LM, Lima©

LM, Lima©

D

E

S

C

O

B

E

R

T

A

D

E

F

Á

R

M

A

C

O

S

Etapa de

Pesquisa

Etapa de

Desenvolvi-

mento

Etapa de

Comerciali-

zação

Etapa

Regulatória

Seleção do Alvo Molecular; Desenvolvimento dos ensaios farmacológicos in vitro e in vivo; Desenho de ligantes; Síntese; Descoberta e Otimização do Protótipo.

Inicial: Realização dos ensaios pré-clínicos.

Tardia: Realização dos ensaios clínicos

(Fase I, Fase II e Fase III).

ANVISA; EMEA, FDA, etc

Marketing e vendas 1 ANO

1 ANO

1.5 ANOS +

5.5 ANOS

3 ANOS

D

U

R

A

Ç

Ã

O

M

É

D

I

A

Cadeia de Inovação em Fármacos & Medicamentos

LM, Lima©

Química Medicinal

Química

Abordagem Fisiológica

Chagas & Leishmaniose Câncer, Diabetes, Asma e Artrite

Farmacologia

Bioinformática

Planejamento Dependente

do Biorreceptor

Planejamento Independente

do Biorreceptor

Alvos: TKs, b-tubulinas, PDE-4, MAPK p38 LASSBio-998

LM, Lima©

São serina/treonina proteínas quinases ativadas por mitógenos responsáveis por

sinais intra- e extracelulares que regulam vários eventos dentre eles a divisão e

diferenciação celular, apoptose, produção de enzimas e mediadores envolvidos com a

resposta inflamatória;

Existem em 4 isoformas: MAPK-p38 a, b, g e d, apresentam homologia >60% na

sequência total de aa; e identidade >90% dentro do domínio quinase;

São produzida em vários tecidosSão produzida em vários tecidos

Pulmões, rins, testículos, pâncreas, intestino, coração, CD4+Pulmões, rins, testículos, pâncreas, intestino, coração, CD4+

Músculo esquelético e fisiopatologias do coraçãoMúsculo esquelético e fisiopatologias do coração

p38γ

p38δ

p38β

p38α

Amplamente produzida em várias células sistema imune e ativada em

respostas a estímulos pró-inflamatórios. É a mais bem caracterizada e

talvez a mais relevante quinase envolvida nas respostas inflamatórias. s.

Coulthard, L.R. (2009) Trends in Molecular Medicine 1, 369.

ae b 75%

a e g 62%

a e d 61%

LM, Lima©

Isoforma de

MAPK p38 Distribuição

Inibição por

SB 203580

p38α Todas as células +

p38β Células T +

p38γ Músculo esquelético -

p38δ

Células T, macrófagos /

monócitos e neutrófilos -

Artrite reumatoide / Doença de Crohn / Psoríase

Alzheimer / Parkinson / Esclerose lateral amiotrófica

Câncer

1 Ashwell, J. D. Nature Reviews / Immunology 2006, 6, 532-540. 2 Zhang, J. et al. TRENDS in Pharmacological Sciences 2006, 28, 286-295. 3 Kim, E. K. et. al. Biochimica et Biophysica Acta 2010, 1802, 396-405.

Cascata de ativação da MAPK p38. MK2 (MAPK

ativada por proteína quinase 2)

(Adaptada de www.sabioscience.com)

LM, Lima©

INIBIDORES DE MAPKINIBIDORES DE MAPK--p38p38

1ª GERAÇÃO1ª GERAÇÃO 2ª GERAÇÃO2ª GERAÇÃO

N

NH

N

F

S

O

SB302590

S

NH

NH

O

O

O

GK00687

NN

NH

O

NH

Cl

NN

NH

O

NH

ONO

BIRB796

não entrou em fase clínica

hepatotóxico e carcinogênico

Inibição CYP450

não entraram em fase clínica

Bayer

Boehringer Ingelheim

CI50= 290 nM (GK);

↓ baixa Potência (BI)

Completou Fase II

(AR, DC, PS)

