MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

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Page 1: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

MÉTODOS DE ESTUDO

DAS CÉLULAS

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Page 3: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

TEORIA CELULAR: versão moderna

1) as células são as unidades morfológicas e fisiológicas de todos os organismos vivos;

2) as propriedades de um dado organismo dependem daquelas de cada uma de suas células;

3) as células originam-se somente de outras células, das quais herdam suas características;

4) a menor unidade da vida é a célula.

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DIVERSIDADE DAS CÉLULAS

VIRÚS

EUCARIONTES

PROCARIONTES

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���� PARASITAS INTRACELULARES OBRIGATÓRIOS

���� DNA ou RNA

���� Vírus animais, vírus vegetais e bacteriófagos

���� Parte central (informação genética), parte periférica (proteínas), invólucro lipoprotéico

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Bactérias

� caracterizam-se pela pobreza de membranas

� possuem: -membrana plasmática

-parede extracelular (proteção mecânica)

-citoplasma não compartimentalizado(polirribossomos)

-nucleóides

-não existe citoesqueleto

Ex.: Escherichia coli

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Células Animais e Vegetais

� caracterizam-se pela riqueza de membranas

� núcleo e citoplasma bem delimitados por membranas (trânsito constante de moléculas)

� formam compartimentos internos que separam os diversos processosmetabólicos

� possuem citoesqueleto

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Tipos de Microscópios

Microscopia de LuzConvencionalContraste de FaseContraste InterferencialCampo EscuroPolarizaçãoFluorescênciaConfocal a Laser

Microscopia eletrônicaTransmissãoAlta VoltagemVarredura

Outros tipos de microscópioTunelamento QuânticoForça AtômicaMicroespectrofotometria

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Com coloração fluorescente

Cores deinterferência

Diferenças deíndices de refração

Campoescuro

Sem coloração

Com coloração

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Componentes de um microscópio

Componentes ópticos:Fonte de luzSistema de lentes (condensador, objetiva, ocular)

Componentes Mecânicos:Base ou péCanhãoRevólverPlatinaParafusos macro e micrométricosCharriot

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Componentes de um microscópio

1. Base ou pé2. Fonte de luz3. Parafusos de foco4. Braço ou haste5. Condensador6. Platina7. Charriot8. Objetivas9. Revólver10. Canhão11. Ocular

Page 12: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

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Os modelos microscópicos variam na forma e no desenho

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PREPARO DAS AMOSTRAS...

�Fixação = estabilização das estruturas celulares e intercelulares.

Fixação Química

1)-Fixadores químicos coagulantes: podem desnaturar as

proteínas em graus variáveis conforme sua estrutura molecular.

Ex: etanol.

2)-Fixadores químicos não coagulantes: são os aldeídos reativos,

como formaldeído e glutaraldeído, que formam ligações

covalentes com os grupos de aa livres de proteínas, produzindo

ligações cruzadas com as moléculas de proteínas adjacentes.

Page 14: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

INCLUSÃO EM PARAFINA

1) Fixação

2) Desidratação (álcool 70%, 80%,

95% e 100%)

3) Diafanização em álcool 100% +

xilol

4) Passagem em xilol puro

5) Dois banhos de parafina (estufa)

6) Inclusão em parafina em moldes

apropriados

Processamento convencional

INCLUSÃO EM HISTORRESINA

1) Fixação

2) Desidratação (álcool 70% e 95%)

3) Embebição em mistura de resina +

álcool 95%

4) Embebição em resina com

catalizador

5) Inclusão em resina

6) Polimerização em estufa

7) Colagem dos blocos em suporte

PREPARO DAS AMOSTRAS...

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SEQUÊNCIA GERAL DE COLETA E PREPARAÇÃO

Page 16: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

Existe pouco conteúdo dentro das

células que impedem a passagem da

luz, assim células fixadas e

seccionadas vistas ao microscópio

óptico são transparentes, com exceção

das células vegetais -cloroplastos!!!

Uma maneira de tornar as células

visíveis é a utilização de corantes!!!

Corantes = grupos cromofóricos

(responsáveis pela cor).

COLORAÇÃO DAS LÂMINAS PERMANENTES

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Hematoxilina e EosinaCORANTE BÁSICO (grupamento cromofórico é catiônico +) � afinidade por elementos ácidos

dentro das células – moléculas basófilas)

CORANTE ÁCIDO (grupamento cromofórico é aniônico -) � afinidade por elementos básicos

dentro das células – moléculas acidófilas)

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TECIDO EPITELIAL CORADO POR DIFERENTES CORANTES

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Microscopia de Fluorescência

TÈCNICAS ESPECIAIS

Page 20: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

Aplicações da Microscopia de Fluorescência

TÈCNICAS ESPECIAIS

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Aplicações da Microscopia de Contraste de Fase

1. Análise do material sem coloração prévia

2. Culturas de células3. Exames parasitológicos4. Esfregaços e Raspagens

de mucosas5. Sangue6. Protozoários de

ambientes aquáticos

TÈCNICAS ESPECIAIS

Page 22: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

EFEITO DO PLANO DE PLANO DE CORTE NA MORFOLOGIA CELULAR

Page 23: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

EFEITO DO PLANO DE PLANO DE CORTE NA MORFOLOGIA TECIDUAL

Page 24: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

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MICROSCOPIA ELETRÔNICA

Page 25: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

Microscopia de Luz e Microscopia Eletrônica

Questões importantes: Ampliação e Resolução

Page 26: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

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Page 27: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO

Page 28: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

BACTÉRIA E VÍRUS EM MET

Page 29: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA

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Page 38: MÉTODOS DE ESTUDO DAS CÉLULAS

Centro de Microscopia Eletrônica

UNESP - Botucatu

MEV MET

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FIM