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Introdução

A linfadenite granulomatosa dossuínos, causada por micobactérias atípi-cas, não provoca qualquer sintoma noanimal e nem afeta o seu desenvolvi-mento. Os prejuízos que a doença causaaos produtores e agroindústrias são basi-camente aqueles decorrentes do destinodado à carcaça dos animais afetados porocasião do abate. Tomando-se por base oano de 1999, na região sul do Brasil, afreqüência de suínos com lesões de linfa-denite no abate foi de cerca de 0,9%.Considerando um abate inspecionado desuínos nesta região em 1999 de 12,6 mi-lhões de cabeças, o prejuízo total aosprodutores, causado pela linfadenite, foiestimado em 6,9 milhões de reais.

O diagnóstico da infecção por mico-bactérias em suínos apresenta dificulda-des, não existindo ainda um teste práticoe eficiente para dar suporte aos estudosepidemiológicos e às estratégias de com-trole. As características das lesões macroe microscópicas não são suficientes para

diferenciar a infecção causada, por agen-tes do Complexo M. avium (MAC) daque-la por M. bovis. O isolamento das mico-bactérias a partir de linfonodos com le-sões é extremamente trabalhoso, lento ecaro. Apresenta ainda baixa sensibilidade,devido aos procedimentos de desconta-minação dos tecidos.

Nos suínos vivos, para diagnóstico,tradicionalmente, utiliza-se o teste de tu-berculinização, com tuberculina aviária e/ou bovina. Este teste, porém, apresentasensibilidade e especificidade baixas paraidentificar animais infectados, dificultan-do a interpretação dos resultados obti-dos. A relação entre a reação ao teste detuberculina e a observação de lesões noabatedouro depende de alguns fatores,principalmente do período decorrido entrea infecção e a realização do exame ma-croscópico. As lesões macroscópicas po-dem levar mais de 90 dias para aparece-rem, enquanto que a reação à tuberculinapode ocorrer a partir de 24 dias após ainfecção com o MAC.

1 Méd Vet., D.Sc., Embrapa Suínos e Aves.2 Biólogo, M.Sc., Embrapa Suínos e Aves.3 Méd Vet., B.Sc. Convênio ACCS, AINCADESC e Embrapa Suínos e Aves.4 Méd Vet., M.Sc., Embrapa Suínos e Aves.5 Méd Vet., M.Sc., Dep. Med. Vet. Prev. e Saúde Animal, FMVZ-USP.6 Estatístico, M.Sc., Embrapa Suínos e Aves.

Execução e interpretação da prova

tuberculínica pareada em suínos,

com tuberculina aviária e bovina

Nelson Morés¹Armando Lopes do Amaral²Lauren Ventura³Roberto Aguilar Machado da Silva4

Virgínia Santiago da Silva5

Waldomiro Barioni Junior6

ISSN 0100-8862Agosto/2002Concórdia, SC

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De modo geral, um resultado positivo noteste de tuberculina é um bom auxílio aodiagnóstico para identificar rebanhos in-fectados. Dúvidas persistem sobre quaiscritérios usar para definir uma reação co-mo positiva. Em função dessas dificulda-des na interpretação das reações ao tes-te de tuberculina, foram desenvolvidaspesquisas com o objetivo de responderaos seguintes questionamentos:

1. A tuberculinização é um bomteste para identificar rebanhos suínosinfectados por MAC?

2. Pode-se usar a tuberculinizaçãopareada com PPD aviária e bovina paradiferenciar rebanhos infectados comMAC daqueles com o M. bovis?

3. Qual o melhor método de medi-ção da reação: o aumento da espessurada dobra da pele ou diâmetro da reação?

Trabalhos executados pela Embrapa

Suínos e Aves

Foram realizados três experimentos:O experimento 1 foi realizado em

seis rebanhos suínos comerciais infecta-dos com MAC. O teste de tuberculina foirealizado em lotes de suínos com pesode abate entre 100 e 120 kg. Os suínosque apresentavam qualquer reação àstuberculinas, e alguns sem reação algu-ma, foram abatidos em menos de setedias após a aplicação, para avaliação delesões nos linfonodos e colheita deamostras para exames laboratoriais.

O experimento 2 foi realizado noisolamento do Laboratório de Sanidadeda Embrapa Suínos e Aves, com suínoslivres de infecção por micobactérias,inoculados experimentalmente com umaamostra patogênica de MAC, entre 30 a40 dias de idade. O teste de tuberculinafoi realizado com aproximadamente 160dias de idade, sendo que em seguida osanimais foram abatidos para avaliação delesões nos linfonodos e colheita deamostras para exames laboratoriais.