Descontinuado→ hepatoxicidade

Boehringer

Ingelheim

LM, Lima©

INIBIDORES DE MAPKINIBIDORES DE MAPK--p38p38

1ª GERAÇÃO1ª GERAÇÃO

2ª GERAÇÃO2ª GERAÇÃO

3ª GERAÇÃO3ª GERAÇÃO

N

NH

N

F

S

O

SB302590

NN

NH

O

NH

ONO

BIRB796

N

N

N O

O

F

F

NH

OH

OH

pamapimode (Roche)FF

NN

O

NH2

F F

O

NH2VX702 (Vertex)

NCl

O

N

N

F

O

O

N

Scio-469

Descontinuado Fase II (AR)

↓

Falta de eficácia clínica

Descontinuados Fase II (AR) Falta de eficácia clínica

LM, Lima©

J. Simon C. Arthur & Steven C. Ley Nature Reviews Immunology 2013, 13, 679–692

LM, Lima©

Desenho Estrutural e Planejamento MolecularDesenho Estrutural e Planejamento Molecular

Piper hispidinervum

O

O

S

N

O

OCH3

O N

H

H

GK00687 (1)

NN

N

O

N

HH Cl

Cl

2

bioisosterismo

de anéis

fenílogo A

NN

N

O

N

HH Cl

Cl

N NH

O

NH

B

bioisosterismo

não clássico

bioisosterismo

de anéis

N NH

O

NH

O

O

O

O

CH3

W

COMPOSTOS-ALVO bioisosterismo

de anéis

N NH

O

NH

O

O

O

O

CH3

LASSBio-998

INPI (2005)

PCT (2006) Ribeiro, I.G (1998) dados não publicados

N NH2O

O

O

NH

N Ar

H

LM, Lima©

Sobreposição e alinhamento propostos para os derivados da uréia

analisados pelo método CoMFA. Em verde é observado o

derivado quinazolinônico 15b e em laranja é observado o derivado

da uréia LASSBio 998 (14). Código de cor: azul (N), vermelho (O)

e verde (halogênio).

Tabela 2:Valores das atividades calculadas a partir do Modelo 2 de QSAR-

3D/CoMFA.

Derivado Atividade

Experimental (pIC50)

Atividade

Calculada (pIC50)

SB-202190 (4) 7.50 7.98

GK 00687 (9) 4.80 5.20

LASSBio 947 (11) - 7.08

LASSBio 948 (12) - 7.07

LASSBio 949 (13) - 7.08

LASSBio 998 (14) - 7.71

LASSBio 999 (15) - 5.03

a pIC50=-Log IC50, onde o IC50 é a concentração necessária para inibir 50% da atividade enzimática.

15b

da Silva, G. M. S et al. (2005) Tese de Doutorado, ICB-UFRJ da Silva, G. M. S et al. (2005) Tese de Doutorado, ICB-UFRJ

SB 202190

N

N

HN

OH

Cl

S

N

O

OCH3

O N

H

H

GK00687 (1)

F

FHN

N

OCl

Cl

OO

CH3

N NH

O

NH

RO

O CO2Et

LM, Lima©

vermelho regiões de alta densidade eletrônica (cargas

negativas que favorescem a atividade); em azul regiões de

baixa densidade eletrônica (cargas parcialmente positivas que

favorescem a atividade)

regiões em amarelo desfavorescidas por efeito estérico;

regiões em verde favorescidas por efeito estérico.

LM, Lima©

Ancoramento molecular do LASSBio-998 na MAPK p38 (Gbinding= -29,05 kJ/mol).

[Programa Flex X; PDB Pargellis, C. et.al . Nat. Struct. Biol. 2002, 9, 268-272]

Dra Nelilma C Romeiro

(Prof. Adjunto, IQ-UFRJ)

LM, Lima©

O

O

H

O

O

O

isomerização

cisão-oxidativa

Safrol

O

O

H

O

NO2

HNO3 conc

t.a. / 30 min

62%

O

O

CH3

N

KF-Al2O3 /

EtOH

t.a. / 1h

77%

O

O NO2

O CH3

O

CN

O

O

O CH3

O

N NH2

N C OO

O

O CH3

O

N NH

NH

O

LASSBio-998

Patente:

WO/2006/128268 (2006)

Tolueno / p-TsOH

Dean Stark

110° C / 48h

61%

Obtenção dos compostosObtenção dos compostos--alvoalvo

Barreiro, E.J. et al. J. Chem. Research (M) 1985, 2301-2332.

