPq

Resumo Introdução

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No DM2, a diminuição da capacidade antioxidante e dos níveis séricos de NO parecem estar correlacionados à severidade das complicações micro e macrovasculares. A redução dos níveis de NO, produzido normalmente pelas células endoteliais, pode estar associada ao desenvolvimento das complicações vasculares, principal causa de co-morbidades e mortalidade do DM2. A produção excessiva de ROS está relacionada à diminuição da secreção da insulina, levando à disfunção da ilhota pancreática e, por fim, à morte da célula beta. O sistema antioxidante celular é responsável pelo controle fino dos níveis de ROS, sendo a catalase, a SOD e a GPx, as enzimas mais importantes. Objetivos O objetivo desse estudo consiste em determinar os níveis séricos de NO e atividade das enzimas antioxidadantes SOD e GPx plasmáticas, a fim de correlacioná-los aos níveis de HbA1c – marcador de complicações do diabetes mellitus Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana CAE = 0264.0.258.000-11 Métodos Foram incluídos 15 pacientes com diagnóstico de DM 2 com idade média de 59,4±2,28 anos. Os pacientes foram estratificados pelos níveis de HbA1c, classificados em 3 grupos: diabetes compensado (HbA1c≤7%), moderadamente compensados (7 9%). Os níveis séricos de NO foram avaliados através de método fluorimétrico e as atividades SOD e GPx plasmáticas determinadas por método colorimétrico, utilizando Kits específicos. A análise estatística utilizada para comparação dos 3 grupos foi a one-way ANOVA (não paramétrico), análise de variância para concentração do NO total, SOD e GPx, categorizados pela % HbA1c. Na comparação entre dois grupos foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney. As diferenças foram consideradas significativas quando p <0,05. Resultados O valor médio dos níveis séricos de NO do grupo dos pacientes com HbA1c≤7%, foi de 20,1± 3,27 pmol/µl, atividade SOD=11,35± 3,37U/ml e atividade GPx=71,82± 11,22 nmol/h/ml. O grupo com níveis de 7 9%, a concentração sérica média de NO foi de 9,67 ± 1,88 ; atividade SOD = 9,87 ± 2,13 U/ml e GPx = 61,17±6.68 nmol/h/ml. Conclusão Os níveis séricos do NO do grupo de pacientes com HbA1c > 9% e do grupo HbA1c≤7%, estavam diminuídos em relação ao grupo 7 9% pode estar relacionado ao pior prognóstico associado ao desenvolvimento das complicações micro e macrovasculares do DM. Entretanto, estudos comparativos com indivíduos normoglicêmicos são necessários para evidenciar se os efeitos deletérios do excesso de NO ou se a falta desse composto, bem como se a diminuição das atividades SOD e GPX representam um pior prognóstico do DM2

Palavras-chaves: Diabetes mellitus tipo 2, HBA1c, SOD, GPx, NO

Resumo: 05.014

INFLUÊNCIA DO GÊNERO E TEMPO DE EXPOSIÇÃO À DIETA NA REMODELAÇÃO DO PÂNCREAS ENDÓCRINO EM RESPOSTA A DISTURBIOS METABÓLICOS INDUZIDOS POR

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DIETA HIPERLIPÍDICA

Autores 1OLIVEIRA, R. B.

1, MASCHIO, D. A.

2, CARVALHO, C. P. F.

1, COLLARES-BUZATO, C. B.

1

Histologia e Embriologia - IB - UNICAMP, 2 Biociências - UNIFESP

Apoio Financeiro: CAPES; CNPq; FAPESP.

Resumo Introdução A prevalência e incidência da obesidade e alterações metabólicas correlatas como diabetes tipo 2 e doenças cardiovasculares tem aumentado na população mundial. Diversos fatores parecem estar diretamente ligados a tal evento, tais como gênero, idade e dieta. Objetivos O presente estudo teve como objetivo avaliar um possível dimorfismo sexual em relação às adaptações funcionais e estruturais do pâncreas endócrino em modelo animal diabetes tipo 2 induzido por dieta hiperlipídica (HL). Código de Experimentação Animal 2176-1 Código de Experimentação Humana Métodos Camundongos C57BL/6 adultos, machos e fêmeas, foram alimentados com dieta HL (21% de lipídios) ou padrão (4,5%) por 30 e 60 dias (d). Após esse período foram avaliados parâmetros metabólicos (peso, glicemia, insulina plasmática, respostas aos testes de tolerância à glicose (GTT) e à insulina (ITT)) nos animais e morfométricos em cortes de pâncreas submetidos à reação de imunoistoquímica para insulina. Para análise estatística foi utilizado o teste t Student bicaudado (p Resultados A exposição à dieta HL por 30d não induziu alteração morfológica/morfométrica do pâncreas endócrino em ambos os gêneros, porém resultou em maior ganho de peso nas fêmeas, e em alterações metabólicas significantes nos machos, os quais tornaram-se ligeiramente hiperglicêmicos (pós-prandial), intolerantes à glicose e hiperinsulinêmicos. Após administração de dieta HL por 60d, ambos os sexos tornam-se obesos, hiperglicêmicos (jejum e pós-prandial), hiperinsulinêmicos, intolerantes à glicose e resistentes à insulina (caracterizando-os como pré-diabéticos), além de apresentarem alteração significativa (p Conclusão A alteração dos aspectos funcionais e estruturais do pâncreas endócrino em ambos os sexos é provavelmente compensatória aos distúrbios metabólicos induzidos pela dieta HL, sendo os machos mais suscetíveis à dieta em comparação às fêmeas indicando um dimorfismo sexual.

Palavras-chaves: Pâncreas endócrino, Célula beta, Secreção de insulina, Diabetes tipo 2, Dieta hiperlipídica

Resumo: 05.015

ESTROGÊNIO AUMENTA A GERAÇÃO DE ESPÉCIES REATIVAS DE OXIGÊNIO (ERO) VIA NADPH OXIDASE 2 NA MAMA DE RATAS

Autores 1Rêgo-Monteiro, I.C.C.

1, FERREIRA, A. C. F.

1, LEITÃO, A. C.

1, CARVALHO, D. P.

1,

FORTUNATO, R. S. 1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ e CNPq

Resumo Introdução Introdução: Os hormônios sexuais desempenham um papel importante na maturação, desenvolvimento e estabelecimento de características adequadas para a procriação. No entanto, acompanhado destas respostas fisiológicas, também acontecem efeitos adversos, que podem levar a uma maior propensão patológica relacionada a determinado sexo. Se enquadrando nestas condições, o câncer de mama tem o estrogênio (E2) como hormônio determinante para uma maior incidência dessa patologia no sexo feminino. Estudos indicam que parte dos efeitos tumorigênicos do E2 em células mamárias seja decorrente do aumento da geração de radicais livres oriundos da metabolização desse hormônio. Porém, até hoje não existem estudos investigando a influência do E2 sobre a expressão e atividade das NADPH Oxidases mamárias, que são enzimas cuja única função é a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO). Objetivos Avaliar o efeito do estrogênio sobre a expressão e atividade das NADPH Oxidases (NOX) do tecido mamário de ratas. Código de Experimentação Animal IBCCF-160 Código de Experimentação Humana Métodos Após aprovação do Comitê de ética em pesquisas utilizando animais (IBCCF-160), foram usadas 40 ratas Wistar com três meses de idade, mantidas em ciclo claro/escuro (12/12h) com água e ração ad libitum e temperatura controlada entre 23 e 25°C. Inicialmente as ratas foram divididas nos grupos: Proestro (P, N=7), Estro (E, N=7), Diestro1 (D1, N=7) e Diestro2 (D2, N=7), de acordo com a fase do ciclo estral no momento do sacrifício. O restante dos animais foi dividido aleatoriamente em dois grupos, sendo tratadas diariamente com 3-benzoato-β-estradiol (0,7µg/100g de peso corporal) durante sete dias (E2, N=6) ou recebendo apenas o veículo (Controle, N=6). A geração de H2O2 foi mensurada pelo método Amplex red/HRP. Utilizando-se o reagente Trizol, foi extraído o RNA total, posteriormente foi feita a síntese do cDNA (High capacity, App Biosystems) e, utilizando-se a sonda SYBR green, foi feito PCR em tempo real do gene NOX 2 e o GAPDH como gene constitutivo. Além disso, foi dosada a geração de NTB2- a partir de DTNB por espectrofotometria (412nm) para a determinação dos níveis grupamento tiol livre. Resultados Inicialmente constatamos um aumento na produção de H2O2 na fase estro em comparação a diestro (P Conclusão

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Desta forma, podemos concluir que o estrogênio modula positivamente a expressão da NOX 2, aumentando a geração de ERO, abrindo assim novas perspectivas terapêuticas para o câncer de mama.

Palavras-chaves: NADPH oxidases, Mama, Estrogênio, ratas

Resumo: 05.016

MECANISMO COMPENSATÓRIO ENTRE ADIPOCINAS E FATORES ANTI-ANGIOGÊNCOS NA PRÉ-ECLÂMPSIA

Autores

1ELEUTÉRIO, N. M.

2, PALEI, A. C.

3, MACHADO, J. R.

4, TANUS-SANTOS, J. E.

3, CAVALLI,

R. C. 5, SANDRIM, V. C.

1 Núcleo de Pós-graduação e Pesquisa - IEP/BH,

2 Departamento de

Farmacologia - FCM-CAMP, 3 Departamento de Ginecologia e Obstetrícia - FMRP,

4 Departamento de

Farmacologia - FMRP, 5 Departamento de Farmacologia - UNESP

Apoio Financeiro: Fapemig, Fapesp, CNPq

Resumo Introdução Pré-eclâmpsia é uma doença específica da gravidez, diretamente relacionada com altas taxas mundiais de morbidade e mortalidade materno-fetal. O desequilíbrio dos níveis circulantes de fatores angiogênicos (sFLT-1 and sENG) tem sido sugerido como desencadeador da disfunção endotelial observada na pré-eclâmpsia. Os estudos a cerca do papel da adiponectina e leptina em gestações saudáveis, bem como complicadas têm revelado resultados interessantes devido à ação vascular de tais adipocinas. Objetivos Comparar as concentrações plasmáticas de adiponectina, leptina, sENG (endoglina solúvel) e sFLT-1 (tirosina quinase 1 solúvel) em gestantes saudáveis (GS) e pré-eclâmpticas (PE) e avaliar possível correlação entre tais adipocinas e fatores anti-angiogênicos. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 1759/2006 Métodos Este trabalho faz parte de um projeto maior autorizado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Institucional com o nº de aprovação CEP 1759/2006. Foram selecionadas 63 gestantes no Departamento de Obstetrícia e Ginecologia do Hospital Universitário da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Brasil, após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido. Destas, 36 eram gestantes saudáveis, sem complicações e 27 tinham pré-eclâmpsia. Foram incluídas somente gestantes com IMC inferior a 30 Kg/m2. Os biomarcadores foram mensurados em plasma por

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ELISA sanduiche de acordo com recomendações do fabricante (Human Adiponectin EZHADP-61K e Human Leptin EZHL-80SK, ambos Millipore, St. Charles, Missouri, USA; Human Endoglin/CD105 Quantikine DNDG00 e Human sVEGF R1/Flt-1 Quantikine DVR100B, ambos R&D Systems, McKinley, Minneapolis, USA). Para a análise estatística utilizamos o programa GraphPad Prism Versão 3.02., comparamos os grupos pelo teste T de Student (dados paramétricos) e teste qui-quadrado (dados nominais), e correlacionamos pelo teste de Pearson. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão e o nível de significância mínimo estabelecido como <0,05. Resultados Houve elevação significativa dos níveis de todos os biomarcadores em PE quando comparados a GS (todos P Conclusão Nossos resultados sugerem a existência de um mecanismo compensatório que ocorre na tentativa de corrigir este desequilíbrio angiogênico.

Palavras-chaves: Adiponectina, Angiogênese, Fatores anti-angiogênicos: sENG e sFLT-1, Leptina, Pré-eclâmpsia

Resumo: 05.017

FILHOTES DE RATAS DIABÉTICAS APRESENTAM MAIOR CAPACIDADE LIPOGÊNICA E DE OXIDAÇÃO DA GLICOSE NO TECIDO ADIPOSO PERI-EPIDIDIMAL

Autores

1D´AVILA, L.

1, OLIVEIRA, K. A. D.

2, CAMPANA, A. B.

2, PROENÇA, A. R. G. D.

2,

ANDREOTTI, S. 2, TORRES-LEAL, F. L.

2, LIMA, F. B.

1, OLIVEIRA, A. C. D.