O experimento 3 foi realizado damesma forma que o experimento 2, masutilizando-se como inóculo uma amostrade M. bovis. Nestes suínos a tuberculini-zação e o abate foram realizados com 40dias pós inoculação.

Aplicação das tuberculinas: cadasuíno dos três experimentos recebeu porvia intradérmica 0,1ml de tuberculinaaviária (0,05mg de PPD-TECPAR) naface dorsal de uma orelha e 0,1 ml detuberculina bovina (0,05mg de PPD-TECPAR) na face dorsal da outra orelha.Para aplicação das tuberculinas utilizou-se seringas e agulhas de insulina (Figura1).

Leitura das reações às tuberculinas:

a leitura foi realizada cerca de 48 horasapós a aplicação. Dois métodos foramusados:

a) medição do diâmetro maior dareação, utilizandose uma régua milimé-trica (Figura 2);

b) aumento da espessura da dobrada pele, realizada com cutímetro, repre-sentada pela diferença entre a medida daespessura da dobra da pele no local daaplicação antes e 48 horas após a aplica-ção das tuberculinas.

Exames laboratoriais: No abate, ossuínos foram avaliados macroscopica-mente quanto à presença de lesõesgranulomatosas (Figura 3). Amostras delinfonodos da cabeça e do mesentérioforam colhidas para exa-mes histopatoló-gico e de imunoperoxidase (experimen-tos 1 e 2). No teste de imunoperoxidaseutilizou-se anticorpo monoclonal produzi-do com extrato celular de M. avium(QED Bioscience Inc., Cat. 18104), paraconfirmação da infecção por agentes docomplexo M. avium (Figura 4).

Resultados e comentários

Para fins de análises estatísticas, nocálculo da média das reações por granja,foram considerados todos os suínos que

Execução e interpretação da prova tuberculínica pareada em suínos, com tuberculina aviária e bovina |3

apresentaram reação igual ou maior que0,50 cm de diâmetro para qualquer umadas tuberculinas (Figura 5). Os valoresmédios das reações por granja, obtidosno experimento 1, com os dois métodoavaliados, estão na Tabela 1. Nos seisrebanhos avaliados, as médias das rea-ções obtidas com a tuberculina aviária,tanto com o método do diâmetro maiorcomo com o aumento da espessura dadobra da pele, foram maiores que asmédias das reações à tuberculina bovina.Isto pode ser visualizado nos gráficos 1(diâmetro maior) e 2 (aumento da espes-sura da pele).

Gráfico 1 - Valores médios por granja dodiâmetro maior da reação às tuberculinas aviáriae bovina em suínos (somente os reagentes) derebanhos infectados naturalmente por MAC.

Gráfico 2 - Valores médios por granja doaumento na espessura da pele (medição comcutímetro) na reação às tuberculinas aviária e

bovina em suínos (somente os reagentes) derebanhos infectados naturalmente por MAC.

As médias das reações, pelos doismé-todos avaliados, foram maiores (P<0,05) para a tuberculina aviária, compa-rativamente à tuberculina bovina, tantonos suínos das granjas infectadas natu-ralmente (Tabela 2) como naqueles ino-culados experimentalmente com MAC(Tabela 3).

Os suínos inoculados com M. bovis(experimento 3) reagiram às duas tuber-culinas aplicadas, mas as reações foramsempre maiores à tuberculina bovina,tanto na medida do diâmetro maior(Figura 6), como no aumento da espes-sura da pele (Tabela 3). Dos sete suínosinoculados, seis apresentaram lesões tu-berculosas nos pulmões (Figura 7), umacaracterística não verificada nos suínosinfectados naturalmente (experimento 1)ou experimentalmente (experimento 2)com MAC.

