PUBERDADE E MATURIDADE SEXUAL DE OVINOS …
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MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ZOOTECNIA CLÊRTON MAGNO ROCHA SANTANA PEREIRA PUBERDADE E MATURIDADE SEXUAL DE OVINOS PORTADORES DA GENÉTICA FecG E SÃO CRISTOVÃO – SE 2018
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MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE
PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ZOOTECNIA
CLÊRTON MAGNO ROCHA SANTANA PEREIRA
PUBERDADE E MATURIDADE SEXUAL DE OVINOS
PORTADORES DA GENÉTICA FecGE
SÃO CRISTOVÃO – SE
2018
MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE
PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ZOOTECNIA
CLÊRTON MAGNO ROCHA SANTANA PEREIRA
PUBERDADE E MATURIDADE SEXUAL DE OVINOS
PORTADORES DA GENÉTICA FecGE
Dissertação apresentada à
Universidade Federal de Sergipe como
parte das exigências para obtenção do
título de Mestre em Zootecnia.
Orientador
Dsc. Hymerson Costa Azevedo
SÃO CRISTOVÃO – SE
2018
FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA CENTRAL UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE
P436p
Pereira, Clêrton Magno Rocha Santana. Puberdade e maturidade sexual de ovinos portadores da genética
FecGE / Clêrton Magno Rocha Santana Pereira; orientador Hymerson Costa Azevedo. – São Cristóvão, 2018.
56 f.: il.
Dissertação (Mestrado em Zootecnia) – Universidade Federal de Sergipe, 2018.
1. Ovino - Reprodução. 2. Variação (Biologia). 3. Polimorfismo
(Zoologia). 4. Sêmen. I. Azevedo, Hymerson Costa, orient. II. Título.
CDU 636.082
Aos meus pais, irmão e esposa por todo apoio, amor e dedicação.
“Julgue seu sucesso pelas
coisas que você teve que
renunciar para conseguir.”
Dalai Lama
AGRADECIMENTOS
À Deus, por me guiar, iluminar e me dar tranquilidade para seguir em frente com os
meus objetivos e não desanimar com as dificuldades.
Aos meus pais Ailton e Valdémia por terem me proporcionado educação e estímulo
para alcançar todos os meus objetivos.
À minha esposa Jailde, amiga, companheira, sempre torcendo, apoiando e estimulando a
avançar em todas as situações.
Aos meus irmãos Camila e Caio, onde sempre encontro um ombro amigo parra
desabafar, estimulando e encorajando em todos os momentos.
À meu orientador Hymerson Costa Azevedo, pela orientação, confiança e ensinamento,
com certeza fizeram a diferença para o meu amadurecimento.
Aos professores Valdir Ribeiro Junior, Edivaldo Rosas dos Santos Junior, Samuel Paiva,
Alexandre Caetano, e todos aqueles que contribuíram para a execução deste trabalho.
A toda equipe da UFS Sertão representada pelo professor Jodnes Sobreira, que sempre
me apoiaram e incentivaram.
À Maiana Silva Chaves, grande amiga, companheira de todas as horas, irmã que a vida
me proporcionou conhecer, com certeza faz parte desta conquista, meu muito obrigado.
Aos amigos da UFS Sertão Luiz Henrique dos Santos Gomes, Rafaela Figueiredo
Fontes e Thatiana Santana Santos, palavras certas nos mmentos certos fazem toda a
diferença, obrigado por todo o apoio.
Aos colegas e equipe LABRA, Claydson Eufrásio, Mayara Barreto, Davi Oliveira, Islan
Dias e Michele Silva, pela colaboração.
À todos os professores que contribuíram para minha formação.
À toda equipe do campo experimental Pedro Arle, por toda colaboração, dedicação e
disposição.
Ao Luiz Carlos Soares Santos pelo convívio e amizade nestes 2 anos de convivio
sempre solicito e prestativo
À Embrapa Tabuleiros Costeiros, pela disponibilização de todo recurso, estrutura e
animais necessários a realização do experimento.
A Universidade Federal de Sergipe pelo incentivo a qualificação e ao PROZOOTEC
pela oferta e oportunidade do curso.
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico – Brasil (CNPq),
da Fundação de Apoio à Pesquisa e a Inovação Tecnológica do Estado de Sergipe
(Fapitec/SE) - Brasil, e da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível
Superior - Brasil (CAPES - Código 001) pelo apoio financeiro.
À todos que fizeram presentes nos momentos de alegrias e dificuldades.
MUITO OBRIGADO!!
SUMÁRIO
RESUMO .......................................................................................................................... i
ABSTRACT .................................................................................................................... ii
1. INTRODUÇÃO ............................................................................................................ 1
2. REFERENCIAL TEÓRICO ......................................................................................... 2
2.1. Desenvolvimento sexual na produção animal ............................................... 2
2.2. Desenvolvimento sexual no macho ............................................................... 2
2.3. Determinação da puberdade e maturidade sexual
.....................................................5
3- REFERÊNCIAS ........................................................................................................... 7
ARTIGO. Puberdade e maturidade sexual de ovinos portadores da genética FecGE .... 10
INTRODUÇÃO .............................................................................................................. 11
MATERIAL E MÉTODOS ............................................................................................ 12
RESULTADOS .............................................................................................................. 15
DISCUSSÃO .................................................................................................................. 18
CONCLUSÃO ................................................................................................................ 22
AGRADECIMENTOS ................................................................................................... 22
REFERÊNCIAS ............................................................................................................. 23
ANEXO .......................................................................................................................... 26
Pagina
i
RESUMO
PEREIRA, Clêrton Magno Rocha Santana. Puberdade e maturidade sexual de ovinos
portadores da genética FecGE. Sergipe: UFS, 2018. 56p. (Dissertação – Mestrado em
Zootecnia).
Identificada a partir de ovelhas Santa Inês com histórico de partos múltiplos, a mutação FecGE
do gene do fator de crescimento e diferenciação -9 (GDF-9), provoca um incremento na taxa
de ovulação e na prolificidade. Contudo, associações do GDF-9 com a fisiologia reprodutiva
dos machos não estão totalmente elucidadas e não existem estudos que relacionam este gene e
tão pouco a FecGE com o desenvolvimento reprodutivo de ovinos, que controlado por
mecanismos hormonais e influenciado por fatores genéticos, sofre interferência de fatores
ambientais e nutricionais. A caracterização da puberdade e maturidade sexual de carneiros
FecGE, além de contribuir para o conhecimento dos efeitos desta mutação sobre a fisiologia
reprodutiva e desenvolvimento sexual masculino, poderá habilitar o uso destes animais na
seleção e melhoramento genético de ovinos. Objetivou-se neste trabalho estudar e avaliar os
efeitos da mutação FecGE sobre a fisiologia reprodutiva de cordeiros Santa Inês com foco no
seu desenvolvimento sexual. Foram utilizados 36 cordeiros genotipados para a FecGE e
distribuídos de acordo com seu genótipo: homozigoto não mutante e, heterozigoto e
homozigoto mutantes. A cada 15 dias durante 11 meses, os cordeiros foram avaliados
andrologicamente (circunferência escrotal; volume seminal; concentração, motilidade e
viabilidade espermáticas e; vigor e defeitos espermáticos maiores, menores e totais) para
verificar a influência da mutação sobre a fisiologia e a idade à puberdade e à maturidade sexual.
Os dados foram avaliados através da análise de covariância com medidas repetidas no tempo,
considerando o peso ao nascimento como covariável. Não foram observadas diferenças entre
os genótipos. A mutação FecGE não influenciou os parâmetros ao longo do período
experimental e as idades à puberdade (187,87 ± 6,54 dias) e à maturidade sexual (230,31 ±
9,87dias). Este trabalho permitiu que fosse verificado pela primeira vez os efeitos da FecGE
sobre a fisiologia reprodutiva dos machos concluindo-se que esta mutação não tem influência
sobre os parâmetros andrológicos, seminais e espermáticos assim como sobre as idades à
puberdade e à maturidade sexual de cordeiros Santa Inês que podem ser utilizados como
reprodutores disseminadores desta genética prolifica.
Palavras Chave: GDF-9, precocidade, mutação, polimorfismo, Santa Inês, sêmen
ii
ABSTRACT
PEREIRA, Clêrton Magno Rocha Santana. Puberty and sexual maturity of lambs with
FecGE mutation. Sergipe: UFS, 2018. 56p. (Dissertation – Master in Zootecnia).
Identified on Santa Ines sheep breed with history of multiple parturitions, the mutation FecGE
of the growth and diferentiation factor -9 gene (GDF-9), causes an increase in the ovulation rate
and in prolificacy. Although, associations of GDF-9 with the reproductive physiology of males
are not totally clarified and there are no studies which relate this gene and neither FecGE with
the reproductive development of sheep, controled by hormonal mechanisms, influenced by
genetic factores and that suffers interference from environmental and nutritional factors. The
sexual puberty and maturity characterization of FecGE lambs, besides contribuing for the
knowlodge of this mutation effects over reprodcutive physiology and male sexual development,
may enable the usage of this animals on the selection and genetic improvement of sheep. The
main objective of this work was to study and measure the effects of the FecGE mutation on the
reproductive physiology of Santa Ines lambs, focusing on its sexual development. Thirty-six
lambs genotyped for FecGE were used and distributed according to their genotype: homozygous
non mutante and, heterozygous and homozygous mutants. Every 15 days through 11 months,
the lambs were evaluated andrologically (scrotal circumference; seminal volume; sperm
concentration, motility and viability; spermatic vigor and sperm with major, minor and total
defects) to verify the influence of this mutation over physiology and puberty and sexual
maturity ages. The data were submitted to covariance analysis with measures repeated in time,
considering the birth weigh as covariable. Differences between the genotypes were not
observed in this study. The FecGE mutation did not influence the parameters over the
experimental period and over the puberty (187,87 ± 6,54 days) and the sexual maturity (230,31
± 9,87 days) ages. This work allowed to be verified for the first time the effects of FecGE on
the males reproductive physiology , concluding that this mutations does not have influence on
andrological, seminal and spermatic parameters and neither on puberty and sexual maturity
ages of Santa Inês lambs, whom can be used as breeding disseminators of this prolific genetics.
