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Exame de Laboratrios de Biofsica / Bioqumicapoca Normal
Licenciatura em Bioqumica25 de Junho de 2010
Por favor utilize folhas separadas para responder 1 e 2 Parte do exame.
1 Parte
1. muito frequente determinar-se a concentrao proteica de uma determinada soluo
com base na absoro de luz UV. Diga a que comprimento de onda que se fazem essas
determinaes. Refira vantagens e desvantagens desse mtodo. (2.0 val.)
2. Durante as aulas prticas teve a oportunidade de produzir transtirretina utlizando um
sistema bacteriano (E. coli). Qual o interesse de produzir protenas recombinantes neste
sistema? Refira vantagens e desvantagens deste sistema. (2.0 val.)
3. Refira dois mtodos diferentes para determinar a massa molecular de uma protena. (1.5
val.)
4. Em que consiste a tcnica de ELISA. Refira as suas aplicaes. (1.5 val.)
5. Uma mistura proteica foi analisada por electroforese bidimensional tendo-se obtido oresultado representado a seguir:
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a. Diga se considera possvel separar estas 3 protenas num s passo. Justifique.
(1.0 val.)
b. Se respondeu afirmativamente questo anterior, descreva qual a tcnica a usar
e refira os seus princpios bsicos. Se respondeu negativamente, proponha uma
sequncia de 2 ou 3 passos que permita o isolamento de cada uma das protenas
e justifique a sua proposta. (2.0 val.)
c. Suponha que possui um anticorpo para a protena que pretende isolar e o
resultado do immunoblot revela duas manchas (1 e 3). Como interpreta esse
resultado? O que poderia fazer para confirmar a sua interpretao. (2.0 val.)
2 Parte
6. A cristalizao de protenas pode ser conseguida recorrendo a estratgias de difuso de
vapor como o caso do mtodo da gota suspensa.
a. Indique em que se baseia este mtodo e justifique a importncia do recurso a um
sistema fechado. (2.0 val.)
b. Para uma mesma condio, como explica um menor tamanho dos cristais obtidos
se o seu nmero elevado? (1.0 val.)
c. Os resultados finais da cristalografia de raios-X so depositados na base de
dados Protein Data Bank. Qual o tipo de informao que a se encontra e qual o
interesse do repositrio? (1.0 val.)
7. O fraccionamento celular de um homogeneizado por centrifugao diferencial um
procedimento laboratorial bsico.
a. Descreva o fundamento deste mtodo de separao e justifique por que se fala
apenas do enriquecimento das fraces num dado componente sub-celular. (2.0
val.)
b. Para avaliar a qualidade de um fraccionamento celular usual recorrer-se a
enzimas marcadoras. Justifique. (1.0 val.)
c. Um investigador segue um determinado protocolo e num dia efectua um
fraccionamento usando tubos contendo um dado volume de homogeneizado;
alguns dias depois repete o procedimento com sedimentaes s mesmas
frequncias de rotao, mas agora partindo de uma quantidade superior de
material biolgico e ficando os tubos com maior enchimento. Apenas a quantidade
de material foi diferente, sendo que em ambos os casos o enchimento dos tubos
foi correcto. Comente. (1.0 val.)