1 INSTITUTO DE

CIÊNCIAS BIOMÉDICAS - UECE, 2 INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOMÉDICAS - USP

Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Introdução O diabetes gestacional expõe o feto a hiperglicemia na vida intrauterina, ocasionando disfunções metabólicas dos filhotes de mãe diabéticas (FMD). Objetivos O presente trabalho teve como objetivo analisar a expressão protéica na lipogênese e oxidação da glicose no tecido adiposo de ratos FMD. Código de Experimentação Animal 12237923-3/25 Código de Experimentação Humana

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Métodos Ratos Wistar fêmeas, no 5º dia de vida, foram induzidos diabetes mellitus (DM), através da injeção intraperitoneal (dose única) de STZ (120 mg/kg de p.c.). A partir da 12° semana de vida, essas fêmeas foram postas em acasalamento com ratos normais. O mesmo procedimento foi realizado com ratas não diabéticas que receberam apenas veiculo (Citrato de sódio, 10mM, pH 7,4) no período neonatal. As fêmeas grávidas foram transferidas para caixas individuais e assim permaneceram com sua ninhada até o período de desmame (21 dias após o nascimento) e foram distribuídos em dois grupos experimentais: grupo controle (C) (n=6), filhotes de ratas não diabéticas; grupo FMD (n=5), filhotes de mães diabéticas. Os filhotes machos permaneceram em acompanhamento até a 12° semana quando foram sacrificados sob anestesia (Tiopentax – 20mg/kg p.c.) seguida de decaptação. Após a laparatomia, foram coletados e pesados os coxins adiposos subcutâneo (SC) e peri-epididimal (PE). Os adipócitos foram isolados para realização de testes biológicos in vitro. Para avaliar a lipogênese e oxidação da glicose foi realizado o teste de incorporação de D-[U-14C]-Glicose em lipídeos e sua oxidação até 14CO2 em adipócitos isolados. Todos os procedimentos experimentais realizados estão de acordo com os Princípios Éticos na Experimentação Animal e foram aprovados pela Comissão de Ética em uso de Animal CEEA/UECE (12237923-3/25). Os dados foram expressos com média ± E.P.M e foi adotado o teste Two-way ANOVA com medida repetida, seguido de Bonferroni, (p < 0,05). As análises foram realizadas usando o software GraphPad Prism versão 5.0. Resultados . Apesar de não apresentarem macrossomia, os animais do grupo FMD apresentaram maior peso corporal (319,8 g ± 13,2, n= 5; p < 0,01) em comparação aos filhotes de mães não diabéticas (269,8 g ± 3,8, n= 5). Houve um aumento na incorporação de D-[U-14C]-Glicose em lipídios no coxim PE dos ratos do grupo FMD em relação aos do grupo controle, tanto basal (C:31,90+ 3,54, n=6 e FMD: 57.02 ± 8.54, n= 5, p < 0,05) como maximamente estimulado com insulina (C:46,20+ 7,24, n=6 e FMD: 83.01 ± 12.08, n= 5, p < 0,05). Em relação ao coxim SC, não houve diferença estatística, entre os grupo tanto na capacidade basal (C: 30,69 ± 1,94, n=6 e FMD: 24,73 ± 3,26) quanto na maximamente estimulado com insulina (C: 37,12 ± 2,89 e FMD: 32,10 ± 2,95). A oxidação da glicose no grupo FMD também foi significativamente maior que o grupo controle, tanto na presença (C: 37,93 + 4,59, n=5 e FMD: 64,09 ± 10,30, n= 5) como na ausência de insulina (C: 27,52 + 2,69, n=5 e FMD: 45.66 ± 8.91, n=5) no coxim PE. Não foi observado diferença no coxim SC, entre os dois grupos, tanto na capacidade basal (C: 21,62 ± 1,44, n=6 e FMD: 19,18 ± 1,66) quanto na maximamente estimulado com insulina (C: 24,84 ± 1,76 e FMD: 23,38 ± 2,04). Conclusão Os dados mostram que adipócitos PE de ratos FMD apresentaram maior capacidade lipogênica e de oxidação da glicose.

Palavras-chaves: Filhotes de ratas diabéticas, Tecido adiposo, Diabetes, Lipogênese, Oxidação da glicose

Resumo: 05.018

O TRATAMENTO A LONGO PRAZO COM MELATONINA, ASSOCIADA OU NÃO A INSULINA,PIORA O QUADRO DE HIPOGONADISMO DE RATOS DIABÉTICOS.

Autores

1OLIVEIRA, K. A.

1, VASCONCELOS, R. P.

1, ABREU, E. S.

1, D´AVILA, L. S.

2, CAMPANA, A.

B. 2, TORRES-LEAL, F. L.

2, ANDREOTTI, S.

2, LIMA, F. B.

1, OLIVEIRA, A. C.

1 Instituto

Superior de Ciências Biomédicas - UECE, 2 Instituto de Ciências Biomédicas - USP

Apoio Financeiro: FAPESP/CAPES

Resumo

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Introdução O Diabetes Mellitus é uma doença de origem multifatorial resultante de alterações na vascularização e disfunções endoteliais que podem afetar o sistema reprodutor. Essas alterações afetam principalmente testículos e epidídimos diminuindo o peso dessas estruturas. A melatonina é o principal produto de secreção da glândula pineal. Objetivos Esse estudo tem como objetivo avaliar o efeito do tratamento com melatonina associada ou não a insulina sobre a maturação sexual de ratos diabéticos. Código de Experimentação Animal 12237923-3/25 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados 24 ratos Wistar machos. O diabetes foi induzido no 5° dia de vida através de uma injeção de STZ (120mg/kg, i.p.). Após 21 dias foram distribuídos em 5 grupos (n=6): Controle (C- veiculo), Diabéticos (D-animais diabéticos sem tratamento), Melatonina (M – animais diabéticos tratados com melatonina [0,2mg/kg/dia] durante período escuro) e Melatonina associado à Insulina (MI – animais diabéticos tratados com melatonina mais insulina [0,5U/100 g às 8h e 1,0U/100 g as 16h]). Os animais foram tratados até a 12ª semana quando foram sacrificados. Foram coletados e pesados os coxins adiposos subcutâneo (SC), peri-epididimal (PE), retroperitoneal (RP) e as estruturas sexuais (testículos, vesículas seminíferas, canal deferente e epidídimo). O sangue também foi coletado para realização de dosagens séricas de testosterona e leptina. Os resultados foram expressos como media ± E.P.M. Foi adotado o teste One-way ANOVA seguido de Tukey. Foram consideradas diferenças significativas quando p <0,05. Resultados Os animais diabéticos apresentaram uma redução significativa no peso dos coxins em relação ao grupo controle. O tratamento com melatonina associada ou não à insulina não recuperou o peso inicial dos coxins SC, RP e PE, respectivamente (C: 3,60+1,01g, 3,81+1,06g e 3,22+1,20g; D: 2,07+0,66g, 1,41+0,50g e 1,58+0,67g; M: 1,86+0,46g, 0,99+0,29g e 1,16+0,37g; MI 2.59+0.48g, 2.31+0.40g e 2.15+0.43g). Os animais diabéticos com e sem tratamento apresentaram peso úmido das estruturas sexuais, significativamente menor, quando comparados ao controle (testículos: 1,8±0,06g[C], 1,03±0,12g[D], 0,93±0,13g[M], 1,13±0,02g[MI]; epidídimo: 1,59±0,04g[C], 0,78±0,14g[D], 0,43±0.11g[M], 0,87±0,03g[MI]; vesículas: 0,82±0,07g[C], 0,62±0,03g[D], 0,22±0,03g[M], 0,1±0,01g[MI] e canal deferente: 0,19±0,01g[C], 0,14±0,01g[D], 0,07±0,00g[M], 0,07±0,01g[MI]). Entretanto, os animais tratados com melatonina associada ou não a insulina apresentaram peso das estruturas menor que os animais diabéticos. Em relação aos níveis de leptina (ng/mL) os animais diabéticos apresentaram baixos níveis quando comparados ao controle e o tratamento não conseguiu reverter esses valores (C: 4,72±0,43; D: 3,10±0,27; M: 2,08±0,44; MI: 2,39±0,27). Os animais diabéticos apresentaram níveis reduzidos de testosterona (ng/mL) quando comparados ao grupo controle. O tratamento reduziu ainda mais esses valores, deixando-os menores que os do grupo D (C:114,7±15,7; D: 15,79±3,98; M: 5,72±2,16; MI: 7,20±3,55). Conclusão Esses resultados mostram que o tratamento com melatonina associada ou não com insulina promoveu uma piora no quadro de hipogonadismo presente nos animais diabéticos, além de não recuperar a adiposidade desses animais.

Palavras-chaves: Diabetes, Melatonina, Testosterona

Resumo: 05.019

EFEITO DA INGESTÃO CRÔNICA DE CINAMALDEÍDO SOBRE A FUNÇÃO TIREOIDEANA E O PERFIL LIPÍDICO DE RATOS SAUDÁVEIS

Autores 1GAIQUE, T. G.

1, BENTO-BERNARDES, T

1, MEDEIROS, R. F.

1, PEREIRA-TOSTE, F.

1,

MIGUEL, T. S. 1, OLIVEIRA, K. J.

1 Departamento de fisiologia e farmacologia - UFF

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, CAPES

Resumo Introdução Recentes estudos in vivo e in vitro que investigam o uso do cinamaldeído, componente purificado da canela, demonstram ações benéficas desse composto sobre a homeostase glicêmica e lipídica, alvos comuns de regulação por hormônios tireoideanos (HT). Entretanto, ainda é desconhecida qualquer relação entre a ingestão crônica deste composto e a função tireoideana. Objetivos Investigar ações da ingestão crônica de cinamaldeído sobre a função tireoideana e o perfil lipídico de ratos wistar saudáveis Código de Experimentação Animal 272 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos Wistar machos, adultos, foram suplementados por gavagem durante 30 dias com cinamaldeído (CIN) (40mg/kg m.c./dia) ou veículo (DMSO 0,05%), grupo controle (CT). Ingestão alimentar e massa corporal foram avaliados semanalmente. Ao final do tratamento a massa do tecido adiposo branco visceral (TAB) foi medida, as concentrações séricas de T3 e T4 totais foram quantificadas por radioimunoensaios específicos (n=9-11) e o perfil lipídico foi avaliado por Kits comerciais específicos seguindo as recomendações do fabricante (n=7-13). O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal da UFF, sob o registro n° 272. Os dados foram analisados pelo programa estatístico GraphPad Prism 5 utilizando o teste-t de Student e foram expressos como média ± erro padrão da média. As diferenças foram consideradas significativas quando p Resultados Não houve diferença na massa corporal final e ingestão entre os grupos cinamaldeído e controle, enquanto a massa do TAB foi menor (-21%, p=0,0161) no CIN comparado ao CT. Encontramos maior concentração sérica de T4 (+14%, p=0,044) e menor concentração de T3 (-28%, p=0,012) no grupo CIN comparado ao CT. Não observamos diferenças significativas nos níveis séricos de colesterol total, lipoproteínas de alta densidade (colesterol HDL), lipoproteínas de baixa densidade (colesterol LDL), lipoproteínas de muito baixa densidade (colesterol VLDL) e de triacilgliceróis dos animais suplementados com cinamaldeído quando comparados aos animais controles. Conclusão

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A ingestão crônica de cinamaldeído modifica a função tireoideana, ao alterar as concentrações séricas de T3 e T4 total, sem modificar o perfil lipídico de ratos saudáveis. As consequências da modulação observada sobre a função tireoideana estão sendo investigadas.

Palavras-chaves: Cinamaldeído, Hormônios tireoideanos , Perfil lipídico

Resumo: 05.020

EFEITOS DO 17β-ESTRADIOL SOBRE A EXPRESSÃO DE TGF-β E ESPÉCIES REATIVAS DE OXIGÊNIO EM CÉLULAS PCCL3

Autores 2FARIA, C. C.

2, HECHT, F.

2, ORTENZI, V. H.

2, FERREIRA, A. C. F.

2, CARVALHO, D.

2,

FORTUNATO, R. S. 2 INSTITUTO DE BIOFÍSICA CARLOS CHAGAS FILHO - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq

Resumo Introdução A prevalência de disfunções tireoidianas é superior em mulheres e este dimorfismo parece estar relacionado à ação do estrogênio. Um dos motivos relacionados a essa maior prevalência de disfunções tireóideas em mulheres seria um desequilíbrio no balanço redox tireóideo, causado pelo aumento da atividade das enzimas NADPH Oxidases tireóideas, aumentando o estresse oxidativo nesse tecido. Uma hipótese seria que o estrogênio poderia estimular a secreção de TGF-Β, uma vez que o TGF-Β é um potente estimulador da NOX4. A transdiferenciação das células epiteliais em células mesenquimais altamente móveis e apolares, processo denominado transição epitélio mesênquima (TEM), foi descrito em tumores tireóideos e moléculas como o TGFΒ e NADPH Oxidases possuem papel fundamental na TEM, estimulando esse processo. Objetivos Avaliar o efeito do estrogênio sobre a expressão e atividade das NADPH Oxidases e a expressão de TGF-Β em linhagem de célula folicular tireóidea. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana Métodos O RNAm de células PCCL3, incubadas por 72 horas com diferentes concentrações de 17Β-estradiol (10 -9 , 10 -8 e 10 -7 M), foi obtido através do kit RNeasy®Plus Mini Kit (Qiagen) seguindo as instruções do fabricante. A análise da expressão gênica foi realizada por PCR em tempo real utilizando SYBR green. A análise da geração de H 2 O 2 foi feita através do método AmplexRed/HRP.

