Imunologia no Quadro da Patologia eAnálises Clínicas

Importância da Detecção de Ag e AC:

1. Elucidar processos patológicos

2. Diferenciar as fases das doenças

3. Selecionar Doadores de Sangue

4. Selecionar doadores e receptores de órgãos transplantados

5. Avaliar o prognóstico das doenças

6. Avaliar a eficácia da terapêutica e da suspensão da terapêutica

Testes Sorológicos

• Chamados ImunoensaiosMarcadosNão marcados

Multiparamétricos

• Respeitar Regras1. Controle Rigoroso2. Técnicas Padronizadas3. Controle de Qualidade

Algumas técnicas usadas

• Eletroforese• Imunoblotting• Citometria de Fluxo• Imunofluorescência• PCR / Real Time PCR

• Precipitação / Imunodifusão• Aglutinação• ELISA• RIA• Nefelometria• Turbidimetria

Automação

Eletroforese (SDS-PAGE)

Transferência

Papel filtro

Gel/ membrana/ filtro

Tampão

( +)( - )

Gel

Membrana transferência

preenchimento

suporte

Imunoblotting ou Western Blotting(proteínas ou glicoproteínas)

1. SDS-PAGE 2. Transferência 3. Bloqueio (BSA ou Leite) 4. Solução AC

5. Quimioluminescência ou Iodo126 6. Revelação 7. Densitometria óptica

Determinação[proteínas]

Imunoprecipitação:Anticorpo 12-14 hProteína-A Sepharose

LavagemCentrifugação

Tampão Laemnli 310

22016010045

SDS-PAGE

Anticorpo(Overnight)

Proteína-A126I

DensitometriaÓptica das

bancasAmostra

interesse

Imunofluorescência

3 Tipos: 1. Direto: • Passos 1 e 2 (Ac marcado com fluorocromo).• Usado para pesquisa de AC em células (imunocitoquímica) e tecidos (imunohistoquímica)• Ex da aplicabilidade: biópsia de doenças imunológicas (pele, rins, sífilis, herpes simples, varicela-zoster) 2. Indireto:• Usado para aumentar a sensibilidade do método• Passos 1, 2 e 33. Sistema Avidina-Biotina:• Técnica de amplificação• Avidina+Biotina = complexo• Avidina pode ser saturada com fluoresceína (verde),ficoeritina (vermelha), peroxidase (M. óptica), ferritina (M.eletrônica).• Várias biotinas podem se ligar ao AC = amplificação dafluorescência