NITROSILAÇÃO : UM NOVO MECANISMO NITROSILAÇÃO : UM NOVO MECANISMO

DE RESISTÊNCIA A INSULINA.DE RESISTÊNCIA A INSULINA.

Departamento de Clinica MédicaDepartamento de Clinica MédicaFCM - UNICAMPFCM - UNICAMP

Aluno : Marco Antonio de Carvalho FilhoAluno : Marco Antonio de Carvalho Filho

Orientador : Mário José Abdalla SaadOrientador : Mário José Abdalla Saad

• Obesidade abdominal: CA > 102 cm-homem e > 88 Obesidade abdominal: CA > 102 cm-homem e > 88 mulhermulher • Hipertrigliceridemia: Hipertrigliceridemia: >> 150 mg/dL 150 mg/dL

• HDL < 40 mg/dL-homem e < 50 mg/dL-mulherHDL < 40 mg/dL-homem e < 50 mg/dL-mulher

• PA PA >> 130 / 85 mm Hg 130 / 85 mm Hg

• Glicose plasmática de jejum Glicose plasmática de jejum >> 110 mg/dL 110 mg/dL

SÍNDROME METABÓLICASÍNDROME METABÓLICAPRESENÇA DE 3 OU MAISDOS CRITÉRIOS ABAIXO

S-SS-SS-SS-S

S - SS - S

LysLys

PPPPPP

GlicoseGlicose

InsulinaInsulina

Captação de glicose (músculo e adipócitos)Captação de glicose (músculo e adipócitos)

Captação de aminoácidos (todas as células)Captação de aminoácidos (todas as células)

LipogêneseLipogênese

Síntese de glicogênio (músculo e fígado)Síntese de glicogênio (músculo e fígado)

Diferenciação pré-adipócito adipócitoDiferenciação pré-adipócito adipócito

ApoptoseApoptose

Síntese protéica (todas as células)Síntese protéica (todas as células)

Expressão gênica (todas as células)Expressão gênica (todas as células)

Síntese de DNA (todas as células)Síntese de DNA (todas as células)

++

+/+/--

++++++

++

++

++

Efeito anti-lipóliseEfeito anti-lipólise----

GLUT 4GLUT 4

SINT. DE GLICOGÊNIOSINT. DE GLICOGÊNIO

LIPOGÊNESELIPOGÊNESE

TRANSPORTE TRANSPORTE

GLICOSEGLICOSE

GlicoseGlicose

GlicoseGlicose

GLUT 4GLUT 4

S - SS - Ssubunidade subunidade

S-SS-S

subunidade subunidade POPO44

ATPATP

insulinainsulina

MECANISMO MOLECULAR DE AÇÃO DA INSULINAMECANISMO MOLECULAR DE AÇÃO DA INSULINA

PI 3PI 3quinasequinase

S-SS-S

AKTAKT

PPPPPP

PP

IRS-1/2IRS-1/2

POPO44POPO44

POPO44 POPO44

POPO44

Escassez de alimentosEscassez de alimentos

Doenças infecciosasDoenças infecciosas

ERA PRÉ-AGRICULTURAERA PRÉ-AGRICULTURA

México – 1519: 22.000.000 de nativosMéxico – 1519: 22.000.000 de nativos

1600: 1.000.000 de nativos1600: 1.000.000 de nativos

Peru – 1520: 9.000.000 de nativosPeru – 1520: 9.000.000 de nativos

1620: 600.000 de nativos1620: 600.000 de nativos

Evolução da População Indígena na América Evolução da População Indígena na América nos Séculos XVI e XVIInos Séculos XVI e XVII

Índios Pima - México

Índios Pima: EUA-Arizona

NITROSILAÇÃONITROSILAÇÃO

NO

PROTEÍNA PROTEÍNANITROSILAÇÃO

( CISTEÍNA )

SNO

SNO

MODULAÇÃO +

MODULAÇÃO –

L - ARGININA

L - CITRULINA

NO - SINTASE

NIROSOTIOIS GSNO

OBJETIVOS OBJETIVOS

Investigar os efeitos de drogas doadoras de NO (GSNO) no metabolismo de glicose, e S-nitrosilação de proteínas da via de sinalização da insulina em músculo isolado e tecido muscular de ratos intactos.Investigar se a iNOS , induzida em diversas situações de resistência a insulina, está envolvida com S-nitrosilação de proteínas da via de sinalização de insulina e com resistência a ação celular deste hormônio.