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Resultados Em relação aos níveis de RNAm de TGF-Β1, observamos um aumento significativo nas células tratadas com 17Β-estradiol na concentração de 10 -7 M (C=1,0 ± 0,07; 10 -9 =1,44 ± 0,21; 10 -8 =1,85 ± 0,31; 10 -7 =2,52 ± 0,43 UA). O mesmo foi observado para os níveis de RNAm da NOX4, com uma aumento significativo na concentração de 10 -7 M quando comparado ao controle (C=1,0 ± 0.08; 10 -9 =1.42 ± 0,29; 10 -8 =1,57 ± 0,22; 10 -7 =3,82 ± 0,85 UA). Corroborando com o aumento da expressão da enzima NOX4, o tratamento aumentou a geração de H 2O 2 nessa mesma concentração do hormônio (C=2,52 ± 0,32; 10 -9 =2,14 ± 0,12; 10 -8 =2,42 ± 0,18; 10 -7 =3,78 ± 0,22 nmol H 2 O 2 /h/10 5 células). Conclusão Com base nesses resultados, concluímos que o tratamento com estrogênio foi capaz de aumentar a expressão de TGF-Β e de NOX 4, que acarreta um aumento da geração de H 2 O 2 nas células. Porém, mais experimentos são necessários para elucidar a influência do aumento da expressão de TGF-Β sobre a expressão da NOX4 e consequente geração de H 2 O 2 .

Palavras-chaves: 17β-ESTRADIOL, ESPÉCIES REATIVAS DE OXIGÊNIO, NADPH OXIDASES, TGF-β, TIREÓIDE

Resumo: 05.021

DETECÇÃO DE CÉLULAS L NA MUCOSA DO TRATO GASTROINTESTINAL POR IMUNOHISTOQUÍMICA EM PACIENTES SUBMETIDOS A TRATAMENTO CIRÚRGICO PARA CONTROLE DA DIABETES MELLITUS TIPO 2.

Autores 1ESTABILE, P. C.

1, MILLÉO, F. Q.

1, VICARI, M. R.

1, NOGAROTO, V.

1, CAMPAGNOLI, E. B.

1, ARTONI, R. F.

1 Biologia Estrutural,Molecular e Genética - UEPG

Apoio Financeiro: CAPES e SETI/UGF

Resumo Introdução A Diabetes Mellitus Tipo 2 (DM2) é uma das doenças mais impactantes da atualidade. Isso se deve, em grande parte, a rápida mudança no estilo de vida, especialmente hábito alimentar e sedentarismo, interferindo na fisiologia e expectativa de vida da população. Objetivos Investigar a presença de células L no intestino delgado por imunohistoquímica em pacientes submetidos a gastroenteromentectomia adaptativa com bipartição parcial nas condições pré e pós – operatório. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana nº 37/2010 protocolo 07883/10.

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Métodos Participaram do estudo 7 pacientes portadores de DM2 com idade > 35 e 35 Kg/m2 de ambos os sexos, que foram submetidos ao procedimento cirúrgico. Amostras de tecidos foram retiradas por biopsia do intestino (jejuno e íleo) nas condições pré e pós-operatório. Fragmentos de tecidos do intestino foram fixados, e posteriormente realizado a detecção imunológica por meio de recuperação de antígenos. A análise do tecido alvo foi realizada por microscopia óptica, comparando de modo quantitativo a presença de células L nas condições pré e pós-operatório. Para as análises estatísticas foi aplicado o Teste t Student (p Resultados A imunohistoquímica evidenciou um número maior de células marcadas com anticorpo contra GLP-1(n=7;10.5 ± 0.5) e PYY3-36 (n=7;5.85 ± 0.55) no pós-operatório em relação ao pré-operatório GLP-1 (n=7;6,71 ± 1,16) e no PYY3-36 (n=7;3.28 ± 0.28). Conclusão Um maior número de células L em atividade, foram encontradas na condição pós-operatório, o que implica numa melhor sinalização dos peptídeos investigados à produção de insulina endógena, sugerindo uma resposta e funcionamento da via neuroendócrina mais adequada ao controle da DM2.

Palavras-chaves: anticorpo, hiperglicemia, células L, imunomarcação, glp-1

Resumo: 05.022

EFEITO DO FLAVONÓIDE RUTINA SOBRE A CAPTAÇÃO TIREOIDEA DE IODO

Autores 1GONÇALVES, C. F. L.

1, CARVALHO, D. P.

1, FERREIRA, A. C. F.

1 IBCCF - FISIOLOGIA -

UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ; CAPES; CNPq

Resumo Introdução A rutina é um bioflavonóide amplamente distribuído no reino vegetal, estando presente na dieta humana. As principais fontes são os vegetais folhosos e frutas cítricas. Diversos estudos demonstram relação entre o consumo de plantas ricas em flavonóides e a ocorrência de bócio e hipotireoidismo, o que sugere efeito destes compostos sobre a função tireóidea. Estudos prévios de nosso grupo sugerem que a administração de rutina a ratos é capaz de modular a função tireóidea, sendo um dos principais efeitos o aumento da captação de radioiodeto. Contudo, não se sabe se a rutina é capaz de aumentar a capacidade da tireóide de armazenar iodo a longo prazo e nem se este flavonóide regula a captação de iodo direta ou indiretamente. Objetivos O presente estudo visa avaliar a influência do tratamento in vivo com o flavonóide rutina sobre a capacidade da tireoide de armazenamento de iodo e o possível efeito da rutina sobre a captação de iodeto e a viabilidade celular em linhagem de células de tireóide de rato PCCL3.

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Código de Experimentação Animal IBCCF135 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos Wistar machos adultos, pesando em média 250g, foram tratados com o veículo propilenoglicol (C) ou rutina (R) na dose de 20mg/kg de peso corporal, sc, 5 dias (nº de aprovação no comitê de ética: IBCCF135, n= 5 animais/grupo). Os animais receberam NaI125 (250.000cpm) 24h antes da eutanásia. As tireóides foram removidas, pesadas e sua radioatividade foi medida em contador gama. A contagem foi relacionada ao peso da tireóide. A linhagem de células PCCL3 foi cultivada em meio F-12 completo (com 5% de soro fetal bovino e 6 hormônios). Para o ensaio de viabilidade celular, as células foram cultivadas por 48 horas em placas de 96 poços em meio F-12 completo contendo rutina (0,1, 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1000μM). O meio foi descartado, adicionou-se MTT 0,5 mg/mL, incubou-se por 3h, lavou-se e adicionou-se DMSO. A absorbância foi lida em espectrofotômetro (570 nm). Para o ensaio de captação de iodeto, as células foram cultivadas em placas de 24 poços nas mesmas condições descritas acima. Após o tratamento, as células foram incubadas com NaI125 0,1 mCi a 37°C por 45 minutos. A seguir, as células foram lavadas, lisadas com NaOH 0,04 N e a radioatividade do extrato foi medida. Os resultados foram normalizados pela concentração de proteína da amostra e expressos como média±erro padrão da média. Resultados Nossos resultados, ainda preliminares, indicam que o tratamento com rutina não é capaz de modular o conteúdo de radioiodo 24 horas após sua administração. Em linhagem de célula PCCL3, o tratamento com rutina não alterou a viabilidade celular de forma significativa em nenhuma das concentrações testadas. Já a captação de radioiodeto foi estimulada significativamente pelo tratamento com rutina somente na concentração de 250μM (C=1,00±0,03; R=1,14±0,04; N=4; p <0,05). Conclusão Nossos dados sugerem que o efeito estimulatório da rutina sobre a captação de radioiodeto observado em estudos prévios de nosso grupo in vivo é devido a um efeito direto deste flavonoide sobre o co-transportador sódio-iodeto na tireóide, uma vez que tal efeito também é observado in vitro , em células PCCL3. Nossos resultados também sugerem que a rutina não afeta a viabilidade dessas células. Além disso, o efeito estimulatório da rutina parece ser transitório, uma vez que não detectamos aumento do conteúdo de radioiodo após 24h nos animais tratados com rutina. Contudo, mais estudos devem ser realizados a fim de comprovarmos tais resultados.

Palavras-chaves: TIREÓIDE, RUTINA, NIS

Resumo: 05.023

REGULAÇÃO DO SISTEMA NIS/LPO/DUOX1 PELO ESTROGÊNIO EM TECIDO MAMÁRIO

Autores 1SILVA, J. G. O.

1, RÊGO-MONTEIRO, I. C. C.

1, CARVALHO, D. P.

1, LEITÃO, A. C.

1,

FORTUNATO, R. S. 1 Centro de Ciências da Saúde - UFRJ

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ

Resumo Introdução Na mama lactante ocorre um aumento da expressão e atividade de enzimas responsáveis pela incorporação do iodeto na caseína do leite. Enquanto o co-transportador sódio/iodeto (NIS) possibilita a entrada do iodeto na célula, a enzima lactoperoxidase (LPO) catalisa a inserção dessa molécula na caseína, necessitando para isso do peróxido de hidrogênio, cuja fonte geradora permanece obscura. A enzima oxidase dual (DUOX) é uma forte candidata, uma vez que está presente na membrana apical das células epiteliais mamárias produzindo H2O2 de forma dependente de cálcio. Um desbalanço desse sistema pode ser prejudicial para as células por aumentar a disponibilidade do H2O2, podendo causar a oxidação de macromoléculas celulares. Assim, é interessante realizar o estudo da influência do estrogênio sobre a atividade e expressão dessas enzimas no tecido mamário, uma vez que pode ser um dos mecanismos desencadeados pelo estrogênio na indução do câncer de mama. Objetivos Analisar os níveis dos RNAm da DUOX1, DUOXA1, LPO e do NIS em linhagens celulares epiteliais mamárias e em tecido mamário de ratas estrogenizadas ou não. Código de Experimentação Animal IBCCF160 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos Wistar fêmeas (n=12) com idade aproximada de 90 dias foram tratados ou não com estrogênio (grupo E2) na dose de 0.7 µg/100g de p.c. durante 7 dias (COMISSÃO DE ÉTICA COM USO DE ANIMAIS NÚMERO IBCCF160). Além disso, 3 linhagens celulares foram utilizadas: células epiteliais não tumorigênicas (MCF10A), adenocarcinoma mamário não-invasivo humano (MCF7) e carcinoma mamário metastático (MDA-MB 231). Após a extração de RNA total do tecido mamário de ratas com o reagente TRIzol® (Life Techonologies) e das linhagens celulares com o kit RNeasy Plus (Qiagen), foi realizada a síntese de cDNA com o kit comercial High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Life Techonologies) seguida da reação de PCR em tempo real utilizando-se o reagente SYBR Green (Sinapse), seguindo as recomendações do fabricante. Avaliamos a expressão dos seguintes genes: DUOX1, DUOXA1, LPO e NIS. A análise estatística foi feita através de Unpaired t test with equal SD ou Ordinary one-way ANOVA. Resultados Pôde-se observar um aumento significativo de DUOX1 (CONTROLE = 1,00 ± 0,29 N=5 e E2 = 9,59 ± 0,65 N=4) e de DUOXA1 (CONTROLE = 1,00 ± 0,33 N=5 e E2 = 5,70 ± 0,33 N=4) no grupo tratado com E2 em comparação ao controle. Houve uma tendência de aumento de NIS nas ratas tratadas em comparação com as controle (CONTROLE = 1,00 ± 0,28 N=4 e E2 = 22,95 ± 10,37 N=6) e diferença estatística na diminuição de LPO (CONTROLE = 1,00 ± 0,18 N=5 e E2 = -2,5 ± 0,57 N=4). Nas células MCF10A, MCF7 e MDA-MB-231, verificando os níveis de NIS e utilizando a MCF10A como CONTROLE, foi observado uma menor expressão na célula MB-MDA 231 (MCF10A = 1,00 ± 0,86 N=4, MCF7 = -0,07 ± 0,72 N=4, MDA-MB 231 = -82,11 ± 42,8 N=4). Além disso, observamos que na linhagem MDA-MB-231 a expressão de LPO foi menor em relação à MCF7 (MDA-MB-231= -15,74 ± 8,47 N=3, MCF7=1,00 ± 0,68 N=4), enquanto nas células MCF10A os valores foram indetectáveis. DUOX 1 está expresso na MCF10A e indetectável nas MCF7 e MDA-MB-231. Conclusão Os altos níveis de DUOX1, NIS e uma baixa expressão de LPO após o tratamento com E2, sugerem que o H2O2 produzido pode estar sendo acumulado na glândula mamária, contribuindo para o estresse oxidativo.

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Palavras-chaves: Co-transportador sódio/iodeto (NIS), Estrogênio, Lactoperoxidase, NADPH oxidases, Peróxido de Hidrogênio

Resumo: 05.024

TRIBUTILESTANHO ALTERA MORFOFISIOLOGIA DA GLÂNDULA ADRENAL DE RATAS

Autores

1MERLO, E.

1, PODRATZ, P. L.

1, SENA, G. C.

1, BERTULOSO, B. D.

2, LIMA, L. C. F.