Zhou, L. et al., J. Chem. Research (S), 1998, 398

Zhou,, L. et al., Synthesis, 1998, 851

Dumas, J. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 2054

Piper hispidinervum

O

O

O

O

Zn, TiCl4, THF,

/ 3h30min., 84%

LM, Lima©

MAPK p38 fosforilada

Salina Veículo LASSBio-998

LPS

MAPK p38

B

A - LASSBio-998 preveniu a fosforilação de

MAPK p38 em macrófagos peritoneais

estimulados por LPS em uma concentração

dependente – in vitro, com IC50 = 14 ± 9 μM.

A

LASSBio-998 (M)

B - LASSBio-998 preveniu a

fosforilação de MAPK p38 em tecido

pulmonar de camundongo após a

inalação de LPS por Western blotting - in

vivo.

Ensaio sobre o alvo: MAPK Ensaio sobre o alvo: MAPK p38p38

IC50 = 14 ± 9 μM.

LM, Lima©

0

50

100

150

200

250

300

Salina

LPS

* p<0,05 versus veículo

* *

Ve í culo 948 998

Neutr

ó filo

s x

(10

3 /m

L)

(200mg/kg)

0

50

100

150

200

250

300

Salina

*

Ve í culo 948 998

Neutr

ó filo

s x

(10

3 /m

L)

(200mg/kg)

EFEITOS DOS COMPOSTOS INIBIDORES DE p38 SOBRE A MIGRAÇÃO LEUCOCITÁRIA

Modelo de Inflamação Pulmonar aguda induzida por LPS

ED50 =150 mg/kg (via oral)

Os animais foram pré-tratados com LASSBio-

998 i, via oral, 4h antes da inalação de LPS

(0,5 mg/mL) e o número de neutrófilos foi

avaliado 3h depois .

Dra Vera L G Koatz

(Professora IBQM)

In Memoriam

LM, Lima©

Ensaio Ensaio in vivoin vivo: Inibição TNF e IL: Inibição TNF e IL--11bb

de Oliveira Lopes, Raquel, Romeiro, Nelilma Correia, de Lima, Cleverton Kleiton F., Louback da Silva, Leandro, Palhares de Miranda, Ana Luisa,

Nascimento, Paulo Gustavo B.D., Cunha, Fernando Q., Barreiro, Eliezer J., LIMA, Lídia Moreira Docking, synthesis and pharmacological activity of novel

urea-derivatives designed as p38 MAPK inhibitors. European Journal of Medicinal Chemistry. , v.54, p.264 - 271, 2012

LM, Lima©

150 mg zimosan na

pata esquerda

72 horas

Tratamento i.p. 10 mg/kg/dia por 4

dias

Ibrahim, T. et al, Intern. Immunol., 2002, 2, 875-883

C57 Black/6

Linfonodo

SalSal Veic.Veic.

ZimosanZimosan

Veic.Veic.

Ensaio Ensaio in vivoin vivo: Inflamação crônica : Inflamação crônica (artrite)(artrite)

LM, Lima©

Lin

fono

do

po

plíte

o (

mg

)

0

2

4

6

8

Salina

VeículoVeículo L-998 (100 mg/kg)

ZIMOSAN (150 µg)

*

Lin

fono

do

po

plíte

o (

mg

)

0

2

4

6

8

Salina

VeículoVeículo L-998 (100 mg/kg)

ZIMOSAN (150 µg)

*

Efeito do tratamento v.o. diário (8 dias)com o LASSBio-998 sobre o peso dos linfonodos Poplíteos (A) e do número

de linfócitos (B)de camundongos Balb/C que receberam uma injeção i.p. de zimosan.