MATERIAIS E MÉTODOSMATERIAIS E MÉTODOS

-Imunoblotting

-Biotinilação de nitrosocisteínas

RESULTADOS – MÚSCULO ISOLADORESULTADOS – MÚSCULO ISOLADO

CAPTAÇÃO DE GLICOSE

-

INSULINA - + - - - -+ + + +GSNO

SÍNTESE DE GLICOGÊNIO

-

INSULINA - + - - - -+ + + +GSNO

S-NITROSILAÇÃO - IR

C GSNO

ATIVIDADE TIROSINA-QUINASE - IR

CONTROLE GSNO

- A I I/A - A I I/A

SINALIZAÇÃO

INSULINA - + - +

CONTROLE GSNO

IR

IRS-1

pAkt

RESULTADOS – TECIDO MUSCULARRESULTADOS – TECIDO MUSCULAR

CONTROLE GSNO

kITTS-NITROSILAÇÃO

C GSNO

IR

ATIVIDADE TIROSINA-QUINASE - IR

CONTROLE GSNO

- A I I/A - A I I/A

IRS-1

QUANTIDADE DE PROTEÍNA – IRS-1

C GSNO C GSNO

Akt

C GSNO

ATIVIDADE QUINASE - Akt

INSULINA - + - +

CONTROLE GSNO

SINALIZAÇÃO

INSULINA - + - +

CONTROLE GSNO

IR

IRS-1

pAkt

RESULTADOS – DIETA HIPERLIPÍDICARESULTADOS – DIETA HIPERLIPÍDICA

CONTROLE DH

kITT

iNOS

C DH

IRS-1

C DH

S-NITROSILAÇÃO

C DH

IR

SINALIZAÇÃO

C DH

IR

INSULINA + +

IRS-1

C DH

IRS-1

C DH

INSULINA + +

Akt

C DH

pAkt

C DH

INSULINA + +

RESULTADOS – ob/obRESULTADOS – ob/ob

kITT

C ob/ob ob/obASO

iNOS

C ob/ob ob/obASO

IRS-1

C ob/ob ob/obASO

S-NITROSILAÇÃO SINALIZAÇÃO

IR IR

INSULINA + + +

C ob/ob ob/obASO

C ob/ob ob/obASO

IRS-1 IRS-1

INSULINA + + +

C ob/ob ob/obASO

C ob/ob ob/obASO

Akt pAkt

INSULINA + + +

C ob/ob ob/obASO

C ob/ob ob/obASO

RESULTADOS – iNOSRESULTADOS – iNOS-/- -/- X LPSX LPSkITT

C LPS iNOS-/- iNOS-/-

LPS

iNOS

C LPS iNOS-/- iNOS-/-

LPS

IRS-1

C LPS iNOS-/- iNOS-/-

LPS

S-NITROSILAÇÃO SINALIZAÇÃO

IR IR

C LPS iNOS-/- iNOS-/-

LPSINSULINA +

C

+

LPS

+

iNOS-/- iNOS-/-

LPS+

IRS-1 IRS-1

INSULINA +

C

+

LPS

+

iNOS-/- iNOS-/-

LPS+

C LPS iNOS-/- iNOS-/-

LPS

Akt pAkt

INSULINA +

C

+

LPS

+

iNOS-/- iNOS-/-

LPS+

C LPS iNOS-/- iNOS-/-

LPS

RESULTADOS – DIETA HIPERLIPÍDICA / RESULTADOS – DIETA HIPERLIPÍDICA / ROSIGLITAZONAROSIGLITAZONA

kITT

C DH ROSI

iNOS

C DH ROSI

IRS-1

C DH ROSI

S-NITROSILAÇÃO SINALIZAÇÃO

IR IR

INSULINA + + +

C DH ROSIC DH ROSI

IRS-1 IRS-1

INSULINA + + +

C DH ROSIC DH ROSI

Akt pAkt

INSULINA + + +

C DH ROSIC DH ROSI

CONCLUSÃOCONCLUSÃO

IRS-1/2IRS-1/2YMXMYMXM

S-SS-SS-SS-S

S - SS - S

insulinainsulina

NO

L - ARGININA

L - CITRULINA

NO - SINTASE

SNO

SNO

RESISTÊNCIA A INSULINA

AktAktSNO