1,

GRACELI, J. B. 1 Departamento de Morfologia - UFES,

2 Departamento de Biofísica e Fisiologia -

UFMG

Apoio Financeiro: UFES (Piic2012-13), FAPES e CNPq

Resumo Introdução Compostos organoestânicos (OT), como tributilestanho (TBT) podem afetar a esteroidogênese, alterando parâmetros reprodutivos, através da inibição da aromatase, tornando gastrópodes estéreis pelo desenvolvimento de uma síndrome denominada imposex. Essas disfunções endócrinas podem atingir o sistema reprodutor de mamíferos, podendo levar a desequilíbrios na biossíntese de hormônios esteroidais, como os adrenais e, consequentemente em parâmetros metabólicos. Objetivos Avaliar influência do TBT em parâmetros metabólicos e na morfometria da glândula adrenal em ratas. Código de Experimentação Animal 106/2011 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizadas ratas Wistar férteis com ciclo reprodutivo regular (±230g, ±3 meses de idade). Os animais foram dividos em: 1) Controle (CON, n=10, tratados com solução alcoólica 0.1%) Tratado com TBT (TBT, n=10, 100ng/kg diluido em solução alcoólica 0,1%, Sigma). Após 14 dias de tratamento diário, por gavagem, os animais foram alocados em gaiolas metabólicas para coleta de amostras de sangue e de urina de 24h para avaliar parâmetros da função renal, metabólica e dosagem hormonal. Posteriormente, os animais foram anestesiados com ketamina (30 mg/Kg, im) e xilazina (3mg/Kg, im), suas glândulas adrenais foram retiradas, pesadas e utilizadas para análise histológica pela coloração de H&E e Oil red (Sigma, 60 campos histológicos aleatórios diferentes foram analisados). Os dados foram expressos como média±epm, seguido pelo teste t Student (não pareado, e pareado, p Resultados Não encontramos alteração no perfil lipídico (HDL, LDL e Colesterol Total), no peso dos animais, na ingestão de ração, de

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água, na glicemia e na glicosúria. Contudo, encontramos redução no ritmo de filtração glomerular (CON: 0,97±0,1; TBT 0,65±0,1 mL/min, p <0,05). Conclusão Esses resultados sugerem que apesar de o TBT não modificar o perfil lipídico e a glicemia, encontramos alterações na morfofisiologia da glândula adrenal de ratas.

Palavras-chaves: tributilestanho, glândula adrenal, hormônios esteróides, morfofisiologia

Resumo: 05.025

REMODELAMENTO SINOVIAL EM MODELO EXPERIMENTAL DE DIABETES

Autores

1ANDRADE, P. C.

2, VELOSA, A. P. P.

2, ATAYDE, S. A.

4, CATANOZI, S.

5, PARRA, E. R.

6,

CAPELOZZI, V. L. 7, TEODORO, W. R.

1, TEODORO, W. . R.

1 Clinica Medica/ Fisiopatologia -

FMUSP, 2 Clinica Medica - FMUSP,

3 Disciplina de Reumatologia - FMUSP,

4 Endogrinologia -

FMUSP, 5 Patologia - FMUSP,

6 Patologia - FMUSP,

7 Disciplina de Reumatologia - FMUSP

Apoio Financeiro: Frederic Fundation

Resumo Introdução Diabetes Mellitus tem sido associada a distúrbios osteoarticulares, cujos mecanismos etiológicos parecem se correlacionar com as doenças microvasculares associadas à hiperglicemia crônica. Neste contexto, estudar o acometimento do tecido sinovial se torna fundamental, devido à sua alta vascularização e primordial função na nutrição dos componentes capsulares, na tentativa de esclarecer a etiologia do comprometimento articular presente em pacientes diabéticos. Objetivos Avaliar o remodelamento dos colágenos tipos I (COL I), III (COL III) e V (COL V) no tecido sinovial após indução do diabetes em ratos. Código de Experimentação Animal 149/13 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos Wistar (n=30) divididos em: grupo diabético (GD, n=15) e grupo controle (GC, n=15), com 2,5 meses de idade (200-250g), foram fornecidos pelo Centro de Bioterismo da Faculdade de Medicina da USP. No GD, o diabetes foi induzido por infusão de estreptozotocina, diluída em solução fisiológica 0,9%, na veia caudal dos animais (35mg/kg), anestesiados por via intraperitoneal com pentobarbital sódico (Hypnol® 60mg/kg de peso). O GC foi submetido à infusão do mesmo volume

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de solução fisiológica. Os animais foram mantidos no Biotério do Departamento de Clínica Médica, com ciclo de 12h claro/12h escuro, à temperatura de 22 ± 2°C, recebendo água e ração padronizada a libitum. O protocolo experimental cumpre as regras adotadas pelo Colégio Brasileiro de Experimentação Animal (COBEA), com aprovação da Comissão de Ética da Faculdade de Medicina USP (CEP-FMUSP) Protocolo # 149/13. O peso corporal dos ratos foi monitorado semanalmente e o sangue coletado antes e após a indução do diabetes para avaliação da glicemia. Após a eutanásia a sinóvia foi coletada e fixada em formol 10%, durante dois dias, e submetida às técnicas histológicas de rotina. A análise morfológica da sinóvia foi realizada através da coloração de hematoxilina e eosina, e a histoarquitetura das fibras de colágeno pelo Picrosírius em microscópio de polarização. A imunofluorescência foi usada na identificação do COL I, COL III e COL V. A análise histomorfométrica foi realizada através da análise de imagem usando o software Image Pro plus 6.0. Para quantificação do depósito de colágeno na sinóvia foi usada a dosagem bioquímica da 4-hidroxiprolina. Resultados Foi observado um aumento da glicemia no GD comparado com o GC (426,2±65,4ml/dl vs. 97,46±6,7ml/dl) e diminuição do peso no GD comparado ao GC (263±19,97g vs. 460,46±65,43g; p Conclusão O tecido sinovial apresenta grande mudança na histoarquitetura das fibras de colágeno e intenso processo fibrótico, caracterizado pelo depósito de COL I e COL III. Esta alteração no tecido sinovial poderia influenciar diretamente no acometimento articular presente no paciente diabético.

Palavras-chaves: Diabetes, Modelo experimental, Sinovia, Remodelamento

Resumo: 05.026

TRIBUTILESTANHO PREJUDICA FUNÇÃO REPRODUTIVA AO LONGO DO EIXO HIPOTÁLAMO-HIPÓFISE-OVÁRIO VIA ER-ALFA DE RATAS

Autores

1SENA, G. C.

1, PODRATZ, P. L.

2, MATSUMOTO, S. T.

3, TAKIYA, C. M.

1, MIGUEL, E. C.

1,

GRACELI, J. B. 1 Morfologia - UFES,

2 Biologia - UFES,

3 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho

- UFRJ

Apoio Financeiro: UFES, FAPES, CNPq, CAPES.

Resumo Introdução O tributilestanho (TBT), um contaminante ambiental comumente utilizado em tintas anti-incrustantes para embarcações, bioacumula-se para outros níveis tróficos, especialmente pela dieta rica em mariscos contaminados. Inibe a aromatase, produzindo efeitos prejudiciais no sistema endócrino de mamíferos, incluindo humanos e roedores, e prejudica sua função reprodutiva in vivo e in vitro. Objetivos Avaliar possível correlação entre distúrbios dos esteroides ovarianos na gênese de prejuízos reprodutivos ao longo do eixo hipotálamo-hipófise-ovário induzidos por baixas doses de tributilestanho.

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Código de Experimentação Animal CEUA 047/10 Código de Experimentação Humana Métodos Ratas Wistar (de aproximadamente 230g e com 12 semanas de idade) com ciclo estral regular foram divididas em: 1) Controle (CON, n=10, tratados com veículo); 2)Tratado com tributilestanho (TBT, n=10, 100ng/Kg, diluído em solução alcoólica, 0,1%, Sigma,) por 15 dias, por gavagem. O ciclo estral foi avaliado diariamente, por análise citológica de esfregaço vaginal. Os animais foram anestesiados com ketamina (30 mg/kg, im) e xilazina (3 mg/kg, im), tiveram sangue coletado para dosagem de hormônios sexuais (radioimunoensaio). Ovários, útero, pituitária e hipotálamo foram isolados para análise da expressão da proteína do receptor de estrogênio alfa (ER-α) por western blotting. O controle interno utilizado foi à proteína β-actina. Ovários e útero foram analisados histologicamente (H&E) e por imunohistoquímica (IHQ, percentual de células positivas/campo/40 campos aleatórios/lâmina) para ED1+ uterino, PNCA+ e TUNEL+ em ovários. In vitro, células de epitélio ovariano de Hamster (CHO-K1) foram expostas ao TBT por 3h (TBT1: 2,0.10-3; TBT2: 2,0.10-2; TBT3: 2,0.10-1ng/ml) para teste do micronúcleo (MN). Ovários foram ainda analisados por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dados foram expressos como média±epm, seguido pelo teste t Student (p Resultados TBT diminuiu a regularidade (%), a duração do ciclo reprodutivo, as fases de proestro e diestro, e o nº de células epiteliais em proestro (p Conclusão A exposição ao TBT prejudica a função reprodutiva de ratas férteis por desequilíbrio da modulação do ER-α pelo estradiol ao longo do eixo hipotálamo-hipófise-ovário e indução de alterações morfológicas, podendo tornar-se um fator de risco reprodutivo.

Palavras-chaves: Contaminação Ambiental, Tributilestanho, Função Reprodutiva, Receptor de Estrogênio, Eixo Hipotálamo-Hipófise

Resumo: 05.027

EFEITO DO TRATAMENTO COM MELATONINA ASSOCIADA OU NÃO A INSULINA NO PERFIL METABÓLICO DE RATOS DIABÉTICOS INDUZIDOS POR STZ

Autores

1VASCONCELOS, R. P.

1, OLIVEIRA, K. A. D.

2, PROENÇA, A. R. G. D.

2, CAMPANA, A. B.

2,

ANDREOTTI, S. 2, SERTIÉ, R. A. L.

1, COELHO-DE-SOUZA, A. N.

2, LIMA, F. B.

1, OLIVEIRA,

A. C. D. 1 Instituto Superior de Ciências Biomédicas - UECE,

2 Instituto de Ciências Biomédicas - USP

Apoio Financeiro: Fapesp Funcap

Resumo

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Introdução O Diabetes Mellitus (DM) é caracterizado por hiperglicemia por deficiência na secreção e/ou ação de insulina. Animais diabéticos induzidos por estreptozotocina (STZ) neonatal apresentam hiperglicemia e hipoinsulinemia acompanhadas de resistência à insulina. Estudos relatam que o tratamento com melatonina atenua as anormalidades metabólicas e promove um controle glicêmico a longo prazo em animais diabéticos. Objetivos O objetivo desse estudo é avaliar se o tratamento com melatonina associada ou não a insulina promove melhora no perfil metabólico de ratos diabéticos induzidos por STZ. Código de Experimentação Animal 12237923-3/25 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados 24 ratos Wistar. O diabetes foi induzido no 5° dia de vida (STZ: 120mg/kg, i.p.) e após desmame, foram distribuídos em 5 grupos (n=6): Controle (C), Diabéticos sem tratamento (D), Melatonina (M–diabéticos tratados com melatonina [0,2mg/kg/dia]) e Melatonina associado à Insulina (MI– diabéticos tratados com melatonina mais insulina [0,5U/100 g às 8h e 1,0U/100 g as 16h]). A glicemia foi medida semanalmente e na 10° semana foi realizado o teste de tolerância oral à glicose (GTT). Os animais foram tratados até a 12ª semana quando foram sacrificados. Os tecidos adiposos subcutâneo (SC), peri-epididimal (PE), retroperitoneal (RP) foram pesados e coletado também o sangue para dosagens de TAG, colesterol e Insulina. Os resultados foram expressos como media ± E.P.M. Foi adotado o teste One-way ANOVA seguido de Tukey (p Resultados Os animais dos grupos D, M e MI apresentaram peso corporal menor que o grupo C (C: 313,4+37,3g, D: 243+31,3g, M: 232,7+19,5g e MI: 247+14,7g). Os pesos dos coxins SC, PE e RP dos grupos D e M não foram diferentes do grupo C, entretanto o grupo MI recuperou parcialmente o peso dos coxins SC e RP (coxins SC, PE e RP respectivamente C: 3,60+1,01g, 3,81+1,06g e 3,22+1,20g; D: 2,07+0,66g, 1,41+0,50g e 1,58+0,67g; M: 1,86+0,46g, 0,99+0,29g e 1,16+0,37g e MI 2.59+0.48g, 2.31+0.40g e 2.15+0.43g). A porcentagem de gordura corporal (calculada a partir do somatório dos 3 coxins) apresentou uma redução (p Conclusão Esses resultados mostram que apesar do tratamento com melatonina associado com insulina não seja capaz de melhorar a hipoinsulinemia e peso corporal dos ratos diabéticos, melhorou a hiperglicemia e a adiposidade corporal, promovendo um controle glicêmico a longo prazo.

Palavras-chaves: Melatonina, Tecido adiposo, Diabetes

Resumo: 05.028

Dimorfismo sexual no balanço redox hepático de ratos

Autores

1SILVA, V. H. O. D. A.

1, FRANKENFELD, S. P.

1, VILAS-BÔAS, T. D. S.

1, RESENDE, C. M. C.

1,

GOLDENBERG, R. C. D. S. 1, CARVALHO, D. P. D.

1, LEITÃO, A. A. D. C.

1, FORTUNATO, R. S.