Keywords: GDF-9, precocity, mutation, polymorphism, Santa Ines, semen
1
1. INTRODUÇÃO
A ovinocultura tem se destacado nas diversas regiões brasileiras por ser uma importante
fonte de renda para os produtores. Nesta atividade a eficiência reprodutiva é um fator que pode
potencializar a lucratividade e o conhecimento da influência dos fatores genéticos e ambientais
é um passo importante para melhorar a produtividade da espécie ovina.
O início da atividade sexual, tanto em machos quanto em fêmeas, é de grande
importância para o sistema de produção e está diretamente ligado à longevidade reprodutiva
dos animais. Entretanto, machos exercem maior pressão de seleção sobre os rebanhos e com
isso aceleram o melhoramento genético principalmente por deixarem um maior número de
descendentes do que as fêmeas.
A introdução de bioferramentas nos programas de melhoramento, a exemplo dos
marcadores moleculares, torna possível a identificação de genes ligados a fenótipos
reprodutivos, incrementando o ganho genético dos animais (McMANUS, PAIVA e ARAUJO,
2010). Exemplo disso é o gene relacionado com a tradução do fator de Diferenciação e
Crescimento-9 (GDF-9) que têm sido associados a características de interesse na produção.
O fator GDF-9 codificado pelo gene de mesmo nome é sintetizado em fêmeas pelo
oócito (OTSUKA et al., 2000) e está presente no fluido folicular agindo na sua diferenciação e
maturação (SU et al., 2004) e, em machos, é sintetizado nas células germinativas do epitélio
seminífero regulando o desenvolvimento testicular e a espermatogênese (NICHOLLS et al.,
2009). Uma alteração no gene GDF-9, representada pela mutação Fecundity Gene - EMBRAPA
(FecGE), é responsável pelo incremento de 82% na taxa de ovulação e 58% na taxa de
prolificidade em ovelhas Santa Inês homozigotas (SILVA et al., 2011). Contudo, ainda não se
sabe os efeitos desta mutação sobre a reprodução dos machos ovinos, principalmente durante
seu desenvolvimento sexual.
A caracterização da puberdade e maturidade sexual de cordeiros Santa Inês portadores
da FecGE pode elucidar os efeitos desta mutação sobre a fisiologia dos machos e poderá
habilitar o uso destes animais na seleção e melhoramento genético de ovinos como
disseminadores de genética prolífica a fim de aumentar a produtividade e lucratividade dos
sistemas de produção de ovinos. Por conta disto, este trabalho teve como objetivo estudar e
avaliar os efeitos da mutação FecGE sobre a fisiologia reprodutiva de cordeiros Santa Inês com
foco no seu desenvolvimento sexual.
2
2. REFERENCIAL TEÓRICO
2.1 Desenvolvimento sexual na produção animal
O acompanhamento do desenvolvimento das características sexuais é de grande
importância para a produção pecuária, pois permite identificar, de forma precisa e antecipada,
animais aptos à reprodução, utilizando-os mais rapidamente e de forma racional como matrizes
e reprodutores, encurtando o intervalo entre gerações e possibilitando aumento do ganho
genético, da produtividade e da rentabilidade do produtor, refletindo na eficiência reprodutiva
do rebanho (ELER et al., 2010). A maior intensidade de seleção pode levar a um maior
progresso genético que contribui de forma rápida e eficiente para a disseminação de genes
ligados a características de interesse a exemplo daquelas relacionadas à reprodução
(CÂMARA, GUERRA e SILVA, 2015).
Entretanto, deve-se considerar que a eficiência reprodutiva sofre influência de fatores
ambientais e nutricionais como estação do ano e disponibilidade de alimento, os quais
interferem no ganho de peso e no desenvolvimento corporal e dos órgãos reprodutivos,
refletindo, por exemplo, na idade e qualidade seminal dos animais à puberdade (ALVES et al.,
2006). A capacidade reprodutiva dos machos é afetada por fatores climáticos, como
temperatura, umidade do ar e fotoperíodo. Em regiões de clima tropical, a alta temperatura
ambiental, observada no período seco, é fator limitante à eficiência reprodutiva, pois pode
interferir na termorregulação testicular, influenciando negativamente a espermatogênese e,
consequentemente, a qualidade do sêmen, principalmente a motilidade, vigor, concentração e
morfologia espermáticas (CHEMINEAU et al., 1991; MOREIRA, MOURA e ARAUJO,
2001).
Além de ser influenciado por fatores ambientais, o desenvolvimento reprodutivo pode
sofrer influência de fatores genéticos diretos ou mesmo indiretos, a exemplo da mutação
prolifica FecGE., que apresenta como fenótipo um aumento na frequência de gestações
múltiplas no rebanho. Animais que nascem de gestações múltiplas normalmente têm taxas de
desenvolvimento corporal inferiores, apresentando menores pesos ao nascimento e à desmama
(MEXIA et al., 2004), com menor desenvolvimento dos órgãos reprodutivos prorrogando a
idade à puberdade (SOUZA et al., 2010; ALVES et al., 2006).
2.2 Desenvolvimento sexual no macho
3
Na fase pré-natal os testículos são formados por células mesenquimais intersticiais as
quais irão se diferenciar em células de Leydig, que produzirão testosterona. Também são
formados por células indiferenciadas de suporte e sustentação, que se diferenciam em células
de Sertoli responsáveis pela produção de espermatozoide que transmitem os genes para a prole
(EILER et al., 2012).
As células de Sertoli primitivas, através de mediadores químicos, estimulam a secreção
hipotalâmica do hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH), que atua na neuro-hipófise
modulando a secreção de hormônio folículo estimulante (FSH) pela adeno-hipófise que irá
regular a proliferação, multiplicação e diferenciação das células de Sertoli e a espermatogênese,
e produzem hormônio anti-Müleriano, apenas nas fases pré-natal e pré-púbere, responsável pela
regressão dos ductos de Muller que formariam a tuba uterina, útero e parte da vagina (FRANÇA
e GARCIA, 2005).
Ao decorrer do desenvolvimento fetal, a testosterona, produzida pelas células de Leydig,
ultrapassa a barreira hematoencefálica e, por meio do processo de aromatização, é metabolizada
em estradiol estimulando a produção de hormônio liberador de gonadotrofina (GnRH), que irá
provocar um aumento da frequência e dos pulsos de hormônio luteinizante (LH) pela hipófise,
estimulando a produção de testosterona e por consequência, o desenvolvimento das células
testiculares (ALVES et al., 2006; HAFEZ, JAINUDEEN e ROSNINA, 2004).
Próximo ao nascimento ocorre uma redução da atividade da aromatase e um aumento
gradual na secreção de testosterona pelos testículos que, estimula o desenvolvimento das células
de Leydig, provoca elevação da frequência e dos pulsos de GnRH e diminuição da resposta dos
receptores de testosterona na neuro-hipófise, provocando aumento na liberação de (LH) pela
adeno-hipófise (HAFEZ, JAINUDEEN e ROSNINA, 2009; ERSKINE, TOBET e BAUM,
1988).
Com a aproximação da puberdade, ocorre um aumento brusco na secreção de LH, o qual
estimula a secreção de testosterona pelas células de Leydig responsável, nesta fase, também
pelo desenvolvimento das características sexuais secundárias e pela regulação da
espermatogênese (HAFEZ, JAINUDEEN, e ROSNINA, 2009).
Na pré-puberdade ocorrem modificações morfológicas e funcionais das células de
Sertoli sob a influência dos hormônios hipofisários, principalmente o FSH, que acarretam na
evolução de um estado imaturo e proliferativo destas células no período pré-natal, para uma
forma madura e não proliferativa antes de alcançada a puberdade (SHARPE et al., 2003). Após
os períodos de proliferação e maturação, as células de Sertoli abrigam um número fixo de
4
células germinativas e que possui relação com a capacidade reprodutiva, o tamanho testicular e
com a espermatogênese no animal adulto (HAFEZ, JAINUDEEN e ROSNINA, 2009).
A espermatogênese é um processo contínuo, altamente organizado e sincronizado,
regulado por processos de retroalimentação, no qual as células germinativas, a partir de
sucessivas transformações no interior dos túbulos seminíferos, se desenvolvem e dão origem
aos espermatozoides. Com duração aproximada de 60 dias em carneiros (EILER et al., 2012),
a espermatogênese pode ser dividida em três fases distintas: fase mitótica ou proliferativa,
meiótica e a fase de espermiogênese ou diferenciação (GARNER e HAFEZ, 2004; ELER et al.,
2010).
A espermatogênese durante a puberdade é marcada pela presença de um grande número
de anomalias espermáticas sem padrão definido relacionadas à imaturidade sexual. Nesse
período, são identificadas principalmente modificações morfológicas classificadas como
defeitos maiores, a exemplo do knobbed, pouch formation, gota citoplasmática proximal e
cauda fortemente dobrada ou enrolada na cabeça e defeitos menores como a gota citoplasmática
distal, espermatozoides com cabeça isolada, cauda dobrada, com inserção retro abaxial ou
oblíqua (CHACÓN, 2001).
O controle da espermatogênese é realizado pelo eixo hipotalâmico-hipofisário através
de feedbacks e mecanismos estimulatórios. Assim, o hipotálamo secreta GnRH de forma
pulsátil na corrente sanguínea e tem como órgão alvo a adenohipófise, provocando a secreção
do LH e do FSH. Estes irão atuar nos testículos, respectivamente nas células de Leydig e Sertoli
modulando a produção de testosterona e dos esteroides gonadais ativina e inibina (HAFEZ,
JAINUDEEN e ROSNINA, 2009).
Na gonada masculina a ação parácrina de alguns fatores de crescimento tem sido
associada à migração, proliferação e diferenciação das células de Sertoli, a exemplo dos
pertencentes à superfamília do Fator de Transformação e Crescimento beta (TGF-β) como o
Fator de Crescimento e Diferenciação-9 (GDF-9) que, estão presentes no epitélio seminífero e
regulam a secreção de FSH e a espermatogênese (LOVELAND e HIME, 2005).
Por outro lado, também tem sido relatado efeito parácrino do GDF-9 estimulando a
produção de inibina pelas células de Sertoli. É de conhecimento que essa glicoproteína age no
hipotálamo, por meio de sinalizadores químicos, modulando a secreção de GnRH e,
consequentemente, a produção hipofisária de FSH (NICHOLLS et al., 2009; LOVERLAND et
al., 2007), que pode modular a função testicular e a espermatogênese (NICHOLLS et al., 2009),
possivelmente interferindo no início da puberdade e da maturidade sexual dos machos e na
qualidade seminal (HARSTINE et al., 2018).