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

Salina

VeículoVeículo L-998 (100 mg/kg)

ZIMOSAN (150 µg)

Lin

fócito

s x

10

6/

mg

lin

fono

do

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

Salina

VeículoVeículo L-998 (100 mg/kg)

ZIMOSAN (150 µg)

Lin

fócito

s x

10

6/

mg

lin

fono

do

LM, Lima©

Estudos de Estabilidade Química e Estudos de Estabilidade Química e SolubilidadeSolubilidade

LASSBio-998

0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0 16.0 17.0 18.0 19.0 20.0 min

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

550

600

650

700

750

800

850

900

950

1000

1050

mAU

254nm4nm (1.00)

1/36

27

2/10

711

3/54

22

4/33

387

5/17

255

6/12

3121

7/19

936

8/50

164

9/40

41

10/3

0288

2

11/1

0709

12/2

0731

650

13/5

717

14/3

104

Solução HCl 10%: 97,2%

0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0 15.0 16.0 17.0 18.0 19.0 20.0 min

-150

-100

-50

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

550

600

650

700

750

800

850

900

950

1000

mAU

254nm,4nm (1.00)

1/84

35

2/24

327

3/37

127

4/23

726

5/10

193

6/51

936

7/22

5401

8/10

864

9/19

7528

83

10/5

701

11/3

1215

Tampão fosfato: 97,9% Aparelho: Shimadzu – LC20AD

Coluna: Kromasil 100-5C18 250-4,6 mm

Fase móvel: 80% ACN, 20% água.

Fluxo: 1mL/min

Detector: SPD-M20A (Diode Array)

Comprimento de onda: 254 nm

Solubilidade aquosa =

0,093µM

LM, Lima©

0 30 60 90 120 150 180 210

0

10

20

30

Tempo (min)

LA

SS

Bio

-998 (

mM

)

0 30 60 90 120

0

5

10

15

20

25

Sem CofatoresCom Cofatotes

Tempo (min)

LA

SS

Bio

-99

8 (

mM

)0 30 60 90 120

0

5

10

15

20

25

Sem CofatoresCom Cofatotes

Tempo (min)

LA

SS

Bio

-99

8 (

mM

)

Gráficos de estabilidade plasmática (A) e estabilidade metabólica em microssoma hepático de

ratos (B) concentração de LASSBio-998 vs. tempo de incubação. Análise por CLAE

Estudos de metabolismo plasmática e Estudos de metabolismo plasmática e microssomalmicrossomal

t1/2= 76,8 minutos t1/2= 60,6 minutos

LM, Lima©

ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR

LM, Lima©

Ancoramento molecular do LASSBio-998 na MAPK p38 (Gbinding= -29,05 kJ/mol).

[Programa Flex X; PDB Pargellis, C. et.al . Nat. Struct. Biol. 2002, 9, 268-272]

LM, Lima©

Binding modes predicted for LASSBio-998 (top)

and LASSBio-1494 (bottom) with the (A) 3D

and (B) 2D ligand interactions diagram

representations. In the 3D representation the

ligands are represented by light blue sticks and

the amino acid residues are represented by grey

sticks. The hydrogen bonds are shown as yellow

dashes, labeled with their respective lengths. The

protein conformations used were selected from

a previous clusterization study and covered both

DFG-in and DFG-out states, comprising a set

of five representative structures of MAPKp38α

(PDB IDs: 1A9U, 1MQ7, 3DT1, 1YQJ and

1WBS)Program: Glide

D= Asp; E= Glu; K= Arg; M = Met; G = Gly; T= Ser

Dr. Laurent E. Dardenne

(LNCC)

Isabella Guedes

(PhD student)

LM, Lima©

Binding modes predicted for LASSBio-998 (top)

and LASSBio-1494 (bottom) with the (A) 3D

and (B) 2D ligand interactions diagram

representations. In the 3D representation the

ligands are represented by light blue sticks and

the amino acid residues are represented by grey

sticks. The hydrogen bonds are shown as yellow

dashes, labeled with their respective lengths. The

protein conformations used were selected from

a previous clusterization study and covered both

DFG-in and DFG-out states, comprising a set

of five representative structures of MAPKp38α

(PDB IDs: 1A9U, 1MQ7, 3DT1, 1YQJ and

1WBS)Program: Glide

D= Asp; E= Glu; K= Arg; M = Met; G = Gly; T= Ser

Dr. Laurent E. Dardenne

(LNCC)

Isabella Guedes

(PhD student)

LM, Lima©

ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR

Patente: WO/2006/128268 (2006) Dumas, J. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 2047-2050