1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho-IBCCF - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ e CNPq

Resumo Introdução A doença hepática alcoólica (DHA) pode ser caracterizada por diversas mudanças morfofuncionais do fígado, dentre elas a fibrose. Além disso, já é bem descrito na literatura que não apenas a quantidade de álcool, mas também o gênero do indivíduo está associado com essa mudança, sendo que há discussão ainda sobre o sexo mais afetado, tornando assim necessários mais estudos para se compreender esse fenômeno. As espécies reativas de oxigênio (ERO) estão relacionadas com o desenvolvimento da fibrose em diversos tecidos do organismo, inclusive o fígado. O balanço redox na célula é mantido pelo equilíbrio entre a produção de ERO, produzidas principalmente pelas NADPH Oxidases (NOX), e a sua defesa antioxidante. Objetivos Avaliar a existência de um dimorfismo sexual no balanço redox hepático de ratos wistar. Código de Experimentação Animal IBCCF028 Código de Experimentação Humana Métodos Nesse estudo foram utilizados ratos wistar machos (pesando ± 350g) e fêmeas (pesando ± 200g) com 4 meses de idade. Os animais que foram castrados e controle foram sacrificados 9 dias após a cirurgia. A geração de H2O2 foi realizada pelo método Amplex Red/HRP. A atividade da enzima catalase foi medida por espectrometria avaliando-se a degradação de H2O2 a 240nm. A análise do conteúdo do grupamento tiol livre foi feita por espectrofotometria utilizando o ácido 5,5-ditionitrobenzóico (DTNB) à uma leitura de 412 nm. A avaliação da expressão de RNAm das enzimas NOX foi avaliada por PCR em tempo real. Todos os experimentos tiveram numero amostral igual a 5, os dados foram expressos como média ± EPM e a análise estatística foi realizada por Two-Way ANOVA, seguido por pós-testes de comparações múltiplas de Bonferroni para os experimentos com grupos: macho, fêmea, macho castrado e fêmea castrada; e para os grupos: macho e fêmea foram feitos teste t não pareado. Resultados Houve uma maior geração de H2O2 nos machos quando comparados com as fêmeas , porém a castração não alterou esse parâmetro (M=55,3 ± 5,7, F=34,96 ± 2,5, Mc=44,69 ± 3,1, Fc=35,46 ± 2,8). Em relação ao conteúdo do grupamento tiol livre, não houve diferença significativa entre os grupos (M=72,4 ± 5,2, F=58,29 ± 6,4, Mc=67,81 ± 7,7, Fc=74,92 ± 4,2). A atividade da catalase foi maior nas fêmeas em relação aos machos, porém não houve diferença significativa na castração (M=46,07 ± 7,4 F=60,64 ± 6,3 Mc=36,78 ± 7,4 Fc=55,83 ± 8,4). Na expressão de NADPH oxidases, observamos uma maior expressão da NOX4 nos machos ( M=1,00 ± 0,10 F=0,05 ± 0,02), enquanto que a expressão de NOX2 (M=1,00 ± 0,17 F=0,87 ± 0,16) e p22phox (M=1,00 ± 0,12 F=1,05 ± 0,15) não foi diferente entre os grupos. Conclusão Sendo assim, observamos que há um dimorfismo sexual no balanço redox hepático, em que os machos teriam uma

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tendência pró-oxidativa . Tais análises levam a crer que esta seria uma possível explicação para a maior letalidade de machos quando estes são expostos a dano hepático pelo álcool, no entanto mais experimentos são necessários para concluir o trabalho.

Palavras-chaves: Defesa Antioxidante, Dimorfismo Sexual, Doença Hepática Alcóolica, Estresse Oxidativo, NADPH Oxidase

Resumo: 05.029

LEPTINA E SUA VIA DE SINALIZAÇÃO CELULAR: ALTERAÇÕES NO CORAÇÃO DA PROLE ADULTA DE RATAS OBESAS

Autores

1ZECA, S. G.

2, FERNANDES, T. P.

2, ROCHA, C. P. D. D.

2, PAZOS-MOURA, C. C.

2,

TREVENZOLI, I. H. 1, ALMEIDA, N. A. D. S.

1 DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS

FISIOLÓGICAS - UFRRJ, 2 DEPARTAMENTO DE BIOFÍSICA CELULAR E DE SISTEMAS -

UFRJ

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERJ.

Resumo Introdução A obesidade é frequentemente associda a doenças cardiovasculares e a ativação da via da leptina relaciona-se à alterações na contratilidade, metabolismo, hipertrofia cardíaca e hipertensão arterial. Assim, a hiperleptinemia parece ser um fator determinante para o surgimento de doenças cardiovasculares na síndrome metabólica. Objetivos O objetivo desse trabalho foi avaliar a expressão de leptina e de proteínas da sua via de sinalização celular no coração da prole adulta de ratas obesas. Código de Experimentação Animal UFRRJ 009448 Código de Experimentação Humana Métodos Ratas Wistar, com 60 dias de idade, foram alimentadas com dieta controle (9% de gordura, grupo C) ou dieta hiperlipídica (29% de gordura, grupo DH) por 8 semanas consecutivas e durante a gestação (conseguida pelo cruzamento com ratos não-obesos) e lactação. As ratas controle deram origem aos machos do grupo Controle (C), enquanto as ratas DH deram origem à prole macho do grupo Obesidade Materna (OM). Metade de ambas as proles foi eutanasiada em atmosfera de CO2 ao fim do desmame (21 dias) e a outra metade recebeu dieta normolipídica ad libitum até os 180 dias de vida, quando foi eutanasiada com auxílio de guilhotina (Protocolo UFRRJ 009448). Foram utilizados 7 animais por grupo experimental,

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sendo p Western Blotting e mRNA para expressão cardíaca de leptina por q-PCR. Resultados Observamos que a prole OM apresenta maior massa corporal aos 21 (C= 34,6±2,6g; OM= 54,7±2,6g) e aos 180 dias de vida (C= 373,1±5,6g; OM= 421,1±4,8g), assim como maior massa dos reservatórios adiposos brancos inguinal (21 dias: C= 0,01±0,001g; OM= 0,02±0,001g; 180 dias: C=0,02±0,002g; OM= 0,03±0,002g), epididimal (21 dias: C= 0,0008±0,0001g; OM= 0,003±0,0003g; 180 dias: C=0,02±0,001g; OM= 0,03±0,0009g) e retroperitoneal (21 dias: C= 0,002±0,0004g; OM= 0,004±0,0005g; 180 dias: C= 0,02±0,001g; OM= 0,03±0,001g). Embora o peso absoluto dos corações dos animais da prole OM seja maior que da prole C, tanto aos 21 (C= 0,17±0,01g; OM= 0,26±0,01g) quanto aos 180 dias (C=1,2±0,03g; OM= 1,3±0,03g), aos corrigirmos pelo peso corporal dos animais não observamos nenhuma diferença. A prole OM também apresentou hiperleptinemia tanto ao desmame (+62%) quanto na idade adulta (+4x). Não houve diferença significativa na expressão cardíaca do ObR entre as proles C e OM ao desmame. No entanto, observamos um aumento expressivo no conteúdo de ObR na prole OM aos 180 dias de idade (+4x). Não observamos alteração na expressão da proteína STAT-3 assim como da sua isoforma STAT-3p entre os grupos ao desmame, no entanto aos 180 dias os animais do grupo OM apresentam aumento na expressão de STAT-3 (+2,5x) e na isoforma STAT-3p (+6x). Dados preliminares indicam que animais da prole OM, aos 180 dias, possuem maior expressão cardíaca do mRNA para leptina (+60%) que a prole C. Conclusão Nossos resultados demonstram que o consumo materno de dieta hiperlipídica resulta em hiperleptinemia na prole e aumento da expressão cardíaca de ObR, STAT-3 e da isoforma STAT-3p na prole OM na fase adulta. Sabendo que a hiperleptinemia causa danos aos cardiomiócitos, a superexposição tecidual a este hormônio pode estar associada ao desenvolvimento de doenças cardiovasculares a longo prazo.

Palavras-chaves: coração, hiperleptinemia, obesidade, ObR, programação metabólica

Resumo: 05.030

A INGESTÃO CRÔNICA DE CANELA POR RATAS LACTANTES ALTERA PARÂMETROS DA FUNÇÃO TIREOIDIANA MATERNA E DA PROLE JOVEM

Autores 1BENTO-BERNARDES, T.

1, GAIQUE, T. G.

1, MEDEIROS, R. F.

1, OLIVEIRA, K. J.

1 Fisiologia e

Farmacologia - UFF

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ

Resumo Introdução Estudos experimentais e epidemiológicos mostram a associação entre parâmetros nutricionais e hormonais maternos durante períodos críticos, como gestação e/ou lactação, com o desenvolvimento de distúrbios endócrinos e metabólicos na progênie. Recentemente, mostramos que a ingestão crônica de extrato aquoso de canela, que possui comprovados efeitos antidiabetogênicos e hipolipemiantes, reduz a concentração sérica de T3 e leptina em ratos machos. Uma vez que alterações maternas nos níveis séricos desses dois hormônios influenciam a homeostase metabólica da prole, nós hipotetizamos que a ingestão crônica de canela por mães lactantes possa alterar o perfil hormonal e metabólico dessas mães e de sua progênie.

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Objetivos O objetivo deste estudo é avaliar os efeitos da ingestão materna de extrato aquoso de canela durante a lactação sobre a função tireoidiana das mães e da prole. Código de Experimentação Animal 0120/11 Código de Experimentação Humana Métodos O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal da UFF, sob o numero de registro 0120/11. Foram utilizados ratos Wistar, dos quais as mães lactantes foram divididas, um dia após o nascimento da prole, em: mães Controle (Ctr), que receberam gavagem com água e mães Canela (Can), que receberam gavagem com extrato aquoso de canela (400mg canela/kg de massa corporal/dia) durante 20 dias de lactação. Do desmame, aos 21 dias de idade (21d), até os 31 dias de idade (31d) as proles das mães Controle e Canela receberam ração padrão. A quantificação sérica de T3 total, T4 total e TSH foram feitas por radioimunoensaios específicos. Os níveis de RNAm do receptor para hormônio tireoidiano (TR) isoforma α e β, da enzima α-glicerofosfato desidrogenase mitocondrial (α-GPDm) e da desiodase tipo 1 (D1) foram avaliados por PCR em tempo real e expressos em unidade arbitrária. O software GraphPad Prism 5 , foi utilizado para análise estatística dos dados, sendo aplicado o teste t de Student e os resultados foram mostrados como média ± erro padrão. As diferenças foram consideradas significativas quando p <0,05. Resultados A ingestão de canela não alterou a massa corporal ou consumo alimentar das mães lactantes e de suas proles. As mães Canela não apresentaram diferenças nas concentrações séricas de T3 total e T4 total, mas apresentaram maior TSH sérico (Ctr: 0,945±0,11ng/mL; Can: 1,311 ±0,12 ng/mL; n=9-10; p Conclusão Portanto, a ingestão materna de extrato aquoso de canela durante a lactação promoveu alterações de parâmetros da função tireoidiana das mães e de sua prole dez dias após o desmame.

Palavras-chaves: Hormônios tireoidianos, Lactação, Canela

Resumo: 05.031

CHANGES IN BROWN ADIPOSE TISSUE AND LIVER IN OVARIECTOMIZED WISTAR RATS

Autores

1BARTHEM, C.

1, NIGRO, M.

1, SANTOS, A. T.

1, KETZER, L. A.

2, LOUZADA, R. A. N.

1, MEIS,

L. D. 2, CARVALHO, D. P. D.

1 Instituto de Bioquímica Médica - UFRJ,

2 Instituto de Biofísica Carlos

Chagas Filho - UFRJ

Apoio Financeiro: Faperj, Pronex and CNPq

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Resumo Introdução Menopause is associated with increased visceral adiposity and disrupted glucose homeostasis(Endocrinology 150:2161,2009), but the underlying molecular mechanisms related to these metabolic changes are still elusive. Brown adipose tissue (BAT) plays a key role in energy expenditure that may be regulated by sexual steroids (Physiolo rev. 84:277-359,2004). Moreover, it has not been determined whether the alterations in glucose homeostasis precede the observed weight gain after ovariectomy. Objetivos The aim of this work was to evaluate the metabolic pathways in both the BAT and the liver that may be disrupted early after ovariectomy. Código de Experimentação Animal IBQM062 Código de Experimentação Humana Métodos Female Wistar rats weighing approximately 200 g were divided into two groups: sham-operated and ovariectomized (ovx). The animals were sacrificed 21 days after surgery. Resultados Ovariectomized (OVX) rats had increased food efficiency as early as twenty-one days after ovariectomy, which could not be explained by differences in feces content (118.6±3.5g sham vs. 132.0±2.5g ovx). An analysis of BAT function revealed no differences in citrate synthase activity, UCP1 expression, oxygen consumption, ATP synthesis or heat production in isolated mitochondria from sham-operated and OVX rats. The addition of GDP and BSA to inhibit UCP1 decreased oxygen consumption in BAT mitochondria equally in both groups. Liver analysis revealed increased triglyceride and cholesterol content (14.6±1.8mg/g sham vs. 20.9±1.4mg/g ovx and 7.5±0.3mg/g sham vs. 8.5±0.2mg/g ovx respectively) accompanied by decreased levels of pAMPK (1.0±0.14 sham vs. 0.57±0.11 ovx) and pACC (1.0±0.11 sham vs. 0.6±0.06 ovx) in OVX animals. The elevated expression of gluconeogenic enzymes (G6Pase and PEPCK) in OVX rats was not associated with alterations in glucose tolerance test or in serum insulin but was coincident with the upregulation of glucagon receptor mRNA (1.0±0.03 sham vs. 1.39±0.11 ovx) and higher glucose disposal during the pyruvate tolerance test. Conclusão Altogether, our results show that the increased food efficiency cannot be explained by disrupted BAT function but is accompanied by changes in hepatic lipid and glucose metabolism early after ovariectomy.

