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1/8/2016 1 Biotecnologia / Engenharia Genética Carlos Sinogas 2019/20 BIOTECNOLOGIA ENGENHARIA GENÉTICA DNA INSERT 1 Biotecnologia / Engenharia Genética Carlos Sinogas 2019/20 Clonagem molecular • Matéria-prima • DNA insert • Vector • Hospedeiro 2 Biotecnologia / Engenharia Genética Carlos Sinogas 2019/20 Dimensões de genomas 3 Biotecnologia / Engenharia Genética Carlos Sinogas 2019/20 Dimensão de um gene • HSA (68 kD) – 584 aa • RNA >1752 nts • Gene >16950 nts • Genoma humano ≈ 4 x 10 9 nts • “albuminas” / genoma humano > 235.000 • Genes humanos identificados: 25.000 a 35.000 • Como isolar um gene? 4 Biotecnologia / Engenharia Genética Carlos Sinogas 2019/20 mRNA 5 Biotecnologia / Engenharia Genética Carlos Sinogas 2019/20 Digestão parcial 6
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Clonagem molecular
•Matéria-prima• DNA insert• Vector• Hospedeiro
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Dimensão de um gene• HSA (68 kD) – 584 aa
• RNA >1752 nts• Gene >16950 nts
• Genoma humano ≈ 4 x 109 nts
• “albuminas” / genoma humano > 235.000• Genes humanos identificados: 25.000 a 35.000
• Como isolar um gene?
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Digestão parcial
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Banco genómico(digestão parcial)
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Isolamento mRNA Cromatografia em oligo(dT)
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Síntese de cDNA
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Adaptadores (linkers)
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