UNIVERSIDADE ESTADUAL DA PARAÍBA

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAUDE

DEPARTAMENTO DE ENFERMAGEM

DOCENTE: KARLETE VIEIRA

EQUIPE: ADRIANO, ANA KARINE, DANIELE FIDELIS, DHÉBORA

CHRISTINNE, KAREN SANTOS, TAILLANY CAROLINE, VANESSA KARLA

Imunodiagnóstico

Diagnóstico de uma doença ao longo da história;

• Elementos essenciais dos testes diagnósticos:

Sensibilidade;

Especificidade.

Testes diagnósticos com base

imunólogica

• Alta especificidade do sistema imune;

• Robert Koch:

-Vacina contra a tuberculose;

-Suspensão de Mycobaterium tuberculosis;

-Teste de tuberculina.

Fonte: http://www.daviddarling.info/encyclopedia/K/Koch_Robert.html Fonte: http://oddish3.rssing.com/chan-3342108/all_p12.html

Anticorpos monoclonais

Anticorpos monoclonais

• Hibridoma é a combinação de uma célula B “normal” com

uma célula B cancerosa.

• Quando uma hibridoma cresce em cultura, suas células

geneticamente idênticas continuam a produzir o tipo de

anticorpo característico da célula B ancestral;

• Os clones das células secretoras de anticorpo podem ser

mantidos indefinidamente em cultivo celular, podendo produzir

grandes quantidades de moléculas idênticas de anticorpo;

Anticorpos monoclonais

ou Mabs são anticorpos

cujo todas suas moléculas

são produzidas por um

clone hibridoma único.

São altamente

específicos, uniformes e

podem ser prontamente

produzidos em grandes

quantidades;

• Usados como ferramentas diagnósticas e terapêuticas e para superar

efeitos indesejáveis do sistema imune. Exemplos:

• Testes de gravidez usam Mabs para indicar a presença de um

hormônio excretado somente na urina de uma mulher;

• Muromonab-CD3 usado para diminuir a rejeição de transplante de

rim;

• Infliximab (Remicade) ou Entanercept (Embrel) direcionados para

bloquear a ação causadora da inflamação na artrite reumatoide e

distúrbio inflamatório intestinal da doença de Crohn;

• Ibritumonab (Zevalin) e o Rituximab (Rituxan) usado para o câncer

de Hodgkin;

• Trastuzumab (Herceptin) usado para o câncer de mama;

• O uso terapêutico de Mabs era limitado pois seus

anticorpos eram produzidos apenas por células de

camundongos (murina). O sistema imune dos

pacientes reagia contra as proteínas estranhas do

camundongo.

• Novas gerações de Mabs:

• Anticorpos monoclonais quiméricos usam

camundongos geneticamente modificados

para produzir uma molécula híbrida

humano/camundongo. A região variável do

anticorpo é murina. A região constante é

humana. São aproximadamente 66%

humanos. Exemplo: Rituximab;

• Anticorpos humanizados são desenvolvidos

para que a porção murina esteja limitada aos

sítios de ligação ao antígeno. A região

variável e a região constante são de fonte

humana. São aproximadamente 90%

humanos. Exemplos: Alemtuzumab e o

Trastuzumab;

• O objetivo final é desenvolver anticorpos

humanos completos. Uma abordagem é

modificar geneticamente camundongos para

que contenham genes humanos.

Reações de precipitação

• As reações de precipitação envolvem a reação de antígenos

solúveis com anticorpos IgG ou IgM para formar grandes

agregados moleculares, as treliças;

• Ocorrem em dois estágios distintos:

• Os antígenos e os anticorpos

rapidamente formam pequenos

complexos antígeno-anticorpo.

Ocorre dentro de alguns segundos;

• Os complexos antígeno-anticorpo

formam treliças que se precipitam na

solução. Pode levar minutos ou horas;

Reações de aglutinação

Reações de aglutinação

Aglutinação: é o agrupamento de

partículas usualmente por moléculas

de AC que se ligam a AG na

superfície de partículas adjacentes.