Palavras-chaves: Liver, Brown adipose tissue, Gluconeogenesis, Estradiol, Menopause

Resumo: 05.032

COMPARAÇÃO DA ATIVIDADE DA HEXOCINASE MITOCONDRIAL EM DUAS LINHAGENS DE CANCÊR DE TIREÓIDE

Autores 1PEREIRA, T. S. V. T.

1, PEÇANHA, F. L. M.

2, CARVALHO, D. P.

1, DA-SILVA, W. S.

1 IBqM -

UFRJ, 2 IBCCF - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ e CNPq

Resumo Introdução A hexocinase (HK) é a primeira enzima da via glicolítica, catalisando a conversão de glicose em glicose 6-fosfato (G6P). A G6P gerada também pode seguir outras vias, como a de síntese de glicogênio ou de síntese de pentoses, sendo essa última bastante importante em células que apresentam alta taxa de proliferação, como tumores, por exemplo. Outra característica presente em células tumorais é o efeito Warburg, caracterizado pela produção de energia predominantemente pela glicólise em relação à fosforilação oxidativa, mesmo em presença de oxigênio. Nessas células, geralmente, ocorre aumento da expressão da HK, o que em alguns casos está relacionado à malignidade do tumor. Contudo, existem poucos estudos relacionados à atividade da enzima em diferentes tipos de tumores de tireóide. Objetivos Sendo assim, o objetivo do trabalho é avaliar a atividade específica e distribuição subcelular da hexocinase em duas linhagens de células originadas de tumores de tireóide humano. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana Métodos As linhagens celulares K5 (carcinoma folicular) e BCPAP (carcinoma papilífero) foram semeadas utilizando-se meio DMEM suplementado com 10% de FBS. Após 48h as células foram utilizadas para preparação de extrato celular enriquecido em proteínas citoplasmáticas (fração solúvel) e proteínas mitocondriais (fração particulada) através de centrifugação diferencial. A atividade da HK foi medida por ensaio enzimático acoplado nas duas frações obtidas. Resultados Ambas as linhagens apresentaram taxa de duplicação (crescimento) semelhante correspondendo a aproximadamente 40h na linhagem K5 e 37h na BCPAP. As duas linhagens apresentaram atividade da HK, sendo esta predominante na fração particulada. Comparando-se a atividade da HK entre as duas linhagens observou-se que a linhagem K5 apresenta maior atividade da HK (nmoles G6P/mg PTN. min-1) que a BCPAP tanto na fração solúvel (45 ± 0,5 e 30 ± 1 em K5 e BCPAP, respectivamente) quanto na fração particulada (383 ± 4 em K5 e 148 ± 5 em BCPAP), sendo 1,5x e 2,6x maior na fração solúvel e particulada, respectivamente. Conclusão Os resultados apresentados sugerem que ambas as linhagens, K5 e BCPAP, apresentam maior atividade da HK na fração particulada. A linhagem K5 apresenta maior atividade da HK na fração solúvel e particulada que a linhagem BCPAP, o que pode estar relacionada ao fato dessa linhagem ser originária de um subtipo tumoral mais agressivo que a BCPAP.

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Palavras-chaves: Atividade Hexocinase, BCPAP, K5, Tireóide

Resumo: 05.033

INFLUÊNCIA DA DENSIDADE CELULAR SOBRE A FUNÇÃO DO CO-TRANSPORTADOR Na+/I- (NIS) EM CULTURA DE CÉLULAS PCCL-3

Autores 1MARTINS-SILVA, M.

1, GONÇALVES, C. F. L.

1, CARVALHO, D. P. D.

1, FERREIRA, A. C. F.

1

Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ, 2 Ciências Básicas - UFF

Apoio Financeiro: CNPq, Faperj

Resumo Introdução Dados preliminares de nosso laboratório mostram que o tamanho do bócio é capaz de influenciar a função do co-transportador sódio-iodeto (NIS), havendo redução da atividade do NIS in vivo em estágios mais avançados de bócio em ratos Wistar, independente dos níveis séricos do TSH. Objetivos Estudar a atividade e expressão do NIS em diferentes graus de confluência celular em cultura da linhagem de tireócitos murinos PCCL-3. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana Métodos Em confluências celulares de 50, 70 e 100%, analisamos a captação de radiodeto, a expressão das proteínas NIS e receptor de TSH através de Western blot e do RNAm do NIS através de Real time PCR. Todos os resultados foram expressos como relativo ao 50% de confluência. Resultados Na confluência mais alta, observamos redução da captação de radioiodeto (50%=1,05±0,10; 70%=0,87±0,05*; 100%=0,63±0,06***, * p Conclusão O presente estudo mostra que a função e a expressão proteica do NIS são reguladas negativamente em densidades mais altas de tireócitos. Nossos dados sugerem ainda que esse efeito pode ser resultante de uma regulação pós-transcricional, não mediada por TSH, já que não houve alteração da expressão do seu receptor. Portanto, a celularidade parece afetar de

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forma importante a função do co-transportador sódio-iodeto.

Palavras-chaves: NIS, densidade, rTSH, PCCL-3

Resumo: 05.034

EFEITO DO HIPERTIREOIDISMO SOBRE HIPOCAMPO DE RATOS IMATUROS: PROTETOR OU INDUTOR DE ESTRESSE OXIDATIVO?

Autores

1ANDRADE, C. M.

1, CAVALLI, V. L. L. O.

1, DOMINGUES, J. T.

1, RIEG, C. E. H.

1, ALMEIDA,

B. A. N. D. 1, PARISOTTO, E. B.

2, FILHO, D. W.

1, Zamoner, A.

1 Departamento de Bioquímica -

UFSC, 2 Departamento Ecologia e Zoologia - UFSC

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PIBIC-CNPq, FAPESC, PGFAR, PPG-BQA

Resumo Introdução Os hormônios da tireoide são importantes moduladores do desenvolvimento e maturação do sistema nervoso central. Níveis circulantes alterados desses hormônios estão associados a distúrbios mentais como diminuição da cognição, depressão e ansiedade. Entretanto, os mecanismos envolvidos nestas disfunções ainda são desconhecidos. Objetivos Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do hipertireoidismo induzido sobre o sistema de defesas antioxidantes em hipocampo de ratos Wistar machos de 15 dias de idade. Código de Experimentação Animal PP00318/CEUA/UFSC Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados ratos Wistar machos de 15 dias de idade com aproximadamente 25 g (Protocolo nº PP00318, aprovado pela CEUA/UFSC). O hipertireoidismo foi induzido pela administração i.p. de 80 µg T3/Kg de peso corporal durante 7 dias consecutivos a partir de 8 dias de idade. O experimento foi realizado quando os animais completaram 15 dias de idade. O hipocampo foi removido e homogeneizado em tampão fosfato 20 mM contendo 0,1% de Triton X-100 1:20 (P:V) para determinação da atividade das enzimas glutationa redutase (GR), glutationa peroxidase (GPx). Para avaliar a atividade da gama-glutamil transferase (GGT) fatias hipocampais foram homogeneizados em tampão Tris-HCl pH 8,5. Os níveis de GSH foram determinados em homogeneizado de hipocampo em TCA 12% gelado 1:10 (P:V). A dosagem de proteínas foi determinada em todos os homogeneizados. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão da média (N= 6). Análise estatística: teste t de Student (C=controle; H=hipertireoideo). Resultados

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O hipertireoidismo provocou alterações em todos os parâmetros bioquímicos avaliados. Observou-se aumento nos níveis de GSH (C= 0,89 ± 0,016 mmol/g de tecido; H= 1,44 ± 0,025 mmol/g de tecido; p <0,001). Conclusão Os resultados evidenciam que o hipertireoidismo leva ao aumento dos níveis de GSH em hipocampo de ratos imaturos, provavelmente via mecanismos envolvendo a ativação de vias envolvidas na regeneração de sua forma reduzida (via GR) ou maior “turnover” da GSH (via GGT), estimulando a síntese de novo deste antioxidante. Neste sentido, propõe-se que os hormônios da tireoide possam desempenhar um papel protetor contra insultos oxidativos em hipocampo de ratos imaturos. Estes efeitos podem desempenhar um importante papel na modulação das funções cerebrais desses hormônios tanto em situações patológicas quanto fisiológicas.

Palavras-chaves: estresse oxidativo, hipertireoidismo, hipocampo

Resumo: 05.035

EFEITO DE INTERFERENTES ENDÓCRINOS SOBRE ENZIMAS ENVOLVIDAS NA BIOSSÍNTESE E METABOLIZAÇÃO DOS HORMÔNIOS TIREOIDEOS

Autores 1MARTINS-SILVA, M.

1, GONÇALVES, C. F. L.

1, CARVALHO, D. P.

1, FERREIRA, A. C. F.

1

Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq

Resumo Introdução Interferentes endócrinos (IE) sintéticos, empregados na indústria de materiais plásticos, como o bisfenol A (BPA) e ftalatos, são xenobióticos muito semelhantes a hormônios, que modulam seus efeitos e suas vias de biossíntese e/ou metabolização. Porém, dados acerca de seus potenciais efeitos sobre o eixo tireóideo ainda são controversos e pouco conclusivos. Objetivos Investigar se o tratamento in vivo com os IE ftalatos e BPA modulam a atividade das enzimas oxidase dual (DuOx) tireoidea e tireoperoxidase (TPO), fundamentais à síntese dos hormônios tireoideos. Objetiva-se ainda avaliar o efeito in vitro desses IE sobre a atividade da 5’-desiodase tipo 2 (D2) de tecido adiposo marrom (TAM), enzima essencial à metabolização periférica dos hormônios tireóideos (HT). Código de Experimentação Animal IBCCF167 Código de Experimentação Humana

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Métodos Inicialmente, realizamos um screening com diversos IE, visando estudar quais seriam capazes de interferir com a atividade D2. Para tanto, incubou-se 25 μg de homogenato de TAM com veículo ou IE (500 μM) com T4 frio e marcado, propiltiouracil e ditiotreitol a 37•C por 180 minutos. Interrompeu-se a reação com soro fetal bovino e TCA (ácido tricloroacético), em gelo. As amostras foram centrifugadas e a radiação emitida pelo I 125 livre no sobrenadante, pela ação da D2, foi medida em contador gama. Uma vez que o BPA mostrou-se o mais potente inibidor da D2, foi construída uma curva de inibição da D2, testando-se concentrações crescentes de BPA para o cálculo da concentração inibitória de 50% (IC50) da atividade. Para o tratamento in vivo , foram utilizados ratos Wistar machos adultos. Administrou-se veículo ao grupo controle (C, n=5) e aos demais grupos: BPA (n=5) 50 mg/Kg PC e ftalatos: Di-(2-etil-hexil) ftalato (DEHP) (n=3) e Diisononil ftalato (DINP) (n=5) ambos a 40 mg/Kg PC, via oral, por 15 dias. Ao final do tratamento, os animais foram eutanasiados e as tireoides obtidas para medida da atividade DuOx, pelo método do Amplex red, e da atividade TPO pelo método da oxidação do iodeto. Resultados In vivo , o DEHP e o BPA tenderam a modular negativamente a atividade DuOx (C=11,37±0,42; DEHP=7,56±0,36; DINP=10,53±0,19 e BPA=6,30±1,07 nmoles H2O2.h-1.mg-1), enquanto os ftalatos DEHP e DINP parecem ter ação inibitória sobre a atividade TPO (C=0,59±0,196; DEHP=0,36±0,13; DINP=0,36±0,16 e BPA=0,69±0,32 U/mg de proteína). In vitro , o BPA foi o único IE que inibiu a atividade D2 (C=0,640±0,082 e BPA 500 μM=0,273±0,146 fentomoles T4.h-1.mg-1 de proteína), com IC50= 0,58mM. Conclusão Sabe-se que in vivo os ftalatos (na forma dimérica) sofrem metabolização gastrointestinal, assumindo forma monomérica ativa, enquanto o BPA é um monômero dos plásticos de policarbonato, sem necessidade de uma biotransformação para se tornar ativo e potentes para inibir a função tireoidiana. Desta forma, é possível que a incubação das amostras de TAM com os ftalatos in vitro não tenha alterado a atividade D2 por não terem sofrido metabolização, enquanto o BPA determinou importante inibição na conversão do pró-hormônio T4 a T3. Por outro lado, in vivo , os ftalatos mostraram-se capazes de inibir a atividade DuOx e TPO, enquanto o BPA inibiu apenas a atividade DuOx. Nossos resultados, portanto, sugerem que IE são capazes de interferir na síntese e metabolização dos HT, além de reforçar a importância dos estudos in vivo acerca dos efeitos dos IE sobre a tireoide.

Palavras-chaves: INTERFERENTES ENDÓCRINOS, TIREOPEROXIDASE (TPO), OXIDASE DUAL (DUOX), TIREOIDE, DESIODASE

Resumo: 05.036

HIPOTIREOIDISMO CONGÊNITO ALTERA A ATIVIDADE DAS DISSACARIDASES INTESTINAIS E O CONTEÚDO DE GLICOGÊNIO HEPÁTICO EM RATOS IMATUROS

Autores 1CESCONETTO, P. A.

1, ANDRADE, C. M.

1, CATTANI, D.

1, SILVA, F. R. M. B.

1, ZAMONER,

A. 1 Departamento de Bioquímica - UFSC

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPESC, PGFAR, PPG-BQA.