5
Embora apresente maior influência sobre a secreção do FSH, a inibna produzida pelas
células de Sertoli, também está envolvida, em menor proporção, na regulação da função das
células de Leydig, que através de ação parácrina modula a sinalização endócrina da secreção
hipofisária do LH e como consequência na produção de testosterona (HAFEZ, JAINUDEEN e
ROSNINA, 2009), podendo interferir no desenvolvimento sexual.
A ocorrência de mutações em genes de fatores de crescimento, podem promover
mudanças fenotípicas no indivíduo, a exemplo daquelas oriundas do polimorfismo identificado
no gene BMPR-1B denominado de FecB (Booroola). Provocada pela decodificação do receptor
BMP-1B, é responsável pelo aumento da prolificidade em ovelhas heterozigotas portadoras
(WILSON et al., 2001). Apesar das modificações verificadas no fenótipo das fêmeas não foram
identificadas diferenças no desenvolvimento nem na maturação dos aparelhos reprodutivos dos
machos portadores do gene FecB, assim como nos parâmetros seminais e espermáticos entre os
genótipos (KUMAR et al., 2007; WALKER et al., 1985).
Tang et al. (2013) relataram que asmutações no gene GDF-9 (A485T e A625T)
identificadas em touros holandeses por foram responsáveis pelo aumento na integridade de
acrossomo dos espermatozoides e na concentração e motilidade espermáticas. De acordo com
os autores, tais alterações podem ter sido decorrentes da interferência do GDF-9 na
permeabilidade das junções entre as células de Sertoli (ITMAN et al., 2006).
Outra mutação no gene GDF9 relatada em ovinos é a FecGE que ocorre em substituição
de uma fenilalanina por uma cisteína (F345C) (CASTRO et al., 2006) e que, em ovelhas Santa
Inês homozigotas, promove o aumento da taxa de ovulação e prolificidade (SILVA et al., 2011).
Porém, não se tem observado estudos que mostrem a influência dessa mutação sobre
características reprodutivas dos carneiros, mesmo considerando que ela ocorre em um gene que
codifica a proteína GDF-9, a qual é sintetizada no epitélio seminífero e que desempenha um
papel importante na formação e desenvolvimento das células germinativas (ITMAN et al.,
2006).
2.3. Determinação da puberdade e maturidade sexual
A puberdade é um processo transitório cujas transformações fenotípicas, fisiológicas e
comportamentais são influenciadas pelo genótipo e por fatores ambientais. Essa fase marca o
início da atividade reprodutiva (PLANT, 2015; ABDEL-RAOUF, 1960) caracterizada,
principalmente, por melhorias dos parâmetros seminais e espermáticos (LOPES et al., 2013).
6
Diversas definições têm sido atribuídas à puberdade com base nas alterações do sistema
reprodutivo e nos aspectos seminais. A puberdade, segundo Wigns e Terrill (1953) inicia-se
com a ocorrência do desprendimento pênis-prepucial e do processo uretral da glande peniana,
possibilitando a exposição peniana e a cópula. Conforme Abdel-Raouf (1960), a puberdade é
alcançada com o aumento da produção de testosterona, estimulando o desenvolvimento das
características masculinas e comportamento sexual. Já Louw e Joubert (1964) definem como
puberdade a presença dos primeiros espermatozoides no ejaculado, o que favorece a
fecundação.
Avellaneda et al. (2006) definiram a puberdade do ponto de vista qualitativo da amostra
seminal como o momento em que se constata a presença de no máximo 50% de defeitos
espermáticos totais no sêmen. A definição descrita por Wolf, Almquist e Hale (1965) entretanto
é uma das mais citadas na literatura, os quais sugerem que a puberdade ocorre quando os
animais produzem um ejaculado com no mínimo 10% de motilidade espermática total e com
concentração espermática superior a 50 milhões de espermatozoides/mL.
Alcançada a puberdade, é notada uma evolução dos parâmetros seminais e espermáticos,
como o aumento da motilidade total, vigor, concentração e redução das alterações morfológicas
(MAIA e VIEIRA, 1992) até o momento em que os machos apresentam um ejaculado com
motilidade espermática total mínima de 50%, máximo de 15% de defeitos espermáticos maiores
e 30% de defeitos espermáticos totais (GARCIA, PINHEIRO e OKUDA, 1987), o que pode
definir a maturidade sexual dos carneiros.
De acordo com Souza et al. (2010), os parâmetros seminais e espermáticos que
determinam a maturidade sexual estão relacionados com o desenvolvimento ponderal e com a
circunferência escrotal, que em ovinos Santa Inês é alcançada, em média, com 48 semanas de
idade, quando normalmente atingem circunferência escrotal superior a 30 cm, sendo assim
considerados aptos à reprodução segundo o Colegio Brasileiro de Reprodução Animal (CRBA,
2013).
7
REFERÊNCIAS
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10
Puberdade e maturidade sexual de cordeiros portadores da genética FecGE
C. M. R. S. Pereiraa, M. S. Chavesb, I. D. M. Diasc, M. A. Barretod S. R. Paivae, A. R.
Caetanof, V. Ribeiro Juniorg, H. C. Azevedoh
a Programa de Pós-Graduação em Zootecnia, Universidade Federal de Sergipe, Sergipe, Brasil E-mail:
b Bolsista CAPES, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife – PE, E-mail: maiana-
@hotmail.com
c Bolsista CNPq/Pibic/Embrapa Tabuleiros Costeiros, Aracaju – SE, E-mail: [email protected]
d Médica veterinária, Aracaju – SE, E-mail: [email protected]
e Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, Brasília – DF, E-mail: [email protected]
f Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, Brasília – DF, E-mail: [email protected]
g Universidade Federal de Sergipe, Nossa Senhora da Gloria – SE, E-mail [email protected]
h Embrapa Tabuleiros Costeiros, Aracaju - SE, Brasil Av. Beira Mar, nº 3.250, Jardins, Aracaju, SE –
Brasil. E-mail: [email protected]
Highlights
A mutação FecGE do gene GDF-9 provoca aumento na taxa de ovulação e prolificidade em
ovelhas
Não existem trabalhos que associem a FecGE com o desenvolvimento sexual de cordeiros
A mutação FecGE não apresenta efeito sobre a puberdade e maturidade sexual de cordeiros
Santa Inês.
Reprodutores portadores da FecGE podem ser usados como disseminadores desta genética
RESUMO
A mutação FecGE do gene do fator de crescimento e diferenciação -9 (GDF-9) provoca um
incremento na taxa de ovulação e prolificidade em ovelhas. Em machos, além das poucas
associações que têm sido feitas entre o GDF-9 e a fisiologia reprodutiva, são escassos os estudos
que relacionam este gene e a FecGE com o desenvolvimento reprodutivo de ovinos. A
caracterização da puberdade e maturidade sexual de cordeiros portadores da FecGE, além de
contribuir para o conhecimento dos efeitos desta mutação sobre a fisiologia reprodutiva e
desenvolvimento sexual masculino, poderá habilitar o uso destes animais na seleção e
melhoramento genético de ovinos. Este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da
mutação FecGE sobre a puberdade e a maturidade sexual de cordeiros Santa Inês. Foram
utilizados 36 cordeiros genotipados para a FecGE distribuídos de acordo com seu genótipo:
homozigoto não mutante e; heterozigoto e homozigoto mutantes. A cada 15 dias durante 11
meses, os cordeiros foram avaliados andrologicamente (circunferência escrotal; volume
11
seminal; vigor, concentração – CON, motilidade – MOT e viabilidade espermáticas; defeitos
espermáticos maiores - DMa, menores e totais - DT) para verificar a influência da mutação
sobre a fisiologia e a idade à puberdade (MOT ≥ 10%, CON ≥ 50 x 106 sptz/mL e DT ≤ 50%)
e à maturidade sexual (MOT ≥ 50%, DMa ≤ 15%, DT ≤ 30%). Os dados foram avaliados através
da análise de covariância com medidas repetidas no tempo, considerando o peso ao nascimento
como covariável e, o pós-teste de Duncan a 5% de probabilidade. Não foram observadas
diferenças (P>0,05) entre os genótipos. A mutação FecGE não influenciou (P>0,05) os
parâmetros ao longo do período experimental e as idades à puberdade (187,87 ± 6,54 dias) e à
maturidade sexual (230,31 ± 9,87dias). Conclui-se que a mutação FecGE não apresenta efeito
sobre a puberdade e a maturidade sexual de cordeiros Santa Inês que podem ser utilizados como
reprodutores disseminadores desta genética prolifica.
Palavras Chave: GDF-9, precocidade, mutação, polimorfismo, Santa Inês, sêmen.
INTRODUÇÃO
A ovinocultura tem se destacado cada vez mais como importante fonte de renda para
produtores e a raça Santa Inês tem se apresentado como uma boa alternativa de base genética
para a produção de carne em diversas regiões do Brasil. Nesta atividade, a eficiência reprodutiva
é um dos principais fatores que regulam a produção e, o conhecimento da influência de fatores
ambientais e genéticos é de suma importância para melhorar a produtividade e
consequentemente a lucratividade dos rebanhos.
Os machos são os principais difusores de genes e a seleção de cordeiros mais produtivos
como reprodutores é essencial para o manejo reprodutivo (McManus et al., 2010) e ganho
genético dos rebanhos. Carneiros com potencial produtivo, quando identificados e utilizados
logo após alcançarem a puberdade e maturidade sexual (Fraga et al., 2015) e a aptidão
reprodutiva, podem ser melhor aproveitados como difusores de genes potencializando os
benefícios dos programas de melhoramento animal por diminuírem o intervalo e incrementarem
o ganho genético entre gerações (McManus et al., 2010).
A utilização de bioferramentas nos programas de melhoramento genético, a exemplo
das técnicas moleculares, como os marcadores e sequenciamento gênico, permite identificar e
caracterizar genes e suas mutações com fenótipos relevantes na produção e reprodução animal
(Milazzotto e Visintin, 2008). Em ovelhas Santa Inês foi identificada uma mutação no éxon 2
do gene do Fator de Diferenciação e Crescimento-9 (GDF-9), nomeado como FecGE (Castro et
12
al., 2006), que apresenta efeito aditivo na taxa de ovulação (82%) e prolificidade (58%) em
ovelhas homozigotas (Silva et al., 2011).