LM, Lima©

Systemic

Circulation

Hepatic

Vein

Portal

Vein

Hepatic

Artery

Oral

Medication

Intestinal

Tract

Liver

efeito de 1ª passagem intestinal

efeito de 1ª passagem hepático

enzimas do metabolismo

Metabolismo → Aumento da Depuração (Clearance) → Compromete Efeito Terapêutico

Metabolismo hidrolítico

LM, Lima©

PRODUTO t1/2 Plasmática

(minutos)

LASSBio-998 76,8

LASSBio-1494 2133,0

LASSBio-1495 1401,7

LASSBio-1496 522,6

LASSBio-1497 45,5

PRODUTO t1/2 SEM COFATOR

(minutos)

t1/2 COM

COFATOR

(minutos)

LASSBio-998 66,0 75,3

LASSBio-1494 407,6 533,1

LASSBio-1495 1155,0 138,6

LASSBio-1496 630,0 74,5

LASSBio-1497 59,7 32,7

compostos mais lábeis ao metabolismo

metabolismo dependente de CYP450/FMO

metabolismo independente de CYP450/FMO

metabolismo dependente de CYP450/FMO/CE

Lopes, R. O. (2010) Dissertação de Mestrado, IQ-UFRJ

Estudo do Metabolismo Plasmático e Estudo do Metabolismo Plasmático e MicrosomalMicrosomal

LM, Lima©

metabolismo dependente de CYP e/ou FMO

LM, Lima©

PRODUTO t1/2 SEM

COFATOR

(minutos)

t1/2 COM

COFATOR

(minutos)

LASSBio-998 66 75,3

LASSBio-1494 407,6 533,1

LASSBio-1495 1155,0 138,6

LASSBio-1496 630,0 74,5

LASSBio-1497 59,7 32,7

Lopes, R. O. (2010) Dissertação de Mestrado, IQ-UFRJ

Gráfico 1 – Percentual de inibição da metabolização dos compostos

LASSBio-998 (1) e LASSBio-1497 (2) x log concentração do inibidor de

CES, o composto bis-p-nitrofenilfosfato (5), utilizando a fração microssomal hepática de ratos na ausência de cofatores.

Estudo do Metabolismo Plasmático e Estudo do Metabolismo Plasmático e MicrosomalMicrosomal

LM, Lima©

+.

+. +.

Rapidamente metabolizado no plasma e em

microssomas hepáticos → metabólito ativo??

LM, Lima©

+.

+.

LM, Lima©

PRODUTO t1/2 Plasmática

(minutos)

LASSBio-998 76,8

LASSBio-1494 2133,0

LASSBio-1495 1401,7

LASSBio-1496 522,6

LASSBio-1497 45,5

PRODUTO t1/2 SEM COFATOR

(minutos)

t1/2 COM

COFATOR

(minutos)

LASSBio-998 66,0 75,3

LASSBio-1494 407,6 533,1

LASSBio-1495 1155,0 138,6

LASSBio-1496 630,0 74,5

LASSBio-1497 59,7 32,7

metabolismo dependente de CYP e/ou FMO

compostos mais lábeis ao metabolismo hidrolítico

Solubilidade aquosa

0,093µM Solubilidade aquosa

3,349µM

Solubilidade aquosa

0,193µM

Solubilidade aquosa

0,215 µM

Solubilidade aquosa

0,11 µM

LM, Lima©

ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR

Efeito de LASSBio-998 (21), LASSBio-1007 (24) e os novos análogos

(25-28) na inibição da fosforilação de MAPK p38 em células THP-1

diferenciadas com PMA .

LM, Lima©

ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR

Veí

culo

LASSBio

-998

LASSBio

-100

7

LASSBio

-149

4

LASSBio

-149

5

LASSBio

-149

6

LASSBio

-149

7

SB20

3580

0

50

100

150

200

250

****

*

IL-1

beta

(p

g/m

l)

Veí

culo

LASSBio

-998

LASSBio

-100

7

LASSBio

-149

4

LASSBio

-149

5

LASSBio

-149

6

LASSBio

-149

7

SB20

3580

0

100

200

300

400

500

600

**

**

**

TN

F (

pg

/ml)

Fig. 1 – Análise da capacidade dos análogos do LASSBio-998 inibirem a

secreção de IL-1beta e TNF induzida pelo LPS. Células THP-1 (1x106 )

foram estimuladas com os diferentes análogos do LASSBio-998 a 10

mM. Após 30 minutos foi adicionado LPS (10 ng/ml) e as culturas

mantidas por um total de 24 horas. Os níveis de IL-1beta (A) e TNF (B)

foram avaliados por ELISA conforme instrução do fabricante (R&D Systems). Veículo = DMSO. p ≤ 0.05 em relação ao veículo.