Resumo Introdução

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O hipotireoidismo congênito altera o metabolismo basal, causa retardo mental e afeta o desenvolvimento normal dos indivíduos acometidos. Os hormônios da tireoide possuem receptores em praticamente todos os tipos celulares ativando respostas genômicas e não genômicas e dessa forma controlando a expressão de diversas proteínas e modulando diferentes vias de sinalização celular. A deficiência desses hormônios diminui o consumo de oxigênio e o metabolismo basal, entretanto, pouco se sabe sobre o efeito do hipotireoidismo sobre a digestão/absorção de carboidratos, assim como sobre o armazenamento de glicogênio hepático. Objetivos O objetivo deste estudo foi investigar as consequências do hipotireoidismo congênito sobre a atividade das dissacaridases intestinais maltase, sacarase e lactase, assim como sobre os níveis de glicogênio hepático em ratos imaturos. Código de Experimentação Animal PP00318/CEUA/UFSC Código de Experimentação Humana Métodos Ratas Wistar prenhas de 180 a 200 g de peso corporal foram tratadas com 0,05% de propiltiouracil (PTU) na água de beber desde o 8º dia gestacional até seus filhotes completarem 15 dias de idade (Protocolo aprovado nº PP00318/CEUA/UFSC). No dia do experimento, o duodeno dos filhotes foi removido, homogeneizado em solução salina 0,9%. A atividade das dissacaridades maltase, sacarase e lactase foi determinada pela formação do monossacarídeo glicose após 5 minutos de incubação do homogeneizado de intestino com cada substrato (maltose, sacarose ou lactose). Para a determinação do conteúdo de glicogênio hepático, este foi extraído de 300 mg de tecido com 30% de KOH a 100°C e posteriormente precipitado em etanol. A concentração de glicogênio foi determinada após adição de solução de iodo e iodeto de potássio com leitura a 460 nm. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão da média (N= 10). Análise estatística: teste t de Student (C= controle; H= hipotireoideo). Resultados Os resultados mostraram o hipotireoidismo congênito não afeta a atividade da sacarase (C=23,5 ± 2,5 µg glicose/mg de proteína; H= 22,48 ± 1,25 µg glicose/mg de proteína; H=10) ou da lactase (C=62,69 ± 4,7 µg glicose/mg de proteína; H= 57,34 ± 2,58 µg glicose/mg de proteína; H=10). Entretanto, observou-se aumento na atividade da maltase no duodeno dos animais hipotireoideos (C= 13,20 ± 1,1 µg glicose/mg de proteína; H= 30,67 ± 3,8 µg glicose/mg de proteína; p < 0,001; H=10). A maior atividade basal da lactase em relação à sacarase ou a maltase deve-se provavelmente ao fato de os filhotes estarem em período de amamentação. Os resultados também mostraram aumento no conteúdo de glicogênio hepático (C= 252,45 ± 14,1 mg/g de tecido; H= 365,0 ± 16,1 mg/g de tecido; N=10; p < 0,01). Conclusão O aumento na atividade da maltase nos animais hipotireoideos em relação aos controles pode estar desencadeando uma maior absorção de glicose e consequentemente o acúmulo de glicogênio hepático nos animais com deficiência dos hormônios da tireoide. Considerando-se que o hipotireoidismo está muitas vezes associado a síndrome metabólica, estes eventos, podem de alguma maneira, estar envolvidos nesse processo.

Palavras-chaves: dissacaridases intestinais, glicogênio hepático, hipotireoidismo

Resumo: 05.037

Bases moleculares dos efeitos da suplementação crônica com beta hidroxi beta metilbutirato (HMB) sobre a sensibilidade à ação da insulina em ratos

Autores

1YONAMINE, C. Y.

1, GERLINGER-ROMERO, F.

1,2, FERREIRA, L. G.

1, CAMPELLO, R. S.

1,

JÚNIOR, C. R. F. 1, TEIXEIRA, S.S.

1, MACHADO, U. F.

1, NUNES, M. T.

1 Fisiologia e Biofísica -

ICB, 2 Centro de Educação Física e Desportos - UFES

Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Introdução O beta hidroxi beta metilbutirato (HMB), metabólito derivado do aminoácido leucina, está entre os suplementos mais populares utilizados por atletas, praticantes de atividade física e na prática médica com o objetivo de reduzir a degradação e/ou aumentar a síntese proteica. Entretanto, trabalhos desenvolvidos pelo nosso grupo demonstraram que ratos submetidos à suplementação crônica deste metabólito apresentaram aumento da insulinemia, com manutenção da glicemia dentro da faixa de normalidade, sugerindo um quadro de resistência à ação da insulina (RI). Em paralelo observou-se um aumento da síntese e secreção de GH e da concentração plasmática de IGF-I, sugerindo um possível envolvimento do eixo somatotrófico nessas alterações. Objetivos O presente estudo teve o objetivo de confirmar se a suplementação crônica (28 dias) com HMB promove RI em ratos, e caracterizar os possíveis mecanismos envolvidos. Código de Experimentação Animal COMISSÃO DE ÉTICA NO USO DE ANIMAIS Código de Experimentação Humana Métodos Foi realizado um teste de tolerância à glicose (GTT). Para a determinação da expressão das proteínas da via de sinalização da insulina, do hormônio do crescimento, bem como da lipase hormônio sensível foi realizado western blotting. Foi realizado um RT-PCR para verificar a expressão de mRNA da lipase hormônio sensível. Para a análise da área de secção transversa das fibras dos músculos sóleo e EDL, as lâminas contendo os cortes foram coradas utilizando eosina-hematoxilina e posteriormente analisadas por meio de um microscópio eletrônico. Resultados Observamos nestes animais uma menor taxa de decaimento de glicose, bem como aumento da concentração plasmática de insulina e da relação da área sob a curva (AUC) insulina/glicose ao longo do tempo, em resposta a sobrecarga de glicose (teste de tolerância à glicose - GTT), confirmando a RI. Após estímulo insulínico (10U), detectou-se redução significativa da atividade da via de sinalização deste hormônio no fígado (redução da fosforilação em tirosina dos receptores de insulina - pTyr IR e, em serina, da AKT - pSer AKT) e no músculo sóleo, diretamente pela redução do conteúdo de pSer AKT. No músculo EDL e no tecido adiposo periepididimal (TAB) não foram detectadas alterações significativas na via de sinalização da insulina. Em ambos os músculos, observamos redução no conteúdo de GLUT4 total e na membrana plasmática, sem alteração significativa da translocação. Nenhuma alteração significativa foi detectada no GLUT4 no TAB. Considerando que o GH exerce efeitos diabetogênicos, que são bastante proeminentes no fígado, investigamos nesse tecido aexpressão das proteínas pSTAT5 e SOCS3, envolvidas na sua via de sinalização. Não observamos alterações significativas neste parâmetro. Adicionalmente, detectamos um aumento no conteúdo do mRNA e da proteína lipase hormônio sensível (LHS) no TAB, em paralelo ao aumento da concentração de ácidos graxos livres (AGL) plasmáticos, o que sugere uma estimulação da lipólise, processo que é ativado pelo GH, e que pode contribuir para

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a RI. Por meio da análise da área de secção transversa (AST) das fibras dos músculos esqueléticos observamos uma redução da AST no músculo sóleo, sem que alterações tenham ocorrido no músculo EDL, após a suplementação com HMB. Conclusão Com base nos resultados obtidos, concluímos que a suplementação crônica com HMB compromete as vias de sinalização da insulina, levando a redução de sua sensibilidade nos tecidos periféricos (fígado e músculos esqueléticos). Sugerimos que o GH esteja envolvido, pelo menos em parte, nessas alterações.

Palavras-chaves: HMB, insulina, hormônio do crescimento, ácidos graxos livres

Resumo: 05.038

AVALIAÇÃO DA VASCULARIZAÇÃO DO PÂNCREAS DE CAMUNDONGOS DIABÉTICOS APÓS TERAPIA GÊNICA COM VEGFA

Autores

1FONSECA, V.U.

2, ZANETTI, B. F.

2, FLUMIGNAN, C. D. Q.

1, SILVA, R. S.

1, FÁTIMA, L.A.

1,

JUSCELE, F. 2, HAN, S. W.

1, PAPA, P.C.

1 Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia - USP,

2

Departamento de Biofísica - UNIFESP

Apoio Financeiro: FAPESP 2009/13153-4

Resumo Introdução Há um número crescente de pessoas e animais com obesidade e sobrepeso, com consequente aumento no número de pacientes resistentes à insulina e portadores de Diabetes mellitus (DM). O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) tem sido caracterizado como uma molécula importante em inúmeros mecanismos fisiopatológicos. Em diabéticos, pesquisas indicam uma redução deste fator em alguns tecidos estudados, sendo esta menor expressão envolvida com o desenvolvimento de hipóxia tecidual e não cicatrização de feridas. Objetivos Este trabalho teve como objetivos caracterizar um modelo diabético induzido por dieta, avaliar a vascularização, expressão gênica e proteica do VEGFA e seus receptores VEGFR1 e VEGFR2 em pâncreas de camundongos diabéticos e não diabéticos, antes e após a terapia gênica com VEGFA. Código de Experimentação Animal 2192/2011 Código de Experimentação Humana Métodos

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O estudo foi aprovado pelo Comitê Ético da FMVZ/USP (2192/2011). O projeto consistiu de 2 fases para as quais foram utilizados 50 camundongos (Mus musculus), machos, 2 meses de idade, com peso de 25 gramas. Na primeira fase foram utilizados 28 animais distribuídos em 6 grupos experimentais: submetidos à dieta controle (CT) e dieta hipercalórica (DH) por 3, 4 e 6 meses. Na segunda fase, 4 grupos experimentais foram avaliados aos 4 meses: CT e DH sem vetor terapêutico (CTPLL e DHPLL) e CT e DH com vetor lentiviral com VEGFA (CTVEGF e DHVEGF). Ambas as fases envolveram análise de expressão gênica pelo método de PCR em tempo real e imunohistoquímica dos genes e proteínas VEGFA, VEGFR1 e VEGFR2; imunohistoquímica anti-CD31 e estereologia para análise de vasos sanguíneos. Os dados foram de distribuição paramétrica, portanto, foi aplicado o teste One Way ANOVA seguido do pós teste de comparações múltiplas de Newman-Keuls (p <0,05). Resultados A análise gênica pelo PCR em tempo real e proteica pela imunohistoquímica evidenciou queda na expressão de VEGFA, VEGFR1 e VEGFR2 no grupo DH, sendo que a variável estereológica de densidade de volume vascular (Vv) indicou queda significativa (p Conclusão Os resultados obtidos sugerem que é possível obter um modelo animal diabético induzido por dieta, que o VEGFA e seus receptores participam da evolução e estabelecimento do quadro diabético, levando a uma redução da vascularização pancreática, e que o aumento forçado na expressão do VEGF no pâncreas de camundongos diabéticos possa contribuir para a revascularização pancreática e função das células B.

Palavras-chaves: Camundongos, Diabetes mellitus, Fator de Crescimento Endotelial Vascular, Pâncreas, Terapia Gênica

Resumo: 05.039

OS EFEITOS INIBITÓRIOS AGUDOS DO EXCESSO DE IODETO SOBRE A EXPRESSÃO E ATIVIDADE DO CO-TRANSPORTADOR DE SÓDIO-IODETO (NIS) ENVOLVEM A ATIVAÇÃO DA VIA DE SINALIZAÇÃO PI3K/AKT

Autores

1SERRANO-NASCIMENTO, C.

1, TEIXEIRA, S. D. S.

2, NICOLA, J. P.

1, NACHBAR, R. T.

2,

MASINI-REPISO, A. M. 1, NUNES, M. T.

1 Departamento de Fisiologia e Biofísica - USP,

2

Departamento de Bioquímica Clínica, Facultad de Ciencias Químicas - UNC

Apoio Financeiro: FAPESP 2009/50175-6

Resumo Introdução O iodo é um importante regulador da função da tireoide e da expressão de genes nesta glândula. Demonstramos anteriormente, que o excesso deste oligoelemento reduz a expressão e atividade de NIS em tirócitos, e outros estudos demonstraram que o excesso de iodo aumenta a produção de ROS, conhecidos ativadores da via PI3K/Akt. Há evidências na literatura de que a ativação desta cascata de sinalização induz efeitos inibitórios sobre a expressão e atividade de NIS. Objetivos

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Analisar se os efeitos inibitórios do excesso agudo de iodeto sobre a expressão/atividade de NIS são mediados pela ativação da via PI3K/Akt através da produção de ROS. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana Métodos Células PCCl3 cultivadas em condições normais ou de starving (sem TSH e insulina) foram tratadas com NaI (10-3 M) por 15-60 min, e a fosforilação de Akt foi avaliada por Western blotting. Para investigar a participação da PI3K, células foram previamente tratadas com inibidores específicos da mesma, wortmanina ou LY294002 e, a seguir, com NaI por 30 min. A produção de ROS e seu envolvimento na ativação de Akt foram avaliados a partir de ensaios com dihidroetidina (DHE) e pelo tratamento prévio das células com sequestradores de ROS (NAC/Ebselen), respectivamente. Células previamente tratadas com inibidores de PI3K (wortmanina e LY294002) e Akt (Akti1/2) e posteriormente submetidas ao tratamento com NaI foram utilizadas para investigar o papel desta via de sinalização nos efeitos inibitórios do iodeto sobre NIS. A expressão de mRNA de NIS, conteúdo de NIS na membrana plasmática, assim como sua atividade foram avaliados por ensaios de Real-Time PCR, biotinilação de superfície e captação de iodo radioativo, respectivamente. Resultados O excesso de iodo induz a fosforilação de Akt, mesmo na ausência de conhecidos ativadores desta via de sinalização em tirócitos (TSH/Insulina). Este efeito foi abolido quando as células foram previamente tratadas com inibidores de PI3K ou sequestradores de ROS, cuja produção foi rapidamente aumentada na presença de iodeto. Os efeitos inibitórios do excesso de iodeto sobre a expressão do mRNA de NIS, seu conteúdo na membrana plasmática e atividade de captação de iodeto foram prevenidos quando as células foram previamente tratadas com inibidores de PI3K ou Akt. Conclusão Este estudo revela o envolvimento de novos mecanismos moleculares no efeito autoregulatório da tireoide desencadeado pelo excesso de iodo, uma vez que demonstra que os efeitos agudos e pós-transcricionais do iodeto sobre a expressão/atividade de NIS dependem da produção de espécies reativas de oxigênio que levam à ativação da via PI3K/Akt em tirócitos.