Associações entre o GDF-9 e a fisiologia reprodutiva dos machos não estão totalmente
elucidadas e não existem estudos que relacionam este gene e tão pouco a FecGE com a
reprodução de ovinos. Em machos, o gene GDF-9 se expressa nas células germinativas do
epitélio seminífero e tem sido associado em outras espécies com o desenvolvimento testicular
e a regulação da espermatogênese (Guo et al., 2013; Nicholls et al., 2009; Zhao et al., 2011).
Ainda não se sabe se a mutação FecGE do gene GDF-9 tem algum efeito sobre a reprodução
dos machos ovinos principalmente sobre a sua puberdade e maturidade sexual. A caracterização
da puberdade e maturidade sexual de cordeiros portadores da FecGE, além de contribuir para o
conhecimento dos efeitos desta mutação sobre a fisiologia reprodutiva masculina, poderá
habilitar o uso destes animais na seleção e melhoramento genético de ovinos. Sendo assim este
trabalho objetivou avaliar os efeitos da mutação FecGE sobre a puberdade e a maturidade sexual
de cordeiros Santa Inês.
MATERIAL E MÉTODOS
Os procedimentos experimentais envolvendo os animais foram aprovados na Comissão
de Ética no Uso de Animais (CEUA) da Embrapa Tabuleiros Costeiros (protocolo:
06122016.0014).
Período e local do experimento
As atividades foram executadas entre dezembro de 2016 e novembro de 2017. O manejo
e as atividades diretamente relacionadas aos animais foram realizados no Campo Experimental
Pedro Arle (CEPA) da Embrapa Tabuleiros Costeiros, localizado no município de Frei Paulo,
Agreste do estado de Sergipe, Brasil (Latitude: 10°36’15” Sul e Longitude: 37°38’29” Oeste).
As análises laboratoriais foram conduzidas no Laboratório de Biotecnologia da Reprodução
Animal (LABRA) localizado na sede da Embrapa Tabuleiros Costeiros, no município de
Aracaju, Sergipe, Brasil e no laboratório de genética animal da Embrapa Recursos Genéticos e
Biotecnologia, Brasília/ DF, Brasil.
Animais e manejo
13
Foram utilizados 36 cordeiros contemporâneos do Núcleo de Conservação In Situ de
Ovinos da raça Santa Inês da Embrapa Tabuleiros Costeiros que no início do experimento
tinham 95,1 ± 1,1 ( ± σ) dias de idade. Os animais foram manejados de modo a atender as suas
exigências nutricionais, sendo confinados até 239,1 ± 1,1 dias com dieta à base de silagem de
milho (15% de peso corporal) e concentrado de milho e soja com 18% de proteína bruta livre
(0,6% de peso corporal), com fornecimento de mistura mineral comercial própria para ovinos
e água ad libitum. Entre 239,1 ± 1,1 e 427,1 ± 1,1 dias de idade, os cordeiros foram submetidos
a manejo semi-intensivo quando passaram a ter acesso a pastagens compostas por Panicum
maximum cultivar Green Panic e Aruana e a ser confinados à noite para receberem a mesma
dieta à base de silagem e concentrado, além de mineralização, atendendo as exigências de
mantença dos animais.
Genotipagem
Os cordeiros foram genotipados para FecGE a partir de amostras de sangue (±5 mL)
colhidas através de punção da veia jugular e armazenadas em tubos contendo EDTA, as quais
foram refrigeradas a -20ºC até a extração do DNA (Araújo et al., 2009) com posterior
sequenciamento de Sanger (Lacerda et al., 2016). Baseando-se no resultado da genotipagem,
os cordeiros foram divididos em três grupos genótipos: FecG+/+ (Homozigoto não mutante, n
=7); FecG+/E (Heterozigoto mutante, n=11) e; FecGE/E (Homozigoto mutante, n=18).
Exame andrológico
A cada quinze dias foram realizados exames andrológicos que compreenderam a
biometria testicular, através da mensuração da circunferência escrotal (CE), e as análises
seminais e espermáticas. A CE foi medida na altura da curvatura maior dos testículos com
auxílio de fita métrica circular. As análises seminais e espermáticas foram realizadas em
amostras de sêmen colhidas com auxílio de eletroejaculador (TK 800®, Uberaba, Brasil),
primeiramente esvaziando-se a ampola retal dos animais, que foram contidos em decúbito
lateral e, submetidos à sonda lubrificada com gel à base de carboximetilcelulose, a qual foi
introduzida no reto posicionando-se os eletrodos ventralmente e aplicando-se seis estímulos
elétricos de baixa voltagem (8V) com duração de seis segundos e intervalos de seis a 10
segundos (Damián e Ungerfeld, 2011).
14
As amostras de sêmen colhidas tiveram seu volume (VS) determinado através de pipeta
de precisão. A concentração espermática (CON) nas amostras foi determinada, adicionando-se
uma alíquota de sêmen à água ultrapura (Milli-Q®, Merck, Darmstadt, Alemanha) na proporção
de 1:400 e observação em câmara de Neubauer sob microscópio ótico (400x). A partir da
multiplicação do VS pela CON foi determinado o número total de espermatozoides (NTE) da
amostra seminal colhida.
A cinética espermática foi avaliada colocando-se uma gota de sêmen puro ou diluído
em solução de X-Cell® (IMV, L'Aigle, França), a depender da concentração aparente de
espermatozoides na amostra colhida. Utilizando-se um microscópio ótico (100 a 400x) foram
mensurados simultaneamente e de forma subjetiva, a motilidade (MOT – 0 a 100%) e o vigor
espermáticos (VigE – 1 a 5) seguindo recomendações de Henry e Jobim (2013).
As amostras de sêmen foram submetidas a avaliações morfológicas dos
espermatozoides transferindo-se alíquotas de 10 μL para 500 μL de tampão fosfato-salino com
glutaraldeído a 0,2% aquecidos a 37ºC. A partir de uma alíquota desta mistura, 200
espermatozoides foram analisados por meio de microscópio de contraste de fase (1000x), sob
óleo de imersão e, classificados com defeitos espermáticos maiores (DMa) e menores (DMe).
Através da soma dos DMa e DMe obteve-se o número de espermatozoides com defeitos
espermáticos totais – DT (Henry e Jobim, 2013).
Os espermatozoides foram avaliados quanto a sua viabilidade (VE) misturando-se
alíquotas de sêmen em corante eosina-nigrosina (1:1 a 1:3 dependendo da concentração
espermática aparente), que permaneceram sob incubação à 37ºC por um minuto para
posteriormente ser confeccionado o esfregaço em lâmina. A lâmina foi seca com soprador
elétrico para armazenagem e posterior contagem de 200 espermatozoides em microscópio ótico
(400x) sendo considerados como viáveis aqueles que apresentavam cabeça não corada de rosa
pela eosina.
Determinação da idade à puberdade e à maturidade sexual
Os cordeiros foram considerados púberes no momento em que as amostras de sêmen
apresentaram espermatozoides com MOT ≥ 10%, CON ≥ 50 x 106 sptz/mL (Pacheco et al.,
2009) e DT ≤ 50% (Avellaneda et al., 2006). A maturidade sexual por sua vez foi determinada
no momento em que os cordeiros apresentaram amostras de sêmen com MOT ≥ 50%, DMa ≤
15% e DT ≤ 30% (Lopes et al., 2013).
15
Análise de dados
As análises dos dados foram realizadas utilizando-se o pacote estatístico SAS (SAS
Institute, Inc., 2010), sendo os resultados expressos em média e erro padrão da média. O
genótipo FecGE foi considerado como efeito principal ou variável independente e as avaliações
andrológicas como variáveis dependentes. Os dados das variáveis dependentes foram
submetidos ao teste de Saphiro-Wilk para verificação do pré-requisito de normalidade da sua
distribuição. Uma vez que todas as variáveis atenderam o pré-requisito de normalidade, não
houve necessidade de transformação dos dados ou utilização de estatísticas não paramétricas.
O peso ao nascimento foi adotado como covariável após verificação dos pré-requisitos de
ausência de efeito do genótipo sobre ele e, de homogeneidade dos parâmetros de regressão. A
análise de covariância (ANCOVA) foi aplicada com arranjo de medidas repetidas no tempo, ao
nível de 5% de probabilidade, utilizando-se o PROC GLM, onde cada coleta foi considerada
como medida repetida, utilizando o comando REPEATED. Médias entre genótipos foram
comparadas pelo teste de Duncan ao nível de 5% de probabilidade.
RESULTADOS
O genótipo FecGE não influenciou (P>0,05) os parâmetros relacionados à biometria
testicular e às análises seminais e espermáticas ao longo do período experimental, assim como
não teve influência (P>0,05) sobre as idades à puberdade e à maturidade sexual dos cordeiros
Santa Inês. A puberdade e a maturidade sexual dos cordeiros ocorreram em média aos 187,87
± 6,54 e aos 230,31 ± 9,87 dias de idade respectivamente.
Estão apresentados na Tabela 1 os resultados das avaliações dos parâmetros
reprodutivos à puberdade e a maturidade sexual e, nas Figuras 1 e 2, as variações dos parâmetros
andrológicos, seminais e espermáticos ao longo da idade dos cordeiros independente do
genótipo.
16
Tabela 1. Médias e erros padrões dos parâmetros biométricos testiculares, seminais e
espermáticos às idades à puberdade (187,87 ± 6,54 dias) e à maturidade sexual (230,31 ±
9,87 dias) de cordeiros Santa Inês.
Parâmetros Puberdade Maturidade Sexual
CE (mm) 241,59 ± 8,52 278,09 ± 29,08
VS (µL) 718,37 ± 178,68 1370,29 ± 260,04
CON (x 106 sptz/mL) 714,82 ± 223,30 1225,77 ± 266,62
NTE (x 106 sptz) 54,14 ± 198,48 1654,60 ± 515,69
MOT (%) 62,45 ± 6,46 69,48 ± 6,21
VigE (1-5) 2,62 ± 0,28 3,39 ± 0,27
DMa (%) 13,45 ± 4,54 0,20 ± 0,12
DMe (%) 29,11 ± 3,78 10,77 ± 1,95
DT (%) 42,57 ± 4,13 10,97 ± 1,96
VE (%) 79,33 ± 7,45 84,19 ± 4,94
CE – circunferência escrotal; VS – volume seminal; CON – concentração espermática; NTE
– número total de espermatozoides; MOT – motilidade espermática; VigE – vigor
espermático; DMa – defeitos espermáticos maiores; DMe – defeitos espermáticos menores;
DT – defeitos espermáticos totais; VE – viabilidade espermática.