Dra. Roberta Olmo

(Fiocruz)

IL-1b

(IC50 mM)

TNF

(IC50 mM)

LASSBio-998 5,1 32,6

LASSBio-1494 96,6 2,5

LASSBio-1495 41,7 80,2

LASSBio-1496 2,0 0,0002

LASSBio-1497 38,6 2,9

LASSBio-1007 21,8 4,3

SB203580 2,0 0,5

LM, Lima©

ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SARETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR

Dra. Roberta Olmo

(Fiocruz)

LPS LPS+5 LPS+6a LPS+6b LPS+6c LPS+6d LPS+7 LPS+SB pp38

p38

LPS

LPS+5

LPS+6a

LPS+6b

LPS+6c

LPS+6d

LPS+7

LPS+SB

0.00

0.25

0.50

0.75

1.00

pp38

/p38

LASSBio-998 LASSBio-1496 LASSBio-1497 LASSBio-1494

LASSBio-1495 LASSBio-1007

pp38 expression in THP-1 cultures after stimulation with LPS. All molecules tested

were able to decrease pp38 expression. Phosphorylation of p38 was detected by

immunoblotting using the specific antibody

LM, Lima©

Hipernocicepção Mecânica Induzida por Carragenina

em camundongos

Dr. Fernando Cunha

(Profº Titular)

Contr

ol

SB20

3580

mol/k

g

m

LASSB

io-9

98 1

00

mol/k

g

m

LASSB

io-9

98 3

00

mol/k

g

m

LASSB

io-1

494

100

mol/k

g

m

LASSB

io-1

495

100

mol/k

g

m

LASSB

io-1

496

100

mol/k

g

m

LASSB

io-1

497

100

0

2

4

6

8Carageenan 100 mg/paw

***

****

***

***

*

Inte

nsit

y o

f H

ype

rno

cic

ep

tio

n

m

ech

an

ical th

resh

old

(g

)

Contr

ol

SB20

3580

mol/k

g

m

LASSB

io-1

495

30

mol/k

g

m

LASSB

io-1

495

100

mol/k

g

m

LASSB

io-1

495

300

Carageenan 100 mg/paw

***

***

***

DI50= 90 (70115) mmol/Kg

Imax: 6014%

LM, Lima©

Contr

ol

SB20

3580

mol/k

g

m

LASSBio

-998

100

m

ol/kg

m

LASSBio

-998

300

m

ol/kg

m

LASSBio

-149

4 10

0 m

ol/kg

m

LASSBio

-149

5 10

0 m

ol/kg

m

LASSBio

-149

6 10

0 m

ol/kg

m

LASSBio

-149

7 10

0

0

40

80

120Capsaicin 1.6 mg/paw

*** *** *** ***

*

***

A

Lic

kin

g (

s)

Contr

ol

SB20

3580

mol/k

g

m

LASSBio

-149

5 30

m

ol/kg

m

LASSBio

-149

5 10

0 m

ol/kg

m

LASSBio

-149

5 30

0

Capsaicin 1.6 mg/paw

******

***

DI50= 234 (161339) mmol/Kg

Imax: 534%

B

Hiperalgesia Térmica Induzida por Capsaicina em

camundongos

Dr. Fernando Cunha

(Profº Titular)

LM, Lima©

Antigen-induced arthritis (AIA)

* pre-treatment day 0

1th IM s.c. day 7

2nd IM s.c.

day 21

Challenge i.a.

mBSA + CFA

5h after challenge:

measurement of mechanical hypernociception and cell migration

mBSA + CFA

LM, Lima©

Antigen-induced arthritis (AIA)

LM, Lima©

Partial Ligation of Sciatic Nerve (PLSN)

7h after surgery:

measurement of

mechanical hypernociception

LM, Lima©

CONSIDERAÇÕES FINAISCONSIDERAÇÕES FINAIS

Mestrado

1995-1997

Doutorado

1997-2001

1. LIMA, L. M et al. (1999) Journal

of the Brazilian Chemical Society

(1999) 10, 421-428.