Com o objetivo de obter uma indi-cação sobre o ponto de corte das rea-ções à tuberculina aviária, na interpreta-ção individual das reações, os dados dosdois métodos testados foram divididosem três categorias e comparados, atra-vés de teste de concordância, com osresultados macro e/ou microscópicos delinfadenite granulomatosa. Isto foi reali-zado tanto com o método de medição dodiâmetro maior, com os suínos infecta-dos naturalmente (Tabelas 4) e expe-rimentalmente (Tabela 5), como com ométodo de medição do aumento na es-pessura da pele, também com os suínosinfectados naturalmente (Tabela 6) eexperimentalmente (Tabela 7). Nos suí-nos infectados naturalmente, na mediçãodo diâmetro maior, a concordânciaobservada com o exame patológico foipraticamente a mesma, quan-do consi-derou-se como positivos os animais comreação superior a 0,5 cm (concordânciade 79,7%) ou 1,0 cm (concordância de

4| Execução e interpretação da prova tuberculínica pareada em suínos, com tuberculina aviária e bovina

78,7%). Entretanto, com os suínos ino-culados experimentalmente a concordân-cia foi um pouco maior (86,4%), quandoconsiderou-se como positiva a reação su-perior a 1,0 cm de diâmetro.

Com relação ao método de mediçãodo aumento da espessura da dobra dapele em suínos infectados naturalmente,a concordância observada foi de 76,2%,quando considerou-se como positivosvalores maiores de 0,20 cm e de 75,0%,quando acima de 0,30 cm (Tabela 6).Porém, a concordância observada foibem maior (95,0% para reação maior de0,20 cm e 85,0% para a reação maiorque 0,30 cm) nos suínos inoculadosexperimentalmente (Tabela 7). Os melho-res resultados de concordância observa-da, obtidos com os suínos inoculados emrelação àqueles infectados naturalmente,com dois métodos de medição avaliados,provavelmente, deve-se ao fato de queem condições naturais não se conhece adose infectante e nem o tempo decorridoapós a infecção. As lesões macroscópi-cas podem levar mais de 90 dias paraaparecer, enquanto que a reação à tuber-culina pode ocorrer a partir de 24 diasapós a infecção com o MAC. Também,suínos infectados com doses baixas deMAC produzem reação mínima e, geral-mente, não são capazes de produzirlesões progressiva.

Um problema que pode ocorrerquando o teste de tuberculina pareadofor aplicada em um rebanho infectadopor MAC, é que, eventualmente, emalguns animais de uma amostragem areação à tuberculina bovina pode sermaior do que a reação à tuberculina aviá-ria. Este fato ocorreu nos seis rebanhosem que o experimento 1 foi realizado. Aspossíveis causas envolvidas nesta apa-rente "incoerência" de resultado são:

a) Local incorreto da aplicação datuberculina (fora da derme).

b) Quantidade de tuberculina aplica-da (problema de refluxo ou dose incor-reta).

c) Falta de atenção na aplicaçãodas tuberculinas, com troca involuntáriade orelha.

O mesmo não ocorreu com os suí-nos infectados com M. bovis em que asreações à tuberculina bovina sempreforam maiores que as reações à tubercu-lina aviária (Tabela 3).

Para fins de interpretação individualdos testes de tuberculina sugere-se usaros critérios que constam nas tabelas 8(pelo método da medição do diâmetromaior) e 9 (para o método de mediçãodo aumento da espessura da dobra dapele).

Conclusões e recomendações

1. É possível, através do teste detuberculinização pareada com PPD aviá-ria e bovina, diferenciar rebanhos suínosinfecta-dos com MAC daqueles com M.bovis.

2. Os dois métodos de medição darea-ção às tuberculinas testados, o diâ-metro maior e o aumento da espessurada pele, foram eficientes no diagnósticoda infecção por micobactérias, mas porrazões práticas e econômicas é recomen-dável a utilização do método da mediçãodo diâmetro maior da reação.

3.Toda medida acima de 0,5 cm nodiâmetro maior da reação deve ser consi-derada como positiva no cálculo da mé-dia para um determinado rebanho.

4. Quando a média do diâmetro ma-ior dos reagentes no rebanho for maior àPPD aviária, trata-se de infecção porMAC.

5. Quando a média do diâmetromaior dos reagentes no rebanho formaior à PPD bovina, trata-se de infecçãopor M. bovis.

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Tabela 1 – Diâmetro maior e aumento da espessura na dobra da pele das reações as tuberculinas aviária ebovina em suínos (somente os reagentes) de granjas infectadas naturalmente com MAC -experimento 1.

Diâmetro maior* Aumento da espessura**

PPD aviária PPD bovina PPD aviária PPD bovinaGranja

Número de

animais

reagentes Média, cm Média, cm Média, cm Média, cm

1 35 3,25 2,40 NR NR2 8 2,09 1,51 0,48 0,343 10 1,85 1,19 1,43 0,684 30 2,39 1,46 1,14 0,595 37 1,68 1,22 1,44 0,976 2 2,20 0,83 1,73 0,26

*Medição feita com régua milimétrica, 48 horas após a aplicação das tuberculinas.**Medição pelo cutímetro, 48 horas após a aplicação das tuberculinas; NR: não realizado.