A B
Figura 1. Variação dos parâmetros biométrico e seminal ao longo da idade de cordeiros Santa
Inês. A – circunferencia escrotal (CE), B – volume seminal (VS). Letras diferentes indicam
diferenças significativas entre as colheitas ao logo da idade (P<0,05).
17
A B
C D
E F
G H
Figura 2. Variação dos parâmetros espermáticos ao longo da idade de cordeiros Santa Inês. A
– concentração espermática (CON), B – número total de espermatozoides (NTE), C –
motilidade espermática (MOT), D – vigor espermático (VigE), E – defeitos espermáticos
maiores (DMa), F – defeitos espermáticos menores (DMe), G – defeitos espermáticos totais
(DT) e viabilidade espermática (VE). Letras diferentes indicam diferenças significativas entre
as colheitas ao logo da idade (P<0,05).
18
DISCUSSÃO
Descrita inicialmente em ovelhas da raça Santa Inês, a mutação FecGE do gene GDF-9
foi associada ao aumento da taxa de ovulação e prolificidade (Silva et al., 2011). Apesar da sua
descoberta a alguns anos, ainda são poucos os trabalhos que têm como objetivo investigar a
ação do GDF-9 sobre a fisiologia da fêmea, e raros são aqueles que tratam da sua mutação
FecGE em ovelhas. Mais escassos ainda são os trabalhos que associam o GDF-9 à fisiologia do
macho, sendo este trabalho o primeiro a avaliar os efeitos da mutação FecGE sobre parâmetros
andrológicos, seminais e espermáticos em cordeiros em desenvolvimento sexual.
Em fêmeas, o fator GDF-9 é sintetizado pelo oócito e está presente no fluido folicular
com efeito mitogênico sobre as células da granulosa (Otsuka et al., 2000) e anti-apoptótico
sobre as células do cumulus (Wang et al., 2013) ações que podem viabilizar o desenvolvimento
folicular. Ao contrário do que acontece em ovelhas portadoras da FecGE, outras mutações no
gene GDF-9 relacionadas à prolificidade, quando apresentam-se em homozigose, podem
provocar esterilidade, pela interrupção no desenvolvimento folicular em estágios de transição
ou primário (Juengel et al., 2002), pela falta da síntese proteica ou por alterações em seus
receptores (Fabre et al., 2006). Na mutação FecGE é provável que ocorra alterações na síntese
do fator GDF-9 (Vage et al., 2013), que pode estar relacionada à maior viabilidade dos folículos
(Silva et al., 2018) e ao aumento da taxa de ovulação e prolificidade (Silva et al., 2011).
Em machos, o gene GDF-9 se expressa nas espermátides redondas e nos espermatócitos
de paquíteno (Guo et al., 2013) e através de ação parácrina, pode alterar a permeabilidade das
tight junction entre as células de Sertoli nos testículos (Itman et al., 2006). Considerando-se
estes fatos e assumindo-se que em machos mutantes FecGE também ocorra uma possível
alteração na síntese e função do fator GDF-9, seria razoável acreditar haver algum tipo de
influência desta mutação sobre a fisiologia reprodutiva de carneiros. Tang et al. (2013)
relataram efeitos positivos de mutações no gene GDF-9 em machos bovinos, a exemplo da
variante A625T que se refletiu no aumento da motilidade e concentração espermática e, da
variante A485T que aumentou o percentual de espermatozoides com membrana acrossomal
íntegra após a descongelação. Segundo os autores, estes efeitos possivelmente foram
provocados pela ação do fator GDF-9 sobre a integridade das células de Sertoli.
Por outro lado, relata-se também que o fator GDF-9 influencia negativamente o
desenvolvimento das células de Sertoli nos testículos (Itman et al., 2006). Este efeito negativo
pode ser consequência da sua ação parácrina nas células de Sertoli, estimulando a produção de
19
inibina (Nicholls et al., 2009). É de conhecimento que a inibina, por meio do processo de
aromatização da testosterona (Hafez et al., 2009) e de sinalizadores químicos, inibe a produção
hipotalâmica de GnRH e, consequentemente a liberação hipofisária de FSH (Loveland et al.,
2007; Nicholls et al., 2009). A redução do FSH pode provocar uma diminuição na
multiplicação, proliferação e desenvolvimento das células de Sertoli que, por sua vez, leva a
uma redução na formação e desenvolvimento das células germinativas e da espermatogênese
(Harstine et al., 2018a) com consequente atraso no início da puberdade e da maturidade sexual
dos machos (Harstine et al., 2018b).
Embora apresente maior influência sobre a secreção do FSH, a inibna produzida pelas
células de Sertoli, também está envolvida, em menor proporção, na regulação da função das
células de Leydig que, através de ação parácrina, modula a sinalização endócrina para a
secreção hipofisária do LH e, consequentemente, a produção de testosterona (Hafez, Jainudeen
e Rosnina, 2009), podendo interferir no desenvolvimento sexual.
Apesar desses relatos e hipóteses, muitas deles contraditórios, sobre as ações e efeitos
do GDF-9 e de outros genes semelhantes e suas mutações, no presente trabalho, não foi
identificado efeito da FecGE sobre parâmetros andrológicos, seminais e espermáticos dos
cordeiros ao longo do período de puberdade e maturidade sexual. Dong et al. (1996) e Yan et
al. (2001) revelaram que camundongos nocaute do gene GDF-9 não apresentaram alterações no
desenvolvimento testicular e na espermatogênese, o que reforça a hipótese de que a proteína
GDF-9 não desempenha papel essencial no desenvolvimento reprodutivo no macho. Apesar de
se tratar de outro gene, que também tem relação com a prolificidade em ovinos (BMPR-1B),
não foi identificado efeito da mutação Booroola sobre o desenvolvimento do sistema
reprodutivo e a espermatogênese de cordeiros da raça Merino Australiano (Walker et al., 1985).
Além de mensurar os efeitos da mutação FecGE sobre a fisiologia do macho, a análise
do comportamento dos parâmetros andrológicos, seminais e espermáticos, ao longo do período
da puberdade e maturidade sexual de cordeiros mutantes, pôde determinar o início da atividade
reprodutiva destes animais. Animais que alcançam precocemente a puberdade e a maturidade
sexual possuem potencial para iniciar antecipadamente sua vida reprodutiva, encurtando o
intervalo entre gerações e, como consequência, possibilitando um maior ganho genético e
aumento de produtividade, advindo, por exemplo, do aumento da prolificidade do rebanho. Por
outro lado, animais sexualmente tardios, geram maiores custos de produção devido ao aumento
no tempo para sua manutenção até que possam ser utilizados como reprodutores além da
redução na quantidade de descendentes e por consequência na disseminação de seus genes e
20
mutações de interesse agropecuário no rebanho durante a sua vida útil, a exemplo da mutação
prolífica FecGE.
Deve-se considerar entretanto, que a precocidade sexual em cordeiros pode sofrer
influência de fatores genéticos diretos ou indiretos. Normalmente animais nascidos de
gestações múltiplas apresentam menores pesos ao nascimento e à desmama, com ganho de peso
compensatório após este período (Mexia et al., 2004). Cordeiros mais leves por sua vez
alcançam a puberdade em um maior tempo (Alves et al., 2006). Assim, nos modelos de análise
de efeitos diretos de determinados genes ou mutações sobre o desenvolvimento sexual, deve-se
considerar o efeito fenotípico do peso dos animais nesta fase a fim de isolar os efeitos
genotípicos diretos. Como o objetivo deste trabalho foi isolar o efeito da mutação FecGE sobre
a puberdade e maturidade sexual de cordeiros, o peso ao nascimento foi considerado como uma
covariável por sua inerente e forte influência sobre o desenvolvimento sexual o que poderia
mascarar qualquer efeito genético direto.
Os comportamentos dos parâmetros biométricos testiculares, seminais e espermáticos
dos cordeiros ao longo do experimento se assemelham com os relatados na literatura para
ovinos Santa Inês (Pacheco et al., 2009; Souza et al., 2010; Fraga et al., 2015), caracterizado
por aumento progressivo da circunferência escrotal, volume seminal, motilidade, vigor,
concentração e viabilidade espermáticas, assim como redução da quantidade de
espermatozoides com alterações morfológicas representadas principalmente por cauda dobrada,
gota proximal e distal e cauda fortemente dobrada (Chacon, 2001). De forma geral observou-
se neste trabalho uma melhoria acentuada das características andrológicas, seminais e
espermáticas até a puberdade (187,87 dias de idade), com desaceleramento no desenvolvimento
até a maturidade sexual (230,31 dias de idade) e leve incremento e estabilização destes
parâmetros após esta fase.
A circunferência escrotal teve um comportamento crescente e bem linear ao longo da
idade confirmando ser um parâmetro bem objetivo de acompanhamento do desenvolvimento
dos testículos. O volume seminal teve um comportamento menos linear apresentando maior
variabilidade ao longo do tempo provavelmente devido ao método utilizado para a coleta do
sêmen que foi a eletroejaculação. Segundo Marco Jimenez et al. (2005), a eletroejaculação pode
provocar uma estimulação excessiva das glândulas sexuais interferindo na quantidade de
plasma das amostras. Apesar de ter sido adotado neste trabalho o mesmo protocolo de colheita
por eletroejaculação para todos os animais, sabe-se que os estímulos elétricos podem variar e
atingir as terminações nervosas de forma diferente a cada momento e em cada indivíduo. A
variação no volume seminal interfere diretamente na concentração espermática da amostra, que
21
também apresentou o mesmo padrão de variação entre as coletas que o volume. Foi identificado
aumento contínuo da concentração espermática ao longo de todo o experimento, assim como
identificado por Pacheco et al. (2009) e, este aumento, tem relação direta com o
desenvolvimento testicular, que modula a capacidade de produção espermática do animal.
A cinética espermática, representada pelos parâmetros de motilidade e vigor, seguiu o
padrão semelhante de desenvolvimento das outras características, porém apresentando
pequenas variações, as quais podem estar relacionadas com a subjetividade das análises.