2. LIMA, L. M et al. Pharmacy and

Pharmacology Communications

(1999) 5, 673-678.

1. LIMA, L. M et al. European Journal of

Pharmaceutical Sciences (1999), 73, 281-

292.

2. LIMA, L. M et al. European Journal of

Medicinal Chemistry (2000) 35, 187-203.

3. LIMA, L. M et al. Synthetic Communications

(2000) 35, 3291-3306.

4. LIMA, L. M et al. Química Nova (2001)

24, 683-688.

5. LIMA, L. M et al. Química Nova (2002)

25, 825-834.

6. LIMA, L. M et al. Bioorganic & Medicinal

Chemistry Letters (2002) 12, 1533-1535.

7. LIMA, L. M et al. Bioorganic & Medicinal

Chemistry (2002) 10, 3067-3073.

8. ROCCO, P R M et al. The European

Respiratory Journal (2003) 21, 1-8.

9. BEVILAQUA, J V et al. Biochemical

Engineering Journal (2004) 21, 103-110.

10. LIMA, L. M et al. Current Medicinal

Chemistry. Anti-inflammatory & Anti-allergy

Agents (2004), 3, 09-18.

2002 Menção Honrosa (concurso de melhor Tese

de Doutorado), Instituto de Química da Universidade Federal do

Rio de Janeiro

Patente

1. Uso do composto lassbio 596

e congêneres, e composições

farmacêuticas contendo os

mesmos, no tratamento da

síndrome do desconforto

respiratório agudo. 2002,

Brasil. Patente: Privilégio de

Inovação. Número do

registro: PI0208767, data de

depósito: 08/10/2002

LM, Lima©

CONSIDERAÇÕES FINAISCONSIDERAÇÕES FINAIS

LM, Lima©

Dr. Fernando Cunha

(Profº Titular)

Dra Vera L G Koatz

(Professora IBQM)

In Memoriam Dra. Roberta Olmo

(Fiocruz)

Dr. Laurent E. Dardenne

(LNCC)

LM, Lima©

Instituto Nacional de Ciência & Tecnologia

de Fármacos e Medicamentos www.inct-nofar.ccs.ufrj.br

“Quanto menos alguém sabe sobre

o passado e o presente, mais

inseguro será o seu juízo sobre o

futuro”. (Sigmund Freud)

LM, Lima©

Estudos de Metabolismo PlasmáticoEstudos de Metabolismo Plasmático

Tabela– Tempo de meia vida plasmática de LASSBio-998

(21) e análogos (25-28) calculados a partir da expressão

t1/2 = 0,693/a, sendo a a inclinação da reta do logaritmo neperiano da concentração da amostra vs. o tempo de incubação

LM, Lima©

Estudos de Metabolismo Estudos de Metabolismo MicrossomalMicrossomal

Fígado Preparação do fígado

•Centrifugação a 900 g, 30 min, 4 °C •Centrifugação a 10.000 g, 1 h, 4 °C

Fração citosólica Fração microssomal

Quantificação de proteínas

Quantificação de proteínas

Conservação a -80° C por 6 meses

1 Cabrera, M. et. al. Toxicology Letters 2009, 190, 140-149. 2 Lavaggi, M. L. et.al. Chemical Research in Toxicology 2008, 21, 1900-1906.

Fração S9*

Ultracentrifugação 100.000 g, 1 h, 4 °C

Enzimas de Fase I e II

Enzimas de

Fase I

CYP 450

FMO CES

* Fração S9: fração submitocondrial

LM, Lima©

Estudos de Metabolismo Estudos de Metabolismo MicrossomalMicrossomal

LM, Lima©

Estudos de Metabolismo Estudos de Metabolismo MicrossomalMicrossomal

Lopes, R. O. (2010) Dissertação de Mestrado, IQ-UFRJ