Palavras-chaves: iodo, co-transportador sódio-iodeto, PI3K/AKT, expressão gênica, tireoide

Resumo: 05.040

EFEITO DA INFUSÃO DE LACTATO SOBRE A ATIVIDADE DO EIXO GH-IGF-I DE RATOS.

Autores 1SALGUEIRO, R. B.

1, BUONFIGLIO, D. D. C.

1, GARCIA, R. P.

1,1,1,1, NUNES, M. T.

1

Departamento de Fisiologia e Biofísica - USP

Apoio Financeiro: Fapesp

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Resumo Introdução O exercício físico aumenta a concentração do GH na corrente sanguínea. Esse aumento vem sendo atribuído à queda da glicemia, bem como ao estresse causado pela atividade física. Sabe-se que durante o esforço físico ocorre elevação do lactato sanguíneo e que este, além de participar do controle ácido/base, exerce efeitos metabólicos e, estudos mais recentes demonstram que ele estimula a secreção de prolactina. Objetivos Esse estudo pretende investigar se o lactato gerado durante o esforço físico também poderia ser um fator que atua ativando o eixo somatotrófico. Código de Experimentação Animal nº 137, fls 110 do livro 02 Código de Experimentação Humana Métodos Para tal, ratos da cepa wistar, 250~300g mantidos no biotério (ciclo 12h/12h) foram: (a) submetidos à injeção ip de lactato, na dose de 10 mM ou 100 mM, no início do período claro ou escuro, sendo sacrificados após 30’, 60’ e 120’ da injeção (Estudo Agudo) ou (b) anestesiados e, a seguir, submetidos à infusão ev (jugular) de lactato nas mesmas concentrações, no início do período claro ou escuro, num fluxo de 0.65 ml/h, por 180’ e sacrificados a seguir (Estudo crônico). Durante o estudo foram realizadas coletas de sangue para dosagem da lactacidemia e glicemia e após o sacrifício. Coletamos a hipófise e fígado dos ratos para avaliação da expressão gênica do GH (mRNA e proteína) e do mRNA de IGF-I. (nº 137, fls 110 do livro 02). Para a análise estatística utilizou-se da ANOVA em 2 vias, seguido do Bonferroni como pós-teste. Valores significativos para p <0,05. Resultados O lactato injetado não alterou a lactacidemia nem a glicemia de nenhum grupo. Contudo, após 30’ da injeção de 10 e 100 mM de lactato no escuro, ocorreu aumento do mRNA do GH (p Conclusão O lactato produzido no exercício físico pode ser um dos fatores que ativam o eixo somatotrófico nessa condição.

Palavras-chaves: Exercício físico, Endocrinologia, Cronobiologia, Eixo somatotrófico, RNA

Resumo: 05.041

Efeitos do ligante de receptor beta de hormônio tireoideano, TRIAC, nanoencapsulado ou não, na pele íntegra e atrofiada, em modelo experimental.

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Autores

1PLANELLO, J. F.

1, PERA, D. T.

2, CANCINO, J.

1, AVÓ, L. R. D. S.

2, ZUCOLLOTO, V.

1, MELO,

D. G. 1, GERMANO, C. M. R.

1 Departamento de Medicina- DMED - UFSCAR,

2 Instituto de Física

de São Carlos- IFSC - USP

Apoio Financeiro: CAPES e FAPESP

Resumo Introdução Hormônios tireoideanos exercem suas funções ligando-se a receptores TR-&alpha e &beta. O TRIAC é &beta seletivo e seu uso tópico estimula proliferação epidérmica e dérmica, representando uma promissora estratégia farmacológica para reversão de atrofia cutânea. Objetivos Estudar os efeitos do TRIAC, nanoencapsulado (nano) ou não, na pele íntegra e atrofiada de ratos. Código de Experimentação Animal Protocolo nº 035/2009 Código de Experimentação Humana Métodos Projeto aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal (34/2009). Utilizou-se 56 ratos machos Wistar, 250g, 150 dias. Foram realizados 2 experimentos com TRIAC (Sigma) e TRIAC nano. O nanoencapsulamento foi feito no LNN-IFSC-USP, com polímero PLA, pelo método de co-precipitação (rendimento de 98%). No dia 0 os animais foram divididos em 2 grupos: pele íntegra, não manipulado; e corticóide, exposto à propionato de clobetasol 0,05% tópico, por 10 dias (fase 1). A partir do dia 11 foi suspenso o corticóide e os grupos foram divididos em 2 subgrupos que receberam veículo (V) ou TRIAC (T) no experimento 1 e V ou TRIAC nano (TN) no experimento 2, por 14 dias (fase 2). Foram realizadas 3 biopsias de pele nos dia 0 e após fases 1 e 2, para análise histológica pelas técnicas de HE (epiderme) e picrosirius (derme). Para análise estatística utilizou-se testes de Mann-Whitney, Wilcoxon pareado ou qui-quadrado, conforme a variável analisada, com nível de significância de 5%. Resultados Experimento 1, no dia 0, valores médios de espessura da epiderme: 2,36&plusmn0,14&mum no grupo pele íntegra e 2,25&plusmn0,12&mum no grupo corticóide (NS). Ao final da fase 1: 2,80&plusmn0,19&mum e 1,70&plusmn0,27&mum, respectivamente (p <0.0001). Conclusão A utilização tópica do T e do TN foi capaz de reverter a atrofia causada pelo corticóide. Na epiderme os efeitos do T foram significativos, já na derme, os efeitos do TN foram mais evidentes, sugerindo uma ação do hormônio nanoencapsulado em camadas mais profundas da pele.

Palavras-chaves: glicocorticóides , atrofia cutânea , hormônios tireoideanos , receptores beta dos hormônios tireoidean, reversão de atrofia cutânea

Resumo: 05.042

Possível ativação da via de sinalização da Wnt/beta-catenina no processo de hiperplasia compensatória da célula beta pancreática em modelo animal de pré-diabetes.

Autores 1MASCHIO, D. A.

1, OLIVEIRA, R. B.

1, SANTOS, M. R.

2, CARVALHO, C. P. F.

1, COLLARES-

BUZATO, C. B. 1 Depto de Histologia e Embriologia - UNICAMP,

2 Depto de Biociêcias - UNIFESP

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPESP

Resumo Introdução É sabido que a beta-catenina, além de atuar como componente estrutural das junções de adesão, participa da via de sinalização canônica da Wnt, a qual está envolvida na diferenciação e proliferação celular. A via Wnt/beta-catenina, entretanto, tem sido pouco investigada no pâncreas endócrino. Hiperplasia da célula beta pancreática pode ocorrer em condições experimentais e in vivo , como no estado de pré-diabetes Objetivos Investigar: 1) se as alterações metabólicas induzidas pela exposição à dieta hiperlipídica (dHL) por 60 dias são acompanhadas por hiperplasia compensatória do pâncreas endócrino de camundongos machos C57BL/6; e 2) o possível envolvimento da via de sinalização da Wnt/beta-catenina no processo de proliferação da célula beta neste modelo. Código de Experimentação Animal Protocolo no. 2815-1 Código de Experimentação Humana Métodos Projeto aprovado na Comissão de Ética Experimental Animal (CEEA-IB-UNICAMP) sob o Protocolo no. 2815-1. Para a caracterização metabólica dos camundongos controle (alimentados com ração padrão, 4,5%g lipídios) e dos em dHL (21%g lipídios), foram avaliados os seguintes parâmetros: o peso corpóreo, a glicemia, tolerância à insulina (pelo teste de ITT), e a concentração plasmática de insulina. A análise morfométrica do pâncreas (n=4 animais/grupo) foi realizada em cortes em parafina processados para detecção de insulina por imunoperoxidase indireta. A distribuição e conteúdo celular de algumas proteínas da via Wnt/beta-catenina foram avaliados por imunofluorescência e Western Blot, em criosecções de pâncreas e homogeneizados de ilhotas pancreáticas isoladas, respectivamente. Para a análise estatística dos valores numéricos, foram utilizados os testes de t-Student ou ANOVA com nível de significância p < 0,05. Resultados Animais alimentados com dHL por 60d tornaram-se obesos e pré-diabéticos, apresentando aumento do ganho de peso (43,0 ± 2,1% N=63), da glicemia em jejum (125,7 ± 4,5 mg/dL N=26) e da insulinemia em jejum (1,1 ± 0,3 ng/mL N=18) quando comparados aos valores do grupo controle de peso (9,1 ± 1,3% N=52 , p Conclusão A análise da expressão das proteínas envolvidas na via Wnt/beta-catenina em ilhotas pancreáticas de camundongos pré-diabéticos sugere que esta via pode estar ativada durante o processo de hiperplasia compensatória das células beta em

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nosso modelo animal.

Palavras-chaves: Via Wnt/beta-catenina, pâncreas endócrino, camundongos, pré-diabéticos, hiperplasia

Resumo: 05.043

DISRUPTED CIRCADIAN REGULATION OF GLUCOSE- AND CARBACHOL-STIMULATED INSULIN SECRETION IN PANCREATIC ISLETS OF MALNOURISHED MICE

Autores 1BORCK, P. C.

1, BATISTA, T. M.

1, VETTORAZZI, J. F.

1, CAMARGO, R. L.

1, BOSCHERO, A.

C. 1, CARNEIRO, E. M.

1 Biologia Estrutural e Funcional - UNICAMP

Apoio Financeiro: Fapesp

Resumo Introdução Background: Many factors are linked to the development of Type 2 Diabetes Mellitus (T2DM) and amongst these, circadian biology and early life nutrition play a determinant role. Disrupted circadian rhythm leads to altered gene expression in peripheral tissues of malnourished mice but its influence on pancreatic islet function and genes expression has not been determined. Objetivos Objective: To analyze the circadian oscillation of glucose-stimulated insulin secretion (GSIS) in association or not with the cholinergic agonist carbachol (Cch) and the mRNA levels of the muscarinic cholinergic receptor M3 , Synaptotagmin and the clock gene, Rev-erb-alpha in islets of malnourished mice. Código de Experimentação Animal 2938-1 Código de Experimentação Humana Métodos Methods: Weaned male C57BL/6 mice, with initial body weight 13.78±0.4g (n= 4-6) were fed a control (C) or a low protein (R) diet for 8 weeks. Afterwards, glucose (ipGTT) and insulin (ipITT) tolerance tests were performed. Insulin secretion in isolated islets was determined at different zeitgeber times (ZT) 0 (8:00), 6 (14:00), 12 (20:00), and 18 (2:00). At the same ZTs, islet samples were collected and the expression to receptor M3 , Synaptotagmin genes and clock gene Rev-erb-alpha was measured by Real Time RT-PCR. Statistical Analysis: Students’s t test and 2-way ANOVA. Ethics Committee: 2938-1. Resultados Results: After 8 weeks R mice had lower body mass (C=26.3±1.1;R=21.1±0.4g; P Synaptotagmin gene was higher in C mice compared to R, at ZT0 and ZT6 (CZT0=1.0±0.08;RZT0=0.4±0.07;CZT6=1.12±0.13:RZT6=0.6±0.15Fold M3 receptor

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was lower in R islets at ZT0 and ZT6 (CZT0=1.0±0.03;RZT0=0.4±0.03;CZT6=1.2±0.14;RZT6=0.5±0.04; Fold;P Rev-erb-alpha in islets of C mice showed circadian variations reaching the highest levels at ZT6 and the lowest at ZT18 (CZT0=1.0±0.3;CZT6=7.6±0.8;CZT18=0.4±0.1 Fold;P <0.001). Conclusão Conclusions: R mice showed typical features of malnutrition, such as lower body weight, increased insulin sensitivity, glucose tolerance and lower insulin secretion. The circadian oscillatory pattern of GSIS in association or not with Cch is absent in islets of R mice. Impaired secretion may be linked to lower expression of the Ca2+-sensor Synaptotagmin and the M3 receptor . Finally, circadian oscillation of clock gene Rev-erb-alpha is disrupted in islets of R mice, and it may be linked to altered beta-cell physiology.

Palavras-chaves: Circadian rhythm, Clock genes, Insulin secretion, Malnourished