Diferentemente dos demais parâmetros que aumentavam ao longo do desenvolvimento sexual,
aqueles relacionados às alterações morfológicas foram diminuindo ao longo da idade. A
viabilidade espermática teve o incremento dos mais agudos dentre os parâmetros avaliados
explicitando que os espermatozoides provavelmente passam por um processo de mudança nas
suas membranas o que os tornam mais viáveis ao longo do desenvolvimento sexual e os habilita
à fertilização e em especial à criopreservação.
Pacheco et al. (2009) utilizando a motilidade (> 10%) e concentração espermáticas (≥
50 x 106 spzt/mL) como parâmetros, relataram que cordeiros Santa Inês atingiram a puberdade
aos 210,8 ± 50,8 dias de idade, similar ao resultados encontrados neste trabalho, porém com
valores inferiores de motilidade (37,71%) e porcentagem de espermatozoides com defeitos
totais (47,20%). Souza et al. (2010) também relataram idade semelhante à puberdade (181 dias)
em cordeiros da mesma raça, utilizando os mesmos critérios de concentração e motilidade
espermática do presente trabalho. Os referidos autores encontraram à puberdade motilidade
espermática semelhante (43,57%) à deste trabalho, porém não explicaram a menor
concentração espermática (70,00 x 106 sptz/mL) que está abaixo dos padrões citados na
literatura para ovinos com idades semelhantes (Avellaneda et al., 2006; Pacheco et al., 2009).
Alves et al. (2006) identificaram que cordeiros Santa Inês alcançaram a puberdade em idade
semelhante (194,57 ± 41,97 dias) contudo a estação do ano influenciou a puberdade. Os autores
identificaram animais mais precoces (162,56 ± 35,55 dias) nascidos na estação seca,
possivelmente, segundo eles, resultante de uma maior disponibilidade de forragem na pré-
puberdade que coincidiu com a estação chuvosa. A fim de controlar estas variáveis externas, os
animais utilizados no presente trabalho foram contemporâneos sendo submetidos às mesmas
condições ambientais e de alimentação durante todo o período experimental.
Embora a puberdade tenha sido atingida aos 187 dias, o cordeiro só deverá ser utilizado
como reprodutor após atingir a maturidade (Pacheco et al., 2009) e aptidão reprodutiva (Henry
e Jobim, 2013). Pela ausência de conceitos que pudessem ser utilizados e por se tratar de espécie
cujas recomendações do Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (CBRA) se assemelham a
22
ovinos, adotou-se neste trabalho parâmetros utilizados em bovinos por Lopes et al. (2013) para
determinar a idade à maturidade sexual dos cordeiros (motilidade espermática ≥ 50%, defeitos
maiores > 15 e, defeitos totais > 30%).
No momento em que foi determinada a maturidade sexual dos cordeiros (230 dias), os
valores médios dos parâmetros seminais e espermáticos encontravam-se de acordo com os
padrões mínimos recomendados pelo CBRA para considerar os animais aptos à reprodução
(Henry e Jobim, 2013). Entretanto a circunferência escrotal só alcançou os padrões mínimos
recomendados pelo CBRA para ovinos (>30,0 cm) aos 427 dias de idade. Talvez os cordeiros
devam ser utilizados na reprodução de forma menos intensa à maturidade sexual e só devam
ser utilizados de forma plena quando possuírem todos os pré-requisitos mínimos recomendados
como a circunferência escrotal que representa a capacidade de produção espermática do animal.
Cordeiros portadores da mutação FecGE apresentam desenvolvimento fisiológico
normal das principais características relacionadas à reprodução. A não observância de efeitos
negativos da mutação FecGE sobre a fisiologia no período que ocorre a puberdade e maturidade
sexual e sobre a precocidade sexual de cordeiros Santa Inês habilita o uso de reprodutores
portadores desta mutação nos sistemas de produção e nos programas de seleção e melhoramento
genético de ovinos.
CONCLUSÃO
A mutação FecGE não apresenta efeito sobre a puberdade e a maturidade sexual de
cordeiros Santa Inês que podem ser utilizados como reprodutores disseminadores desta genética
prolifica.
AGRADECIMENTOS
O presente trabalho foi realizado com apoio do Conselho Nacional de Desenvolvimento
Científico e Tecnológico – Brasil (CNPq), da Fundação de Apoio à Pesquisa e a Inovação
Tecnológica do Estado de Sergipe (Fapitec/SE) - Brasil, e da Coordenação de Aperfeiçoamento
de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES - Código 001).
23
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776.
27
ANEXO
28
SMALL RUMINANT RESEARCH
Official Journal of the International Goat Association
AUTHOR
INFORMATION PACK
TABLE OF
CONTENTS XXX
• Description p.1
• Audience p.1
• Impact Factor p.1
• Abstracting and Indexing p.1
• Editorial Board p.2 • Guide for Authors p.4 ISSN: 0921-4488
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Small Ruminant Research publishes original, basic and applied research articles,
technical notes, and review articles on research relating to goats, sheep, deer, the
New World camelids llama, alpaca, vicuna and guanaco, and the Old
World camels.
Topics covered include nutrition, physiology, anatomy, genetics, microbiology, ethology,
product technology, socio-economics, management, sustainability and environment,
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29
AUDIENCE
Research Scientists working on sheep, goats, deer and other small ruminants.
IMPACT FACTOR
2017: 0.974 © Clarivate Analytics Journal Citation Reports 2018
ABSTRACTING AND INDEXING
Biological Abstracts
Nutrition Abstracts and Reviews Series B
Animal Breeding Abstracts
Index Veterinarius
Veterinary Bulletin
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Editor-in-Chief
S.Y. Landau, Agricultural Research Organization (ARO), Bet Dagan, Israel
Honorary Editors-in-Chief
G.F.W. Haenlein, Newark, DE, USA
J.G. Boyazoglu, Menton, France
Reviews and Special Issue Editor
G.C. Fthenakis, Karditsa, Greece
Statistics Editor
H. Voet, Rehovot, Israel
Associate Editors
Genetics and Breeding
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30
N.H. Ing, College Station, TX, USA
J. Schmidova, Prague, Czech Republic
Health and Welfare
M.S.A. Kumar, North Grafton, MA, USA
Lactation and Dairy Technology (products and quality)
N. Argov-Argaman, Rehovot, Israel
Nutrition
R. Bodas, Valladolid, Spain
A. Cannas, Sassari, Italy
S. Giger-Reverdin, Paris, France
Products (meat, wool and hair)
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E. Piasentier, Udine, Italy
Production Systems and Sustainability
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J.N.B. Shrestha, Sherbrooke, QC, Canada
Reproductive Physiology
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M. Zarkawi, Damascus, Syrian Arab Republic
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I. Cervantes, Madrid, Spain L. Ekateriniadou, Thermi, Greece
M.H. Fahmy, Ottawa, ON, Canada
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S.P. Ford, Laramie, WY, USA
G. Freyer, Dummerstorf, Germany
M. Galina, Coyoacán, Mexico
E.G. Grünwaldt, Mendoza, Argentina
T. Kott, Prague, Czech Republic
G. Leitner, Bet Dagan, Israel
C. Li, Edmonton, AB, Canada
C. Ligda, Thessaloniki, Greece
J. Miron, Bet Dagan, Israel
G. Moatsou, Athens, Greece
G. Molle, Olmedo, Italy
31
H.H. Montaldo, Coyoacán, Mexico
J.P. Muir, Stephenville, TX USA
Y.W. Park, Fort Valley, GA, USA
W.E. Pomroy, Palmerston North, New Zealand
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A. Rodolakis, Nouzilly, France
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extracts using in-vitro methods only are discouraged, unless a largescale, long-term in vivo
studies are undertaken with those plant extracts. Papers on the use of local feeds in nutrition
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same manuscript. In the field of health, case reports presenting work in individual animals
will not be considered. Only case reports presenting population medicine approaches will be
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their local interest, and good statistical evidence.
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products for human food. Studies on the textile processing of fibres are also excluded. We
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33
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'Multiple, redundant or concurrent publication' for more information).
Use of inclusive language
Inclusive language acknowledges diversity, conveys respect to all people, is sensitive to
differences, and promotes equal opportunities. Articles should make no assumptions about the
beliefs or commitments of any reader, should contain nothing which might imply that one
individual is superior to another on the grounds of race, sex, culture or any other
characteristic, and should use inclusive language throughout. Authors should ensure that
writing is free from bias, for instance by using 'he or she', 'his/her' instead of 'he' or 'his', and
by making use of job titles that are free of stereotyping (e.g. 'chairperson' instead of 'chairman'
and 'flight attendant' instead of 'stewardess').
Changes to authorship
Authors are expected to consider carefully the list and order of authors before submitting
their manuscript and provide the definitive list of authors at the time of the original
submission. Any addition, deletion or rearrangement of author names in the authorship list
should be made only before the manuscript has been accepted and only if approved by the
journal Editor. To request such a change, the Editor must receive the following from the
corresponding author: (a) the reason for the change in author list and (b) written
confirmation (e-mail, letter) from all authors that they agree with the addition, removal or
rearrangement. In the case of addition or removal of authors, this includes confirmation from
the author being added or removed.
36
Only in exceptional circumstances will the Editor consider the addition, deletion or
rearrangement of authors after the manuscript has been accepted. While the Editor
considers the request, publication of the manuscript will be suspended. If the manuscript has
already been published in an online issue, any requests approved by the Editor will result in a
corrigendum.
Copyright
Upon acceptance of an article, authors will be asked to complete a 'Journal Publishing
Agreement' (see more information on this). An e-mail will be sent to the corresponding author
confirming receipt of the manuscript together with a 'Journal Publishing Agreement' form or a
link to the online version of this agreement.
Subscribers may reproduce tables of contents or prepare lists of articles including abstracts for
internal circulation within their institutions. Permission of the Publisher is required for resale
or distribution outside the institution and for all other derivative works, including
compilations and translations. If excerpts from other copyrighted works are included, the
author(s) must obtain written permission from the copyright owners and credit the source(s) in
the article. Elsevier has preprinted forms for use by authors in these cases.
For gold open access articles: Upon acceptance of an article, authors will be asked to
complete an 'Exclusive License Agreement' (more information). Permitted third party reuse of
gold open access articles is determined by the author's choice of user license.
Author rights
As an author you (or your employer or institution) have certain rights to reuse your work.
More information.
Elsevier supports responsible sharing
Find out how you can share your research published in Elsevier journals.
