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Exame de Laboratrios de Bioqumica e Biofsica

Licenciatura em Bioqumica

1 poca 27 de Junho de 2006

Por favor responda s questes da 1 parte e 2 partes em folhas separadas

1 Parte

1. Suponha que possui um composto que reage com protenas dando origem a um produto corado.

Como verificava se o podia utilizar para quantificar protenas? (2.0 val.)

2. Considere os resultados apresentados abaixo resultantes da anlise de uma mistura proteica naqual se encontra uma protena, protena 14, que se pretende purificar.A Colorao de Coomassie de um gel de electroforese bidimensional.B Immunoblottingda electroforese bidimensional

A. B.

a) Explique sumariamente em que consiste uma electroforese bidimensional. (1.0 val.)

b) De acordo com os resultados apresentados proponha um processo de purificao da protena14 utilizando trs passos de purificao. Justifique as suas opes. (2.0 val.)

c) Como justifica o aparecimento de duas bandas no immunoblotting? O que poderia fazer paraconfirmar as suas hipteses? (2.0 val.)

3. O diagnstico de algumas doenas (em alguns casos doenas infecciosas) feito por pesquisade antignios no soro dos indivduos supostamente infectados usando a tcnica de ELISA.Justifique a utilizao desta tcnica neste tipo de diagnstico. (1.5 val.)

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4. Um dos trabalhos prticos realizados consistiu na purificao da TTR semi-purificada produzidaem E. coliusando uma coluna HiTrap em que se imobilizou um anticorpo anti-TTR. Que tipo detcnica de isolamento foi utilizada neste trabalho? Justifique a sua utilizao apenas nesta fase da

purificao. (1.5 val.)

2 Parte

5. Para a cristalizao de protenas, recorre-se frequentemente a mtodos de difuso de vapor.a) Descreva o fundamento desses mtodos. (1.5 val.)b) Explique o interesse de fazer experincias em condies de diferente solubilidade da protena.

(1.0 val.)

6. Considere experincias de difraco utilizando duas grelhas quadradas G1 e G2, sendo que adistncia entre os filamentos na grelha G1 o dobro da distncia entre os filamentos na grelha

G2. Para as mesmas condies experimentais, diga com qual das grelhas que se obtm opadro de difraco em que os pontos esto mais afastados. Justifique. (2.5 val.)

7. Os resultados experimentais dos estudos de cristalografia de raios-X de protenas sonormalmente depositados no Protein Data Bank(PDB).a) Em que consiste a informao acessvel no PDB e qual a importncia desta base de dados no

mbito da investigao em biologia estrutural? (1.0 val.)b) O RasMol e o DeepView so programas que podem utilizar informao do PDB. Faa uma

anlise comparativa das suas potencialidades e limitaes (1.5 val.)

8. Descreva genericamente o processo de centrifugao diferencial para a preparao de fracessub-celulares e indique, justificando, como pode ser avaliada a qualidade do fraccionamento

obtido. (2.5 val.)