Os testes de Aglutinação podem

ser de dois tipos:

• Teste de Aglutinação Direta: Detectam

anticorpos contra quantidades relativamente

grandes de antígenos celulares como hemácias,

bactérias e fungos.

Teste de Aglutinação

indireta(Passiva)

• Os Anticorpos contra antígenos solúveis

podem ser detectados por testes de

aglutinação. Os antígenos são adsorvidos em

partículas como bentonita ou mais

frequentemente esferas de látex minúsculas.

Hemaglutinação

• Quando reações de aglutinação envolvem a

agregação de hemácias.

Reações de

Neutralização

Reações de Neutralização

• A neutralização é uma reação antígeno-anticorpo;

• Um antissoro contendo anticorpo que neutraliza uma toxina é chamado antitoxina;

• As reações também podem ocorrer quando vírus são ligados por anticorpos específicos;

• Teste in vitro são utilizados para identificar um vírus e determinar o anticorpo viral.

Teste de Inibição da hemaglutinação

viral.

Reações de fixação do complemento

• Usada para detectar quantidades pequenas de anticorpos;

• Baseia-se na interação entre antígeno anticorpo seguida pela fixação do componente do sistema complemento;

• Se houver anticorpos no soro ocorrerá a formação de imunocomplexos.

é adicionada em cada poço uma

fonte de Complemento

• O passo seguinte é a adição em

conjunto de hemácias anticorpos

contra estas células (sistema

indicador ou hemolítico).

• Se houver Complemento livre no

meio, as hemácias serão lisadas

• mas se o Complemento

estiver ligado aos imunocomplexos

não ocorrerá hemólise e a reação

será considerada como positiva

Técnicas de anticorpos

florescentes

• É uma técnica que permite :

Identificar microrganismos

Detectar anticorpos específicos

Corantes

fluorescentes

FA Direto- Utilizado para identificar um antígeno.

FA Indireto- Utilizado para detectar a presença de um

anticorpo especifico no soro.

O anticorpo especifico para

contra o micróbio presente, ele

reage com um antígeno para

formar um complexo

ENSAIO IMUNOSSORVENTE

LIGADO À ENZIMA

(ELISA)

O ensaio imunossorvente ligado á enzima

(ELISA, de enzyme-linked immnosorbet assay) é

mais amplamente utilizado em um conjunto de

testes conhecidos como imunoensaio enzimatico

(EIA, de enzyme immunossay).

ELISA direto

O ELISA direto é utilizado para detectar

antígenos contra um anticorpo especifico ligado

a placa de teste.

ELISA indireto

O ELISA indireto é utilizado para detectar

anticorpo contra um antígeno ligado a placa

teste.

HIV (Vírus da imunodeficiência humana)

É o mais realizado para

diagnosticar a doença.

Nele, profissionais de

laboratório buscam por

anticorpos contra o HIV

no sangue do paciente.

WESTERN BLOTTING OU

IMMUNOBLOTING

INTRODUÇÃO:

• Western Blotting é uma técnica usada para

detectar proteínas de uma determinada amostra

e serve como teste confirmatório dos

resultados obtidos em testes

imunoenzimaticos.

MÉTODOS DE EXECUÇÃO

DE WESTERN BLOTTING

Componentes da mistura

Eletroforese em gel

Filtro/membrana

Anticorpo ligado a enzima

Análise

O FUTURO DA TERAPÊUTICA E DO

DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICOS

• A introdução dos anticorpos monoclonais

revolucionou o diagnóstico imunológico ao

tornar disponível grandes quantidades de

anticorpos específicos.

REFERÊNCIAS

• TORTORA, Gerard J.. Microbiologia. 6. ed. Porto

Alegre: Artmed, 2003. 827 p. il. ISBN 857307678X

• http://biomedicinapadrao.wordpress.com/2010/

05/05/elisa/

• http://www.saudepratodos.com/conteudo.php?t

=132