Role of the funding source
You are requested to identify who provided financial support for the conduct of the research
and/or preparation of the article and to briefly describe the role of the sponsor(s), if any, in
study design; in the collection, analysis and interpretation of data; in the writing of the report;
and in the decision to submit the article for publication. If the funding source(s) had no such
involvement then this should be stated.
37
Funding body agreements and policies
Elsevier has established a number of agreements with funding bodies which allow authors to
comply with their funder's open access policies. Some funding bodies will reimburse the
author for the gold open access publication fee. Details of existing agreements are available
online.
After acceptance, open access papers will be published under a noncommercial license. For
authors requiring a commercial CC BY license, you can apply after your manuscript is
accepted for publication.
Open access
This journal offers authors a choice in publishing their research:
Subscription • Articles are made available to subscribers as well as developing countries and patient groups
throughour universal access programs.
• No open access publication fee payable by authors.
• The Author is entitled to post the accepted manuscript in their institution's repository and
make this public after an embargo period (known as green Open Access). The published
journal article cannot be shared publicly, for example on ResearchGate or Academia.edu, to
ensure the sustainability of peerreviewed research in journal publications. The embargo
period for this journal can be found below.
Gold open access • Articles are freely available to both subscribers and the wider public with permitted reuse.
• A gold open access publication fee is payable by authors or on their behalf, e.g. by their
researchfunder or institution.
Regardless of how you choose to publish your article, the journal will apply the same peer
review criteria and acceptance standards.
For gold open access articles, permitted third party (re)use is defined by the following
Creative Commons user licenses:
Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivs (CC BY-NC-ND)
For non-commercial purposes, lets others distribute and copy the article, and to include in a
collective work (such as an anthology), as long as they credit the author(s) and provided they
do not alter or modify the article.
The gold open access publication fee for this journal is USD 2500, excluding taxes. Learn
more about Elsevier's pricing policy: https://www.elsevier.com/openaccesspricing.
38
Green open access
Authors can share their research in a variety of different ways and Elsevier has a number of
green open access options available. We recommend authors see our green open access page
for further information. Authors can also self-archive their manuscripts immediately and
enable public access from their institution's repository after an embargo period. This is the
version that has been accepted for publication and which typically includes author-
incorporated changes suggested during submission, peer review and in editor-author
communications. Embargo period: For subscription articles, an appropriate amount of time is
needed for journals to deliver value to subscribing customers before an article becomes freely
available to the public. This is the embargo period and it begins from the date the article is
formally published online in its final and fully citable form. Find out more.
This journal has an embargo period of 12 months.
Elsevier Researcher Academy
Researcher Academy is a free e-learning platform designed to support early and mid-career
researchers throughout their research journey. The "Learn" environment at Researcher
Academy offers several interactive modules, webinars, downloadable guides and resources to
guide you through the process of writing for research and going through peer review. Feel
free to use these free resources to improve your submission and navigate the publication
process with ease.
Language (usage and editing services)
Please write your text in good English (American or British usage is accepted, but not a
mixture of these). Authors who feel their English language manuscript may require editing to
eliminate possible grammatical or spelling errors and to conform to correct scientific English
may wish to use the English Language Editing service available from Elsevier's WebShop.
Submission
Our online submission system guides you stepwise through the process of entering your
article details and uploading your files. The system converts your article files to a single PDF
file used in the peer-review process. Editable files (e.g., Word, LaTeX) are required to typeset
your article for final publication. All correspondence, including notification of the Editor's
decision and requests for revision, is sent by e-mail.
Submit your article
Please submit your article via http://ees.elsevier.com/rumin/
39
PREPARATION
Peer review
This journal operates a single blind review process. All contributions will be initially assessed
by the editor for suitability for the journal. Papers deemed suitable are then typically sent to a
minimum of two independent expert reviewers to assess the scientific quality of the paper.
The Editor is responsible for the final decision regarding acceptance or rejection of articles.
The Editor's decision is final. More information on types of peer review.
Article structure
Manuscripts should have numbered lines, with wide margins and double spacing throughout,
i.e. also for abstracts, footnotes and references. Every page of the manuscript, including the
title page, references, tables, etc., should be numbered. However, in the text no reference
should be made to page numbers; if necessary one may refer to sections. Avoid excessive
usage of italics to emphasize part of the text.
Manuscripts in general should be organized in the following order:
• Abstract
• Keywords (indexing terms), normally 3-6 items
•Introduction
• Material studied, area descriptions, methods, techniques
• Results
• Discussion
• Conclusion
• Acknowledgment and any additional information concerning research grants, etc.
• References
Essential title page information
• Title. Concise and informative. Titles are often used in information-retrieval systems.
Avoid abbreviations and formulae where possible.
• Author names and affiliations. Please clearly indicate the given name(s) and
family name(s) of each author and check that all names are accurately spelled. You can add
your name between parentheses in your own script behind the English transliteration. Present
the authors' affiliation addresses (where the actual work was done) below the names. Indicate
all affiliations with a lowercase superscript letter immediately after the author's name and in
front of the appropriate address. Provide the full postal address of each affiliation, including the
country name and, if available, the e-mail address of each author.
• Corresponding author. Clearly indicate who will handle correspondence at all
stages of refereeing and publication, also post-publication. This responsibility includes
answering any future queries about Methodology and Materials. Ensure that the e-mail
address is given and that contact details are kept up to date by the
corresponding author.
40
• Present/permanent address. If an author has moved since the work
described in the article was done, or was visiting at the time, a 'Present address' (or 'Permanent
address') may be indicated as a footnote to that author's name. The address at which the author
actually did the work must be retained as the main, affiliation address. Superscript Arabic
numerals are used for such footnotes.
Abstract
A concise and factual abstract is required. The abstract should state briefly the purpose of the
research, the principal results and major conclusions. An abstract is often presented separately
from the article, so it must be able to stand alone. For this reason, References should be
avoided, but if essential, then cite the author(s) and year(s). Also, non-standard or uncommon
abbreviations should be avoided, but if essential they must be defined at their first mention in
the abstract itself.
Highlights
Highlights are mandatory for this journal. They consist of a short collection of bullet points
that convey the core findings of the article and should be submitted in a separate editable file
in the online submission system. Please use 'Highlights' in the file name and include 3 to 5
bullet points (maximum 85 characters, including spaces, per bullet point). You can view
example Highlights on our information site.
Formatting of funding sources
List funding sources in this standard way to facilitate compliance to funder's requirements:
Funding: This work was supported by the National Institutes of Health [grant numbers xxxx,
yyyy]; the Bill & Melinda Gates Foundation, Seattle, WA [grant number zzzz]; and the
United States Institutes of Peace [grant number aaaa].
It is not necessary to include detailed descriptions on the program or type of grants and
awards. When funding is from a block grant or other resources available to a university,
college, or other research institution, submit the name of the institute or organization that
provided the funding.
If no funding has been provided for the research, please include the following sentence:
This research did not receive any specific grant from funding agencies in the public,
commercial, or not-for-profit sectors.
41
Nomenclature and units
Follow internationally accepted rules and conventions: use the international system of units
(SI). If other quantities are mentioned, give their equivalent in SI. You are urged to consult
IUB: Biochemical Nomenclature and Related Documents for further information.
Authors are, by general agreement, obliged to accept the rules governing biological
nomenclature, as laid down in the International Code of Botanical Nomenclature,
the International Code of Nomenclature of Bacteria, and the International
Code of Zoological Nomenclature.
All biotica (crops, plants, insects, birds, mammals, etc.) should be identified by their scientific
names when the English term is first used, with the exception of common domestic animals.
All biocides and other organic compounds must be identified by their Geneva names when
first used in the text. Active ingredients of all formulations should be likewise identified.
Math formulae
Please submit math equations as editable text and not as images. Present simple formulae in
line with normal text where possible and use the solidus (/) instead of a horizontal line for
small fractional terms, e.g., X/Y. In principle, variables are to be presented in italics. Powers
of e are often more conveniently denoted by exp. Number consecutively any equations that
have to be displayed separately from the text (if referred to explicitly in the text).
Equations should be numbered serially at the right-hand side in parentheses. In general only
equations explicitly referred to in the text need be numbered.
The use of fractional powers instead of root signs is recommended. Powers of e are often
more conveniently denoted by exp.
*
Levels of statistical significance which can be mentioned without further explanation are P<
** ***
0.05, P<0.01 and P<0.001.
2+ ++
In chemical formulae, valence of ions should be given as, e.g. Ca , not as Ca .
1
8 Isotope numbers should precede the symbols, e.g.
O.
The repeated writing of chemical formulae in the text is to be avoided where reasonably
possible; instead, the name of the compound should be given in full. Exceptions may be made
42
in the case of a very long name occurring very frequently or in the case of a compound being
described as the end product of a gravimetric determination (e.g. phosphate as P2O5).
Footnotes
Footnotes should be used sparingly. Number them consecutively throughout the article. Many
word processors can build footnotes into the text, and this feature may be used. Otherwise,
please indicate the position of footnotes in the text and list the footnotes themselves separately
at the end of the article. Do not include footnotes in the Reference list.
Artwork
Electronic artwork General points
• Make sure you use uniform lettering and sizing of your original artwork.
• Embed the used fonts if the application provides that option.
• Aim to use the following fonts in your illustrations: Arial, Courier, Times New Roman,
Symbol, oruse fonts that look similar.
• Number the illustrations according to their sequence in the text.
• Use a logical naming convention for your artwork files.
• Provide captions to illustrations separately.
• Size the illustrations close to the desired dimensions of the published version.
• Submit each illustration as a separate file.
A detailed guide on electronic artwork is available.
You are urged to visit this site; some excerpts from the detailed
information are given here. Formats
If your electronic artwork is created in a Microsoft Office application (Word, PowerPoint,
Excel) then please supply 'as is' in the native document format.
Regardless of the application used other than Microsoft Office, when your electronic artwork
is finalized, please 'Save as' or convert the images to one of the following formats (note the
resolution requirements for line drawings, halftones, and line/halftone combinations given
below):
EPS (or PDF): Vector drawings, embed all used fonts.
TIFF (or JPEG): Color or grayscale photographs (halftones), keep to a minimum of 300 dpi.
TIFF (or JPEG): Bitmapped (pure black & white pixels) line drawings, keep to a minimum of
1000 dpi. TIFF (or JPEG): Combinations bitmapped line/half-tone (color or grayscale), keep
to a minimum of 500 dpi.
