Métodos de Contagem Bacteriana
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MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANA BACTERIANA BACTERIANA BACTERIANA BACTERIANA BACTERIANA BACTERIANA BACTERIANA 1 Métodos Turbidimétricos Totais Contagens Microscópicas Métodos de Contagem Bacteriana Viáveis Contagem em Placa Determinação do NMP Atividade Metabólica Contagem em Membrana Filtrante
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Métodos TurbidimétricosTotais
Contagens Microscópicas
Métodos de Contagem Bacteriana
ViáveisContagem em Placa
Determinação do NMP
Atividade Metabólica
Contagem em Membrana Filtrante
MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM MÉTODOS DE CONTAGEM BACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANABACTERIANA 2
MÉTODOS DE CONTAGEM MICROSCÓPICA
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MÉTODOS DE CONTAGEM MICROSCÓPICA
Principais Características:
� Contam células vivas e mortas;
� Mais adequado para amostras liquidas;
� A amostra deve possuir pouco material particulado;
� População deve ser elevada;
� Rápido e com resultados imediatos;
� Resultados podem bastante ser influenciados pelo executor;
� Mais fácil para culturas mono-microbianas e de células isoladas;
� Não é adequado para bactérias móveis;
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MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS
� A turvação da amostra bacteriana é determinada espectrofotometricamente;
Diretos
Métodos Turbidimétricos
Por Comparação
� A turvação da amostra bacteriana é comparada visualmente com padrões;
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MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS
Quanto menor a quantidade de bactérias maior a transmitância
menor a absorbância
Quanto maior a quantidade de bactérias menor a transmitância
maior a absorbância
LeituraCurva Padrão
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MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS
DOCurva Padrão
Contagem de Bactérias / mL
Leitura
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Principais Características:
� Contam células vivas e mortas;
� É um método de contagem indireto;
MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - DIRETOS
� Mais adequado para amostras liquidas;
� A amostra “não deve” possuir particulado;
� População deve ser elevada;
� Rápido e com resultados imediatos;
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MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - POR COMPARAÇÃO
Tubo da Escala
Quantidade de Bactérias x 106 bactérias /mL
0,5 150 (1,5 x 108)
1 300 (3,0 x 108)
2 600 (6,0 x 108)
Escala de McFarland
3 900 (9,0 x 108)
4 1200 (1,2 x 109)
5 1500 (1,5 x 109)
6 1800 (1,8 x 109)
7 2100 (2,1 x 109)
8 2400 (2,4 x 109)
9 2700 (2,7 x 109)
10 3000 (3,0 x 109)
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Principais Características:
� Contam células vivas e mortas;
� É um método de contagem indireto;
MÉTODOS DE CONTAGEM TURBIDIMÉTRICOS - POR COMPARAÇÃO
� Mais adequado para amostras liquidas;
� A amostra “não deve” possuir particulado;
� População deve ser elevada;
� Rápido e com resultados imediatos;
� Resultados dependem do operador;
� Resultados imprecisos;
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MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE METABÓLICA
Vitamina + Cultura = Crescimento BiomassaBiomassa
Carboidrato + Cultura = Fermentação Dosagem de ÁcidosDosagem de Ácidos
Fonte de Energia + Cultura = Bioluminescência Dosagem da Luz EmitidaDosagem da Luz Emitida
� A população é determinada a partir da Atividade Metabólica das células;
Principais Características:
� É um método de contagem indireto;
� Aplicações bastante específicas;
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10 ml
MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL
Tabela específica para os volumes utilizados
Resultado Negativo
Resultado Positivo
1 ml
0,1 ml
NMP = 110 bactérias / 100 ml
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MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL
Principais Características:
� Contam células vivas;
� É um método de contagem estatístico;� É um método de contagem estatístico;
� É um método TRABALHOSO ;
� É um método DISPENDIOSO;
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CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA
Diluição Seriada na Razão 1/10
Contagem de Colônias
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CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA
Técnica de Espalhamento em Superfície
(“Spead-Plate”)
Técnica de Espalhamento em
Profundidade (“Pour-Plate”)
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CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA
Técnica de Espalhamento em Superfície
(“Spead-Plate”)
� Possibilita o uso de “Meios Opacos”;
� Não existe choque térmico “devido” ao meio de cultura ;
� Inóculo de 0,1 a 0,5 mL;
Técnica de Espalhamento em
Profundidade (“Pour-Plate”)
� Não possibilita o uso de “Meios Opacos”;
� Existe choque térmico “na adição” do meio de cultura;
� Inóculo de 1 a 5 mL;
� Detecção difícil de colônias no interio do meio de cultura
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CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA
Contagem de Colônias
Inverso da Diluição da Amostra
X
X
Determinação da Contagem de Unidades Formadoras de ColôniasUnidades Formadoras de Colônias
na Amostra
Fator de Correção de Volume do Inóculo
X
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CONTAGEM DE VIÁVEIS EM MEMBRANA FILTRANTE
Permite a Análise de “Grandes” Volumes
Meio de Cultura