Tabela 2 - Valores médios da reações às tuberculinas aviária e bovina, 48 horas após a aplicação, emsuínos (somente os reagentes) de rebanhos infectados naturalmente ou experimentalmentecom MAC.

Medida da reação

Diâmetro maior* Aumento da espessura da pele**Experimento Tuberculina

N Média, cm N Média, cm

Aviária 122 2,35a 88 1,26a1. Infecçãonatural Bovina 119 1,61b 88 0,73a

Aviária 38 2,48a 19 0,42a2. Infecçãoexperimental Bovina 38 1,93b 19 0,29a

* Medição feita com régua no diâmetro maior da reação.**Diferença entre as medidas (posterior-anterior) feita com cutímetro dobrando-se a pele no centro da reação.Médias na mesma coluna com letras diferentes diferem entre si (P<0,05) pelo teste Tukey.

Tabela 3 – Resultados individuais das reação às tuberculinas aviária e bovina e lesões macroscópicas, emsuínos inoculados com M. bovis (40 dias pós-inoculação)

Diâmetro da reação, cm* Aumento da espessura

pele, cm**

Lesões macro

Tratamentos Suínos

Aviária Bovina Aviária Bovina Pulmão Linfonodo

463 3,0 4,0 3,2 10,1 + BR464 3,0 7,0 2,2 8,0 + BR465 5,0 7,0 4,7 11,0 + BR466 3,0 7,0 2,7 5,4 + BR467 2,5 4,0 2,5 11,5 + BR468 3,0 6,5 1,7 13,8 - MD

Inoculados

469 3,5 5,0 3,8 4,7 + BRMédias 3,28a 5,78b 2,97a 9,21b

443 0,0 0,0 0,0 0,0 - -445 0,0 0,0 0,0 0,0 - -449 0,0 0,0 0,0 0,0 - -

Controles

450 0,0 0,0 0,0 0,0 - -* Medição feita com régua no diâmetro maior da reação.**Diferença entre as medidas (posterior-anterior) feita com cutímetro dobrando-se a pele no centro da reação.Médias na mesma linha, com letras diferentes, diferem entre si (P<0,05) pelo teste Tukey.MD= linfonodos mediastínicos; BR= linfonodos bronquiais.

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Tabela 4 – Teste de concordância entre o teste com PPD aviária, pela medição do diâmetro maior (comrégua), com diferentes pontos de corte e o exame patológico (macro e/ou micro), em suínosinfectados naturalmente com MAC.

Exames macro e/ ou microTeste

Critério usado(ponto de corte)

Pos. Neg.

TotaisConcordânciaobservada, %

Pos.:>2,0cm 53 3 56Reação à PPDaviária Neg.: <=2,0cm 73 68 141 61,4

Totais 126 71 197

Pos.:>1,0cm 100 16 116Reação à PPDaviária Neg.: <=1,0cm 26 55 81 78,7

Totais 126 71 197

Pos.:>0,50cm 109 23 132Reação à PPDaviária Neg.: <=0,5cm 17 48 65 79,7

Totais 126 71 197

Tabela 5 - Teste de concordância entre o teste com PPD aviária, pela medição do diâmetro maior (comrégua), com diferentes pontos de corte e o exame patológico (macro e/ou micro), em suínosinfectados experimentalmente com MAC.

Exames macro e/ ou microTeste

Critério usado(ponto de corte)

Pos. Neg.

TotaisConcordânciaobservada, %

Pos.:>2,0cm 24 1 25Reação à PPDaviária Neg.: <=2,0cm 8 11 19 79,5

Totais 32 12 44

Pos.:>1,0cm 31 5 36Reação à PPDaviária Neg.: <=1,0cm 1 7 8 86,4

Totais 32 12 44

Pos.:>0,50cm 31 7 38Reação à PPDaviária Neg.: <=0,5cm 1 5 6 81,8

Totais 32 12 44

Tabela 6 – Teste de concordância entre o teste com PPD aviária, pela medição do aumento na espessurada pele (com cutímetro), com diferentes pontos de corte e o exame patológico (macro e/oumicro), em suínos infectados naturalmente com MAC.