Please do not:
• Supply files that are optimized for screen use (e.g., GIF, BMP, PICT, WPG); these typically
have alow number of pixels and limited set of colors;
• Supply files that are too low in resolution;
43
• Submit graphics that are disproportionately large for the content.
Color artwork
Please make sure that artwork files are in an acceptable format (TIFF (or JPEG), EPS (or
PDF), or MS Office files) and with the correct resolution. If, together with your accepted
article, you submit usable color figures then Elsevier will ensure, at no additional charge, that
these figures will appear in color online (e.g., ScienceDirect and other sites) regardless of
whether or not these illustrations are reproduced in color in the printed version. For color
reproduction in print, you will receive information regarding the
costs from Elsevier after receipt of your accepted article. Please
indicate your preference for color: in print or online only. Further information on the
preparation of electronic artwork.
Figure captions
Ensure that each illustration has a caption. Supply captions separately, not attached to the
figure. A caption should comprise a brief title (not on the figure itself) and a description of
the illustration. Keep text in the illustrations themselves to a minimum but explain all symbols
and abbreviations used.
Tables
Please submit tables as editable text and not as images. Tables can be placed either next to the
relevant text in the article, or on separate page(s) at the end. Number tables consecutively in
accordance with their appearance in the text and place any table notes below the table body.
Be sparing in the use of tables and ensure that the data presented in them do not duplicate
results described elsewhere in the article. Please avoid using vertical rules and shading in
table cells.
References
Web references
As a minimum, the full URL should be given and the date when the reference was last
accessed. Any further information, if known (DOI, author names, dates, reference to a source
publication, etc.), should also be given. Web references can be listed separately (e.g., after the
reference list) under a different heading if desired, or can be included in the reference list.
Data references
This journal encourages you to cite underlying or relevant datasets in your manuscript by
citing them in your text and including a data reference in your Reference List. Data references
44
should include the following elements: author name(s), dataset title, data repository, version
(where available), year, and global persistent identifier. Add [dataset] immediately before the
reference so we can properly identify it as a data reference. The [dataset] identifier will not
appear in your published article.
Reference management software
Most Elsevier journals have their reference template available in many of the most popular
reference management software products. These include all products that support Citation
Style Language styles, such as Mendeley and Zotero, as well as EndNote. Using the word
processor plug-ins from these products, authors only need to select the appropriate journal
template when preparing their article, after which citations and bibliographies will be
automatically formatted in the journal's style. If no template is yet available for this journal,
please follow the format of the sample references and citations as shown in this Guide. If you
use reference management software, please ensure that you remove all field codes before
submitting the electronic manuscript. More information on how to remove field codes.
Users of Mendeley Desktop can easily install the reference style for this journal by clicking
the following link:
http://open.mendeley.com/use-citation-style/small-ruminant-research
When preparing your manuscript, you will then be able to select this style using the Mendeley
plugins for Microsoft Word or LibreOffice.
Reference style
Text: All citations in the text should refer to:
1. Single author: the author's name (without initials, unless there is ambiguity) and the year
of publication;
2. Two authors: both authors' names and the year of publication;
3. Three or more authors: first author's name followed by 'et al.' and the year of
publication. Citations may be made directly (or parenthetically). Groups of references can
be listed either first alphabetically, then chronologically, or vice versa.
Examples: 'as demonstrated (Allan, 2000a, 2000b, 1999; Allan and Jones, 1999)…. Or, as
demonstrated (Jones, 1999; Allan, 2000)… Kramer et al. (2010) have recently shown …'
List: References should be arranged first alphabetically and then further sorted
chronologically if necessary. More than one reference from the same author(s) in the same
year must be identified by the letters 'a', 'b', 'c', etc., placed after the year of publication.
Examples:
Reference to a journal publication:
45
Van der Geer, J., Hanraads, J.A.J., Lupton, R.A., 2010. The art of writing a scientific article.
J. Sci.
Commun. 163, 51–59. https://doi.org/10.1016/j.Sc.2010.00372.
Reference to a journal publication with an article number:
Van der Geer, J., Hanraads, J.A.J., Lupton, R.A., 2018. The art of writing a scientific article.
Heliyon. 19, e00205. https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2018.e00205.
Reference to a book:
Strunk Jr., W., White, E.B., 2000. The Elements of Style, fourth ed. Longman, New York.
Reference to a chapter in an edited book:
Mettam, G.R., Adams, L.B., 2009. How to prepare an electronic version of your article, in:
Jones, B.S., Smith , R.Z. (Eds.), Introduction to the Electronic Age. E-Publishing Inc., New
York, pp. 281–304.
Reference to a website:
Cancer Research UK, 1975. Cancer statistics reports for the UK.
http://www.cancerresearchuk.org/ aboutcancer/statistics/cancerstatsreport/ (accessed 13
March 2003).
Reference to a dataset:
[dataset] Oguro, M., Imahiro, S., Saito, S., Nakashizuka, T., 2015. Mortality data for Japanese
oak wilt disease and surrounding forest compositions. Mendeley Data, v1.
https://doi.org/10.17632/ xwj98nb39r.1.
Video
Elsevier accepts video material and animation sequences to support and enhance your
scientific research. Authors who have video or animation files that they wish to submit with
their article are strongly encouraged to include links to these within the body of the article.
This can be done in the same way as a figure or table by referring to the video or animation
content and noting in the body text where it should be placed. All submitted files should be
properly labeled so that they directly relate to the video file's content. . In order to ensure that
your video or animation material is directly usable, please provide the file in one of our
recommended file formats with a preferred maximum size of 150 MB per file, 1 GB in total.
Video and animation files supplied will be published online in the electronic version of your
article in Elsevier Web products, including ScienceDirect. Please supply 'stills' with your
files: you can choose any frame from the video or animation or make a separate image. These
will be used instead of standard icons and will personalize the link to your video data. For
46
more detailed instructions please visit our video instruction pages. Note: since video and
animation cannot be embedded in the print version of the journal, please provide text for both
the electronic and the print version for the portions of the article that refer to this content.
Data visualization
Include interactive data visualizations in your publication and let your readers interact and
engage more closely with your research. Follow the instructions here to find out about
available data visualization options and how to include them with your article.
Supplementary material
Supplementary material such as applications, images and sound clips, can be published with
your article to enhance it. Submitted supplementary items are published exactly as they are
received (Excel or PowerPoint files will appear as such online). Please submit your material
together with the article and supply a concise, descriptive caption for each supplementary file.
If you wish to make changes to supplementary material during any stage of the process,
please make sure to provide an updated file. Do not annotate any corrections on a previous
version. Please switch off the 'Track Changes' option in Microsoft Office files as these will
appear in the published version.
Research data
This journal encourages and enables you to share data that supports your research publication
where appropriate, and enables you to interlink the data with your published articles. Research
data refers to the results of observations or experimentation that validate research findings. To
facilitate reproducibility and data reuse, this journal also encourages you to share your
software, code, models, algorithms, protocols, methods and other useful materials related to
the project.
Below are a number of ways in which you can associate data with your article or make a
statement about the availability of your data when submitting your manuscript. If you are
sharing data in one of these ways, you are encouraged to cite the data in your manuscript and
reference list. Please refer to the "References" section for more information about data
citation. For more information on depositing, sharing and using research data and other
relevant research materials, visit the research data page.
Data linking
If you have made your research data available in a data repository, you can link your article
directly to the dataset. Elsevier collaborates with a number of repositories to link articles on
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ScienceDirect with relevant repositories, giving readers access to underlying data that gives
them a better understanding of the research described.
There are different ways to link your datasets to your article. When available, you can directly
link your dataset to your article by providing the relevant information in the submission
system. For more information, visit the database linking page.
For supported data repositories a repository banner will automatically appear next to your
published article on ScienceDirect.
In addition, you can link to relevant data or entities through identifiers within the text of your
manuscript, using the following format: Database: xxxx (e.g., TAIR: AT1G01020; CCDC:
734053; PDB: 1XFN).
Mendeley Data
This journal supports Mendeley Data, enabling you to deposit any research data (including
raw and processed data, video, code, software, algorithms, protocols, and methods) associated
with your manuscript in a free-to-use, open access repository. During the submission process,
after uploading your manuscript, you will have the opportunity to upload your relevant
datasets directly to Mendeley Data. The datasets will be listed and directly accessible to
readers next to your published article online.
For more information, visit the Mendeley Data for journals page.
Data statement
To foster transparency, we encourage you to state the availability of your data in your
submission. This may be a requirement of your funding body or institution. If your data is
unavailable to access or unsuitable to post, you will have the opportunity to indicate why
during the submission process, for example by stating that the research data is confidential.
The statement will appear with your published article on ScienceDirect. For more
information, visit the Data Statement page.
AFTER ACCEPTANCE
Online proof correction
Corresponding authors will receive an e-mail with a link to our online proofing system,
allowing annotation and correction of proofs online. The environment is similar to MS Word:
in addition to editing text, you can also comment on figures/tables and answer questions from
48
the Copy Editor. Web-based proofing provides a faster and less error-prone process by
allowing you to directly type your corrections, eliminating the potential introduction of errors.
If preferred, you can still choose to annotate and upload your edits on the PDF version. All
instructions for proofing will be given in the e-mail we send to authors, including alternative
methods to the online version and PDF.
We will do everything possible to get your article published quickly and accurately. Please
use this proof only for checking the typesetting, editing, completeness and correctness of the
text, tables and figures. Significant changes to the article as accepted for publication will only
be considered at this stage with permission from the Editor. It is important to ensure that all
corrections are sent back to us in one communication. Please check carefully before replying,
as inclusion of any subsequent corrections cannot be guaranteed. Proofreading is solely your
responsibility.
Offprints
The corresponding author will, at no cost, receive a customized Share Link providing 50 days
free access to the final published version of the article on ScienceDirect. The Share Link can
be used for sharing the article via any communication channel, including email and social
media. For an extra charge, paper offprints can be ordered via the offprint order form which is
sent once the article is accepted for publication. Both corresponding and co-authors may order
offprints at any time via Elsevier's Webshop. Corresponding authors who have published their
article gold open access do not receive a Share Link as their final published version of the
article is available open access on ScienceDirect and can be shared through the article DOI
link.
AUTHOR INQUIRIES
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You can also check the status of your submitted article or find out when your accepted article
will be published. © Copyright 2018 Elsevier | https://www.elsevier.com