Exames macro e/ ou microTeste

Critério usado(ponto de corte)

Pos. Neg.

TotaisConcordânciaobservada, %

Pos.:>0,5cm 51 5 56Reação à PPDaviária Neg.: <=0,5cm 40 68 108 72,6

Totais 91 73 164

Pos.:> 0,3cm 58 8 66Reação à PPDaviária Neg.: <=0,3cm 33 65 98 75,0

Totais 91 73 164

Pos.:>0,2cm 64 12 132Reação à PPDaviária Neg.: <=0,2cm 27 61 65 76,2

Totais 91 73 164

Execução e interpretação da prova tuberculínica pareada em suínos, com tuberculina aviária e bovina |7

Tabela 7 – Teste de concordância entre o teste com PPD aviária, pela medição do aumento na espessurada pele (com cutímetro), da reação com diferentes pontos de corte e o exame patológico(macro e/ou micro) em suínos infectados experimentalmente com MAC.

Exames macro e/ ou microTeste

Critério usado(ponto de corte)

Pos. Neg.

TotaisConcordânciaobservada, %

Pos.:>0,5cm 5 0 5Reação à PPDaviária Neg.: <=0,5cm 12 3 15 40,0

Totais 17 3 20

Pos.:> 0,3cm 14 0 14Reação à PPDaviária Neg.: <=0,3cm 3 3 6 85,0

Totais 17 3 20

Pos.:>0,2cm 17 1 18Reação à PPDaviária Neg.: <=0,2cm 0 2 2 95,0

Totais 17 3 20

Tabela 8 – Interpretação do teste de tuberculinização pareada em suínos com PPD aviária (TA) e PPDbovina (TB), através da medição do diâmetro maior da reação feita com régua milimétrica.

Teste comparativo Diâmetro maior da reação* Outras lesões Interpretação

TA<TB Maior que 2,0cm Edema, hiperemia/hemorragia e necrose

Positivo para M. bovisou

Menor de 0,50cm Nenhum NegativoDe 0,51 a 1,0cm Edema e/ou hiperemia SuspeitoTA>TBMaior de 1,0cm Edema, hiperemia/

hemorragia e/ou necrosePositivo para o

complexo M. avium*Leitura feita 48 horas após a aplicação da tuberculina.** Média dos animais reagentes com mais de 0,50cm no diâmetro maior da reação.

Tabela 9 – Interpretação do teste de tuberculinização pareada em suínos com PPD aviária (TA) e PPDbovina (TB), através da medição do aumento da espessura da dobra da pele, feita comcutímetro.

Teste comparativo Aumento da espessura da

pele*

Outras lesões Interpretação

TA<TB Maior que 0,30cm Edema, hiperemia/hemorragia e necrose

Positivo para M. bovisou

Menor de 0,20cm Nenhum NegativoDe 0,21 a 0,30cm Edema e/ou hiperemia SuspeitoTA>TBMaior de 0,30cm Edema, hiperemia/

hemorragia e/ou necrosePositivo para o

complexo M. avium*Leitura feita 48 horas após a aplicação da tuberculina.** Média dos animais reagentes, com aumento da espessura da dobra da pele (medida posterior menos medida anterior).

8| Execução e interpretação da prova tuberculínica pareada em suínos, com tuberculina aviária e bovina

Figura 1 – Aplicação intra-dérmica da tuberculina(formação de lentilha) em suíno, usan-do agulha e seringa de insulina.

Figura 2 – Suíno com reação à tuberculina aviária-medida da reação com régua, 48horas após à aplicação.

Figura 3 – Linfonodos mesentéricos de suíno a-batido apresentando lesões granulo-matosas de linfadenite.

Figura 4 – Reação positiva (grumos de cor mar-rom) ao teste de imunoperoxidase emlinfonodo de suíno com linfadenite.

Figura 5 – Suíno infectado com MAC. Reaçãopositiva às tuberculina aviária (orelhadireita) e bovina (orelha esquerda).Note que a reação à tuberculinaaviária é maior e mais grave(necrose).

Execução e interpretação da prova tuberculínica pareada em suínos, com tuberculina aviária e bovina |7

Figura 6 – Suíno infectado com M. bovis. Reaçãopositiva às tuberculina aviária (orelhaesquerda) e bovina (orelha direita).Note que a reação à tuberculinabovina é maior e mais grave(necrose).

Figura 7 – Suíno infectado com M. bovis. Lesõestuberculosas no parênquima pulmo-nar.